專利名稱：一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡及制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種靶向載藥聚合物囊泡及制備方法及用途。
背景技術(shù)：
囊泡是由雙親分子自組裝形成的一種超分子聚集體，它們是由密閉雙分子層所形 成的球形的單腔室或多腔室的締合結(jié)構(gòu)，類似于細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)。囊泡作為藥物載體，具有改 變藥物在體內(nèi)的分布、防止藥物降解失活、延長藥物的作用時(shí)間以及降低藥的毒、副作用等 特性。與膠束相比，囊泡有如下特點(diǎn)(1)囊泡有著很大的比表面積，可以吸附比膠束更多 的反應(yīng)物；(2)由雙層兩親性分子構(gòu)成的囊泡膜即囊泡的雙層膜具有很強(qiáng)的剛性，可以增 溶大的藥物分子或酶；(3)囊泡表面電荷更多，而且電性可以通過改變組成來調(diào)節(jié)，電場更 強(qiáng)，因此在應(yīng)用方面有巨大的潛力。聚合物囊泡(Polymersome)是由具有兩親性質(zhì)的聚合物分子自組裝而成的封閉 的有序雙分子層結(jié)構(gòu)。其結(jié)構(gòu)類似于脂質(zhì)體，由一個水溶性內(nèi)腔和雙層分子膜層構(gòu)成。相 對于表面活性劑、脂質(zhì)體等小分子囊泡，聚合物囊泡有著分子可設(shè)計(jì)性好、囊泡強(qiáng)度高、穩(wěn) 定性好、滲透性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。它具有脂質(zhì)體和納米粒等微粒載藥系統(tǒng)的主要優(yōu)點(diǎn)，而且其體內(nèi) 外穩(wěn)定性顯著優(yōu)于脂質(zhì)體；其水溶性的內(nèi)腔結(jié)構(gòu)對水溶性藥物的包封量優(yōu)于納米粒；其膜 層較厚，雙分子層膜間有利于包封脂溶性藥物，脂溶性藥物可與水溶性內(nèi)腔的水溶性藥物 共同發(fā)揮“雞尾酒療法”作用；此外，通過兩親聚合物分子的選擇(種類、分子量、嵌段比例、 共聚物結(jié)構(gòu)等)，其構(gòu)建的囊泡系統(tǒng)的理化特性(粒徑、膜厚、滲透性、載藥量等)乃至體內(nèi) 行為更具有主觀的可控制性。近幾年，由于大分子自組裝的飛速發(fā)展，聚合物囊泡作為一類 新型的藥物載體，由于其特殊的穩(wěn)定性、可設(shè)計(jì)性、結(jié)構(gòu)和組成的多樣性，已經(jīng)吸引了越來 越多研究者的積極關(guān)注，成為當(dāng)前分子自組裝新型藥物載體研究的熱點(diǎn)?？尚纬删酆衔锬遗莸膬捎H性聚合物材料主要有兩類。一類為不可生物降解的聚合 物，代表性的有聚環(huán)氧乙烷-聚乙基乙烯(PEO-PEE)，聚環(huán)氧乙烷-聚丁二烯(PEO-PBD)，聚 丙烯酸-聚苯乙烯(PAA-PS)等；另一類為可生物降解的聚合物，代表性的主要為聚酯類如 聚乙二醇-聚乳酸(PEG-PLA)，聚乙二醇-聚己內(nèi)酯(PEG-PCL)和聚乙二醇-聚丙交酯乙交 酯(PEG-PLGA)。此外，還有聚肽類兩親聚合物如聚丁二烯-聚谷氨酸(PBD-PG)，聚乙二醇-聚賴氨 酸(PEG-PL)衍生物等。聚ε -己內(nèi)酯(PCL)是一種生物相容性很好的生物可降解材料，同 時(shí)也具有優(yōu)良的藥物通過性，可以用于體內(nèi)植入材料及藥物釋放載體。聚乙二醇(PEG)具 有獨(dú)特的生物相容性和理化特性如親水性、能溶于水和有機(jī)溶劑、無毒性及無抗原性和免 疫原性等，因而PEG在生物醫(yī)藥及生物技術(shù)方面得到了廣泛的應(yīng)用。兩親性聚合物在水中可以自組裝形成球狀膠束、柱狀膠束、蠕蟲狀膠束、聚合物囊 泡等多種結(jié)構(gòu)，其形成的結(jié)構(gòu)取決于兩親聚合物中親水部分與疏水部分的比例，該比例決 定了兩親性聚合物的組裝系數(shù)(packing parameter, ρ)。研究表明當(dāng)1/2 < ρ彡1時(shí)，兩 親聚合物形成囊泡。但對兩親性三嵌段共聚物PCL-b-PEG-b-PCL，目前尚無文獻(xiàn)研究其形成囊泡。葉酸是一種糖基化磷脂肌醇連接的膜糖蛋白，其受體在許多腫瘤細(xì)胞中過度表 達(dá)，而在絕大多數(shù)正常組織中幾乎不表達(dá)，同時(shí)葉酸無毒、免疫原性弱、穩(wěn)定，與葉酸受體的 結(jié)合力強(qiáng)，對腫瘤有高度選擇性。因此，將葉酸連接到聚合物囊泡表面，賦予聚合物囊泡對 腫瘤細(xì)胞的主動靶向性，可提高藥物在腫瘤組織中的濃度，減輕不良反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)腫瘤的靶向 治療。惡性腫瘤是威脅人類健康的嚴(yán)重疾病，化療藥物的一般給藥形式進(jìn)入體內(nèi)后，由 于藥物全身分布，毒副作用大，治療效果不理想，因此，腫瘤治療尤其需要靶向傳釋的給藥 系統(tǒng)。許多新的高分子材料和給藥載體已應(yīng)用于抗腫瘤藥物靶向給藥系統(tǒng)的研究之中，隨 著眾多不同作用機(jī)制的抗腫瘤藥物的發(fā)現(xiàn)和腫瘤治療技術(shù)的發(fā)展需求，研究安全、高效、長 效的抗腫瘤靶向給藥系統(tǒng)越來越成為藥物制劑研究的熱點(diǎn)。葉酸靶向聚合物囊泡表面的 長鏈具有親水性、柔性的特點(diǎn)，賦予了聚合物囊泡長循環(huán)特性，通過Era效應(yīng)，使載藥囊泡 有效聚集在腫瘤部位。聚合物囊泡對藥物的載藥量較高，并通過葉酸的靶向作用將囊泡內(nèi) 大量藥物遞送至腫瘤細(xì)胞內(nèi)部，以增強(qiáng)藥物在靶部位的活性并減少其在非靶部位的毒副作 用，提高藥物的治療指數(shù)，實(shí)現(xiàn)惡性腫瘤的靶向化療。傳統(tǒng)制備藥物緩控釋系統(tǒng)需要大量使用乳化劑或表面活性劑，在制備后需要采取 一定的方法去除這些試劑，但不可避免地使這些試劑混雜在制備的藥物緩控釋系統(tǒng)中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種具有生物相容性和可生物降解 性、穩(wěn)定性強(qiáng)、載藥量高的葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡。本發(fā)明的第二個目的是提供一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡的制備方法。本發(fā)明的第三個目的是提供一種具有生物相容性和可生物降解性、穩(wěn)定性強(qiáng)、載 藥量高的葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡的用途。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡，用下述方法制成(1)將質(zhì)量比為9 1 1的PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物和疏水性藥 物溶于有機(jī)溶劑中，加入相當(dāng)PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物質(zhì)量0. -10%的二 硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(2000)葉酸，蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑制成均勻的薄膜，氮?dú)獯?干殘余的有機(jī)溶劑，真空干燥至有機(jī)溶劑除凈；(2)在一容器中加入雙蒸水或磷酸鹽緩沖液和步驟(1)的產(chǎn)物，使步驟(1)的 產(chǎn)物的質(zhì)量百分比為0. -10%，在50°C -70°c，水化2h-12h，再震蕩混勻，冰浴下超聲 5min-35min形成穩(wěn)定乳液，依次通過孔徑為0. 45 μπι,Ο. 22 μ m的膜過濾后，收集濾液，冷凍 干燥12-36h，即制成一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡。所述有機(jī)溶劑為乙腈、二氯甲烷或三氯甲烷。所述疏水性藥物為紫杉醇、羥基喜樹堿、長春新堿或康普瑞汀。所述步驟(2)為在一容器中加入雙蒸水或磷酸鹽緩沖液和步驟(1)的產(chǎn)物，使 步驟(1)的產(chǎn)物的質(zhì)量百分比為2%-8%，在60°C，水化4h-6h，再震蕩混勻，冰浴下超聲 10min-15min形成穩(wěn)定乳液，依次通過孔徑為0. 45 μ m、0. 22 μ m的膜過濾后，收集濾液，冷凍干燥12-36h，即制成一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡。一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡的制備方法，包括如下步驟(1)將質(zhì)量比為9 1 1的PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物和疏水性藥 物溶于有機(jī)溶劑中，加入相當(dāng)PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物質(zhì)量0. -10%的二 硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(2000)葉酸，蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑制成均勻的薄膜，氮?dú)獯?干殘余的有機(jī)溶劑，真空干燥至有機(jī)溶劑除凈；(2)在一容器中加入雙蒸水或磷酸鹽緩沖液和步驟(1)的產(chǎn)物，使步驟(1)的 產(chǎn)物的質(zhì)量百分比為0. -10%，在50°C -70°c，水化2h-12h，再震蕩混勻，冰浴下超聲 5min-35min形成穩(wěn)定乳液，依次通過孔徑為0. 45 μπι,Ο. 22 μ m的膜過濾后，收集濾液，冷凍 干燥12-36h，即制成一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡。所述有機(jī)溶劑為乙腈、二氯甲烷或三氯甲烷。所述疏水性藥物為紫杉醇、羥基喜樹堿、長春新堿或康普瑞汀。所述步驟(2)優(yōu)選的是在一容器中加入雙蒸水或磷酸鹽緩沖液和步驟(1)的產(chǎn) 物，使步驟(1)的產(chǎn)物的質(zhì)量百分比為2% -8%，在60°C，水化4h-6h，再震蕩混勻，冰浴下 超聲10min-15min形成穩(wěn)定乳液，依次通過孔徑為0. 45 μ m、0. 22 μ m的膜過濾后，收集濾 液，冷凍干燥12_36h，即制成一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡。一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明利用具有良好生物相容性和可生物降解性的聚己內(nèi)酯-b_聚乙二 醇-b-聚己內(nèi)酯(PCL-b-PEG-b-PCL)兩親性三嵌段共聚物為制備聚合物囊泡的高分子原 料，并在制備中加入偶聯(lián)葉酸的磷脂——二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(2000)葉酸 (DSPE-PEG(2000)Folate)，通過分子自組裝構(gòu)建一類新型的強(qiáng)度高、穩(wěn)定性好、滲透性強(qiáng)的 葉酸靶向PCL-b-PEG-b-PCL載疏水性藥物聚合物囊泡并將其制備成靶向緩控釋藥物，囊泡 表面的PEG鏈具有親水性、柔性的特點(diǎn)，賦予了聚合物囊泡長循環(huán)特性，可延長在血液中的 循環(huán)時(shí)間而不被單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)(MPS)捕獲；再通過EI3R被動靶向和葉酸主動靶向雙重 靶向作用，使載藥囊泡有效靶向聚集在腫瘤部位，達(dá)到靶向治療的目的。本發(fā)明制備的葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡具有脂質(zhì)體和納米粒等微粒載 藥系統(tǒng)的主要優(yōu)點(diǎn)，并且其體內(nèi)外穩(wěn)定性顯著優(yōu)于脂質(zhì)體；其膜層較厚，有利于包封疏水性 藥物；此外，通過兩親聚合物分子量、嵌段比例的選擇，構(gòu)建的聚合物囊泡系統(tǒng)的理化特性 (粒徑、膜厚、滲透性、載藥量、表面PEG修飾和靶向功能基修飾等)乃至體內(nèi)行為更具有主 觀的可控制性；同時(shí)，本發(fā)明制備的靶向聚合物載藥囊泡具有Era被動靶向和葉酸主動靶 向雙重靶向功能，可使載藥囊泡有效靶向聚集在腫瘤部位，達(dá)到靶向治療的目的。在本發(fā)明的制備過程中無需使用乳化劑或表面活性劑，克服了傳統(tǒng)制備藥物緩控 釋系統(tǒng)需要大量使用乳化劑或表面活性劑的不足，避免了使用試劑而造成的對生物體的 毒、副作用。本發(fā)明制備出的葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡在體內(nèi)是完全可生物降解的， 降解后不產(chǎn)生對生物有害的物質(zhì)。


圖1葉酸靶向載紫杉醇聚合物囊泡的透射電鏡圖。圖2葉酸靶向載紫杉醇聚合物囊泡的激光共聚焦圖。圖3為葉酸靶向載紫杉醇聚合物囊泡的細(xì)胞毒性研究。
具體實(shí)施例方式聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚己內(nèi)酯兩親性三嵌段共聚物(PCL-b-PEG-b-PCL兩親性 三嵌段共聚物)的制備方法是公知技術(shù)，本發(fā)明在此公開了一種制備方法，但并不用于限 定本發(fā)明，實(shí)驗(yàn)證明用其它方法獲得的PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物也可以做為 本發(fā)明的原料。聚己內(nèi)酯-聚乙二醇_聚己內(nèi)酯兩親性三嵌段共聚物制備過程為ε _己內(nèi)酯(ε -CL)經(jīng)氫化鈣(CaH2)干燥減壓蒸餾后備用；選聚乙二醇(分子量為2000，4000，6000，8000或12000中任一種)用甲苯共沸脫 水，備用；稱取一定量的PEG和ε-CL(質(zhì)量比可以1 1_10中選取)加入到經(jīng)硅烷化 處理的干燥聚合管中，加入辛酸亞錫為催化劑，所述催化劑的加入質(zhì)量為反應(yīng)原料物質(zhì) 量的0. 1 %，再將體系進(jìn)行抽真空-充氮?dú)?抽真空-充氮?dú)獾拇螖?shù)可以在2-4次中選 取)，真空封管，將其放入恒溫(溫度可以在120°C-18(TC中選取)油浴中反應(yīng)(反應(yīng)時(shí) 間可以12h-24h選取)。反應(yīng)結(jié)束后，將所得聚合物溶于少量二氯甲烷，傾入大量無水乙 醚或無水甲醇進(jìn)行重沉淀。聚合物在40°C下真空干燥至恒重，即可得不同分子量親水 鏈長或疏水鏈長的聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚己內(nèi)酯兩親性三嵌段共聚物。(本發(fā)明各 實(shí)施例選用的PEG的分子量是8000，實(shí)驗(yàn)證明PEG2000，PEG4000, PEG6000或PEG 12000 中任一種的PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物也可以做為本發(fā)明的原料，制備的 PCL-b-PEG-b-PCL載疏水性藥物聚合物囊泡都具有緩釋劑型的優(yōu)勢，)下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。實(shí)施例1一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡，用下述方法制成(1)將質(zhì)量比3: 1的PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物和紫杉醇溶于三氯 甲烷中，加入相當(dāng)PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物質(zhì)量的二硬脂酰磷脂酰乙醇 胺-聚乙二醇(2000)葉酸，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去三氯甲烷使溶液在瓶壁上形成一層均勻的薄膜， 氮?dú)獯蹈蓺堄嗟娜燃淄?，真空干燥至三氯甲烷除凈；在一容器中加入雙蒸水和步驟(1)的產(chǎn)物，使步驟(1)的產(chǎn)物的質(zhì)量百分比為 1 %，在60°C，水化12h，再震蕩混勻，冰浴下超聲20min形成穩(wěn)定乳液，依次通過孔徑為 0. 45 μ m、0. 22 μ m的膜過濾后，收集濾液，冷凍干燥20h，即制成一種葉酸靶向載紫杉醇聚
合物囊泡。表1.葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡對荷EMT-6乳腺癌BALB/c小鼠抑瘤效果 (η = 10, χ 士s)組別 動物數(shù) 動物體重/g腫瘤重量 腫瘤重 腫瘤體積/mm3 腫瘤體
量 ~—-—~ /g 量抑制積抑制
開始/結(jié) 』束率/%率/% _^_生理鹽水對照10/8 1238. 71 士 347. 74組未靶向修飾的10/8 45.74 639. 42 士 144. 17* 48.38載紫杉醇聚合物囊泡組實(shí)施例1制備的 10/9 64.60 423. 93 士 114. 88* 65.78囊泡組*P < 0. 05vs生理鹽水對照組相同劑量條件下，與未靶向修飾的載紫杉醇聚合物囊泡組相比，實(shí)施例1制備 的葉酸靶向載紫杉醇聚合物囊泡組對腫瘤抑制作用較強(qiáng)(腫瘤重量抑制率64. 60% vs 45. 74%，腫瘤體積抑制率 65. 78% vs 48. 34%, P < 0. 05)。葉酸靶向載紫杉醇聚合物囊泡的細(xì)胞毒性見圖3，在圖中可見未靶向修飾的載紫 杉醇聚合物囊泡、葉酸靶向載紫杉醇聚合物囊泡(紫杉醇濃度25μ g · mL—1)、葉酸靶向空 白聚合物納米囊泡(聚合物濃度10mg/mL)在不同作用時(shí)間對H1299肺癌細(xì)胞生長抑制曲 線(η = 6， 士S)?？瞻兹~酸靶向的聚合物囊泡對細(xì)胞沒有毒性，細(xì)胞存活率一直保持近 100%。未靶向修飾及葉酸靶向載紫杉醇聚合物囊泡的細(xì)胞存活率均隨培養(yǎng)時(shí)間的延長而 下降，與未靶向修飾的載紫杉醇聚合物囊泡相比，由于葉酸的靶向作用，葉酸靶向載紫杉醇 聚合物囊泡對細(xì)胞毒性更強(qiáng)，在培養(yǎng)96h后，細(xì)胞存活率為19. 73%，未靶向修飾的納米囊 泡細(xì)胞存活率為30. 08%。未靶向修飾的載紫杉醇聚合物囊泡的制備同實(shí)施例1，只是在步驟(1)中未加入 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(2000)葉酸。實(shí)施例2一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡，用下述方法制成(1)將質(zhì)量比5: 1的PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物和羥基喜樹堿溶于 二氯甲烷中，加入相當(dāng)PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物質(zhì)量的二硬脂酰磷脂酰 乙醇胺-聚乙二醇(2000)葉酸，蒸發(fā)除去二氯甲烷制成均勻的薄膜，氮?dú)獯蹈蓺堄嗟亩?甲烷，真空干燥至二氯甲烷除凈；(2)在一容器中加入雙蒸水和步驟(1)的產(chǎn)物，使步驟(1)的產(chǎn)物的質(zhì)量百分比 為2 %，在65°C，水化4h，再震蕩混勻，冰浴下超聲15min形成穩(wěn)定乳液，依次通過孔徑為 0. 45 μ m、0. 22 μ m的膜過濾后，收集濾液，冷凍干燥30h，即制成一種葉酸靶向載羥基喜樹 堿聚合物囊泡。實(shí)施例3
20. 10 士 1.63 21. 23 士 1.77 1. 356 士 0. 21
19. 75 士 1.59 20. 23 士 1.68 0. 74 士 0. 16*
19. 61 士 1.47 19. 90 士 1.56 0.48 士 0.13*
一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡，用下述方法制成(1)將質(zhì)量比2 1的PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物和長春新堿溶于 乙腈中，加入相當(dāng)PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物質(zhì)量的二硬脂酰磷脂酰乙醇 胺-聚乙二醇(2000)葉酸，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙腈在瓶壁形成一層均勻的薄膜，氮?dú)獯蹈蓺堄?的乙腈，真空干燥至乙腈除凈；(2)在一容器中加入磷酸鹽緩沖液(PBS)和步驟(1)的產(chǎn)物，使步驟(1)的產(chǎn)物的 質(zhì)量百分比為8%，在55°C，水化6h，再震蕩混勻，冰浴下超聲IOmin形成穩(wěn)定乳液，依次通 過孔徑為0. 45 μ m、0. 22 μ m的膜過濾后，收集濾液，冷凍干燥18h，即制成一種葉酸靶向載 長春新堿聚合物囊泡。實(shí)施例4一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡，用下述方法制成(1)將質(zhì)量比為1 1的PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物和康普瑞汀溶于 三氯甲烷中，加入相當(dāng)PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物質(zhì)量10%的二硬脂酰磷脂酰 乙醇胺-聚乙二醇(2000)葉酸，蒸發(fā)除去三氯甲烷制成均勻的薄膜，氮?dú)獯蹈蓺堄嗟娜?甲烷，真空干燥至三氯甲烷除凈；(2)在一容器中加入磷酸鹽緩沖液(PBS)和步驟(1)的產(chǎn)物，使步驟(1)的產(chǎn)物的 質(zhì)量百分比為0. 1 %，在70°C，水化5h，再震蕩混勻，冰浴下超聲35min形成穩(wěn)定乳液，依次 通過孔徑為0. 45 μ m、0. 22 μ m的膜過濾后，收集濾液，冷凍干燥36h，即制成一種葉酸靶向 載康普瑞汀聚合物囊泡。實(shí)施例5一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡，用下述方法制成(1)將質(zhì)量比9 1的PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物和紫杉醇溶 于二氯甲烷中，加入相當(dāng)PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物質(zhì)量偶聯(lián)葉酸的磷脂 DSPE-PEG(2000)Folate，加入質(zhì)量為所述PCL-b-PEG-b-PCL的0. 1%，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去二氯甲 烷制成均勻的薄膜，氮?dú)獯蹈蓺堄嗟亩燃淄?，真空干燥至二氯甲烷除凈?2)在一容器中加入磷酸鹽緩沖液(PBS)和步驟(1)的產(chǎn)物，使步驟(1)的產(chǎn)物的 質(zhì)量百分比為10%，在50°C，水化2h，再震蕩混勻，冰浴下超聲5min形成穩(wěn)定乳液，依次通 過孔徑為0. 45 μ m、0. 22 μ m的膜過濾后，收集濾液，冷凍干燥12h，即制成一種葉酸靶向載 紫杉醇聚合物囊泡。利用葉酸本身具有熒光的特點(diǎn)，將本發(fā)明各實(shí)施例制備的葉酸靶向載紫杉醇聚合 物囊泡用激光共聚膠顯微鏡觀看，可以看見本發(fā)明一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡 具有藍(lán)紫色熒光點(diǎn)，表明囊泡表面連接上了葉酸，見圖2，(為了使藍(lán)紫色熒光點(diǎn)在黑色底 上更清楚的顯示出來，我們將圖2中的藍(lán)紫色熒光點(diǎn)處理為白色)。實(shí)驗(yàn)證明，用本發(fā)明的方法也可以制備出臨床上常用的其它疏水性藥物聚合物囊 泡。如葉酸靶向載卡馬西平聚合物囊泡、葉酸靶向載非洛地平聚合物囊泡、葉酸靶向載布洛 芬聚合物囊泡、葉酸靶向載左炔諾孕酮聚合物囊泡和葉酸靶向載頭孢哌酮聚合物囊泡。實(shí)驗(yàn)證明各實(shí)施例制備的疏水性抗癌藥物聚合物囊泡對荷EMT-6乳腺癌BALB/c 小鼠具有抑瘤效果。都可以抑制H1299肺癌細(xì)胞生長。對其它腫瘤如卵巢癌、肺癌、頭頸 癌及肝癌也有抑制作用，也能抑制上述腫瘤細(xì)胞的生長，而且其抑制作用都要比未用葉酸修飾的相應(yīng)囊泡組好。
權(quán)利要求
一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡，其特征是用下述方法制成(1)將質(zhì)量比為9～1∶1的PCL b PEG b PCL兩親性三嵌段共聚物和疏水性藥物溶于有機(jī)溶劑中，加入相當(dāng)PCL b PEG b PCL兩親性三嵌段共聚物質(zhì)量0.1％ 10％的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 聚乙二醇(2000)葉酸，蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑制成均勻的薄膜，氮?dú)獯蹈蓺堄嗟挠袡C(jī)溶劑，真空干燥至有機(jī)溶劑除凈；(2)在一容器中加入雙蒸水或磷酸鹽緩沖液和步驟(1)的產(chǎn)物，使步驟(1)的產(chǎn)物的質(zhì)量百分比為0.1％ 10％，在50℃ 70℃，水化2h 12h，再震蕩混勻，冰浴下超聲5min 35min形成穩(wěn)定乳液，依次通過孔徑為0.45μm、0.22μm的膜過濾后，收集濾液，冷凍干燥12 36h，即制成一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡，其特征是所述有機(jī) 溶劑為乙腈、二氯甲烷或三氯甲烷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡，其特征是所述疏水 性藥物為紫杉醇、羥基喜樹堿、長春新堿或康普瑞汀。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡，其特征是所述步驟(2) 為在一容器中加入雙蒸水或磷酸鹽緩沖液和步驟(1)的產(chǎn)物，使步驟(1)的產(chǎn)物的質(zhì)量 百分比為2% -8%，在60°C，水化4h-6h，再震蕩混勻，冰浴下超聲10min-15min形成穩(wěn)定乳 液，依次通過孔徑為0. 45 μ m、0. 22 μ m的膜過濾后，收集濾液，冷凍干燥12_36h，即制成一 種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡。
5.一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡的制備方法，其特征是包括如下步驟(1)將質(zhì)量比為9 1 1的PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物和疏水性藥物溶 于有機(jī)溶劑中，加入相當(dāng)PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物質(zhì)量0. -10%的二硬脂 酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(2000)葉酸，蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑制成均勻的薄膜，氮?dú)獯蹈蓺?余的有機(jī)溶劑，真空干燥至有機(jī)溶劑除凈；(2)在一容器中加入雙蒸水或磷酸鹽緩沖液和步驟(1)的產(chǎn)物，使步驟(1)的產(chǎn) 物的質(zhì)量百分比為0. -10%，在50°C -70°C，水化2h-12h，再震蕩混勻，冰浴下超聲 5min-35min形成穩(wěn)定乳液，依次通過孔徑為0. 45 μπι,Ο. 22 μ m的膜過濾后，收集濾液，冷凍 干燥12-36h，即制成一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡的制備方法，其特征 是所述有機(jī)溶劑為乙腈、二氯甲烷或三氯甲烷。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡的制備方法，其特征 是所述疏水性藥物為紫杉醇、羥基喜樹堿、長春新堿或康普瑞汀。
8.根據(jù)權(quán)利要求5的一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡的制備方法，其特征是所 述步驟(2)為在一容器中加入雙蒸水或磷酸鹽緩沖液和步驟(1)的產(chǎn)物，使步驟(1)的產(chǎn) 物的質(zhì)量百分比為2% -8%，在60°C，水化4h-6h，再震蕩混勻，冰浴下超聲10min-15min形 成穩(wěn)定乳液，依次通過孔徑為0. 45 μ m、0. 22 μ m的膜過濾后，收集濾液，冷凍干燥12_36h， 即制成一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡。
9.權(quán)利要求1-4之一的一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡在制備抗癌藥物中的 應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種葉酸靶向載疏水性藥物聚合物囊泡及制備方法及用途，該聚合物囊泡是用下述方法制成(1)將兩親性三嵌段共聚物和疏水性藥物溶于有機(jī)溶劑中，加入二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(2000)葉酸，蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑制成均勻的薄膜，吹干，干燥；(2)在一容器中加入雙蒸水和步驟(1)的產(chǎn)物，水化，震蕩混勻，超聲形成穩(wěn)定乳液，膜過濾，收集濾液，冷凍干燥。本發(fā)明的聚合物囊泡具有脂質(zhì)體和納米粒等微粒載藥系統(tǒng)的主要優(yōu)點(diǎn)，并且其體內(nèi)外穩(wěn)定性顯著優(yōu)于脂質(zhì)體；其膜層較厚，有利于包封疏水性藥物；具有EPR被動靶向和葉酸主動靶向雙重靶向功能，可使載藥囊泡有效靶向聚集在腫瘤部位，達(dá)到靶向治療的目的。
文檔編號A61K9/00GK101953778SQ201010299199
公開日2011年1月26日 申請日期2010年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月30日
發(fā)明者宋存先, 張琳華 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程研究所