專利名稱：一種復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液及其制備方法。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體主要由磷脂和膽固醇構(gòu)成。磷脂普遍存在于動植物細(xì)胞的原生質(zhì)和生物膜中，是構(gòu)成細(xì)胞膜的主要成分之一，對生物膜的生理活性和機(jī)體的正常代謝有重要的調(diào)節(jié)作用。
膽固醇是一種中性脂質(zhì)，在各類動物細(xì)胞中含量較高。它在膜中主要與磷脂結(jié)合起著改變磷脂層性質(zhì)的作用，它趨向于減弱膜中類脂類與蛋白質(zhì)之間的連接，作用主要是調(diào)節(jié)膜的流動性。脂質(zhì)體作為載體，其價值在于能包合各種物質(zhì)，其包合方式完全是物理性的，水溶性的物質(zhì)可包封在脂質(zhì)體的水層結(jié)構(gòu)中，而脂溶性物質(zhì)和兩親性的物質(zhì)，則結(jié)合于脂質(zhì)體雙分子層中。而對于在水相和有機(jī)相都不能溶解的物質(zhì)或者在兩相中都溶解非常好的物質(zhì)不易采用脂質(zhì)體進(jìn)行包封。被包封的脂質(zhì)體能提高被包裹藥物的穩(wěn)定性，并且能達(dá)到緩釋的效果。黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根。其性甘、微溫，入肺、脾經(jīng)、具有補(bǔ)氣升陽、固表止汗、托毒排膿、利水消腫、斂瘡生肌等功效。它含有多糖、蛋白質(zhì)、生物堿、氨基酸、黃酮類、微量元素等多種生物活性物質(zhì)，其中黃芪多糖是其主要生物活性成分，它主要由葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖組成。黃芪多糖可顯著增強(qiáng)非特異性免疫功能和體液免疫功能，顯著增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能，促進(jìn)血清溶血素形成，提高空斑形成細(xì)胞的溶血功能和明顯的碳粒廓清作用和明顯增加脾重量。另外黃芪多糖是一種干擾素誘導(dǎo)齊U，其抗病毒原理刺激巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞的功能，使E環(huán)形成細(xì)胞數(shù)增加，誘生細(xì)胞因子，促進(jìn)白細(xì)胞介素誘生，而使動物機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)源性干擾素，從而達(dá)到抗病毒的目的。然而在實(shí)際應(yīng)用中黃芪多糖粉易吸潮，穩(wěn)定性差，難保存，而黃芪多糖注射液是03版《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》上常用于雞傳染性法氏囊病輔助治療的注射用藥品，使用方法為肌肉注射，每日一次，連用兩日，通過走訪了解到，連需兩日注射會帶來雞子嚴(yán)重的應(yīng)激反應(yīng)，引起產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋量的顯著下降。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種一次給藥就能有效控制疾病、有效提高生物利用度的復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液及其制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下
一種復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液，每IOOml注射液中，其有效成分是黃芪多糖I 2g、磷脂5 7g、膽固醇I 3g、磷酸二鯨臘酯0. I lg、螺內(nèi)酯0. 01 0. 02g。所述的磷脂為卵磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰甘油。優(yōu)選為卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰甘油，最優(yōu)選為注射用卵磷脂。制備方法所述制法為薄膜分散法、逆向蒸發(fā)法、冷凍干燥法、超聲波分散法中的一種。優(yōu)選采用超聲分散法，即將黃芪多糖在PBS緩沖液中溶解，加至磷脂、膽固醇、磷酸二鯨蠟酯、螺內(nèi)酯共溶的有機(jī)溶劑制成的溶液中，蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，殘液經(jīng)超聲波分散，分離出脂質(zhì)體，重新混懸于100ml PBS緩沖液中，然后過濾、分裝，即得。所述的有機(jī)溶劑為氯仿、乙醚、乙醇、丙二醇、甲醇、丙醇的一種或者幾種。優(yōu)選為氯仿和乙醚，最優(yōu)選為氯仿。本發(fā)明制備出的復(fù)方黃芪多糖長效注射液是利用磷脂和膽固醇的固有的性質(zhì)，通過借助外界的一定手段，將黃芪多糖用脂質(zhì)體的方法進(jìn)行包裹，得到了類似于生物膜的雙分子結(jié)構(gòu)，具有很好的組織相容性、細(xì)胞親和性、提高了黃芪多糖的穩(wěn)定性，并且擁有很好的緩釋性效果，在臨床應(yīng)用中，該注射液和原黃芪多糖注射液相比，在相同的用量下，黃芪多糖注射液僅使用一次即可達(dá)到常規(guī)注射液2次的良好的效果。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步地詳細(xì)介紹，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此。實(shí)施例I :lg黃芪多糖在PH7. 4磷酸鹽緩沖液中溶解，然后加至溶入5g注射用卵磷脂、Ig膽固醇、0. Ig磷酸二鯨蠟酯、0. Olg螺內(nèi)酯的氯仿制成的溶液中，蒸發(fā)除去氯仿，殘液經(jīng)超聲波分散，分離出脂質(zhì)體，重新混懸于100ml PH7. 4磷酸鹽緩沖液中得淡黃色的脂質(zhì)體混懸液，然后0. 45 u m微孔濾膜過濾2次，0. 22 u m無菌過濾后分裝，即得復(fù)方黃芪多糖長效注射液。實(shí)施例2 :1. 5g黃芪多糖在pH7. 4磷酸鹽緩沖液中溶解，然后加至溶入6g 二硬脂 酰磷脂酰甘油、2g膽固醇、0. 5g磷酸二鯨蠟酯、0.015g螺內(nèi)酯的乙醚制成的溶液中，蒸發(fā)除去乙醚，殘液經(jīng)超聲波分散，分離出脂質(zhì)體，重新混懸于100ml pH7. 4磷酸鹽緩沖液中得淡黃色的脂質(zhì)體混懸液，然后0. 45 u m微孔濾膜過濾2次，0. 22 u m無菌過濾后分裝，即得復(fù)方黃芪多糖長效注射液。實(shí)施例3 2g黃芪多糖在pH7. 4磷酸鹽緩沖液中溶解，然后加至溶入7g注射用卵磷脂、2g膽固醇、0. 5g磷酸二鯨蠟酯、0. 02g螺內(nèi)酯的氯仿制成的溶液中，蒸發(fā)除去氯仿，殘液經(jīng)超聲波分散，分離出脂質(zhì)體，重新混懸于100ml pH7. 4磷酸鹽緩沖液中得淡黃色的脂質(zhì)體混懸液，然后0. 45 u m微孔濾膜過濾2次，0. 22 u m無菌過濾后分裝，即得復(fù)方黃芪多糖長效注射液。以上實(shí)施例中，所述PBS緩沖液按本領(lǐng)域常規(guī)方法配制，例如1L、pH7. 4的PBS配方磷酸二氫鉀(KH2PO4) :0. 27g、磷酸氫二鈉(Na2HPO4) :1.42g、氯化鈉(NaCl) :8g、氯化鉀(KCl) 0. 2g,加去離子水約800mL充分?jǐn)嚢枞芙?然后加入濃鹽酸調(diào)pH至7. 4,最后定容到1L，高溫高壓滅菌后室溫保存。包封率測定
吸取0.5 mL本發(fā)明復(fù)方黃芪多糖長效注射液于10 mL錐形離心管中，添加0.5 mL魚精蛋白(10 mg ^mL-1)攪勻。靜置3 min,加入3 mL生理鹽水,在室溫條件下離心30 min(3000r/min)。上清液以生理鹽水定容至10 mL，取I mL此溶液，測定其多糖含量，即游離藥物量。沉淀以3 mL 10% triton-100溶解，并補(bǔ)充生理鹽水至10 mL。取I mL此溶液，測定其多糖含量，即包封藥物量 。計算公式為包封率=(l_Cf/C,e、)X 100%, Cf為游離藥物量;(&為包封藥物量與游離藥物之和。多糖含量的測定采用苯酚-濃硫酸法，經(jīng)測定，實(shí)施例1、2、3的包封率依次為26. 94%,45. 02%、56. 66%。為驗證本發(fā)明所述復(fù)方黃芪多糖長效注射液的特性，特進(jìn)行如下試驗。I.試驗材料 試驗藥物
本發(fā)明實(shí)施例3制備的復(fù)方黃芪多糖長效注射液。黃芪多糖注射液，河南牧翔動物藥業(yè)有限公司，批號20111101。雞傳染性法氏囊病病毒診斷試劑盒，購自河南百奧生物科技有限公司，批號20120508。雞傳染性法氏囊病病毒抗體檢測試劑盒，購自河南百奧生物科技有限公司，批號20120508。雞傳染性法氏囊病毒IBDV強(qiáng)毒株(毒號BC_6/85)，法氏囊陽性，購自中國獸藥監(jiān)察所。試驗動物1日齡海蘭蛋雞雛共250只，購自河南雛鷹集團(tuán)，均未經(jīng)法氏囊疫苗免疫，試驗前經(jīng)雞傳染性法氏囊病病毒診斷試劑盒檢測均為陰性。動物飼養(yǎng)動物飼料，購自鄭州市嘉吉飼料有限公司。試驗雞均飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)雞舍，自由采食與飲水。2.方法
2.I疾病模型的預(yù)試
將IBDV強(qiáng)毒株BC-6/85按照菌種分發(fā)證書上的毒力用滅菌生理鹽水稀釋至1000BID(BID :法氏囊感染劑量)。取飼養(yǎng)至24日齡健康非免疫、體重接近的雞40羽，分4組，隨機(jī)分成低感組、中感染組、高感染組和健康對照組。感染組經(jīng)點(diǎn)眼共0. 05ml,0. 10ml、0. 15ml接種1000IBD病毒液。每天觀察記錄雞的精神狀態(tài)、臨床癥狀、發(fā)病情況及死亡情況，連續(xù)觀察5d，確定復(fù)制疾病模型的最佳條件為點(diǎn)眼共0. 05ml。2. 2試驗動物分組與處理
將30日齡的供試雞隨機(jī)分為4組，每組30只，自由采食與飲水。除健康對照組外，其余組通過點(diǎn)眼共接種IBD病毒液0. 05 mL的方式進(jìn)行攻毒，攻毒24h后立即給藥，分組與給藥情況詳見表I。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液，其特征在于每IOOml注射液中，其有效成分是黃芪多糖I 2g、磷脂5 7g、膽固醇I 3g、磷酸ニ鯨蠟酯O. I lg、螺內(nèi)酯O. 01 O.02go
2.如權(quán)利要求I所述的復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液，其特征在于所述的磷脂為卵磷脂、ニ棕櫚酰磷脂酰膽堿、ニ硬脂酰磷脂酰膽堿、ニ棕櫚酰磷脂酰こ醇胺、ニ油酰磷脂酰膽堿、ニ硬脂酰磷脂酰甘油。
3.一種制備如權(quán)利要求I或2所述的復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液的方法，其特征在于所述制法為薄膜分散法、逆向蒸發(fā)法、冷凍干燥法、超聲波分散法中的ー種。
4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于采用超聲分散法，即將黃芪多糖在PBS緩沖液中溶解，加至磷脂、膽固醇、磷酸ニ鯨蠟酷、螺內(nèi)酯共溶的有機(jī)溶劑制成的溶液中，蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，殘液經(jīng)超聲波分散，分離出脂質(zhì)體，重新混懸于100ml PBS緩沖液中，然后過濾、分裝，即得。
5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述的有機(jī)溶劑為氯仿、こ醚、こ醇、丙ニ醇、甲醇、丙醇的ー種或者幾種。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液及其制備方法。每100ml注射液中，其有效成分是黃芪多糖1～2g、磷脂5～7g、膽固醇1～3g、磷酸二鯨蠟酯0.1～1g、螺內(nèi)酯0.01～0.02g。本發(fā)明制備出的復(fù)方黃芪多糖長效注射液是利用磷脂和膽固醇的固有的性質(zhì)，通過借助外界的一定手段，將黃芪多糖用脂質(zhì)體的方法進(jìn)行包裹，得到了類似于生物膜的雙分子結(jié)構(gòu)，具有很好的組織相容性、細(xì)胞親和性、提高了黃芪多糖的穩(wěn)定性，并且擁有很好的緩釋性效果，在臨床應(yīng)用中，該注射液和原黃芪多糖注射液相比，在相同的用量下，黃芪多糖注射液僅使用一次即可達(dá)到常規(guī)注射液2次的良好的效果。
文檔編號A61P31/12GK102973508SQ20121042642
公開日2013年3月20日 申請日期2012年10月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月31日
發(fā)明者賀培益, 陳圓圓, 劉升, 柴保國, 高義 申請人:河南牧翔動物藥業(yè)有限公司