專利名稱：一種制備脫細(xì)胞骨的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備脫細(xì)胞骨的方法。
背景技術(shù)：
骨修復(fù)一直是臨床上的難題，目前治療骨缺損的方法仍然以自體和異體骨移植為主。臨床上關(guān)于異種骨移植存在的抗原性強(qiáng)、排斥反應(yīng)強(qiáng)的問題尚未有效解決，異種骨的抗原性主要來自于異種骨細(xì)胞，目前的工藝制備的異種骨材料存在以下不足操作較復(fù)雜，周期較長，效率較低；脫細(xì)胞不徹底，容易造成骨基質(zhì)的損壞。因此，需要提供一種新的技術(shù)方案來解決上述問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種周期較短、效率較高、脫細(xì)胞徹底、對骨細(xì)胞外基質(zhì)天然結(jié)構(gòu)損害輕的制備脫細(xì)胞骨的方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是
一種制備脫細(xì)胞骨的方法，該脫細(xì)胞骨由豬骨、牛骨或羊骨制備而成，其特征在于，包括以下步驟
a、制備異種骨工藝將動(dòng)物骨切成的O. 2-0. 4cm片狀骨片，清除表面油脂； b、病毒滅活工藝將片狀骨片用質(zhì)量濃度O. 1°/Γ2%的過氧乙酸和質(zhì)量濃度1°/Γ5%的氯化鈉組成的病毒滅活溶液進(jìn)行病毒滅活O. 5-1. O小時(shí),片狀骨片與病毒滅活溶液的質(zhì)量比為 I: 3-5 ；
C、脫脂工藝采用質(zhì)量濃度3. 09Γ5. 0%純堿、質(zhì)量濃度3. 09Γ5. 0%燒堿和質(zhì)量濃度 O. 59Γ1. 0%表面活性劑組成的混合脫脂劑進(jìn)行脫脂I. 0-5. O小時(shí)，所述表面活性劑為平平加、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚、曲拉酮中的一種，片狀骨片與混合脫脂劑的質(zhì)量比為I: 3-5 ；
d、脫細(xì)胞工藝采用質(zhì)量濃度O.1%-0. 5%胰酶、激活劑和脫脂劑組成的脫細(xì)胞液進(jìn)行脫細(xì)胞工藝I. 0-2. O小時(shí)，所述激活劑為質(zhì)量濃度O. 19Γ0. 3%硫酸銨，所述脫脂劑為質(zhì)量濃度O. 29ΓΟ. 5%平平加，片狀骨片與脫細(xì)胞液的質(zhì)量比為1: 3-5 ；
e、凍干、裁剪、定型工藝將經(jīng)脫細(xì)胞工藝后制備好的骨片，放入冷凍干燥機(jī)凍干后，進(jìn)一步將脫細(xì)胞骨根據(jù)臨床不同的適應(yīng)癥的需要，分別裁剪、定型；
f、包裝和輻照消毒工藝成型包裝、經(jīng)Y射線輻照滅菌，即為成品。本發(fā)明的有益效果(l)b步驟采用過氧乙酸和氯化鈉溶液組成的病毒滅活液進(jìn)行病毒滅活，既達(dá)到了病毒滅活的效果，又避免了過氧乙酸溶液滅活病毒而產(chǎn)生的骨腫脹的問題；(2) c步驟中的由純堿、燒堿、表面活性劑組成的混合脫脂劑具有脫脂時(shí)間短、效率高、對骨組織天然結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)；(3) d步驟中采用酶、激活劑和脫脂劑組成的脫細(xì)胞液進(jìn)行脫細(xì)胞，具有脫細(xì)胞徹底，對骨細(xì)胞外基質(zhì)天然結(jié)構(gòu)損害輕的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I
本發(fā)明的一種制備脫細(xì)胞骨的方法，該脫細(xì)胞骨由豬骨、牛骨或羊骨制備而成，包括以下步驟
a、制備異種骨工藝將動(dòng)物骨切成的O.2cm片狀骨片，清除表面油脂；
b、病毒滅活工藝將片狀骨片用質(zhì)量濃度O.1%的過氧乙酸和質(zhì)量濃度1%的氯化鈉組成的病毒滅活溶液進(jìn)行病毒滅活O. 5小時(shí),片狀骨片與病毒滅活溶液的質(zhì)量比為1:3 ;
C、脫脂工藝采用質(zhì)量濃度3. 0%純堿、質(zhì)量濃度3. 0%燒堿和質(zhì)量濃度O. 5%平平加組成的混合脫脂劑進(jìn)行脫脂I. O小時(shí)，片狀骨片與混合脫脂劑的質(zhì)量比為1:3 ;
d、脫細(xì)胞工藝采用質(zhì)量濃度O.1%胰酶、激活劑和脫脂劑組成的脫細(xì)胞液進(jìn)行脫細(xì)胞工藝I. O小時(shí)，激活劑為質(zhì)量濃度O. 1%硫酸銨，脫脂劑為質(zhì)量濃度O. 2%平平加，片狀骨片與脫細(xì)胞液的質(zhì)量比為1:3 ;
e、凍干、裁剪、定型工藝將經(jīng)脫細(xì)胞工藝后制備好的骨片，放入冷凍干燥機(jī)凍干后，進(jìn)一步將脫細(xì)胞骨根據(jù)臨床不同的適應(yīng)癥的需要，分別裁剪、定型；
f、包裝和輻照消毒工藝成型包裝、經(jīng)Y射線輻照滅菌，即為成品。實(shí)施例2
本發(fā)明的一種制備脫細(xì)胞骨的方法，該脫細(xì)胞骨由豬骨、牛骨或羊骨制備而成，包括以下步驟
a、制備異種骨工藝將動(dòng)物骨切成的O.3cm片狀骨片，清除表面油脂；
b、病毒滅活工藝將片狀骨片用質(zhì)量濃度1%的過氧乙酸和質(zhì)量濃度3%的氯化鈉組成的病毒滅活溶液進(jìn)行病毒滅活O. 8小時(shí),片狀骨片與病毒滅活溶液的質(zhì)量比為1:4 ;
C、脫脂工藝采用質(zhì)量濃度4. 0%純堿、質(zhì)量濃度4. 0%燒堿和質(zhì)量濃度O. 8%十二烷基氨基丙酸鈉組成的混合脫脂劑進(jìn)行脫脂3. O小時(shí)，片狀骨片與混合脫脂劑的質(zhì)量比為1:4 ；
d、脫細(xì)胞工藝采用質(zhì)量濃度O.3%胰酶、激活劑和脫脂劑組成的脫細(xì)胞液進(jìn)行脫細(xì)胞工藝I. 5小時(shí)，激活劑為質(zhì)量濃度O. 2%硫酸銨，脫脂劑為質(zhì)量濃度O. 3%平平加，片狀骨片與脫細(xì)胞液的質(zhì)量比為1:4 ;
e、凍干、裁剪、定型工藝將經(jīng)脫細(xì)胞工藝后制備好的骨片，放入冷凍干燥機(jī)凍干后，進(jìn)一步將脫細(xì)胞骨根據(jù)臨床不同的適應(yīng)癥的需要，分別裁剪、定型；
f、包裝和輻照消毒工藝成型包裝、經(jīng)Y射線輻照滅菌，即為成品。實(shí)施例3
本發(fā)明的一種制備脫細(xì)胞骨的方法，該脫細(xì)胞骨由豬骨、牛骨或羊骨制備而成，包括以下步驟
a、制備異種骨工藝將動(dòng)物骨切成的O.4cm片狀骨片，清除表面油脂；
b、病毒滅活工藝將片狀骨片用質(zhì)量濃度2%的過氧乙酸和質(zhì)量濃度5%的氯化鈉組成的病毒滅活溶液進(jìn)行病毒滅活I(lǐng). O小時(shí),片狀骨片與病毒滅活溶液的質(zhì)量比為1:5;
C、脫脂工藝采用質(zhì)量濃度5. 0%純堿、質(zhì)量濃度5. 0%燒堿和質(zhì)量濃度I. 0%脂肪醇聚氧乙烯醚組成的混合脫脂劑進(jìn)行脫脂5. O小時(shí)，片狀骨片與混合脫脂劑的質(zhì)量比為1:5 ;
d、脫細(xì)胞工藝采用質(zhì)量濃度O. 5%胰酶、激活劑和脫脂劑組成的脫細(xì)胞液進(jìn)行脫細(xì)胞工藝2. O小時(shí)，激活劑為質(zhì)量濃度O. 3%硫酸銨，脫脂劑為質(zhì)量濃度O. 5%平平加，片狀骨片與脫細(xì)胞液的質(zhì)量比為1:5 ;
e、凍干、裁剪、定型工藝將經(jīng)脫細(xì)胞工藝后制備好的骨片，放入冷凍干燥機(jī)凍干后，進(jìn)一步將脫細(xì)胞骨根據(jù)臨床不同的適應(yīng)癥的需要，分別裁剪、定型；
f、包裝和輻照消毒工藝成型包裝、經(jīng)Y射線輻照滅菌，即為成品。c步驟脫脂工藝中，表面活性劑還可以為曲拉酮。本發(fā)明的有益效果(l)b步驟采用過氧乙酸和氯化鈉溶液組成的病毒滅活液進(jìn)行病毒滅活，既達(dá)到了病毒滅活的效果，又避免了過氧乙酸溶液滅活病毒而產(chǎn)生的骨腫脹的問題；(2) c步驟中的由純堿、燒堿、表面活性劑組成的混合脫脂劑具有脫脂時(shí)間短、效率高、對骨組織天然結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)；(3) d步驟中采用酶、激活劑和脫脂劑組成的脫細(xì)胞液進(jìn)行脫細(xì)胞，具有脫細(xì)胞徹底，對骨細(xì)胞外基質(zhì)天然結(jié)構(gòu)損害輕的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明涉及一種脫細(xì)胞骨的應(yīng)用。該脫細(xì)胞骨供醫(yī)療機(jī)構(gòu)用于各種原因引起的人體骨組織缺損的修復(fù)治療。
權(quán)利要求
1.一種制備脫細(xì)胞骨的方法，該脫細(xì)胞骨由豬骨、牛骨或羊骨制備而成，其特征在于， 包括以下步驟a、制備異種骨工藝將動(dòng)物骨切成的O. 2-0. 4cm片狀骨片，清除表面油脂；b、病毒滅活工藝將片狀骨片用質(zhì)量濃度O. 1°/Γ2%的過氧乙酸和質(zhì)量濃度1°/Γ5%的氯化鈉組成的病毒滅活溶液進(jìn)行病毒滅活O. 5-1. O小時(shí),片狀骨片與病毒滅活溶液的質(zhì)量比為 I: 3-5 ；C、脫脂工藝采用質(zhì)量濃度3. 09Γ5. 0%純堿、質(zhì)量濃度3. 09Γ5. 0%燒堿和質(zhì)量濃度O.59Γ1. 0%表面活性劑組成的混合脫脂劑進(jìn)行脫脂I. 0-5. O小時(shí)，所述表面活性劑為平平加、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚、曲拉酮中的一種，片狀骨片與混合脫脂劑的質(zhì)量比為I: 3-5 ；d、脫細(xì)胞工藝采用質(zhì)量濃度O.1%-0. 5%胰酶、激活劑和脫脂劑組成的脫細(xì)胞液進(jìn)行脫細(xì)胞工藝I. 0-2. O小時(shí)，所述激活劑為質(zhì)量濃度O. 19Γ0. 3%硫酸銨，所述脫脂劑為質(zhì)量濃度O. 29ΓΟ. 5%平平加，片狀骨片與脫細(xì)胞液的質(zhì)量比為1: 3-5 ；e、凍干、裁剪、定型工藝將經(jīng)脫細(xì)胞工藝后制備好的骨片，放入冷凍干燥機(jī)凍干后，進(jìn)一步將脫細(xì)胞骨根據(jù)臨床不同的適應(yīng)癥的需要，分別裁剪、定型；f、包裝和輻照消毒工藝成型包裝、經(jīng)Y射線輻照滅菌，即為成品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備脫細(xì)胞骨的方法，將動(dòng)物骨通過制備骨片、病毒滅活、脫脂、脫細(xì)胞、凍干、裁剪、成型、包裝和輻照消毒工藝后得到脫細(xì)胞骨。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)脫脂時(shí)間短、效率高、對骨組織結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用強(qiáng)，脫細(xì)胞徹底，對骨細(xì)胞外基質(zhì)天然結(jié)構(gòu)損害輕的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號A61L27/36GK102580152SQ20121006065
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月9日
發(fā)明者潘華倩, 潘銀根 申請人:潘銀根