一種抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其是涉及一種抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑。所述復(fù)合抑菌劑的有效活性組份由蛋黃免疫球蛋白IgY、殼聚糖和三氯生組成。所述的抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑用于制備治療陰道炎的藥物，能抑制陰道內(nèi)細(xì)菌及念珠菌而不破壞陰道內(nèi)正常菌群的生態(tài)平衡，還可防止陰道干澀，沒(méi)有副作用，適合于預(yù)防和早期陰道炎的治療。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其是涉及一種抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑。

【背景技術(shù)】
[0002] 陰道炎是婦科門(mén)診常見(jiàn)的疾病，其中最常見(jiàn)的是霉菌性陰道炎，由念珠菌感染所 致。念珠菌感染最常見(jiàn)的癥狀是白帶多，外陰及陰道灼熱瘙癢，外因性排尿困難，典型的白 帶呈凝乳狀或?yàn)槠瑝K狀，陰道粘膜高度紅腫，可見(jiàn)白色鵝口瘡樣斑塊附著，易剝離，其下為 受損粘膜的糜爛基底，或形成淺潰瘍，嚴(yán)重者可遺留瘀斑。妊娠期霉菌性陰道炎的瘙癢癥狀 尤為嚴(yán)重，甚至坐臥不寧，痛苦異常，也可有尿頻、尿痛等癥狀。念珠菌性陰道炎的治療方法 包括：局部用藥，使用咪康唑栓劑、克霉唑栓劑、制霉菌素栓劑；全身用藥(反復(fù)發(fā)作或不能 陰道給藥的患者)使用氟康唑、伊曲康唑、酮康唑。這些藥物多有副作用，還會(huì)抑制陰道內(nèi)正 常菌群活性從而破壞陰道內(nèi)正常的生態(tài)平衡。不適合妊娠期治療，也不能用于預(yù)防。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為了克服這些問(wèn)題，本發(fā)明公開(kāi)了一種抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑，能抑 制陰道內(nèi)細(xì)菌及念珠菌，適合于預(yù)防和早期陰道炎的治療。
[0004] 本發(fā)明涉及一種抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑，一種抗陰道感染免疫球蛋白 復(fù)合抑菌劑，所述復(fù)合抑菌劑的有效活性組份由蛋黃免疫球蛋白IgY、殼聚糖和三氯生組 成。
[0005] 所述復(fù)合抑菌劑中，蛋黃免疫球蛋白IgY的含量按抗體效價(jià)計(jì)為100-50000滴度， 殼聚糖的含量按重量計(jì)為〇. 01%-1%，三氯生的含量按重量計(jì)為〇. 001%-1%。更優(yōu)選地，所述 蛋黃免疫球蛋白IgY的含量按抗體效價(jià)計(jì)為1000-10000滴度，所述殼聚糖的含量按重量計(jì) 為0. 1%-0. 5%，所述三氯生的含量按重量計(jì)為0. 01%-0. 1%。
[0006] 所述復(fù)合抑菌劑的其它組分包括弱酸鹽緩沖液、聚乙二醇和香精。
[0007] 所述弱酸鹽緩沖液的濃度為5-200mM、pH為3-6. 5,聚乙二醇的含量按重量計(jì)為 1%-20%，香精的含量按重量計(jì)為0. 001%-0. 5%。
[0008] 更優(yōu)選地，所述弱酸鹽緩沖液的pH為3. 5-5。
[0009] 所述蛋黃免疫球蛋白IgY的制備方法如下： (1)抗原制備：將經(jīng)裂解滅活的病原體與大豆油及大豆磷脂按2 :1:0. 8的質(zhì)量比例混 合后用超聲波乳化制得抗原乳化液，備用；所述的病原體為白色念珠菌、嗜血桿菌、棒狀桿 菌、加特納菌中的任一種或兩種以上組合。
[0010] (2)蛋黃免疫球蛋白IgY抗體制備：用抗原乳化液免疫母雞，收集雞蛋，分離出蛋 黃；根據(jù)蛋黃重量加1-10倍量的〇. 1-10%甘露醇水溶液稀釋蛋黃，離心，收集含抗體的上清 液，純化抗體，用PBS緩沖液調(diào)整純化抗體效價(jià)，分裝、儲(chǔ)存，備用。
[0011] 上述原料中采用的菌種可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過(guò)常規(guī)的菌種分離、鑒定方法獲 得，也可通過(guò)商業(yè)渠道，如中國(guó)微生物菌種網(wǎng)-北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研宄院獲得。本發(fā)明 所述的菌液均為通過(guò)單菌種純化培養(yǎng)后獲得的培養(yǎng)液。
[0012] 本發(fā)明還提供了一種所述抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑的制備方法，其特征 在于：先混合蛋黃免疫球蛋白IgY和聚乙二醇溶液，然后加入弱酸鹽緩沖液混勻，再加入殼 聚糖溶液混勻，然后再加入三氯生溶液，混勻，最后加入香精混勻，經(jīng)〇. 2M-0. 45P濾膜過(guò)濾 后分裝。
[0013] 本發(fā)明還保護(hù)了所述的抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑在制備治療陰道炎的 藥物中的應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明的免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑是一種溫和的免疫增強(qiáng)劑和抗菌劑，能抑制陰道 內(nèi)細(xì)菌及念珠菌而不破壞陰道內(nèi)正常菌群的生態(tài)平衡，還可防止陰道干澀，沒(méi)有副作用，適 合于預(yù)防和早期陰道炎的治療。

【具體實(shí)施方式】
[0015] 實(shí)施例1:抗菌免疫球蛋白制備例： 1)抗原制備：分別將白色念珠菌培養(yǎng)液和加特納菌培養(yǎng)液于90°C保溫10分鐘滅活后， 用超聲波破碎后各取5ml混合得IOml組合菌液，加入大豆油5ml和大豆磷脂按4ml混合后 用超聲波攪打2分鐘，便制得組合抗原乳化液，備用。
[0016] 2)雞蛋抗體制備：用1)中所制備的抗原乳化液免疫母雞(皮下注射)，每只每次注 射0. 3ml，每隔12天注射一次，注射5次后開(kāi)始收集雞蛋，隨后每隔1個(gè)月再補(bǔ)充注射一次)； 將收集來(lái)的雞蛋分離出蛋黃，根據(jù)蛋黃重量，用加5倍體積量的0. 2%甘露醇水溶液稀釋蛋 黃、攪渾后靜止離心，收集含抗體的上清液；將該上清液加到經(jīng)上樣緩沖液平衡的DEAE離 子樹(shù)脂柱，依次用不同濃度(從低到高)的NaCl緩沖液洗脫柱子，收集0. 5-0. 8mM的NaCl洗 脫的IgY抗體流分；用PBS緩沖液調(diào)純化抗體效價(jià)至1000-5000滴度或以上，分裝、低溫儲(chǔ) 存，備用。
[0017] 實(shí)施例2: -種免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑I配方，制備方法及使用方法。
[0018] -種免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑其主要活性成分及含量為：1).蛋黃免疫球蛋白IgY, 其含量以抗體效價(jià)計(jì)為1000滴度，2).殼聚糖，其含量按重量計(jì)為0.1%，3).三氯生，其含 量按重量計(jì)為〇. 1°/〇。
[0019] 其制備方法如下（以終產(chǎn)品生產(chǎn)量為1升為例）： 1) .根據(jù)抗體原液滴度，取適量用PBS緩沖液稀釋至抗體效價(jià)計(jì)為5000滴度，配制 200ml備用； 2) .取適量聚乙二醇-20000 (PEG-20000)，用純凈水調(diào)配成30% (w/v)濃度的水溶液， 配制IOOml備用； 3) .取適量的殼聚糖溶于1%乙酸溶液中調(diào)配成含5%殼聚糖的溶液，配制20ml備用； 4) .取適量三氯生用乙醇稀釋至10%三氯生溶液，配制IOml備用； 5) . A)取一水檸檬酸10. 5克，用去離子水溶解并定容至IOOOml制得50mM檸檬酸水溶 液；B)取二水檸檬酸鈉14. 7克，用去離子水溶解并定容至IOOOml制得50mM檸檬酸鈉水溶 液；C)取適量A)和B)，將B)逐步加到A)里，邊加邊測(cè)pH值，至pH4. 8為止，便得pH5的 50mM檸檬酸鹽緩沖液，配制800ml以上備用； 6) .分別取上述I) 200ml和2) IOOml預(yù)混合；另取3) 20ml和5) 600ml (pH5的50mM 檸檬酸鹽緩沖液）混勻后，再加入1)和2)的預(yù)混合液，再加入4) 10ml，攪拌混合后用pH5 的50mM檸檬酸鹽緩沖液定容至1000ml ;最后加Iml檸檬酸香精，混勻便制得免疫球蛋白復(fù) 合抑菌劑； 7).經(jīng)0. 2M-0. 45P濾膜無(wú)菌過(guò)濾后分裝在陰道洗液瓶?jī)?nèi)，每瓶50ml，另配無(wú)菌密封袋 裝的一次性使用陰道沖洗棒。
[0020] 使用方法：擰開(kāi)洗液瓶瓶蓋，撕開(kāi)沖洗棒密封袋，將沖洗棒與儲(chǔ)液瓶對(duì)接旋緊；用 者取仰臥墊高臀部或蹲勢(shì)將沖洗棒插入陰道內(nèi)，緩慢擠壓儲(chǔ)液瓶將洗液注入，拔出沖洗棒， 保持原姿勢(shì)10分鐘，以保持有效抑菌效果。
[0021] 實(shí)施例3 -種免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑II配方，制備方法及使用方法。
[0022] -種免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑其主要活性成分及含量為：1).蛋黃免疫球蛋白IgY, 其含量以抗體效價(jià)計(jì)為1000滴度，2).殼聚糖，其含量按重量計(jì)為0.2%，3).三氯生，其含 量按重量計(jì)為〇. 02%。
[0023] 制備方法及使用方法如實(shí)施例2所述，主要活性成分濃度根據(jù)配方作適當(dāng)調(diào)整。
[0024] 實(shí)施例4一種免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑III配方，制備方法及使用方法。
[0025] -種免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑其主要活性成分及含量為：1).蛋黃免疫球蛋白IgY, 其含量以抗體效價(jià)計(jì)為5000滴度，2).殼聚糖，其含量按重量計(jì)為0.2%，3).三氯生，其含 量按重量計(jì)為〇. 02%。
[0026] 制備方法及使用方法如實(shí)施例2所述，主要活性成分濃度根據(jù)配方作適當(dāng)調(diào)整。
[0027] 實(shí)施例5-種復(fù)合抑菌劑IV(不含免疫球蛋白）配方，制備方法及使用方法。
[0028] 一種復(fù)合抑菌劑其主要活性成分及含量為：1).殼聚糖，其含量按重量計(jì)為0. 2%， 2).三氯生，其含量按重量計(jì)為0. 02%。
[0029] 制備方法按實(shí)施例2中制備方法的步驟2-7所述進(jìn)行，活性成分濃度根據(jù)配方作 適當(dāng)調(diào)整；使用方法按實(shí)施例2中所述的使用方法進(jìn)行。
[0030] 實(shí)施例6比較幾種不同配方抑菌劑的臨床使用效果 臨床使用效果試驗(yàn)方法：選取患有不同陰道炎的志愿者80名，如表1所示，不分年齡隨 機(jī)分成5組，每組各16名（其中：細(xì)菌性陰道炎6人，念珠菌（霉菌）性陰道炎5人，滴 蟲(chóng)性陰道炎5人）。給組1-4的志愿者分別用實(shí)施例2-5所制備的復(fù)合抑菌劑I-IV，給組5 (對(duì)照組）使用生理鹽水，按實(shí)施例2所述的使用方法，每天沖洗1次，連續(xù)進(jìn)行15天，檢查 每組志愿者的陰道炎情況并記錄。各種陰道炎對(duì)應(yīng)的癥狀減輕或消失視為有效，不變或變 得更嚴(yán)重的視為無(wú)效；療效判定標(biāo)準(zhǔn)：1)細(xì)菌性陰道炎：陰道分泌物減少，魚(yú)腥味減輕及 消失，外陰瘙癢或灼熱感減輕或消失，分泌物作涂片檢查時(shí)不再見(jiàn)到線(xiàn)索細(xì)胞。2)念珠菌性 陰道炎：外陰瘙癢、灼痛、性交痛等癥狀減輕，外陰及前庭的水腫、紅斑減輕或消失，白色稠 厚呈凝乳或豆渣樣的分泌物減少或消失。3)滴蟲(chóng)性陰道炎：陰道分泌物的稀薄膿性、黃綠 色、泡沫狀和臭味等癥狀減輕或消失；外陰瘙癢減輕或消失；合并尿道感染減輕或消失；陰 道粘黏膜充血，散在出血斑癥狀減輕或消失，陰道PH降到5. 0以下。試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。
[0031] 表1.比較實(shí)施例2、3、4、5所述抑菌劑臨床使用效果：

【權(quán)利要求】
1. 一種抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑，其特征在于：所述復(fù)合抑菌劑的有效活性 組份由蛋黃免疫球蛋白IgY、殼聚糖和三氯生組成。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑，其特征在于：所述復(fù)合 抑菌劑中，蛋黃免疫球蛋白IgY的含量按抗體效價(jià)計(jì)為100-50000滴度，殼聚糖的含量按重 量計(jì)為0. 01%-1%，三氯生的含量按重量計(jì)為0. 001%-1%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑，其特征在于：所述蛋黃 免疫球蛋白IgY的含量按抗體效價(jià)計(jì)為1000-10000滴度，所述殼聚糖的含量按重量計(jì)為 0. 1%-0. 5%，所述三氯生的含量按重量計(jì)為0. 01%-0. 1%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑，其特征在于：所述復(fù)合 抑菌劑的其它組分包括弱酸鹽緩沖液、聚乙二醇和香精。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑，其特征在于：所述弱酸 鹽緩沖液的濃度為5-200mM、pH為3-6. 5,聚乙二醇的含量按重量計(jì)為1%-20%，香精的含量 按重量計(jì)為〇. 〇〇1%_〇. 5%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑，其特征在于：所述弱酸 鹽緩沖液的pH為3. 5-5。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑，其特征在于：所述蛋黃 免疫球蛋白IgY的制備方法如下： (1) 抗原制備：將經(jīng)裂解滅活的病原體與大豆油及大豆磷脂按2 :1:0. 8的質(zhì)量比例混 合后用超聲波乳化制得抗原乳化液，備用；所述的病原體為白色念珠菌、嗜血桿菌、棒狀桿 菌、加特納菌中的任一種或兩種以上組合； (2) 蛋黃免疫球蛋白IgY抗體制備：用抗原乳化液免疫母雞，收集雞蛋，分離出蛋黃；根 據(jù)蛋黃重量加1-10倍量的〇. 1-10%甘露醇水溶液稀釋蛋黃，離心，收集含抗體的上清液，純 化抗體，用PBS緩沖液調(diào)整純化抗體效價(jià)，分裝、儲(chǔ)存，備用。
8. -種如權(quán)利要求4-7中任一項(xiàng)所述抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑的制備方法， 其特征在于：先混合蛋黃免疫球蛋白IgY和聚乙二醇溶液，然后加入弱酸鹽緩沖液混勻，再 加入殼聚糖溶液混勻，然后再加入三氯生溶液，混勻，最后加入香精混勻，經(jīng)0. 2M-0. 45P濾 膜過(guò)濾后分裝。
9. 如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的抗陰道感染免疫球蛋白復(fù)合抑菌劑在制備治療陰 道炎的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K31/085GK104474547SQ201510006259
【公開(kāi)日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2015年1月7日 優(yōu)先權(quán)日:2015年1月7日
【發(fā)明者】鄒潮, 胡博志, 蘭增金 申請(qǐng)人:藍(lán)佳堂生物醫(yī)藥（福建）有限公司