專利名稱：商陸總皂甙及其對子宮內(nèi)膜異位癥的治療應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從中藥商陸中提取的商陸總皂甙，并經(jīng)動物試驗(yàn)證明對子宮內(nèi)膜異位癥具有顯著的治療作用。
中藥商陸為商陸科植物商陸Phytolacca esculenta Van Houtte(P．Acinose Roxb．)或垂序商陸Phytolacca americana L．的干燥塊根，是一種傳統(tǒng)中藥。性味苦、寒、有毒。中醫(yī)用于瀉水散結(jié)，主治水腫、脹滿、喉痹、癰腫、惡瘡。但是，它從未被用于治療子宮內(nèi)膜異位癥。治療子宮內(nèi)膜異位癥，目前多采用激素類藥物如達(dá)那唑等。
本發(fā)明的目的在于利用我國的中藥資源，尋找出對子宮內(nèi)膜異位癥有治療作用的化學(xué)成份，以便研制新的治療子宮內(nèi)膜異位癥的藥物。
本發(fā)明以中藥商陸為原料，用溶劑提取法提取得商陸總皂甙，為三萜皂甙類化學(xué)成分。主要含以下化學(xué)成份，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下
商陸皂甙O H -木糖 HH商陸皂甙P OH -葡萄糖 HH商陸皂甙Q OH -葡萄糖4-1木糖4-1葡萄糖HH經(jīng)動物試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)上述商陸總皂甙對子宮內(nèi)膜異位癥具有明顯的治療作用。試驗(yàn)方法與結(jié)果如下一、實(shí)驗(yàn)藥物商陸總皂甙批號為970201，純度為74．1％，用0．5％羧甲基纖維素鈉溶液配成10mg／ml液體，供灌胃用。
達(dá)那唑上海第十二制藥廠產(chǎn)品，用0．5％羧甲基纖維素鈉溶液配成10mg／ml溶液，供灌胃用。
二、實(shí)驗(yàn)動物SD大鼠，雌性，體重150±20g，購自上海西普爾必凱實(shí)驗(yàn)動物有限公司(清潔級，合格證書醫(yī)動字第02-49-2號)。
三、實(shí)驗(yàn)方法1．自體移植子宮塊法誘發(fā)的大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的制備按Johes描述的方法進(jìn)行自體子宮內(nèi)膜移植(Johes RC．The effect of a luteinizing hormonereleasing hormone(LRH)agonists(Wy-40，972)，levonorgetrel，danazol and ovariectmy onexperimental endometriosis in the rat．Acta Endocrinologica，1984；106∶282)。具體步驟如下3％戊巴比妥鈉溶液進(jìn)行腹腔注射麻醉(劑量為30mg／Kg)，將大鼠仰臥固定于手術(shù)臺上，剪去腹毛，消毒皮膚后，在無菌條件下進(jìn)行手術(shù)。取下腹正中切口，自恥骨聯(lián)合上緣0．5cm處向上切開3cm，暴露子宮。從左側(cè)子宮角遠(yuǎn)端切下長約1cm的子宮角片段，兩頭結(jié)扎，保留卵巢和輸卵管。沿子宮系膜縱行剖開子宮角片段，將子宮內(nèi)膜從子宮肌層分離開來，并切成5mm×4mm的子宮內(nèi)膜塊，置于37℃ RPMI-1640培養(yǎng)液中待用，用號碼為7個0的無損傷尼龍縫合線將子宮內(nèi)膜塊縫合于腹膜，使其粘膜面朝向腹腔表面。于手術(shù)后3周，行第二次剖腹，檢查子宮內(nèi)膜異位灶的生長情況，并用卡尺測量所形成的囊腫大小(長×寬×高，mm3)。
2．大鼠子宮內(nèi)膜異位癥治療實(shí)驗(yàn)的分組和給藥方案治療自第二次剖腹手術(shù)后開始，將造子宮內(nèi)膜異位癥模型的大鼠，隨機(jī)分成7組，各組按以下方案給藥(1)商陸總皂甙大劑量組每天每只動物給予100mg／Kg商陸總皂甙；(2)商陸總皂甙小劑量組每天每只動物給予50mg／Kg商陸總皂甙；(3)達(dá)那唑組每天每只動物給予100mg／Kg達(dá)那唑；(4)對照組每天每只動物給予等體積0．5％羧甲基纖維素鈉溶液。
所有組動物均用灌胃法給藥，每日1次，連續(xù)3周。最后，在服藥3周后，第三次打開大鼠腹腔，用卡尺測量其子宮內(nèi)膜異位癥的囊腫體積(長×寬×高，mm3)。用本組動物自身對照法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)t檢驗(yàn)，評價用藥前后子宮內(nèi)膜異位癥囊腫體積大小差異的顯著性。
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果所有用藥組和陽性對照達(dá)那唑組動物，在用藥3周后，囊腫均比用藥前顯著縮小，具體數(shù)據(jù)如下表1所示。
表1商陸總皂甙對大鼠子宮內(nèi)膜癥囊腫的治療作用組別 動物數(shù) 囊腫大小(mm3) 囊腫平均減少量 抑制率給藥前給藥3周后 (mm3) (％)對照組 17 103．7±98．0 119．6±103．9-16．0±12．9商陸總皂甙100mg／Kg 17 118．9±119．618．2±18．9**100．6±104．3**84．650mg／Kg18 110．5±89．8 48．8±49．5**51．7±48．6**51．4達(dá)那唑100mg／Kg 17 108．2±102．353．0±46．7**55．2±47．4**51．0*P＜0．05**P＜0．01 與對照組用藥相比。
五、結(jié)論本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的商陸總皂甙對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥均有顯著的治療作用，作用強(qiáng)于同劑量的達(dá)那唑，說明用于臨床治療子宮內(nèi)膜異位癥有重要的治療價值?？梢?，用商陸總皂甙可制成對子宮內(nèi)膜異位癥具有治療作用的藥品或功能食品。
本發(fā)明中，商陸總皂甙的提取方法如下以中藥商陸為原料，粉碎后用具60％乙醇回流提取2～4次，合并提取液，減壓回收乙醇，得濃縮浸膏。浸膏以適量水稀釋，用水飽和正丁醇反復(fù)多次萃取，合并正丁醇萃取液，活性炭脫色，減壓回收正丁醇，得淺黃色粉末，即商陸總皂甙。商陸總皂甙經(jīng)硅膠柱層析，以氯仿∶甲醇-8∶2洗脫，得主要化學(xué)成分為商陸皂甙甲。此外，還有商陸皂甙乙、丙、丁、戊、己、H、O、P、Q等多種皂甙成分。
權(quán)利要求
1．一種以中藥商陸為原料的提取物商陸總皂甙，其特征在于具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)
其中R1R2R3R4商陸皂甙甲 OH -木糖4-1葡萄糖 H CH3商陸皂甙乙 OH -木糖 H CH3商陸皂甙丙 H -木糖4-1葡萄糖 H CH3商陸皂甙丁 OH -葡萄糖 H CH3商陸皂甙戊 OH -木糖 H H商陸皂甙己 OH -木糖4-1葡萄糖 H H商陸皂甙H OH -木糖 4-1 葡萄糖 葡萄糖CH3商陸皂甙O H -木糖 H H商陸皂甙P OH -葡萄糖 H H商陸皂甙Q OH -葡萄糖4-1木糖4-1葡萄糖H H
2．如權(quán)利要求1所述的商陸總皂甙，其特征在于用它制成對子宮內(nèi)膜異位癥具有治療作用的藥品或功能食品。
全文摘要
一種以中藥商陸為原料提取的中藥成分商陸總皂甙,含有商陸皂甙甲、乙、丙、丁、戊、己、H、O、P、Q等多種皂甙成分,經(jīng)對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥治療試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)具有顯著的治療作用,作用強(qiáng)于同劑量的達(dá)那唑,證明用于臨床治療子宮內(nèi)膜異位癥有重要治療價值。
文檔編號A61P43/00GK1205339SQ98110989
公開日1999年1月20日 申請日期1998年7月28日 優(yōu)先權(quán)日1998年7月28日
發(fā)明者易楊華, 鄭欽岳 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)