專利名稱：一枝蒿有效部位和有效成分抗過敏反應(yīng)的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種一枝蒿有效部位及其成分抗過敏反應(yīng)的用途。
背景技術(shù)：
一枝蒿Artemisia rupestris L.的干燥全草。七、八月采割、曬干。本品全長10-50厘米。根和根莖圓柱形，土黃色至灰褐色，長帶少數(shù)短須根，斷面淺黃色。莖單一或數(shù)個，于根莖處彎曲，直徑1.5-3厘米，幼枝和花枝上部密被短絨毛，老枝或枝的下部光滑，有不顯著的細條紋，表面常為紫紅色，斷面白色，中空。功能與主治清熱解毒，健胃消食，祛風(fēng)活血。用于感冒、過敏、食積、蛇傷、瘡癤。
皮膚過敏往往有很多原因，目前治療皮膚過敏的藥物也很多。一枝蒿是維吾爾醫(yī)常用藥材，文獻報道一枝蒿全草含有黃酮類、酮酸類、氨基酸、甙類、多糖類、揮發(fā)油、多肽、生物堿等化合物。本發(fā)明是將一枝蒿有效部位和一枝蒿有效成分采用常規(guī)方法混合或分別制成口服或外用制劑對皮膚過敏性疾病有一定療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于，提供一種一枝蒿有效部位及其成分抗過敏反應(yīng)的用途，將一枝蒿采用常規(guī)的水提法或醇提法或大孔樹脂提取或有機溶劑提取方法得到一枝蒿有效部位和有效成分，按常規(guī)方法將提取的一枝蒿粗提物和一枝蒿有效部位和一枝蒿有效成分混合或分別制成口服和外用制劑。在將一枝蒿有效部位及其成分應(yīng)用于治療過敏反應(yīng)性疾病中，一枝蒿有效部位和有效成分對抗過敏反應(yīng)即能抑制速發(fā)型(I型)過敏反應(yīng)，又能抑制細胞毒性(II型)過敏反應(yīng)及遲發(fā)型過敏反應(yīng)(IV型)。其中對I型過敏反應(yīng)的抑制作用最強，作用及量增加而增強，因此，一枝蒿有效部位及其有效成分具有明顯的抗過敏作用。
本發(fā)明所述的一枝蒿有效部位包括總黃酮、總酮酸、氨基酸類、甙類、多糖類、揮發(fā)油、多肽和生物堿和有效成分包括4’，5-二羥基-3，3’，6，7-四甲氧基黃酮；5、3′-二羥基-6，7，8，4′-四甲氧基黃酮；5-羥基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黃酮；5，3′-二羥基-6，8，4′-三甲氧基黃酮三種黃酮類化合物及一枝蒿酮酸、異一枝蒿酮酸、一枝蒿酸、針葉春黃菊酸四種酮酸類化合物，按常規(guī)方法將提取的一枝蒿有效部位和一枝蒿有效成分混合或分別制成口服和外用制劑在制備抗過敏反應(yīng)藥物用途。
一枝蒿有效部位及其有效成分，采用常規(guī)的水提法或醇提法或大孔樹脂提取或有機溶劑提取方法得到有效部位和有效成分，其中有效部位包括總黃酮、總酮酸、氨基酸類、甙類、多糖類、揮發(fā)油、多肽和生物堿，有效成分包括黃酮類化合物4’，5-二羥基-3，3’，6，7-四甲氧基黃酮；5、3′-二羥基-6，7，8，4′-四甲氧基黃酮；5-羥基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黃酮；5，3′-二羥基-6，8，4′-三甲氧基黃酮三種黃酮類化合物及和一枝蒿酮酸、異一枝蒿酮酸、一枝蒿酸、針葉春黃菊酸四種酮酸類化合物，按常規(guī)方法將提取的一枝蒿有效部位和一枝蒿有效成分混合或分別制成口服和外用制劑，用于治療皮膚過敏病癥，經(jīng)過對動物抗過敏反應(yīng)觀察，證明該制劑即能抑制速發(fā)型(I型)過敏反應(yīng)，又能抑制細胞毒性(II型)過敏反應(yīng)及遲發(fā)型過敏反應(yīng)(IV型)。其中對I型過敏反應(yīng)的抑制作用最強，作用及量增加而增強，因此，一枝蒿有效部位及其成分為治療過敏反應(yīng)性疾病的良藥。
具體實施例方式
實施例采用常規(guī)的水提法或醇提法或大孔樹脂提取或有機溶劑提取方法得到一枝蒿有效部位包括總黃酮、總酮酸、氨基酸類、甙類、多糖類、揮發(fā)油、多肽和生物堿和有效成分包括黃酮類化合物4’，5-二羥基-3，3’，6，7-四甲氧基黃酮；5、3′-二羥基-6，7，8，4′-四甲氧基黃酮；5-羥基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黃酮；5，3′-二羥基-6，8，4′-三甲氧基黃酮三種黃酮類化合物及和一枝蒿酮酸、異一枝蒿酮酸、一枝蒿酸、針葉春黃菊酸四種酮酸類化合物，按常規(guī)方法將提取的一枝蒿有效部位和一枝蒿有效成分混合或分別制成口服和外用制劑在制備抗過敏反應(yīng)的藥物用途。
一枝蒿有效部位及其有效成分是新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)研究所提供?，F(xiàn)將有效部位及有效成分對動物過敏反應(yīng)抑制試驗的方法及結(jié)果報告如下一、同系大鼠被動皮膚過敏反應(yīng)(PCA)的影響材料Wistar大鼠，新疆維吾爾自治區(qū)實驗動物中心提供。一枝蒿有效部位及其有效成分，新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)研究提供。天花粉粉劑，北京醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室提供。氫氧化鋁凝膠，陜西華山制藥廠產(chǎn)品。
方法與結(jié)果取5只雄性大鼠，每鼠每足跖注射5mg/ml天花粉-氫氧化鋁凝膠混懸液0.1ml，每鼠4足共注射0.4ml。15天后，心臟取血，離心取(抗)血清。用前將抗血清以1∶10(抗血清生理鹽水)稀釋。另取大鼠35只，體重200±20g，雌雄兼用，隨機分為，空白對照組(NS)、陽性對照組(色甘酸鈉)和3個不同劑量的制劑組，每組7只，在每鼠背部脫毛處皮內(nèi)注射抗血清致敏，共3點，每點0.1ml，48小時后iv含5mg天花粉的0.5％伊文思藍1ml進行攻擊。于抗原攻擊前連續(xù)給藥3天，每天口服一次?？乖艉?0分鐘，斷頭處死大鼠，將皮膚藍斑剪下置于試管內(nèi)，加1mol/L的KOH1ml，37℃消化15小時，然后加0.2mol/L磷酸與丙酮混合液3.75ml經(jīng)震蕩后，2500r/min離心10分鐘，取上清液721-型分光光度計(λ＝610nm)測定吸收率(A)。結(jié)果，3個劑量的一枝蒿有效部位及其成分均明顯抑制PCA反應(yīng)的影響(表1)。
表1一枝蒿有效部位及其有效成分對同系大鼠PCA反應(yīng)的影響(mean±SD)

注與對照組比較***P＜0.01，*P＞0.05結(jié)果，一枝蒿有效部位及其有效成分在致敏前1天給藥，共3天，能明顯抑制同系大鼠被動皮膚過敏反應(yīng)，其作用隨劑量增加而增強。表明該制劑對速發(fā)型過敏反應(yīng)有明顯的抑制作用。
二、大鼠同種細胞抗體介導(dǎo)的肥大細胞脫顆粒的影響材料Wistar大鼠，新疆維吾爾自治區(qū)實驗動物中心提供。一枝蒿有效部位及其成分，新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)研究提供。天花粉粉劑，北京醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室提供。氫氧化鋁凝膠，陜西華山制藥廠產(chǎn)品。
方法與結(jié)果取大鼠5只，按上述一項方法制備大鼠抗天花粉血清。另取大鼠5只，制備大鼠腸系膜標(biāo)本，每鼠10塊，每塊為1cm2放入臺式營養(yǎng)液內(nèi)備用。取試管40支，各管加臺式營養(yǎng)液2ml，腸系膜標(biāo)本1塊及大鼠抗天花粉血清0.2ml，37℃水浴溫育30分鐘后，使腸系膜肥大細胞致敏，然后用37℃臺式營養(yǎng)液洗標(biāo)本3次，以去除剩余抗血清。再加37℃臺式營養(yǎng)液2ml，37℃水浴溫育10分鐘后按表2所示劑量向管內(nèi)加藥，繼續(xù)溫育10分鐘，加天花粉抗原0.1ml(含天花粉110ug)攻擊，37℃水浴繼續(xù)溫育20分鐘后，將標(biāo)本用甲醛固定，甲苯胺藍及伊紅染色，鹽酸酒精分色，酒精脫水，二甲苯透明及封片。用顯微鏡觀察并計數(shù)肥大細胞脫顆粒情況，以其脫顆粒的百分率進行組間比較。結(jié)果，不同濃度的制劑可明顯抑制大鼠肥大細胞的脫顆粒反應(yīng)(表2)。
表2一枝蒿有效部位及其有效成分對大鼠同種細胞抗體介導(dǎo)的肥大細胞脫顆粒的影響(mean±SD)

注與對照組比較***P＜0.01結(jié)果，一枝蒿有效部位及其有效成分對大鼠同種細胞抗體介導(dǎo)的肥大細胞顆粒反應(yīng)有抑制作用，表明其抗過敏作用與穩(wěn)定肥大細胞，使肥大細胞脫顆粒反應(yīng)減少，進而減少組胺等過敏介質(zhì)釋放有關(guān)。
三、組胺所致毛細血管通透性增加的影響材料Wistar大鼠，新疆維吾爾自治區(qū)實驗動物中心提供；一枝蒿有效部位及其有效成分，新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)研究提供；磷酸組胺，購自中國科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所。
方法與結(jié)果取大鼠24只，體重200±20g，雌雄兼用，隨機分為對照組(NS)、地塞米松組和2個不同劑量的制劑組。灌胃給藥，一日一次，共3天，于末次給藥后1.5小時大鼠背部脫毛處，皮內(nèi)注射磷酸組胺生理鹽水溶液0.1ml(內(nèi)含組胺50ug)，每鼠2點，同時iv0.5％伊文思藍溶液1ml。30分鐘后斷頭處死大鼠，將皮膚藍斑剪下，置于試管內(nèi)，按PCA方法測定各方應(yīng)點皮膚的吸收率(A)，以其A值進行組間均數(shù)t檢驗。結(jié)果，不同劑量的制劑可明顯抑制組胺引起的血管通透性增加作用(表3)。
表3一枝蒿有效部位及其成分對組胺所致毛細血管通透性增加的影響(mean±SD)

注與對照組比較***P＜0.01結(jié)果，一枝蒿有效部位及其有效成分，連續(xù)給藥3天，對組胺所致毛細血管通透性增加有明顯抑制作用。
四、一枝蒿有效部位制劑對Forssman皮膚血管炎反應(yīng)的影響材料豚鼠，新疆醫(yī)學(xué)院動物室提供。一枝蒿有效部位及其有效成分，新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)研究提供。
方法與結(jié)果無菌條件下，從綿羊頸外靜脈取血，置于有磷酸緩沖液的無菌瓶內(nèi)，放4℃冰箱保存?zhèn)溆?。臨用前將綿羊血液5ml于10ml離心管內(nèi)，2000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，棄去上清和界面的WBC層，用無菌生理鹽水洗滌3次，第三次洗滌后，用無菌生理鹽水配成5％羊紅細胞懸液(約相當(dāng)于1×109細胞/ml)。取雄性家兔3只，靜脈109SBBC混懸液，每次1ml，隔天1次，共10次，于最后1次注射后14天，收集兔血清，本血清為抗SBBC血清。
取豚鼠30只，體重365±41g，雌雄兼用，隨機分為對照組(NS)，地塞米松組和3個不同劑量的一枝蒿有效部位及其成分組，灌胃給藥，每日1次，共2天。于末次給藥后1小時豚鼠背部剪毛，皮內(nèi)注射1∶8稀釋的抗SBBC血清，每點0.1ml，共3點，24小時后靜注0.5％伊文思藍1ml，30分鐘后處死豚鼠，將皮膚藍斑剪下，置于試管內(nèi)，按PCA方法測定各方應(yīng)點皮膚的吸收率(A)，以其A值進行組間均數(shù)t檢驗，結(jié)果，不同劑量的制劑可明顯抑制Forssman皮膚血管炎反應(yīng)(表4)。
表4一枝蒿有效部位及其成分對Forssman皮膚血管炎反應(yīng)的影響(mean±SD)

注與對照組比較***P＜0.01結(jié)果，一枝蒿有效部位及其有效成分，在注射抗血清前一天給藥，共2天。能明顯抑制Forssman皮膚血管炎反應(yīng)，表明該制劑對II型變態(tài)反應(yīng)(細胞毒性變態(tài)反應(yīng))有明顯地抑制作用。
五、二硝基氯苯誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響材料NIA小鼠，新疆醫(yī)學(xué)院動物室提供；一枝蒿有效部位及其成分，新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)研究提供；2，4二硝基氯苯，上海試劑一廠產(chǎn)品。
方法與結(jié)果取小鼠45只，體重20±1.7g，雌雄兼用，隨機分為對照組(NS)，環(huán)磷酰胺組和3個不同劑量的制劑組，每組9只，灌胃給藥，每日1次，共8天，于給藥后第四天，每鼠腹部剪毛，面積約3×3cm2，將1％二硝基氯苯(DNFB)溶液50ul均勻涂抹于剪毛處皮膚致敏。致敏后第5天，將1％DNFB溶液50ul均勻涂抹于小鼠右耳兩面進行抗原攻擊，24小時后，拉脫頸椎處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下直徑8mm的耳片，稱重。左右耳片重量之差為腫脹度，結(jié)果，不同劑量的一枝蒿有效部位及其有效成分可明顯抑制二硝基氯苯誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)(表5)。
表5一枝蒿有效部位及其成分對二硝基氯苯誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響(mean±SD)

注與對照組比較***P＜0.01結(jié)果，一枝蒿有效部位及其有效成分在致敏前3天給藥，共8天，能明顯抑制二硝基氯苯誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)，其作用劑量增加而增強，表明該制劑對IV型變態(tài)反應(yīng)亦有明顯抑制作用。
六、對兔Arthus反應(yīng)的影響材料新西蘭種家兔，新疆醫(yī)學(xué)院動物室提供；一枝蒿有效部位及其有效成分，新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)研究提供；卵白蛋白，購自中國科學(xué)院東方儀器設(shè)備公司生化部。
方法與結(jié)果取家兔25只，體重2.1±1.5kg，雌雄兼用，隨機分為對照組(NS)，地塞米松組和三個不同劑量的一枝蒿組，各組動物用結(jié)晶卵白蛋白與福氏完全佐劑混懸液1ml，肌肉注射，每周1次，共4周，末次注射后第9天兔背部剪毛，第10天剪毛處皮內(nèi)注射10％卵白蛋白攻擊，每點0.2ml，共3點，于抗原攻擊前每日1次，連續(xù)灌胃給藥4天，抗原攻擊后2，5和24小時觀察攻擊部位有無紅腫或出血，并按下表進行反應(yīng)程度分級和評分，經(jīng)求平均值后組間進行統(tǒng)計學(xué)檢查，結(jié)果，一枝蒿有效部位及其有效成分在抗原攻擊前每日1次，連續(xù)灌胃給藥4天，對兔Arthus反應(yīng)沒有抑制作用(表6、表7)
表6 反應(yīng)程度標(biāo)準(zhǔn)分級及評分

表7 一枝蒿有效部位及其成分對兔Arthus反應(yīng)的影響(mean±SD)

注與對照組比較***P＜0.01，*P＞0.05小結(jié)與討論根據(jù)上述結(jié)果，說明一枝蒿有效部位及其成分有下述作用①明顯抑制同系大鼠被動皮膚過敏反應(yīng)；②試管內(nèi)給藥可顯著抑制大鼠親同細胞抗體介導(dǎo)的腸系膜肥大細胞脫顆反應(yīng)；③對組胺所致毛細血管通透性增加有明顯抑制作用；④對Forssman皮膚血管炎反應(yīng)有抑制作用；⑤對二硝基氯苯誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)，有明顯地抑制作用。
通過對同系大鼠被動皮膚過敏反應(yīng)(PCA)的影響，大鼠同種細胞抗體介導(dǎo)的肥大細胞脫顆粒的影響，組胺所致毛細血管通透性增加的影響，F(xiàn)orssman皮膚血管炎反應(yīng)的影響，二硝基氯苯誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響五項抗過敏反應(yīng)觀察，證明該制劑即能抑制速發(fā)型(I型)過敏反應(yīng)，又能抑制細胞毒性(II型)過敏反應(yīng)及遲發(fā)型過敏反應(yīng)(IV型)。其中對I型過敏反應(yīng)的抑制作用最強，作用及量增加而增強，因此，一枝蒿有效部位及其有效成分為治療過敏反應(yīng)性疾病的良藥。
權(quán)利要求
1.一種一枝蒿有效部位包括總黃酮、總酮酸、氨基酸類、甙類、多糖類、揮發(fā)油、多肽和生物堿和有效成分包括4’，5-二羥基-3，3’，6，7-四甲氧基黃酮；5、3′-二羥基-6，7，8，4′-四甲氧基黃酮；5-羥基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黃酮；5，3′-二羥基-6，8，4′-三甲氧基黃酮三種黃酮類化合物及一枝蒿酮酸、異一枝蒿酮酸、一枝蒿酸、針葉春黃菊酸四種酮酸類化合物，按常規(guī)方法將提取的一枝蒿有效部位和一枝蒿有效成分混合或分別制成口服和外用制劑在制備抗過敏反應(yīng)藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一枝蒿有效部位和有效成分在制備抗過敏反應(yīng)的藥物用途。
文檔編號A61P37/00GK1788742SQ20041010423
公開日2006年6月21日 申請日期2004年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月17日
發(fā)明者斯拉甫·艾白 申請人:斯拉甫·艾白