專利名稱：環(huán)四肽化合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用作藥劑的環(huán)四肽化合物、涉及用于生產(chǎn)該化合物的方法并涉及含有該化合物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
已知組蛋白脫?；冈谡{(diào)節(jié)基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄機(jī)中起主要作用，且組蛋白脫?；敢种苿┱T導(dǎo)組蛋白乙?；^度并影響所述的基因表達(dá)。因此，將組蛋白脫?；敢种苿┯米饔苫虮磉_(dá)異常所導(dǎo)致的幾種疾病的治療劑或預(yù)防劑，所述的疾病諸如炎癥疾病、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、純合型地中海貧血癥、纖維變性、肝硬變、急性前髓性白血病(APL)、原蟲感染等。
在這方面，可以用作抗腫瘤藥的環(huán)四肽化合物公開在JP-A-196686中，但是在該公開文獻(xiàn)中沒有關(guān)于對組蛋白脫?；傅淖饔煤蛯ι鲜龈鞣N疾病的作用的記載。
發(fā)明公開內(nèi)容本發(fā)明涉及一種用作藥劑的新型環(huán)四肽化合物WF27082，涉及該化合物的制備方法并涉及含有該化合物的藥物組合物。
更具體地說，本發(fā)明涉及一種對組蛋白脫酰基酶活性具有有效抑制作用的環(huán)四肽化合物。
本發(fā)明的發(fā)明者還發(fā)現(xiàn)諸如WF27082這樣的組蛋白脫?；敢种苿┚哂杏行У拿庖咭种谱饔煤陀行У目鼓[瘤作用。因此，將諸如WF27082這樣的組蛋白脫酰基酶抑制劑用作免疫抑制劑和抗腫瘤藥的活性組分并用作器官移植排斥、自身免疫病、腫瘤等的治療劑或預(yù)防劑。
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種具有如上所述的生物活性的化合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種用于生產(chǎn)WF27082的方法，該方法通過在營養(yǎng)培養(yǎng)基中發(fā)酵產(chǎn)生WF27082的屬于支頂孢屬(Acremonium)的菌株來完成。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種含有WF27082作為活性組分的藥物組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供諸如WF27082這樣的組蛋白脫?；敢种苿┯糜谥委熁蝾A(yù)防上述疾病的用途。
因此，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下。
(1)一種下列通式的WF27082化合物 其中R1是甲基，R2是甲基或乙基，R3是氫或甲基且R4是可以帶有羥基保護(hù)基或不帶有羥基保護(hù)基的羥基，條件是當(dāng)R3是氫時(shí)，R2是乙基。
(2)一種上述(1)的WF27082化合物，其中R3是甲基，R2是乙基，R3是甲基且R4是羥基。
(3)一種屬于支頂孢屬的真菌菌株，它具有的保藏號為FERMBP-6539且它產(chǎn)生一種具有組蛋白脫?；敢种苹钚缘幕衔?。
(4)一種具有組蛋白脫?；敢种苹钚缘幕衔铮ㄟ^在營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)上述(3)的真菌菌株并從其培養(yǎng)肉湯中回收所述化合物來獲得。
(5)一種用于生產(chǎn)上述(1)的WF27082化合物的方法，該方法包括在營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)生WF27082的屬于支頂孢屬的菌株并從其培養(yǎng)肉湯中回收所述化合物的步驟。
(6)上述(5)的方法，其中所述的產(chǎn)生WF27082的屬于支頂孢屬的菌株是上述(3)的真菌菌株。
(7)一種藥物組合物，它含有上述(1)的WF27082化合物作為活性組分和藥物上可接受的基本上無毒性的載體或賦形劑。
(8)一種用作藥劑的上述(1)的化合物。
(9)一種用于生產(chǎn)具有組蛋白脫?；敢种苹钚缘幕衔锏姆椒ǎ摲椒òㄔ跔I養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)屬于支頂孢屬的真菌菌株并回收所述化合物的步驟，其中所述的真菌菌株可產(chǎn)生一種具有組蛋白脫酰基酶抑制活性的化合物。
(10)一種具有組蛋白脫?；敢种苹钚缘幕衔铮ㄟ^在營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)屬于支頂孢屬的真菌菌株并從其培養(yǎng)肉湯中回收所述化合物來獲得，其中所述的屬于支頂孢屬的真菌菌株可產(chǎn)生一種具有組蛋白脫酰基酶抑制活性的化合物。
(11)一種含有通式(I)化合物的組蛋白脫酰基酶抑制劑 其中R1是甲基，R2是甲基或乙基，R3是氫或甲基且R4是可以帶有羥基保護(hù)基或不帶有羥基保護(hù)基的羥基。
(12)一種用于抑制組蛋白脫酰基酶的方法，該方法包括使用上述(11)中所用的化合物(I)的步驟。
(13)一種上述(11)中所用的化合物(I)在制備用于抑制組蛋白脫?；傅乃巹┲械挠猛?。
(14)一種用于治療或預(yù)防炎癥疾病、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、純合型地中海貧血癥、纖維變性、肝硬變、急性前髓性白血病(APL)、器官移植排斥或自身免疫病的藥物組合物，它含有通式(I)的化合物作為活性組分，其中R1是甲基，R2是甲基或乙基，R3是氫或甲基且R4是可以帶有羥基保護(hù)基或不帶有羥基保護(hù)基的羥基。
(15)一種用于治療或預(yù)防炎癥疾病、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、純合型地中海貧血癥、纖維變性、肝硬變、急性前髓性白血病(APL)或器官移植排斥、自身免疫病的方法，該方法包括對人或動物給予上述(14)中所用的化合物(I)的步驟。
(16)一種上述(14)中所用的化合物(I)在制備用于治療或預(yù)防炎癥疾病、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、純合型地中海貧血癥、纖維變性、肝硬變、急性前髓性白血病(APL)、器官移植排斥或自身免疫病的藥劑中的用途。
(17)一種用于治療或預(yù)防原蟲感染或腫瘤的方法，該方法包括對人和動物給予上述(1)中所用的化合物WF27082的步驟。
(18)一種上述(1)中所用的化合物WF27082在制備用于治療或預(yù)防原蟲感染或腫瘤的藥劑中的用途。
(19)一種組蛋白脫?；敢种苿┳鳛槊庖咭种苿┗蚩鼓[瘤藥的用途。
(20)一種組蛋白脫?；敢种苿┰谥苽溆糜谥委熁蝾A(yù)防器官移植排斥、自身免疫病或腫瘤的藥劑中的用途。
對組蛋白脫酰基酶活性具有有效抑制作用的化合物可以由下列通式(I)代表 其中R1是甲基，R2是甲基或乙基，R3是氫或甲基且R4是可以帶有羥基保護(hù)基或不帶有羥基保護(hù)基的羥基。
在這一系列化合物中，特別是下列通式的化合物是一種新型化合物。 其中R1是甲基，R2是甲基或乙基，R3是氫或甲基且R4是可以帶有羥基保護(hù)基或不帶有羥基保護(hù)基的羥基，條件是當(dāng)R3是氫時(shí)，R2是乙基。
具有通式(I)的本發(fā)明化合物，其中R1是甲基，R2是甲基或乙基，R3是氫或甲基且R4是可以帶有羥基保護(hù)基或不帶有羥基保護(hù)基的羥基，條件是當(dāng)R3是氫時(shí)，R2是乙基，也稱作WF27082。
下面具體解釋上述特定的定義及其優(yōu)選的實(shí)施方案。
除非另有說明，本說明書中所用的術(shù)語“低級”指的是1-6個(gè)碳原子。
合適的羥基保護(hù)基可以包括1-(低級烷硫基)(低級)烷基諸如低級烷硫基甲基(例如甲硫基甲基、乙硫基甲基、丙硫基甲基、異丙硫基甲基、丁硫基甲基、異丁硫基甲基、己硫基甲基等)等，其中優(yōu)選的可以是C1-C4烷硫基甲基且最優(yōu)選的可以是甲硫基甲基；三取代的甲硅烷基諸如三(低級)烷基甲硅烷基(例如三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三丁基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、三叔丁基甲硅烷基等)、低級烷基-二芳基甲硅烷基(例如甲基-二苯基甲硅烷基、乙基-二苯基甲硅烷基、丙基-二苯基甲硅烷基、叔丁基-二苯基甲硅烷基等)等，其中優(yōu)選的可以是三(C1-C4)烷基甲硅烷基和C1-C4烷基-二苯基甲硅烷基且最優(yōu)選的可以是叔丁基-二甲基甲硅烷基和叔丁基-二苯基甲硅烷基；?；T如脂族酰基、芳香族?；捅环枷慊〈闹艴；龋鼈冇婶人岷突撬嵫苌?。
脂族?；梢园梢詭в幸粋€(gè)或多個(gè)諸如羧基這樣的合適的取代基的低級鏈烷酰基(例如甲?；⒁阴；?、丙?；⒍□；?、異丁酰基、戊?；愇祯；⑿挛祯；⒓乎；?、羧基乙?；?、羧基丙?；?、羧基丁酰基、羧基己?；?、可以帶有一個(gè)或多個(gè)諸如低級烷基這樣的合適的取代基的環(huán)(低級)烷氧基(低級)鏈烷?；?例如環(huán)丙基氧基乙?；?、環(huán)丁基氧基丙酰基、環(huán)庚基氧基丁?；ⅹ盎趸阴；?、基氧基丙?；ⅹ盎趸□；?、基氧基庚?；?、基氧基己?；?、樟腦磺?；取?br> 芳香族?；梢园梢詭в幸粋€(gè)或多個(gè)諸如硝基這樣的合適的取代基的芳?；?例如苯甲?；?、甲苯酰基、二甲苯?；⑤刘；?、硝基苯基、二硝基苯基、硝基萘?；?、可以帶有一個(gè)或多個(gè)諸如鹵素這樣的合適的取代基的芳基磺酰基(例如苯磺?；?、甲苯磺?；?、二甲苯磺酰基、萘磺?；⒎交酋；⒙缺交酋；灞交酋；⒌獗交酋；?等。
被芳香基取代的脂族酰基可以包括可以帶有一個(gè)或多個(gè)諸如低級烷氧基和三鹵代(低級)烷基這樣的合適的取代基的芳基(低級)鏈烷?；?例如苯乙酰基、苯丙?；⒈蕉□；?、2-三氟甲基-2-甲氧基-2-苯乙?；?-乙基-2-三氟甲基-2-苯乙?；?、2-三氟甲基-2-丙氧基-2-苯乙?；?等。
當(dāng)上述通式(I)的化合物具有立體異構(gòu)體時(shí)，這類異構(gòu)體也包括在本發(fā)明中。通式(I)的化合物可以成鹽，它也包括在本發(fā)明中。例如，當(dāng)分子中存在諸如氨基這樣的堿性基團(tuán)時(shí)，酸加成鹽(例如與諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸等這樣的無機(jī)酸形成的鹽；與諸如甲磺酸、富馬酸、馬來酸、扁桃酸、檸檬酸、水楊酸等這樣的有機(jī)酸形成的鹽)是典型的；而當(dāng)存在諸如羧基這樣的酸性基團(tuán)時(shí)，堿性鹽(例如與諸如鈉、鉀、鈣、鎂、鋁等這樣的金屬形成的鹽；與諸如賴氨酸等這樣的氨基酸形成的鹽)是典型的。此外，其溶劑化物諸如水合物、乙醇酸鹽等也包括在本發(fā)明中。
在本說明書中，為了方便而使用下列特殊化合物的命名。化合物名稱 R1R2R2R4WF27082 B -CH3-CH2CH3-CH3-OHWF27082 E-CH3-CH2CH3-H -OHWF27082 F-CH3-CH3-CH3-OHFR235220 CH3-CH3-H -OHWF27082 B具有下列物化特性分子式C30H44N4O6分子量ESI-MS(+)m/z 557(M+H)+ESI-MS(-)m/z 555(M-H)-比旋[α]D(23℃)-129℃(c＝0.5，在氯仿中)紫外吸收光譜λmax(甲醇)235(sh)λmax(甲醇+0.01N HCl) 235(sh)λmax(甲醇+0.01N NaOH)235(sh)溶解性可溶于甲醇、氯仿、乙酸乙酯、二甲亞砜不溶于己烷顯色反應(yīng)陽性硫酸鈰反應(yīng)、碘蒸氣反應(yīng)、德拉根道夫反應(yīng)陰性茚三酮反應(yīng)、氯化鐵反應(yīng)、莫里什氏反應(yīng)、埃爾利希反應(yīng)薄層色譜(TLC)固定相 展開劑Rf值Silica Gel 60氯仿∶甲醇0.58F254*(20∶1，v/v)*由E.Merck制造高效液相色譜(HPLC)條件流動相乙腈∶水＝50∶50柱YMC ODS AM-303**(250mm長×4.6mm內(nèi)徑)流速1.0ml/分鐘檢測210nm處的UV檢測保留時(shí)間10.2分鐘**由YMC Co.，Ltd.制造紅外光譜vmax(凈)3300、2960、2940、2880、1715、1680、1660、1630、1510、1440、1380、1250、1060cm-11H核磁共振光譜(500MHz，CDCl3)δH7.52(1H，d，J＝10Hz，可互換)，7.30-7.17(5H，m)，7.17(1H，d，J＝10Hz，可互換)，5.81(1H，s，可互換)，5.16(1H，m)，4.67(1H，m)，4.26-4.16(2H，m)，4.05(1H，dd，J＝10&7.5Hz)，3.56(1H，d，J＝5Hz，可互換)，3.24(1H，dd，J＝13.5&10Hz)，2.96(1H，dd，J＝13.5&6Hz)，2.73(1H，dd，J＝10&8Hz)，2.62(1H，m)，2.54-2.29(4H，m)，2.16(1H，m)，1.82(1H，m)，1.66-1.56(3H，m)，1.38(3H，d，J＝7Hz)，1.41-1.27(5H，m)，1.28(3H，s)，0.88(3H，d，J＝6.5Hz)，0.84(3H，t，J-7Hz).13C核磁共振光譜(125 MHz，CDCl3)δC212.4(s)，175.6(s)，174.1(s)，173.1(s)，171.9(s)，137.0(s)，129.0(d)x2，128.6(d)x2，126.7(d)，72.6(d)，63.0(s)，58.0(d)，54.4(d)，53.8(t)，53.3(d)，37.2(t)，35.7(t)，33.0(t)，32.8(d)，28.8(t)，28.8(t)，27.8(t)，25.3(t)，23.2(t)，22.4(q)，19.8(q)，18.1(q)，8.4(q).物質(zhì)性質(zhì)中性物質(zhì)WF27082 E具有下列物化特性分子式C29H42N4O6分子量ESI-MS(+)m/z 543(M+H)+比旋 D(23℃)-137℃(c＝0.2，在氯仿中)紫外吸收光譜λmax(甲醇)235(sh)λmax(甲醇+0.01N HCl)235(sh)λmax(甲醇+0.01N NaOH)235(sh)溶解性可溶于甲醇、氯仿、乙酸乙酯、二甲亞砜顯色反應(yīng)陽性硫酸鈰反應(yīng)、碘蒸氣反應(yīng)、德拉根道夫反應(yīng)陰性茚三酮反應(yīng)、氯化鐵反應(yīng)、莫里什氏反應(yīng)、埃爾利希反應(yīng)薄層色譜(TLC)固定相 展開劑Rf值Silica Gel 60氯仿∶甲醇0.46F254*(20∶1，v/v)*由E.Merck制造高效液相色譜(HPLC)條件流動相乙腈∶水＝50∶50柱YMC ODS AM-303**(250mm長×4.6mm內(nèi)徑)流速1.0ml/分鐘檢測210nm處UV檢測保留時(shí)間7.6分鐘**由YMC Co.，Ltd.制造紅外光譜vmax(凈)3300、2940、1720、1690、1660、1630、1530、1460、1420、1380、1320、1250、1150、1060cm-11H核磁共振光譜
(500 MHz，CDCl3)δH7.54(1H，d，J＝10Hz，可互換)，7.29-7.17(5H，m)，7.10(1H，d，J＝10Hz，可互換)，5.82(1H，s，可互換)，5.19(1H，m)，4.67(1H，m)，4.26-4.17(2H，m)，3.85(1H，m)，3.54(1H，br.s，可互換)，3.30-3.20(2H，m)，2.96(1H，dd，J＝14&6Hz)，2.54-2.38(2H，m)，2.36-2.28(2H，m)，2.18-2.12(2H，m)，1.84-1.72(3H，m)，1.67-1.57(3H，m)，1.38(3H，d，J＝7Hz)，1.37-1.23(4H，m)，1.28(3H，s)，0.83(3H，t，J＝7z)13C核磁共振光譜(125MHz，CDCl3)δC212.4(s)，175.6(s)，174.1(s)，172.8(s)，171.8(s)，137.0(s)，129.0(d)x2，128.6(d)x2，126.7(d)，72.6(d)，63.1(s)，57.8(d)，54.4(d)，53.3(d)，47.0(t)，37.3(t)，35.8(t)，28.8(t)，28.7(t)，27.9(t)，25.3(t)，25.0(t)，24.7(t)，23.2(t)，22.4(q)，19.8(q)，8.4(q).物質(zhì)性質(zhì)中性物質(zhì)WF27082 F具有下列物化特性分子式C29H42N4O6分子量ESI-MS(+)m/z 543(M+H)+比旋[α]D(23℃)-114℃ (c＝0.3，在氯仿中)紫外吸收光譜λmax(甲醇)235(sh)λmax(甲醇+0.01N HCl) 235(sh)λmax(甲醇+0.01N NaOH)235(sh)溶解性可溶于甲醇、氯仿、乙酸乙酯、二甲亞砜顯色反應(yīng)陽性硫酸鈰反應(yīng)、碘蒸氣反應(yīng)、德拉根道夫反應(yīng)陰性茚三酮反應(yīng)、氯化鐵反應(yīng)、莫里什氏反應(yīng)、埃爾利希反應(yīng)薄層色譜(TLC)固定相 展開劑Rf值Silica Gel 60 氯仿∶甲醇0.47F254* (20∶1，v/v)*由E.Merck制造高效液相色譜(HPLC)條件流動相乙腈∶水＝50∶50柱YMC ODS AM-303**(250mm長×4.6mm內(nèi)徑)流速1.0ml/分鐘檢測210nm處UV檢測保留時(shí)間7.6分鐘**由YMC Co.，Ltd.制造紅外光譜vmax(凈)3300、2930、1720、1690、1660、1630、1530、1440、1390、1280、1180、1120、1060cm-11H核磁共振光譜(500MHz，CDCl3)δH7.47(1H，d，J＝10Hz，可互換)，7.30-7.18(5H，m)，7.17(1H，d，J＝10Hz，可互換)，5.88(1H，s，可互換)，5.14(1H，m)，4.66(1H，m)，4.26-4.14(2H，m)，4.05(1H，dd，J＝10&8Hz)，3.54(1H，d，J＝5Hz，可互換)，3.27(1H，dd，J＝14&10Hz)，2.94(1H，dd，J＝14&6Hz)，2.70(1H，dd，J＝10&8Hz)，2.61(1H，m)，2.53-2.35(3H，m)，1.80(1H，m)，1.78(3H，s)，1.70-1.57(3H，m)，1.40-1.25(5H，m)，1.38 (3H，d，J＝7Hz)，1.34(3H，s)，0.86(3H，d，J＝7Hz)13C核磁共振光譜(125 MHz，CDCl3)δC212.4(s)，175.6(s)，174.3(s)，173.0(s)，171.9(s)，137.0(s)，129.0(d)x2，128.6(d)x2，126.7(d)，72.6(d)，58.8(s)，57.9(d)，54.3(d)，53.9(t)，53.5(d)，37.3(t)，35.7(t)，33.0(t)，32.8(d)，28.8(t)，28.7(t)，26.5(q)，25.2(t)， 23.5(q)，23.2(t)，19.8(q)，18.1(q).物質(zhì)性質(zhì)
中性物質(zhì)如上所述根據(jù)上述物化特性和廣泛研究，分別確定WF27082 B、E和F的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
通過在營養(yǎng)肉湯中培養(yǎng)產(chǎn)生WF27082的屬于支頂孢屬的菌株諸如支頂孢屬27082號菌株且如果必要使用化學(xué)修飾(例如引入羥基保護(hù)基等)可以生產(chǎn)WF27082。
例如，通過將羥基保護(hù)基引入化合物(其中R4是羥基)可以制備其中R4是帶有羥基保護(hù)基的羥基的WF27082。
在該反應(yīng)中使用的羥基保護(hù)基的合適的引導(dǎo)劑可以是一種常用的物質(zhì)諸如二(低級)烷基亞砜，例如低級烷基甲基亞砜(例如二甲亞砜、乙基甲基亞砜、丙基甲基亞砜、異丙基甲基亞砜、丁基甲基亞砜、異丁基甲基亞砜、己基甲基亞砜等)；三取代的甲硅烷基化合物諸如三(低級)烷基甲硅烷基鹵(例如三甲基甲硅烷基氯、三乙基甲硅烷基溴、三丁基甲硅烷基氯、叔丁基二甲基甲硅烷基氯等)；低級烷基-二芳基甲硅烷基鹵(例如甲基-二苯基甲硅烷基氯、乙基-二苯基甲硅烷基溴、丙基-二甲苯基甲硅烷基氯、叔丁基-二苯基甲硅烷基氯等)和能夠引入如上所述的酰基的諸如羧酸、磺酸及其反應(yīng)衍生物例如?；u、酸酐、活性酰胺、活性酯等這樣的?；瘎?。這類反應(yīng)衍生物的優(yōu)選實(shí)例可以包括?；龋货；?；與諸如取代磷酸(例如二烷基磷酸、苯基磷酸、二苯基磷酸、二芐基磷酸、鹵化磷酸等)這樣的酸形成的混合酸酐；二烷基亞磷酸；亞硫酸；硫代硫酸；硫酸；碳酸烷基酯(例如碳酸甲酯、碳酸乙酯、碳酸丙酯等)；脂族羧酸(例如新戊酸、戊酸、異戊酸、2-乙基丁酸、三氯乙酸、三氟乙酸等)；芳香羧酸(例如苯甲酸等)；一種對稱酸酐；一種與含有亞氨基官能基的諸如咪唑、4-取代咪唑、二甲基吡唑、三唑和四唑這樣的雜環(huán)化合物形成的活性酰胺；一種活性酯(例如對硝苯基酯、2，4-二硝苯基酯、三氯苯基酯、五氯苯基酯、甲磺?；交ァ⒈交脚嫉?、苯基硫酯、對硝苯基硫酯、對甲苯基硫酯、羧甲基硫酯、吡啶基酯、哌啶基酯、8-喹啉基硫酯或與諸如N，N-二甲基羥基胺、1-羥基-2-(1H)-吡啶酮、N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基苯鄰二甲酰亞胺、1-羥基苯并三唑、1-羥基-6-氯苯并三唑等這樣的N-羥基化合物形成的酯)等。
在該反應(yīng)中，就將二(低級)烷基亞砜用作羥基保護(hù)基的引導(dǎo)劑(introducing agent)的情況而言，該反應(yīng)通常在有諸如乙酐這樣的低級鏈烷酸酐存在的情況下進(jìn)行。
此外，就將三取代甲硅烷基化合物用作羥基保護(hù)基的引導(dǎo)劑的情況而言，該反應(yīng)優(yōu)選在有諸如咪唑等這樣的常用縮合劑存在的情況下進(jìn)行。
此外，就將?；瘎┯米髁u基保護(hù)基的引導(dǎo)劑的情況而言，該反應(yīng)優(yōu)選在有下列物質(zhì)存在的情況下進(jìn)行有機(jī)或無機(jī)堿諸如堿金屬(例如鋰、鈉、鉀等)、堿土金屬(例如鈣等)、堿金屬氫化物(例如氫化鈉等)、堿土金屬氫化物(例如氫化鈣等)、堿金屬氫氧化物(例如氫氧化鈉、氫氧化鉀等)、堿金屬碳酸鹽(例如碳酸鈉、碳酸鉀等)、堿土金屬碳酸氫鹽(例如碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等)、堿金屬醇鹽(例如甲醇鈉、乙醇鈉、叔丁醇鉀等)、堿金屬鏈烷酸鹽(例如乙酸鈉等)、三烷基胺(例如三乙胺等)、吡啶化合物(例如吡啶、盧剔啶、甲基吡啶、4-N，N-二甲氨基吡啶等)、喹啉等。
就在該反應(yīng)中使用游離形式或其鹽形式的?；瘎┑那闆r而言，該反應(yīng)優(yōu)選在有下列常用縮合劑存在的情況下進(jìn)行諸如碳化二亞胺化合物[例如N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺、N-環(huán)己基-N’-(4-二乙氨基環(huán)己基)碳化二亞胺、N，N’-二乙基碳化二亞胺、N，N’-二異丙基碳化二亞胺、N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺等]；乙烯酮亞胺化合物(例如N，N’-羰基雙(2-甲基咪唑)、五亞甲基乙烯酮-N-環(huán)己基亞胺、二苯基乙烯酮-N-環(huán)己基亞胺等)；烯或炔醚化合物(例如乙氧基乙炔、β-環(huán)乙烯基乙基醚)；N-羥基苯并三唑衍生物的磺酸酯[例如1-(4-氯苯磺酰氧基)-6-氯-1H-苯并三唑等]等。
該反應(yīng)通常在不會對反應(yīng)產(chǎn)生不利影響的常規(guī)溶劑中進(jìn)行，諸如水、丙酮、二氯甲烷、醇(例如甲醇、乙醇等)、四氫呋喃、吡啶、N，N-二甲基甲酰胺等或其混合物；而另外就堿和羥基保護(hù)基的引導(dǎo)劑是液體的情況而言，也可以將它用作溶劑。
反應(yīng)溫度并不關(guān)鍵且該反應(yīng)通常在冷卻至加熱的條件下進(jìn)行。生產(chǎn)菌株27082的特征真菌菌株27082號最初土壤樣品分離、保藏在日本的Akita-shi，Akita-ken。該生物體在各種培養(yǎng)基上生長得極為有限并形成淡黃色至暗棕色菌落。該菌株產(chǎn)生由單純瓶梗產(chǎn)孢細(xì)胞和粘液質(zhì)頭中的分生孢子組成的分生孢子結(jié)構(gòu)，而它不在培養(yǎng)基上形成有性型。其真菌特征如下。
將各種瓊脂培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物特征概括在表1中。馬鈴薯右旋糖瓊脂上的培養(yǎng)物生長得極為有限，在25℃下的4周后達(dá)到1.5-2.5cm直徑。該菌落表面中心升高、起毛、呈放射狀溝槽至皺紋狀、有滲出物、黃褐色至灰棕色、而邊緣處呈淡黃色。在培養(yǎng)基上沒有觀察到分生孢子結(jié)構(gòu)。反色是暗棕色并產(chǎn)生棕色可溶性色素。在相同條件下玉米粉瓊脂上的菌落以與馬鈴薯右旋糖瓊脂上類似的速度發(fā)散。表面平坦、薄、粉狀、中心呈橄欖色而邊緣呈淡黃色。大量形成分生孢子結(jié)構(gòu)。反色在中心呈暗棕色而邊緣呈淡黃色至灰棕色，并觀察到淡桔黃色可溶性色素。
根據(jù)Miura’s LCA平板(Miura，K.和M.Kudo《日本真菌學(xué)協(xié)會學(xué)報(bào)》(Trans.Mycol.Soc.Japan)11116-118，1970)上的培養(yǎng)物確定形態(tài)特征。分生孢子梗幾乎不存在、微線形(micronematous)、短、貫基且有時(shí)是輪生的。產(chǎn)孢細(xì)胞是離散的、頂生、瓶梗且線形(nematogenous)至具絞旋線形(plectonematogenous)。它們是透明的、稍粗糙、刺狀至尖錐狀、帶有模糊的領(lǐng)部、長21-40μm、頂端距至基底部從(1.5-)2-2.5μm減小至1-2(-2.5)μm且產(chǎn)生粘液滴形式的分生孢子。分生孢子開始是透明的、在成熟時(shí)逐漸變成深橄欖色、平滑、單細(xì)胞、寬橢圓體至橢圓體、有時(shí)呈梨形、頂端成環(huán)形、基底部上帶有小突出物且大小為3.5－5(-6)×2.5－3(-3.5)μm。營養(yǎng)菌絲是透明的、平滑、有隔膜且有分支。菌絲細(xì)胞呈圓柱形、2-3μm寬。沒有觀察到厚壁孢子。
27082號菌株能夠在2-26℃的溫度范圍內(nèi)生長，在21-22℃下生長最佳。在馬鈴薯右旋糖瓊脂(由NISSUI制造)上測定這些溫度數(shù)據(jù)。
以與von Arx(J.A.von Arx《真菌屬-純培養(yǎng)物中形成孢子》(The Genera of Fungi-Sporulating in Pure Culture)第3版315頁，J.Cramer，Vaduz，1974)和Domsch等(K.H.Domsch，W.Gams和T.-H.Anderson《土壤真菌概要》(Compendium of SoilFungi)第1卷859頁，Academic Press，London，1980)的真菌分類標(biāo)準(zhǔn)相比較的形態(tài)特征為基礎(chǔ)，將27082號菌株看作屬于絲狀菌屬的Acremonium Link(1809)。因此，我們將這種分離物鑒定為支頂孢屬的一種菌株并將其命名為支頂孢屬27082號。已經(jīng)將該菌株保藏在工業(yè)科學(xué)和技術(shù)部國立生命科學(xué)和人體技術(shù)研究所(NationalInstitute of Bioscience and Human-Technology，Agency ofIndustrial Science and Technology)，1-3，Higashi 1-chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，305-8566，Japan，給予其保藏號為FERM BP-6539(保藏日1998年10月2日)。表1.27082號菌株的培養(yǎng)物特征培養(yǎng)基培養(yǎng)物特征麥芽汁瓊脂*G極為有限，1.5-2.5cmS環(huán)狀、平坦、氈狀至起毛狀、形成一定的分生孢子結(jié)構(gòu)、中心呈橄欖褐色(4D3-4E3)、邊緣呈淡黃色(6A2)或淺桔黃色(6B4-6B5)R中心成褐色(7E8)、邊緣呈淺桔黃色(5A3)馬鈴薯右旋糖瓊脂(Difco G極為有限，1.5-2.5cm0013) S環(huán)狀、中心升高、起毛、呈發(fā)散溝槽狀至皺紋狀、有滲出物、不形成分生孢子結(jié)構(gòu)、淺黃褐色(7C4)至灰棕色(7D3)且邊緣呈淡黃色(6A2)R深棕色(7F7-7F8)并產(chǎn)生棕色可溶性色素Czapek氏溶液瓊脂* G極為有限，1.5-2.5cmS環(huán)狀至不規(guī)則狀、平坦至中心升高、邊緣沉沒、不形成分生孢子結(jié)構(gòu)、中心呈深棕色(7F6)或淡黃色(6A2)、邊緣呈淺黃色(4A2)且中部呈棕色(6E6-6E8)
R深棕色(6F5-6F7)且邊緣呈淺黃色(4A2)沙氏葡糖瓊脂(Difco 0190) G極為有限，1.5-2.0cmS環(huán)狀、中心升高、氈狀、呈發(fā)散溝槽狀至皺紋狀、不形成分生孢子結(jié)構(gòu)、中心呈淺桔黃色(6B4-6B5)且邊緣呈淺棕色(6D6)至棕色(6E6)R棕色(7E7)至深棕色(7F7)并產(chǎn)生棕色可溶性色素埃默森Yp Ss瓊脂(DifcoG極為有限，1.5-2.5cm0739) S環(huán)狀、平坦、氈狀、有滲出物、不形成分生孢子結(jié)構(gòu)、淺黃色(5A2)且邊緣呈淺棕色(6D6-6D7)R淺棕色(6D7)至深棕色(6F7)玉米粉瓊脂(Difco 0386) G極為有限，1.5-2.5cmS環(huán)狀、平坦、薄、粉狀、形成大量分生孢子結(jié)構(gòu)、中心呈橄欖色(3F5-3F6)且邊緣呈淡黃色(6A2)R中心呈深棕色(7F7)，邊緣呈淺桔黃色至淺棕色(5D3)并產(chǎn)生淺桔黃色可溶性色素MY20瓊脂*G極為有限，1.5-2.5cmS環(huán)狀、中心升高、起毛至絮狀、呈發(fā)散溝槽狀、不形成分生孢子結(jié)構(gòu)、中心呈淺桔黃色(6B4-6B6)且邊緣呈淡黃色(5A2)R淺棕色(6D7-6D8)且邊緣呈淺桔黃色(5A5)燕麥粉瓊脂(Difco 0552) G極為有限，1.5-2.5cmS環(huán)狀、平坦、氈狀至起毛、呈發(fā)散溝槽狀、形成一定的分生孢子結(jié)構(gòu)、中心呈暗綠色(30D4-30E4)、
邊緣呈淡黃色(6A2)并產(chǎn)生淺棕色可溶性色素縮寫G生長，測定的以直徑計(jì)的菌落大?。籗；菌落表面，R反向。
*麥芽汁瓊脂、Czapek氏溶液瓊脂和MY20瓊脂的組成均以JCM菌株目錄為基礎(chǔ)(Nakase，T.，第6版617頁，日本微生物保藏中心(Japan Collection of Microorganisms)，物理和化學(xué)研究所(the Institute of Physical and Chemical Research)，Saitama，1995)。
在25℃下培養(yǎng)28天后觀察到了這些特征。顏色描述以《Methuen顏色手冊》(Methuen Handbook of Colour)(Kornerup，A.和J.H. Wanscher第3版252頁，Methuen，London，1978)為基礎(chǔ)。
可以理解的是WF27082的生產(chǎn)并不限于本文所述的特定生物體的應(yīng)用，它僅用于解釋的目的。本發(fā)明還包括能夠產(chǎn)生WF27082的所有突變體的應(yīng)用，所述的突變體包括天然突變體和可以由所述生物體通過常規(guī)方法產(chǎn)生的人工突變體，所述的常規(guī)方法諸如重組DNA技術(shù)；X線照射；紫外線照射；用N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍、2-氨基嘌呤處理等。WF27082的生產(chǎn)在上述通式(I)的化合物中，當(dāng)產(chǎn)生WF27082的屬于支頂孢屬的菌株在需氧條件下生長在含有可同化碳和氮源的營養(yǎng)培養(yǎng)基中時(shí)(例如搖合培養(yǎng)、浸沒培養(yǎng)等)，產(chǎn)生了WF27082。
在營養(yǎng)培養(yǎng)基中優(yōu)選的碳源是諸如葡萄糖、蔗糖、淀粉、果糖或甘油等這樣的碳水化合物。
優(yōu)選的氮源是花生粉、酵母提取物、牛肉提取物、胨、聚胨、谷蛋白粉、棉子粉、大豆粉、大豆粗粉、玉米漿、干酵母、麥胚等以及諸如銨鹽(例如硝酸銨、硫酸銨、磷酸銨等)、脲或氨基酸等這樣的無機(jī)和有機(jī)氮化合物。
盡管以組合形式使用是有利的，但是并不要求使用純形式的碳和氮源，因?yàn)楹形⒘可L因子和相當(dāng)數(shù)量的礦物營養(yǎng)物的純度較低的物質(zhì)也適合使用。
如果需要，可以向培養(yǎng)基中加入無機(jī)鹽諸如碳酸鈉或碳酸鈣、磷酸鈉或磷酸鉀、氯化鈉或氯化鉀、碘化鈉或碘化鉀、鎂鹽、銅鹽、鋅鹽、鐵鹽或鈷鹽等。
如果必要，尤其是當(dāng)培養(yǎng)基嚴(yán)重起泡時(shí)，可以加入消泡劑諸如液體石蠟、脂肪油、植物油、礦物油、硅氧烷等。
可以按照各種方式諸如通過螺旋槳或類似的機(jī)械攪拌設(shè)備進(jìn)行攪拌、通過旋轉(zhuǎn)或振搖發(fā)酵罐等來完成對培養(yǎng)混合物的攪拌和通氣。
發(fā)酵過程通常在約10℃-40℃、優(yōu)選20℃-30℃的溫度下進(jìn)行約50小時(shí)-150小時(shí)，它可以根據(jù)發(fā)酵條件和規(guī)模而改變。
然后為回收WF27082而使所得的培養(yǎng)肉湯進(jìn)行用于回收和純化生物活性物質(zhì)所通常使用的各種步驟，例如用合適的溶劑或某些溶劑的混合物進(jìn)行溶劑提取、層析或從合適的溶劑或其混合物中重結(jié)晶。
例如，可以按照J(rèn)P-A-7-196686中所述的方法制備通式(I)化合物中的所述化合物，其中R1是甲基、R2是甲基、R3是氫且R4是羥基或被保護(hù)的羥基(例如FR235220)。通過如上所述制備WF27082并修飾其必要的部分也可以獲得所述化合物。這種修飾方法可以按照本身公知的方法來進(jìn)行。
WF27082可以是溶劑化物形式，它屬于本發(fā)明的范圍。該溶劑化物優(yōu)選包括水合物和乙醇鹽。
作為表現(xiàn)出上述通式(I)化合物的生物活性的實(shí)例，將某些生物數(shù)據(jù)列在下面。
試驗(yàn)1.對淋巴細(xì)胞種質(zhì)遺傳(blastogenesis)反應(yīng)的作用將WF27082和FR235220用作測試化合物。
在帶有孔的微量滴定平板中進(jìn)行淋巴細(xì)胞種質(zhì)遺傳試驗(yàn)，所述的各孔內(nèi)的0.1ml RPMI-1640培養(yǎng)基中含有1×105個(gè)Balb/c小鼠的脾細(xì)胞，所述的培養(yǎng)基用10％胎牛血清(FBS)、50mM 2-巰基乙醇、青霉素(100個(gè)單位/ml)和鏈霉素(100μg/ml)進(jìn)行了補(bǔ)充，向其中加入抗-CD3抗體(2C11)(1μm/ml)。在37℃下和5％ CO2加濕氣體中將細(xì)胞培養(yǎng)72小時(shí)。培養(yǎng)期后，通過MTT[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基-2H-四唑鎓溴化物(MTT)]染料還原試驗(yàn)對淋巴細(xì)胞種質(zhì)遺傳中測試樣品的抑制活性進(jìn)行定量。
將WF27082 B溶于甲醇并進(jìn)一步稀釋入RPMI-1640培養(yǎng)基并加入到培養(yǎng)物中至終濃度為50ng/ml或50ng/ml以下。將WF235220溶于甲醇并進(jìn)一步稀釋入RPMI-1640培養(yǎng)基并加入到培養(yǎng)物中至終濃度為500ng/ml或500ng/ml以下。分別將結(jié)果列在表2和表3中。
正如表2和3中所示，WF27082 B和WF235220以一種劑量依賴性方式抑制由抗-CD3抗體誘導(dǎo)的鼠淋巴細(xì)胞種質(zhì)遺傳。發(fā)現(xiàn)WF27082B具有特別強(qiáng)的作用。表2 WF27082 B對由抗-CD3抗體誘導(dǎo)的鼠淋巴細(xì)胞種質(zhì)遺傳的作用濃度502512.56.33.11.60.8(ng/ml)抑制(％)113.5 114.1 111.7 86.6 46.1 19.3 4.4表3 FR235220對由抗-CD3抗體誘導(dǎo)的鼠淋巴細(xì)胞種質(zhì)遺傳的作用濃度500 250 125 633116 8 4(ng/ml)抑制(％)126.0 126.0 127.2 125.3 106.0 45.1 -1.3 -23.4試驗(yàn)2.WF27082 B對小鼠體內(nèi)DTH(延緩型過敏性)反應(yīng)的作用通過皮下注射給雌性Balb/c小鼠免疫接種綿羊紅細(xì)胞(1×108個(gè))。從免疫接種前第1天開始將WF27082 B溶于10％ HCO-60水溶液并口服連續(xù)給予8天。免疫接種后6天，將綿羊紅細(xì)胞(1.25×108個(gè))注入右后爪墊且在24小時(shí)后用刻度盤(Ozaki MFG CO.，Ltd.)測量爪墊的腫脹程度。將DTH的大小表示為受攻擊的右爪墊與未處理的左爪墊的厚度之比。
正如表4中所示，爪墊的腫脹程度明顯以劑量依賴性方式受到給予WF27082 B的抑制而沒有任何體重減輕。表4.WF27082 B對小鼠體內(nèi)DTH反應(yīng)的作用N劑量爪墊腫脹(抑制％) 體重增加(g)(mg/kg)未處理的5100*** 1.2±0.2預(yù)處理的10 0 1.2±0.2WF27082 B 5 1020 1.5±0.25 3234**1.5±0.35 100 47*** 1.1±0.3**P＜0.01 ***P＜0.001試驗(yàn)3.對部分純化的人組蛋白脫?；傅淖饔没旧先缦滤霭凑誝oshida等提供的方法部分純化人組蛋白脫?；浮⒅苽鋄3H]乙酰基組蛋白并進(jìn)行對組蛋白脫?；富钚缘臋z測試驗(yàn)。
人脫酰基酶的部分純化-從人T細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞中部分純化人脫?；?。將Jurkat細(xì)胞(5×108個(gè)細(xì)胞)懸浮于由15mM磷酸鉀(pH7.5)、5％甘油和0.2mM EDTA組成的40ml HDA緩沖液中。在勻化后，通過離心(35,000×g，10分鐘)收集細(xì)胞核并將其在20ml的用1M(NH4)2SO4補(bǔ)充的相同緩沖液中勻化。將粘性勻化物進(jìn)行超聲處理并通過離心(35,000×g，10分鐘)使之澄清且通過將(NH4)2SO4的濃度升高至3.5M來沉淀脫?；?。將沉淀的蛋白質(zhì)溶于10ml的HDA緩沖液并對4升的相同緩沖液進(jìn)行透析。然后將透析液上用相同緩沖液平衡的DEAE-纖維素(Whatman DE52)柱(25×85mm)并用線性梯度(0-0.06M)的NaCl(300ml)洗脫。在0.3-0.4M NaCl之間洗脫組蛋白脫?；富钚缘膯畏寮壏帧?br> 乙?；M蛋白的制備-為了獲得[3H]乙?；鶚?biāo)記的組蛋白作為組蛋白脫?；笝z測試驗(yàn)的底物，在37℃下、5％CO2-95％空氣中和5μM丁酸鈉存在的情況下，將75cm2燒瓶內(nèi)用10％FBS、青霉素(50個(gè)單位/ml)和鏈霉素(50μg/ml)補(bǔ)充的20ml RPMI-1640培養(yǎng)基中的1×108個(gè)Jurkat細(xì)胞用300MBq[3H]乙酸鈉培養(yǎng)30分鐘、收集入離心管(50ml)，通過以1000rpm離心10分鐘收集并用磷酸緩沖鹽水洗滌一次。將洗滌過的細(xì)胞懸浮于15ml的冰冷裂解緩沖液(10mMTris-HCl、50mM亞硫酸氫鈉、1％ Triton X-100、10mM MgCl2、8.6％蔗糖、pH 6.5)中。在杜恩斯勻化后(30個(gè)循環(huán))，通過以1000rpm離心10分鐘收集細(xì)胞核、將其依次用15ml的裂解緩沖液洗滌3次并用15ml的冰冷洗滌緩沖液(10mM Tris-HCl、13mM EDTA、pH7.4)洗滌一次。使用混合器將沉淀懸浮于6ml的冰冷水中并將68ml的H2SO4加入到該混懸液中至得到0.4N的濃度。在4℃下培養(yǎng)1小時(shí)后，以15,000rpm將該混懸液離心5分鐘并取出上清液且與60ml的丙酮混合。在-20℃下培養(yǎng)過夜后，通過微量離心收集凝固的物質(zhì)、風(fēng)干并儲存在-8℃下。
組蛋白脫?；富钚詸z測試驗(yàn)-為了進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)檢測試驗(yàn)，將10μl[3H]乙?；鶚?biāo)記的組蛋白加入到90μl的酶級分中并在25℃下將該混合物培養(yǎng)30分鐘。通過加入10μl的HCl而終止反應(yīng)。將釋放的[3H]乙酸用1ml的乙酸乙酯提取并將0.9ml的溶劑層溶于10ml的甲苯閃爍溶液中用于測定放射性。
正如表5中所示，WF27082 B、E和F以及FR235220以一種劑量依賴性方式有效抑制了部分純化的人(Jurkat細(xì)胞)組蛋白脫酰基酶的活性。表5對部分純化的人組蛋白脫酰基酶活性的作用濃度(ng/ml) 1000100 10 1抑制(％) WF27082B 98.676.537.31.9WF27082E 104.9 88.557.611.1WF27082F 91.774.136.511.4FR235220 94.674.633.7 -13.1試驗(yàn)4.WF27082 B對人腫瘤細(xì)胞系的抗腫瘤活性如下在體外測定WF27082 B對人腫瘤細(xì)胞系的細(xì)胞毒性活性。通過將濃度的對數(shù)對所處理的細(xì)胞的生長率(控制百分比)作圖來測試抑制50％細(xì)胞生長所需的化合物濃度(IC50；ng/ml)。在37℃下和5％ CO2-95％空氣中，在用10％ FBS、青霉素(50個(gè)單位/ml)和鏈霉素(50μg/ml)補(bǔ)充的100μl RPMI-1640培養(yǎng)基中將人T細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞(1×105個(gè)細(xì)胞/ml)和人結(jié)腸腺癌HT-29細(xì)胞(5×104個(gè)細(xì)胞/ml)用WF27082 B處理。按照如上所述的MTT方法在550nm處(和660nm作為參考)用比色方式測定細(xì)胞毒性。
結(jié)果如表6中所示。WF27082 B對Jurkat細(xì)胞和HT-29細(xì)胞具有有效抗腫瘤活性。
表6 WF27082 B對人腫瘤細(xì)胞系的抗腫瘤活性(體外)
IC50(ng/ml)JurkatHT-291114將含有諸如通式(I)化合物這樣的組蛋白脫酰基酶抑制劑的本發(fā)明藥物組合物用作由異?；虮磉_(dá)所導(dǎo)致的疾病的治療劑或預(yù)防劑，所述的疾病諸如炎癥疾病、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、純合型地中海貧血癥、纖維變性、肝硬變、急性前髓性白血病(APL)、原蟲感染等。此外，將本發(fā)明的藥物組合物用作預(yù)防以下列實(shí)例為典型的器官移植排斥和自身免疫病的抗腫瘤藥和免疫抑制劑由諸如心臟、腎、肝、骨髓、皮膚、角膜、肺、胰、小腸、肢、肌肉、神經(jīng)、錐間盤、氣管、成肌細(xì)胞、軟骨等這樣的器官或組織移植所導(dǎo)致的排斥反應(yīng)；骨髓移植后的移植物抗宿主反應(yīng)；諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡、橋本甲狀腺炎、多發(fā)性硬化癥、重癥肌無力、I型糖尿病等這樣的自身免疫??；和由致病微生物(例如煙曲霉、尖孢鐮孢、星形發(fā)癬菌等)所導(dǎo)致的感染。
此外，將含有諸如通式(I)化合物這樣的組蛋白脫酰基酶抑制劑的本發(fā)明藥物組合物用于治療或預(yù)防下列疾病炎癥或皮膚過度增生性疾病或以免疫方式介導(dǎo)的疾病的皮膚表現(xiàn)(例如銀屑病、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、濕疹樣皮炎、脂溢性皮炎、扁平苔蘚、天皰瘡、大皰性天疤瘡、大皰性表皮松解、蕁麻疹、血管性水腫、脈管炎、紅斑、皮膚嗜酸性粒細(xì)胞增多、紅斑狼瘡、痤瘡和簇狀脫發(fā))；眼部自身免疫病(例如角結(jié)膜炎、春季結(jié)膜炎、與貝赫切特病相關(guān)的眼色素層炎、角膜炎、皰疹樣角膜炎、圓錐形角膜炎、角膜上皮營養(yǎng)不良、角膜白斑、眼天皰瘡(ocular premphigus)、莫倫潰瘍、鞏膜炎、格雷夫斯眼病、伏格特-小柳-原田綜合征、干燥性角結(jié)膜炎(干眼)、水皰、虹膜睫狀體炎、結(jié)節(jié)病、內(nèi)分泌眼病等)；可逆性阻塞性氣道疾病[哮喘(例如支氣管哮喘、過敏性哮喘、內(nèi)源性哮喘、外源性哮喘和粉塵哮喘)，特別是慢性或慢性頑固性哮喘(例如晚期哮喘和氣道響應(yīng)過強(qiáng))、支氣管炎等]；粘膜或血管炎癥(例如胃潰瘍、局部缺血或血栓形成性血管損傷、局部缺血性腸病、腸炎、壞死性小腸結(jié)腸炎、與熱燒傷相關(guān)的腸損傷、白細(xì)胞三烯B4介導(dǎo)的疾病)；腸炎癥/過敏反應(yīng)(例如腹腔疾病、直腸炎、嗜酸性胃腸炎、肥大細(xì)胞增生病、局限性回腸炎和潰瘍性結(jié)腸炎)；具有遠(yuǎn)離胃腸道癥狀表現(xiàn)的與食物相關(guān)的過敏性疾病(例如偏頭痛、鼻炎和濕疹)；腎臟疾病(例如腸腎炎、古德帕斯切特綜合征、溶血性尿毒癥綜合征和糖尿病性腎病)；神經(jīng)疾病(例如多發(fā)性肌炎、急性熱病性多神經(jīng)炎、梅尼埃病、多發(fā)性神經(jīng)炎、孤立性神經(jīng)炎、腦梗塞、阿爾茨海默病、帕金森病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)和神經(jīng)根病)；大腦局部缺血性疾病(例如頭部損傷、大腦內(nèi)出血(例如蛛網(wǎng)膜下出血、顱內(nèi)出血)、腦血栓形成、腦栓塞、心動停止、中風(fēng)、一過性缺血發(fā)作(TIA)和高血壓性腦病)；內(nèi)分泌疾病(例如甲狀腺功能亢進(jìn)和巴塞多病)；血液病(例如純紅細(xì)胞再生不良、再生障礙性貧血、發(fā)育不良性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜、自身免疫性溶血性貧血、粒細(xì)胞缺乏癥、惡性貧血、巨成紅細(xì)胞貧血和紅細(xì)胞發(fā)生不能)；骨疾病(例如骨質(zhì)疏松癥)；呼吸疾病(例如結(jié)節(jié)病、肺纖維化和特發(fā)性間質(zhì)性肺炎)；皮膚病(例如皮肌炎、尋常性白斑病、尋常魚鱗病、光敏感性和皮膚T細(xì)胞淋巴病)；循環(huán)疾病(例如動脈硬化、動脈粥樣硬化、主動脈炎綜合征、結(jié)節(jié)性多動脈炎和心肌病)；膠原病(例如硬皮病、韋格納肉芽腫和斯耶格倫綜合征)；肥胖癥；嗜酸性筋膜炎；牙周疾病(例如牙齦、牙周組織、牙槽骨或牙骨質(zhì)損傷)；腎病綜合征(例如腎小球腎炎)；男性脫發(fā)、老年性脫發(fā)；肌行為異常；膿皮病和賽塞利綜合征；
與染色體異常相關(guān)的疾病(例如唐氏綜合征)；艾迪生??；活性氧介導(dǎo)的疾病[例如與保藏、移植或局部缺血性疾病(例如血栓形成、心梗等)相關(guān)的器官(例如心臟、肝、腎、消化道等)損傷(器官局部缺血性循環(huán)障礙)；腸疾病(例如內(nèi)毒素休克、假膜性結(jié)腸炎和藥物或輻射誘發(fā)的結(jié)腸炎)；腎病(例如人局部缺血性急性腎功能不全、慢性腎衰)；肺病(例如由肺氧或藥物(例如潑尼松、博來霉素等)導(dǎo)致的中毒)、肺癌和肺氣腫；眼部疾病(例如白內(nèi)障、離子儲存性疾病(眼球鐵質(zhì)沉著)、視網(wǎng)膜炎、眼點(diǎn)、老年斑、玻璃體斑；角膜堿性燒傷)；皮炎(例如多形紅斑、線性免疫球蛋白A大皰性皮炎、水泥皮炎)；及其它疾病(例如牙齦炎、牙周炎、膿毒病、胰腺炎和由環(huán)境污染(例如空氣污染)、老化、致癌物、癌轉(zhuǎn)移和低氣壓病導(dǎo)致的疾病)]；由組胺釋放或白細(xì)胞三烯C4釋放導(dǎo)致的疾?。谎艹尚涡g(shù)后的冠狀動脈再狹窄和所預(yù)防的手術(shù)后粘連；自身免疫病和炎癥疾病(例如原發(fā)性粘膜水腫、自身免疫性萎縮性胃炎、早現(xiàn)性絕經(jīng)、男性不育、青少年糖尿病、尋常性天皰瘡、類天皰瘡、交感神經(jīng)眼炎、晶狀體誘發(fā)性色素層炎、特發(fā)性白細(xì)胞減少、慢性肝炎活躍期、自發(fā)性肝硬化、盤狀紅斑狼瘡、自身免疫性睪丸炎、關(guān)節(jié)炎(例如變形性關(guān)節(jié)炎)或多軟骨炎)；人免疫缺陷病毒(HTV)感染、AIDS；變應(yīng)性結(jié)膜炎；因外傷、燒傷或手術(shù)所導(dǎo)致的瘢痕增生和疤痕疙瘩。
因此，本發(fā)明的藥物組合物用于治療和預(yù)防肝病[例如免疫原性疾病(例如諸如自身免疫性肝病、原發(fā)性膽汁性肝硬變或原發(fā)性硬化性膽管炎這樣的慢性自身免疫性肝病)、部分肝臟切除術(shù)、急性肝壞死(例如由毒素、病毒性肝炎、休克或缺氧癥導(dǎo)致的壞死)、乙型肝炎、非甲非乙型肝炎、肝硬變和肝衰(例如暴發(fā)性肝炎、肝炎晚期發(fā)作和“慢性肝炎急性(acute-on-chronic)”肝衰(涉及慢性肝病的急性肝衰))]。
可以使用本發(fā)明藥物組合物的藥物制劑形式，例如固體、半固體或液體形式，它含有混合了適于外用、內(nèi)部或非腸道給藥的有機(jī)或無機(jī)栽體或賦形劑的諸如通式(I)化合物這樣的組蛋白脫?；敢种苿┳鳛榛钚越M分。例如可以將該活性組分與常用的無毒性的藥物上可接受的栽體混合制成片劑、丸劑、膠囊、栓劑、溶液、乳劑、混懸劑、注射劑、軟膏、涂抹劑、滴眼液、洗劑、凝膠、霜劑和任意其它適用的劑型。
可以使用的載體是水、葡萄糖、乳糖、阿拉伯膠、明膠、甘露糖醇、淀粉糊、三硅酸鎂、滑石、玉米淀粉、角蛋白、膠態(tài)硅石、馬鈴薯淀粉、脲和其它適用于制備固體、半固體或液體劑型制劑的載體；且還可以使用助劑、穩(wěn)定劑、增稠劑、增溶劑和著色劑以及香料。
為了將該組合物施用于人體，優(yōu)選通過靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、局部或口服給藥形式施用它。盡管諸如通式(I)化合物這樣的組蛋白脫?；敢种苿┑闹委熡行Я康膭┝侩S所治療各患者的年齡和病情的不同而改變并取決于它們，但是當(dāng)治療患者時(shí)，一般用于治療的給藥量如下就靜脈內(nèi)給藥的情況而言，諸如通式(I)化合物這樣的組蛋白脫?；敢种苿┑拿咳談┝繛?.01-10mg/kg人體重；就肌內(nèi)給藥的情況而言，諸如通式(I)化合物這樣的組蛋白脫酰基酶抑制劑的每日劑量為0.1-10mg/kg人體重；且就口服給藥的情況而言，諸如通式(I)化合物這樣的組蛋白脫?；敢种苿┑拿咳談┝繛?.5-50mg/kg人體重。
給出的下列實(shí)施例用于更具體地解釋本發(fā)明的目的。
權(quán)利要求
1.-種下列通式的WF27082化合物 其中R1是甲基，R2是甲基或乙基，R3是氫或甲基且R4是可以帶有羥基保護(hù)基或不帶有羥基保護(hù)基的羥基，條件是當(dāng)R3是氫時(shí)，R2是乙基。
2.一種權(quán)利要求1的WF27082化合物，其中R1是甲基，R2是乙基，R3是甲基且R4是羥基。
3.一種屬于支頂孢屬的真菌菌株，它具有的保藏號為FERM BP-6539且它產(chǎn)生一種具有組蛋白脫?；敢种苹钚缘幕衔铩?br> 4.一種具有組蛋白脫?；敢种苹钚缘幕衔铮ㄟ^在營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)權(quán)利要求3的真菌菌株并從其培養(yǎng)肉湯中回收所述化合物來獲得。
5.一種用于生產(chǎn)權(quán)利要求1的WF27082化合物的方法，該方法包括在營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)生WF27082的屬于支頂孢屬的菌株并從其培養(yǎng)肉湯中回收所述化合物的步驟。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述的產(chǎn)生WF27082的屬于支頂孢屬的菌株是權(quán)利要求3的真菌菌株。
7.一種藥物組合物，它含有權(quán)利要求1的WF27082化合物作為活性組分和藥物上可接受的基本上無毒性的載體或賦形劑。
8.一種權(quán)利要求1的化合物用作藥劑的用途。
9.一種用于生產(chǎn)具有組蛋白脫?；敢种苹钚缘幕衔锏姆椒ǎ摲椒òㄔ跔I養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)屬于支頂孢屬的真菌菌株的步驟，其中所述的真菌菌株可產(chǎn)生一種具有組蛋白脫?；敢种苹钚缘幕衔?，并回收該化合物。
10.一種具有組蛋白脫酰基酶抑制活性的化合物，它通過在營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)屬于支頂孢屬的真菌菌株并從其培養(yǎng)肉湯中回收所述化合物來獲得，其中所述的真菌菌株可產(chǎn)生一種具有組蛋白脫?；敢种苹钚缘幕衔?。
11.一種含有通式(I)化合物的組蛋白脫?；敢种苿?其中R1是甲基，R2是甲基或乙基，R3是氫或甲基且R4是可以帶有羥基保護(hù)基或不帶有羥基保護(hù)基的羥基。
12.一種用于抑制組蛋白脫?；傅姆椒?，該方法包括使用權(quán)利要求11中所用的化合物(I)的步驟。
13.一種權(quán)利要求11中所用的化合物(I)在制備用于抑制組蛋白脫?；傅乃巹┲械挠猛尽?br> 14.一種用于治療或預(yù)防炎癥疾病、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、純合型地中海貧血癥、纖維變性、肝硬變、急性前髓性白血病(APL)、器官移植排斥或自身免疫病的藥物組合物，它含有通式(I)的化合物作為活性組分 其中R1是甲基，R2是甲基或乙基，R3是氫或甲基且R4是可以帶有羥基保護(hù)基或不帶有羥基保護(hù)基的羥基。
15.一種用于治療或預(yù)防炎癥疾病、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、純合型地中海貧血癥、纖維變性、肝硬變、急性前髓性白血病(APL)或器官移植排斥、自身免疫病的方法，該方法包括對人或動物給予權(quán)利要求14中所用的化合物(I)的步驟。
16.一種權(quán)利要求14中所用的化合物(I)在制備用于治療或預(yù)防炎癥疾病、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、純合型地中海貧血癥、纖維變性、肝硬變、急性前髓細(xì)性白血病(APL)、器官移植排斥或自身免疫病的藥劑中的用途。
17.一種用于治療或預(yù)防原蟲感染或腫瘤的方法，該方法包括對人和動物給予權(quán)利要求1中所用的化合物WF27082的步驟。
18.一種權(quán)利要求1中所用的化合物WF27082在制備用于治療或預(yù)防原蟲感染或腫瘤的藥劑中的用途。
19.一種組蛋白脫?；敢种苿┳鳛槊庖咭种苿┗蚩鼓[瘤藥的用途。
20.一種組蛋白脫?；敢种苿┰谥苽溆糜谥委熁蝾A(yù)防器官移植排斥、自身免疫病或腫瘤的藥劑中的用途。
全文摘要
本發(fā)明描述了環(huán)四肽化合物及其用途。特別地,本發(fā)明描述了一種通過在營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)生WF27082的屬于支頂孢屬的菌株并從培養(yǎng)肉湯中回收所述化合物而生產(chǎn)所述化合物的方法;一種含有所述化合物作為活性組分和藥物上可接受的基本上無毒性的載體或賦形劑的藥物組合物;所述化合物作為藥劑的用途;所述化合物在制備用于抑制組蛋白脫酰基酶的藥劑中的用途;所述化合物在制備用于治療或預(yù)防炎癥疾病、糖尿病、糖尿病并發(fā)癥、純合型地中海貧血癥、纖維變性、肝硬變、急性前髓性白血病(APL)、原蟲感染、器官移植排斥、自身免疫病或腫瘤的藥劑中的用途;組蛋白脫?；敢种苿┳鳛槊庖咭种苿┗蚩鼓[瘤藥的用途;以及組蛋白脫?；敢种苿┰谥苽溆糜谥委熁蝾A(yù)防器官移植排斥、自身免疫病或腫瘤的藥劑中的用途。
文檔編號A61P1/16GK1330660SQ9981438
公開日2002年1月9日 申請日期1999年10月8日 優(yōu)先權(quán)日1998年10月13日
發(fā)明者森泰亮, 坂本憲俊, 鶴海泰久, 高瀨茂弘, 日野資弘 申請人:藤澤藥品工業(yè)株式會社