專利名稱：抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于飼料添加劑和醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體 飼料添加劑和注射劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前，豬病毒性疾病仍是當(dāng)前嚴(yán)重制約養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的主要傳染病。 全國(guó)每年均有上億頭豬在不同季節(jié)發(fā)生病毒性傳染病。豬一旦感染發(fā)病，則 有起病急，臨床癥狀嚴(yán)重，極易傳播擴(kuò)散，以及病死率和死亡率均較高的特 點(diǎn)，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)危害極大。藍(lán)耳病由豬群被藍(lán)耳病病毒感染引起的，豬藍(lán)耳病比較普遍，且非常嚴(yán) 重。但從當(dāng)前藍(lán)耳病發(fā)病特點(diǎn)來(lái)看，發(fā)病已由過(guò)去母豬繁殖障礙為主轉(zhuǎn)為以 保育豬的呼吸道病綜合征為主。在臨床上見(jiàn)有初產(chǎn)母豬常發(fā)生流產(chǎn)、早產(chǎn)及產(chǎn)死胎等；經(jīng)產(chǎn)母豬常出現(xiàn)滯后產(chǎn)、不發(fā)情或?qū)遗洳辉?，而流產(chǎn)與死胎的大 為減少，亞臨床感染增多；斷奶后的仔豬發(fā)病率上升，病情嚴(yán)重，死亡率增 高。臨床上常見(jiàn)藍(lán)耳病與圓環(huán)病毒II型、或與豬藍(lán)耳病毒或與偽狂犬病毒混 合感染，同時(shí)繼發(fā)多種細(xì)菌感染，如肺炎支原體、放線桿菌、鏈球菌及巴氏 桿菌等。使病情復(fù)雜化，出現(xiàn)發(fā)熱、腹式呼吸、腹瀉、后軀麻痹、共濟(jì)失調(diào)、 眼瞼水腫、皮下水腫、消瘦等癥狀，造成死亡率增高。豬藍(lán)耳病至今尚無(wú)有效的治療藥物和治療方法。近年來(lái)曾經(jīng)有人ii行過(guò) 用中草藥制劑預(yù)防和治療豬病毒性疾病的試驗(yàn)，但治愈率較低?？股丶盎前奉愃幬锘緹o(wú)效。在獸醫(yī)臨床上，卵黃抗體已廣泛用于雞(傳染性法氏嚢、新城疫、雞白 痢等)、鴨(肝炎)、鵝(小鵝瘟)、犢牛(腹瀉)、仔豬(黃白瘌、豬輪狀病 毒腹瀉)、羔羊(輪狀病毒腹瀉)等疫病的緊急治療和預(yù)防。卵黃抗體制備筒 單，而且具有性質(zhì)均一、易提取、可有效避免非特異性免疫反應(yīng)發(fā)生等特性， 在免疫技術(shù)、免疫監(jiān)測(cè)、人畜治療等方面有很大的發(fā)展?jié)摿?。?guó)內(nèi)的研制工3作主要集中在對(duì)禽類疾病的防治，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院畜牧獸醫(yī)研究所已 獲得防治雞傳染性法氏嚢、新城疫、雞白痢、鴨肝炎、小鵝瘟等多聯(lián)高免卵黃抗體注射液；華西醫(yī)科大學(xué)一項(xiàng)防治禽病的卵黃抗體針劑已取得生物獸藥 證書(shū)；四川省養(yǎng)豬研究所研制了大腸桿菌卵黃抗體注射液?？闺u法氏嚢病、 雞新城疫、鴨病毒性肝炎高免卵黃廣泛用于治療雞法氏嚢病、雞新城疫、鴨 病毒性肝炎，均取得滿意結(jié)果。03128310.1提供一種預(yù)防仔豬腹瀉的特異性卵黃抗體及其制備方法與應(yīng)用；200410084558.9提供一種抗仔豬病毒性疫病復(fù)合卵黃抗體制劑的制備方法；200410084559.3提供一種抗仔豬細(xì)菌性疫病復(fù)合卵黃抗體制劑的制備方法；200510027330.0提供一種抗豬偽狂犬病卵黃抗體的制備方法；03117507.4提供一種抗仔豬黃痢、白痢病原菌卵黃抗體及其制備和應(yīng)用；02103667.5提供一種豬傳染性胃腸炎病毒卵黃抗體和抗原及其制備。目前，有關(guān)用豬藍(lán)耳病卵黃抗體的制備方法還未見(jiàn)報(bào)道。因此，提供一種抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及其制備方法，有效預(yù)防和治療豬藍(lán)耳病，是該技術(shù)領(lǐng)域科研人員急需開(kāi)發(fā)的新課題之一。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體飼 料添加劑和注射劑及其制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明所采用的實(shí)施方式如下 一種抗豬藍(lán)耳病卵黃抗 體飼料添加劑，其特征在于以豬藍(lán)耳病疫苗免疫非免疫產(chǎn)蛋母雞，再收集免 疫產(chǎn)蛋母雞卵黃并提取、制備?？关i藍(lán)耳病卵黃抗體飼料添加劑方便預(yù)防喂 食，非常適宜豬使用。一種抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體銅料添加劑的制備方法，其特征在于包括制備 豬藍(lán)耳病病毒免疫原；將免疫原對(duì)健康產(chǎn)蛋母雞進(jìn)行免疫，免疫原注射劑量 為0.5-3.0ml/只雞；收集免疫8-10天后的雞下的蛋，留取含有抗豬藍(lán)耳病的卵 黃抗體的效價(jià)不小于l :64的雞蛋備用；用0.01M無(wú)菌磷酸鹽緩沖液液稀釋、0.5%羥丙曱基纖維素、鄰苯二曱酸鹽處理，取上述液體進(jìn)行巴氏殺菌消毒法， 在常規(guī)噴霧干燥器中進(jìn)行噴霧干燥得到飼料添加劑；該飼料添加劑內(nèi)含有效 價(jià)>1 : 64的抗豬藍(lán)耳病的卵黃抗體。該飼料添加劑制備用于防治豬藍(lán)耳病。一種抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體注射劑，其特征在于以豬藍(lán)耳病疫苗免疫非免 疫產(chǎn)蛋母雞，再收集免疫產(chǎn)蛋母雞卵黃抗體并提取、制備?？关i藍(lán)耳病卵黃 抗體注射劑在抗豬藍(lán)耳病發(fā)病后使用，藥效更快。一種抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體注射劑的制備方法，其特征在于將豬藍(lán)耳病疫 苗免疫非免疫產(chǎn)蛋母雞，通過(guò)基礎(chǔ)免疫和強(qiáng)化免疫后用血凝抑制試驗(yàn)測(cè)定免 疫卵ffl效價(jià)，達(dá)標(biāo)(效價(jià)>1 : 64)后收獲卵黃用無(wú)菌蒸餾水對(duì)倍稀釋，用乳 酸液進(jìn)行酸處理去除雜蛋白、抽濾液進(jìn)行鹽析，除鹽后調(diào)整IgY的濃度分裝， 即成抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體注射劑；該注射劑內(nèi)含有效價(jià)>1 : 64的抗豬藍(lán)耳病 的卵黃抗體；其lgY的得率達(dá)95。/。以上， 一個(gè)免疫卵一般可得IgY80-110mg。 該注射劑制備用于治療豬藍(lán)耳病。本發(fā)明的有益效果是抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體是治療豬藍(lán)耳的特異性生物 制品，是一種被動(dòng)免疫制劑，同時(shí)還有鑒別診斷和緊急預(yù)防接種等作用，具 有較高的推廣應(yīng)用價(jià)值。卵黃抗體的使用，在免疫學(xué)理論中可成為被動(dòng)免疫。 當(dāng)免疫缺陷、疫苗缺乏及免疫失敗時(shí)，可利用卵黃抗體注射、口服替代主動(dòng) 免疫接種，發(fā)揮抗病作用?？关i藍(lán)耳病卵黃抗體都是通過(guò)提高豬機(jī)體對(duì)抗豬 藍(lán)耳病卵黃抗體的抗體水平來(lái)防治抗豬藍(lán)耳病的。抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體飼料 添加劑喂食豬，既使用簡(jiǎn)便，又特適宜豬使用。由豬藍(lán)耳病病毒引起的豬藍(lán) 耳病，可直接給豬飼喂本發(fā)明產(chǎn)品，有效率可達(dá)85.2%以上。也可添加于飼料 中用于預(yù)防豬藍(lán)耳病?？关i藍(lán)耳病卵黃抗體注射劑治療豬藍(lán)耳病，l-2天見(jiàn)效， 臨床治愈率可達(dá)90 %以上。使用本發(fā)明的卵黃抗體注射治療患藍(lán)耳病的豬， 試驗(yàn)組臨床癥狀比對(duì)照組明顯減輕，且試驗(yàn)組的死亡率顯著低于對(duì)照組，具 有明顯的防治豬藍(lán)耳病作用。本發(fā)明的抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體飼料添加劑和注 射劑防治豬藍(lán)耳病效果顯著。該方法成本低，見(jiàn)效快，無(wú)副作用，不會(huì)產(chǎn)生 耐藥性菌林，制備工藝簡(jiǎn)單，原料來(lái)源廣泛，使用方便，易于在基層推廣。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)依據(jù)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式
詳述如下實(shí)施例l抗豬藍(lán)耳病卯黃抗體制劑的制備方法利用豬藍(lán)耳病市售疫苗通過(guò)基礎(chǔ)免疫和強(qiáng)化免疫，第一輪次以豬藍(lán)耳病 疫苗免疫非免疫產(chǎn)蛋母雞，免疫劑量呈2M梯度增加，每個(gè)輪次間間隔10天， 第三輪次免疫結(jié)束后10天，經(jīng)卯黃抗體效價(jià)測(cè)定后收集免疫卵，無(wú)菌獲取卵黃，用0.01M無(wú)菌磷酸鹽緩沖液液稀釋、0.5%羥丙曱基纖維素、鄰苯二曱酸鹽 處理，抽濾液噴霧干燥，將粉劑封裝保存。 實(shí)施例2抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體注射劑的制備方法將豬藍(lán)耳病疫苗免疫非免疫產(chǎn)蛋母雞，通過(guò)基礎(chǔ)免疫和強(qiáng)化免疫后用血凝抑制試驗(yàn)測(cè)定免疫卵m效價(jià)，達(dá)標(biāo)后收獲卵黃用無(wú)菌蒸餾水對(duì)倍稀釋，用乳酸液進(jìn)行酸處理去除雜蛋白、抽濾液進(jìn)行鹽析，除鹽后調(diào)整IgY的濃度分裝，即成抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體注射劑。該注射劑內(nèi)含有效<介>1 : 64的抗豬藍(lán)耳病的卵黃抗體。該注射劑可制備用于治療豬藍(lán)耳病。其lgY的得率達(dá)95。/。以上， 一個(gè)免疫卵一般可得IgY 80-110mg。 實(shí)施例3抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體的飼料添加劑的制備方法其制備方法包括制備豬藍(lán)耳病病毒免疫原；將免疫原對(duì)健康產(chǎn)蛋母雞進(jìn) 行免疫，免疫原注射劑量為0.5-3.0ml/只雞；收集免疫8-10天后的雞下的蛋， 留取含有抗豬藍(lán)耳病的卵黃抗體的效價(jià)不小于l :64的雞卵備用；用0.01M無(wú) 菌磷酸鹽緩沖液液稀釋、0.5%羥丙曱基纖維素、鄰苯二甲酸鹽處理，取上述 液體進(jìn)行巴氏殺菌消毒法、在常規(guī)噴霧干燥器中進(jìn)行噴霧干燥得到飼料添加 劑。該飼料添加劑內(nèi)含有效價(jià)>1 : 64的抗豬藍(lán)耳病的卵黃抗體。該飼料添加 劑可制備用于防治豬藍(lán)耳病。實(shí)施例4186曰齡健康商品蛋雞，對(duì)蛋雞進(jìn)行免疫，第一次每羽肌注豬藍(lán)耳病疫苗 5頭份，7天后，第二次每羽肌注豬藍(lán)耳病疫苗10頭份。基礎(chǔ)免疫后10天，進(jìn) 行加強(qiáng)免疫，每次間隔10天，共進(jìn)行3次。第一次每羽肌注豬痘血毒2mL,第 二次注2.5mL,第三次注3mL。6在最后一次免疫后15天，隨機(jī)取5枚高免蛋，無(wú)菌抽取蛋黃各3mL,分別 用等量pH7.2 PBS混勻，然后各加入6 mL的氯仿，室溫下作用30 min, 3000 r/min 離心20min，分成三層取上清液分別作豬藍(lán)耳病正向間接血凝實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)豬藍(lán) 耳病抗體效價(jià)。收集效價(jià)在1:32以上的蛋作高免蛋。用1%新潔爾滅消毒蛋殼，在無(wú)菌條件下收集卵黃，置組織搗碎機(jī)中用3000 r/min勻漿l min，加等量滅菌生理鹽水?dāng)噭蚝蠓盅b于滅菌玻璃瓶中，加青霉素、 鏈霉素各2000 IU/mL進(jìn)行常規(guī)安全性和無(wú)菌4企驗(yàn)。初診為豬藍(lán)耳病的豬，按 每千克體重0.5-l mL的劑量確定用量，選擇肌肉豐滿的部位進(jìn)行多點(diǎn)肌肉注 射，嚴(yán)重者間隔3-4日可再次注射。同時(shí)要飲用白糖水、維生素或葡萄糖水溶 液，輔助給予青飼料等含維生素豐富的食物。應(yīng)用實(shí)例l:抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體治療豬藍(lán)耳病的臨床報(bào)告2007年10月10日天津郊區(qū)某豬場(chǎng)在外地購(gòu)進(jìn)仔豬416頭，10月13日部分豬 出現(xiàn)食欲減少、嗜睡、體溫升高、大便干燥等癥狀，遂請(qǐng)當(dāng)?shù)孬F醫(yī)進(jìn)行治療 無(wú)效，已死亡9頭。通過(guò)對(duì)病較嚴(yán)重的32頭豬進(jìn)行臨床檢查，體溫41-41.2。C, 80%的豬出現(xiàn)嗜睡、停食、干球便、糞表面有白色腸粘膜，少數(shù)豬出現(xiàn)拉稀、 皮膚發(fā)紅、數(shù)頭豬出現(xiàn)蘭耳、四肢內(nèi)側(cè)、腹部呈紫色血斑、眼結(jié)膜發(fā)炎、眼 瞼水腫，公豬包皮腫大、積尿，有的站立不穩(wěn)，有共濟(jì)失調(diào)等精神癥狀，后 期四3支無(wú)法站立，衰竭而死亡。解剖病變心臟有出血點(diǎn)，肝胂大有灰色塊狀病變，脾不腫大，但邊緣 有梗死，腹股溝淋巴、腸系膜淋巴腫大充血、膀胱出血、胃大面積有出血斑， 回盲瓣有糠麩樣螯狀物，肺萎縮，肺尖葉與胸膜粘連等。臨床診斷疑似豬痘或藍(lán)耳病。實(shí)驗(yàn)實(shí)診斷經(jīng)天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室"^斷為藍(lán)耳病。使用自制抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體，配合抗生素治療防繼發(fā)疾病，同時(shí)堅(jiān)持 天天消毒，加強(qiáng)護(hù)理等綜合措施。10月21日使用抗豬藍(lán)耳病卯黃抗體，每頭1.0ml治療。連續(xù)2天使用抗豬藍(lán) 耳病卵黃抗體，每頭1.0ml治療，并配合使用抗生素進(jìn)行治療。10月29日觀察，拉稀的癥狀減少，精神癥狀消失，便秘有所好轉(zhuǎn)。10月31日，對(duì)全場(chǎng)隨機(jī)^r查35頭豬，體溫均在38-39。C之間，當(dāng)天停藥觀察。11月2日豬場(chǎng)病情日趨穩(wěn)定，部分豬食欲提高。 10月26日除少數(shù)豬體溫升高，90%的豬已恢復(fù)正常。 C區(qū)2棟l號(hào)寧中發(fā)病時(shí)間短的豬10頭，于10月22日-25日注射抗豬藍(lán)耳病 卵黃抗體至今無(wú)l頭死亡。C區(qū)2棟10號(hào)圈中發(fā)病時(shí)間長(zhǎng)且病情比較重豬IO頭，于10月22日-25日注射 抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體已死亡3頭，存活4頭。結(jié)論抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體用于治療豬藍(lán)耳病效果較好，特別是在病發(fā) 早期、前期效果更為理想。當(dāng)前治療動(dòng)物病毒性疾病，抗病毒藥品種太少， 抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體是防治豬藍(lán)耳病的有效藥物。豬藍(lán)耳病病毒的感染，嚴(yán) 重威脅豬的健康，造成了重大經(jīng)濟(jì)損失。當(dāng)豬發(fā)生豬藍(lán)耳病病時(shí)，可立即口 服或皮下注射卵黃抗體，能阻止豬藍(lán)耳病病毒進(jìn)入細(xì)胞，中和病毒數(shù)量，經(jīng) 2-10小時(shí)就可發(fā)現(xiàn)豬精神好轉(zhuǎn)，食欲增加。目前，抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體是治療 豬藍(lán)耳病的有效藥物之一。本試驗(yàn)結(jié)果表明，抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體注射劑對(duì) 于抗豬藍(lán)耳病具有良好的治療效果。應(yīng)用實(shí)例2:河北滄州某豬場(chǎng)累計(jì)購(gòu)入仔豬449頭，購(gòu)入后結(jié)果相繼發(fā)病，死亡12頭， 經(jīng)臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室診斷診斷為豬藍(lán)耳病。對(duì)剩下的437余頭豬進(jìn)行了豬藍(lán) 耳病卵黃抗體治療。按每千克體重l mL的劑量確定用量，選擇肌肉豐滿的部 位進(jìn)行多點(diǎn)肌肉注射，嚴(yán)重者間隔2日可再次注射豬藍(lán)耳病卵黃抗體。同時(shí)要 飲用白糖水、維生素或葡萄糖水溶液，輔助給予青菜、水果等含維生素豐富 的食物，結(jié)果康復(fù)359頭，有效率為82.2%。臨床試用表明，患藍(lán)耳病豬經(jīng)豬藍(lán) 耳病卵黃抗體治療后的有效率高達(dá)93.5%。制成的豬藍(lán)耳病卵黃抗體，注入動(dòng) 物機(jī)體后，具有療效好、安全可靠、無(wú)毒副作用和成本低等優(yōu)點(diǎn)。上述參照實(shí)施例對(duì)該抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及其制備 方法進(jìn)行的詳細(xì)描述，是說(shuō)明性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉 出若干個(gè)實(shí)施例，因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā) 明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1、一種抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體飼料添加劑，其特征在于以豬藍(lán)耳病疫苗免疫非免疫產(chǎn)蛋母雞，再收集免疫產(chǎn)蛋母雞卵黃并提取、制備。
2、 一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體飼料添加劑的制備方 法，其特征在于包括制備豬藍(lán)耳病病毒免疫原；將免疫原對(duì)健康產(chǎn)蛋母雞進(jìn) 行免疫，免疫原注射劑量為0.5-3.0ml/只雞；收集免疫8-10天后的雞下的蛋， 留取含有抗豬藍(lán)耳病的卵黃抗體的效價(jià)不小于l :64的雞蛋備用；用0.01M無(wú) 菌磷酸鹽緩沖液液稀釋、0.5%羥丙曱基纖維素、鄰苯二曱酸鹽處理，取上述 液體進(jìn)行巴氏殺菌消毒方法，在常規(guī)噴霧干燥器中進(jìn)行噴霧千燥得到飼料添 加劑；該飼料添加劑'內(nèi)含有效價(jià)> 1 : 64的抗豬藍(lán)耳病的卵黃抗體。
3、 一種抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體注射劑，其特征在于以豬藍(lán)耳病疫苗免疫非 免疫產(chǎn)蛋母雞，再收集免疫產(chǎn)蛋母雞卵黃抗體并提取、制備。
4、 一種根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體注射劑的制備方法， 其特征在于將豬藍(lán)耳病疫苗免疫非免疫產(chǎn)蛋母雞，通過(guò)基礎(chǔ)免疫和強(qiáng)化免疫 后用血凝抑制試驗(yàn)測(cè)定免疫卵HI效價(jià)，達(dá)標(biāo)后收獲卯黃用無(wú)菌蒸餾水對(duì)倍稀 釋，用乳酸液進(jìn)行酸處理去除雜蛋白、抽濾液進(jìn)行鹽析，除鹽后調(diào)整IgY的濃 度分裝，即成抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體注射劑；該注射劑內(nèi)含有效價(jià)>1 : 64的抗 豬藍(lán)耳病的卵黃抗體。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體飼料添加劑和注射劑及其制備方法。所述抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體飼料添加劑，以豬藍(lán)耳病疫苗免疫非免疫產(chǎn)蛋母雞，再收集免疫產(chǎn)蛋母雞卵黃并提取、制備。所述抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體注射劑，以豬藍(lán)耳病疫苗免疫非免疫產(chǎn)蛋母雞，再收集免疫產(chǎn)蛋母雞卵黃抗體并提取、制備。所述抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體都是通過(guò)提高豬機(jī)體對(duì)抗豬藍(lán)耳病的抗體水平來(lái)防治抗豬藍(lán)耳病的。本發(fā)明的有益效益是抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體飼料添加劑方便預(yù)防喂食，非常適宜豬使用。抗豬藍(lán)耳病卵黃抗體注射劑在抗豬藍(lán)耳病發(fā)病后使用，藥效更快。本發(fā)明療效顯著，成本低、見(jiàn)效快，無(wú)毒副作用，不會(huì)產(chǎn)生耐藥性菌株；制備簡(jiǎn)單，原料來(lái)源廣泛，使用方便，易于推廣。
文檔編號(hào)A61P31/00GK101259272SQ20081005280
公開(kāi)日2008年9月10日 申請(qǐng)日期2008年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月18日
發(fā)明者古長(zhǎng)慶 申請(qǐng)人:天津生機(jī)集團(tuán)股份有限公司