專利名稱：：中藥復(fù)方藥物組合物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥復(fù)方藥物組合物的新用途，具體地，是在制備延緩陰道衰萎的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：雌激素主要以兩種分子形式存在雌酮(estrone,E》和雌二醇(estradiol,E2)，Ei和E2可以相互轉(zhuǎn)化。由于^的生物活性只有E2的1%左右，所以E2是具有生理意義的雌激素分子。絕經(jīng)前非妊娠婦女的卵巢是合成雌激素的主要器官，將睪酮(testosterone,Te)轉(zhuǎn)化為E2;其它部位也能合成少量雌激素，包括脂肪組織間充質(zhì)細(xì)胞w、皮膚成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞、骨軟骨細(xì)胞、心血管內(nèi)皮細(xì)胞及動脈平滑肌細(xì)胞，此外下丘腦視前區(qū)、下丘腦前部、下丘腦基底及杏仁核也能合成雌激素，這些細(xì)胞和組織在女性絕經(jīng)后即成為體內(nèi)雌激素合成的主要位點。性腺外雌激素合成具有與卵巢合成雌激素不同的特征首先，性腺外合成的雌激素是以旁分泌、細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外自分泌的方式作用于局部組織細(xì)胞[2]'[3]由于循環(huán)雌激素大部分與雌激素結(jié)合球蛋白結(jié)合，不能直接作用于雌激素受體，因此性腺外組織合成局部的雌激素總量可能很少，但濃度高，生物學(xué)效應(yīng)強(qiáng)。其次，由于性腺外組織缺乏合成C19甾體化合物的能力，利用循環(huán)的C19甾體化合物是性腺外組織轉(zhuǎn)化產(chǎn)生雌激素的基本條件。絕經(jīng)后婦女的性腺外組織主要以腎上腺皮質(zhì)產(chǎn)生的雄烯二酮為底物通過芳香化酶的催化作用生成En再轉(zhuǎn)化為活性強(qiáng)的E2發(fā)揮作用。很多研究表明，脂肪組織不僅能儲存能量，還是可分泌多種激素類物質(zhì)的內(nèi)分泌器官[4]'[5]。肥胖婦女骨質(zhì)疏松發(fā)病率較低，瘦人骨質(zhì)疏松發(fā)病機(jī)率高，原因在于肥胖婦女體內(nèi)血雌二醇或雌三醇較高[6]。伴隨體重增加，雄烯二酮轉(zhuǎn)化為雌激素增加，而血中性激素結(jié)合球蛋白減少，引起游離雌激素水平升高，因此體重與循環(huán)中的雌激素和E2水平呈正相關(guān)["。女性在絕經(jīng)后體內(nèi)雌激素水平下降，有肥胖傾向，說明雌激素水平的降低可能與脂質(zhì)代謝和誘發(fā)肥胖有關(guān)。有研究表明，雌激素是脂肪細(xì)胞分化及體脂分布的重要調(diào)節(jié)因子[8]。Wing等報道，圍絕經(jīng)期婦女體重平均每年增加1磅,而且主要是脂肪組織的增加，并呈向心性肥胖，腹圍有明顯的增加[9]，這與絕經(jīng)期婦女脂肪向心性積聚的研究相符合[1°]。有文獻(xiàn)認(rèn)為芳香化酶在調(diào)節(jié)脂肪組織的分布和大小上起著重要作用，女性絕經(jīng)后常出現(xiàn)腹部脂肪沉積(腰圍增加)，可能與絕經(jīng)后女性脂肪組織芳香化酶mRNA過度表達(dá)有關(guān)。芳香化酶mRNA過度表達(dá).導(dǎo)致局部雌激素水平增高，改變體脂分布，內(nèi)臟脂肪沉積[11]，而健康絕經(jīng)后婦女的內(nèi)臟脂肪在制造和轉(zhuǎn)化雌酮上比外周脂肪更為重要[12]。朱曉暉等人的研究表明卵巢切除明顯影響小鼠的脂肪代謝導(dǎo)致腹腔脂肪積聚，外源性雌激素干預(yù)，特別是長期應(yīng)用，可以明顯減少小鼠的腹腔脂肪積聚。而外源性雌激素干預(yù)對正常小鼠腹腔脂肪沒有明顯的影響[13]。國外文獻(xiàn)報道絕經(jīng)期婦女給予雌激素替代療法可以阻止或逆轉(zhuǎn)脂肪的向心分布[14]'[15]，劉漪等也認(rèn)為長期激素替代療法(hormoner印lacementther即y，HRT)既不能加重也不能預(yù)防與絕經(jīng)相關(guān)的體重、體脂的增加，然而HRT組婦女腰圍明顯小于對照組婦女(P〈0.05)，表明長期HRT可能有助于預(yù)防脂肪向腹部轉(zhuǎn)移[16]，此研究結(jié)果與Haarbo等的研究結(jié)果相一致[17]，說明絕經(jīng)后婦女雌激素水平的變化與體內(nèi)脂肪的增加和積聚呈現(xiàn)出一定的相關(guān)性。婦女絕經(jīng)后體內(nèi)的低雌激素狀態(tài)會引發(fā)一系列退行性疾病，如骨質(zhì)疏松、陰道衰萎和阿爾茨海默病等，老年性陰道炎是陰道衰萎的特殊表現(xiàn)。老年性陰道炎常見于絕經(jīng)后的老年婦女，另外，手術(shù)切除雙側(cè)卵巢、卵巢功能早衰、盆腔放療后也可引起本病的發(fā)生。臨床表現(xiàn)為卵巢功能衰退，雌激素水平降低，陰道壁萎縮，易膜變薄，上皮細(xì)胞內(nèi)糖原含量減少，陰道內(nèi)pH值上升，因此局部抵抗力降低，病原菌容易入侵繁殖引起炎癥。陰道粘膜呈老年性改變，皺壁消失，上皮菲薄，粘膜充血，表面有散在小出血點或點狀出血斑，宮頸也常充血，有散在小出血點。有時可形成陰道粘膜粘連，甚至陰道閉鎖致宮腔積膿。陰道粘膜為淡紅色，有散在小鮮紅點，有時可見到淺小潰瘍。鏡下見陰道上皮脫落，上皮下結(jié)締組織充血，白細(xì)胞浸潤。老年性陰道炎的臨床表現(xiàn)為絕經(jīng)后一段時間內(nèi)陰道很干凈，但逐漸出現(xiàn)干癢或千澀,此時可能很少有分泌物，或有少量淡黃色分泌物。婦科檢查可發(fā)現(xiàn)陰道壁變薄且光，黏膜上散在或多量的點狀充血或滲血。因此，若符合以下標(biāo)準(zhǔn)，均可以診斷為老年性陰道炎，即婦女已絕經(jīng)，或雙側(cè)卵巢已切除；陰道分泌物增多，稀薄、淡黃色，嚴(yán)重者呈血樣、膿性;外陰瘙癢、灼痛，部分患者尿頻、尿痛；陰道黏膜蔞縮、皺襞消失，黏膜充血、紅腫，可見出血點，嚴(yán)重者可見潰瘍。通常，治療老年性陰道炎,是根據(jù)陰道的生理特點局部用藥，加強(qiáng)其保護(hù)作用。首先，①采用陰道和外陰清洗法,清洗液宜酸性，以彌補(bǔ)老年生理性酸性變?nèi)醯那闆r，可用1%的乳酸或0.5%的醋酸液沖洗陰道。盡可能不用高錳酸鉀(p.p)液坐浴，以防因濃度把握不當(dāng)或長期使用致使局部皮膚黏膜由于收斂作用而出現(xiàn)更加干癢的現(xiàn)象。②要注意保持陰部衛(wèi)生，每晚應(yīng)用溫水清洗一次。③結(jié)合老年特點，可在醫(yī)生指導(dǎo)下，局部或全身使用雌激素配合治療，而補(bǔ)充雌激素為治療該疾病的有效方法。但是，雌激素的不良反應(yīng)反應(yīng)主要是胃腸道反應(yīng).副作用是引起陰道分泌物增多。如服用雌激素的婦女，有510%出現(xiàn)副作用，如出血、腹脹、浮腫、下腹抽痛、乳房發(fā)脹等，多在開始服用時出現(xiàn)，用久后則自行消失。另外雌激素在用于治療老年性陰道炎的同時，對其它相鄰器官，如子宮等其它器官指標(biāo)的影響，長期使用易造成病變甚至癌變。此外，嚴(yán)重肝腎功能障礙、血卟啉癥、系統(tǒng)性紅斑狼疫、6個月內(nèi)患有活動性靜脈或動脈栓塞性疾病等，應(yīng)禁用雌激素。由于雌激素替代療法的局限，目前，采用中醫(yī)藥治療婦女老年性疾病常常有其獨特的療效。左、右歸丸出自明代溫補(bǔ)名家張景岳的《景岳全書，新方八陣》，為補(bǔ)益腎陰、腎陽的經(jīng)典方，臨床上均可用于治療女性絕經(jīng)前后諸癥。左歸丸治療圍絕經(jīng)期綜合征，可消除烘熱汗出、煩躁易怒、口干咽燥等癥狀，能增加陰道分泌物，改善外陰、陰道干澀癥狀，對雌激素不足的閉經(jīng)也有較好的療效(朱玲，陳彬彬，黃泉智，等.左歸丸臨床與實驗研究進(jìn)展[J].國醫(yī)論壇，2003,18(2):51-53。)"左歸丸"治真陰腎水不足，不能滋養(yǎng)營衛(wèi)，漸至衰弱，或虛熱往來，自汗盜汗，或神不守舍，血不歸原，或虛損傷陰，或遺淋不禁，或氣虛昏運(yùn)，或眼花耳聾，或口燥舌干，或腰酸腿軟，凡精髓內(nèi)虧，津液枯涸等證，俱速宜壯水之主，以培左腎之元陰，而精血自充矣，宜此方主之。"右歸丸"治元陽不足，或先天稟衰，或勞傷過度，以致命門火衰，不能生土，而為脾胃虛寒，飲食少進(jìn)，或嘔惡膨脹，或番胃噎膈，或怯寒畏冷，或臍腹多痛，或大便不實，瀉痢頻作，或小水自遺，虛淋寒疝，或寒侵溪谷而肢節(jié)痹痛，或寒在下焦而水邪浮腫?？傊?，真陽不足者，必神疲氣怯，或心跳不寧，或四體不收，或眼見邪祟，或陽衰無子等證，俱速宜益火之原，以培右腎之元陽，而神氣自強(qiáng)矣，此方主之。文獻(xiàn)左歸丸現(xiàn)代臨床應(yīng)用和實驗研究進(jìn)展，中國實驗方劑學(xué)雜志2004,10(1)，報道了左歸丸用于治療絕經(jīng)期婦女的多發(fā)病——萎縮性外陰炎。從病變部位看，蔞縮性外陰炎部位在外陰，萎縮性外陰陰道炎才涵蓋了陰道；造成萎縮性外陰炎的病因不完全是雌激素水平低下造成，如病因不完全清楚的外陰白色病損，其中"萎縮型"可以表現(xiàn)為外陰陰道萎縮。從中醫(yī)用藥的角度看，由于左歸丸功效是滋陰補(bǔ)腎，填精益髓，主治精髓虧損，陽失潛涵,封藏失司所致的真陰不足證。右歸丸溫補(bǔ)腎陽，填精益髓，用于腎陽不足，命門火衰證。在中醫(yī)的具體適應(yīng)證方面有顯著差異。當(dāng)針對同一以西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)定義的適應(yīng)癥時，由于中醫(yī)辯證不相同，藥物的選擇是不同的。中藥在治療老年性疾病方面具有傳統(tǒng)的優(yōu)勢，然而針對一個以西醫(yī)標(biāo)準(zhǔn)診斷確切的病癥，如果沒有經(jīng)過正規(guī)訓(xùn)練的醫(yī)生，在臨床應(yīng)用傳統(tǒng)中藥時，往往會因不能正確辨證而錯誤用藥，造成臨床使用不方便，不便于對診斷確切的疾病的準(zhǔn)確用藥，同時也給病人帶來不便和浪費。目前尚無左、右歸丸用于延緩陰道衰萎的相關(guān)報道。對月贈本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種中藥復(fù)方藥物組合物的新用途。具體地，是在制備延緩陰道衰萎的藥物中的用途。本發(fā)明另一技術(shù)方案是提供了一種延緩陰道衰萎的藥物組合物。本發(fā)明提供了含有下述重量配比的原料制備而成的藥物組合物在制備延緩陰道衰萎的藥物中的用途熟地18-30份、山茱萸9-12份、山藥8-16份、枸杞子9-12份、菟絲子8-16份、鹿角膠8-16份。其中，所述的藥物是增加陰道血供的藥物。其中，所述的藥物為增強(qiáng)性腺外組織芳香化酶的活性的藥物。其中，所述的藥物是預(yù)防或/和治療老年性陰道炎的藥物。所述的老年性陰道炎，其患者為正常體重或低于正常體重的患者。所述的正常體重標(biāo)準(zhǔn)按正常體重國際標(biāo)準(zhǔn)判定，超過正常20%為超重體重。其中，所述藥物組合物是由下述重量配比制備而成熟地24份、山茱萸9-12份、山藥12份、枸杞子9-12份、菟絲子12份、鹿角膠12份。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的原料中還含有川牛膝9份、龜板膠12份。更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的藥物組合物是由下述重量配比的原料制備而成-熟地24份、山茱萸12份、山藥12份、枸杞子12份、菟絲子12份、鹿角膠12份、川牛膝9份、龜板膠12份。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的原料中還含有杜仲12份、肉桂6份、當(dāng)歸9份、制附子6份。更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的藥物組合物是由下述重量配比的原料制備而成熟地24份、山茱萸9份、山藥12份、枸杞子9份、菟絲子12份、鹿角膠12份、杜仲12份、肉桂6份、當(dāng)歸9份、制附子6份。本發(fā)明還提供了一種延緩陰道衰萎的藥物組合物，它是含有由下述重量配比的原料制備而成的藥劑熟地18-30份、山茱萸9-12份、山藥8-16份、枸杞子9-12份、菟絲子8-16份、鹿角膠8-16份。進(jìn)一步地，它是由含有由下述重量配比的原料制備而成藥劑熟地24份、山茱萸9-12份、山藥12份、枸杞子9-12份、菟絲子12份、鹿角膠12份。更進(jìn)一步地，它是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑熟地24份、山茱萸9-12份、山藥12份、枸杞子9-12份、菟絲子12份、鹿角膠12份。本發(fā)明提供的該藥物組合物延緩陰道衰萎的新用途。尤其具有增強(qiáng)性腺外組織芳香化酶的活性及增加陰道血供的活性。針對治療正常體重或低于正常體重的患者。在特定的診斷標(biāo)準(zhǔn)下，藥效明確。尤其是直接采用熟地、山茱萸、山藥、枸杞子、菟絲子、鹿角膠六味原料在本發(fā)明限定的配伍范圍內(nèi)制備成的藥物組合物，與傳統(tǒng)的左、右歸丸相比，在延緩陰道衰萎方面發(fā)揮了相同的功效，且原料少、來源廣泛，原料的選擇能有效的節(jié)約成本，長期服用對血清雌激素水平無影響，對子宮內(nèi)膜無增殖作用，具有安全性。為臨床治療老年性陰道炎，尤其是預(yù)防老年性陰道炎或預(yù)防老年性陰道炎復(fù)發(fā)提供了新的選擇。實施例1本發(fā)明藥物組合物1的制備(左歸丸)稱取原料熟地黃200g、菟絲子lOOg、牛膝75g、龜板膠100g、鹿角膠100g、山藥100g、山茱萸100g、枸杞子100g;制備方法以上八味，除鹿角膠、龜板膠外，其余熟地黃等六味粉碎成細(xì)粉，過篩混勻。取鹿角膠、龜板膠烊化，與上述細(xì)粉混勻。每100g粉末加煉蜜10g與適量的水，泛丸，干燥，即得。實施例2本發(fā)明藥物組合物2的制備(右歸丸)稱取原料熟地黃24g、山藥12g、山茱萸9g、枸杞子9g、菟絲子12g、鹿角膠12g、杜仲12g、肉桂6g、當(dāng)歸9g、制附子6g。制備方法將熟地蒸爛杵膏，余為細(xì)末，加煉蜜為丸，如彈子大。每嚼服二三丸(69g)，以滾白湯送下。實施例3本發(fā)明藥物的制備稱取原料熟地24g、山茱萸12g、山藥12g、枸杞子12g、菟絲子12g、鹿角膠12g;制備方法以上六味，除鹿角膠外，其余熟地黃等六味粉碎成細(xì)粉，過篩混勻。取鹿角膠烊化，與上述細(xì)粉混勻。每100g粉末加煉蜜10g與適量的水。實施例4本發(fā)明藥物的制備稱取原料熟地24g、山茱萸9g、山藥12g、枸杞子9g、菟絲子12g、鹿角膠12g;按實施例3方法制備。實施例5本發(fā)明藥物的制備稱取原料熟地18g、山茱萸9g、山藥8g、枸杞子9g、菟絲子8g、鹿角膠8g;按實施例3方法制備。實施例6本發(fā)明藥物的制備熟地30g、山茱萸12g、山藥16g、枸杞子12g、菟絲子16g、鹿角膠16g,按實施例3的方法制備。上述原料可以用原生藥，也可以用原生藥的炮制品。以下是通過藥效實驗及臨床實驗證明本發(fā)明的有益效果。實驗材料與儀器1、實驗材料左歸丸(實施例1方法制備)上海雷允上封濱制藥有限公司，成人劑量18g/日，批號040810，其高低劑量組分別簡稱"左高、左低"。右歸丸(實施例2方法制備)北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，成人劑量27g/日，批號4013139，其高低劑量組分別簡稱"右高、右低"。倍美力惠氏艾爾斯特制藥公司艾爾斯特藥廠生產(chǎn)(規(guī)格0.625mg/片)，批號PKG0404001戊巴比妥鈉中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司進(jìn)口分裝，批號F20020405硫酸慶大霉素注射液天津藥業(yè)焦作有限公司，批號04081002-2注射用硫酸鏈霉素華北制藥股份有限公司，批號040704注射用青霉素鈉華北制藥股份有限公司，批號U0406610生理鹽水四川美大康佳樂藥業(yè)有限公司，批號05030631雌二醇試劑盒AlphaDiagnosticInternational公司，批號05114-B高糖達(dá)爾伯克(氏)必需基本培養(yǎng)基(dulbecco，sminimumessentialmedium,DMEM):GIBC0公司。LotNo:1272921。丙酸睪酮注射液25mg/ml，10支/盒，上海通用藥業(yè)股份有限公司，批號0207113-異丁基-l-甲基黃嘌呤(isobuthyl-methylxan-thine，IBMX)、地塞米松(dexamethasone,Dex)、胰島素(insulin,Ins)均購于sigma公司Trypsin:Sigma公司，批號032K7255新生小牛血清哈里生物有限公司，批號050109Trizol:Takara，Lot:B201ART-PCR試劑盒Takara，Lot:BK3101mousearomataseprimer,rataromataseprimer:上海申能博彩生物禾斗技有限公司。無水乙醇安徽安特生物化學(xué)有限公司，批號0510073604。三氯甲烷廣東光華化學(xué)廠有限公司，批號20051114。異丙醇廣東光華化學(xué)廠有限公司，批號20050526。瓊脂糖Bio-west,Lot:081527PBS、EDTA、TAE、焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonarate，DEPC)處理水、瓊脂糖凝膠均新鮮配置。2、實驗儀器電子天平德國SartoriusBS210S低速離心機(jī)北京醫(yī)用離心機(jī)廠，LD5-2A倒置顯微鏡日本OLYMPUSCK40C02培養(yǎng)箱德國HERAEUSBB5060小型高速離心機(jī)美國Thermo3591酶標(biāo)儀美國ThermoMK3高速冷凍離心機(jī)BECKMANAllegra64R臺式離心機(jī)印pendorf5415D恒溫烤箱上海精宏實驗設(shè)備有限公司，DHG-9053A紫外分光光度計BeckmanDU640電泳槽，電泳儀BI0RADPAC200PCR儀:HybaidHBPX220凝膠成像系統(tǒng)及圖象分析軟件KodakEDAS290及KodakID3.5泰盟醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)2000Primer5.0引物設(shè)計軟件振蕩器、超凈工作臺、超低溫冰箱、0.22um針頭濾器、細(xì)胞計數(shù)板、6孔培養(yǎng)板、24孔培養(yǎng)板、EP管、單道微量移液器、多道微量移液器、加樣槽等；lml、5ml注射器，四號、五號針頭，縫合線，縫合針，持針鉗，眼科鑷，手術(shù)剪，解剖板，無菌棉簽，載玻片。實驗例l本發(fā)明藥物小鼠血清雌二醇E2值測定1、實驗動物及方法1.1實驗動物及環(huán)境昆明種雌性早育齡期小鼠45只，體重18土2g，購于四川中藥研究所實驗動物中心，合格證川實動管質(zhì)第19號，清潔級動物房常規(guī)飼養(yǎng)。室溫2225°C，濕度45%65%，晝夜明暗交替時間為12:12小時。1.2動物分組及給藥在體重均一的情況下隨機(jī)將小鼠分成3組，分別為正常組、左高組和右高組，每組15只。分別灌服生理鹽水、左歸丸(0.06g/10g)、右歸丸(0.09g/10g)，灌胃體積均為O.3ml/10g。1.3—次性灌胃含藥小鼠血清的制備每組小鼠于給藥0.5小時、2小時、4小時、8小時、24小時分別取3只行股動脈取血，所得血液室溫靜置2小時后，離心3000Xg，15分鐘。取上層血清，每組分裝，以0.22um微孔濾膜過濾除菌后置—70'C冰箱保存。1.4各類血清培養(yǎng)誘導(dǎo)分化后的3T3-L前脂肪細(xì)胞3T3-L,前脂肪細(xì)胞是Green和Kehinde于1974年從Swiss3T3小鼠胚胎中分離克隆所得，是目前國際上公認(rèn)的研究成脂過程的細(xì)胞株，能較好地模擬活體脂肪組織的功能[18]'[19]，可作為研究脂肪組織芳香化酶表達(dá)的體外實驗載體[2°]'[21]。芳香化酶的表達(dá)是未分化前脂肪細(xì)胞的標(biāo)志，前脂肪細(xì)胞分化為成熟的脂肪細(xì)胞和芳香化酶的表達(dá)水平下降有關(guān)。由于芳香化酶的表達(dá)和活性在3T3-1^前脂肪細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞過程中最高[22]，因此我們選擇誘導(dǎo)分化中的3T3-L前脂肪細(xì)胞來進(jìn)行芳香酶活性和表達(dá)的研究。1.4.13T3-Li前脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)3L-1U前脂肪細(xì)胞由地奧集團(tuán)天然藥物篩選中心提供。從液氮中取出3T3-L,前脂肪細(xì)胞，37。C水浴復(fù)蘇。復(fù)蘇之細(xì)胞懸液1000Xg離心3分鐘，棄上清，加入含10X新生小牛血清(Newbroncalfserum,NCS)、青霉素100u/L、鏈霉素100u/L的高糖DMEM培養(yǎng)液制成2X105/ml的細(xì)胞懸液，加入六孔細(xì)胞培養(yǎng)板，置于37°。培養(yǎng)箱(5%二氧化碳，95%空氣)內(nèi)，每48小時更換一次培養(yǎng)液。1.4.23T3-Li前脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化接種細(xì)胞5X107孔于24孔培養(yǎng)板內(nèi)，培養(yǎng)1天后，參照文獻(xiàn)(JianbeiDeng，KunjieHua，StevenS.LesserandJoyceB.Harp.ActivationofSignalTransducerandActivatorofTranscription-3duringProliferativePhasesof3T3-UAdipogenesis.Endocrinology.2000，141(7):2370-2376;朱曉海,何清濂，林子豪，等.人前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)及增殖與分化模型的建立[J].中華整形燒傷外科雜志.1999,15(3):199-201)進(jìn)行誘導(dǎo)分化。1.4.3加入各類血清培養(yǎng)3T3-L前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化48小時后，更換培養(yǎng)液，使不含NCS的高糖DMEM培養(yǎng)液中只含10mg/LIns、底物T，分別加入2%、10%的正常組血清和左高、右高組各時段2%、10%的血清，另設(shè)無T(含2%正常組小鼠血清)、無T無血清組為對照。1.5測定3TfL,前脂肪細(xì)胞上清的E2值加入各類血清培養(yǎng)細(xì)胞48和96小時后，觀察細(xì)胞形態(tài)變化，取細(xì)胞上清lOOyl，3000Xg，離心5分鐘后測定E2值。嚴(yán)格按照酶聯(lián)免疫試劑盒說明操作，于酶標(biāo)儀450nm吸光度，讀取吸光度值(opticaldensity,0D)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和OD值做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算得出樣品中E2的濃度。2、結(jié)果2.1左高組各時段不同濃度含藥血清培養(yǎng)3T3-L,前脂肪細(xì)胞48和96小時后細(xì)胞上清E2值2.1.1.表1左高組各時段2%含藥血清培養(yǎng)3T3-Ll前脂肪細(xì)胞48小時后細(xì)胞上清E2值(pg/ml)G±S)—_<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2.1.2表2左高組各^寸段2%含藥血清培養(yǎng)3T3-L前脂肪細(xì)胞96小時后細(xì)胞上清E2值(pg/ml)(;±S)_^_<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2.1.3表3左高組各時段10%含^血清培養(yǎng)3T3-L前脂肪細(xì)胞48小時和96小時后細(xì)胞上清E2值(pg/ml)G±S)_<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表1、表2和表3提示，左歸丸高劑量灌胃8小時后含藥鼠血清2%濃度時具有一定促進(jìn)培養(yǎng)48小時后3T3-Ll前脂肪細(xì)胞芳香酶活性的作用。左歸丸高劑量灌胃4小時后含藥鼠血清10%濃度時具有一定促進(jìn)培養(yǎng)96小時后3T3-Ll前脂肪細(xì)胞芳香酶活性的作用。左歸丸高劑量灌胃4小時后含藥鼠血清10%濃度時具有一定促進(jìn)培養(yǎng)48或96小時后3T3-Ll前脂肪細(xì)胞芳香酶活性的作用。2.2右高組各時段不同濃度含藥血清培養(yǎng)3T3-L,前脂肪細(xì)胞48和96小時后<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>2.2.2表5右高組各時段10%含藥血清培養(yǎng)3T廠L前脂肪細(xì)胞48和96小時后細(xì)胞上清E2(pg/ml)(;土S)_<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表4、表5提示，右歸丸高劑量灌胃4小時后含藥鼠血清10%濃度時具有一定促進(jìn)培養(yǎng)48或96小時后3T3-Ll前脂肪細(xì)胞芳香酶活性的作用。上述小鼠實驗證明，左、右歸丸可增強(qiáng)3T3-Ll前脂肪細(xì)胞芳香化酶的活性。<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實驗例2本發(fā)明藥物大鼠血清雌二醇E2值實驗方法按實驗例1所述小鼠血清雌二醇E2值的實驗方法進(jìn)行測定。1、實驗動物及環(huán)境正常體重大鼠育齡期雌性早SD大鼠，230土30g，97只；購于成都中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，飼養(yǎng)于二級動物實驗室，合格證SCXK(川)2004-11。室溫2225。C，濕度45%65%，晝夜明暗交替時間為12:12小時。超重大鼠育齡期雌性孚SD大鼠，體重279g464g，157只；灌胃時間12周。其中，超過正常體重20%左右的大鼠為超重大鼠。2、去勢模型的建立及動物分組大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，除正常組(20只)夕卜，均腹腔注射生理鹽水配制的戊巴比妥鈉(30mg/kg，lml/100g)，腹位固定，假手術(shù)組(17只)僅去除卵巢周圍的脂肪組織后關(guān)腹，其余(60只)行去卵巢手術(shù)。術(shù)后連續(xù)3天注射抗生素預(yù)防感染，此后行陰道涂片觀察，連續(xù)5天，每天1次，去勢后大鼠無動情周期表現(xiàn)，確定去勢成功。在體重均一的情況下將去勢成功的大鼠分為6組，去勢生理鹽水組(8只)、倍美力組(ll只)、左高組(6只)、左歸丸低劑量組(左低組，9只)、右高組(6只)、右歸丸低劑量組(右低組，9只)，正常組、假手術(shù)組、去勢生理鹽水組均灌服生理鹽水，左高組、左低組分別灌服左歸丸(0.6g/100g，0.15g/100g)，右高組、右低組分別灌服右歸丸(O.9g/100g，0.23g/100g)，倍美力組1灌服大鼠倍美力(62.5ug/100g)，倍美力組2灌服小鼠倍美力(41.7ug/100g)，每0.625mg藥配15ml純水，將藥物壓成粉末狀，包成小包，每日現(xiàn)用現(xiàn)配。每組動物灌胃體積均為lml/100g，三天稱取一次體重，調(diào)整給藥劑量。灌藥2周后開始陰道涂片觀察陰道細(xì)胞角化率，均連續(xù)灌胃11周。3、連續(xù)灌胃含藥大鼠血清的制備連續(xù)灌胃11周后，大鼠末次給藥1小時[23]后行股動脈取血，血液靜置2小時后，離心3000Xg，15分鐘，取上層血清，分組混勻。所有血清均用0.22um的微孔濾膜過濾除菌。4、3TfL前脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化同實驗例15、含藥血清培養(yǎng)3T3-L前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化48小時后，更換培養(yǎng)液，使不含NCS的高糖DMEM培養(yǎng)液中只含Insl0mg/L和底物T。加入各組血清，終濃度為2%;設(shè)立無含藥血清組(含2XNCS和T)、無T組(含2XNCS)，培養(yǎng)48小時。6、3T3-Li前脂肪細(xì)胞細(xì)胞上清E2值的測定培養(yǎng)48小時后，觀察每組細(xì)胞形態(tài)變化，取細(xì)胞培養(yǎng)液50ii1，3000Xg離心5分鐘后，取上清測定E2值。嚴(yán)格按照酶聯(lián)免疫試劑盒說明操作，于酶標(biāo)儀450nm吸光度，讀取0D值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。7、方法和結(jié)果將雌性育齡期大鼠分為正常組、假手術(shù)組和去勢組，去勢組去勢后分為去勢生理鹽水組、倍美力組、左歸丸高劑量組、右歸丸高劑量組。正常組、假手術(shù)組、去勢生理鹽水組灌服生理鹽水，左高組灌服左歸丸、右高組灌服右歸丸，倍美力組灌服倍美力，每組動物灌胃體積均為0.3ml/10g，給藥45天后取子宮組織作病理切片。連續(xù)灌胃ll周后股動脈取血，測定血清E2值，取子宮、陰道組織作病理切片，同時獲得含本發(fā)明藥物去勢鼠血清、含倍美力去勢鼠血清以及含生理鹽水去勢鼠血清。以2%各類血清培養(yǎng)3T3-L前脂肪細(xì)胞48小時后測定細(xì)胞上清E,值?！?本發(fā)明藥物高低劑量對去勢大鼠血清E2值(pg/ml)的影響(；士S)正常體重大鼠組超重大鼠組』S」樣本數(shù)(n)血清E2值樣本數(shù)血清&值注與正常組動情期比較，翻P〈0.05■■P<0.01■■■<().001與正常組動情間期比較，口P〈0.05口口P〈0.01口口口P〈0.001與假手術(shù)組動情期比較，AP〈0.05AAP〈0.01▲▲▲<().001與假手術(shù)組動情間期比較，AP<0.05△△P<0.01AAAP〈0.001與去勢生理鹽水組比較，*P<0.05**P〈0.01***P<0.001與倍美力組比較，令p〈0.05令令P〈0.01令令令P〈0.00表6正常體重實驗提示本發(fā)明藥物高低劑量組與去勢生理鹽水組比較，對血清E2值無明顯影響(P〉0.05)，與倍美力組比較，血清E2值有差異(P〈0.05)。超重實驗提示，去勢時實驗動物體重過高，超過標(biāo)準(zhǔn)體重1/2左右時，本發(fā)明藥物對去勢超重大鼠血清E2值沒有影響，(P>0.05)。實驗例1和2表明本發(fā)明藥物并不直接增加血清E2值，具有一定增強(qiáng)性腺外組織芳香化酶活性的作用，促進(jìn)雌激素合成，可延緩去勢大鼠陰道衰萎。實驗例3本發(fā)明藥物陰道供血作用實驗通過陰道病理病理切片，在低倍鏡(10X10)下觀察，每例標(biāo)本選取陰道黏膜最厚、最薄及中間厚度3處拍照后以軟件測量厚度；高倍鏡(40X10)下觀察，在粘膜最厚、最薄及中間厚度3處分別數(shù)出上皮細(xì)胞層數(shù)(以細(xì)胞核定位)，計算出粘膜厚度的平均值和上皮細(xì)胞層數(shù)的平均值；采用低倍鏡(IOX10)下觀察，計數(shù)出每個標(biāo)本整個陰道橫切面所有陰道皺襞和陰道固有層血管數(shù)，結(jié)果如下61.67±24.3628.30±13.3861.56±13.5036.77±14.4916.28±5.96""530.32±295.97*28.13±15.23*17.80±6.63aa國419.08±5.43a*21.84±8.01"151312910321.14±83.51320.09±33.81244.67±24.63222.66±68.23225.55±36.63179.23±34.46鑰鑰K其其力期期瞎瞎鹽晴瞎動,理組動間術(shù)術(shù)生力常常手手勢美高低高低正正假假去倍左左右右表7本發(fā)明藥物對陰道粘膜厚度、陰道皺襞和陰道固有層血管數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>參與去勢組、左右歸丸組比較P<0.05女與去勢組比較P<0.05正常體重實驗提示在一定體重下(近標(biāo)準(zhǔn)體重)，倍美力能夠明顯改善去勢大鼠的陰道粘膜厚度、皺襞數(shù)、陰道固有層血管數(shù)、上皮細(xì)胞層數(shù)，左、右歸丸能明顯增加去勢大鼠陰道皺襞和陰道固有層血管數(shù)，而對陰道粘膜厚度、上皮細(xì)胞層數(shù)沒有影響，說明本發(fā)明藥物在一定體重下(近標(biāo)準(zhǔn)體重)可以通過改善陰道血供，延緩陰道衰萎。實驗例4本發(fā)明藥物對去勢大鼠體重的影響表8灌服本發(fā)明藥物高低劑量11周對去勢正常體重大鼠體重差的影響(；土S)組別例去勢后灌胃前灌胃后處死前增重(g)(%)數(shù)體重體重_注B翻B與正常組比較，P<0.001AAA與假手術(shù)組比較，P〈0.001林*與去勢生理鹽水組比較，P<0.001命令與倍美力組比較，P<0.01令令令與倍美力組比較，P〈0.001表8提示左高、右高組與去勢生理鹽水組比較，給藥前后體重差無顯著性差異(P〉0.05);倍美力組與去勢生理鹽水組、左高、左低組比較，給藥前后體重有極顯著性差異(P〈0.001);倍美力組與右歸丸低劑量組比較，給藥前后體重有顯著性差異(P<0.01)。綜上，倍美力組體重增加不顯著，其余各20238.40±10.9417239，94±19.638255.38±23.9811254.82±20,87276,40±21.25279.35±27.15302.00±28.17260.64±23.87257.57±22.37310.29±32.21253.67±18.14315.89±53.6238.00±17.67"令(15.96%±7.35%)丁39.41±13.5""(16.39%±5.33%)48.37土20.68令"(18.08%±6.58%)5.82±13.49***(2.34%±5,72%)52.71±11.51***(20.34%±3.15%)49.77±14.45令令*(18.01%±6.06%iQ62.22±52.24(24.71%±20.64%)52.33±21.67"(21.00%±8.61%)且叚且紹用紹組術(shù)對力組組組組常手勢美高低高低正假去倍左左右右組增加明顯，但組間差異不明顯(P>0.05)。表9本發(fā)明藥物對超重實驗大鼠去勢后體重的影響(；士S)分組例數(shù)去勢后灌胃前體重灌胃后處死前體重增重(g)(%)參與正常組、假手術(shù)組、去勢組、左右歸丸組比較P<0.05表8、表9提示，倍美力組增重值顯著低于其余各組(P<0.05)，其余各組體重增加均較明顯，但各組組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P〉0.05)。表10兩次實驗前(去勢后灌胃前)各組體重均值比較(x士s)分組例數(shù)超重實驗組例數(shù)正常體重實驗組均值差值(超重％)表10提示，超重實驗組與正常體重實驗組大鼠實驗前體重比較，超重實驗組大鼠超重較明顯。表ll兩次實驗處死前(灌胃后處死前)各組體重均值比較(x士s)分組例數(shù)超重實驗組例數(shù)正常體重實驗組均值差值(超重％)表11提示，超重實驗組與正常體重實驗組大鼠處死前體重比較，超重實驗組大鼠超重也較明顯。上述實驗結(jié)果提示大鼠去勢后灌服倍美力體重?zé)o明顯增加。正常組、假手術(shù)組、去勢組、本發(fā)明藥物組實驗前后體重增加顯著，但組間差異不明顯。正常體重實驗組與超重實驗組結(jié)果具有可重復(fù)性。超重實驗組去勢大鼠實驗前后各組體重均數(shù)較正常體重實驗組增加120-170g，平均超重47%—65%。383.07±38.27366.08±31.85395.75±44.10399.22±38.78399.20±39.84419.89±49.4120238.40±10.9417239.94±19.638255.38±23.9811254.82±20.877257.57±22.379253.67±18.14144.67(60.68%)126.14(52.57%)140.37(54.97%)144.40(56.67%)141.63(54.99%)166.22(65.53%)440.73±49.0020276.40±21.25164.33(59.45%)427.08±49.7017279.35±27.15147.73(52.,463.25±69.258302.00±28.17161.25(53.39%)405.44±45.3911260.64±23.87144.80(55.56%)456.70±60,217310.29±32.21146.41(47.180/0)487.33±75.569315.89±53.62171.44(54.270/o)383.07±38.27440.73±49.0057.67±40.35(15.35%±10.64%)366.08±31.85427.08±49.7061.00±38.40(16.77%±10.49%)395.75±44.10463.25±69.2567.50±37.83(16.80%±9.03%)399.22±38.78405.44±45.396.22土20.88參(1.52%±4.92%)399.20±39.84456.70±60.2157.50±28.10(14.10%±6.90%)419.89±49.41487.33±75.5667.44±36.97(15.85%±9.91%)紹自經(jīng)自自自常手勢美歸歸正假去倍左右經(jīng)紹紹紹經(jīng)資常手勢美歸歸正假去倍左右5329orn.inullFTT.lnrirnlln-H經(jīng)經(jīng)結(jié)經(jīng)經(jīng)經(jīng)常手勢美歸歸正假去倍左右實驗例5本發(fā)明藥物對超重大鼠陰道粘膜厚度、陰道皺襞和陰道固有層血管數(shù)的影響表12本發(fā)明藥物對陰道粘膜厚度、陰道皺襞和陰道固有層血管數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>參與去勢組、左右歸丸組比較P<0.05表12提示，倍美力對體重過重的去勢大鼠血清雌激素水平影響不明顯，但對陰道固有層血管數(shù)和上皮細(xì)胞層數(shù)有顯著影響，而本發(fā)明藥物則對體重過重的去勢大鼠陰道組織沒有顯著影響(P〉0.05)。通過實驗例1-5的實驗提示，本發(fā)明藥物可延緩陰道衰萎，具有增強(qiáng)性腺外組織芳香化酶的活性及增加陰道血供的活性，本發(fā)明藥物具有刺激脂肪細(xì)胞合成雌激素的作用。對于正常體重大鼠組，左右歸丸能明顯改善去勢大鼠皺襞數(shù)、固有層血管數(shù)；而針對超重大鼠組實驗，去勢時實驗動物體重過高，超過標(biāo)準(zhǔn)體重1/2左右時，本發(fā)明藥物對去勢超重大鼠陰道無明顯影響，與正常體重大鼠組實驗結(jié)果不同。本發(fā)明藥物對體重過高去勢實驗大鼠陰道無明顯影響(P>0.05)。參照中醫(yī)"肥人多痰"傳統(tǒng)理論認(rèn)識，肥胖者多夾痰濕，本發(fā)明藥物以補(bǔ)腎為主，正常體重實驗提示適合針對治療腎虛所致老年陰道炎，超重實驗提示，對于腎虛夾痰濕的老年陰道炎無明顯作用。實驗例6本發(fā)明藥物安全性實驗1、子宮濕重及子宮臟器指數(shù)表i3灌服本發(fā)明藥物高低劑量ii周對去勢大鼠子宮濕重的影響(;土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注■■■與正常動情期組比較，p<0.001□□□與正常動情間期組比較，p<0.001▲▲▲與假手術(shù)動情期組比較，p<0.001△△△與假手術(shù)動情間期組比較，p<0.001***與去勢生理鹽水組比較，p〈0.001與倍美力組比較，p〈0.001表13提示本發(fā)明藥物高低劑量組與去勢生理鹽水組比較，子宮濕重?zé)o顯著性差異(p〉0.05)。_表14灌服本發(fā)明藥物高低劑量11周對去勢大鼠子宮臟器指數(shù)的影響G±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>注■■■與正常動情期組比較，p〈0.001□□□與正常動情間期組比較，p<0.001▲▲與假手術(shù)組動情期比較，p〈0.01;▲▲▲與假手術(shù)動情期組比較，p〈0.001△△△與假手術(shù)動情間期組比較，p〈0.001***與去勢生理鹽水組比較，p<0.001與倍美力組比較，p〈o.oo12、子宮病理切片結(jié)果低倍鏡(10x10)下觀察子宮病理切片，選擇每例標(biāo)本內(nèi)膜最厚、最薄和中等厚度三處拍照，以軟件測量后，計算內(nèi)膜厚度、被覆上皮厚度、肌層厚度的平均值。表15本發(fā)明藥物高低劑量對去勢大鼠子宮內(nèi)膜厚度和宮內(nèi)膜被覆上皮的影響(；士s)。HMl內(nèi)膜厚度(wm)被覆上皮厚度(um)注■與正常動情期組比較，固P〈0.05■■P〈0.01H固園P〈0.001□與正常動情間期組比較，口P〈0.05口口P〈0.01▲與假手術(shù)組動情期比較，AP〈0.05△與假手術(shù)動情間期組比較，AP<0.05△△P<0.01△△△P〈0.001*與去勢生理鹽水組比較，*P〈0.05**P<0.01***P〈0.001與倍美力組比較，令令令P〈0.001表15提示本發(fā)明藥物高低劑量組與去勢生理鹽水組比較，子宮內(nèi)膜厚度和內(nèi)膜被覆上皮厚度無顯著性差異(P>0.05)。3、本發(fā)明藥物子宮肌層厚度的影響表16本發(fā)明藥物高低劑量對去勢大鼠子宮肌層厚度的影響G士S)組別例數(shù)肌層厚度(Pm)正常動情期102.20±0.59**正常間情期102.10±0.46**假手術(shù)動動情期72.41±0.34***假手術(shù)間情期102.14±0.59*去勢生理鹽水80.95±0.31aaa爭爭爭b矚oo厶倍美力112.78±0.54***左高61.09±0.39""左低91.09±0.30"""口口國a右高6右低90.67±0.17aaa令爭爭口qq黼靈厶厶30357.72±1,38***0.20±0.076.22±1.61**0.17±0.0510.60±2.540.27±0.05*6.17±1.41**0.20±0.05*2.65±0.0.11±0.8.58±2.24***0.28±0.2.99±0.69b謂翻爭爭爭aa口a0.09±0.Ol余爭爭厶aa2.79±0.58hb隱令令爭o口厶aa0.10±0.2.75±0.63固困畫"爭口口厶aa0.10±0.1.82±0.35b麗麗令令爭a厶a口oa0.08±0.與正常動情期組比較，HP〈0.05■■P〈0.01與正常動情間期組比較，口口P〈0.01，口口口P〈0.001與假手術(shù)組動情期比較，AP〈0.05與假手術(shù)動情間期組比較，AP〈0.05△△P<0.01與去勢生理鹽水組比較，*P〈0.05**P<0.01***P〈0.001與倍美力組比較，令令令P〈0.0011r『T-」，『T7接勢外期期情情鹽請瞎動臥1動臥術(shù)擬生力常常手手勢美高低高低正正假假去倍左左右右注表16提示本發(fā)明藥物高低劑量組與去勢生理鹽水組比較，子宮肌層厚度無顯著性差異(P〉0.05)。4、本發(fā)明藥物對去勢大鼠子宮內(nèi)膜腺體直徑、內(nèi)徑、腺上皮高度的影響以高倍鏡(40X10)觀察子宮病理切片，每個標(biāo)本選擇大小適中的內(nèi)膜腺體三個拍照后以軟件測量腺體直徑、內(nèi)徑、腺上皮高度，計算出平均值；每個標(biāo)本計算低倍鏡G0X10)5個視野內(nèi)的腺休數(shù)量表17本發(fā)明藥物高低劑量對去勢大鼠子宮內(nèi)膜腺體直徑、內(nèi)徑、腺上皮高度的影響G土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>與正常動情期組比較，園P〈0.05■■P<0.01與正常動情間期組比較，口P〈0.05與假手術(shù)組動情期比較，AP〈0.05與假手術(shù)動情間期組比較，AAP〈0.01，AAAP〈0.001與去勢生理鹽水組比較，*P〈0.05**P<0.01與倍美力組比較，令P〈0.05令令P〈0.01表17提示本發(fā)明藥物高低劑量組與去勢生理鹽水組比較，子宮內(nèi)膜腺體直徑、內(nèi)徑、腺上皮高度無顯著性差異(P>0.05)。5、本發(fā)明藥物對去勢大鼠子宮腺體個數(shù)的影響表18本發(fā)明藥物高低劑量對去勢大鼠子宮腺體個數(shù)的影響G土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注■與正常動情期組比較，麵P〈0.05■■P〈0.01□與正常動情間期組比較，口P〈0.05，口口P〈0.01，▲與假手術(shù)組動情期比較，AP〈0.05*與去勢生理鹽水組比較，*P<0.05***P<0.001與倍美力組比較，命令令P〈0.001表18提示本發(fā)明藥物高低劑量組與去勢生理鹽水組比較，子宮腺體個數(shù)無顯著性差異(P〉0.05)。6、本發(fā)明藥物對陰道濕重及陰道臟器指數(shù)的影響表19本發(fā)明藥物高劑量對大鼠陰道濕重和陰道臟器指數(shù)的影響(；土S)HMl濕重(g)陰道臟器指數(shù)(L34±0.04求承氺0.0013±0.0.28±0.0.OOIO土O.0003*神""0.34±0.0.0012±0.0003承氺氺。。0.29±0.0.OOIO土O.0002***,0.15±0.03睡讓-口ci口aaaa厶a爭爭令0,0005±0.0001麵鼸BCia。AAAAA厶命命命0.28±0.0.OOll土O.0002***0.14±0.02睡b鼸口。。aaa厶厶a爭令令0.0004±0.000lB-籠ciciaAAA厶厶a4峰寺0.14±0.0斗騸-畫口口ciaaa厶aa爭爭令0.0004±0.OOOIbb翻口口口aaa厶厶a命普寺注■與正常動情期組比較，BP〈0.05■■P<0.01疆顯BP〈0.001□與正常動情間期組比較，口P〈0.05，口口P〈0.01，▲與假手術(shù)組動情期比較，AP〈0.05△與假手術(shù)組動情間期比較，AP〈0.05A厶AP〈0,001*與去勢生理鹽水組比較，***P<0.001與倍美力組比較，令令令P〈0.001表19提示本發(fā)明藥物高劑量組與去勢生理鹽水組比較，陰道濕重、臟器指數(shù)無顯著性差異(P〉0.05)。上述安全性實驗證明，倍美力組對子宮濕重、子宮臟器指數(shù)、子宮內(nèi)膜厚度和內(nèi)膜被覆上皮厚度、子宮內(nèi)膜腺體直徑、內(nèi)徑、腺上皮高度、陰道濕重、臟器指數(shù)等均有明顯影響，長期反復(fù)使用具有一定副作用。而本發(fā)明藥物僅通過增加陰道皺襞數(shù)和陰道固有層血管數(shù)，以及通過增強(qiáng)性腺外組織芳香化酶的活性增加雌激素合成達(dá)到延緩陰道衰萎，預(yù)防和治療老年性陰道炎的目的，同時對與雌激素相關(guān)的其它組織沒有影響，說明本發(fā)明藥物預(yù)防和治療的針對性強(qiáng)，與雌激素替代療法相比，不會對其它組織產(chǎn)生副作用，安全性好，可以長期使用。實驗例7本發(fā)明藥物臨床實驗一、診斷標(biāo)準(zhǔn)病史婦女已絕經(jīng)，或雙側(cè)卵巢已切除。癥狀陰道分泌物增多，稀薄、淡黃色，可伴有性交痛，嚴(yán)重者呈血樣、膿性。期期水期期瞎請沐i請清動,慘動，兩術(shù)刺生力常常手手勢美高高正正假假去倍左右外陰瘙癢、灼痛，部分患者尿頻、尿痛。婦科檢査陰道黏膜萎縮、皺襞消失，黏膜充血、紅腫，可見出血點，嚴(yán)重者可見潰瘍。實驗室檢查陰道分泌物涂片檢查，顯微鏡下見大量基底層細(xì)胞及白細(xì)胞，無滴蟲，無假絲酵母菌，線索細(xì)胞小于20%，宮頸刮片巴氏2級以下，陰道脫落細(xì)胞檢查提示雌激素水平低下，血清FSH、LH顯著升高大絕經(jīng)水平，E2值顯著低下。療效評估外陰瘙癢、灼痛消失，陰道分泌物減少，檢查外陰皮膚及陰道粘膜充血消失為治愈。因卵巢功能衰退，雌激素水平下降，陰道上皮細(xì)胞積聚糖原減少，老年人陰道，致陰道局部抵抗力下降，故老年性陰道炎常見。老年性陰道炎的診斷一般不難，但應(yīng)排除其他疾病，對血性白帶應(yīng)特別與子宮惡性腫瘤(子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌)及陰道癌相鑒別。老年性陰道炎經(jīng)雌激素治療，消除繼發(fā)感染以后可停藥，陰道黏膜回到萎縮而無感染狀態(tài)，極少數(shù)需間斷反復(fù)治療。診斷局部檢查可見外陰潮紅，濕潤，陰道壁充血，有散在出血點，穹窿及宮頸最明顯，診斷一般不難。應(yīng)取陰道分泌物查滴蟲、霉菌等病原體。必要時行宮頸或子宮內(nèi)膜活組織檢查。二、結(jié)論本發(fā)明藥物組合物治療老年性陰道炎，尤其是正常體重或低于正常體重的老年性陰道炎，具有較好的藥效。其中實施例1-6均能達(dá)到較好的藥效。實施例3-6與實施例1、2相比，雖然在原料用量上少于實施例1、2，但針對治療老年性陰道炎的藥效實驗表明，發(fā)揮了相同的功效，因此，本發(fā)明原料中熟地、山茱萸、山藥、枸杞子、菟絲子、鹿角膠六味藥物為治療老年性陰道炎的核心配伍，其選擇及具體用量對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說并非顯而易見的。參考文獻(xiàn)[1]SimpsonER,ZhaoY,AgarwalVR,MichaelMD,BulunSE,etal.Aromataseexpressioninhealthanddisease.RecProgHormRes.1997，52:185-214[2]Si即sonE，RubinG，ClyneC，etaLTheroleoflocalestrogen-biosynthesisinmalesandfemales.TrendsEndocrinolMetab2000.11(5):184-188[3化abrieF，BelangerA，CusanGzJL，CandasB.MarkeddeclineinserumconcentrationsofadrenalC19sexsteroidprecursorsandconjugatedandrogenmetabolitesduringaging.JClinEndocrinolMetab.1997,28(8)23862402[4]HoistD，GrimaldiPA.Newfactorsintheregulationofadiposedifferentiationandmetabolism.Curr0pinLipidol.2002，13:241-245[5]GreenbergAS,McDanielMI.Identifyingthelinksbetweenobesity,insulinresistanceandbeta-cellfunction:Potentialroleofadipcyte-derivedcytokinesinthepathogenesistype2diabetes.EurJClinInvest.2002，13:24-34[6]大西利夫等.雌激素缺乏和骨代謝[J]日本醫(yī)學(xué)介紹.1986(6):272[7]MeldrumDR，DavidsonBJ,TatarynIV,JuddHL.Changesincirculatingsteroidswithaginginpostmenopausalwomen.ObstetGynecol.1981,57:624[8]McTernanPG,AnwarA，EggoMC,etal.GenderdifferencesintheregulationofP450aromataseexpressionandactivityinhumanadiposetissue,IntJObesRelatMetabDisord.2000，2(7):875-878[9]WingRR，MatthewsKA,KullerLH,etal.WeightGainattheTimeofMenopause.ArchInternMed.1991,151:97[10]CareyDG,JenkinsAB,CampellLV,etal.Abdominalfatandinsulinresistanceinnormalandoverweightwomen:directmeasuresrevealastrongrelationshipinsubjectsatbothlowandhighriskofNIDDM[J].Diabetes.1996,45:633-638[ll]魯梅芳,袁鷹,等.絕經(jīng)期后女性腹部脂肪組織芳香化酶mRNA表達(dá)的研究[J]天津醫(yī)藥.2004'10(10):610-612[12]WarmingL...AmJ.在健康絕經(jīng)婦女中內(nèi)臟脂肪對子宮內(nèi)膜厚度和骨質(zhì)比外周脂肪更重要[J].ObstetGynecol.2003,188(2):349-353[13]朱曉暉,王軍，等.雌激素干預(yù)影響腹腔脂肪積聚的實驗研究[J].中國臨床藥理學(xué)與治療.2003,8(6):669—672[14]WittemanJC,GrobbeeDE，KokFJ，etal.Increasedriskofatherosclerosisinwomenafterthemenopause[J].BrMedJ1989,298:642-644[15]BelangerC,Uiu-TheV，D叩ontP，etal.Adiposetissueintracrinology:potentialimportanceoflocalandrogen/estrogenmetabolismintheregulationofadiposity[J].HormMetabRes2002，34:737—745[16]劉漪，等.長期激素替代治療對絕經(jīng)后婦女身體成分和體脂分布的影響[J].G.Perron,新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報.1999,22(1):9-10[17]HaarboJ,MarslewU,GotfredsenA，etal.Postmenopausalhormonereplacementtherapypreventscentraldistributionofbodyfotaftermenopause.Metabolism.1991'40(12):132-133[18]GreenH，Kehinde0.Spontaneousheritablechangesleadingtoincreasedadipocyteconversionin3T3cells[J].Cell.1976，7(1):105-113[19]LongcopeC,PrattJH,SchneiderSH，etal.Aroraatizationofandrogensbymuscleandadiposetissueinvivo.JClinEndocrinolMetab.1978:46:146[20]CarolineJ.Speed,EvanR.InhibitionofAromataseTranscriptionViaPromoterIIbyShortHeterodimerPartnerinHumanPreadipocytesAgnesKovacic.MolecularEndocrinology18(1):252-259[21]JianfengZhou,BilginGurates.MalignantBreastEpithelialCellsStimulateAromataseExpressionviaPromoterIIinHumanAdiposeFibroblastsCancerResearch.2001March1,61,2328-2334[22]ClyneDC,SpeedCJ,ZhouJ，etal.Liverreceptorhomologue-l(LRH-1)regulatesexpressionofaromataseinpreadipocytes[J].J"BioChem,2002,277(23):20591-20597[23]李儀奎.中藥血清藥理學(xué)實驗方法的若干問題[J].中藥新藥與臨床藥理。1999,10(2):95.權(quán)利要求1、含有下述重量配比的原料制備而成的藥物組合物在制備延緩陰道衰萎的藥物中的用途熟地18-30份、山茱萸9-12份、山藥8-16份、枸杞子9-12份、菟絲子8-16份、鹿角膠8-16份。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述的藥物是增加陰道血供的藥物。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的藥物是增強(qiáng)性腺外組織芳香化酶活性的藥物。4、根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的用途，其特征在于所述的藥物是預(yù)防或/和治療老年性陰道炎的藥物。5、根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的用途，其特征在于所述的老年性陰道炎，其患者為正常體重或低于正常體重的患者。6、根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述的用途，其特征在于所述藥物組合物是由下述重量配比的原料制備而成的藥劑熟地24份、山茱萸9-12份、山藥12份、枸杞子9-12份、菟絲子12份、鹿角膠12份。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于所述的原料中還含有川牛膝9份、龜板膠12份。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于所述的藥物組合物是由下述重量配比的原料制備而成熟地24份、山茱萸12份、山藥12份、枸杞子12份、菟絲子12份、鹿角膠12份、川牛膝9份、龜板膠12份。9、根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于所述的原料中還含有杜仲12份、肉桂6份、當(dāng)歸9份、制附子6份。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于所述的藥物組合物是由下述重量配比的原料制備而成熟地24份、山茱萸9份、山藥12份、枸杞子9份、菟絲子12份、鹿角膠12份、杜仲12份、肉桂6份、當(dāng)歸9份、制附子6份。11、根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于所述的藥劑為丸劑、膠囊劑、片劑、口服液。全文摘要本發(fā)明提供了一種含有下述重量配比的原料制備而成的藥物組合物在制備延緩陰道衰萎的藥物中的用途熟地18-30份、山茱萸9-12份、山藥8-16份、枸杞子9-12份、菟絲子8-16份、鹿角膠8-16份。所述的藥物是增強(qiáng)性腺外組織芳香化酶的活性的藥物及增加陰道血供的藥物。所述的藥物預(yù)防或/和治療老年性陰道炎的藥物。本發(fā)明藥物在特定的診斷標(biāo)準(zhǔn)下，藥效明確。在延緩陰道衰萎方面發(fā)揮了相同的功效，且原料少、來源廣泛，原料的選擇能有效的節(jié)約成本，長期服用對血清雌激素水平無影響，對子宮內(nèi)膜無增殖作用，具有安全性。為臨床治療老年性陰道炎，尤其是預(yù)防老年性陰道炎或預(yù)防老年性陰道炎復(fù)發(fā)提供了新的選擇。文檔編號A61K36/88GK101214338SQ200810000078公開日2008年7月9日申請日期2008年1月4日優(yōu)先權(quán)日2007年1月5日發(fā)明者翔胡,華陸,黃曉玲申請人:陸華;成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院