專利名稱：一種無明膠及人血蛋白成分的疫苗凍干保護(hù)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開一種無明膠及人血蛋白成分的疫苗凍干保護(hù)劑，不含動(dòng)物源性組分， 用于疫苗凍干保護(hù)，屬于疫苗生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
預(yù)防性疫苗的應(yīng)用使常見流行性傳染病得到了有效的控制，使得上述傳染性 疾病的發(fā)病率和死亡率大幅降低。但是，在疫苗的流通領(lǐng)域中發(fā)現(xiàn)，疫苗的儲存、運(yùn)輸和臨 床使用過程中，存在諸如穩(wěn)定性差、有效期短、不良反應(yīng)率高以及潛在的隱性危害等問題。 隨著生物科技的飛速發(fā)展及對不良反應(yīng)誘因的深入研究，發(fā)現(xiàn)很多問題與疫苗的保護(hù)劑和 佐劑有直接的關(guān)系，尤其是凍干產(chǎn)品中保護(hù)劑的組成物。首先，組成物中明膠或明膠的衍生 物能直接弓I起被接種者的變態(tài)反應(yīng)。1993年，Ke 1 so等報(bào)道，有些孩子對MMR聯(lián)合疫苗過敏 是由于疫苗中的明膠在被接種者機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生抗明膠分子的IgE抗體所致。明膠既可以引起 細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)，也可以引起非細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)；另外，明膠也是細(xì)菌內(nèi)毒素的主要來 源，可導(dǎo)致人體產(chǎn)生發(fā)熱反應(yīng)。其次，組成物中人血白蛋白雖然源于檢測合格的健康人血， 但是由現(xiàn)在檢測技術(shù)水平的限制，可影響某些病原體的檢測如肝炎方面等，由此可能對疫 苗造成隱性污染，最終對被接種者造成潛在的危害。因此必須開發(fā)無明膠、人血白蛋白的凍 干保護(hù)劑?，F(xiàn)有疫苗產(chǎn)品的凍干保護(hù)劑多數(shù)是以明膠、人血白蛋白以及部分糖類為主要成 分。隨著國家對疫苗質(zhì)量要求的逐步提高，行業(yè)中對保護(hù)劑中去除明膠或人血白蛋白意愿 更加迫切。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開一種無明膠及人血蛋白成分的疫苗凍干保護(hù)劑，解決了動(dòng)物源性組分 可能對疫苗造成隱性污染問題。本發(fā)明的無明膠及人血蛋白成分的疫苗凍干保護(hù)劑，以下主要物質(zhì)在凍干制品中 的終濃度(g/1)為
右旋糖酐(40)10-60、蔗糖10-60、乳糖10-50、甘露醇5-30、甘氨酸5-20、精氨酸1-10、 谷氨酸鈉1-10、尿素1-10、199綜合培養(yǎng)基1-50。本發(fā)明所述無明膠及人血蛋白成分的疫苗凍干保護(hù)劑，以下主要物質(zhì)在凍干制品 中的優(yōu)選終濃度(g/1)為
右旋糖酐(40) 50、蔗糖50、乳糖20、甘露醇10、甘氨酸10、精氨酸1. 85、谷氨酸鈉 9. 2、尿素4. 6、199綜合培養(yǎng)基2。本發(fā)明所提供的凍干保護(hù)劑的滲透壓在300 - 450m0sm范圍內(nèi)。本發(fā)明所提供的凍干保護(hù)劑pH在7. 2-7. 8范圍內(nèi)。本發(fā)明所提供的凍干保護(hù)劑的保存條件為2_8°C或室溫條件。本發(fā)明所述無明膠及人血蛋白成分的疫苗凍干保護(hù)劑的制備方法，其特征在于按比例稱取以上物質(zhì)充分溶解于適量滅菌注射用水后，然后定容，測定滲透壓并在 300-450mosm范圍內(nèi)，同時(shí)用IN鹽酸調(diào)整pH并在7. 2-7. 8范圍內(nèi)，最后除菌過濾，既得。本發(fā)明的積極效果在于保護(hù)劑不含動(dòng)物源性組分，并且使疫苗的內(nèi)毒素含量大 幅降低，極大地降低了對人體的刺激性及危害性，賦予疫苗更好的安全性、穩(wěn)定性；同時(shí)本 發(fā)明的保護(hù)劑由于未使用諸如海藻糖等價(jià)格昂貴的原材料，因此具有成本低的優(yōu)勢，更適 合于產(chǎn)業(yè)化。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例I
稱取以下物質(zhì)(g/1)為右旋糖酐(40) 50、蔗糖50、乳糖20、甘露醇10、甘氨酸10、 精氨酸I. 85、谷氨酸鈉9. 2、尿素4. 6、199綜合培養(yǎng)基2，將上述物質(zhì)充分溶解于適量滅 菌注射用水后，然后定容，測定滲透壓并在300-450mOsm范圍內(nèi)，同時(shí)用IN鹽酸調(diào)整pH并 在7. 2-7. 8范圍內(nèi)，最后除菌過濾，既得。
實(shí)施例2
稱取以下物質(zhì)(g/1)為右旋糖酐(40) 20、蔗糖30、乳糖10、甘露醇5、甘氨酸5、精 氨酸I. 85、谷氨酸鈉9. 2、尿素4. 6、199綜合培養(yǎng)基2，將上述物質(zhì)充分溶解于適量滅菌 注射用水后，然后定容，測定滲透壓并在300-450mOsm范圍內(nèi)，同時(shí)用IN鹽酸調(diào)整pH并在 7. 2-7. 8范圍內(nèi)，最后除菌過濾，既得。實(shí)施例3
稱取以下物質(zhì)(g/1)為右旋糖酐(40) 60、蔗糖60、乳糖25、甘露醇15、甘氨酸15、 精氨酸I. 85、谷氨酸鈉9. 2、尿素4. 6、199綜合培養(yǎng)基2，將上述物質(zhì)充分溶解于適量滅 菌注射用水后，然后定容，測定滲透壓并在300-450mOsm范圍內(nèi)，同時(shí)用IN鹽酸調(diào)整pH并 在7. 2-7. 8范圍內(nèi)，最后除菌過濾，既得。對照實(shí)施例
稱取以下物質(zhì)(g/1)為鹿糖70g/l、明膠8g/l、人血白蛋白10g/l、精氨酸0. 5g/l、谷 氨酸鈉3g/l、尿素0. 5g/l、199綜合培養(yǎng)基lg/1，將上述物質(zhì)充分溶解于適量滅菌注射用水 后，然后定容，測定滲透壓并在300-450mOsm范圍內(nèi)，同時(shí)用IN鹽酸調(diào)整pH并在7. 2-7. 8 范圍內(nèi)，最后除菌過濾，既得。以下試驗(yàn)表明本發(fā)明凍干保護(hù)劑的積極效果
試驗(yàn)例I
I.以人胚肺二倍體細(xì)胞為培養(yǎng)基質(zhì)，制備水痘病毒培養(yǎng)物，以適量的實(shí)施例I配制的 保護(hù)劑與水痘病毒培養(yǎng)物混合，此混合物經(jīng)-70°C以下凍融、超聲破碎細(xì)胞、過濾收集上清 液，即為原液。2.原液按姆人份0. 58ml的裝量分裝于西林瓶中，一部分全加塞保存4°C做疫苗 凍干前感染性滴度的檢測，另一部分經(jīng)半加塞后置于凍干箱內(nèi)，準(zhǔn)備凍干。3.按步驟2所得的疫苗在凍干箱內(nèi)預(yù)凍至_45°C并在此溫度保溫2小吋，然后抽 真空至0. Imbar,同時(shí)隔板升溫至_28°C開始一次升華，于33°C控溫15小吋，即完成凍干。4.將上述凍干前及凍干后的疫苗分別進(jìn)行滲透壓、水分、內(nèi)毒素含量、凍干前后 滴度下降、2-8 V穩(wěn)定性、37 0C穩(wěn)定性檢測。試驗(yàn)例2按照試驗(yàn)例1所提供的方法制備疫苗及凍干并完成留樣，所不同的是保護(hù)劑采用實(shí)施 例2配制的保護(hù)劑。同時(shí)按試驗(yàn)例1所進(jìn)行的檢定項(xiàng)目完成各項(xiàng)檢定。試驗(yàn)例3
按照試驗(yàn)例1所提供的方法制備疫苗及凍干并完成留樣，所不同的是保護(hù)劑采用實(shí)施 例3配制的保護(hù)劑。同時(shí)按試驗(yàn)例1所進(jìn)行的檢定項(xiàng)目完成各項(xiàng)檢定。對照試驗(yàn)例
按照試驗(yàn)例1所提供的方法制備疫苗及凍干并完成留樣，所不同的是保護(hù)劑采用對照 實(shí)施例配制的保護(hù)劑。同時(shí)按試驗(yàn)例1所進(jìn)行的檢定項(xiàng)目完成各項(xiàng)檢定。試驗(yàn)例的檢定結(jié)果
對上述試驗(yàn)例和對照試驗(yàn)例的疫苗樣品分別進(jìn)行滲透壓、水分、內(nèi)毒素含量、凍干前后 滴度下降、2_8°C穩(wěn)定性、37°C穩(wěn)定性檢測，具體結(jié)果如下
1.本發(fā)明的保護(hù)劑制備的水痘疫苗滲透壓指標(biāo)的評價(jià)
將試驗(yàn)例及對照試驗(yàn)例制備的疫苗部分樣品按《中國藥典》三部附錄V H提供的方法 分別進(jìn)行滲透壓測定。結(jié)果表明，本發(fā)明的保護(hù)劑的疫苗水分均在300-450m0sm范圍內(nèi)，遠(yuǎn) 遠(yuǎn)低于含明膠及蛋白保護(hù)劑的疫苗。結(jié)果見下表。
權(quán)利要求
1.一種無明膠及人血蛋白成分的疫苗凍干保護(hù)劑，以下主要物質(zhì)在凍干制品中的終濃度(g/1)為 右旋糖酐(40) 10-60、蔗糖10-60、乳糖10-50、甘露醇5-30、甘氨酸5-20、精氨酸1-10、谷氨酸鈉1-10、尿素1-10、199綜合培養(yǎng)基1-50。
2.權(quán)利要求I所述無明膠及人血蛋白成分的疫苗凍干保護(hù)劑，以下主要物質(zhì)在凍干制品中的優(yōu)選終濃度(g/1)為 右旋糖酐(40) 50、蔗糖50、乳糖20、甘露醇5、甘氨酸5、精氨酸I. 85、谷氨酸鈉9.2、尿素4. 6、199綜合培養(yǎng)基2。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述無明膠及人血蛋白成分的疫苗凍干保護(hù)劑的制備方法，其特征在于 按比例稱取以上物質(zhì)充分溶解于適量滅菌注射用水后，然后定容，測定滲透壓并在300-450mosm范圍內(nèi)，同時(shí)用IN鹽酸調(diào)整pH并在7. 2-7. 8范圍內(nèi)，最后除菌過濾，既得。
全文摘要
本發(fā)明公開一種無明膠及人血蛋白成分的疫苗凍干保護(hù)劑，由右旋糖酐(40)、蔗糖、乳糖、甘露醇、甘氨酸、精氨酸、谷氨酸鈉、尿素、199綜合培養(yǎng)基等構(gòu)成保護(hù)劑，本發(fā)明不含動(dòng)物源性組分，并且使疫苗的內(nèi)毒素含量大幅降低，極大地降低了對人體的刺激性及危害性，賦予疫苗更好的安全性、穩(wěn)定性；同時(shí)本發(fā)明的保護(hù)劑由于未使用諸如海藻糖等價(jià)格昂貴的原材料，因此具有成本低的優(yōu)勢，更適合于產(chǎn)業(yè)化。
文檔編號A61K39/00GK102657870SQ20121017970
公開日2012年9月12日 申請日期2012年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月4日
發(fā)明者張勇, 李生軍, 梁慧穎, 梁雪, 鄒勇, 鄭曉麗, 郝寶雙, 隋波 申請人:長春祈健生物制品有限公司