專利名稱：扎來(lái)普隆的純化方法和晶形的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗焦慮、抗癲癇、鎮(zhèn)靜、催眠和骨骼肌肉松弛的藥物扎來(lái)普隆。更具體地講，本發(fā)明涉及扎來(lái)普隆的后期處理以及其特殊晶形，通過(guò)調(diào)節(jié)后期處理很容易獲得所述晶形。本發(fā)明進(jìn)一步涉及扎來(lái)普隆的位置異構(gòu)體N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺(4)。本發(fā)明還涉及用于分析和測(cè)定扎來(lái)普隆的HPLC方法。
背景技術(shù)：
扎來(lái)普隆具有抗焦慮、抗癲癇、鎮(zhèn)靜以及催眠特性。美國(guó)食品和藥品管理局已經(jīng)批準(zhǔn)其用于短期治療失眠癥，并且可以獲得商品名為Sonata_的處方藥。扎來(lái)普隆的分子結(jié)構(gòu)已知，可以如下表示 扎來(lái)普隆的IUPAC命名為N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基)苯基]-N-乙基乙酰胺。
美國(guó)專利4,626,538(“′538號(hào)專利”)提供制備扎來(lái)普隆和結(jié)構(gòu)相關(guān)性化合物的一般制備方法。在′538號(hào)專利的實(shí)施例2中，N-(3-乙?；交?乙酰胺1與二甲基甲酰胺二甲基縮醛反應(yīng)生成N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙酰胺2。在′538號(hào)專利的實(shí)施例7中，乙酰胺2的伯酰胺用乙基碘烷基化生成N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺3。扎來(lái)普隆在實(shí)施例14中如下制備使乙基乙酰胺3和3-氨基-4-氰基吡唑4在回流下冰醋酸中稠合。如下逐步處理扎來(lái)普隆將非揮發(fā)分在飽和碳酸氫鈉和二氯甲烷間分配，干燥有機(jī)相，讓有機(jī)相通過(guò)吸附劑(硅酸鎂)，將己烷加入有機(jī)相，冷卻有機(jī)相，收集有機(jī)相中形成的固體。報(bào)告該產(chǎn)物的熔點(diǎn)為186-187℃。整個(gè)合成方法在流程1中描述?！?38號(hào)專利沒(méi)指出任何在反應(yīng)中生成的副產(chǎn)物或者解釋如果有副產(chǎn)物生成，如何將其與扎來(lái)普隆分離。
流程1 (a)二甲基甲酰胺二甲基縮醛，refl.；(b)乙基碘，氫化鈉，DMF；(c)冰醋酸，refl。
美國(guó)專利5,714,607(“′607號(hào)專利”)介紹了一種制備扎來(lái)普隆的改進(jìn)方法。根據(jù)′607號(hào)專利，如果在′538號(hào)專利方法的最后步驟以約10％至約85％(v/v)將水加入醋酸溶劑，則扎來(lái)普隆可以有更高的產(chǎn)率和純度。如′607號(hào)專利所指出的，改進(jìn)條件縮短了反應(yīng)時(shí)間約3-3.5h至約1-3.5h。根據(jù)′607號(hào)專利的表1，所得的扎來(lái)普隆產(chǎn)率為81.7-90％，HPLC檢測(cè)純度為98.77-99.4％。在所有實(shí)施例中，扎來(lái)普隆通過(guò)從反應(yīng)混合物中結(jié)晶獲得，所述反應(yīng)混合物為水和醋酸的混合物。′538號(hào)專利沒(méi)指出該方法的副產(chǎn)物或者解釋如果有副產(chǎn)物生成，如何將其與扎來(lái)普隆分離。
共同轉(zhuǎn)讓的共同未決美國(guó)專利申請(qǐng)10/170,673公開(kāi)了如下制備扎來(lái)普隆的方法在包含水和水混溶性有機(jī)化合物的反應(yīng)介質(zhì)中，使N-乙基乙酰胺3和吡唑4或其酸加成鹽稠合。
2002年6月12日申請(qǐng)的美國(guó)專利申請(qǐng)10/170,673通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容結(jié)合到本文中。
為了獲得市場(chǎng)許可的新藥物，制造商必須遞交符合規(guī)則的有力證據(jù)以證實(shí)產(chǎn)品用于人體是可接受的。除其它項(xiàng)目外，所遞交證據(jù)還必須包括顯示產(chǎn)物雜質(zhì)特征的分析數(shù)據(jù)，以證明沒(méi)有雜質(zhì)或存在的雜質(zhì)量可忽略不計(jì)。對(duì)于這樣的證明，需要能夠檢測(cè)雜質(zhì)的分析方法以及其鑒定和測(cè)定的參考標(biāo)準(zhǔn)。還需要這樣的分析方法的參考標(biāo)準(zhǔn)。
美國(guó)食品和藥品管理局藥物評(píng)估和研究中心(CDER)已經(jīng)頒布了推薦指導(dǎo)原則新藥和一般藥物申請(qǐng)者應(yīng)確定活性成分中有機(jī)雜質(zhì)為0.1％或0.1％以上?！癎uideline on Impurities in New DrugSubstances”61 Fed.Reg.371(1996)，“Guidance for Industry ANDAsImpurities in Drug Substances”64 Fed.Reg.67917(1999)。除非雜質(zhì)為人代謝產(chǎn)物、已經(jīng)測(cè)試表明是安全的或?yàn)榕R床試驗(yàn)證明是安全的成分，否則CDER進(jìn)一步推薦藥物申請(qǐng)者減少活性成分中雜質(zhì)量低于0.1％。因此，需要分離藥物中雜質(zhì)以便研究它們的藥理學(xué)和毒物學(xué)特征。
各種晶型(包括多晶型和假多晶型)為具有相同結(jié)構(gòu)式的獨(dú)特固體，但是由于晶胞中分子構(gòu)象和/或取向不同而具有不同的物理性質(zhì)。一種在不同晶型之間不相同的物理性質(zhì)是溶解性，它可能影響到藥物的生物利用度。可以在實(shí)驗(yàn)室用粉末X-射線衍射光譜法鑒定化合物的晶型。對(duì)于晶型(即多晶型和假多晶型)以及多晶型的藥學(xué)應(yīng)用的一般性綜述參見(jiàn)G.M.Wall，Pharm Manuf.3，33(1986)；J.K.Haleblian和W.McCrone，J.Pharm.Sci.，58，911(1969)；J.K.Haleblian，J.Pharm.Sci.，64，1269(1975)。
發(fā)現(xiàn)藥用化合物的新晶型提供了新的改善藥品作用特征的機(jī)會(huì)。此發(fā)現(xiàn)擴(kuò)大了物質(zhì)的性能，配方研制科學(xué)家可以設(shè)計(jì)例如藥物的具有目標(biāo)釋放特征或其它特性的藥用劑型。本發(fā)明提供扎來(lái)普隆的四種新晶型。
附圖簡(jiǎn)介

圖1為扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體的13CNMR譜。
圖2為扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體的質(zhì)譜。
圖3為扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體的1H MR譜。
圖4為扎來(lái)普隆晶型I的粉末X-射線衍射圖。
圖5為扎來(lái)普隆晶型II的粉末X-射線衍射圖。
圖6為扎來(lái)普隆晶型III的粉末X-射線衍射圖。
圖7為扎來(lái)普隆晶型IV的粉末X-射線衍射圖。
圖8為扎來(lái)普隆晶型V的粉末X-射線衍射圖。
圖9為用本發(fā)明方法得到的扎來(lái)普隆的HPLC色譜圖。
圖10為用本發(fā)明方法得到的位置異構(gòu)體的HPLC色譜圖。
發(fā)明概述美國(guó)專利申請(qǐng)10/170,673中公開(kāi)的反應(yīng)縮合步驟生成的次要副產(chǎn)物為具有下式結(jié)構(gòu)的N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺5
此化合物在以前的化學(xué)文獻(xiàn)中是未知的，如下文闡述，它可以用作分析扎來(lái)普隆的參考標(biāo)準(zhǔn)。化合物5是扎來(lái)普隆的位置異構(gòu)體，與扎來(lái)普隆的區(qū)別在于N-乙基-N-乙?；被交诔砗想s環(huán)環(huán)系上的位置。生成位置異構(gòu)體5可以解釋為因?yàn)?1)氰基吡唑4的3-氨基的1，2加成反應(yīng)并脫水以及所述吡唑的2-氮原子與共軛C＝C雙鍵的Michael加成反應(yīng)，或者(2)所述吡唑的2-氮原子的Michael加成反應(yīng)以及3-氨基與酮基環(huán)化。無(wú)論何種機(jī)制的位置異構(gòu)體5構(gòu)型，顯而易見(jiàn)的是它是在商業(yè)制備扎來(lái)普隆中不需要的次要副產(chǎn)物。
在專利申請(qǐng)10/170,673說(shuō)明的條件下，位置異構(gòu)體5形成的量通常為相對(duì)于所需異構(gòu)體的約0.2-0.5％。
因此在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺，它被稱為扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體。
另一方面，本發(fā)明涉及制備N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺的方法，該方法包括以下步驟在水與至少一種沒(méi)有羧酸基團(tuán)的水混溶性有機(jī)化合物的液體反應(yīng)介質(zhì)中，使N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺、3-氨基-4-氰基吡唑和強(qiáng)酸的混合物反應(yīng)，中和反應(yīng)混合物得到沉淀粗制產(chǎn)物，然后用氯仿和丙酮混合物作為洗脫劑通過(guò)硅膠柱色譜法將N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺與粗制產(chǎn)物的其它組分分離，其中強(qiáng)酸摩爾量至少為N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺摩爾量或3-氨基-4-氰基吡唑摩爾量的10倍，后兩者中任意一個(gè)過(guò)量，或者如果后兩者大約等摩爾量則強(qiáng)酸摩爾量為任何一個(gè)摩爾量的至少10倍。
另一方面，本發(fā)明涉及制備N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺的方法，該方法包括以下步驟在水與至少一種沒(méi)有羧酸基團(tuán)的水混溶性有機(jī)化合物的液體反應(yīng)介質(zhì)中，使N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺、3-氨基-4氰基吡唑和強(qiáng)酸的混合物反應(yīng)，中和反應(yīng)混合物，從而沉淀出粗制產(chǎn)物，然后用氯仿和丙酮混合物作為洗脫劑通過(guò)硅膠柱色譜法將N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺與粗制產(chǎn)物的其它組分分離，其中強(qiáng)酸摩爾量為N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺摩爾量或3-氨基-4-氰基吡唑摩爾量的至少20倍，后兩者無(wú)論哪一種過(guò)量；或者如果后兩者使用量為大約等摩爾量，則強(qiáng)酸摩爾量為任何一種的摩爾量的至少20倍。
因?yàn)樵鷣?lái)普隆和位置異構(gòu)體5的結(jié)構(gòu)類似，所以很難將它們分離。藥學(xué)領(lǐng)域需要一種純化含其位置異構(gòu)體的扎來(lái)普隆混合物的方法。本發(fā)明滿足了這種需要，本發(fā)明需要有效分離所述兩種化合物的沉淀方法。應(yīng)當(dāng)理解的是本發(fā)明純化扎來(lái)普隆的方法也有效減少或消除許多其它雜質(zhì)。
因此，另一方面，本發(fā)明提供一種純化可能混有扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體和其它雜質(zhì)的扎來(lái)普隆(例如粗制扎來(lái)普隆)的方法，該方法為從用任何來(lái)源的粗制扎來(lái)普隆形成的溶液中沉淀出富集扎來(lái)普隆的固體。所述溶液可以如下形成在高溫下將任何來(lái)源的粗制扎來(lái)普隆溶于有機(jī)溶劑。通過(guò)冷卻高溫溶液、用反溶劑或者用反溶劑并冷卻可以使純化的扎來(lái)普隆從所述溶液中沉淀出來(lái)。在所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，在高溫下將反溶劑加入所述溶液中。通過(guò)所述純化方法，可以獲得基本沒(méi)有位置異構(gòu)體的扎來(lái)普隆。
另一方面，本發(fā)明提供一種純化可能混有扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體和其它雜質(zhì)的扎來(lái)普隆的方法，該方法為從用任何來(lái)源的粗制扎來(lái)普隆形成的溶液中沉淀出富集扎來(lái)普隆的固體。所述溶液可以通過(guò)將粗制扎來(lái)普隆溶于高溫有機(jī)溶劑形成，其中所述有機(jī)溶劑選自以下物質(zhì)醇、酮、醚、羧酸、羧酸酯、腈、芳香烴、鹵化烴、它們的任何混合物以及一種或多種上述溶劑與水的混合物。通過(guò)冷卻高溫溶液、用反溶劑或者用反溶劑并冷卻可以使純化的扎來(lái)普隆從所述溶液中沉淀出來(lái)。在所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，在高溫下將反溶劑加入所述溶液中。通過(guò)所述純化方法，可以獲得基本沒(méi)有位置異構(gòu)體和其它雜質(zhì)的扎來(lái)普隆。
在又一方面，本發(fā)明提供一種純化可能混有扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體和其它雜質(zhì)的扎來(lái)普隆的方法，該方法為從用任何來(lái)源的粗制扎來(lái)普隆形成的溶液中沉淀出富集扎來(lái)普隆的固體。所述溶液可以通過(guò)將粗制扎來(lái)普隆溶于高溫有機(jī)溶劑形成，其中所述有機(jī)溶劑選自以下化合物甲醇、乙醇、2-丙醇、丙酮、甲基乙基酮、甲基異丁基酮、四氫呋喃、乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸、丙酸、乙酸乙酯、乙酸異丁酯、乙腈、丙烯腈、苯、甲苯、二甲苯、二氯甲烷和氯仿。通過(guò)冷卻高溫溶液、用反溶劑或者用反溶劑并冷卻可以使純化的扎來(lái)普隆從所述溶液中沉淀出來(lái)。在所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，在高溫下將反溶劑加入所述溶液中。通過(guò)所述純化方法，可以獲得基本沒(méi)有位置異構(gòu)體和其它雜質(zhì)的扎來(lái)普隆。
另一方面，本發(fā)明提供一種純化可能混有扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體和其它雜質(zhì)的扎來(lái)普隆的方法，該方法為從粗制扎來(lái)普隆形成的溶液中沉淀出富集扎來(lái)普隆的固體。所述溶液可以通過(guò)將粗制扎來(lái)普隆溶于高溫有機(jī)溶劑形成，并且其濃度為約100mM至約1M。通過(guò)冷卻高溫溶液、用反溶劑或者用反溶劑并冷卻可以使純化的扎來(lái)普隆從所述溶液中沉淀出來(lái)。
由此，另一方面，本發(fā)明提供一種純化可能混有扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體和其它雜質(zhì)的扎來(lái)普隆的方法，該方法為從用任何來(lái)源的粗制扎來(lái)普隆形成的溶液中沉淀出富集扎來(lái)普隆的固體。所述溶液可以通過(guò)將粗制扎來(lái)普隆溶于高溫有機(jī)溶劑(尤其是乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、四氫呋喃、乙腈或丙酮)形成。反溶劑(尤其是水)在所述溶液為高溫時(shí)加入。通過(guò)冷卻高溫溶液、用反溶劑或者用反溶劑并冷卻可以使純化的扎來(lái)普隆從所述溶液中沉淀出來(lái)。在所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，在高溫下將反溶劑加入所述溶液中。
在又一方面，本發(fā)明提供一種純化可能混有扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體和其它雜質(zhì)的扎來(lái)普隆的方法，該方法為從用任何來(lái)源的粗制扎來(lái)普隆形成的溶液中沉淀出富集扎來(lái)普隆的固體。所述溶液可以通過(guò)將粗制扎來(lái)普隆溶于高溫有機(jī)溶劑形成。通過(guò)冷卻高溫溶液、用反溶劑或者用反溶劑并冷卻可以使純化的扎來(lái)普隆從所述溶液中沉淀出來(lái)。在所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，在高溫下將反溶劑加入所述溶液中。通過(guò)所述提純方法，所得扎來(lái)普隆中含有的扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體與本方法中用作初始原料的粗制扎來(lái)普隆相比減少至少約50％以及減少達(dá)到約70％。
另一方面，本發(fā)明提供一種純化可能混有扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體和其它雜質(zhì)的扎來(lái)普隆的方法，該方法為從用任何來(lái)源的粗制扎來(lái)普隆形成的溶液中沉淀出富集扎來(lái)普隆的固體。所述溶液可以通過(guò)在高溫下將粗制扎來(lái)普隆溶于選自乙腈和乙醇的有機(jī)溶劑而形成。反溶劑在所述溶液為高溫時(shí)加入。乙腈為溶劑時(shí)，則水為反溶劑。乙醇為溶劑時(shí)，則己烷為反溶劑。通過(guò)冷卻高溫溶液可以使純化的扎來(lái)普隆從所述溶液中沉淀出來(lái)。
另一方面，本發(fā)明涉及一種純化扎來(lái)普隆的方法，該方法包括以下步驟形成包含扎來(lái)普隆的固體的乙醇溶液；用水作反溶劑，沉淀出相對(duì)用于形成所述溶液的含扎來(lái)普隆的固體的富集扎來(lái)普隆的固體；分離富集扎來(lái)普隆的固體沉淀；形成前一步驟的富集扎來(lái)普隆的固體沉淀的乙醇溶液；在沒(méi)有反溶劑輔助下，從前一步驟的溶液中沉淀出進(jìn)一步富集扎來(lái)普隆的固體；然后分離前一步驟中進(jìn)一步富集扎來(lái)普隆的固體。
對(duì)用所述純化方法獲得的基本純凈的扎來(lái)普隆表征，發(fā)現(xiàn)某些方法的實(shí)施方案產(chǎn)生扎來(lái)普隆的新晶型，這樣本發(fā)明進(jìn)一步提供扎來(lái)普隆的新晶型，用適當(dāng)選擇的溶劑、反溶劑和/或其它條件通過(guò)所述純化方法逐步操作很容易獲得這些新晶型。
由此，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供扎來(lái)普隆晶型II，其特征為在粉末X-射線衍射圖中在7.9、10.7、12.5、14.9、16.9、17.9、21.3、24.0、25.2、25.9、27.0和27.5±0.2度2θ有衍射峰。
另一方面，本發(fā)明提供扎來(lái)普隆晶型III，其特征為在粉末X-射線衍射圖中在154、18.1、21.1、26.8和27.5±0.2度2θ有衍射峰。
另一方面，本發(fā)明提供扎來(lái)普隆晶型III，其特征為在粉末X-射線衍射圖中在15.4、18.1、21.1、26.8和27.5±0.2度2θ有衍射峰以及進(jìn)一步特征為在11.6、17.6、19.0、20.0和22.2度2θ有X-射線衍射線峰(反射)。
另一方面，本發(fā)明提供扎來(lái)普隆晶型IV，其特征為在粉末X-射線衍射圖中在8.1、14.5、17.3、21.3±0.2度2θ有衍射峰。
另一方面，本發(fā)明提供扎來(lái)普隆晶型IV，其特征為在粉末X-射線衍射圖中在8.1、14.5、17.3、21.3±0.2度2θ有衍射峰以及進(jìn)一步特征為在10.6、11.1、14.1、15.6、18.0、18.2、20.1、20.3、24.3、25.0、25.9、26.7、27.9和29.5±0.2度2θ有X-射線衍射峰。
另一方面，本發(fā)明涉及扎來(lái)普隆晶型V，其特征為在8.0、14.8和17.0±0.2度2θ有X-射線衍射峰。
另一方面，本發(fā)明涉及扎來(lái)普隆晶型V，其特征為在8.0、14.8和17.0±0.2度2θ有X-射線衍射峰以及進(jìn)一步特征為在10.7、11.0、12.5、15.4、16.5、17.7、21.3、25.7和26.5±0.2度2θ有X-射線衍射峰。
另一方面，本發(fā)明提供一種制備扎來(lái)普隆晶型II的方法，該方法包括以下步驟用水混溶性或有相當(dāng)水溶性的有機(jī)溶劑形成扎來(lái)普隆溶液；使所述溶液與水接觸引起扎來(lái)普隆結(jié)晶；然后從有機(jī)溶劑和水中分離扎出來(lái)普隆晶型II。
另一方面，本發(fā)明提供一種制備扎來(lái)普隆晶型II的方法，該方法包括以下步驟用水混溶性或有相當(dāng)水溶性的有機(jī)溶劑形成扎來(lái)普隆溶液；使所述溶液與其三倍體積的水接觸并任選冷卻至約0℃，引起扎來(lái)普隆結(jié)晶；然后從有機(jī)溶劑和水中分離出扎來(lái)普隆晶型II。
另一方面，本發(fā)明提供一種制備扎來(lái)普隆晶型III的方法，該方法包括以下步驟形成扎來(lái)普隆的乙腈溶液；將水加入高溫下的所述溶液；冷卻溶液使其沉淀出扎來(lái)普隆；然后從乙腈和水中分離出扎來(lái)普隆晶型III。
另一方面，本發(fā)明提供一種制備扎來(lái)普隆晶型IV的方法，該方法包括以下步驟用選自2-丙醇和四氫呋喃與水的混合物的溶劑體系形成扎來(lái)普隆溶液；從所述溶液中沉淀出扎來(lái)普隆；然后溶劑體系中分離出扎來(lái)普隆晶型IV。
本發(fā)明進(jìn)一步提供制備的扎來(lái)普隆已知晶型的新方法。
由此，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種制備扎來(lái)普隆晶型I的方法，該方法包括以下步驟在高溫液體中形成扎來(lái)普隆的懸浮液，所述液體可以為沸水或高沸點(diǎn)烴(僅舉兩個(gè)例子)；冷卻懸浮液；然后從所述液體中分離出扎來(lái)普隆晶型I。
另一方面，本發(fā)明提供提供一種制備扎來(lái)普隆晶型I的方法，該方法包括以下步驟熔化扎來(lái)普?。焕鋮s固化扎來(lái)普?。谎心ス袒脑鷣?lái)普隆獲得扎來(lái)普隆晶型I。
在又一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種制備扎來(lái)普隆晶型I的方法，該方法包括以下步驟加熱使扎來(lái)普隆溶于有機(jī)溶劑；在所得溶液中任選加入非極性有機(jī)反溶劑；冷卻引起扎來(lái)普隆沉淀；然后分離出扎來(lái)普隆晶型I。
在又一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種制備扎來(lái)普隆晶型I的方法，該方法包括以下步驟加熱使扎來(lái)普隆溶于有機(jī)溶劑；在所述溶液中加入非極性有機(jī)反溶劑；冷卻引起扎來(lái)普隆沉淀；然后分離出扎來(lái)普隆晶型I。
本發(fā)明還提供包含本文所述扎來(lái)普隆的任何晶型(單獨(dú)或任何組合)的藥用組合物，使用任何這些藥用組合物治療例如失眠癥的方法。
另一方面，本發(fā)明提供分析和檢測(cè)扎來(lái)普隆的HPLC方法。
另一方面，本發(fā)明提供檢測(cè)扎來(lái)普隆的HPLC方法，該方法包括以下步驟將扎來(lái)普隆樣品溶于乙腈∶水(1∶1)稀釋劑；注射樣品溶液(約10μ1)到100mm×4mm，3μm RP-18 HPLC柱；使用乙腈(28vol-％)和甲酸銨緩沖液(72vol-％，0.005M，pH＝4)的混合物作為洗脫劑以1ml/min從以上柱洗脫樣品；在245nm波長(zhǎng)用UV檢測(cè)器檢測(cè)相關(guān)樣品的扎來(lái)普隆含量。
優(yōu)選實(shí)施方案的說(shuō)明本發(fā)明提供一種尤其適合提高可能混有扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體和其它雜質(zhì)的粗制扎來(lái)普隆的純度的方法。本發(fā)明還提供一種用于富集所述混合物中位置異構(gòu)體(5)的方法，因此在本發(fā)明又一實(shí)施方案中促進(jìn)位置異構(gòu)體的分離。
可用于多個(gè)本發(fā)明實(shí)施方案中的粗制扎來(lái)普隆可以提供為濃縮的未純化或部分純化的化學(xué)合成終產(chǎn)物，例如以下文獻(xiàn)中的終產(chǎn)物美國(guó)專利4,626,538，5,714,607和美國(guó)專利申請(qǐng)10/170,673，或來(lái)自任何來(lái)源。
化合物N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺(5)為扎來(lái)普隆的位置異構(gòu)體，發(fā)現(xiàn)它是用3-氨基-4-氰基吡唑和N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺作初始原料合成扎來(lái)普隆中的主要雜質(zhì)。在美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)60/297,635公開(kāi)的反應(yīng)條件下，粗制產(chǎn)物中位置異構(gòu)體雜質(zhì)含量為約0.2-0.5％(HPLC)。雜質(zhì)含量很大程度上取決于反應(yīng)條件，如下所述，可以控制反應(yīng)條件以最大化生成的位置異構(gòu)體含量，由此促進(jìn)其分離和表征。
由此，在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種制備新N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺(5)的方法，該方法包括在酸的水溶液或者酸的水混溶性有機(jī)溶劑溶液存在下，用3-氨基-4-氰基吡唑和N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺開(kāi)始反應(yīng)。在合成中使用高濃度強(qiáng)酸可以使位置異構(gòu)體(5)的產(chǎn)量增加達(dá)5％(HPLC)。這促進(jìn)了此新化合物的分離和表征。
以上反應(yīng)可以在20-30℃或可達(dá)水沸點(diǎn)的更高溫度下進(jìn)行。溫度優(yōu)選為20-30℃。為極性質(zhì)子溶劑(例如乙酸、甲醇、乙醇、異丙醇)或極性質(zhì)子惰性溶劑(例如乙腈、四氫呋喃、二甲基甲酰胺)的水混溶性有機(jī)溶劑都可以使用。酸可以使用無(wú)機(jī)酸(例如鹽酸、硫酸、磷酸)和有機(jī)酸(例如乙酸、三氟乙酸、甲磺酸)，優(yōu)選酸為鹽酸。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述反應(yīng)在鹽酸存在下在水中于約25℃進(jìn)行。可以通過(guò)蒸發(fā)、過(guò)濾、萃取或上述方法的任何組合方式進(jìn)行扎來(lái)普隆和其位置異構(gòu)體(5)的混合物的分離。
在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，在反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物用水稀釋，過(guò)濾移出扎來(lái)普隆沉淀。然后將濾液中和以沉淀出扎來(lái)普隆及其位置異構(gòu)體5的混合物?？梢杂盟烊苄杂袡C(jī)溶劑(例如乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿等)萃取水相進(jìn)一步收獲所述混合物。
可以用色譜法分離化合物5。可使用柱色譜法、制備型TLC或HPLC。優(yōu)選柱色譜法?？梢允褂霉枘z或氧化鋁作為柱填料。優(yōu)選的柱填料為硅膠?？梢允褂酶鞣N有機(jī)溶劑或它們的混合物作為洗脫劑。優(yōu)選二氯甲烷和丙酮的混合物作為柱洗脫劑。特別優(yōu)選3∶1(v∶v)二氯甲烷∶丙酮的混合物作為洗脫劑。
表征分離出的5，它的結(jié)構(gòu)通過(guò)1H-NMR和13C-NMR光譜以及質(zhì)譜分析證實(shí)。
圖1顯示5的13C NMR譜。圖2為位置異構(gòu)體5的低分辨率EI質(zhì)譜。圖3為位置異構(gòu)體5的1H NMR。以下給出1H和13C NMR峰的分配。
表11H NMR共振分配
表213C共振分配
根據(jù)本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案，扎來(lái)普隆通過(guò)在控制條件下從溶液中析出提純，所述溶液用可能包含扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體的粗制扎來(lái)普隆制備。可以將不純的粗制扎來(lái)普隆重復(fù)進(jìn)行一次所述過(guò)程以獲得更高純度的扎來(lái)普隆，或者可以反復(fù)進(jìn)行上述過(guò)程以獲得可達(dá)到的任何需要純度的扎來(lái)普隆，包括基本沒(méi)有位置異構(gòu)體的扎來(lái)普隆。
本發(fā)明的純化方法中，富集扎來(lái)普隆的固體從包含有機(jī)溶劑的溶液中析出。有機(jī)溶劑包括醇，例如甲醇、乙醇和2-丙醇；酮，例如丙酮，甲基乙基酮和甲基異丁基酮；醚，例如四氫呋喃(THF)、乙醚和甲基叔丁基醚；羧酸，例如乙酸和丙酸；羧酸酯，例如乙酸乙酯和乙酸異丁酯；腈，例如乙腈和丙烯腈；芳香烴，例如苯、甲苯和二甲苯；鹵化烴，例如二氯甲烷和氯仿；以及它們的混合物。任選水可以與有機(jī)溶劑混合。應(yīng)當(dāng)理解的是有機(jī)溶劑根據(jù)其凝固點(diǎn)和進(jìn)行上述處理時(shí)的溫度來(lái)選擇以使溶劑不凝固。通常，優(yōu)選的有機(jī)溶劑為乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、四氫呋喃(THF)、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲苯和二氯甲烷。
溶液中扎來(lái)普隆的最佳濃度通常為約100mM至約1M，更優(yōu)選約100mM至約700mM。有機(jī)溶劑可以加熱至高溫以獲得粗制扎來(lái)普隆混合物的均勻溶液。本文使用的術(shù)語(yǔ)“高溫”是指溫度高于約25℃。為了方便起見(jiàn)使用在所需溫度沸騰的有機(jī)溶劑。從在形成所述溶液的溫度的飽和扎來(lái)普隆溶液分離扎來(lái)普隆和位置異構(gòu)體5與從不飽和溶液分離的效果相當(dāng)。優(yōu)選形成飽和溶液。
在粗制扎來(lái)普隆完全溶劑后，可以通過(guò)冷卻引起富集扎來(lái)普隆的固體從溶液中析出。冷卻既包括放置外部散熱器的主動(dòng)冷卻，這樣在溶液和冷卻器間產(chǎn)生熱交換，又包括中止主動(dòng)加熱的被動(dòng)冷卻。優(yōu)選溶液冷卻至低溫，更優(yōu)選至約5-10℃。也可以加入反溶劑并任選冷卻引起沉淀。本文使用的術(shù)語(yǔ)“低溫”是指溫度低于約20℃。
冷卻引起相對(duì)粗制扎來(lái)普隆/位置異構(gòu)體混合物富集扎來(lái)普隆的固體析出。
在富集扎來(lái)普隆的固體從溶液中析出后，將固體從已沒(méi)有扎來(lái)普隆的溶液中分離獲得純凈的扎來(lái)普隆?？梢酝ㄟ^(guò)將固體從液體移出的任何常規(guī)技術(shù)實(shí)現(xiàn)分離，例如通過(guò)過(guò)濾或傾析。更進(jìn)一步，分離過(guò)程任選包括常規(guī)的固體洗滌和干燥，如同實(shí)施例的描述。
在純化過(guò)程的一個(gè)實(shí)施方案中，將反溶劑加入所述溶液中。本文使用的術(shù)語(yǔ)反溶劑是指扎來(lái)普隆在其中只有很小的溶解度并且在所述過(guò)程不會(huì)形成單獨(dú)液相的任何液體。優(yōu)選的反溶劑包括脂族烴和水，更優(yōu)選戊烷、己烷、庚烷、辛烷、石油醚和水，最優(yōu)選己烷和水。反溶劑與有機(jī)溶劑的比例優(yōu)選為約1∶1至約4∶1，更優(yōu)選約1∶1至約2∶1。
使用脂族烴反溶劑時(shí)，優(yōu)選的有機(jī)溶劑為乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、THF、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲苯和二氯甲烷。反溶劑為水時(shí)，優(yōu)選的有機(jī)溶劑為乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、THF、乙腈和丙酮。
使用反溶劑時(shí)，優(yōu)選在較低濃度范圍操作。準(zhǔn)備加入反溶劑時(shí)，扎來(lái)普隆在有機(jī)溶劑中的優(yōu)選濃度為約100mM至約400mM。反溶劑優(yōu)選在出現(xiàn)混濁或沉淀之前加入，更優(yōu)選在高溫時(shí)加入反溶劑。
反溶劑可以用于協(xié)助形成飽和或接近飽和溶液，而無(wú)需除去過(guò)量不溶固體。在有機(jī)溶劑中形成扎來(lái)普隆和位置異構(gòu)體的不飽和溶液。將反溶劑加入溶液直到扎來(lái)普隆開(kāi)始沉淀。然后升高溫度和/或加入額外有機(jī)溶劑直到扎來(lái)普隆沉淀再次溶于溶液，通過(guò)扎來(lái)普隆從如此形成的溶液中析出繼續(xù)純化過(guò)程。
在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，重復(fù)一次純化過(guò)程可以減少粗制扎來(lái)普隆中位置異構(gòu)體含量的50％或50％以上，甚至70％或70％以上?？紤]到扎來(lái)普隆和位置異構(gòu)體5的結(jié)構(gòu)類似性，這樣的減少量是相當(dāng)有效的。重復(fù)一次純化過(guò)程可以降低位置異構(gòu)體的比例從占粗制扎來(lái)普隆的約0.2％至占富集扎來(lái)普隆固體的約0.03％，相當(dāng)于除去84％的位置異構(gòu)體?？梢苑磸?fù)重復(fù)純化過(guò)程從而進(jìn)一步減少位置異構(gòu)體的含量。
使用反溶劑能夠增加扎來(lái)普隆回收量，而不會(huì)大大縮小分離度。如實(shí)施例所證實(shí)，使用反溶劑并結(jié)合使用代表性有機(jī)溶劑均勻增加扎來(lái)普隆回收量。
通過(guò)發(fā)明純化過(guò)程，可以獲得位置異構(gòu)體含量少于0.033％的扎來(lái)普隆(根據(jù)本發(fā)明HPLC方法)。
因此，本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案提供純度至少約98.5％的扎來(lái)普隆，最優(yōu)選至少約99％。本文使用的純度百分?jǐn)?shù)是指本文說(shuō)述HPLC方法確定的面積純度百分?jǐn)?shù)。由此，純度99％的扎來(lái)普隆(99％純凈扎來(lái)普隆)是指扎來(lái)普隆的HPLC峰面積與所有HPLC峰面積之和的比例乘以100為99。
發(fā)現(xiàn)所述提純過(guò)程的某些實(shí)施方案產(chǎn)生扎來(lái)普隆的新晶型。純化過(guò)程的逐步操作可以用于從純凈或不純?cè)鷣?lái)普隆制備新的晶型。新的晶型也可以很容易通過(guò)任何其它技術(shù)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)獲得。
新晶型與可獲得的Sonate_扎來(lái)普隆的區(qū)別在于它們的X-射線衍射圖的特征。本文中規(guī)定Sonate_扎來(lái)普隆為晶型I。扎來(lái)普隆晶型I在其X-射線衍射圖(圖4)中在10.5、14.5、16.8、17.3、18.0(強(qiáng)峰)、19.0、20.1、21.3、24.4、25.9、26.7、29.4、30.7±0.2度2θ有特征峰。
扎來(lái)普隆晶型II可以使用冰水作為反溶劑以及水混溶性或基本水溶性有機(jī)溶劑通過(guò)提純過(guò)程的逐步操作制備。特別地，扎來(lái)普隆晶型II可以通過(guò)將扎來(lái)普隆溶于選自前述的基本水溶性或水混溶性有機(jī)溶劑制備。生產(chǎn)扎來(lái)普隆晶型II的優(yōu)選有機(jī)溶劑為乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、THF、乙腈和丙酮。扎來(lái)普隆晶型II可以在任何溫度沉淀，但是該溫度適合在室溫或高溫。為了最優(yōu)化扎來(lái)普隆回收量，優(yōu)選在高溫使扎來(lái)普隆在有機(jī)溶劑中飽和。然后將冰水加入混合物。有機(jī)溶劑和冰水的比例可以為約1∶2至約1∶5(v/v)，優(yōu)選為約1∶3(v/v)。盡管加入冰水將冷卻混合物，但是如果需要優(yōu)選進(jìn)一步將有機(jī)溶劑/水混合物冷卻至約5-10℃。在加入水以及冷卻混合物時(shí)應(yīng)該攪拌混合物。在優(yōu)選條件下，晶型II的結(jié)晶在約1小時(shí)或更少時(shí)間內(nèi)基本完成，于是可以分離，包括任選洗滌和干燥，獲得扎來(lái)普隆晶型II。
扎來(lái)普隆晶型II通過(guò)粉末X-射線衍射圖(圖5)表征，所述衍射圖在7.9(強(qiáng)峰)、10.7、12.5、14.9、16.9、17.9、21.3、24.0、25.2、25.9、27.0和27.5±0.2度2θ有特征峰。附圖中顯示的此PXRD圖以及其它PXRD圖是由以下儀器產(chǎn)生X’TRA型Scintag X-射線粉末衍射計(jì)，配備銅陽(yáng)極管和固態(tài)檢測(cè)器。在瑪瑙研缽中輕輕地充分研磨以減少優(yōu)選取向，從而制備樣品。注意到研磨制備的樣品沒(méi)有結(jié)晶度損失。將粉末樣品傾入樣品容器的圓形腔，用玻璃板壓制成光滑表面。從2到40°2θ以3°min-1連續(xù)掃描?？紤]報(bào)告的峰位置精確到±0.05°內(nèi)。X-射線結(jié)晶學(xué)領(lǐng)域熟練技術(shù)人員能夠理解不同儀器確定的峰位置可能變化達(dá)±1°。
扎來(lái)普隆晶型III可以通過(guò)如下制備將扎來(lái)普隆溶于回流下的乙腈，將水加入回流下的溶液，所加水量相對(duì)乙腈為約2∶1(v/v)至約4∶1(v/v)、優(yōu)選約3∶1(v/v)，然后在沒(méi)有攪拌下冷卻混合物至約5-10℃。
扎來(lái)普隆晶型III通過(guò)PXRD光譜表征，發(fā)現(xiàn)衍射圖(圖6)在15.4、18.1、19.0、21.1、26.8和27.5±0.2度2θ有特征峰。
扎來(lái)普隆晶型III可以進(jìn)一步被在11.6、17.6、19.0、20.0和22.2±0.2度2θ有X-射線衍射峰表征。
規(guī)定為晶型IV的扎來(lái)普隆新晶型可以如下制備在回流下的水和THF的1∶1(v/v)混合物中形成扎來(lái)普隆溶液，然后在沒(méi)有攪拌下冷卻溶液至室溫。分離析出的固體獲得扎來(lái)普隆晶型IV。晶型IV也可以如下制備在回流下形成扎來(lái)普隆的2-丙醇溶液，在沒(méi)有攪拌下冷卻溶液至5-10℃，然后分離析出的固體。
扎來(lái)普隆晶型IV通過(guò)PXRD光譜表征，發(fā)現(xiàn)衍射圖(圖7)在8.1、14.5、17.3、21.3、24.3、25.0、25.9、26.7、27.9、29.5±0.2度2θ有特征峰。
扎來(lái)普隆晶型IV可以進(jìn)一步被X-射線衍射圖在10.6、11.1、14.1、15.6、18.0、18.2、20.1、20.3、24.3、25.0、25.9、26.7、27.9和29.5±0.2度2θ的峰表征。
扎來(lái)普隆的另一種新晶型V可以按照美國(guó)專利申請(qǐng)10/170,673的實(shí)施例制備，通過(guò)引用將該專利申請(qǐng)全部?jī)?nèi)容結(jié)合到本文中。
扎來(lái)普隆晶型V通過(guò)PXRD光譜表征，發(fā)現(xiàn)衍射圖(圖8)在8.0、14.8和17.0±0.2度2θ有特征峰。
扎來(lái)普隆晶型V可以進(jìn)一步被在10.7、11.0、12.5、15.4、16.5、17.7、21.3、25.7和26.5±0.2度2θ有X-射線衍射峰表征。
本發(fā)明進(jìn)一步提供制備已知扎來(lái)普隆晶型I的新方法。在一種制備扎來(lái)普隆晶型I的方法中，扎來(lái)普隆懸浮于水中并回流。然后將懸浮液冷卻至室溫。濾出晶體并干燥獲得扎來(lái)普隆晶型I。
根據(jù)另一種制備扎來(lái)普隆晶型I的方法，扎來(lái)普隆在高沸點(diǎn)烴中成漿狀。烴選自甲苯、二甲苯、四氫化萘等。合適的溫度可以為約100℃至扎來(lái)普隆熔點(diǎn)。在高溫處理后，然后冷卻懸浮液液至室溫。濾出晶體并干燥獲得扎來(lái)普隆晶型I。
根據(jù)另一種制備扎來(lái)普隆晶型I的方法，熔化扎來(lái)普隆，將熔化的扎來(lái)普隆冷卻至室溫，研磨獲得扎來(lái)普隆晶型I。
扎來(lái)普隆的新晶型II、III、IV和V可用于將扎來(lái)普隆給予患有失眠癥的患者的胃腸道、粘液膜和循環(huán)系統(tǒng)。它們可以配制為類似Sonata_或其它劑型的藥品。
本發(fā)明的藥用組合物包含扎來(lái)普隆晶型II、III、IV和V，任選混合其它晶型或無(wú)定形扎來(lái)普隆和/或其它活性成分。除了活性成分外，本發(fā)明藥用組合物還可以包含一種或多種賦形劑。各種賦形劑加入組合物中用于不同的目的。
稀釋劑增加固體藥用組和物的體積，并且可以使患者和護(hù)理者更容易使用包含所述組合物的藥用劑型。用于固體組合物的稀釋劑包括例如微晶纖維素(例如Avicel_)、微細(xì)纖維素、乳糖、淀粉、預(yù)膠化淀粉、碳酸鈣、硫酸鈣、糖、葡萄糖結(jié)合劑、糊精、葡萄糖、磷酸氫鈣二水合物、三堿基磷酸鈣、高嶺土、碳酸鎂、氧化鎂、麥芽糖糊精、甘露糖醇、聚甲基丙烯酸酯(例如Eudragit_)、氯化鉀、粉狀纖維素、氯化鈉、山梨糖醇和滑石粉。
壓制成片劑樣劑型的固體藥用組合物可以包括這樣的賦形劑，該賦形劑的功能包括在壓縮后輔助活性成分與其它賦型劑粘合在一起。用于固體藥用組合物的粘合劑包括阿拉伯膠、海藻酸、卡波姆(例如聚羧乙烯)、羧甲基纖維素鈉、糊精、乙基纖維素、明膠、瓜爾膠、氫化植物油、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素(例如Klucel_)、羥丙基甲基纖維素(例如Methocel_)、液體葡萄糖、硅酸鋁鎂、麥芽糖糊精、甲基纖維素、聚甲基丙烯酸酯、聚維酮(例如Kollidon_、Plasdone_)、預(yù)膠化淀粉、藻酸鈉和淀粉。
壓制固體藥用組合物在患者胃內(nèi)的溶解速率可以通過(guò)在組合物中加入崩解劑而提高。崩解劑包括藻酸、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉(例如Ac-Di-Sol_，Primellose_)、膠體二氧化硅、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、交聚維酮(例如Kollidon_，Polyplasdone_)、瓜爾膠、硅酸鋁鎂、甲基纖維素、微晶纖維素、聚克立林鉀、粉狀纖維素、預(yù)膠化淀粉、藻酸鈉、淀粉羥乙酸鈉(例如Explotab_)和淀粉。
助流劑可以增加非壓制固體組合物的流動(dòng)特性并且改善劑量的精確性?？梢杂米髦鲃┕δ艿馁x形劑包括膠體二氧化硅、三硅酸鎂、粉狀纖維素、淀粉、滑石粉和三堿基磷酸鈣。
當(dāng)片劑等劑型通過(guò)壓縮粉狀組合物制備時(shí)，組合物受到?jīng)_壓機(jī)和沖模的壓力。某些賦形劑和活性成分可能粘附在沖壓機(jī)和沖模表面，這將使得產(chǎn)品產(chǎn)生點(diǎn)蝕和其它表面不規(guī)則現(xiàn)象。可以在組合物中加入潤(rùn)滑劑減少粘附并且容易從沖模取出產(chǎn)品。潤(rùn)滑劑包括硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、甘油單硬脂酸酯、甘油棕櫚酸硬脂酸酯、氫化蓖麻油、氫化植物油、礦物油、聚乙二醇、苯甲酸鈉、十二烷基硫酸鈉、硬脂?；雍魉徕c、硬脂酸、滑石粉和硬脂酸鋅。
調(diào)味劑和鮮味劑使得劑型對(duì)患者有更好的適口性?？砂诒景l(fā)明組合物中的藥品常用調(diào)味劑和鮮味劑包括麥芽酚、香草醛、乙基香草醛、薄荷檸檬酸、富馬酸、乙基麥芽酚和酒石酸。
固體和液體組合物也可以用任何藥學(xué)上可接受的著色劑染色以改善它們的外觀和/或有利于患者識(shí)別產(chǎn)品或單位劑量水平。
在本發(fā)明液體藥用組合物中，晶型II、III、IV和V與任何其它固體賦形劑溶于或懸浮于液體載體，例如水、植物油、乙醇、聚乙二醇、丙二醇或甘油。
液體藥用組合物可以包含乳化劑以使不能溶于液體載體的活性成分或其它賦形劑均勻分散于整個(gè)組合物?？捎糜诒景l(fā)明液體組合物的乳化劑包括例如明膠、蛋黃、酪蛋白、膽固醇、阿拉伯膠、西黃蓍膠、角叉菜屬、果膠、甲基纖維素、卡波姆、十六醇十八醇混合物和鯨蠟醇。
本發(fā)明液體藥用組合物還可以包含粘性增強(qiáng)劑以改善產(chǎn)品的口感和/或保護(hù)胃腸道上皮。這樣的試劑包括阿拉伯膠、藻酸膨潤(rùn)土、卡波姆、羧甲基纖維素鈣或鈉、十六醇十八醇混合物、甲基纖維素、乙基纖維素、明膠瓜爾膠、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、麥芽糖糊精、聚乙烯醇、聚維酮、碳酸丙二酯、藻酸丙二酯、藻酸鈉、淀粉羥乙酸鈉、淀粉西黃蓍膠和黃原膠。
可以加入甜味劑改善味道，例如山梨糖醇、糖精、糖精鈉、蔗糖、阿司帕坦、果糖、甘露糖醇和轉(zhuǎn)化糖。
可以加入攝入安全量的防腐劑和螫合劑以改善貯藏穩(wěn)定性，例如乙醇、苯甲酸鈉、丁化羥基甲苯、叔丁對(duì)甲氧酚和乙二胺四乙酸。
本發(fā)明的液體組合物還可包含緩沖劑例如葡糖酸、乳酸、檸檬酸或乙酸、葡糖酸鈉、乳酸鈉、檸檬酸鈉或醋酸鈉。
配制技術(shù)人員很容易基于其經(jīng)驗(yàn)以及考慮本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法和參考文獻(xiàn)確定賦形劑的選擇和用量。
本發(fā)明固體組合物包括粉末狀、顆粒狀、聚集和壓縮的組合物。劑型包括適合以下給藥方式的劑型口服、含服、直腸、胃腸外(包括皮下、肌內(nèi)和靜脈內(nèi))、吸入和眼部用藥。盡管在任何給定情況中最合適的途徑取決于所治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，但是本發(fā)明的最優(yōu)選途徑是口服。劑型適合為單位劑型，通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知的任何方法制備。
劑型包括固體劑型如片劑、散劑、膠囊劑、栓劑、小藥囊、糖錠和錠劑以及液體糖漿劑、混懸劑和酏劑。
活性成分和賦形劑可以根據(jù)本領(lǐng)域已知方法配制成組合物和劑型。
膠囊劑、片劑和錠劑和其它固體單位劑型優(yōu)選包含劑量為約5至約20mg、更優(yōu)選約5mg至約10mg扎來(lái)普隆。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供新的梯度洗脫HPLC方法，用于確定扎來(lái)普隆雜質(zhì)特征，也就是通過(guò)面積百分?jǐn)?shù)定量扎來(lái)普隆樣品中雜質(zhì)含量。在此實(shí)施方案中，適合使扎來(lái)普隆(1)峰與結(jié)構(gòu)非常類似的化合物(5)的峰以及其它雜質(zhì)完全拆分(分離)，本發(fā)明提供一種HPLC方法，該方法包括以下步驟a.將扎來(lái)普隆樣品溶于乙腈∶水(1∶1)稀釋劑，b.注射樣品溶液(約10μl)到250mm×4.6mm，5μl RP-18 HPLC柱，c.用乙腈(A)和甲酸銨緩沖液(B，0.005M，pH＝4)的混合物以1ml/min根據(jù)下表梯度洗脫HPLC梯度
d.在245nm波長(zhǎng)用UV檢測(cè)器以及合適的記錄儀檢測(cè)各種雜質(zhì)的含量。
在以上方法中，扎來(lái)普隆的保留時(shí)間為約17min。使用此方法的典型HPLC色譜圖見(jiàn)圖9。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，其適合檢測(cè)包含扎來(lái)普隆的藥物和藥用組合物中的扎來(lái)普隆及其主要雜質(zhì)5，本發(fā)明提供一種無(wú)梯度HPLC檢測(cè)方法，該方法包括以下步驟a.將扎來(lái)普隆樣品溶于乙腈∶水(1∶1)稀釋劑，
b.注射樣品溶液(約10μl)到100mm×4mm，3μl RP-18，HPLC柱，c.用乙腈(28Vol-％)和甲酸銨緩沖液(72vol-％，0.005M，pH＝4)的混合物作為洗脫劑以1ml/min從以上柱洗脫樣品，d.在245nm波長(zhǎng)用UV檢測(cè)器以及合適的記錄儀檢測(cè)扎來(lái)普隆含量。
在此方法中，扎來(lái)普隆的保留時(shí)間為約5min。
碳13NMR譜和質(zhì)子NMR譜用Brucker Model DRX分光計(jì)分別在125MHz和500MHz獲得。檢測(cè)溫度為27℃。
低分辨率EI質(zhì)譜用VG-7035質(zhì)譜儀(VG Analytical，Manchester，England)獲得。離子化能量為70eV，離子電流為200μA。源溫度為150°。理論MW＝305.127；m/Z實(shí)測(cè)值＝305.128。
上文描述了本發(fā)明的不同方面，以下非限制性實(shí)施例提供示例性的具體實(shí)施方案。
實(shí)施例總則原樣使用Precise Chemipharma PVT.Ltd.的乙基乙酰胺3。原樣使用Precise Chemipharma PVT.Ltd.的氨基-4-氰基吡唑4。原樣使用Aldrich Chemical Co.的磷酸(85％)。原樣使用各種有機(jī)溶劑和反溶劑。
粗制扎來(lái)普隆(即初始混合物)和析出產(chǎn)物中的扎來(lái)普隆和位置異構(gòu)體5在254nm用UV檢測(cè)器通過(guò)HPLC定量，在所述波長(zhǎng)扎來(lái)普隆及其位置異構(gòu)體5的響應(yīng)因子相同。
制備1制備扎來(lái)普隆和位置異構(gòu)體5的混合物將乙基乙酰胺3(260g，1mol)和3-氨基-4-氰基吡唑4(108g，1mol)溶于水(7L)和乙醇(4L)的混合物。加入85％磷酸水溶液(67ml，1mol)，將混合物在室溫下攪拌8h。然后將反應(yīng)混合物冷卻至5℃，收集形成的結(jié)晶產(chǎn)物，用水洗滌，在60℃干燥獲得扎來(lái)普隆(275g，90.2％)，它的純度為99.36(HPLC)，包含0.21％位置異構(gòu)體5。
實(shí)施例1-8通過(guò)沉淀純化扎來(lái)普隆將制備1的扎來(lái)普隆和位置異構(gòu)體5的混合物(4g)溶于回流下的有機(jī)溶劑。在扎來(lái)普隆完全溶解后，讓溶液冷卻至室溫，然后進(jìn)一步冷卻至6℃，在該溫度保持1天。過(guò)濾回收所得結(jié)晶固體，用冷的新有機(jī)溶劑(晶體從中析出的溶劑)洗滌，然后在60℃真空干燥。表1中記錄了用不同有機(jī)溶劑實(shí)現(xiàn)的分離。
表3
實(shí)施例9-21用反溶劑析出扎來(lái)普隆將制備1的扎來(lái)普隆和位置異構(gòu)體5的混合物(4g)溶于回流下的有機(jī)溶劑。在扎來(lái)普隆完全溶解后，將反溶劑緩慢加入回流下的溶液。在加入結(jié)束后，將混合物冷卻至5℃。過(guò)濾回收所得結(jié)晶固體，用冷的新有機(jī)溶劑(晶體從中析出的溶劑)洗滌，然后在60℃真空干燥。表2中記錄了用不同有機(jī)溶劑和反溶劑的組合實(shí)現(xiàn)的分離。
表4
實(shí)施例22制備扎來(lái)普隆晶型I在攪拌下使扎來(lái)普隆(10g)溶于回流乙醇(100ml)。將己烷(200ml)滴加到回流溶液。然后在攪拌下約4h內(nèi)將混合物冷卻至5℃。過(guò)濾收集沉淀獲得扎來(lái)普隆晶型I(8.9g，89％)。
實(shí)施例23制備扎來(lái)普隆晶型II在50℃攪拌使扎來(lái)普隆(10g)溶于乙酸(50ml)。將所得溶液傾入冰-水(150ml)立即引起沉淀。過(guò)濾收集沉淀獲得扎來(lái)普隆晶型II(8.5g，85％)。
實(shí)施例24制備扎來(lái)普隆晶型III在攪拌下使扎來(lái)普隆(10g)溶于回流乙腈(50ml)。將水(150ml)滴加到以上回流溶液。然后在沒(méi)有攪拌下將澄清溶液冷卻至5℃。過(guò)濾收集沉淀獲得扎來(lái)普隆晶型III(9.1g，91％)。
實(shí)施例25制備扎來(lái)普隆晶型IV在攪拌下使扎來(lái)普隆(10g)溶于回流2-丙醇(150ml)。在沒(méi)有攪拌下將澄清溶液冷卻至5℃。過(guò)濾收集沉淀獲得扎來(lái)普隆晶型IV(8.6g，86％)。
實(shí)施例26制備扎來(lái)普隆晶型I將扎來(lái)普隆(26.8g)溶于回流溫度的乙醇和水(210和210cm3)的混合物，然后用木炭(2.7g，10m/m％)處理。將溶液在回流溫度攪拌30min，然后過(guò)濾。木炭用乙醇和水(30∶30cm3)的熱混合物洗滌。將溶液在6小時(shí)內(nèi)冷卻至25℃，并在此溫度保持2h。濾出晶體，用乙醇和水(20∶20cm3)的混合物洗滌，在60℃真空干燥8h獲得扎來(lái)普隆晶型I(22.8g，85％)
實(shí)施例27制備扎來(lái)普隆晶型I將扎來(lái)普隆(22.8g)溶于回流溫度的乙醇(230cm3)，然后用木炭(2.3g，10m/m％)處理。攪拌溶液10min，然后過(guò)濾。木炭用熱乙醇(20cm3)洗滌。將溶液在6小時(shí)內(nèi)冷卻至25℃，并在此溫度保持2h。濾出晶體，用乙醇(30cm3)洗滌。在60℃真空干燥產(chǎn)物8h獲得獲得扎來(lái)普隆晶型I(18.7g，82％)。
實(shí)施例28制備N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基-乙酰胺將N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺(5.2g，0.02mol)和3-氨基-4-氰基吡唑(2.16g，0.02mol)溶于水(50ml)和濃鹽酸(40ml)的混合物，在室溫下攪拌混合物8h。然后將反應(yīng)混合物冷卻至5℃，過(guò)濾移出沉淀。濾液用濃氨水溶液中和至析出380mg扎來(lái)普隆及其位置異構(gòu)體5的混合物，過(guò)濾收集沉淀。濾液用100ml乙酸乙酯萃取，在蒸發(fā)后獲得100mg上述兩種化合物的混合物。合并兩次的產(chǎn)物放入硅膠柱(100g)，洗脫采用氯仿和丙酮3∶1(v/v)的溶劑混合物獲得5的第二批產(chǎn)物240mg(4％)；mp 194-196℃；1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.143(t，3H)，1.876(s，3H)，3.804(q，2H)，7.361(d，1H)，7.532(d，1H)，7.613(t，1H)，8.018(s，1H)，8.159(d，1H)，8.375(s，1H)，8.805(d，1H)；13C-NMR(CDCl3)δ(ppm)12.89，22.68，43.84，83.17，107.71，112.84，127.17，127.48，130.62，131.63，136.67，137.46，144.10，148.31，149.99，158.60，169.90；MS(EI，70EV)m/z(％)305(M+，18)，248(59)。
實(shí)施例29基本沒(méi)有扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體的純凈扎來(lái)普隆將制備1的粗制扎來(lái)普隆(4g)溶于回流乙腈(20mL)。在扎來(lái)普隆完全溶解后，讓溶液冷卻至約20℃-25℃。然后將所得混合物冷卻至約6℃，并在此溫度保持約24h。過(guò)濾回收富集扎來(lái)普隆的固體沉淀，用新的冷乙腈洗滌。
將回收的富集扎來(lái)普隆的固體沉淀(約2.3g)溶于回流乙腈(約10mL)。讓溶液冷卻至約20℃-25℃。然后將所得混合物冷卻至約6℃，并在此溫度保持約24h。過(guò)濾回收沉淀，用新的冷乙腈洗滌，然后在60℃真空干燥。
進(jìn)一步純化的扎來(lái)普隆的回收沉淀物通過(guò)本發(fā)明梯度HPLC法分析，發(fā)現(xiàn)純度＞99％。用本發(fā)明梯度HPLC法沒(méi)有檢測(cè)到位置異構(gòu)體。所得扎來(lái)普隆基本沒(méi)有位置異構(gòu)體。
權(quán)利要求
1.一種純化扎來(lái)普隆的方法，該方法包括以下步驟(a)在至少一種有機(jī)溶劑或至少一種有機(jī)溶劑和水的混合物中形成包含扎來(lái)普隆的固體的溶液，(b)沉淀出相對(duì)用于形成所述溶液的所述含扎來(lái)普隆固體而富集扎來(lái)普隆的固體，(c)分離出富集扎來(lái)普隆的固體沉淀。
2.權(quán)利要求1的方法，其中用于形成所述溶液的包含扎來(lái)普隆的固體進(jìn)一步包含位置異構(gòu)體。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述有機(jī)溶劑選自以下物質(zhì)醇、酮、醚、羧酸、羧酸酯、腈、芳香烴、鹵化烴以及它們的任何混合物。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述有機(jī)溶劑選自以下化合物甲醇、乙醇、2-丙醇、丙酮、甲基乙基酮、甲基異丁基酮、四氫呋喃、乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸、丙酸、乙酸乙酯、乙酸異丁酯、乙腈、丙烯腈、苯、甲苯、二甲苯、二氯甲烷、氯仿以及它們的任何混合物。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述有機(jī)溶劑選自以下化合物乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、四氫呋喃、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲苯和二氯甲烷。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所形成的溶液的濃度為約100mM至約1M。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述溶液在高溫下形成。
8.權(quán)利要求7的方法，其中通過(guò)冷卻高溫溶液引起沉淀形成。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述冷卻一直冷卻到低溫。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述有機(jī)溶劑為2-丙醇，分離的沉淀為扎來(lái)普隆晶型IV。
11.權(quán)利要求8的方法，其中將反溶劑加入所述高溫溶液。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述反溶劑為脂族烴。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述脂族烴為己烷，所述有機(jī)溶劑為乙醇。
14.權(quán)利要求11的方法，其中所述有機(jī)溶劑選自以下化合物乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、四氫呋喃、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲苯和二氯甲烷。
15.權(quán)利要求12的方法，其中所述脂族烴為己烷。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述有機(jī)溶劑為乙醇，分離出的沉淀為扎來(lái)普隆晶型I。
17.權(quán)利要求11的方法，其中所述反溶劑為水。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述有機(jī)溶劑選自以下化合物乙酸、甲醇、乙醇、2-丙醇、四氫呋喃、乙腈和丙酮。
19.權(quán)利要求18的方法，其中所述有機(jī)溶劑為乙腈。
20.權(quán)利要求19的方法，其中所述反溶劑加入量為有機(jī)溶劑體積的約1倍至約3倍。
21.權(quán)利要求1的方法，其中富集扎來(lái)普隆的固體沉淀中扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體的含量相對(duì)于用于制備所述溶液的包含扎來(lái)普隆的固體減少至少約50％。
22.權(quán)利要求21的方法，其中富集扎來(lái)普隆的固體沉淀中扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體的含量相對(duì)于用于制備所述溶液的包含扎來(lái)普隆的固體減少至少約70％。
23.權(quán)利要求1的方法，該方法進(jìn)一步包括重復(fù)進(jìn)行步驟(a)、(b)和(c)。
24.權(quán)利要求1的方法，該方法進(jìn)一步包括重復(fù)進(jìn)行步驟(a)、(b)和(c)至少一次，其中所述有機(jī)溶劑為乙醇。
25.一種純化扎來(lái)普隆的方法，該方法包括以下步驟(a)形成包含扎來(lái)普隆的固體的乙醇溶液，(b)用反溶劑水沉淀出相對(duì)用于形成溶液的所述含扎來(lái)普隆固體而富集扎來(lái)普隆的固體，(c)分離出富集扎來(lái)普隆的固體沉淀。(d)形成步驟(c)中富集扎來(lái)普隆的固體沉淀的乙醇溶液，(e)在沒(méi)有加入反溶劑下，從步驟(d)的溶液中沉淀出相對(duì)于步驟(c)中富集扎來(lái)普隆的固體的進(jìn)一步富集扎來(lái)普隆的固體，(f)分離出步驟(e)中進(jìn)一步富集扎來(lái)普隆的固體。
26.扎來(lái)普隆晶型II，其特征在于粉末X-射線衍射圖在7.9、10.7、12.5、14.9、16.9、17.9、21.3、24.0、25.2、25.9、27.0和27.5±0.2度2θ有衍射峰。
27.權(quán)利要求26的制備扎來(lái)普隆的方法，該方法包括(a)在水混溶性或很大水溶性的有機(jī)溶劑中形成扎來(lái)普隆溶液，(b)使以上溶液與水接觸引起扎來(lái)普隆結(jié)晶，(c)從所述有機(jī)溶劑和水中分離出扎來(lái)普隆晶型II。
28.一種藥用組合物，該組合物包含權(quán)利要求26的扎來(lái)普隆。
29.權(quán)利要求27的方法，其中所述扎來(lái)普隆溶液與所接觸的水的體積比為約1∶3。
30.權(quán)利要求29的方法，其中所述扎來(lái)普隆溶液所接觸的水的溫度為約0℃。
31.一種治療失眠癥的方法，該方法為給予權(quán)利要求28的藥用組合物。
32.扎來(lái)普隆晶型III，其特征在于粉末X-射線衍射圖在15.4、18.1、21.1、26.8和27.5±0.2度2θ有衍射峰。
33.權(quán)利要求32的扎來(lái)普隆晶型III，其進(jìn)一步特征為在11.6、17.6、19.0、20.0和22.2度2θ有X-射線衍射峰。
34.一種制備權(quán)利要求32的扎來(lái)普隆的方法，該方法包括以下步驟(a)形成扎來(lái)普隆的乙腈溶液，(b)將水加入高溫下的所述溶液，(c)通過(guò)冷卻從所述溶液沉淀出扎來(lái)普隆，(d)從乙腈和水中分離出扎來(lái)普隆晶型III。
35.一種藥用組合物，該組合物包含權(quán)利要求32的扎來(lái)普隆。
36.一種治療失眠癥的方法，該方法為給予權(quán)利要求35的藥用組合物。
37.扎來(lái)普隆晶型IV，其特征在于粉末X-射線衍射圖在8.1、14.5、17.3、21.3±0.2度2θ有衍射峰。
38.權(quán)利要求37的扎來(lái)普隆晶型IV，其進(jìn)一步的特征為在10.6、11.1、14.1、15.6、18.0、18.2、20.1、20.3、24.3、25.0、25.9、26.7、27.9和29.5±0.2度2θ有X-射線衍射峰。
39.一種制備權(quán)利要求37的扎來(lái)普隆的方法，該方法包括以下步驟(a)在選自2-丙醇以及四氫呋喃與水的混合物的溶劑體系中形成扎來(lái)普隆溶液，(b)從所述溶液中沉淀出扎來(lái)普隆，(c)從所述溶劑體系分離出扎來(lái)普隆晶型IV。
40.一種藥用組合物，該組合物包含權(quán)利要求37的扎來(lái)普隆。
41.一種治療失眠癥的方法，該方法為給予權(quán)利要求40的藥用組合物。
42.扎來(lái)普隆晶型V，其特征在于粉末X-射線衍射圖在8.0、14.8、17.0±0.2度2θ有衍射峰。
43.權(quán)利要求42的扎來(lái)普隆晶型V，其進(jìn)一步的特征為在10.7、11.0、12.5、15.4、16.5、17.7、18.2、21.3、25.7、26.5±0.2度2θ有X-射線衍射峰。
44.一種藥用組合物，該組合物包含權(quán)利要求43的扎來(lái)普隆。
45.一種治療失眠癥的方法，該方法為給予權(quán)利要求44的藥用組合物。
46一種制備扎來(lái)普隆晶型I的方法，該方法包括以下步驟(a)在高溫液體中形成扎來(lái)普隆的懸浮液，(b)冷卻懸浮液，(c)從所述液體中分離出扎來(lái)普隆晶型I。
47.權(quán)利要求46的制備扎來(lái)普隆晶型I的方法，其中所述液體為沸水。
48.權(quán)利要求46的制備扎來(lái)普隆晶型I的方法，其中所述液體為高沸點(diǎn)烴。
49.一種制備扎來(lái)普隆晶型I的方法，該方法包括以下步驟(a)熔化扎來(lái)普隆，(b)通過(guò)冷卻固化扎來(lái)普隆，(c)研磨固化的扎來(lái)普隆獲得扎來(lái)普隆晶型I。
50.一種制備扎來(lái)普隆晶型I的方法，該方法包括以下步驟(a)加熱使扎來(lái)普隆溶于有機(jī)溶劑，(b)通過(guò)冷卻引起扎來(lái)普隆沉淀，(c)分離扎來(lái)普隆晶型I。
51.一種制備扎來(lái)普隆晶型I的方法，該方法包括以下步驟(a)加熱使扎來(lái)普隆溶于有機(jī)溶劑，(b)在溶液中加入非極性有機(jī)反溶劑，(c)通過(guò)冷卻引起扎來(lái)普隆沉淀，(d)分離扎來(lái)普隆晶型I。
52.一種制備扎來(lái)普隆晶型I的方法，該方法包括以下步驟(a)將扎來(lái)普隆溶于水混溶性有機(jī)溶劑，(b)在此溶液中加入水，但仍然為澄清溶液，(c)通過(guò)緩慢冷卻引起扎來(lái)普隆沉淀，(d)分離扎來(lái)普隆晶型I。
53.純度至少約98.5％的純凈扎來(lái)普隆。
54.權(quán)利要求53的純凈扎來(lái)普隆，其中純度用3μm PR-18柱以及含乙腈和甲酸銨緩沖液的洗脫劑通過(guò)HPLC檢測(cè)。
55.純度至少約99％的純凈扎來(lái)普隆。
56.權(quán)利要求55的純凈扎來(lái)普隆，其中純度用3μm PR-18柱以及含乙腈和甲酸銨緩沖液的洗脫劑通過(guò)HPLC檢測(cè)。
57.權(quán)利要求56的純凈扎來(lái)普隆，其基本不含位置異構(gòu)體。
58.N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺。
59.一種制備N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺的方法，該方法包括以下步驟a.在水與至少一種沒(méi)有羧酸基團(tuán)的水混溶性有機(jī)化合物的液體反應(yīng)介質(zhì)中，使N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺、3-氨基-4氰基吡唑和強(qiáng)酸的混合物反應(yīng)，b.中和反應(yīng)混合物，從而沉淀出粗制產(chǎn)物，c.用氯仿和丙酮的混合物作為洗脫劑通過(guò)硅膠柱色譜法將N-[3-(3-氰基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)苯基]-N-乙基乙酰胺與粗制產(chǎn)物的其它組分分離，其中強(qiáng)酸摩爾量為N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺摩爾量或3-氨基-4-氰基吡唑摩爾量的至少10倍，其中后兩者中任意一個(gè)過(guò)量，或者如果后兩者大約等摩爾量則強(qiáng)酸摩爾量為任何一個(gè)摩爾量的至少10倍。
60.權(quán)利要求59的方法，其中強(qiáng)酸摩爾量為N-[3-[3-(二甲基氨基)-1-氧代-2-丙烯基]苯基]-N-乙基乙酰胺摩爾量或3-氨基-4-氰基吡唑摩爾量的至少20倍，后兩者無(wú)論哪一種過(guò)量；或者，如果后兩者使用量為大約等摩爾量，則強(qiáng)酸摩爾量為任何一種的摩爾量的至少20倍。
61.一種檢測(cè)扎來(lái)普隆的HPLC方法，該方法包括以下步驟a.將扎來(lái)普隆樣品溶于乙腈∶水(1∶1)稀釋劑，b.注射樣品溶液(約10μl)到100mm×4mm，3μm RP-18HPLC柱，c.使用乙腈(28vol-％)和甲酸銨緩沖液(72vol-％，0.005M，pH＝4)的混合物作為洗脫劑以1ml/min從以上柱洗脫樣品，d.在245nm波長(zhǎng)用UV檢測(cè)器檢測(cè)相關(guān)樣品的扎來(lái)普隆含量。
62.一種定量扎來(lái)普隆中雜質(zhì)含量的HPLC方法，該方法包括以下步驟a.將扎來(lái)普隆樣品溶于乙腈∶水(1∶1)稀釋劑，b.注射樣品溶液(約10μl)到250mm×4.6mm，5μm RP-18HPLC柱，c.用乙腈(A)和甲酸銨緩沖液(B，0.005M，pH＝4)的混合物以1ml/min根據(jù)下表梯度洗脫樣品HPLC梯度
d.在245nm波長(zhǎng)用UV檢測(cè)器以及合適的記錄儀檢測(cè)各種雜質(zhì)的含量。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種能夠分離扎來(lái)普隆和扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體從而獲得基本純凈的扎來(lái)普隆的提純方法，所述扎來(lái)普隆位置異構(gòu)體是在化學(xué)合成扎來(lái)普隆中容易生成的副產(chǎn)物。此外，用所述方法可獲得扎來(lái)普隆的新晶形。
文檔編號(hào)A61P25/20GK1784406SQ02819356
公開(kāi)日2006年6月7日 申請(qǐng)日期2002年8月1日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月1日
發(fā)明者E·費(fèi)赫爾, F·科羅迪, C·辛格, E·馬亞 申請(qǐng)人:特瓦藥廠有限公司