專利名稱：選擇性降低血脂水平的藥物組合劑制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過(guò)從苜蓿的種子、根、莖和/或葉萃取，萃取液隨意濃縮、濃萃取液制成粉或顆粒，從而制備選擇性降血脂的藥物組合劑的方法。
眾所周知，心血管疾病和心肌梗塞的最重要的危險(xiǎn)因素與對(duì)健康有不利影響的一些血脂成分的量緊密相關(guān)，這些疾病在人類的死亡統(tǒng)計(jì)中起主導(dǎo)作用。Brown和Goldstein由于對(duì)膽固醇會(huì)引起這類疾病提出新的見(jiàn)解而被授予1985年的Nobel獎(jiǎng)，這一事件也正好強(qiáng)調(diào)了這類疾病的重要性。根據(jù)文獻(xiàn)〔Journal of American Medical Association 248，1465(1982);ibidem 256，2835(1986)〕中發(fā)表的最重要的病理學(xué)論述，已經(jīng)澄清，在早期普遍接受的血清膽固醇上限，即6.5mmol/l，局部缺血患者(即由于供血不足而危及生命)的比例是血清膽固醇濃度大約為5mmol/l的人的兩倍。
包括詳盡弄清各種血脂成分的作用的研究特別重要。于是，已經(jīng)明了，除血清膽固醇水平高之外(該所謂的血膽固醇過(guò)多)，甘油三酸酯型的脂水平增高(甘油三酸酯過(guò)多)以及高密脂蛋白(HDL)與低密脂蛋白(LDL)的錯(cuò)誤比例分布(即所謂的脂蛋白異常)在冠心病中起著決定性作用。這一點(diǎn)特別得到Frick等〔NewEngl.J.Med.317，1237(1987)〕的研究工作的支持，他們表明通過(guò)優(yōu)先影響所述三種脂的濃度的藥物進(jìn)行治療，可以使局部缺血疾病及死亡率不僅減少兩倍甚至減少三倍。
在幾個(gè)國(guó)家的統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)已經(jīng)說(shuō)明，65%至76%成年人的血脂水平接近高危險(xiǎn)水平。匈牙利人血液中的平均膽固醇水平為5.6-5.7mmol/l〔Magyur Tudomany(“Hangarian Science”)3，265(1989)〕。在美國(guó)3.4-4.1mmol/l的LDL膽固醇水平被認(rèn)為是健康人可以接受的水平，而高于此水平，則認(rèn)為是危險(xiǎn)的〔Arch Intern Med.14836(1988)〕。
高脂蛋白或脂蛋白異常主要是脂肪代謝障礙發(fā)展的結(jié)果，并能用藥物調(diào)節(jié)。這些藥物經(jīng)口服吸收，抑制脂蛋白的生物合成，并增加它們的分解和排除(例如冠心平或煙酸衍生物);或者它們不從腸道吸收并抑制脂從腸道吸收(例如離子交換樹脂、谷甾醇、右旋糖酐硫酸酯，以及類似的化合物)。可是這些藥物應(yīng)象治療一樣使用，結(jié)果會(huì)導(dǎo)致惡心、腹瀉，另一些情況下會(huì)發(fā)生便秘、鼓脹、肌肉痛、無(wú)力、形成結(jié)石，少數(shù)還出現(xiàn)脫發(fā)以及皮膚癥狀的副反應(yīng)。
脂蛋白過(guò)多的病例意味著高風(fēng)險(xiǎn)，有副作用的藥物治療意味著低風(fēng)險(xiǎn)。與此相反，僅因血脂水平高而有危險(xiǎn)的接受治療的病人要求具有理想療效無(wú)副作用，也就是無(wú)風(fēng)險(xiǎn)的組合劑。到目前為止，還沒(méi)有這樣的組合劑。在我的系統(tǒng)研究過(guò)程中，正是以開(kāi)發(fā)這種類型的組合劑系統(tǒng)為目標(biāo)。
對(duì)具有抗血脂效應(yīng)的皂甙，包括植物來(lái)源的藥物，賦予了最大的注意力。
雖然到目前還不大知道皂甙在植物生理中的作用，但是在種植期的非常多數(shù)量的植物個(gè)體中都存在皂甙。除少數(shù)例外，這些皂甙都對(duì)人體有毒。
類似地從文獻(xiàn)中還知道，來(lái)自于植物的所謂中性或酸性皂甙可以和膽酸或膽甾醇及其衍生物選擇性地生成絡(luò)合物〔Biochemistry and Function of Isopentenoids in plants.Monograqh(Marcel Dekker，New York，1984)pages 229-246〕，而且在許多植物中都存在這些皂甙。
化學(xué)上了解最多的皂角苷配基組分〔CRC Crit Rev.Food Sci Nutr.26，27-135(1987)〕為大豆皂角苷配基A、B、C、D、E和F，在一些植物中的所謂中性皂甙中，這些皂角苷配基上連接了各種糖基。所有這些都存在于大豆和苜蓿中，而它們中的一部分存在于蠶豆、豌豆和三葉草類中，以及花生、蓮及類似的植物中。其它中性皂甙有燕麥中的燕麥根皂甙A和B、紐阿替皂甙元、異紐阿替皂甙元和類似組分;土豆和辣椒中的羥基螺甾酮、新克洛皂甙元、吉托皂甙元、辣椒皂甙、melongosides、園錐茄堿和西紅柿中的蕃茄素;洋蔥和主要在大蒜中的谷甾醇、香樹精、吉托皂甙元及類似組分;天冬屬中的officinalgsin和天冬皂甙;茶樹中的茶皂甙;特別是鉤吻根(jam root)中的薯蕷皂甙元;馬粟樹中的七葉皂甙、aescinialin、cryptoaescin。在胡蘿卜、絲蘭、南瓜、黃瓜、黑果莓、桑葚、越桔、草莓、木賊和玫瑰中，特別是薔薇果、common confrey、人參根及類似植物中，發(fā)現(xiàn)了其它皂甙。
酸性皂甙的主要代表是石竹素、oleandiolic acid、medicagenic acid、glyeirrhizetic acid、ep
catonic acid、echinocistoic acid、常春配基、絲石竹配基、medicoside、helianthoside衍生物和類似的化合物，在各個(gè)皂甙中含不同的糖基。它們可以存在于黃香草木犀、苜蓿、向日葵、洋蔥、大蒜、肉豆蔻、菠菜、甜菜、菖蒲、巴拿馬種植果皮、肥皂草、菌幕、野百合、鐵線蓮及類似植物中。
從抗血脂活性角度看，雖然苜蓿不是單一皂甙的來(lái)源，由于已經(jīng)知道它的所有皂甙均與膽固醇形成絡(luò)合物〔J.Amer.Chem.Soc.，76，2271(1954)〕，所以認(rèn)為是最有用的;有關(guān)這種絡(luò)合物的研究也已詳細(xì)發(fā)表〔Biochim.Biophys.Acta.270，1818(1972)〕。
廣義的苜蓿是指Medicago L.genus，狹義的苜蓿表示最了解的普通培養(yǎng)的種，即用作飼料的苜蓿(蘭苜蓿Medieago soctiva L.)。與后一種密切相關(guān)的其它重要的家庭種植的苜蓿是長(zhǎng)在沙質(zhì)土壤的苜蓿(或稱谷苜蓿)，即鐮刀形苜蓿、黃苜?；蚝谲俎！?br> 蘭苜蓿和谷苜蓿的嫩苗的莖由從根部發(fā)育的基組成，它們?cè)谲俎５牡撞糠种?。苜蓿的簇葉是掌狀混成三重葉。各個(gè)部位的葉子均由葉柄(葉-莖)支撐。在蘭苜蓿下部葉上，嫩葉的肩為楔形，而葉子顯顛倒的雞蛋形。
蘭苜蓿的花簇為緊密的花束，常常有8-25朵花。花莖常常比葉柄和葉片的總長(zhǎng)度延長(zhǎng)。苜蓿花具有特征的蝶形結(jié)構(gòu)。綠色的花由五片葉組成，表面通常為多絨毛狀?；ㄩL(zhǎng)度大約為10mm。蘭苜蓿的副花冠的顏色可以顯示多種色澤，從亮蘭色至深蘭色。
蘭苜蓿的種子2-2.8mm長(zhǎng)、1.5-1.7mm寬、1.1-1.2mm厚;形狀或?yàn)樾Q豆?fàn)罨驗(yàn)槟I狀或?yàn)閭?cè)面有壓縮了的歪曲對(duì)稱性的三角形。
苜蓿中的主要組分如下a)普通蛋白原性氨基酸，例如谷氨酰胺、天冬氨酸、丙氨酸、精氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、組氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、色氨酸、苯丙氨酸和纈氨酸。
b)特殊氨基酸(雖然有些結(jié)合成蛋白，但大多數(shù)為游離氨基酸)鳥氨酸、瓜氨酸、γ-氨基丁酸、γ-亞甲基谷氨酸、δ-羥基賴氨酸，ε-氨基-α-羥基己酸和刀豆氨酸。
c)胺膽堿和三甲胺。
d)脂肪酸亞油酸、油酸、亞麻酸和硬脂酸。
e)磷脂卵磷脂、腦磷脂和磷脂酸。
f)類異戊二烯脂甾醇和三萜皂甙。
g)類胡蘿卜素胡蘿卜素和葉黃素。
h)單萜類羅勒烯(苜蓿的主要芳香組分)。
i)二萜類葉綠醇和葉綠醌。
j)花色素類萃雀素的二苷、3′-甲花萃素和二甲花萃素。
k)在呋喃并香豆精中，苜蓿中存在重要量的有高度子宮收縮活性的擬雌內(nèi)酯。由于這一事實(shí)，用苜蓿喂羊，可以改變羊的促黃體激素水平并導(dǎo)致不育，而且用于人體結(jié)核的苜蓿制劑是至少可以是一種危險(xiǎn)因子〔I.Bocsa and L.Szabo“Alfalfa and its Relatives”(in Hungarian)，Aka-demiai kiado，Budapest 1987，pp，79 and 80〕。
1)苜蓿中含非常豐富的苜蓿皂甙，即由五環(huán)皂角苷配基與各種糖形成的甙。最重要的皂角配基是大豆皂角苷配基A、B、C、D、E以及苜蓿酸和medicagenic acid。在植物中，葉子中皂的含量為主莖中的兩倍;而根中皂甙的含量大約是嫩芽中的10倍。根中皂甙的組成不同于嫩芽中皂甙的組成。
根據(jù)以前的文獻(xiàn)，是使用乙醇水溶液從苜蓿植物的各部分提取皂甙〔The Ameriean Journal of Nutrition 30，2061(1977);Second Munster International Arteriosclerosis Symposium;Clinical Implica-tions of Recent Research Resutts in Arterioscherosis，Westdeuscher Uerlag，Munster 1983，P.240〕或用乙醇萃取〔Phyto-chemistry 13，2253〕(1974)〕。
從苜蓿的主莖和葉子中萃取的總皂甙對(duì)猴子顯示降低血膽固醇水平和血脂水平的活性已有報(bào)道〔J.Clim.Invest.67，156(1981);Clinical Implications of Recent Research Results in Arteriosclerosis，Westdeutscher Uerlag，Munster 1983，pp.241-254〕。Carolinska研究所(瑞典)研究了苜蓿種子粉對(duì)人的降低血液膽固醇水平和阿樸脂蛋白水平的作用，結(jié)果表明每天服用40g粉末，非常高的濃度值(9.58-8.00mmol/l)能被降低大約17-18%?！睞therosclerosis 65，173(1987)〕。不過(guò)，這種效應(yīng)不能看作充分的治療作用。
雖然從植物的各部分(種子、根、主莖和葉子)按已知方法即用乙醇水溶液或乙醇萃取得到萃取物可用來(lái)降低血液膽固醇或血脂水平，但已經(jīng)知道這些植物部位含毒性刀豆氨酸〔2-氨基-4-(胍氧基)-丁酸〕〔The Merek Index，11th Edotion(1989)Rahway，N.J.，U.S.A.，P，263〕和有害的植物雌激素，主要是擬雌內(nèi)酯(The Merck Index，page 401)。這樣一來(lái)在這類萃取物的治療作用中伴隨著副作用。
苜蓿植物的種子和嫩芽中，按干重計(jì)算，刀豆氨酸含量為1.5%刀豆氨酸可以誘發(fā)以苜蓿喂養(yǎng)的猴子產(chǎn)生類似紅斑狼瘡綜合癥〔Science 216，415(1982)〕。
市售苜蓿片是用干苜蓿制的，含20-190ppm的擬雌內(nèi)酯。這意味著，服用苜蓿片的人每天體內(nèi)要攝入1mg以上的擬雌內(nèi)酯，這樣一種雌激素的量可以導(dǎo)致病理副作用〔J.Agric.Food Chem.，32，173(1984)〕。
目前還沒(méi)有能夠減少萃取物中有副作用的擬雌內(nèi)酯和刀豆氨酸含量的萃取苜蓿的方法。
本發(fā)明的目標(biāo)是，發(fā)展一種方法，以便可能從苜蓿的各個(gè)部位制備既不含植物雌激素又不含刀豆氨酸的萃取物。
本發(fā)明是基于這樣一種認(rèn)識(shí)，即使用溫度至少為40℃，pH最多為8的水或者水溶液萃取苜蓿植物的各個(gè)部位，可以完全達(dá)到上述目的。
這樣一來(lái)，本發(fā)明是通過(guò)萃取苜蓿植物的種子、根、主莖和/或葉、隨意濃縮萃取物、用濃萃取物隨意制備干粉或顆粒，制備選擇性降低血脂水平的藥物組合劑的方法。根據(jù)本發(fā)明，萃取是使用至少40℃、pH至多為8的水或水溶液進(jìn)行，這樣得到的萃取物單獨(dú)或與幾乎不消化或不消化的多糖、膠體穩(wěn)定劑、和隨意使用制藥工業(yè)中用的普通載體一道轉(zhuǎn)變?yōu)樗幬锝M合劑。
根據(jù)本發(fā)明的方法中的優(yōu)選具體方案，進(jìn)行萃取時(shí)用溫度為50-120℃，pH為5.5-6.5的水溶液，更優(yōu)先的溫度是60-70℃，pH為5.8-6.2。
酸性緩沖溶液適宜于用作水溶液，最好是含醋酸和醋酸鈉的水溶液;或含磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉的水溶液;或含磷酸氫二鈉和檸檬酸的水溶液。
對(duì)于萃取來(lái)說(shuō)，最好使用鹽酸、醋酸、檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、琥珀酸或抗壞血酸的水溶液，或這些酸的鹽、或硫酸與鐵、鎂、鈣、錳、硒、鋅、鈷和/或銅離子形成的鹽的水溶液，或上述離子與天冬氨酸或谷氨酸形成的鹽的水溶液。
最好用苜蓿葉或干葉粉以十倍量的95-100℃的水萃取25-35分鐘制備萃取物。萃取物過(guò)濾之后，全量的表面活性劑用一半體積的丁醇分?jǐn)?shù)次萃取。丁醇層合并，并蒸發(fā)至干。
往干萃取物中加入酸性調(diào)味劑，最好是檸檬酸、加入甜味劑，合適的是aspartame、加入芳香劑，最好是留蘭香和百里香萃取物，以及加入膠態(tài)乳劑穩(wěn)定劑，最好是麥芽糖胡精，按照終產(chǎn)物中干物質(zhì)里由重量分析得到的總皂甙重量計(jì)算，這些物料加入后皂甙占1.5-30%，最好是14%。
這樣獲得的按重量百分比含14%皂甙的產(chǎn)品，進(jìn)行各種檢查。首先按文獻(xiàn)〔Analyst 114，965(1989)〕中已知的方法檢查，產(chǎn)品中應(yīng)不存在出現(xiàn)于苜蓿中的毒性氨基酸刀豆氨酸。類似地，研究產(chǎn)品是否含有擬雌內(nèi)酯，這是苜蓿中的另一種特征的毒性化合物〔J.Agric Food Chem.32，173(1984)〕。產(chǎn)物中也不應(yīng)檢測(cè)到擬雌內(nèi)酯。
由于產(chǎn)品的無(wú)毒程度已經(jīng)達(dá)到了不必測(cè)定急性毒性，即使用的劑量不引起50%的死亡率(LD50值)的水平，故使用體重為160g的雄性SD大鼠對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行所謂的70天亞急性毒性研究。實(shí)驗(yàn)分為兩組，每組12只大鼠，一組作為對(duì)照，另一組用含15%皂甙的產(chǎn)品的干料與食物的混合物喂養(yǎng)。
兩組動(dòng)物的日平均食物耗量相等，為28g(日限量分別為21.4g和37.3g)。這樣一來(lái)，亞急性毒性研究的劑量水平對(duì)應(yīng)于3.67g(限值分別為2.81g和4.81g)總皂甙/kg體重/天。
在70天的研究中兩組動(dòng)物都未發(fā)生死亡。兩組動(dòng)物的血糖、尿、尿酸、肌酸酐、鈉、鉀、鹽酸鹽、二氧化碳、鈣、磷、總蛋白、白蛋白、膽紅素、堿性磷酸酯酶、紅血胞、血細(xì)胞比容和反映血液學(xué)狀態(tài)的特征值血紅蛋白值方面均無(wú)顯著性差異。但是與對(duì)照組比較，用皂甙喂養(yǎng)的動(dòng)物，血液膽固醇水平降低18.7%，甘油三酸酯水平降低5.6%。
對(duì)肝、胃、腎、脾、肺、心和腦等器官的檢查，未觀察到病理變化;兩組間的器官重量未見(jiàn)顯著性差異。所以未進(jìn)行組織學(xué)檢查。
產(chǎn)品中的全部活性成分的中性和酸性皂甙采用薄層分析(TLC)檢查如下
1.0g產(chǎn)品加熱溶于100ml蒸餾水中，用正丁醇(每次10ml)萃取5次。合并的正丁醇層減壓蒸發(fā)至干，使合乎分析精度。殘留物代表重量分析的總皂甙活性成分的重量。該殘留物溶于50ml甲醇中，并按下面描述的條件進(jìn)行色譜檢查。
薄層硅膠G(Merck)展開(kāi)系統(tǒng)正丁醇+乙醇+濃氨水(35+15+30)飽和時(shí)間蓋有濾紙的缸中60分鐘展開(kāi)時(shí)間4小時(shí)展開(kāi)距離160mm點(diǎn)樣25/μl甲醇溶液由于酸性或中性皂甙能夠與膽固醇或膽酸選擇性地形成乳膠性絡(luò)合物，所以它們抑制脂在胃腸道系統(tǒng)吸收，并發(fā)展了一種體外方法用來(lái)檢測(cè)全量皂甙的乳膠形成能力。
根據(jù)色譜研究，用重量分析法測(cè)定的按本發(fā)明方法制備的產(chǎn)品中，14(±0.2)%重量的皂甙總量由8種皂甙按不同比例組成。200mg該產(chǎn)品溶于10.0ml水中，并與各種量(mg)的向日葵油(向日葵籽油Sigma S5007，Sigma，st.Louis，Mo，USA)混合。樣品于35℃下在實(shí)驗(yàn)室機(jī)器上激烈振搖1分鐘，然后測(cè)定形成的乳膠與含油的樣品比較，以百分?jǐn)?shù)表示(〔%〕)相對(duì)濁度〔“Physico-Chemical Practicum”(in Hungarian)，Tankongvkiado，Budapest 1068，Vol.Ⅱ，P.316〕。測(cè)值列入下表 0 10 20 40 60 80 100[Z%] 60 8.5 4.5 2.5 1.7 1.3 1.1表中的數(shù)據(jù) 可以用下述表示它特征的飽和功能的通式描述〔Z%〕＝a·(mg)-1/n式中的a和n是取決于測(cè)定方法和被測(cè)化合物的乳化形成能力的參數(shù)，在我們的測(cè)定中，它們的值分別為a＝60，n＝1.19。
在測(cè)定了大量樣品的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)參數(shù)n受重量比和測(cè)定中使用的振動(dòng)的物理方式(例如機(jī)械振動(dòng)或磁力控制振動(dòng)或超聲波振動(dòng)及類似的振動(dòng))的影響，但被測(cè)樣品的乳化形成能力可以通過(guò)比較性測(cè)試(按相同的方式進(jìn)行)作出正確的判斷。這樣一來(lái)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)總可以用上面的通式表述，而n的值與乳化形成能力成反比。很弱的表面活性樣品具有低的乳化形成能力，在這種情況下，n的值可以達(dá)到10-15。使用高表面活性的樣品，n值接近于1，甚至小于1。
使用該法可以闡明，幾乎不消化或不消化的多糖由于穩(wěn)定乳化膠體顆粒而能夠增加整個(gè)皂甙的乳化形成能力，所以它們協(xié)同地增加皂甙和親水性-親脂性-類型的組分(例如黃酮、胡蘿卜素、萜類及類似化合物)的乳化形成能力。結(jié)果增加了所有活性試劑的抗血脂的生物有效度。
在這些觀察的基礎(chǔ)上，根據(jù)本發(fā)明的方法的另一優(yōu)選具體方案。產(chǎn)品除含酸性和中性皂之外，還含有溶于極性溶劑或適度溶于非極性溶劑中的幾乎不消化或不消化的多糖。該產(chǎn)品可以按這樣的方法適宜地制備，即以干凈苜蓿上分離下來(lái)的嫩芽在干燥狀態(tài)下研磨，然后用10倍體積的沸水浸泡1小時(shí)，冷后過(guò)濾。然后按濾液中含25份總皂甙的重量比往濾液中加55份麥芽糖胡精、5份大麥-β-葡糖聚糖、5份燕麥-β-葡聚糖、4份蘋果果膠、4份檸檬酸、1.5份抗壞血酸和0.5份人造甜味劑。該液相中間體在減壓下噴霧干燥或微波干燥，或簡(jiǎn)單蒸發(fā)至干，以便制成固相產(chǎn)品。
按此法制得的產(chǎn)品使用前面描述的體外方法研究它對(duì)脂吸收的抑制能力。根據(jù)優(yōu)選的方法測(cè)得的表示乳化形成能力的參數(shù)n的值為1.05，該值表明了產(chǎn)品有極好的素質(zhì)。
該產(chǎn)品的研究時(shí)間為1個(gè)月。有19名年齡在31歲和63歲之間的志愿人員(14位男性和5位女性)接受了試驗(yàn)，把1g該產(chǎn)品分布在100ml水中，每天服2次，每次1g，早飯后和晚飯后服用。下面給出的血脂參數(shù)(mmol/l)是研究前和研究后獲得的結(jié)果
結(jié)果表明，按照本發(fā)明的方法制備的組合劑可以刺激肝臟，加強(qiáng)血液膽固醇的分解。根據(jù)我的推斷，這種作用來(lái)自于尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道的選擇性專屬激動(dòng)劑的效應(yīng)。作為這種效應(yīng)的結(jié)果，由于總的膽固醇水平及其中的LDL水平下降，而HDL水平升高，高血脂和主要是危險(xiǎn)的脂蛋白異常可以被選擇性地優(yōu)先受到影響。該組合劑的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是它能降低甘油三酸脂的水平。
按照本發(fā)明的方法制備的萃取物可以單獨(dú)使用，也可以和其它已知對(duì)降血脂水平有效的活性劑合用。正如我上面的實(shí)驗(yàn)毫不含糊地顯示的那樣，把按照本發(fā)明的方法制備的萃取物與多氧化物一和/或碳水化合物-類型的膠體穩(wěn)定劑合用，可以達(dá)到特別優(yōu)良的效果。
作為治療劑，按照本發(fā)明的方法制備的萃取物既可以單獨(dú)，也可以和其它類似的活性劑聯(lián)合，轉(zhuǎn)變?yōu)橹饕m于口服的藥物組合劑，即將其與非毒性的固體或液體載體和/或其它在制藥工業(yè)中使用的添加劑混合，得到的混合物再轉(zhuǎn)變?yōu)橐簯B(tài)組合劑，最好是溶液，糖漿劑、混懸劑、凝膠劑。也可以制備固態(tài)水可混溶的顆粒、片劑、硬明膠膠囊或軟明膠膠囊、栓劑及類似的劑型。
制備藥物組合劑時(shí)按制藥工業(yè)的已知方法進(jìn)行，即把萃取物與惰性的無(wú)機(jī)或有機(jī)固體或液體載體混合，然后把混合物轉(zhuǎn)變?yōu)樯w倫劑。
乳糖、玉米淀粉、土豆淀粉、滑石粉、碳酸鎂、硬脂酸鎂、碳酸鈣、硬脂酸和硬脂酸鹽是制備片劑(dragees)和硬明膠膠本的有用載體。在制備軟明膠膠本時(shí)，使用植物油、脂肪、蠟或適宜的多元醇作載體更為合適。水多元醇、蔗糖或葡萄糖是制備溶液制劑和糖漿劑的合適載體。具有適宜稠度的油、蠟、脂肪或多元醇能夠用作制備栓劑的載體。
該藥物組合劑可以含有制藥中普通使用的添加劑，例如濕潤(rùn)劑、甜味劑、芳香劑、緩沖劑及類似的添加劑。
含有按照本發(fā)明的方法制備的萃取物的藥物組合劑的日劑量可以在大的限度內(nèi)變化，這主要取決于諸如活性劑的活性、患者的狀態(tài)和年齡及類似的情形等幾種因素。對(duì)于成年患者，口服劑量為含30-1200mg皂，最好是300-400mg皂的組合劑。下述這些劑量只是作為信息提供，實(shí)際使用的劑量應(yīng)由醫(yī)生根據(jù)病例確定。
在治療應(yīng)用中，按照本發(fā)明的方法制備的萃取物主要以片劑、膠囊劑、或水溶性顆粒劑或片劑等劑型口服給藥。
本發(fā)明提供的方法主要有下述優(yōu)點(diǎn)a)使用含最多9ppm擬雌內(nèi)酯和最多1ppm刀豆氨酸的苜蓿萃取物，b)根據(jù)本發(fā)明的方法制備的萃取物中含有的中性和酸性皂以有益的比例存在于苜蓿植物的各個(gè)部位。這樣一來(lái)，與日前已知的苜蓿萃取物相比較，使用本發(fā)明中的萃取物治療高脂蛋白癥或脂蛋白失調(diào)，可以獲得明顯好的治療結(jié)果。
c)把這樣制備的萃取物與幾乎不消化或不消化的多糖聯(lián)合應(yīng)用，可以協(xié)同性地加強(qiáng)專屬的降低血脂水平的效應(yīng)。
借助下述非限制性的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的方法作詳細(xì)說(shuō)明。
實(shí)施例15×100kg干苜蓿葉或嫩芽研碎并過(guò)Ⅲ號(hào)篩。在體積為4M3的耐酸萃取罐中進(jìn)行萃取。往萃取容器中加1M3預(yù)熱至90℃的水后，直接用蒸汽使水溫升至100℃，然后往容器中加入頭一個(gè)100kg所述植物部位，并在100℃下攪拌10分鐘進(jìn)行萃取。
使用Alfa-Laval螺旋傾斜器從植物殘?jiān)蟹蛛x濾液。得到的溶液中干物料的含量經(jīng)折光計(jì)測(cè)定，按重量比計(jì)算，為2.5-3%。其它四個(gè)100kg物料按相同的方法萃取并傾出，然后合并所得的溶液。
合并的溶液的pH為5.9，該溶液在稀壓下用可連續(xù)操作的蒸發(fā)儀在40-45℃下濃縮，按重量計(jì)算，干物料的含量為22-28%。干物料的含量可用折光儀進(jìn)行觀測(cè)。測(cè)定了體積和比重之后計(jì)算總干物料的含量。
13.5%重量的麥芽糖糊精(按植物干物料含量計(jì)算)溶于水中并加到所得的濃縮物中作為噴霧干燥的添加劑，然后在170-180℃的內(nèi)溫和90℃的外溫下噴霧干燥。
往所得的粉末中分次加入17.5%重量的研碎的含一分子水的檸檬酸和1.2%重量的aspartame，這些組分在Lodig型的攪勻器中與基質(zhì)物料均勻混合。
制粒之后，這樣獲得的粉末可以作為速溶茶組合劑直接配方。
實(shí)施例2按照實(shí)施例1中描述的方法，進(jìn)行萃取時(shí)的差別是把植物與含0.1mol/l醋酸和0.1mol/l醋酸鈉的pH為4.6的水溶液一塊煮沸。
實(shí)施例3
按照實(shí)施例1中描述的方法，進(jìn)行萃取時(shí)的差別是把植物用含0.01mol/l鹽酸pH為2.0的水溶液進(jìn)行萃取。
實(shí)施例4按照實(shí)施例1中描述的方法，進(jìn)行萃取時(shí)的差別是用預(yù)熱至40℃的水對(duì)植物萃取15分鐘，傾斜后得到的合并的溶液加熱至沸并通過(guò)壓濾過(guò)濾。象實(shí)施例1中描述的那樣濃縮之后，濾液噴霧干燥。得到的粉末制粒后壓成每片800mg的片劑。
實(shí)施例5按照實(shí)施例4中描述的方法，差別在于進(jìn)行萃取時(shí)使用含2g/l天冬氨酸硒的pH為5.8的水溶液，濃縮之后不進(jìn)行噴霧干燥，而是往濃縮物中加0.5%重量的抗壞血酸鉀和0.5%重量的aspartame。得到的溶液可作為糖漿劑使用。
實(shí)施例6800kg研成粉末的干凈苜蓿取出50kg，用3M340℃的水?dāng)嚢?小時(shí)后過(guò)濾。擠壓干植物殘?jiān)瑝撼鲆号c濾液合并之后，若有必要，壓出的液體用水補(bǔ)足到3M3，然后再加另一個(gè)50kg苜蓿粉懸浮于其中。在反復(fù)攪拌、過(guò)濾和擠壓之后，反復(fù)進(jìn)行同樣的操作，直至萃取完800kg總量的苜蓿粉。最后一步得到的pH為6.0的濾液加熱至沸并過(guò)濾。加入68kg乳化穩(wěn)定劑多糖，25kg含一分子結(jié)晶水的檸檬酸和4kg aspartame之后，濾液在高壓釜中于120℃進(jìn)行40分鐘熱處理。冷至15℃后，混合物過(guò)濾并在無(wú)菌條件下裝入隔絕空氣的瓶?jī)?nèi)。
另外，在灌裝入瓶中之前，亦可加入微生物穩(wěn)定劑。
實(shí)施例7往100kg干凈、干燥、研碎的苜蓿主莖中加1M3沸水之后，混合物在緩慢的攪拌下煎煮。過(guò)濾之后，溶液在減壓下蒸發(fā)至終體積為50升，所得到的濃溶液用正丁醇萃取5次，每次正丁醇的用量為5升。把正丁醇萃取液合并并蒸發(fā)至干。得到的殘留物研成細(xì)末，懸浮到30倍重量的(藥用質(zhì)量)亞麻子油中，或懸浮于含相同油酸組份的天然油中，或懸浮于鱈魚魚肝油中，或懸浮于它們的混合物中，然后按照制藥工業(yè)的已知方法裝入軟明膠膠囊。
實(shí)施例8從40kg干苜蓿根和60kg干苜蓿嫩芽制得的粉末與500升含12g/l蘋果酸的水在高壓釜中于120℃加熱30分鐘。得到的萃取物于袋式離心器中與植物殘?jiān)蛛x、在減壓下濃縮成干物料含量為14-16%重量的濃溶液，最終冷凍干燥。
制得的顆粒壓成片劑或用于制備硬明膠膠囊。
權(quán)利要求
1.制備選擇性降低血脂水平的藥物組合劑的方法，該方法包括苜蓿種子、根、主莖和/或葉子進(jìn)行萃取，隨意濃縮萃取液、用濃縮的萃取物隨意制備干粉末或顆粒，進(jìn)行萃取時(shí)使用溫度最低為40℃PH最高為8的水或水溶液，這樣得到的萃取物單獨(dú)或與幾乎不消化或不消化的多糖一道并隨意使用制藥工業(yè)中普通使用的載體，轉(zhuǎn)變?yōu)樗幬锝M合劑。
2.權(quán)力要求1中的方法，包括使用溫度為50-120℃，pH為5.5-6.5的水溶液進(jìn)行萃取。
3.權(quán)力要求2中的方法，包括使用溫度為60-70℃，pH為5.8-6.2的水溶液進(jìn)行萃取。
4.權(quán)力要求1-3中的任一方法，包括使用鹽酸、酯酸、檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、琥珀酸或抗壞血酸的水溶液進(jìn)行萃取。
5.權(quán)力要求1或2中的方法，包括使用含鹽酸鹽、醋酸鹽、檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、抗壞血酸鹽或硫酸與鐵、鎂、鈣、鋁、碘、鋅、鈷和/或銅離子形成的鹽的水溶液進(jìn)行萃取。
6.權(quán)力要求1或2中的方法，包括使用含鐵、鎂、鈣、錳、硒 鋅、鈷和/或銅離子與天冬氨酸或各氨酸形成的鹽的水溶液進(jìn)行萃取。
7.權(quán)利要求1或2中的方法，包括使用酸性緩沖液作為水溶液。
8.權(quán)力要求7中的方法，包括使用含醋酸和醋酸鈉、磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉、磷酸氫二鈉和檸檬酸或醋酸鈉的水溶液作為酸性緩沖液。
9.按權(quán)力要求1-8中的任一方法制備的選擇性降低血脂水平的藥物組合劑。
10.用于選擇降低血脂水平的苜蓿萃取物，其含最多1ppm刀豆氨酸和最多9ppm擬雌內(nèi)酯。
全文摘要
本發(fā)明涉及從苜蓿的種子、根、主莖和/或葉子提取，以制備選擇性降低血脂水平的藥物組合劑的方法。本發(fā)明的方法，是用溫度至少為40℃和pH至多為8的水或水溶液進(jìn)行萃取，此后得到的萃取物單獨(dú)與幾乎不消化或不消化的多糖一起并隨意使用制藥工業(yè)中常用的載體轉(zhuǎn)變?yōu)樗幬锝M合劑。本發(fā)明的組合劑既不含刀豆氨酸(毒性氨基酸)，也不含擬雌內(nèi)酯(具有激素效應(yīng))。
文檔編號(hào)A61P3/06GK1074123SQ9211420
公開(kāi)日1993年7月14日 申請(qǐng)日期1992年12月11日 優(yōu)先權(quán)日1991年12月12日
發(fā)明者M·海威基 申請(qǐng)人:M·海威基