專(zhuān)利名稱(chēng)：作為蛋白激酶抑制劑的吡咯并嘧啶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及取代的吡咯并嘧啶、它們的制備、含有這些化合物的藥物組合物和它們?cè)谥委熆赏ㄟ^(guò)抑制蛋白激酶調(diào)節(jié)的疾病狀態(tài)的藥用用途。
蛋白激酶參與細(xì)胞應(yīng)答胞外介質(zhì)和環(huán)境中的變化時(shí)控制細(xì)胞的激活、生長(zhǎng)和分化的信號(hào)事件。通常，這些激酶可歸為幾組優(yōu)先磷酸化絲氨酸和/或蘇氨酸殘基的激酶和優(yōu)先磷酸化酪氨酸殘基的激酶[S.K.Hanks和T.Hunter，F(xiàn)ASEB.J.，1995，9，576-596頁(yè)]。絲氨酸/蘇氨酸激酶包括例如，蛋白激酶C同種型[A.C.Newton，J.Biol.Chem.，1995，270，28495-28498頁(yè)]和一組細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)的激酶，如cdc2 [J.Pines，Trends in BiochemicalSciences，1995，18，195-197頁(yè)]。酪氨酸激酶包括跨膜生長(zhǎng)因子受體，如表皮生長(zhǎng)因子受體[S.Iwashita和M.Kobayashi，Cellular Signalling，1992，4，123-132頁(yè)]和胞質(zhì)非受體激酶，如p56tck、p59fYn、ZAP-70和csk激酶[C.Chan等，Ann.Rev.Immunol.，1994，12，555-592頁(yè)]。
不適宜的高蛋白激酶活性和許多由異常細(xì)胞功能導(dǎo)致的疾病相關(guān)。這可能或者直接或者不直接的出現(xiàn)下列情況，例如由于該激酶正確的控制機(jī)制的失敗而導(dǎo)致例如該酶的突變、過(guò)表達(dá)或不適當(dāng)?shù)幕罨?；或者由于?xì)胞因子或生長(zhǎng)因子的生產(chǎn)過(guò)?；虿蛔?，而所述細(xì)胞因子或生長(zhǎng)因子也參與該激酶的上游或下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在所有這些例子中，選擇性抑制該激酶的作用可能有有利的效果。
Syk是72 kDa的胞質(zhì)蛋白酪氨酸激酶，它在多種造血細(xì)胞中表達(dá)，并且是一些將抗原受體和細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)結(jié)合起來(lái)的級(jí)聯(lián)中的必需成分。這樣，Syk在肥大細(xì)胞中高親和性IgE受體FcεR1的信號(hào)中和T和B淋巴細(xì)胞中的受體抗原的信號(hào)中扮演著樞紐的角色。在肥大細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞中的該信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路具有相同的特征。受體的配基結(jié)合區(qū)缺乏內(nèi)在酪氨酸激酶活性。然而，它們和含有基于酪氨酸的免疫受體活化基元(ITAM)的轉(zhuǎn)導(dǎo)亞基相互作用[M.Reth，Nature，1989，338，383-384頁(yè)]。這些基元存在于FcεR1中的β和γ亞基、T細(xì)胞受體(TCR)的ξ亞基和B細(xì)胞受體(BCR)的IgGα和IgGβ亞基中[N.S.van Oers和A.Weiss，Seminars inImmunology，1995，7，227-236頁(yè)]。當(dāng)結(jié)合抗原并多聚化時(shí)，ITAM殘基被Src家族的蛋白酪氨酸激酶磷酸化。Syk屬于一個(gè)酪氨酸激酶的獨(dú)特家族，該家族的酪氨酸激酶具有兩個(gè)串連的Src同源物2(SH2)區(qū)和一個(gè)C末端催化區(qū)。這些SH2區(qū)高親和性的結(jié)合ITAM并且該SH2介導(dǎo)的Syk與活化受體的結(jié)合刺激Syk激酶活性并將Syk定位到原生質(zhì)膜。
在Syk缺陷的小鼠中，肥大細(xì)胞的脫粒受到抑制，表明Syk是開(kāi)發(fā)肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑的一個(gè)重要的靶標(biāo)[P.S.Costello，Oncogene，1996，13，2595-2605頁(yè)]。類(lèi)似的研究表明Syk在BCR和TCR的信號(hào)中的關(guān)鍵作用[A.M.Cheng，Nature，1995，378，303-306頁(yè)，(1995)和D.H.Chu等，Immunological Reviews，1998，165，167-180頁(yè)]。Syk似乎也參與應(yīng)答IL-5和GM-CSF中的嗜酸性粒細(xì)胞的存活[S.Yousefi等.，J.Exp.Med.，1996，183，1407-1414頁(yè)]。盡管Syk在肥大細(xì)胞、BCR和T細(xì)胞信號(hào)中起著關(guān)鍵的作用，對(duì)于Syk傳輸信號(hào)到下游效應(yīng)子的機(jī)制還知之甚少。已表明兩個(gè)連接蛋白，BLNK(B細(xì)胞連接蛋白，SLP-65)和SLP-76分別是B細(xì)胞和肥大細(xì)胞中Syk的底物，推測(cè)它們是Syk和下游效應(yīng)子的接觸面[M.Ishiai等，Immunity，1999，10，117-125頁(yè)和L.R.Hendricks-Taylor等，J.Biol.Chem.，1997，272，1363-1367頁(yè)]。此外，Syk似乎在CD40信號(hào)通路中起著重要的作用，而CD40信號(hào)通路在B細(xì)胞增殖中起著重要的作用[M.Faris等，J.Exp.Med.，1994，179，1923-1931頁(yè)]。
Syk還參與通過(guò)低親和性IgG受體(Fcγ-RIIA)或膠原刺激的血小板的活化[F.Yanaga等，Biochem.J.，1995，311，(Pt.2)471-478頁(yè)]。
粘著斑激酶(FAK)是參與整合蛋白介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的非受體酪氨酸激酶。FAK和整合蛋白共同定位于粘著斑位點(diǎn)，已經(jīng)表明在許多細(xì)胞類(lèi)型中FAK的激活和它的酪氨酸磷酸化依賴(lài)于整合蛋白結(jié)合到它們的胞外配體。一些研究的結(jié)果支持該假說(shuō)，即FAK抑制劑可以用于癌癥的治療。例如，F(xiàn)AK缺陷細(xì)胞在應(yīng)答趨化信號(hào)時(shí)遷移較差，過(guò)量表達(dá)FAK的C末端區(qū)阻滯了細(xì)胞的擴(kuò)散和趨化遷移(Sieg等，J.Cell Science，1999，112，2677-2691；Richardson A.和Parsons T.，Cell，1997，97，221-231)；此外，用FAK反義寡核苷酸處理的腫瘤細(xì)胞喪失了粘附性并經(jīng)歷細(xì)胞凋亡(Xu等，Cell Growth Differ.1996，4，413-418)。已報(bào)道FAK在前列腺癌、乳腺癌、甲狀腺癌、結(jié)腸癌和肺癌中過(guò)量表達(dá)。FAK的表達(dá)水平與表現(xiàn)最具侵占性表型的腫瘤直接相關(guān)。通過(guò)從預(yù)先存在的微管結(jié)構(gòu)萌發(fā)的血管發(fā)生或者新血管的形成對(duì)于胚胎發(fā)育和器官發(fā)生非常重要。在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜炎和在腫瘤發(fā)展中觀察到異常增強(qiáng)的新血管形成(Folkman，Nat.Med.，1995，1，27-31.)。血管發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的多階段的過(guò)程，包括內(nèi)皮細(xì)胞的活化、遷移、增殖和存活。過(guò)去20年里在腫瘤的血管發(fā)生這一領(lǐng)域的廣泛研究已經(jīng)鑒定出了許多治療治療靶標(biāo)，包括激酶、蛋白酶和整合蛋白，導(dǎo)致了許多新的抗血管發(fā)生劑的發(fā)現(xiàn)，這些抗血管發(fā)生劑包括KDR抑制劑，它們中的一些現(xiàn)今已處于臨床評(píng)估階段(Jekunen等，Cancer TreatmentRev.1997，23，263-286.)。血管發(fā)生抑制劑可用在腫瘤的出現(xiàn)或重新生長(zhǎng)的一線的、輔助性或者甚至預(yù)防性治療中。
在酵母和果蠅中已經(jīng)鑒定了幾種參與染色體分離和紡錘體裝配的蛋白。這些蛋白的破壞導(dǎo)致染色體錯(cuò)誤的分離和單極化或破壞的紡錘體。在這些激酶中有分別來(lái)自S.cerevisiae和果蠅的Ipl1和極光激酶(aurorakinase)，它們是中心體分開(kāi)和染色體分離所需要的。不同實(shí)驗(yàn)室最近克隆并鑒定了一種酵母Ipl1的人同源物。該激酶被命名為Aurora 2、STK15或BTAK，屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶家族。Bischoff等證明Aurora 2是致癌的且在人結(jié)直腸癌中擴(kuò)增(EMBO J，1998，17，3052-3065)。還證明它與上皮腫瘤(如乳腺癌)有關(guān)。
本發(fā)明涉及與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑結(jié)合的式(I)的取代的吡咯并嘧啶，其能夠抑制一種或多種蛋白激酶，更具體地是抑制FAK、KDR、Syk激酶或Aurora 2，特別是Syk激酶
和它們的相應(yīng)N-氧化物、前藥、酸性生物等排物(bioisostere)；和這些化合物的藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物(例如水合物)和N-氧化物和它們的前藥和它們的酸性生物等排物，其中R1代表氫、-C(＝O)-NY1Y2、-C(＝O)-OR5、-SO2-NY1Y2、-SO2-R7、-C(＝O)R7，或者R1代表鏈烯基、鏈烯氧基、烷基、炔基、芳基、雜芳基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基或環(huán)烷基烷基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自芳基、環(huán)烷基、氰基、鹵、雜芳基、雜環(huán)烷基、-CHO(或其5-、6-或7元的環(huán)縮醛衍生物)、-C(＝O)-NY1Y2、-C(＝O)-OR5、-NY1Y2、-N(R6)-C(＝O)-R7、-N(R6)-C(＝O)-NY3Y4、-N(R6)-SO2-R7、-N(R6)-SO2-NY3Y4、-OR7、C(＝O)-R7、羥基、烷氧基和羧基的基團(tuán)所取代；R2代表一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)氫、?；?、亞烷二氧基、鏈烯基、鏈烯氧基、炔基、芳基、氰基、鹵素、羥基、雜芳基、雜環(huán)烷基、硝基、R4、-C(＝O)-NY1Y2、-C(＝O)-OR5、-NY1Y2、-N(R6)-C(＝O)-R7、-N(R6)-C(＝O)-NY3Y4、-N(R6)-C(＝O)-OR7、-N(R6)-SO2-R7、-N(R6)-SO2-NY3Y4、-SO2-NY1Y2和-ZR4；R3代表H、氰基、鹵素、羥基、硝基、R4、-NY1Y2、-ZR4、-C(＝O)-OR5、-C(＝O)-R7、-C(＝O)-NY1Y2、-N(R8)-C(＝O)-R4、-N(R8)-C(＝O)-NY1Y2、-N(R8)-C(＝O)-OR5、-SO2-NY3Y4或-N(R8)-SO2-R7，或者R3代表芳基、雜芳基、鏈烯基或炔基，每個(gè)任選地被選自芳基、氰基、鹵素、羥基、雜芳基、雜環(huán)烷基、硝基、-C(＝O)-NY1Y2、-C(＝O)-OR5、-NY1Y2、-N(R6)-C(＝O)-R7、-N(R6)-C(＝O)-NY3Y4、-N(R6)-C(＝O)-OR7、-N(R6)-SO2-R7、-N(R6)-SO2-NY3Y4、-SO2-NY1Y2或-ZR4的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代；R4代表烷基、環(huán)烷基或環(huán)烷基烷基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自芳基、環(huán)烷基、氰基、鹵素、雜芳基、雜環(huán)烷基、羥基、-CHO(或其5-、6-或7元的環(huán)縮醛衍生物)、-C(＝O)-NY1Y2、-C(＝O)-OR5、-NY1Y2、-N(R6)-C(＝O)-R7、-N(R6)-C(＝O)-NY3Y4、-N(R6)-SO2-R7、-N(R6)-SO2-NY3Y4、-OR7和-C(＝O)-R7的基團(tuán)取代；R4也可以任選地被選自O(shè)、S(O)n和NR6的基團(tuán)間隔；R5代表氫、烷基、鏈烯基、芳基、芳基烷基、雜芳基或雜芳烷基；R6代表氫或低級(jí)烷基；R7代表烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)烷基或雜環(huán)烷基烷基；R8代表氫或低級(jí)烷基；Y1和Y2是獨(dú)立的氫、鏈烯基、芳基、環(huán)烷基、雜芳基或烷基，任選地被一個(gè)或多個(gè)選自芳基、鹵素、雜芳基、羥基、-C(＝O)-NY3Y4、-C(＝O)-OR5、-NY3Y4、-N(R6)-C(＝O)-R7、-N(R6)-C(＝O)-NY3Y4、-N(R6)-SO2-R7、-N(R6)-SO2-NY3Y4和-OR7的基團(tuán)取代；或者基團(tuán)-NY1Y2可以形成環(huán)狀胺；Y3和Y4是獨(dú)立的氫、鏈烯基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、雜芳基或雜芳基烷基；或者基團(tuán)-NY3Y4可以形成環(huán)胺；Z代表O或S(O)n；n為0或整數(shù)1或2。
在本說(shuō)明書(shū)中，術(shù)語(yǔ)“本發(fā)明化合物”及其等價(jià)表述是指如此處前面描述的通式(I)的化合物，該表述包括根據(jù)上下文的內(nèi)容可能存在的前藥、可藥用的鹽和溶劑合物，如水合物。類(lèi)似地，不管所述的中間體是否被要求保護(hù)，均包括根據(jù)上下文的內(nèi)容可能存在的鹽和溶劑合物。為了清楚起見(jiàn)，在上下文允許時(shí)，有時(shí)會(huì)在本文中說(shuō)明特定的實(shí)例，但是這些例子是純粹的說(shuō)明性的而不是想在上下文允許時(shí)排除其他實(shí)例。
如上所述并且在本申請(qǐng)的整篇說(shuō)明書(shū)中，除非另外說(shuō)明，下面的術(shù)語(yǔ)將理解為具有下面的意思“患者”包括人和其他哺乳動(dòng)物。
“酸性生物等排物”指在廣義上能夠產(chǎn)生與羧基類(lèi)似的生物性質(zhì)的具有化學(xué)和物理類(lèi)似性的基團(tuán)(見(jiàn)Lipinski，Annual Reports in MedicinalChemistry，1986，21，p283“Bioisosterism In Drug Design”；Yun HwahakSekye，1993，33，576-579頁(yè)“Application of Bioisosterism To New DrugDesin”；Zhao，Huaxue Tongbao，1995，34-38頁(yè)；“Bioisosteric ReplacementAnd Development of Lead Compounds In Drug Design”；Graham，Theochem，1995，343，105-109頁(yè)“Theoretical Studies Applied To DrugDesignab Initio Electronic Distributions In Bioisosteres”)。合適的酸性生物等排物的例子包括-C(＝O)-NHOH、-C(＝O)-CH2OH、-C(＝O)-CH2SH、-C(＝O)-NH-CN、硫代、膦酰基、烷基磺?；被柞；?、四唑基、芳基磺?；被柞；?、雜芳基磺?；被柞；?、N-甲氧基氨基甲酰基、3-羥基-3-環(huán)丁烯-1，2-二酮、3，5-二氧-1，2，4-噁二唑烷基或雜環(huán)酚基，如3-羥基異噁唑基和3-羥基-1-甲基吡唑基。
“?；敝窰-CO-或烷基-CO-基團(tuán)，其中烷基如本文所述。
“酰氨基”指?；?NH-基團(tuán)，其中酰基如此處所述。
“鏈烯基”指一種脂肪族烴基團(tuán)，其含有一個(gè)碳-碳雙鍵，可以是直鏈或支鏈，在鏈中有約2到約15個(gè)碳原子；優(yōu)選的鏈烯基鏈中具有2-約12個(gè)碳原子，更優(yōu)選地，在鏈中有2到約6個(gè)碳原子(例如，2到4個(gè)碳原子)。全文中所用的“支鏈的”指的是一個(gè)或多個(gè)低級(jí)烷基，如甲基、乙基或丙基連接于線性鏈上，這里是指線性鏈烯基鏈?！暗图?jí)鏈烯基”指在鏈中有約2到約4個(gè)碳原子，該鏈可以是直鏈的或支鏈的。典型的鏈烯基包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基、異丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯基、庚烯基、辛烯基、環(huán)己基丁烯基和癸烯基。
“鏈烯氧基”是鏈烯基-O-基團(tuán)，其中鏈烯基定義如上。典型的鏈烯氧基包括烯丙氧基。
“烷氧基”指烷基-O-基團(tuán)，其中烷基如此處定義。典型的烷氧基包括二氟甲氧基、甲氧基、三氟甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基和庚氧基。
“烷氧基羰基”指烷基-O-CO-基團(tuán)，其中烷基如此處定義。典型的烷氧基羰基包括甲氧基羰基和乙氧基羰基。
除非另外說(shuō)明，“烷基”指一種脂肪族烴基團(tuán)，其可以是直鏈或支鏈，鏈中有約1到15個(gè)碳原子，任選地被一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代。特定的烷基有1到約6個(gè)碳原子。除非另外說(shuō)明，“低級(jí)烷基”基團(tuán)本身或作為低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷硫基、低級(jí)烷基亞磺酰基、低級(jí)烷基磺?；徊糠值摹暗图?jí)烷基”是指一種脂肪族烴基團(tuán)，其可以是直鏈或支鏈，鏈中有1到約4個(gè)碳原子。典型的烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、3-戊基、庚基、辛基、壬基、癸基和十二烷基。典型的被一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代的烷基包括三氟甲基。
“亞烷基”指從直鏈或支鏈烷基衍生的脂肪族二價(jià)基，其中烷基如此處所述。典型的亞烷基包括亞甲基、1，2-亞乙基和1，3-亞丙基。
“亞烷二氧基”指-O-亞烷基-O-基團(tuán)，其中亞烷基定義如上。典型的亞烷二氧基包括亞甲二氧基和亞乙二氧基。
“烷基亞磺?；敝竿榛?SO-基團(tuán)，其中烷基如前面所描述的。優(yōu)選的烷基亞磺酰基為其中烷基為C1-4烷基的那些烷基亞磺?；?。
“烷基磺酰基”指烷基-SO2-基團(tuán)，其中烷基如前面所描述的。優(yōu)選的烷基磺酰基為其中烷基為C1-4烷基的那些烷基磺?；?br> “烷基磺?；被柞；敝竿榛?SO2-NH-C(＝O)-基團(tuán)，其中烷基如前面所述。優(yōu)選的烷基磺?；被柞；悄切┩榛鶠镃1-4的烷基的烷基磺酰基氨基甲?；?。
“烷硫基”指烷基-S-基團(tuán)，其中烷基如前述。典型的烷硫基包括甲硫基、乙硫基、異丙硫基和庚硫基。
“炔基”指含有碳-碳三鍵的脂肪族烴基，其可以是直鏈或支鏈的，鏈中有約2到約15個(gè)碳原子。優(yōu)選的炔基在鏈中有2到約12個(gè)碳原子；更優(yōu)選的，在鏈中有2到約6個(gè)碳原子(例如2到4個(gè)碳原子)。典型的炔基包括乙炔基、丙炔基、正丁炔基、異丁炔基、3-甲基丁-2-炔基和正戊炔基。
“芳?；敝阜蓟?CO-基團(tuán)，其中芳基如此處所述。典型的芳?；ū郊柞；?-萘?；?-萘酰基。
“芳酰基氨基”是芳?；?NH-基團(tuán)，其中芳基如前述。
作為一個(gè)基團(tuán)或基團(tuán)的一部分的“芳基”指(i)約6到約14個(gè)碳原子的任選地取代的單環(huán)或多環(huán)芳香碳環(huán)部分，如苯基或萘基；或(ii)任選地取代的部分飽和的多環(huán)芳香碳環(huán)部分，其中芳基和環(huán)烷基或環(huán)烯基稠合在一起形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，如四氫萘基、茚基或2，3-二氫化茚基環(huán)。除非另外定義，芳基可以用一個(gè)或多個(gè)芳基取代基取代，該取代基可以相同或不同，而“芳基取代基”包括，例如，?；Ⅴ０被?、烷氧基、烷氧基羰基、亞烷二氧基、烷基亞磺?；?、烷基磺?；⑼榱蚧?、芳?；?、芳?；被?、芳基、芳基烷氧基、芳基烷氧基羰基、芳基烷硫基、芳氧基、芳氧基羰基、芳基亞磺?；⒎蓟酋；?、芳硫基、羧基(或酸性等排物)、氰基、鹵素、雜芳?；?、雜芳基、雜芳基烷氧基、雜芳酰基氨基、雜芳氧基、羥基、硝基、三氟甲基、-NY3Y4、-CONY3Y4、-SO2NY3Y4、-NY3-C(＝O)烷基、-NY3SO2烷基或任選地用芳基、雜芳基、羥基或-NY3Y4取代的烷基。
“芳基烷基”指芳基-烷基-基團(tuán)，其中芳基和烷基部分如前述。優(yōu)選的芳基烷基含有C1-4烷基部分。典型的芳基烷基包括芐基、2-苯乙基和萘甲基。
“芳基烷氧基”指芳基烷基-O-基團(tuán)，其中芳基烷基如前述。典型的芳基烷氧基包括芐氧基和1-萘基甲氧基或2-萘基甲氧基。
“芳基烷氧基羰基”指芳基烷基-O-CO-基團(tuán)，其中芳基烷基如前述。典型的芳基烷氧基羰基為芐氧基羰基。
“芳基烷硫基”指芳基烷基-S-基團(tuán)，其中芳基烷基如前述。典型的芳基烷硫基為芐硫基。
“芳氧基”指芳基-O-基團(tuán)，其中芳基如前述。典型的芳氧基包括苯氧基和萘氧基，每個(gè)任選的被取代。
“芳氧基羰基”指芳基-O-C(＝O)基團(tuán)，其中芳基如前述。典型的芳氧基羰基包括苯氧基羰基和萘氧基羰基。
“芳基亞磺?；敝阜蓟?SO-基團(tuán)，其中芳基如前述。
“芳基磺?；敝阜蓟?SO2-基團(tuán)，其中芳基如前述。
“芳基磺?；被柞；敝阜蓟?SO2-NH-C(＝O)-基團(tuán)，其中芳基如前述。
“芳硫基”指芳基-S-基團(tuán)，其中芳基如前述、典型的芳硫基包括苯硫基和萘硫基。
“氮雜芳基”指約5到約10個(gè)環(huán)原子的芳香碳環(huán)部分，其中一個(gè)環(huán)原子為氮，其他環(huán)原子選自碳、氧、硫和氮。典型的氮雜芳基包括苯并咪唑基、咪唑基、吲唑啉基、吲哚基、異喹啉基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹啉基、喹唑啉基和四氫中氮茚基。
“環(huán)狀胺”指3到8元的單環(huán)環(huán)烷基環(huán)系，其中一個(gè)環(huán)碳原子被氮取代且(i)還可以含有選自O(shè)、S、SO2和NY5(其中Y5為氫、烷基、芳基、芳基烷基、-C(＝O)-R7、-C(＝O)-OR7或-SO2R7)的含有雜原子的基團(tuán)；和(ii)可以與另外的芳基(例如苯基)、雜芳基(例如吡啶基)、雜環(huán)烷基或環(huán)烷基環(huán)稠合形成二環(huán)或三環(huán)環(huán)系。典型的環(huán)狀胺包括吡咯烷、哌啶、嗎啉、哌嗪、二氫吲哚、吡啶并二氫吲哚(pyrindoline)、四氫喹啉等基團(tuán)。
“環(huán)烯基”指非芳香族的含有至少一個(gè)碳-碳雙鍵且有約3個(gè)到約10個(gè)碳原子的單環(huán)或多環(huán)系統(tǒng)。典型的單環(huán)環(huán)烯基環(huán)包括環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基和環(huán)庚烯基。
“環(huán)烷基”指具有約3個(gè)到約10個(gè)碳原子、并且可選的被氧取代的飽和的單環(huán)或二環(huán)系統(tǒng)。典型的單環(huán)環(huán)烷基環(huán)包括C3-8環(huán)烷基環(huán)，如環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。
“環(huán)烷基烷基”指環(huán)烷基-烷基-基團(tuán)，其中環(huán)烷基和烷基部分如前述。典型的單環(huán)烷基烷基包括環(huán)丙基甲基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基甲基和環(huán)庚基甲基。
“鹵代”或“鹵素”指氟、氯、溴或碘。優(yōu)選為氟和氯。
“雜芳?；敝鸽s芳基-C(＝O)-基團(tuán)，其中雜芳?；绱颂幩?。典型的雜芳?；ㄟ拎驶?br> “雜芳酰基氨基”指雜芳?；?NH-基團(tuán)，其中雜芳酰基部分如前述。
作為基團(tuán)或基團(tuán)的一部分的“雜芳基”指(i)有約5到約10個(gè)環(huán)原子的任選取代的芳香族單環(huán)或多環(huán)有機(jī)部分，其中環(huán)原子的一個(gè)或多個(gè)不是碳，例如為氮、氧或硫(這些基團(tuán)的例子包括苯并咪唑基、苯并噻唑基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、中氮茚基、異噁唑基、異喹啉基、異噻唑基、噁二唑基、吡嗪基、噠嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、 喹唑啉基、喹啉基、1，3，4-噻二唑基、噻唑基、噻吩基和三唑基，任選地被如上所定義(除了另外定義)的一個(gè)或多個(gè)芳基取代基所取代)；(ii)任選取代的部分飽和的多環(huán)雜碳環(huán)部分，其中一個(gè)雜芳基和環(huán)烷基或環(huán)烯基稠合形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)(這些基團(tuán)的例子包括吡啶并二氫化茚基(pyrindanyl)基團(tuán)，任選地被一個(gè)或多個(gè)上述所定義的(除了另外定義)“芳基取代基”所取代)。任選的取代基包括(除非另外定義)如上所定義的一種或多種“芳基取代基”。
“雜芳基烷基”指雜芳基-烷基-基團(tuán)，其中雜芳基和烷基部分如前述。優(yōu)選的雜芳基烷基包含C1-4烷基部分。典型的雜芳基烷基包括吡啶基甲基。
“雜芳基烷氧基”指雜芳基烷基-O-基團(tuán)，其中雜芳基烷基如前述。典型的雜芳基烷氧基包括任選取代的吡啶甲氧基。
“雜芳氧基”指雜芳基-O-基團(tuán)，其中雜芳基如前述。典型的雜芳氧基包括任選取代的吡啶氧基。
“雜芳基磺?；被柞；敝鸽s芳基-SO2-NH-C(＝O)基團(tuán)，其中雜芳基如前述。
“雜環(huán)烷基”指(i)含有選自O(shè)、S和NY5的一個(gè)或多個(gè)雜原子或含雜原子的基團(tuán)且可任選地被氧取代的3到7個(gè)環(huán)原子的環(huán)烷基；(ii)部分飽和的多環(huán)的雜碳環(huán)部分，其中芳(或雜芳)環(huán)(每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)“芳基取代基”取代)和雜環(huán)烷基稠合形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。(這種基團(tuán)的示例包括苯并二氫吡喃基、二氫苯并呋喃基、二氫吲哚基和吡啶并二氫吲哚基)。
“雜環(huán)烷基烷基”指雜環(huán)烷基-烷基-基團(tuán)，其中雜環(huán)烷基和烷基部分如前述。
“前藥”指通過(guò)代謝方式(例如通過(guò)水解)可體內(nèi)轉(zhuǎn)變成式(I)化合物的化合物，包括其N(xiāo)-氧化物。例如含有羥基的式(I)化合物的酯可以通過(guò)體內(nèi)水解轉(zhuǎn)變成母體分子。備選地，含有羧基的式(I)化合物的酯可以通過(guò)體內(nèi)水解轉(zhuǎn)變成母體分子。
含有羥基的式(I)化合物的合適的酯為，例如乙酸酯、檸檬酸酯、乳酸酯、酒石酸酯、丙二酸酯、草酸酯、水楊酸酯、丙酸酯、琥珀酸酯、延胡索酸酯、馬來(lái)酸酯、亞甲基-二-β-羥基萘甲酸酯、龍膽酸酯、羥乙基磺酸酯、二-p-甲苯甲酰酒石酸酯、甲磺酸酯、乙磺酸酯、苯磺酸酯、p-甲苯磺酸酯、環(huán)己基氨基磺酸酯和奎尼酸酯。
合適的含有羧基的式(I)化合物的酯為，例如，F(xiàn).J.Leinweber，DrugsMetab.Res.，1987，18，379頁(yè)所描述的那些。
在-L1-Y部分不僅含有羧基而且含有羥基的式(I)化合物的合適的酯包括通過(guò)在所述羧基和羥基之間脫水形成的內(nèi)酯。這些內(nèi)酯的例子包括己內(nèi)酯和丁內(nèi)酯。
一類(lèi)特別有用的含有羥基的式(I)化合物的酯可以從選自由Bundgaard等，J.Med.Chem.，1989，32，2503-2507頁(yè)所描述的酸部分形成，并且包括取代的(氨基甲基)苯甲酸酯，例如二烷基氨基-甲基苯甲酸酯，其中兩個(gè)烷基可以連接在一起和/或被氧原子或被任選取代的氮原子(例如烷基化氮原子，更特別地，(嗎啉基甲基)苯甲酸酯，例如，3-或4-(嗎啉基甲基)-苯甲酸酯和(4-烷基哌嗪-1-基)苯甲酸酯)所打斷，例如3-或4-(4-烷基哌嗪-1-基)苯甲酸酯。
當(dāng)本發(fā)明化合物含有羧基或足夠的酸性等排物，可以形成堿加成堿鹽，并且它們是一種更方便地使用形式；實(shí)踐中，鹽形式的使用和游離酸形式的使用相當(dāng)。可用于制備堿加成鹽的堿包括優(yōu)選地那些當(dāng)和游離酸結(jié)合時(shí)形成藥學(xué)上可接受的鹽的堿，也就是說(shuō)，在所述鹽的藥用劑量范圍內(nèi)，鹽中的陽(yáng)離子對(duì)患者是無(wú)毒的，這樣游離堿的內(nèi)在有益抑制作用不會(huì)被陽(yáng)離子的副作用所破壞。本發(fā)明范圍內(nèi)藥學(xué)上可接受的鹽(包括那些衍生自堿金屬或堿土金屬的鹽)包括衍生自下面堿的鹽氫化鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鋁、氫氧化鋰、氫氧化鎂、氫氧化鋅、氨、乙二胺、N-甲基-葡萄糖胺、賴(lài)氨酸、精氨酸、鳥(niǎo)氨酸、膽堿、N，N’-二芐基乙二胺、氯代普魯卡因、二乙醇胺、普魯卡因、N-芐基苯乙胺、二乙胺、哌嗪、三(羥甲基)氨基甲烷、氫氧化四甲基銨，等等。
本發(fā)明的一些化合物是堿性的，這些化合物可以游離堿形式或其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽的形式使用。
酸加成鹽是一種更方便使用的形式；實(shí)踐中，使用鹽的形式和使用游離堿的形式相當(dāng)?？捎糜谥苽渌峒映甥}的酸包括優(yōu)選地當(dāng)和堿結(jié)合時(shí)產(chǎn)生藥學(xué)上可接受的鹽的那些酸，即藥用劑量的鹽的陰離子對(duì)病人無(wú)毒，從而有機(jī)堿內(nèi)在的有利抑制作用不會(huì)被陰離子的副作用破壞。盡管優(yōu)選所述堿性化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，但是所有酸加成鹽都可用作游離堿形式的來(lái)源，即使該特定鹽本身僅可作為中間產(chǎn)物，例如，當(dāng)生成該鹽用于純化和鑒定，或者當(dāng)其用作通過(guò)離子交換方法制備藥學(xué)上可接受的鹽的中間體的時(shí)候。本發(fā)明范圍內(nèi)藥學(xué)上可接受的鹽包括衍生自無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸的鹽，包括氫鹵化物(例如鹽酸鹽和氫溴酸鹽)、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、氨基磺酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、丙二酸鹽、草酸鹽、水楊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、延胡索酸鹽、馬來(lái)酸鹽、亞甲基-二-β-羥基萘甲酸鹽、龍膽酸鹽、羥乙基磺酸鹽、二-p-甲苯甲酰酒石酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、p-甲苯磺酸鹽、環(huán)己基氨基磺酸鹽和奎尼酸鹽。
本發(fā)明化合物的鹽除了它們本身可用作活性化合物外，還可用于例如，通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)利用鹽和母化合物、副產(chǎn)物和/或起始物質(zhì)的溶解度不同純化化合物。
對(duì)于上面的式(I)，具體優(yōu)選下面的定義R1具體可以代表(i)氫；
(ii)C1-4烷基[例如-CH3或-CH2CH3]；(iii)鹵代C1-4烷基[例如-CH2CF3]；(iv)羥基取代的C1-4烷基[例如-CH2OH、-CH2CH2OH或-CH2CH2CH2OH]；(v)-N(R6)C(＝O)-R7取代的C1-4烷基[例如-CH2CH2CH2NHC(＝O)CH3]；(vi)-C(＝O)-NY1Y2取代的C1-4烷基[例如 或(vii)羥基取代的環(huán)烷基烷基[例如 ]。
特別優(yōu)選R1代表氫、-CH3、CH2CH3-CH2CF3或 的式(I)化合物。R1更特別地代表氫。
R2可特別地代表(i)羧基或酸性等排物(例如 )；(ii)羥基；(iii)羧基取代的烷基[例如-CH2CH2CO2H]；(iv)雜芳基[例如 或吡啶基]；(v)-OR4，其中R4為烷基[例如-OCH3]；(vi)-OR4，其中R4為被一個(gè)或多個(gè)羥基取代的烷基或環(huán)烷基烷基[例如-OCH2CH2OH、-OCH2CH2CH2OH、-OCH(CH3)CH2OH、-OCH2CH(OH)CH3、 或-OCH2CH(OH)CH2OH]；(vii)-OR4，其中R4是被一個(gè)或多個(gè)烷氧基取代的烷基[例如-OCH(CH3)CH2OCH3]；(viii)-OR4，其中R4是被一個(gè)或多個(gè)羧基取代的烷基或環(huán)烷基[例如-OCH2CO2H、-OCH(CH3)CO2H或 (ix)-OR4，其中R4是被-C(＝O)-NY1Y2取代的環(huán)烷基[例如 或 (x)-C(＝O)-R，其中R為烷基[例如-C(＝O)-CH3]；(xi)-C(＝O)-NY1Y2[例如-CONH2、-CONHCH3、-CONHCH(CH2OH)2、-CONHCH2CH2OH、-CONHC(CH3)2CH2OH、-CONHCH2CH2OCH3、-CONHCH2CH2CONH2、-CONHCH2C(CH3)2OH或 ]或(xii)-N(R6)-C(＝O)-R7[例如-NHC(＝O)CH3]。
特別優(yōu)選R2代表-OCH3或-CONHC(CH3)2CH2OH的式(I)化合物。R2更優(yōu)選地代表-OCH3。
R3可特別地代表(i)氫；(ii)氰基；(iii)任選取代的芳基(例如苯基)；(iv)任選取代的雜芳基(例如任選取代的吡啶基或任選取代的吲哚基，特別地 或 (v)烷基(例如甲基或乙基)；(vi)被一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代的烷基(如三氟甲基)；(vii)被-C(＝O)-NY1Y2、特別是被-CH2-CH2-C(＝O)NHCH3取代的烷基；(viii)被-OR7取代的烷基(例如-CH2-CH2-OCH3)；(ix)ZR4，特別是-OCH3、-OCH2CH3、-OCF2H或-OCH2-CH2-OCH3；(x)-C(＝O)-OR5，特別是-C(＝O)-OH；(xi)-C(＝O)-NY1Y2，特別地是-C(＝O)NHCH3或-C(＝O)-NH-C(CH3)2-CH2OH；和(xii)-NY1Y2，特別地 優(yōu)選R3代表氫、氰基、吡啶基、三氟甲基、-CH2-CH2-C(＝O)NHCH3、-OCF2H、-C(＝O)-NH-C(CH3)2-CH2OH或 的式(I)化合物。更特別地，R3代表-OCH3。
R2優(yōu)選地連接于吲哚環(huán)的5位。
基團(tuán) 優(yōu)選地連接于吲哚環(huán)的3位。
應(yīng)該理解，本發(fā)明涵蓋此處所提及的特定的和優(yōu)選的基團(tuán)的所有適當(dāng)?shù)慕M合。
本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物為

和相應(yīng)的N-氧化物，以及它們的前藥，這些化合物與N-氧化物和前藥的藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物(例如，水合物)。
特別優(yōu)選的本發(fā)明化合物為
4-甲氧基-6-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；和相應(yīng)的N-氧化物，以及它們的前藥，這些化合物與N-氧化物和前藥的藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物(例如，水合物)。
本發(fā)明化合物顯示出有用的藥理活性，因此可加入藥物組合物中，用于治療患某些疾病的病人。這樣，根據(jù)另外一方面，本發(fā)明提供了用于治療的本發(fā)明化合物和含有本發(fā)明化合物的組合物。
根據(jù)文獻(xiàn)中描述的試驗(yàn)和下面描述的體外方法，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物可以阻斷激酶催化活性，并且相信試驗(yàn)結(jié)果和人類(lèi)與其他哺乳動(dòng)物中的藥理學(xué)活性相關(guān)。這樣，在再一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于治療患者的本發(fā)明化合物和含有本發(fā)明化合物的組合物，所述患者患有或者易患有的癥狀可以通過(guò)施用蛋白激酶(例如Syk、FAK、KDR或Aurora 2)抑制劑、特別是Syk激酶抑制劑而得到改善。例如，本發(fā)明化合物可用于治療炎性疾病，例如，哮喘、炎性皮膚病(例如，牛皮癬、皰疹樣皮炎、濕疹、壞死性血管炎和皮膚性血管炎、大泡性疾病)；過(guò)敏性鼻炎和過(guò)敏性結(jié)膜炎；關(guān)節(jié)發(fā)炎，包括關(guān)節(jié)炎、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和其他關(guān)節(jié)炎癥狀如類(lèi)風(fēng)濕性脊椎炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、創(chuàng)傷性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)疹性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎。這些化合物也可用于治療慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、急性滑膜炎、自身免疫性糖尿病、自身免疫性腦脊髓炎、結(jié)腸炎、動(dòng)脈粥樣硬化、外周血管病、心血管疾病、多發(fā)性硬化癥、再狹窄、心肌炎、B細(xì)胞淋巴瘤、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、移植物抗宿主疾病和其他移植相關(guān)的排斥反應(yīng)、癌癥和腫瘤(如結(jié)直腸癌、前列腺癌、乳腺癌、甲狀腺癌、結(jié)腸癌和肺癌)和炎性腸疾病。此外，這些化合物可用作腫瘤抗血管生成劑。
本發(fā)明治療方法的一個(gè)特定實(shí)施方案是治療哮喘。
本發(fā)明治療方法的另一個(gè)特定實(shí)施方案是治療牛皮癬。
本發(fā)明治療方法的另一個(gè)特定實(shí)施方案是治療關(guān)節(jié)炎癥。
本發(fā)明治療方法的另一個(gè)特定實(shí)施方案是治療炎性腸疾病。
本發(fā)明治療方法的另一個(gè)特定實(shí)施方案是治療癌癥和腫瘤。
根據(jù)本發(fā)明的再一個(gè)方面，提供了治療患有或易患可以通過(guò)施用蛋白激酶(例如Syk、FAK、KDR或Aurora 2)抑制劑改善的癥狀(例如本文前面描述的癥狀)的人或動(dòng)物患者的方法，該方法包括對(duì)患者施用有效量的本發(fā)明化合物或含有本發(fā)明化合物的組合物?！坝行Я俊敝赣行б种频鞍准っ溉鏢yk、FAK、KDR或Aurora 2的催化活性的本發(fā)明化合物的量，因此可以產(chǎn)生有益的治療效果。
應(yīng)該理解，此處所指的治療包括預(yù)防性治療和已確診的癥狀的治療。
本發(fā)明還包括藥物組合物，該藥物組合物含有至少一種本發(fā)明化合物及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
可通過(guò)適宜方法施用本發(fā)明化合物。實(shí)踐中，本發(fā)明化合物可以腸胃外地、局部地、直腸地、口服或吸入施用，特別是口服施用。
根據(jù)本發(fā)明的組合物可根據(jù)慣用方法，用一種或多種藥學(xué)上可接受的輔助劑或賦形劑制備。輔助劑本身包括稀釋劑、無(wú)菌含水介質(zhì)和各種無(wú)毒有機(jī)溶劑。組合物可以以片劑、丸劑、散劑、粉劑、含水溶液或混懸液、注射液、酏劑或糖漿劑的形式提供，并且可以含有一種或多種選自甜味劑、矯味劑、著色劑和穩(wěn)定劑的物質(zhì)，由此得到藥學(xué)上可接受的制劑。載體的選擇和載體中活性物質(zhì)的含量根據(jù)活性化合物的溶解度和化學(xué)特性、特定施用模式和藥學(xué)實(shí)踐中需要遵守的規(guī)定來(lái)確定。例如，賦形劑(如乳糖、檸檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸二鈣)和崩解劑(如淀粉、藻酸和一些硅酸鹽復(fù)合物)與潤(rùn)滑劑(如硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉和滑石粉)可用于制備片劑。為了制備膠囊，有利的是使用乳糖和高分子量的聚乙二醇。當(dāng)使用含水混懸液時(shí)，它們可含有乳化劑或利于懸浮的試劑。也可使用稀釋劑如蔗糖、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甘油和氯仿或它們的混合物。
對(duì)于腸胃外施用，可以采用溶于植物油(例如芝麻油、花生油或橄欖油)或含水有機(jī)溶劑溶液(如水和丙二醇)、注射用有機(jī)酯(如油酸乙酯)以及藥學(xué)上可接受的鹽的無(wú)菌含水溶液中的本發(fā)明產(chǎn)物的乳劑、混懸劑和溶液。根據(jù)本發(fā)明的產(chǎn)物的鹽溶液特別適合用于肌內(nèi)或皮下注射施用。含水溶液(還包含溶于純蒸餾水的鹽溶液)可用于靜脈內(nèi)施用，條件是對(duì)它們的pH適當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)，以使它們被足夠量的葡萄糖或氯化鈉良好地緩沖并且使其等滲，可以通過(guò)加熱、照射或微濾使它們無(wú)菌。
對(duì)于局部施用，可以使用含有本發(fā)明化合物的凝膠劑(基于水或醇)、霜?jiǎng)┗蜍浉鄤?。本發(fā)明化合物也可以加入凝膠或基質(zhì)中以貼劑形式使用，這將使得化合物經(jīng)過(guò)皮膚屏障有控制地釋放。
對(duì)于吸入性施用，可將本發(fā)明化合物溶于或懸浮于合適的載體以用于噴霧器或懸浮劑或氣溶膠中或者吸收或吸附于合適的固相載體以用于干粉吸入器。
直腸施用的固相組合物包括根據(jù)已知方法制備并且含有至少一種本發(fā)明化合物的栓劑。
本發(fā)明組合物中活性成分的百分比可以改變，該百分比應(yīng)為足以得到合適的劑量所必需的比例。顯然，可以在大致相同的時(shí)間施用數(shù)個(gè)單位劑型。所使用的劑量將由醫(yī)生確定，并且取決于所需的治療效果、施用途徑和治療時(shí)間以及病人狀況。
對(duì)于成年人而言，吸入劑量通常為每天約0.001到約50、優(yōu)選約0.001到約5mg/kg體重，口服施用為每天約0.01到約100、優(yōu)選0.1到70、更優(yōu)選0.5到10mg/kg體重，靜脈內(nèi)施用為約0.001到約10、優(yōu)選0.01到1mg/kg體重。對(duì)于每個(gè)特定的病例，將根據(jù)所要治療的對(duì)象的不同因素，如年齡、體重、一般健康狀態(tài)和其他能夠影響該醫(yī)藥產(chǎn)品的功效的特征來(lái)確定。
可根據(jù)需要經(jīng)常性地施用本發(fā)明化合物以得到所需的療效。有些病人可能對(duì)或高或低的劑量反應(yīng)迅速，并且隨后用更低的維持劑量就足夠了。而對(duì)于其他病人，可能需要長(zhǎng)期的治療，根據(jù)每個(gè)特定病人的生理需求，可每天給予1到4個(gè)劑量。通常而言，該活性產(chǎn)物可以口服施用，每天1到4次。當(dāng)然，對(duì)于某些病人，可能需要每天不超過(guò)1到2個(gè)劑量。
可以通過(guò)實(shí)施或修改已知的方法制備本發(fā)明化合物，這些方法指迄今所使用或文獻(xiàn)中描述的方法，例如R.C.Larock在Comprehensive OrganicTransformations，VCH publishers，1989中所描述的方法。
在下文描述的反應(yīng)中，可能需要對(duì)反應(yīng)性功能基團(tuán)，例如羥基、氨基、亞氨基、硫代或羧基(這些基團(tuán)是終產(chǎn)物中所需的)進(jìn)行保護(hù)以避免它們參與不需要的反應(yīng)。可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)慣例使用常用的保護(hù)性基團(tuán)，例如，見(jiàn)T.W.Greene和P.G.M.Wuts的“Protective Groups in Organic Chemistry”John Wiley and Sons，1991。
通過(guò)式(XXVIII)化合物(R3如前定義，X1為鹵素原子(優(yōu)選碘)或三氟甲磺酸根) 與式(XXIX)化合物(其中R1和R2如前定義) 反應(yīng)制備式(I)化合物(其中，R1、R2和R3如前面所定義)。在例如復(fù)合金屬催化劑如四(三苯基膦)鈀(0)和碳酸氫鈉的存在下，在含水二甲基甲酰胺中，在最高溫度為回流溫度下可方便地進(jìn)行該偶合反應(yīng)。用例如甲苯磺?；Ｗo(hù)化合物(XXVIII)中的吡咯NH，用例如叔丁氧基羰基保護(hù)化合物(XXIX)中的吲哚NH可以方便地進(jìn)行本反應(yīng)。
通過(guò)相應(yīng)的式(I)化合物(其中R2和R3如前定義，R1為氫)與適宜的烷基鹵化物R2-X2(其中R2為任選取代的烷基，X2為鹵素)的反應(yīng)制備式(I)化合物(其中R2和R3如前定義，R1為任選取代的烷基)。該反應(yīng)特別適于制備式(I)化合物(其中R1為嗎啉基乙?；?。
也可以通過(guò)本發(fā)明其他化合物的互變制備本發(fā)明化合物。
這樣，例如，通過(guò)相應(yīng)酯的水解制備含有羧基的式(I)化合物。通過(guò)堿性水解(用堿，如堿金屬氫氧化物，例如氫氧化鋰或堿金屬碳酸鹽，例如碳酸鈉)在水/有機(jī)溶劑混合物的存在下，用有機(jī)溶劑如二噁烷、四氫呋喃或甲醇，在從約環(huán)境溫度到約回流溫度的溫度下，可方便地進(jìn)行水解。也可以在水/惰性有機(jī)溶劑混合物的存在下，用有機(jī)溶劑如二噁烷或四氫呋喃，在溫度從約50℃到約80℃下用無(wú)機(jī)酸(如鹽酸)酸性水解進(jìn)行酯的水解。
作為含有羧基的式(I)化合物的另一個(gè)例子可以通過(guò)用標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件(例如用三氟乙酸在約室溫時(shí))，酸催化除去相應(yīng)叔丁基酯的叔丁基來(lái)制備。
作為含有羧基的式(I)化合物的另一個(gè)例子可以通過(guò)氫化相應(yīng)芐基酯來(lái)制備?？梢栽诩姿徜@與負(fù)載于惰性載體(如碳)上的合適的金屬催化劑(例如鈀)的存在下，優(yōu)選在溶劑(如甲醇或乙醇)中、于約回流溫度下進(jìn)行該反應(yīng)。或者，也可以在任選負(fù)載于惰性載體(如碳)上的合適的金屬催化劑(例如鉑或鈀)的存在下，優(yōu)選地在溶劑(如甲醇或乙醇)中進(jìn)行該反應(yīng)。
作為互變方法的另一個(gè)實(shí)例，可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)肽偶合方法(例如在溶于四氫呋喃(或二甲基甲酰胺)中的O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽和三乙胺(或二異丙基乙胺)的存在下，于室溫偶合)，將含有羧基的式(I)化合物與式HNY1Y2的胺偶合得到酰氨鍵，從而制備含有-C(＝O)-NY1Y2基團(tuán)的式(I)化合物。該方法特別適合用于制備(i)式(I)化合物，其中R3代表-C(＝O)-NY1Y2，或(ii)式(I)化合物，其中R2代表-C(＝O)-NY1Y2。也可以通過(guò)使含有羧基的式(I)化合物與N-{(二甲基氨基)(1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-1-基)亞甲基}-N-甲基甲銨六氟磷酸鹽N-氧化物，在合適的堿(如二異丙基乙胺)的存在下、于惰性溶劑(如二甲基甲酰胺)中、在約室溫下反應(yīng)，然后與式HNY1Y2的胺反應(yīng)(氯化銨可用于制備含有-C(＝O)-NH2基團(tuán)的式(I)化合物)反應(yīng)進(jìn)行該偶合反應(yīng)。也可以通過(guò)使含有羧基的式(I)化合物與2-(1H-苯并三唑-1-基)1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽在干燥二甲基甲酰胺中反應(yīng)，然后在二異丙基乙胺存在下與式HNY1Y2的胺反應(yīng)進(jìn)行該偶合反應(yīng)。
作為互變方法的另一個(gè)實(shí)例，可通過(guò)還原含有-CHO或-CO2R7(其中R7是低級(jí)烷基)的相應(yīng)式(I)化合物，來(lái)制備含有-CH2OH的式(I)化合物。例如，通過(guò)在惰性溶劑(如四氫呋喃)中，在從約室溫到約回流溫度下，使其與氫化鋁鋰反應(yīng)方便地進(jìn)行還原反應(yīng)。
作為互變方法的另一個(gè)實(shí)例，可通過(guò)在惰性溶劑(如二氯甲烷)中，在從約0℃到約室溫的溫度下，使相應(yīng)的式(I)化合物(其中R1為甲氧基)與路易斯酸(如三溴化硼)反應(yīng)制備式(I)化合物(其中R2為羥基)。
作為互變方法的另一個(gè)實(shí)例，可采用標(biāo)準(zhǔn)烷基化條件通過(guò)用式(XXX)化合物使相應(yīng)的式(I)化合物(其中R2為羥基)烷基化R4-X3(XXX)其中R4如前定義，X3為鹵素原子(優(yōu)選溴)或甲苯磺酰基)制備式(I)化合物，其中R2為-OR4(其中R4為任選取代的烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基或雜環(huán)烷基烷基)?？梢栽诶鐗A(如堿金屬碳酸鹽(例如碳酸鉀或碳酸銫)和堿金屬醇鹽(例如叔丁醇鉀)或堿金屬氫化物(例如氫化鈉))的存在下，于二甲基甲酰胺或二甲亞砜中，在從約0℃到約100℃的溫度下進(jìn)行該烷基化反應(yīng)。
作為互變方法的另一個(gè)實(shí)例，可通過(guò)用例如前面描述的那些標(biāo)準(zhǔn)烷基化條件，用適宜的式(XXXI)鹵化物R1-X4(XXXI)
其中R1為烷基、鏈烯基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基，或被-C(＝O)NY1Y2、-OR7、-C(＝O)-OR7、-NY1Y1取代的烷基，X4為鹵素原子，優(yōu)選溴，將相應(yīng)的式(Ia)化合物(其中R1為氫)烷基化，來(lái)制備式(I)化合物，其中R1為烷基、鏈烯基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基，或被-C(＝O)NY1Y2、-OR7、-C(＝O)-OR7、-NY1Y1取代的烷基。
作為互變方法的另一個(gè)實(shí)例，可通過(guò)氧化含有-S-鍵的相應(yīng)化合物制備含有亞砜的式(I)化合物。例如，通過(guò)優(yōu)選地在惰性溶劑(例如二氯甲烷)中，優(yōu)選地在或接近室溫下、與過(guò)氧酸(例如3-氯過(guò)苯甲酸)反應(yīng)，或者通過(guò)溶于介質(zhì)(如含水甲醇，緩沖到pH約為5)的過(guò)氧單硫酸氫鉀，在約0℃和室溫的溫度之間反應(yīng)，方便地進(jìn)行氧化反應(yīng)。對(duì)于含有酸性易變基團(tuán)的化合物而言，優(yōu)選采用后一種方法。
作為互變方法的另一個(gè)實(shí)例，可通過(guò)氧化含有-S-或亞砜鍵的相應(yīng)化合物制備含有砜鍵的式(I)化合物。例如，優(yōu)選在惰性溶劑(例如二氯甲烷)中，優(yōu)選在或接近室溫下與過(guò)氧酸(例如，3-氯過(guò)苯甲酸)反應(yīng)，方便地進(jìn)行氧化反應(yīng)。
作為互變方法的另一個(gè)實(shí)例，可通過(guò)在三乙胺的存在下，通過(guò)使含有-C(＝O)-NH2基團(tuán)的相應(yīng)式(I)化合物與五氯化磷反應(yīng)制備含有氰基的式(I)化合物?？梢栽诙栊匀軇?如四氫呋喃)，在約回流溫度下方便地進(jìn)行該反應(yīng)。
作為互變方法的另一個(gè)實(shí)例，可通過(guò)在氫氧化鈉存在下，使含有氰基的相應(yīng)式(I)化合物與過(guò)氧化氫反應(yīng)，來(lái)制備含有-C(＝O)-NH2基團(tuán)的式(I)化合物?？梢栽诩s室溫的溫度下、在甲醇中方便地進(jìn)行該反應(yīng)。
作為互變方法的另一個(gè)實(shí)例，可通過(guò)使相應(yīng)的式(I)化合物(其中R3為鹵素(例如氯)與式HNY1Y2的胺(其中Y1和Y2如前述)反應(yīng)，來(lái)制備式(I)化合物(其中R3為-NY1Y2(其中Y1和Y2如前定義的))。
作為互變方法的另一個(gè)實(shí)例，可通過(guò)在鋅粉、[1’1-二(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)復(fù)合物和二氯甲烷(催化量)以及N，N-二甲基乙酰胺存在下，在最高約150℃下，使式(I)化合物(其中X1為鹵素，優(yōu)選氯)和氰化鋅反應(yīng)制備式(I)化合物(其中R3為氰基)。
作為互變方法的另一個(gè)實(shí)例，可通過(guò)使含有-C(＝O)-OH基團(tuán)的相應(yīng)式(I)化合物與式R5-OH的醇反應(yīng)制備含有-C(＝O)-OR5基團(tuán)(其中R5如前面定義)的式(I)化合物。例如，當(dāng)R5為叔丁基時(shí)，可以在1，1’-羰基二咪唑和1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯存在下，在約室溫的溫度下方便地進(jìn)行該反應(yīng)。
可以理解，本發(fā)明化合物可能含有不對(duì)稱(chēng)中心。這些不對(duì)稱(chēng)中心可以獨(dú)立的為R或S構(gòu)型。一些本發(fā)明化合物也可顯示出幾何異構(gòu)現(xiàn)象，這對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。應(yīng)該理解，本發(fā)明包括此處上面的式(I)化合物的單獨(dú)的幾何異構(gòu)體和立體異構(gòu)體以及它們的混合物，包括外消旋混合物。通過(guò)實(shí)施或修改已知方法，例如層析技術(shù)和重結(jié)晶技術(shù)可以從它們的混合物中分離這些異構(gòu)體，或者可以由它們的中間體的合適的異構(gòu)體分別制備它們。
根據(jù)本發(fā)明的再一個(gè)方面，可通過(guò)實(shí)施或修改已知的方法，使游離堿與適宜的酸反應(yīng)，來(lái)制備本發(fā)明化合物的酸加成鹽。例如，可以通過(guò)將游離堿溶解于含有適宜的酸的水或含水醇溶液或其他合適的溶劑中，并通過(guò)蒸發(fā)溶液分離鹽，或者通過(guò)使游離堿與酸在有機(jī)溶劑中反應(yīng)(此時(shí)鹽可以直接分離或者可以通過(guò)濃縮溶液得到)，來(lái)制備本發(fā)明化合物的酸加成鹽。
通過(guò)實(shí)施或修改已知方法，可以從鹽中再生本發(fā)明化合物的酸加成鹽。例如，通過(guò)用堿(例如，碳酸氫鈉或氨水溶液)處理可以從酸加成鹽中再生本發(fā)明母體化合物。
通過(guò)實(shí)施或修改已知方法，可以從它們的堿加成鹽中再生本發(fā)明化合物。例如，通過(guò)用酸(例如鹽酸)處理，可以從它們的堿加成鹽中再生本發(fā)明母體化合物。
在本發(fā)明方法中，可以方便地制備或形成溶劑合物(例如水合物)形式的本發(fā)明化合物。用有機(jī)溶劑如二噁烷、四氫呋喃或甲醇，從含水/有機(jī)溶劑混合物中通過(guò)重結(jié)晶方便地制備本發(fā)明化合物的水合物。
根據(jù)本發(fā)明再一個(gè)方面，通過(guò)實(shí)施或修改已知方法，使游離酸與合適的堿反應(yīng)，制備本發(fā)明化合物的堿加成鹽。例如，通過(guò)將游離酸溶解于含有合適的堿的水或含水醇溶液或其它合適的溶劑中，蒸發(fā)溶液分離鹽，或者通過(guò)使游離酸和堿在有機(jī)溶劑中反應(yīng)(此時(shí)可以直接分離鹽或通過(guò)濃縮溶液得到鹽)，制備本發(fā)明化合物的堿加成鹽。
通過(guò)實(shí)施或修改已知方法(例如在參考實(shí)施例中描述的方法或者它們明顯的化學(xué)等同方法)，可以制備起始物質(zhì)和中間體。
可以如方案1所示制備式(XXVIII)的中間體(其中R3如此前定義，X1為碘代，吡咯NH用甲苯磺?；Ｗo(hù))。
方案1 這樣，例如，可以通過(guò)下列步驟制備式(XXXIV)化合物(i)室溫下、在惰性溶劑(如甲苯)中、在氫氧化鈉和四丁基硫酸銨水溶液存在下，使式(XXXII)化合物與對(duì)甲苯磺?；确磻?yīng)；(ii)然后在約-78℃下、在四氫呋喃中，用丁基鋰處理產(chǎn)生的式(XXXIII)化合物；使碘與產(chǎn)生的陰離子反應(yīng)。
通過(guò)使式(XXXIII)化合物(其中R3為鹵素，例如氯)與式R3BEt2的硼烷(其中R3為雜芳基)反應(yīng)，制備式(XXXIII)中間體(其中R3為雜芳基)。也可以在最高溫度為回流溫度下、在四(三苯基膦)鈀(0)和碳酸鉀存在下、在四氫呋喃中，方便地進(jìn)行該反應(yīng)。該反應(yīng)特別適于制備式(XXXIII)(其中R3為吡啶基)化合物。
也可以在最高溫度為回流溫度下、在四(三苯基膦)鈀(0)和碳酸氫鈉水溶液存在下、于二甲基甲酰胺中，使式(XXXIII)化合物(其中R3為鹵素，例如氯)與式R3B(OH)2的雜芳基硼酸反應(yīng)，制備式(XXXIII)中間體(其中R3為雜芳基)。該反應(yīng)特別適于制備式(XXXIII)化合物(其中R3為任選取代的吲哚基)。
可以在溫度最高約65℃下，使式(XXXIII)化合物(其中R3為鹵素，例如氯)與式R4ONa化合物(通過(guò)式R4OH的醇與鈉反應(yīng)制備)反應(yīng)，制備式(XXXIII)中間體(其中R3為OR4， R4如此前定義)。該反應(yīng)特別適于制備式(XXXIII)(其中R3為OMe)化合物。
用下面的說(shuō)明性實(shí)施例和參考實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步闡明，但本發(fā)明的范圍并不受這些實(shí)施例和參考實(shí)施例的任何限制。
確定保留時(shí)間(RT)的高壓液相層析-質(zhì)譜(LC-MS)的條件如下方法AHypersil BDS C-18柱(4.6mm×50mm)反相操作，梯度洗脫條件為(A)含有0.05％三氟乙酸的水和(B)含有0.05％三氟乙酸的乙腈的混合物作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫0.00分鐘100％A0％B；2分鐘時(shí)線性梯度到100％B；然后保持直到3.5分鐘；流速1mL/min，約0.25ml/min分流進(jìn)入質(zhì)譜儀；注射體積10μL；Hewlett Packard Model HP1100系列UV檢測(cè)器，波長(zhǎng)200nm；蒸發(fā)光散射(ELS)檢測(cè)-溫度46℃，氮?dú)鈮?巴。
方法B用HyPURITY C-18-5μ柱(4.6mm×50mm)Gilson 215注射器型操作，梯度洗脫條件為(A)含有0.05％三氟乙酸的水和(B)含有0.05％三氟乙酸的乙腈的混合物作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫0.00分鐘95％A5％B；4分鐘時(shí)線性梯度到95％B；然后在4.5分鐘時(shí)到5％，然后保持直到6分鐘；注射體積5μL；流速1mL/min進(jìn)入U(xiǎn)V(DAD)檢測(cè)器，約0.100ml/min分流進(jìn)入質(zhì)譜儀(正性電噴霧)，剩余的進(jìn)入ELS檢測(cè)器。
方法C與HP 1100型連接的Micromass LCT型。用HP G1315A型光電二極管陣列檢測(cè)器在200-600nm波長(zhǎng)范圍和Sedex 65型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)化合物豐度。在180到800范圍內(nèi)得到質(zhì)譜。采用MicromassMassLynx軟件分析數(shù)據(jù)。在Hypersil BDS C18，3μm顆粒柱(50×4.6mm)上進(jìn)行分離，用含有0.05％(v/v)三氟乙酸的5到90％乙腈的含有0.05％(v/v)三氟乙酸的水溶液線性梯度洗脫3.5分鐘，流速為1ml/min?？傔\(yùn)行時(shí)間(包括柱再平衡的時(shí)間)為7分鐘。
實(shí)施例12-[5-甲氧基-3-(4-三氟甲基-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶-6-基)-吲哚-1-基-嗎啉-4-基-乙酮由下面式(II) 代表的式(I)化合物(其中R1為 R2為-OMe，R3為-CF3，基團(tuán) 連接于吲哚環(huán)的3位，基團(tuán)R2連接到吲哚環(huán)的5位)按照如下的方案制備
(i)在約0℃、在二氯甲烷中，用3-氯過(guò)苯甲酸處理7-H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(1)，得到7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶-N-氧化物(2)；(ii)在約50℃，使三溴氧化磷與(2)反應(yīng)，得到4-溴-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(3)；(iii)在四丁基硫酸銨和氫氧化鈉水溶液的存在下、在甲苯中，使(3)與4-甲苯基磺酰氯反應(yīng)，得到4-溴-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(4)；
(iv)在氟化鉀和碘化銅(I)存在下、在二甲基甲酰胺中、于約60℃下，使(4)與三氟甲基三甲基硅烷反應(yīng)，得到7-(甲苯-4-磺酰基)-4-三氟甲基-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(5)；(v)在約-78℃、在四氫呋喃中，用二異丙基氨化鋰處理(5)，然后使所得陰離子與碘反應(yīng)，得到6-碘代-7-(甲苯-4-磺酰基)-4-三氟甲基-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(6)。
(vi)在約回流溫度下、于二甲基甲酰胺水溶液中、在四(三苯基膦)鈀(0)和碳酸氫鈉存在下，使(6)與1-叔-丁氧基羰基-5-甲氧基-1H-吲哚-3-硼酸偶合，脫除叔-丁氧基羰基保護(hù)基團(tuán)后，在氫化鈉存在下、在四氫呋喃中，用碘代甲烷處理，得到6-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-7-(甲苯-4-磺?；?-4-三氟甲基-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(7)；(vii)在甲醇中，用氫氧化鉀處理脫除(7)中甲苯磺?；Ｗo(hù)基團(tuán)，得到6-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-4-三氟甲基-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(8)；和(viii)在氫化鈉存在下、在二甲基甲酰胺中，用4-(2-氯乙?；?嗎啉使(8)烷基化，得到2-[5-甲氧基-3-(4-三氟甲基-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶-6-基)-吲哚-1-基]-1-嗎啉-4-基-乙酮(II)。
實(shí)施例21-甲基-3-(7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶-6-基)-1H-吲哚-5-甲酸(2-羥基-1，1-二甲基-乙基)-酰胺由式(III)
表示的式(I)化合物(其中R1為-CH3，R2為 R3為-H，基團(tuán) 連接到吲哚環(huán)的3位，基團(tuán)R2連接到吲哚環(huán)的5位)按照如下的方案制備 (i)在四丁基硫酸銨和氫氧化鈉水溶液存在下、在甲苯中，使(9)與4-甲苯磺酰氯反應(yīng)，得到(10)；
(ii)在約-78℃下、在四氫呋喃中，用二異丙基氨化鋰處理(10)，然后使所得陰離子與碘反應(yīng)，得到(11)；(iii)在約回流溫度下、于二甲基甲酰胺水溶液中、在四(三苯基膦)鈀(0)和碳酸氫鈉存在下，使(11)和1-叔-丁氧基羰基-5-甲氧基-1H-吲哚-3-硼酸(12)偶合，脫除叔-丁氧基羰基保護(hù)基團(tuán)后，在氫化鈉存在下、在四氫呋喃中，用碘代甲烷處理，得到6-[(1-甲基-5-甲酯基吲哚)-3-基]-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(13)；(iv)于回流下，用含水甲醇制氫氧化鉀處理(13)，得到6-[(1-甲基-5-甲氧基吲哚)-3-基]-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(14)；和(v)在O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽和二異丙基乙胺存在下、在二甲基甲酰胺中，使(14)和2-羥基-1，1-二甲基乙胺偶合，得到1-甲基-3-(7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶-6-基)-1H-吲哚-5-甲酸(2-羥基-1，1-二甲基-乙基)-酰胺(III)。
實(shí)施例32-{[5-甲氧基-3-(7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶-6-基)-吲哚-1-基]-嗎啉-4-基}-乙酮由式(IV)
表示的式(I)化合物(其中R1為 ，R2為-OMe，R3為-H，基團(tuán) 連接到吲哚環(huán)的3位，基團(tuán)R2連接到吲哚環(huán)的5位)按照如下方案制備 (i)在約回流溫度下、于二甲基甲酰胺水溶液中、在四(三苯基膦)鈀(0)和碳酸氫鈉存在下，使6-碘代-7-(甲苯-4-磺?；?-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(11)和1-叔-丁氧基羰基-5-甲氧基吲哚-3-硼酸(15)偶合，脫除叔-丁氧基羰基保護(hù)基團(tuán)，得到6-[(5-甲氧基吲哚)-3-基]-7-(甲苯-4-磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(16)；(ii)在回流下，用含水甲醇制氫氧化鉀處理(16)，得到6-[(5-甲氧基吲哚)-3-基]-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(17)；和(iii)在二甲基甲酰胺中，使(17)與氫化鈉反應(yīng)，然后與2-溴乙酸嗎啉酰胺反應(yīng)，得到2-{[5-甲氧基-3-(7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶-6-基)-吲哚-1-基]-1-嗎啉-4-基}-乙酮(IV)。
實(shí)施例4由式(VII) 表示的式(I)化合物(其中R1為-CH2CF3，R2為-OMe，R3為-CN，基團(tuán) 連接到吲哚環(huán)的3位，基團(tuán)R2連接到吲哚環(huán)的5位)按照如下方案制備
(i)在碳酸鉀和碘化鈉存在下，使(18)和(19)反應(yīng)，得到(20)；(ii)在乙醇鈉存在下、在乙醇中，使(20)和硫脲反應(yīng)，得到(21)；(iii)在約回流下、在甲苯中，加熱使(21)環(huán)化，得到(22)；(iv)使(22)和三溴氧化磷反應(yīng)，得到4-溴-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(23)；(v)在四丁基硫酸銨和氫氧化鈉水溶液存在下、在甲苯中，使(23)和4-甲苯磺酰氯反應(yīng)，得到(24)；
(vi)在約-78℃、在四氫呋喃中，用二異丙基氨化鋰處理(24)，然后使所得陰離子和碘反應(yīng)，得到(25)；(vii)在約回流溫度下、于二甲基甲酰胺水溶液中、在四(三苯基膦)鈀(0)和碳酸氫鈉存在下，使(25)和1-叔-丁氧基羰基-5-甲氧基吲哚-3-硼酸(15)偶合，脫除叔-丁氧基羰基保護(hù)基團(tuán)，得到4-溴-6-[(5-甲氧基吲哚)-3-基]-7-(甲苯-4-磺?；?-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(26)；(viii)在四氫呋喃中，使(26)和氫化鈉反應(yīng)，然后與2-三氟-碘代乙烷反應(yīng)，得到(27)；(ix)在鈀存在下、在N’，N-二甲基苯胺中、約140℃下，使(27)和氰化鋅反應(yīng)，得到(28)；和(x)在回流下，用含水甲醇制氫氧化鉀處理(28)，得到(VII)。
實(shí)施例5由式(IX) 表示的式(I)化合物(其中R1為-CH3，R2為-OMe，R3為
基團(tuán) 連接到吲哚環(huán)的3位，基團(tuán)R2連接到吲哚環(huán)的5位)按照下面的方案制備 (i)在四氫呋喃中，使(26)和氫化鈉反應(yīng)，然后和碘代甲烷反應(yīng)，得到(29)；(ii)在鈀存在下、在甲醇中、于回流下，使(29)與一氧化碳反應(yīng)，得到(30)；(iii)于回流下，用含水甲醇制氫氧化鈉處理(30)，得到(31)；和(iv)在O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽和二異丙基乙酰胺存在下、在二甲基甲酰胺中，使(31)與2-羥基-1，1-二甲基乙胺偶合，得到(IX)。
實(shí)施例6由式(V) 表示的式(I)化合物(其中R1為 ，R2為-OMe，R3為 基團(tuán) 連接到吲哚環(huán)的3位，基團(tuán)R2連接到吲哚環(huán)的5位)按照如下方案制備
(i)在乙酸鈀、三苯基膦和三乙胺存在下、于約110℃下，使(26)和丙烯酸甲酯反應(yīng)，得到(32)；(ii)在披鈀炭存在下，氫化(32)，得到(33)；(iii)于回流下，用含水甲醇制氫氧化鉀處理(33)，得到酸(34)；(iv)在O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽和二異丙基乙胺存在下、在二甲基甲酰胺中，使(34)和甲胺偶合，得到(35)；和(v)在氫化鈉存在下、在二甲基甲酰胺中，用4-(2-氯乙酰基)嗎啉使(35)烷基化，得到(V)。
實(shí)施例7由式(VI)
表示的式(I)化合物(其中R1為 ，R2為-OMe，R3為 ，基團(tuán) 連接到吲哚環(huán)的3位，基團(tuán)R2連接到吲哚環(huán)的5位)按照下面的方案制備
(i)在約回流溫度下、在四(三苯基膦)鈀(O)和碳酸氫鈉水溶液存在下、在二甲基甲酰胺水溶液中，使(26)和吡啶-3-硼酸偶合，得到4-(吡啶-3-基)-6-[(5-甲氧基吲哚)-3-基]-7-(甲苯-4-磺?；?-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶(36)；(ii)于回流下，用含水甲醇制氫氧化鈉處理(36)，得到(37，實(shí)施例9)；和(iii)在氫化鈉存在下、在二甲基甲酰胺中，用4-(2-氯乙?；?嗎啉使(37，實(shí)施例9)烷基化，得到2-[5-甲氧基-3-(4-(吡啶-3-基)-7H-吡咯并[2，3-b]嘧啶-6-基)-吲哚-1-基]-1-嗎啉-4-基-乙酮(VI)。
實(shí)施例8由式(VIII)
表示的式(I)化合物(其中R1為-CH2CH3，R2為-OMe，R3為 ，基團(tuán) 連接到吲哚環(huán)的3位，基團(tuán)R2連接到吲哚環(huán)的5位)按照如下方案制備
(i)在氫化鈉存在下、在二甲基甲酰胺中，用乙基碘使(26)烷基化，得到(38)；(ii)在微波爐中、于約200℃下、于α，α，α-三氟甲苯中，使(38)和嗎啉反應(yīng)，得到(39)；和(iii)于回流下，用含水甲醇制氫氧化鉀處理(39)，得到(VIII)。
實(shí)施例96-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-4-吡啶-3-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶 用四(三苯基膦)鈀(13mg)和碳酸氫鈉(8mg)處理溶于二甲基甲酰胺(10mL)的6-碘代-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-吡啶-3-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[260mg，參考實(shí)施例1]和1-叔-丁基-羧基-5-甲氧基-1H-吲哚-3-硼酸[178mg，參考實(shí)施例12]溶液。于回流下，攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)，冷卻至室溫。減壓蒸發(fā)溶液，殘?jiān)谒鸵宜嵋阴ラg分配。將有機(jī)相分離并經(jīng)硫酸鎂干燥，然后減壓蒸發(fā)。將殘?jiān)诠枘z上進(jìn)行閃柱層析，用乙酸乙酯和甲醇的混合物(95∶5，v/v)洗脫，得到無(wú)定形固態(tài)的6-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-4-吡啶-3-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶。MS342[MH]+，LCMS(方法A)RT＝2.57分鐘。
實(shí)施例104-甲氧基-6-(5-甲氧基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶
溶于甲醇(20mL)中的4-甲氧基-6-(5-甲氧基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[361mg，參考實(shí)施例4]的溶液用氫氧化鉀(1.53g)處理。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)，并回流1小時(shí)。減壓蒸發(fā)溶液，殘?jiān)谒鸵宜嵋阴ブg分配。分離有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥并減壓蒸發(fā)。用乙醚研磨殘?jiān)玫焦虘B(tài)4-甲氧基-6-(5-甲氧基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(155mg)，熔點(diǎn)＝184℃。MS309[MH]+。
實(shí)施例114-甲氧基-6-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶 溶于甲醇(15mL)中的4-甲氧基-6-(5-甲氧基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[448mg，參考實(shí)施例5]的溶液用氫氧化鉀(1.96g)處理。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)并減壓蒸發(fā)溶液，殘?jiān)谒鸵宜嵋阴ブg分配。分離有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥并減壓蒸發(fā)。將殘?jiān)诠枘z上進(jìn)行閃柱層析，用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合物(80∶20，v/v)洗脫，得到黃色固態(tài)4-甲氧基-6-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(320mg)，熔點(diǎn)＞260℃。MS295[MH]+。
實(shí)施例124(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-6-(5-甲氧基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶 溶于甲醇(5mL)中的4-(5-甲氧基-1-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-1H-吲哚-3-基)-6-(5-甲氧基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[93mg，參考實(shí)施例9]的溶液用氫氧化鉀(249mg)處理。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物16小時(shí)。減壓蒸發(fā)溶液，殘?jiān)谝宜嵋阴ズ退g分配。分離有機(jī)相，然后經(jīng)硫酸鎂干燥，然后減壓蒸發(fā)。用HPLC純化殘?jiān)?，得到膠狀4-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-6-(5-甲氧基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(9mg)。MS424[MH]+。LCMS(方法B)RT＝3.15分鐘。
參考實(shí)施例16-碘代-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-4-吡啶-3-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶在-78℃、在惰性環(huán)境中，向溶于四氫呋喃(20mL)中的7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-4-吡啶-3-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[1g，參考實(shí)施例2]逐滴加入溶于己烷的丁基鋰溶液(2mL，1.6M)。在該溫度下攪拌1.5小時(shí)，然后加入碘(796mg)。在-78℃下再攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)，使其達(dá)到室溫。反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和亞硫酸鈉水溶液之間分配。分離有機(jī)相并經(jīng)硫酸鎂干燥，然后減壓蒸發(fā)。將殘?jiān)诠枘z上進(jìn)行閃柱層析，用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合物(50∶50-100，v/v)梯度洗脫，得到無(wú)定形固態(tài)的標(biāo)題化合物(260mg)。MS477[MH]+。LCMS(方法B)RT＝3.26分鐘。
參考實(shí)施例27-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-4-吡啶-3-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶將溶于四氫呋喃(180mL)中的4-氯-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[4g，參考實(shí)施例3]和二乙基-3-吡啶基-硼烷(2.1g)溶液用四(三苯基膦)鈀(0.65g)和碳酸鉀(3.59g)處理。于回流下攪拌溶液24小時(shí)并減壓蒸發(fā)。殘?jiān)谝宜嵋阴ズ望}水之間分配。分離有機(jī)相并經(jīng)硫酸鎂干燥，然后減壓蒸發(fā)。將殘?jiān)诠枘z上進(jìn)行兩次閃柱層析，用乙酸乙酯與甲醇的混合物(90∶10，v/v)和乙酸乙酯與環(huán)己烷的混合物(50∶50，v/v)洗脫，得到無(wú)定形固態(tài)的標(biāo)題化合物(2.5g)。MS351[MH]+。LCMS(方法B)RT＝3.05分鐘。
參考實(shí)施例34-氯-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶將溶于甲苯(1L)中的4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(參考Gerster，JohnF.；Hinshaw，Barbara C.；Robins，Roland K.；Townsend，Leroy B.Study ofelectrophylic substitution in the pyrrolo[2，3-d]pyrimidine ring.J.Heterocycl.Chem.(1969)，-(2)，207-213)(20g)和對(duì)-甲苯磺酰氯(28.6g)的溶液用溶于水(800mL)中的氫氧化鈉(50g)溶液和四丁基硫酸銨(462mg)處理。在室溫下劇烈攪拌溶液2小時(shí)，溶液在乙酸乙酯和鹽水之間分配。分離有機(jī)相并經(jīng)硫酸鎂干燥，然后減壓蒸發(fā)。將殘?jiān)诠枘z上進(jìn)行閃柱層析，用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合物(50∶50，v/v)梯度洗脫，得到固態(tài)的標(biāo)題化合物(2.5g)。熔點(diǎn)＝143℃。LCMS(方法B)RT＝2.78分鐘。
參考實(shí)施例44-甲氧基-6-(5-甲氧基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶在惰性環(huán)境中，向溶于二甲基甲酰胺(20mL)中的4-甲氧基-6-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[448mg，參考實(shí)施例5]溶液加入氫化鈉(44mg，60％分散于油中)和碘代甲烷(156mg)。室溫下攪拌溶液1小時(shí)并減壓蒸發(fā)溶劑。殘?jiān)谒鸵宜嵋阴ラg分配。分離有機(jī)相并經(jīng)硫酸鎂干燥，然后減壓蒸發(fā)。將殘?jiān)诠枘z上進(jìn)行閃柱層析，用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合物(30∶70，v/v)洗脫，得到無(wú)定形固態(tài)標(biāo)題化合物(260mg)。MS464[MH]+。LCMS(方法B)RT＝4.39分鐘。
參考實(shí)施例54-甲氧基-6-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶將溶于二甲基甲酰胺(40mL)中的6-碘代-4-甲氧基-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[1.98g，參考實(shí)施例6]和1-叔-丁基-羧基-5-甲氧基-1H-吲哚-3-硼酸[1.26g，參考實(shí)施例12]溶液用飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)和四(三苯基膦)鈀(165mg)依次處理。于回流下攪拌反應(yīng)混合物3小時(shí)，減壓蒸發(fā)溶劑，殘?jiān)谒鸵宜嵋阴ラg分配。分離有機(jī)相并經(jīng)硫酸鎂干燥，然后減壓蒸發(fā)。將殘?jiān)诠枘z上進(jìn)行閃柱層析，用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合物(50∶50，v/v)洗脫，得到灰色固態(tài)標(biāo)題化合物(1.8g)。熔點(diǎn)＝131℃。MS450[MH]+。
參考實(shí)施例66-碘-4-甲氧基-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶在惰性環(huán)境中、-78℃下，向溶于四氫呋喃(35mL)中的4-甲氧基-7-[(4-甲基苯基)磺酰基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[2.23g，參考實(shí)施例7]溶液逐滴加入溶于己烷的丁基鋰溶液(5mL，1.6M)。在-70℃下攪拌溶液1小時(shí)并加入碘(2.05g)。在-70℃下再攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)，使其升至室溫并在乙酸乙酯和亞硫酸鈉水溶液之間分配。分離有機(jī)相并經(jīng)硫酸鎂干燥，然后減壓蒸發(fā)，得到無(wú)定形固態(tài)標(biāo)題化合物(2.64g)。MS430[MH]+。LCMS(方法B)RT＝4.15分鐘。
參考實(shí)施例74-甲氧基-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶將溶于甲苯(60mL)中的4-甲氧基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[1.2g，參考實(shí)施例8]和對(duì)甲苯磺酰氯(1.77g)用溶于水(30mL)的氫氧化鈉(3.2g)溶液和四丁基硫酸銨(27mg)處理。室溫下劇烈攪拌溶液4小時(shí)，溶液在乙酸乙酯和鹽水之間分配。分離有機(jī)相并經(jīng)硫酸鎂干燥，然后減壓蒸發(fā)。將殘?jiān)诠枘z上進(jìn)行閃柱層析，用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合物梯度(50∶50到80∶20，v/v)洗脫，得到無(wú)定形固態(tài)標(biāo)題化合物(2.23g)。MS304[MH]+。LCMS(方法B)RT＝3.88分鐘。
參考實(shí)施例84-甲氧基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶在惰性環(huán)境中，向甲醇(100mL)中逐份加入鈉(2g)制備甲醇鈉溶液，向該溶液中加入4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(參考Gerster，John F.；Hinshaw，Barbara C.；Robins，Roland K.；Townsend，Leroy B.Study of electrophylicsubstitution in the pyrrolo[2，3-d]嘧啶環(huán)。J.Heterocycl.Chem.(1969)，-(2)，207-13.)(3.5g)。將溶液在65℃下攪拌16小時(shí)，溶液在乙酸乙酯和鹽水之間分配。分離有機(jī)相并經(jīng)硫酸鎂干燥，然后減壓蒸發(fā)。將殘?jiān)诠枘z上進(jìn)行閃柱層析，用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合物(50∶50，v/v)洗脫，得到無(wú)定形固態(tài)標(biāo)題化合物(1.2g)。MS150[MH]+。 LCMS(方法B)RT＝2.39分鐘。
參考實(shí)施例94-(5-甲氧基-1-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-1H-吲哚-3-基)-6-(5-甲氧基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶在惰性環(huán)境中，向溶于二甲基甲酰胺(10mL)的4-(5-甲氧基-1-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-1H-吲哚-3-基)-6-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[270mg，參考實(shí)施例10]溶液加入氫化鈉(10mg，60％分散于油中)和碘代甲烷(0.025mL)。室溫?cái)嚢枞芤?6小時(shí)并減壓蒸發(fā)溶劑。殘?jiān)谒鸵宜嵋阴ラg分配。分離有機(jī)相并經(jīng)硫酸鎂干燥，然后減壓蒸發(fā)。將殘?jiān)诠枘z上進(jìn)行閃柱層析，用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合物(50∶50，v/v)洗脫，得到無(wú)定形固態(tài)標(biāo)題化合物(93mg)。MS732[MH]+。LCMS(方法B)RT＝4.68分鐘。
參考實(shí)施例104-(5-甲氧基-1-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-1H-吲哚-3-基)-6-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶將溶于二甲基甲酰胺(36.5mL)的4-氯-6-碘-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[1.72g，參考實(shí)施例11]和1-叔-丁基-羧基-5-甲氧基-1H-吲哚-3-硼酸[1.26g，參考實(shí)施例12]溶液依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(9.1mL)和四(三苯基膦)鈀(0.3g)處理?；亓飨聰嚢璺磻?yīng)混合物2小時(shí)并減壓蒸發(fā)溶劑。殘?jiān)谝宜嵋阴ズ退g分配。分離有機(jī)相并經(jīng)硫酸鎂干燥，然后減壓蒸發(fā)。將殘?jiān)诠枘z上進(jìn)行閃柱層析，用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合物(30∶70，v/v)洗脫，得到膠狀標(biāo)題化合物(270mg)。MS718[MH]+。LCMS(方法B)RT＝4.44分鐘。
參考實(shí)施例114-氯-6-碘-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶在惰性環(huán)境中、-78℃下，向溶于四氫呋喃(96mL)的4-氯-7-[(4-甲基苯基)磺?；鵠-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[5.4g，參考實(shí)施例3]逐滴加入溶于己烷中的丁基鋰(12.1mL，1.6M)。-78℃下攪拌溶液3小時(shí)并加入碘(8.9g)。-78℃下攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)，使其達(dá)到室溫。反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和亞硫酸鈉水溶液中分配，將反應(yīng)混合物經(jīng)硫酸鎂干燥并減壓蒸發(fā)。將殘?jiān)诠枘z上進(jìn)行閃柱層析，用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合物(50∶50到100，v/v)洗脫，得到無(wú)定形固態(tài)標(biāo)題化合物(1.52g)。MS434[MH]+。LCMS(方法B)RT＝4.26分鐘。
參考實(shí)施例121-叔-丁基-羧基-5-甲氧基-1H-吲哚-3-硼酸于氮?dú)庀?，將溶于四氫呋?800mL)的3-溴-5-甲氧基-吲哚-1-甲酸叔丁酯[50g，參考實(shí)施例13]溶液用硼酸三丁基酯(49.5mL)處理，然后冷卻到-100℃，隨后用溶于己烷的正-丁基鋰溶液(94mL，2.5M)處理，同時(shí)保持溫度在-90℃以下。一旦加入完成，用1小時(shí)使混合物逐漸恢復(fù)到室溫，然后加入冰(10g)使其驟冷。減壓除去有機(jī)物，殘?jiān)谝宜嵋阴?500mL)和水(400mL)之間分配。經(jīng)硫酸鎂干燥有機(jī)層，然后蒸發(fā)得到奶油色的固態(tài)標(biāo)題化合物(28g)。MS314[M+Na]+。LCMS(方法C)RT＝4.07分鐘。
參考實(shí)施例133-溴-5-甲氧基-吲哚-1-甲酸叔丁酯于室溫下，將溶于無(wú)水二甲基甲酰胺(150mL)的5-甲氧基吲哚(10g)溶液通過(guò)逐滴加入溴(4mL)處理，確保溫度不上升到30℃以上。立刻用三乙胺(28mL)和4-二甲基氨基吡啶(0.5g)處理混合物，然后用溶于無(wú)水二甲基甲酰胺(80mL)的二碳酸二-叔丁酯(18g)溶液處理，繼續(xù)攪拌4小時(shí)。蒸發(fā)反應(yīng)混合物，殘?jiān)谝宜嵋阴?250mL)和水(200mL)之間分配。用乙酸乙酯(100mL)萃取水層。用水(100mL)、然后用鹽水(100mL)洗滌混合的有機(jī)相，隨后經(jīng)硫酸鎂干燥，接著蒸發(fā)。將殘?jiān)诠枘z上進(jìn)行閃柱層析，用戊烷和乙酸乙酯的混合物(19/1，v/v)洗脫，得到無(wú)色固態(tài)標(biāo)題化合物(23.4g)，熔點(diǎn)111-112℃。
對(duì)Syk的體外試驗(yàn)方法1.化合物對(duì)Syk激酶的抑制作用用時(shí)間分辨(time-resolved)熒光分析法測(cè)定化合物對(duì)Syk激酶的抑制作用。
Syk激酶的催化區(qū)(A340-N635殘基)在酵母細(xì)胞中以融合蛋白形式表達(dá)，將其純化至均一。在含有50mM NaCl、5mM MgCl2、5mM MnCl2、1μM三磷酸腺苷和10μM合成肽生物素-(β-丙氨酸)3-DEEDYEIPP-NH2的50mM Tris-HCl緩沖液(pH7.0)中測(cè)定激酶活力。加入含有0.4M KF、133mM EDTA，pH7.0、含有鏈霉抗生物素蛋白-XL665綴合物和結(jié)合到銪穴狀化合物(Eu-K)的單克隆磷特異抗體的緩沖液終止酶反應(yīng)。兩種熒光團(tuán)XL-665和Eu-K的特征在G.Mathis等，Anticancer Research，1997，17，3011-3014頁(yè)給出。XL-665的特異長(zhǎng)時(shí)間信號(hào)(只有當(dāng)合成肽被Syk磷酸化時(shí)才產(chǎn)生)在LJL Biosystems Analyst AD微量測(cè)定板讀板儀上測(cè)定。本發(fā)明化合物對(duì)Syk活力的抑制以在不加入測(cè)試化合物的情況下對(duì)照活力的抑制百分?jǐn)?shù)表示。本發(fā)明具體優(yōu)選的化合物抑制Syk活力的IC50在100mM到100nM的范圍內(nèi)。本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物抑制Syk活力的IC50在1mM到100nM的范圍內(nèi)。
2.大鼠嗜堿性白血病(RBL)細(xì)胞的抗原誘導(dǎo)的脫粒2.1細(xì)胞培養(yǎng)、RBL-2H3細(xì)胞的標(biāo)記和分析將RBL-2H3細(xì)胞保存在37℃、5％CO2的T75燒瓶中，并且每3-4天傳代一次。為了收獲細(xì)胞，用5ml胰蛋白酶-EDTA洗燒瓶一次，然后每只燒瓶中加5ml胰蛋白酶并在室溫孵育2分鐘。用14ml培養(yǎng)液將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到試管中，以1100rpm RT旋轉(zhuǎn)5分鐘，以2×105/ml重新懸浮。向每10ml細(xì)胞中加入1μl DNP-特異IgE使細(xì)胞致敏。向平底96孔板的每孔中加入200μl細(xì)胞(40,000個(gè)細(xì)胞/孔)，將平板在37℃和5％CO2下孵育過(guò)夜。第二天，制備10mM化合物的100％DMSO溶液。用分析緩沖液將每種化合物以1∶100稀釋?zhuān)缓笤?％DMSO分析緩沖液中進(jìn)一步稀釋以使終濃度為0.03-30μM。向每孔中加入80μl分析緩沖液，然后加入10μl稀釋的化合物。接著孵育5分鐘。向每孔中加入10μl DNP-HAS(100ng/ml)并在37℃(無(wú)CO2)孵育30分鐘。作為一個(gè)對(duì)照，向一組孔中只加入1％DMSO(無(wú)化合物)以測(cè)定總的釋放。作為另一個(gè)對(duì)照，向另一組孔中加入DNP-HAS緩沖液測(cè)定分析背景。孵育30分鐘后，將上清液轉(zhuǎn)移到新的96孔板中。向分析板的各孔中加入50μl上清液。向每孔中加入100μl底物溶液并在37℃孵育90分鐘。加入50μl 0.4M甘氨酸溶液中止反應(yīng)，將平板在Molecular Devices SpectraMax 250平板讀板儀上于405nm測(cè)定。
2.2結(jié)果計(jì)算(i)計(jì)算每組三份的平均值±SD。
(ii)最大的應(yīng)答是含有抗原(100ng/ml)、但無(wú)化合物的陽(yáng)性對(duì)照孔。
(iii)最小的應(yīng)答是含有緩沖液(無(wú)抗原)、但無(wú)化合物的對(duì)照孔。
(iv)分別利用這些值作為最大值(100％)和最小值(0％)，計(jì)算實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，得到產(chǎn)生最大應(yīng)答的百分率(稱(chēng)為對(duì)照％)。
(v)繪制劑量應(yīng)答曲線并用Prism GraphPad軟件和非線性最小平方回歸分析計(jì)算化合物的IC50。
本發(fā)明化合物抑制大鼠嗜堿性白血病(RBL)細(xì)胞的抗原誘導(dǎo)的脫粒的EC50為100mM到1mM。
權(quán)利要求
1.下式的化合物及其N(xiāo)-氧化物、前藥、酸性等排物、藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；或者這種鹽或溶劑化物的N-氧化物、前藥或酸性等排物 其中R1代表氫、-C(＝O)-NY1Y2、-C(＝O)-OR5、-SO2-NY1Y2、-SO2-R7、-C(＝O)R7，或者R1代表鏈烯基、鏈烯氧基、烷基、炔基、芳基、雜芳基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基或環(huán)烷基烷基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自芳基、環(huán)烷基、氰基、鹵素、雜芳基、雜環(huán)烷基、-CHO或其5-、6-或7元環(huán)縮醛衍生物、-C(＝O)-NY1Y2、-C(＝O)-OR5、-NY1Y2、-N(R6)-C(＝O)-R7、-N(R6)-C(＝O)-NY3Y4、-N(R6)-SO2-R7、-N(R6)-SO2-NY3Y4、-OR7、-C(＝O)-R7、羥基、烷氧基和羧基的基團(tuán)所取代；R2代表一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)氫、?；?、亞烷二氧基、鏈烯基、鏈烯氧基、炔基、芳基、氰基、鹵素、羥基、雜芳基、雜環(huán)烷基、硝基、R4、-C(＝O)-NY1Y2、-C(＝O)-OR5、-NY1Y2、-N(R6)-C(＝O)-R7、-N(R6)-C(＝O)-NY3Y4、-N(R6)-C(＝O)-OR7、-N(R6)-SO2-R7、-N(R6)-SO2-NY3Y4、-SO2-NY1Y2和-ZR4；R3代表H、氰基、鹵素、羥基、硝基、R4、-NY1Y2、-ZR4、-C(＝O)-OR5、-C(＝O)-R7、-C(＝O)-NY1Y2、-N(R8)-C(＝O)-R4、-N(R8)-C(＝O)-NY1Y2、-N(R8)-C(＝O)-OR5、-SO2-NY3Y4或-N(R8)-SO2-R7，或者R3代表芳基、雜芳基、鏈烯基或炔基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)取代芳基、氰基、鹵素、羥基、雜芳基、雜環(huán)烷基、硝基、-C(＝O)-NY1Y2、-C(＝O)-OR5、-NY1Y2、-N(R6)-C(＝O)-R7、-N(R6)-C(＝O)-NY3Y4、-N(R6)-C(＝O)-OR7、-N(R6)-SO2-R7、-N(R6)-SO2NY3Y4、-SO2-NY1Y2或-ZR4；R4代表烷基、環(huán)烷基或環(huán)烷基烷基，每個(gè)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)取代芳基、環(huán)烷基、氰基、鹵素、雜芳基、雜環(huán)烷基、羥基、-CHO或其5-、6-或7元環(huán)縮醛衍生物、-C(＝O)-NY1Y2、-C(＝O)-OR5、-NY1Y2、-N(R6)-C(＝O)-R7、-N(R6)-C(＝O)-NY3Y4、-N(R6)-SO2-R7、-N(R6)-SO2-NY3Y4、-OR7和-C(＝O)-R7；其中R4任選地被選自O(shè)、S(O)n和NR6的基團(tuán)間隔；R5代表氫、烷基、鏈烯基、芳基、芳基烷基、雜芳基或雜芳烷基；R6代表氫或低級(jí)烷基；R7代表烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)烷基或雜環(huán)烷基烷基；R8代表氫或低級(jí)烷基；Y1和Y2獨(dú)立地是氫、鏈烯基、芳基、環(huán)烷基、雜芳基或烷基，任選地被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)取代芳基、鹵素、雜芳基、羥基、-C(＝O)-NY3Y4、-C(＝O)-OR5、-NY3Y4、-N(R6)-C(＝O)-R7、-N(R6)-C(＝O)-NY3Y4、-N(R6)-SO2-R7、-N(R6)-SO2-NY3Y4和-OR7；或者基團(tuán)-NY1Y2形成環(huán)狀胺；Y3和Y4獨(dú)立地是氫、鏈烯基、烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、雜芳基或雜芳基烷基；或者基團(tuán)-NY3Y4形成環(huán)狀胺；Z代表O或S(O)n；n為0或整數(shù)1或2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1為氫、C1-4烷基、鹵代C1-4烷基、羥基取代的C1-4烷基、-N(R6)C(＝O)-R7取代的C1-4烷基、-C(＝O)-NY1Y2取代的C1-4烷基或者羥基取代的環(huán)烷基烷基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1為氫、-CH3、CH2CH3、-CH2CF3或
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1為氫。
5.根據(jù)權(quán)利要求1到4中任一項(xiàng)的化合物，其中R2為羧基或酸性等排物、羥基、羧基取代的烷基、雜芳基，或者R2為-OR4，其中R4為烷基；R2為-OR4，其中R4為被一個(gè)或多個(gè)羥基取代的烷基或環(huán)烷基烷基；R2為-OR4，其中R4是被一個(gè)或多個(gè)烷氧基取代的烷基；R2為-OR4，其中R4是被一個(gè)或多個(gè)羧基取代的烷基或環(huán)烷基；R2為-OR4，其中R4是被-C(＝O)-NY1Y2取代的環(huán)烷基，或者R2為-C(＝O)-R，其中R為烷基，或者R2為-C(＝O)-NY1Y2或者-N(R6)-C(＝O)-R7。
6.根據(jù)權(quán)利要求1到4中任一項(xiàng)的化合物，其中R2為-OCH3或-CONHC(CH3)2CH2OH。
7.根據(jù)權(quán)利要求1到4中任一項(xiàng)的化合物，其中R2為-OCH3。
8.根據(jù)權(quán)利要求1到7中任一項(xiàng)的化合物，其中R3為氫、氰基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、烷基、被一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代的烷基、被-C(＝O)-NY1Y2取代的烷基、被-OR7取代的烷基；或者R3為ZR4、-C(＝O)-OR5、-C(＝O)-NY1Y2或-NY1Y2。
9.根據(jù)權(quán)利要求1到7中任一項(xiàng)的化合物，其中R3為氫、氰基、吡啶基、三氟甲烷基、-CH2-CH2-C(＝O)NHCH3、-OCF2H、-C(＝O)-NH-C(CH3)2-CH2OH或
10.根據(jù)權(quán)利要求1到7中任一項(xiàng)的化合物，其中R3為-OCH3。
11.根據(jù)權(quán)利要求1到10中任一項(xiàng)的化合物，其中R2連接到吲哚環(huán)的5位。
12.根據(jù)權(quán)利要求1到11中任一項(xiàng)的化合物，其中基團(tuán) 連接到吲哚環(huán)的3位。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，所述化合物為 或其N(xiāo)-氧化物、前藥、藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物；或者這種鹽或溶劑合物的N-氧化物或前藥。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，所述化合物為 或其N(xiāo)-氧化物、前藥、藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物；或者這種鹽或溶劑合物的N-氧化物或前藥。
15.藥物組合物，該藥物組合物含有藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1到14中任一項(xiàng)的化合物以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
16.一種治療患有或易患可以通過(guò)施用Syk催化活力抑制劑而改善的癥狀的患者的方法，該方法包括對(duì)所述患者施用藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1到14中任一項(xiàng)的化合物或藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求15的組合物。
17.一種治療患者炎性疾病的方法，該方法包括對(duì)所述患者施用藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1到14中任一項(xiàng)的化合物或藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求15的組合物。
18.一種治療患有或易患可以通過(guò)施用FAK催化活力抑制劑而改善的癥狀的患者的方法，該方法包括對(duì)所述患者施用藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1到14中任一項(xiàng)的化合物或藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求15的組合物。
19.一種治療患有或易患可以通過(guò)施用KDR催化活力抑制劑而改善的癥狀的患者的方法，該方法包括對(duì)所述患者施用藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1到14中任一項(xiàng)的化合物或藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求15的組合物。
20.一種治療患有或易患可以通過(guò)施用Aurora 2催化活力抑制劑而改善的癥狀的患者的方法，該方法包括對(duì)所述患者施用藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1到14中任一項(xiàng)的化合物或藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求15的組合物。
21.一種治療患者癌癥的方法，該方法包括對(duì)所述患者施用藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1到14中任一項(xiàng)的化合物或藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求15的組合物。
22.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述炎性疾病為哮喘、炎性皮膚病、過(guò)敏性鼻炎、過(guò)敏性結(jié)膜炎或關(guān)節(jié)發(fā)炎。
23.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述炎性疾病為哮喘、牛皮癬、皰疹樣皮炎、濕疹、壞死性血管炎、皮膚性血管炎、大泡性疾病、過(guò)敏性鼻炎、過(guò)敏性結(jié)膜炎、關(guān)節(jié)炎、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)疹性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎。
24.一種治療患者慢性阻塞性肺部疾病的方法，該方法包括對(duì)所述患者施用藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1到14中任一項(xiàng)的化合物或藥用有效量的根據(jù)權(quán)利要求15的組合物。
25.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中所治療的癌癥為結(jié)直腸癌、前列腺癌、乳腺癌、甲狀腺癌、皮膚癌、直腸癌或肺癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)化合物、這些化合物的N－氧化物、前藥、酸性等排物、藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或者這種鹽或溶劑化物的N－氧化物、前藥或酸性等排物，本發(fā)明還涉及含有這些化合物的組合物以及通過(guò)對(duì)需要這種治療的患者施用這些化合物和組合物的治療方法。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1518552SQ02811932
公開(kāi)日2004年8月4日 申請(qǐng)日期2002年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2001年6月23日
發(fā)明者P·J·考克斯, P J 考克斯, T·N·馬吉德, 馬吉德, S·阿門(mén)道拉, 諾覽, S·D·德普雷, 德普雷, C·埃德林, 鋁, B·L·佩德格雷弗特, 佩德格雷弗特, F·阿萊, 祿 , M·愛(ài)德華茲, 虐, B·博杜安, 麥克雷, L·M·麥克雷, 奧爾德斯, D·J·奧爾德斯 申請(qǐng)人:安萬(wàn)特藥物公司