專利名稱：多克隆免疫球蛋白的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及多克隆免疫球蛋白制劑的用途。
背景技術(shù)：
高等生物的特征在于具有使其免受潛在危險(xiǎn)物質(zhì)或微生物侵染的免疫系統(tǒng)。如果物質(zhì)(抗原)侵入體內(nèi)，借助免疫系統(tǒng)可以將所述物質(zhì)識(shí)別為“異物”并且清除掉。而且“退化的”自體細(xì)胞也通常能被免疫系統(tǒng)識(shí)別出來而從循環(huán)中清除掉。
人的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)由兩個(gè)基本部分，體液免疫和細(xì)胞免疫組成。適應(yīng)性免疫應(yīng)答建立在B和T-淋巴細(xì)胞克隆選擇的基礎(chǔ)上并且原則上能夠識(shí)別任何抗原以及建立免疫記憶。適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的這些特征一般被有效用于疫苗接種。
每種B細(xì)胞產(chǎn)生具有一定結(jié)合特異性的抗體。這種抗體還以特異性受體的形式存在于產(chǎn)生它的B細(xì)胞的膜中。針對(duì)被識(shí)別為異物的抗原產(chǎn)生的體液免疫應(yīng)答建立在產(chǎn)生這種抗體的B細(xì)胞的選擇性激活的基礎(chǔ)上，所述抗體能與各種抗原的表位結(jié)合。在B細(xì)胞分化過程中發(fā)生的DNA重排對(duì)抗體的多樣性起著決定性作用。
在人血清中存在著大量的特異性差異大、同型和亞類的抗體。血清中的全部免疫球蛋白的總濃度是15-20mg/ml；這意味著約100g具有不同特異性的免疫球蛋白在血液中不斷地進(jìn)行循環(huán)。不可能確定特異性不同的所有抗體的精確數(shù)目，一個(gè)人體中儲(chǔ)備的各種B細(xì)胞克隆約為109。一般來說，盡管親和力和結(jié)合力有所不同，但一種特定抗體可與多種相似抗原結(jié)合。
鑒于不同特異性的分布和平衡，免疫系統(tǒng)必須借助于內(nèi)源調(diào)節(jié)機(jī)制來維持體內(nèi)穩(wěn)態(tài)。達(dá)到此目的的一個(gè)必需機(jī)制是“獨(dú)特型網(wǎng)絡(luò)”(Ann.Immunol.125C373-89(1974))。針對(duì)一種抗體的決定其結(jié)合特異性的每種獨(dú)特型，就象抗原識(shí)別過程一樣，存在著與第一抗體的獨(dú)特型結(jié)合的抗-獨(dú)特型的抗體。根據(jù)這種解釋模式，淋巴細(xì)胞上的獨(dú)特型-特異性受體之間的相互作用起著調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的作用。顯然，確實(shí)存在著這些相互作用，這是因?yàn)橐呀?jīng)證明在免疫應(yīng)答過程中，還形成了針對(duì)通過免疫應(yīng)答初次誘導(dǎo)的抗體的抗-獨(dú)特型抗體。由于存在著針對(duì)任何抗體的抗-獨(dú)特型抗體，淋巴細(xì)胞對(duì)抗體的獨(dú)特型基本上不耐受(William E.Paul，Eds.，F(xiàn)undamental Immunology，3rdEd.，RavenPress Ltd.New York，1993，887-902頁)。
因此，免疫系統(tǒng)由分別通過系統(tǒng)內(nèi)的其它克隆產(chǎn)生的免疫球蛋白刺激或調(diào)節(jié)的淋巴細(xì)胞克隆構(gòu)成。術(shù)語“連通度”應(yīng)被理解成免疫系統(tǒng)的交聯(lián)度。無連通度的免疫系統(tǒng)含有更多的不受獨(dú)特型/抗-獨(dú)特型相互作用影響的免疫細(xì)胞克隆。對(duì)于這種類型的相互作用的理解不僅是直接的相互作用，即兩個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)間的相互作用，而且主要是通過抗體的一系列相互作用間接形成的作用。其中不僅涉及B-細(xì)胞和抗體，還涉及帶有受體的T細(xì)胞(Immunol.Rev.(1988)，101191-215)。
整個(gè)免疫網(wǎng)絡(luò)具有一定的“內(nèi)部結(jié)構(gòu)”，該“內(nèi)部結(jié)構(gòu)”中的B淋巴細(xì)胞分為多種類型，即產(chǎn)生基本特性不相同的免疫球蛋白(Immunol.Rev.(1989)，11037-61)·對(duì)幾乎所有其它免疫球蛋白具有親和力的抗體(即還具有自身親和力，也就是說它們自身也發(fā)生反應(yīng)，“粘著抗體”)，·鏡像抗體是對(duì)一種特定抗體的獨(dú)特型具有親和力的抗體，·對(duì)“粘著抗體”具有弱親和力的抗體。
網(wǎng)絡(luò)的連通度越高，交聯(lián)免疫球蛋白的種類越多。所有這些抗體都處于一定的平衡當(dāng)中。平衡的偏移能引起病理現(xiàn)象(自身免疫疾病、過敏反應(yīng)、癌癥、對(duì)感染性疾病的易感性)。在本文中，病理現(xiàn)象的發(fā)生在某種程度上應(yīng)被理解為由于連通度缺陷或降低而引起的自身反應(yīng)性克隆的無規(guī)擴(kuò)增。
數(shù)據(jù)表明對(duì)自身免疫疾病治療性施用高劑量的多克隆免疫球蛋白(IVIG)的積極作用在于導(dǎo)致免疫系統(tǒng)連通度的恢復(fù)或改善(Immunological Reviews(1989)110135-149；Scand.J.Immunol.(2000)51408-414；Immunology Today(1994)15341-342；Dermatol.Clin.(2000)18447-457)。
在美國專利US5562902和US5965130中記載了IVIG在癌癥治療中的應(yīng)用。
混合型免疫球蛋白的最早期應(yīng)用之一是預(yù)防感染性疾病。以這種方式使用的免疫球蛋白在進(jìn)行靜脈內(nèi)用藥時(shí)可導(dǎo)致過敏性休克，因此免疫球蛋白只能進(jìn)行有限量的肌肉注射用藥(幾毫升相當(dāng)于幾百毫克的免疫球蛋白)。
還觀察到用于預(yù)防肝炎而進(jìn)行的血清免疫球蛋白的預(yù)防性用藥還能降低治療群體中各種皮膚病的發(fā)病率(Int.J.Dermatol.(2000)39628-631)。
在利用混合型血清球蛋白的作用模式進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)觀察的基礎(chǔ)上建立了多種理論·通過Fc-Fc受體的相互作用影響吞噬作用(Ann.Intern.Med.(1991)115294-307)；·調(diào)節(jié)獨(dú)特型/抗獨(dú)特型網(wǎng)絡(luò)；抑制某些獨(dú)特型(Int.J.Artif.Organs(1993)16，增刊.5189-195)；·抑制抗體產(chǎn)生(Clin.Exp.Immunol.(1986)65409-415)；·免疫球蛋白-細(xì)胞因子間的相互作用(Immunol.Rev.(1994)1395-19)；·超抗原和毒素的中和作用(New Engl.J.Med.(1991)3241633-1639)；·補(bǔ)體系統(tǒng)的影響(J.Neuroimmunol.(1996)71227-229)；·免疫球蛋白代謝的加速(Immunol.Today(1997)18592-598)；·細(xì)菌、真菌和病毒的中和作用(Goodman和Goldman’s ThePharmacological Basis of Therapeutics，McGraw-Hill，New York(1996)1291-1308)。
即使這種免疫球蛋白的用藥機(jī)制不是總能清楚地被歸結(jié)為僅僅一個(gè)作用，但是可以看到所有施用者將大量的免疫球蛋白用于治療而且所施用的免疫球蛋白顯示出一個(gè)直接的效果。每天每公斤體重的通用量是幾百毫克至幾克的免疫球蛋白，治療過程大多進(jìn)行一天以上(Dermatol.Clin.(2000)18447-457)。
混合型多克隆免疫球蛋白(如靜脈內(nèi)免疫球蛋白、IVIG或免疫血清球蛋白)是通過對(duì)源自成千供體的混合血清進(jìn)行分級(jí)來制備的。迄今用于治療多種免疫疾病所需的高劑量通常在該制劑的供給上面產(chǎn)生瓶頸效應(yīng)。
在WO 92/15885A1中，記載了用于治療HIV感染的含有單克隆抗-獨(dú)特型抗體的制劑的生產(chǎn)方法。根據(jù)該文獻(xiàn)，由于相對(duì)于多克隆抗體具有特定專一性而選擇合適的單克隆抗體并配制成疫苗。多克隆抗體本身沒有被用于所述的制劑中。在該篇文獻(xiàn)中也沒有提示本領(lǐng)域的技術(shù)人員能用多克隆抗體取代單克隆抗體。
根據(jù)WO 91/114651A1的記載，抗獨(dú)特型抗體被用作特定抗原的免疫原性模擬物。該文中記載了單克隆抗體和多克隆抗體，然而WO 91/114651A1僅僅公開了使用特異性抗-獨(dú)特性抗體制備疫苗的用途，而非具有不同特異性的多克隆抗體。
因此，本發(fā)明的目的是針對(duì)所述疾病提供一種新型和有效的治療可能性，借助該治療方法還可以避免供給方面的瓶頸效應(yīng)。
根據(jù)本發(fā)明，以一種全新的方式使用多克隆免疫球蛋白，即將多克隆免疫球蛋白用于免疫接種，由此實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。因此根據(jù)本發(fā)明，僅僅需要使用微量(與被動(dòng)免疫或免疫球蛋白在其它領(lǐng)域中的用途，特別是現(xiàn)有技術(shù)中的IVIG相比)的這種物質(zhì)，即用于其它有效免疫接種的使用量。
通過免疫接種，引發(fā)免疫應(yīng)答從而恢復(fù)免疫系統(tǒng)的連通度。多克隆免疫球蛋白中存在的“粘著抗體”以及對(duì)“粘著抗體”具有弱親和力的抗體產(chǎn)生免疫應(yīng)答從而表明這些抗體類型的增強(qiáng)。同樣，在自身應(yīng)用中，通過免疫接種，可以誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)存在于多克隆免疫球蛋白中的病理自身抗體的抗-獨(dú)特型抗體。這可減少病理抗體的產(chǎn)生。
本發(fā)明還涉及多克隆免疫球蛋白制劑用于生產(chǎn)含有不同特異性的抗體的疫苗制品的用途，該疫苗制品用于對(duì)免疫球蛋白來源的同種個(gè)體進(jìn)行免疫接種。例如，本發(fā)明提供了用于人類治療的人免疫球蛋白制劑，而例如牛或豬免疫球蛋白被分別用于?；蜇i的治療。
將不同特異性的抗體用作多克隆抗體，優(yōu)選從人血清中或人血漿的混合免疫球蛋白級(jí)分中分別發(fā)現(xiàn)的多種特異性。
根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，多特異性抗體以免疫球蛋白制劑的形式進(jìn)行施用，其中免疫原性既不是所需的也沒有被發(fā)現(xiàn)。令人驚奇的是被配制成本發(fā)明疫苗的多特異性抗體具有作為激活免疫應(yīng)答的免疫原的優(yōu)勢作用。盡管是非特異性免疫原，但是對(duì)某些不需要抗原產(chǎn)生的反應(yīng)性被證明增強(qiáng)了而且沒有產(chǎn)生不希望有的副作用。該反應(yīng)性主要能有效抵抗同種異型抗原如腫瘤抗原或本身不能被身體識(shí)別為異物的自身抗體。
在本發(fā)明中，0.01至1ml體積的含有人多特異性抗體的疫苗制品中，通常能夠提供大約5μg-10mg的免疫球蛋白用以對(duì)患者進(jìn)行治療。免疫球蛋白的量優(yōu)選地約為10至1000μg，最優(yōu)選地為50至750μg。
所述疫苗既適合于疾病的預(yù)防又適合于疾病的治療，其中主要的綜合征與腫瘤、感染和自身免疫疾病有關(guān)。
本發(fā)明分別避免或減少了上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)，因此只需要以低劑量使用免疫球蛋白制劑就能在受體生物體內(nèi)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。在本文中，令人驚奇地是采用多特異性免疫球蛋白進(jìn)行的免疫接種不產(chǎn)生不希望有的副作用，尤其是盡管激活了非特異性免疫應(yīng)答，但是特異結(jié)合腫瘤細(xì)胞的活性明顯提高了。
根據(jù)本發(fā)明，多克隆免疫球蛋白混合物(例如IVIG或其它γ球蛋白制劑)可被用于進(jìn)行有效免疫接種。
在此以有效免疫接種所需的常規(guī)量將免疫球蛋白制劑施用于受體生物。施用途徑與進(jìn)行有效免疫接種的常用途徑(例如皮下、皮內(nèi)或肌內(nèi))一樣，優(yōu)選的是皮下和皮內(nèi)的施用方式。
優(yōu)選地，自身免疫球蛋白制劑被用作相同個(gè)體進(jìn)行有效免疫接種的多克隆免疫球蛋白制劑，該多克隆免疫球蛋白制劑得自所述個(gè)體。多克隆免疫球蛋白制劑的自身施用，即將免疫球蛋白制劑施用于由其含免疫球蛋白的體液獲得多克隆免疫球蛋白的個(gè)體，是本發(fā)明的一種特別優(yōu)選的技術(shù)方案。本發(fā)明的這種自體技術(shù)方案的其它優(yōu)勢在于能夠排除如可以是混合制劑形式存在的得自其它個(gè)體(例如病毒，如丙型肝炎病毒和HIV病毒)的免疫球蛋白制劑的感染的影響。本發(fā)明所指的個(gè)體應(yīng)被理解為具有含有抗體的體液或組織的人類個(gè)體或動(dòng)物個(gè)體。當(dāng)然，本發(fā)明制劑的制備優(yōu)選應(yīng)用脊椎動(dòng)物，特別優(yōu)選應(yīng)用哺乳動(dòng)物，尤其優(yōu)選的是人。
優(yōu)選地，將一種或多種佐劑混合到多克隆免疫球蛋白制劑中。佐劑應(yīng)被理解成能夠定性和/或定量增強(qiáng)針對(duì)免疫原的免疫應(yīng)答的物質(zhì)。本發(fā)明的多克隆免疫球蛋白以一種能夠激發(fā)免疫應(yīng)答的形式進(jìn)行施用。因此為了增強(qiáng)免疫應(yīng)答，免疫球蛋白制劑能與免疫學(xué)上通用的佐劑聯(lián)用。
下列物質(zhì)可以作為佐劑的實(shí)例，但并不局限于這些物質(zhì)含鋁佐劑，具體地是氫氧化鋁，脂多糖衍生物、芽孢桿菌CalmetteGuerin(BCG)、皂甙及其衍生物(例如QS-21)、脂質(zhì)體制劑。因此，在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選技術(shù)方案中，將抗體制劑制成疫苗制品包括添加佐劑物質(zhì)、免疫刺激細(xì)胞、活性劑和/或添加配制輔劑，所述佐劑具體地選自含鋁佐劑，脂多糖衍生物、芽孢桿菌(BCG)、脂質(zhì)體或QS-21(其它優(yōu)選佐劑已被記載在Singh等，Nat.Biotechnol.17(1999)，1075-1081頁中)，所述免疫刺激細(xì)胞具體地是樹突細(xì)胞或其它抗原-遞呈細(xì)胞，所述活性劑優(yōu)選地是細(xì)胞因子，具體地是粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞刺激因子，所述制劑輔劑具體地是緩沖物質(zhì)、穩(wěn)定劑或增溶劑或這些物質(zhì)的混合物。
在US 5965130以及US 5562902和EP 0750514A的專利說明書中，記載了較低的用量(皮下用量為每天每千克體重4mg至20mg)，然而這些用量仍然不在有效免疫接種常規(guī)用量的范圍內(nèi)。有效免疫接種的常規(guī)用量為進(jìn)行每次免疫接種時(shí)每千克體重約100納克至100微克。
在上述美國專利說明書中，列舉了一個(gè)其中皮下施用200微克免疫球蛋白就具有效果的實(shí)例。該實(shí)例令人產(chǎn)生誤解，其中免疫球蛋白制劑不是得自于進(jìn)行了體內(nèi)接種的相同物種(人免疫球蛋白被接種到小鼠體內(nèi))，對(duì)小鼠采用所述用量因而其實(shí)達(dá)到每千克體重約1毫克的用量。
優(yōu)選地，每次免疫接種，疫苗制品中的多克隆免疫球蛋白制劑的用量為每千克體重低于200微克，更優(yōu)選地每千克體重低于20微克，特別優(yōu)選地每千克體重低于5微克。然而，每次免疫接種每千克體重200納克-1微克的免疫球蛋白用量也能滿足需要。通常，對(duì)一種物種的使用劑量進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化而且是建立在各個(gè)物種的平均體重的基礎(chǔ)上。
從含有免疫球蛋白的人體或動(dòng)物體的體液(例如人血清或血漿)中分離免疫球蛋白可以通過大量已知的方法來實(shí)現(xiàn)。為了達(dá)到此目的，可以采用沉淀方法、色譜法(例如離子交換層析、疏水作用層析或采用免疫球蛋白特異性-配體如抗IgG或抗IgM或蛋白G等的親和層析)或其它方法或多種方法的結(jié)合。最終從個(gè)體分離根據(jù)本發(fā)明的免疫球蛋白只需要基本上從體內(nèi)其它不需要的物質(zhì)中分離所需要的免疫球蛋白。分別基于總蛋白含量，優(yōu)選純度為90％，特別優(yōu)選純度98％。在此對(duì)于本發(fā)明重要的是通過多克隆免疫球蛋白的制備方法進(jìn)一步保留免疫球蛋白的多樣性。特別優(yōu)選在制備方法中不應(yīng)當(dāng)有任何富集或消耗某些免疫球蛋白特異性的步驟(例如在J.Immunol.(1985)1351091-1096中提及的)。
本發(fā)明所定義的免疫球蛋白制劑主要由IgG、IgM和IgA組成，然而也可以僅采用特定類型的免疫球蛋白(例如，僅采用IgM或IgA或僅采用IgG)，或者各種類型免疫球蛋白的某種混合物。
因此本發(fā)明所指的術(shù)語“免疫球蛋白”或“抗體”還包括所獲取的抗體的片段或衍生物。應(yīng)當(dāng)提到的是，但不限于此例如可以通過本身已知的生物化學(xué)方法(例如通過酶裂解)制備的F(ab)2’片段、F(ab)’片段。本文中的術(shù)語“衍生物”包括例如可以通過本身已知的化學(xué)或生物化學(xué)方法制備的抗體衍生物。特別是，所述術(shù)語還包括通過將抗體或抗體片段與能增強(qiáng)免疫應(yīng)答的分子(例如破傷風(fēng)毒素、假單胞菌外毒素、脂A的衍生物、GM-CSF、IL-2、IL-12、C3d)進(jìn)行化學(xué)偶聯(lián)而制得的產(chǎn)物。
可以將含有得自不同個(gè)體的免疫球蛋白的混合體液作為多克隆免疫球蛋白的來源，然而也可以使用單個(gè)個(gè)體的含免疫球蛋白的體液。
因此，本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案涉及天然狀態(tài)的多克隆免疫球蛋白制劑的用途，也就是說所述免疫球蛋白是在沒有富集或消耗某種免疫球蛋白特異性的條件下制備的，因而在其組成上與分別存在于或循環(huán)于各個(gè)生物體或各種體液(血液、淋巴液、初乳等)中的天然免疫球蛋白譜相應(yīng)。
因此，本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及免疫球蛋白用于制備含有多種特異性抗體的疫苗制品的用途，所述疫苗制品用于治療癌癥、自身免疫疾病、用于預(yù)防(預(yù)防性的)或治療過敏反應(yīng)和用于治療對(duì)病毒、細(xì)菌或真菌的易感性；每種治療都是通過免疫接種來進(jìn)行的。
本發(fā)明還涉及一種用于對(duì)個(gè)體進(jìn)行預(yù)防或治療的方法，在該方法中按照本發(fā)明制備的制劑以有效量，優(yōu)選地以每千克體重幾微克至一百微克的量施用給從其體內(nèi)抽取體液的個(gè)體。該治療方法主要適用于自身免疫疾病的病例，諸如全身性紅斑狼瘡、自身免疫甲狀腺炎、系統(tǒng)性節(jié)結(jié)性脈管炎、格-巴二氏綜合征和抗因子VIIIC自身免疫疾病、過敏反應(yīng)或癌癥。
可以根據(jù)本發(fā)明對(duì)健康個(gè)體進(jìn)行預(yù)防感染(諸如各種皮膚病)的治療。
總的來說，所述治療方法可以用于治療以及預(yù)防性的目的。
另一方面，本發(fā)明還涉及自身免疫球蛋白制劑用于制備免疫調(diào)節(jié)劑的用途。
本發(fā)明還涉及一種含有人多克隆抗體的人用疫苗，是通過將多克隆多特異性人免疫球蛋白制劑配制到疫苗制品中而得到的。優(yōu)選地，該疫苗是通過配制免疫球蛋白混合物而得到的。優(yōu)選地，該疫苗還進(jìn)一步含有一種或多種佐劑。根據(jù)一個(gè)特別優(yōu)選的技術(shù)方案，該疫苗含有含量為5μg至10mg的免疫球蛋白。
本發(fā)明還將通過下列實(shí)施例的方式得到更詳細(xì)的解釋，然而并不局限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1用于有效免疫接種的免疫球蛋白制劑的制備在無菌條件下將0.83ml的Alu-Gel(購自Serva的Alu-Gel S；2％的懸浮液；質(zhì)量等級(jí)用于制備疫苗的佐劑)懸浮液與5ml的恒河猴免疫球蛋白溶液(Sigma，USA，I4385，用1mM的pH6.0磷酸緩沖液稀釋成2.5mg/ml；0.86％NaCl)混合并在室溫下輕輕搖晃1小時(shí)。將所述懸浮液以0.5ml的等分量無菌裝入針刺瓶中。
實(shí)施例2增強(qiáng)免疫血清的抗腫瘤細(xì)胞結(jié)合活性采用實(shí)施例1制備的每份0.5ml的疫苗對(duì)恒河猴進(jìn)行四次免疫(第0、15、29和60天)。采用細(xì)胞ELISA測試所述恒河猴血清結(jié)合人腫瘤細(xì)胞的能力。
檢測所述恒河猴免疫血清中是否含有結(jié)合了人癌細(xì)胞的免疫球蛋白。為了達(dá)到該目的，采用了KATO III胃癌細(xì)胞系。這些檢測是通過細(xì)胞ELISA-測試按照下列步驟進(jìn)行的于4℃下在培養(yǎng)基A中以2×106個(gè)細(xì)胞/ml的濃度在微滴板的各孔中分別將100μl的待測細(xì)胞系的懸浮液培養(yǎng)過夜。吸去上清液后，將所述微滴板與每孔50μl的固定液于室溫下一起溫育5分鐘。吸去上清液后，在每孔中各自加入200μl的封閉緩沖液B，并在37℃下將所述微滴板溫育1小時(shí)。每孔分別用200μl的洗滌緩沖液B沖洗兩遍后，用稀釋緩沖液B將各100μl的待測恒河猴血清等分樣品稀釋成1∶10至1∶100000的稀釋度后于37℃下溫育1小時(shí)。微滴板的每個(gè)孔分別用100μl冰冷的洗滌緩沖液B沖洗兩遍后各自分別加入100μl用稀釋緩沖液A稀釋成1∶1000稀釋度的與超氧化酶偶聯(lián)的抗人-Ig-抗體(Zymed)并在37℃下溫育45分鐘。微滴板各孔分別用100μl的冰冷洗滌緩沖液B沖洗三遍。通過每孔分別加入100μl的特異性底物來顯示抗體的結(jié)合力，約5分鐘后，通過每孔分別加入50μl的終止溶液來終止顯色反應(yīng)。通過在490nm下測定光密度(OD)(對(duì)照測量的波長是620nm)來進(jìn)行評(píng)價(jià)。
結(jié)果(如表1所示的稀釋度為1∶100)免疫過程中的結(jié)合能力明顯增強(qiáng)了。
表1樣品MOD前血清 250第15天 323第29天 845第60天 1224洗滌緩沖液A 2％NaCl0.2％Triton X-100少量PBS洗滌緩沖液B 0.05％Tween20，少量PBS封閉緩沖液A 5％小牛血清(加熱失活)少量PBS封閉緩沖液B 1％牛血清白蛋白0.1％NaN3少量PBS稀釋緩沖液A 2％小牛血清(加熱失活)少量PBS稀釋緩沖液B 少量PBS染色緩沖液24.3mM檸檬酸51.4mM Na2HPO4
pH5.0底物 40mg的鄰-苯二胺-二鹽酸化物100ml的染色緩沖液20μl的H2O2(30％)終止溶液4N H2SO權(quán)利要求
1.多克隆免疫球蛋白制劑用于制備疫苗制品的用途，所述疫苗制品含不同特異性的抗體，用于對(duì)免疫球蛋白來源的同種個(gè)體進(jìn)行免疫接種。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述多克隆免疫球蛋白制劑是一種用于對(duì)制劑來源的同一個(gè)體進(jìn)行免疫接種的自身免疫球蛋白制劑。
3.如權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述多克隆免疫球蛋白制劑中混合了一種或多種免疫佐劑。
4.如權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于，進(jìn)行每次免疫接種時(shí)，所述制品中的多克隆免疫球蛋白制劑的用量為每千克體重小于200微克，優(yōu)選地為每千克體重小于20微克，特別優(yōu)選地為每千克體重小于5微克。
5.如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于，所述多克隆免疫球蛋白制劑以天然形式存在于所述制品中。
6.如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述用于制備疫苗制品的用途，所述疫苗制品含不同特異性的抗體，通過免疫接種該疫苗制品來預(yù)防或治療癌癥。
7.如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述用于制備疫苗制品的用途，所述疫苗制品含不同特異性的抗體，通過免疫接種該疫苗制品來預(yù)防或治療自身免疫疾病。
8.如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述用于制備疫苗制品的用途，所述疫苗制品含不同特異性的抗體，通過免疫接種該疫苗制品來預(yù)防或治療過敏反應(yīng)。
9.如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述用于制備疫苗制品的用途，所述疫苗制品含不同特異性的抗體，通過免疫接種該疫苗制品來預(yù)防或治療對(duì)病毒、細(xì)菌或真菌感染的易感性。
10.一種用于人的含有人多特異性抗體的疫苗，該疫苗可通過將多克隆、多特異性人免疫球蛋白制劑配制成疫苗制品而獲得。
11.如權(quán)利要求10所述的疫苗，其可通過免疫球蛋白混合物的制劑而獲得。
12.如權(quán)利要求10或11所述的疫苗，其特征在于，該疫苗中含有一種或多種佐劑。
13.如權(quán)利要求10至12中任一項(xiàng)所述的疫苗，其特征在于，該疫苗含有含量范圍為5μg至10mg的免疫球蛋白。
全文摘要
本發(fā)明涉及多克隆免疫球蛋白制劑用于生產(chǎn)疫苗制品的用途，該疫苗制品含有用于對(duì)免疫球蛋白來源的同種個(gè)體進(jìn)行免疫接種的多特異性抗體?？梢詫⑺鲇行庖咧苿┯糜冢?，預(yù)防或治療癌癥、自身免疫疾病、過敏反應(yīng)和對(duì)病毒、細(xì)菌或真菌感染的易感性。
文檔編號(hào)A61P31/04GK1512895SQ02811121
公開日2004年7月14日 申請(qǐng)日期2002年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2001年6月1日
發(fā)明者H·羅伊伯納, G·希姆勒, H 羅伊伯納, 防 申請(qǐng)人:伊格尼昂癌癥治療研發(fā)股份公司