專利名稱：治療再狹窄和動脈硬化的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有Batroxobin(以下稱巴曲酶)作為有效成分用于治療和/或預(yù)防經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)后再狹窄和動脈硬化的藥物。
據(jù)認為在經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)后血管壁內(nèi)膜肥厚是由血管的內(nèi)皮損傷所致，所述經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)已擴展為治療動脈硬化性內(nèi)膜肥厚、心肌梗塞和心絞痛的方法，據(jù)報道內(nèi)膜肥厚是平滑肌細胞在血管中層遷移并在內(nèi)膜中反復(fù)增生的過程中形成。
然而此現(xiàn)象難以在生理學(xué)和藥理學(xué)上得到解釋。盡管已知血小板生長因子(PDGF)具有促進平滑肌細胞遷移及其增生的作用，但尚無報道能證實只有該因素與經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)后的動脈硬化性內(nèi)膜肥厚或再肥厚有直接關(guān)系。
因此尚未發(fā)現(xiàn)治療經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)后血管壁中的內(nèi)膜肥厚的藥物和方法；所述經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)已拓展為治療動脈硬化性內(nèi)膜肥厚、心肌梗塞和心絞痛的方法。
根據(jù)最近的報道，在日本進行的經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)例如PTCA(經(jīng)皮經(jīng)管腔冠狀血管成形術(shù))的數(shù)目約35000例，由經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)術(shù)后在血管壁中的內(nèi)膜肥厚所致再狹窄的發(fā)病率為20-50％。因此，開發(fā)出用于治療和/或預(yù)防再狹窄的藥物是個非常重要的課題。
為開發(fā)治療和/或預(yù)防血管壁中的內(nèi)膜肥厚的藥物，本發(fā)明人通過使用動物模型進行了多種研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用有效量巴曲酶可顯著抑制血管壁中的內(nèi)膜肥厚。
本發(fā)明的目的是提供治療和/或預(yù)防已拓展為治療動脈硬化性內(nèi)膜肥厚、心肌梗塞和心絞痛的方法的經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)后血管壁中的內(nèi)膜肥厚的有效藥物。
本發(fā)明提供含有效量巴曲酶用于治療和/或預(yù)防經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)后再狹窄和動脈硬化的藥物。
由于巴曲酶對哺乳動物顯示出種特異性，因此對于在使用巴曲酶時血漿纖維蛋白原濃度不會顯著降低的哺乳動物，最好可選擇將巴曲酶與肝素一起使用。
用在本發(fā)明中的巴曲酶是來自蛇(具竅蝮蛇屬Bothropsatrox moojeni)毒的類凝血酶。其制劑是由日本東菱藥品工業(yè)株式會社所制造的batroxobin(巴曲酶制劑)。
用在本發(fā)明中的巴曲酶具有抑制血管壁中內(nèi)膜肥厚的作用尚未公知。
用在本發(fā)明中的巴曲酶的氨基酸的總一級結(jié)構(gòu)已被測定[N.Itoh等人，J.Biol.Chem.262(7)3132-3135，1987]。
巴曲酶是一種類似凝血酶的絲氨酸蛋白酶并且其分子量與凝血酶的相近。它們能將纖維蛋白原分解釋放出纖維蛋白肽A。然而它們又不相同凝血酶還能釋出纖維蛋白肽B，而巴曲酶不能；而且凝血酶對多種血凝固因子有作用，而巴曲酶對纖維蛋白原以外的血凝固因子無作用。
用在本發(fā)明中的巴曲酶被用作血管壁中內(nèi)膜肥厚的抑制劑、抗動脈硬化劑和通過對血管壁中的內(nèi)膜肥厚的抑制作用用于治療和/或預(yù)防經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)后再狹窄的藥物。
用在本發(fā)明中的巴曲酶的劑量取決于癥狀。一般來說，該劑量對于成人，在每天1-20巴曲酶單位(以下簡稱為BU)的范圍內(nèi)，當然也可以根據(jù)癥狀使用以上范圍之外的劑量。
巴曲酶可被適當稀釋，以靜脈注射或局部滴注形式使用。本文所述的巴曲酶單位是代表巴曲酶酶活性的單位。當將0.1ml巴曲酶溶液加至溫度為37℃的0.3ml含檸檬酸的標準人血漿中時，在19.0±0.2秒內(nèi)發(fā)生血漿凝固的活性被定義為2BU。
下面將詳細描述本發(fā)明的參考實施例。在1ml巴曲酶制劑[來自蛇(Bothrops atrox moojeni)毒的類凝血酶]中的成分及其含量如下巴曲酶(主要成分) 10BU氯丁醇(防腐劑) 3mg明膠水解產(chǎn)物(穩(wěn)定劑) 0.1mg氯化鈉(等滲劑) 9mg注射用蒸餾水 加至1ml[試驗]將高膽固醇兔(給這些兔一個月含2％膽固醇的食物)的髂總動脈用作再狹窄的模型，該模型包括具有7只雄性兔的肝素組和具有7只雄性兔的巴曲酶與肝素合用組，各兔的重量在2.5-3kg之間。
此模型最常使用，由此已獲得許多觀察結(jié)果，因此在試驗中用作動脈硬化的經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)后再狹窄的模型。更具體地講，將導(dǎo)管鞘插入兔的股動脈中，然后將球囊導(dǎo)管通過導(dǎo)管鞘推入髂總動脈將髂總動脈損傷。髂總動脈損傷后，將球囊導(dǎo)管再推入主動脈分岐中。通過該鞘局部注射2ml鹽水，同時通過給球囊導(dǎo)管充氣使鄰近部分閉合，血液灌注重新開始。這稱為對照組。
另一方面，類似地，將2ml含肝素(25U/kg)的鹽水或含巴曲酶制劑(1BU/kg)和肝素(25U/kg)的混合溶液的鹽水，即2ml含以1∶100重量比混合的巴曲酶和肝素的鹽水局部注射入受損傷的髂總動脈中，在該狀態(tài)下維持3分鐘后，重新開始血液灌注。這作為給藥組。
一小時后通過毛細血管顯微鏡和毛細血管顯微造影觀察，發(fā)現(xiàn)在對照組所有動物上均存在閉塞性血栓或附壁血栓，而在給藥組中未發(fā)現(xiàn)閉塞性血栓存在。
通過繼續(xù)給一個月高膽固醇食物來比較術(shù)后對照組和給藥組的腔梗阻百分數(shù)(％)。也就是說，通過自血管損傷一個月后進行毛細血管顯微造影來比較由內(nèi)膜肥厚所致腔梗阻百分數(shù)(％)評價通過局部使用巴曲酶預(yù)防狹窄的效果。
經(jīng)一個月后毛細血管顯微造影觀察，僅給予鹽水的對照組腔梗阻百分數(shù)(％)較高，并由于給高膽固醇食物而在髂總動脈中形成狹窄。與僅給予肝素的給藥組相比，給予巴曲酶和肝素的給藥組的腔梗阻百分數(shù)(％)顯著降低(p＜0.05)。
結(jié)果見下表。
表腔梗阻百分數(shù)(％)對照組給藥組肝素組 73±1734±31(n＝7，p＜0.01)巴曲酶+肝素組 59±395±5(n＝7，p＜0.05)腔梗阻百分數(shù)(％)按下式計算腔梗阻百分數(shù)(％)100×[(①＋②)/2一③]/[(①＋②)/2]①狹窄附近(近端)的血管的內(nèi)直徑
②狹窄附近(遠端)的血管的內(nèi)直徑③狹窄上血管的最小內(nèi)直徑如結(jié)果所示，巴曲酶與肝素合用能顯示出預(yù)防再狹窄的效果。但不一定總是要使用肝素。
巴曲酶對兔血漿纖維蛋白原的去纖維蛋白原作用明顯低于人的血纖維蛋白原(“Medicine and Pharmacy”，Mitsuoki Ohba等人，第14卷，第4期，第1061-1071頁，1985，10，Shizen Kagakusha，Tokyo，Japan)，因此，為預(yù)防由血小板早期形成的血栓所致的再閉合，在試驗中將肝素與巴曲酶一起使用。
巴曲酶的急性毒性試驗通過給小鼠、大鼠、兔和狗靜脈給藥來進行。所得的LD50值(BU/Kg)如下LD50值(BU/kg)小鼠(ddY系)192～210大鼠(Wistar系) 105～110兔(NW種) ＞300狗(雜種) 190～208用在本發(fā)明中的巴曲酶能預(yù)防血栓形成，抑制血管壁中的內(nèi)膜肥厚，并能有效地治療和/或預(yù)防經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)后再狹窄和動脈硬化。
鑒于上面已詳細描述了本發(fā)明的特定實施方案用于舉例說明，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當明白，在不違背如所附權(quán)利要求書中所述的本發(fā)明的情況下可對細節(jié)做出各種變動。
權(quán)利要求
1.用于治療和/或預(yù)防經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)后的再狹窄和動脈硬化的藥物，其特征在于該藥物含有巴曲酶作為有效成分。
2.權(quán)利要求1的藥物，其中還含有肝素作為有效成分。
3.權(quán)利要求1的藥物，其中巴曲酶的含量在1-20BU范圍內(nèi)。
4.權(quán)利要求2的藥物，其中巴曲酶的含量在1-20BU范圍內(nèi)。
5.巴曲酶在制備用于治療和/或預(yù)防經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成形術(shù)后的再狹窄和動脈硬化的藥物方面的用途。
6.權(quán)利要求5的用途，其中肝素與巴曲酶一起配合使用。
7.權(quán)利要求6的用途，其中巴曲酶與肝素按1∶100的重量比混合。
全文摘要
本發(fā)明提供用于治療和/或預(yù)防經(jīng)皮經(jīng)管腔血管成型術(shù)后的再狹窄和動脈硬化的藥物，其特征在于該藥物含有巴曲酶作為有效成分。
文檔編號A61K38/58GK1135358SQ9512039
公開日1996年11月13日 申請日期1995年12月22日 優(yōu)先權(quán)日1994年12月26日
發(fā)明者東丸貴信 申請人:東菱藥品工業(yè)株式會社