專(zhuān)利名稱(chēng)：小穴殼菌素化合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種聚酮類(lèi)化合物，尤其是涉及一種源于紅樹(shù)林真菌(小穴殼菌素)的具有抗腫瘤活性的聚酮類(lèi)化合物及其制備方法，以及它們?cè)谥苽淇鼓[瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
紅樹(shù)林為分布于熱帶和亞熱帶海岸潮間帶的木本植物群落，是海灘上特有的森林類(lèi)型。生活在紅樹(shù)林區(qū)的紅樹(shù)林真菌(mangrove fungi)由于所處的生境特殊，其遺傳及生理特性與其他生境中的微生物有所不同，具有產(chǎn)生新型活性物質(zhì)的潛力，是開(kāi)發(fā)新藥的重要資源。近年來(lái)對(duì)紅樹(shù)林真菌活性物質(zhì)的研究引起了國(guó)內(nèi)外的關(guān)注，目前已從這類(lèi)真菌中發(fā)現(xiàn)了一些具有藥用價(jià)值的新化合物，如Isaka等(Isaka，M.，Chotika，S.，Morakot，T.Aigialomycins A-E，new resorcylic macrolides from the marine mangrove fungusAigialus parvus.J.Org.Chem.2002，671561-1566.)從紅樹(shù)林真菌Aigialus parvus中分離到5種新的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)化合物(aigialomycins A～E)，其中aigialomycin D對(duì)KB細(xì)胞和Vero細(xì)胞的IC50分別為3.0μg/mL和1.8μg/mL。Lin等(Lin，Y.C.，Wu，X.Y.，F(xiàn)eng，S.，et al.Five Unique CompoundsXyloketals from Mangrove Fungus Xylaria sp.fromthe South China Sea Coast.J.Org.Chem.2001，666252-6256.)從南海紅樹(shù)林真菌Xylaria sp.(no.2508)發(fā)酵液中分離到5種獨(dú)特的化合物xyloketals A～E，當(dāng)xyloketals A濃度為1.5×10-6mol/L時(shí)對(duì)乙酰膽堿酯酶有抑制活性。所以我們的研究具有較高的理論價(jià)值和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類(lèi)新的來(lái)源于紅樹(shù)林真菌的具有潛在藥用價(jià)值的化合物及其提取分離方法，以及它們?cè)谥苽淇鼓[瘤藥物方面的應(yīng)用。
本發(fā)明所說(shuō)的小穴殼菌素化合物是從紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3(簡(jiǎn)稱(chēng)HTF3)的發(fā)酵培養(yǎng)物中提取分離到的四種結(jié)構(gòu)類(lèi)似的新化合物，結(jié)構(gòu)分別為小穴殼菌素A，(3，5-Dihydroxy-2-octanoyl-phenyl)-acetic acid methyl ester(化合物A)、小穴殼菌素B，[3，5-Dihydroxy-2-(1-methoxy-octyl)-phenyl］-acetic acid methyl ester(化合物B)、小穴殼菌素C，(3，5-Dihydroxy-2-nonanoyl-phenyl)-acetic acid ethyl ester(化合物C)和小穴殼菌素D，6，8-Dihydroxy-1-(6-hydroxy-heptyl)-isochroman-3-one(化合物D)。
本發(fā)明所說(shuō)的化合物A、化合物B、化合物C、化合物D的結(jié)構(gòu)式分別為 本發(fā)明所用的紅樹(shù)林真菌HTF3已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC，中國(guó)武漢大學(xué)校內(nèi))，保藏號(hào)為CCTCC NOM203067，保藏日期為2003年8月29日。
本發(fā)明所說(shuō)的化合物A、B、C和D可從紅樹(shù)林真菌HTF3的發(fā)酵培養(yǎng)物中提取分離得到，制備方法的具體步驟如下(1)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)按質(zhì)量比培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，瓊脂1.5-2.0，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面，挑取菌種接入斜面培養(yǎng)；(2)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)按質(zhì)量比發(fā)酵培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，半海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)；(3)將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)物過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；(4)發(fā)酵液上清用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮，得到組分A；菌體用甲醇充分浸提，合并提取液減壓濃縮，得到石油醚相和水相，石油醚相減壓濃縮后得到組分B；水相用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮后得到組分C；(5)組分A用硅膠柱和反相硅膠柱層析后，用高效液相色譜分離，收集保留時(shí)間為11.6min的洗脫峰，濃縮后得到化合物A；(6)組分B用硅膠柱層析和凝膠柱層析后，再用硅膠柱純化，按體積比收集氯仿∶甲醇＝(30～60)∶1的組分得到化合物B；(7)組分C用硅膠柱層析，氯仿—甲醇梯度洗脫，得到組分1和組分2，組分1用反相硅膠柱得到化合物C，組分2用硅膠柱純化得到化合物D。
在步驟1中，挑取菌種接入斜面，28℃培養(yǎng)5-15天。
在步驟2中，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基，溫度28℃、以100-160轉(zhuǎn)/分震搖，培養(yǎng)5-10天。
在步驟4中，水相用乙酸乙酯萃取2-5遍。
在步驟5中，組分A反復(fù)用硅膠柱和反相硅膠柱層析后，用高效液相色譜[email protected]μm，7.8mm×300mm，WATO2582分離，洗脫劑為氯仿—甲醇，流量為1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。
本發(fā)明所說(shuō)的化合物A、化合物B、化合物C、化合物D具有抗腫瘤活性，可用于制備抗腫瘤藥物。由此可見(jiàn)，本發(fā)明具有較高的理論價(jià)值和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
實(shí)施例1化合物A、B、C、D的分離制備方法(1)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)培養(yǎng)基以克為單位馬鈴薯去皮、切碎20，加水煮沸，紗布過(guò)濾，濾液中加葡萄糖2，瓊脂2.0，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面。挑取菌種接入斜面，28℃培養(yǎng)10天；(2)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基以克為單位馬鈴薯去皮、切碎20，加水煮沸，紗布過(guò)濾，濾液中加葡萄糖2，半海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基，溫度28℃、震搖(120轉(zhuǎn)/分)培養(yǎng)7天；(3)將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)液用4層紗布過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；(4)發(fā)酵液上清用等體積乙酸乙酯萃取4遍，有機(jī)相于50℃減壓濃縮，得到組分A；菌體在室溫用甲醇充分浸提，合并提取液于50℃減壓濃縮，得到石油醚相和水相，石油醚相減壓濃縮后得到組分B；水相用乙酸乙酯萃取3遍，有機(jī)相減壓濃縮后得到組分C；(5)組分A反復(fù)用硅膠柱層析后，再用反相硅膠柱(22g RP-18)分離，收集甲醇—水＝7∶3(V/V)的組分，濃縮后用高效液相色譜分離([email protected]μm，7.8×300mm，WAT02582)，洗脫劑為氯仿∶甲醇＝40∶1(V/V)，流量為1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；收集保留時(shí)間為11.6min的洗脫峰，濃縮后得到化合物A(3mg)
(6)組分B用硅膠柱層析，收集氯仿∶甲醇＝30∶1(V/V)的組分，濃縮后用凝膠柱(45g Sephadex LH-20)層析，再用硅膠柱純化，收集氯仿∶甲醇＝50∶1(V/V)的組分得到化合物B(18mg)。
(7)組分C用硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫，得到組分1和組分2。組分1用反相硅膠柱(45g RP-18)分離，收集丙酮∶水＝1∶1(V/V)的組分，濃縮后再用硅膠柱純化，收集石油醚∶丙酮＝5∶1(V/V)的組分得到化合物C(10mg)。組分2用反相硅膠柱(45gRP-18)分離，收集甲醇∶水＝1∶1(V/V)的組分，濃縮后再用硅膠柱純化，收集石油醚∶丙酮＝4∶1(V/V)的組分得到化合物D(30mg)。
化合物A的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)黃色油狀物；ESIMS m/z 309.0[M+H]+；HRESIMS m/z 331.1527[M+Na]+(calcd for C17H24O5Na，331.1521)；1H NMR and13C NMR(500MHz，CDCl3)見(jiàn)表1和表2。
表1化合物A、B、C和D的1H-NMR數(shù)據(jù)

a)CDCl3；b)CD3OD
表2化合物A、B、C和D的13C-NMR數(shù)據(jù)

a)CDCl3；b)CD3OD化合物B的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)無(wú)色無(wú)定形粉末；ESIMS m/z 347.1[M+Na]+；HRESIMS m/z 347.1832 [M+Na]+(calcd for C18H28O5Na，347.1834)；1H NMR and13C NMR(400MHz，CDCl3)見(jiàn)表1和表2。
化合物C的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)黃色油狀物；ESIMS m/z 337.0[M+H]+(calcd for C19H28O5)；1H NMR and13C NMR(400MHz，CDCl3)見(jiàn)表1和表2。
化合物D的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)黃色油狀物；ESIMS m/z 295.1[M+H]+(calcd for C16H22O5)；1H NMR and13C NMR(500MHz，CD3OD)見(jiàn)表1和表2。
實(shí)施例2采用體外測(cè)定細(xì)胞毒的MTT(Methyl Thiazolyltetrazolium)法檢測(cè)化合物A、B、C、D的抗腫瘤活性(1)腫瘤細(xì)胞株人B淋巴瘤Raji細(xì)胞、人口腔皮樣癌KB細(xì)胞和人肝癌HepgII細(xì)胞(2)材料a MTT(噻唑藍(lán))用0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS)溶解MTT(Thiazoyl blue)到終濃度5mg/ml，0.220μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，分裝后于4℃避光保存；
b SDS裂解液100g十二烷基磺酸鈉(SDS)，1N HCl10ml，加熱溶解，蒸餾水定容至1000ml。
c細(xì)胞培養(yǎng)基(全培)一袋10g干粉RMPI 1640(Gibco Co.Ltd.)細(xì)胞培養(yǎng)基溶于1L雙蒸水中；加入2g NaHCO3攪勻溶解后封口，置于4℃過(guò)夜，以自然沉淀除去雜質(zhì)；次日加入10-15％已滅活(56℃，30min)的小牛血清及1％多抗母液；混勻后用0.22μm孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。
(3)化合物A、B、C和D的配置分別取一定量的化合物A、B、C和D，用甲醇溶解并調(diào)整濃度為10mg/ml，0.22μm孔徑的濾膜過(guò)濾除菌，4℃保存?zhèn)溆谩?br> (4)腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)a細(xì)胞活化取一干凈燒杯，裝入干凈溫水，水溫調(diào)至37-40℃；將凍存管從液氮中取出迅速投入溫水解凍，并將凍存細(xì)胞接入預(yù)裝有細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％ CO2、100％濕度的條件下培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，及時(shí)更換培養(yǎng)液、分瓶。
b細(xì)胞計(jì)數(shù)選對(duì)數(shù)生成期細(xì)胞，胰酶消化，移入離心管中，加全培至10ml，取一滴滴入計(jì)數(shù)板一側(cè)凹槽中，倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)。調(diào)整細(xì)胞數(shù)至1×105/ml。
c活性檢測(cè)①96孔板在超凈工作臺(tái)內(nèi)紫外光下照射1小時(shí)；②在各孔中加入細(xì)胞懸液80μl，37℃、5％CO2、100％濕度的條件下培養(yǎng)24小時(shí)；③加入20μl用全培梯度稀釋成一系列濃度的A、B、C和D溶液，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)；④每孔加入MTT溶液10μl，輕輕震搖使顆粒溶解，37℃放置3小時(shí)；⑤取出培養(yǎng)板，每孔加入10％SDS溶液100μl，37℃溶解過(guò)夜；⑥用酶聯(lián)反應(yīng)儀590nm測(cè)定各孔吸光值，按下列公式計(jì)算抑制率抑制率＝(對(duì)照組OD值-實(shí)驗(yàn)組OD值)/對(duì)照組OD值×100％⑦以抑制率為縱坐標(biāo)，受試樣品濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)作圖，求出抑制率為50％時(shí)的濃度即為IC50。
d實(shí)驗(yàn)結(jié)果化合物A-D對(duì)三種腫瘤細(xì)胞均具有抗腫瘤活性，但其活性及抗瘤譜有些差異?；衔顱和化合物C對(duì)人淋巴瘤Raji細(xì)胞的IC50均小于2μg/mL，而化合物A和化合物D對(duì)人淋巴瘤Raji細(xì)胞的IC50均大于20μg/mL；化合物A-D對(duì)人口腔上皮癌KB細(xì)胞和人肝癌HepgII細(xì)胞的IC50均大于10μg/mL。
實(shí)施例3與實(shí)施例1類(lèi)似，其區(qū)別在于在紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)中，濾液中加葡萄糖1，瓊脂1.8，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面。挑取菌種接入斜面，28℃培養(yǎng)10天；在紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)中震搖160轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)5天；將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)液用3層紗布過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；發(fā)酵液上清用等體積乙酸乙酯萃取3遍，水相用乙酸乙酯萃取5遍。
實(shí)施例4與實(shí)施例1類(lèi)似，其區(qū)別在于在紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)中，濾液中加葡萄糖3，瓊脂1.5，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面。挑取菌種接入斜面，28℃培養(yǎng)10天；在紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)中震搖100轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)10天；將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)液用5層紗布過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；發(fā)酵液上清用等體積乙酸乙酯萃取2遍，水相用乙酸乙酯萃取2遍。
權(quán)利要求
1.小穴殼菌素化合物A，其特征在于其結(jié)構(gòu)為
2.小穴殼菌素化合物B，其特征在于其結(jié)構(gòu)為
3.小穴殼菌素化合物C，其特征在于其結(jié)構(gòu)為
4.小穴殼菌素化合物D，其特征在于其結(jié)構(gòu)為
5.如權(quán)利要求1所述的小穴殼菌素化合物A的制備方法，其特征在于其步驟為(1)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)按質(zhì)量比培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，瓊脂1.5-2.0，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面，挑取菌種接入斜面培養(yǎng)；(2)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)按質(zhì)量比發(fā)酵培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，半海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)；(3)將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)物過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；(4)發(fā)酵液上清用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮，得到組分A；菌體用甲醇充分浸提，合并提取液減壓濃縮，得到石油醚相和水相，石油醚相減壓濃縮后得到組分B；水相用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮后得到組分C；(5)組分A用硅膠柱和反相硅膠柱層析后，用高效液相色譜分離，收集保留時(shí)間為11.6min的洗脫峰，濃縮后得到化合物A。
6.如權(quán)利要求2所述的小穴殼菌素化合物B的制備方法，其特征在于其步驟為(1)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)按質(zhì)量比培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，瓊脂1.5-2.0，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面，挑取菌種接入斜面培養(yǎng)；(2)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)按質(zhì)量比發(fā)酵培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，半海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)；(3)將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)物過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；(4)發(fā)酵液上清用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮，得到組分A；菌體用甲醇充分浸提，合并提取液減壓濃縮，得到石油醚相和水相，石油醚相減壓濃縮后得到組分B；水相用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮后得到組分C；(5)組分A用硅膠柱和反相硅膠柱層析后，用高效液相色譜分離，收集保留時(shí)間為11.6min的洗脫峰，濃縮后得到化合物A；(6)組分B用硅膠柱層析和凝膠柱層析后，再用硅膠柱純化，按體積比收集氯仿∶甲醇＝(30～60)∶1的組分得到化合物B。
7.如權(quán)利要求3所述的小穴殼菌素化合物C的制備方法，其特征在于其步驟為(1)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)按質(zhì)量比培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，瓊脂1.5-2.0，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面，挑取菌種接入斜面培養(yǎng)；(2)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)按質(zhì)量比發(fā)酵培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，半海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)；(3)將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)物過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；(4)發(fā)酵液上清用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮，得到組分A；菌體用甲醇充分浸提，合并提取液減壓濃縮，得到石油醚相和水相，水相用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮后得到組分C；(5)組分C用硅膠柱層析，氯仿—甲醇梯度洗脫，得到組分1和組分2。組分1用反相硅膠柱和硅膠柱純化得到化合物C。
8.如權(quán)利要求4所述的小穴殼菌素化合物D的制備方法，其特征在于其步驟為(1)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的種子培養(yǎng)按質(zhì)量比培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，瓊脂1.5-2.0，半海水定容至100ml，滅菌，制成試管斜面，挑取菌種接入斜面培養(yǎng)；(2)紅樹(shù)林真菌Dothiorella sp.HTF3CCTCC NOM203067的發(fā)酵培養(yǎng)按質(zhì)量比發(fā)酵培養(yǎng)基為馬鈴薯去皮、切碎取20，加水煮沸后過(guò)濾，濾液中加葡萄糖1-3，半海水定容至100ml，滅菌，將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)；(3)將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵培養(yǎng)物過(guò)濾，分別得到發(fā)酵液上清和菌體；(4)發(fā)酵液上清用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮，得到組分A；菌體用甲醇充分浸提，合并提取液減壓濃縮，得到石油醚相和水相，石油醚相減壓濃縮后得到組分B；水相用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相減壓濃縮后得到組分C；(5)組分C用硅膠柱層析，氯仿—甲醇梯度洗脫，得到組分1和組分2。組分2用硅膠柱純化得到化合物D。
9.如權(quán)利要求1或2或3或4所述的小穴殼菌素化合物用于制備抗腫瘤藥物的應(yīng)用。
全文摘要
小穴殼菌素化合物及其制備方法和應(yīng)用，涉及一種聚酮類(lèi)化合物，尤其是涉及一種小穴殼菌素的具有抗腫瘤活性的聚酮類(lèi)化合物及其制備方法，以及它們?cè)谥苽淇鼓[瘤藥物中的應(yīng)用。提供一類(lèi)新的來(lái)源于紅樹(shù)林真菌的具有潛在藥用價(jià)值的化合物及其提取分離方法，以及它們?cè)谥苽淇鼓[瘤藥物方面的應(yīng)用。步驟為將斜面上培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)、過(guò)濾，得發(fā)酵液上清和菌體；發(fā)酵液上清萃取，有機(jī)相減壓濃縮，得組分A；菌體用甲醇充分浸提，減壓濃縮，得到石油醚相和水相，石油醚相減壓濃縮后得組分B；水相萃取，有機(jī)相減壓濃縮后得組分C；組分A、B、C層析后，再分別用高效液相色譜分離、硅膠柱純化、洗脫得化合物A、B、C、D。
文檔編號(hào)A61K31/216GK1733693SQ20051009188
公開(kāi)日2006年2月15日 申請(qǐng)日期2005年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月15日
發(fā)明者沈月毛, 杜希萍, 鄭忠輝, 黃耀堅(jiān), 宋思揚(yáng), 蘇文金 申請(qǐng)人:廈門(mén)大學(xué)