專利名稱：吡嗪酮蛋白酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及起到蛋白酶抑制劑作用的新穎化合物，特別涉及一類新穎的凝血酶抑制劑。
相關(guān)技術(shù)
蛋白酶是在單一的、特定地肽鍵上分解蛋白質(zhì)的酶。蛋白酶可以分為四類絲氨酸、硫醇或半胱氨酰、酸或天冬氨酰、和金屬蛋白酶(Cuypers等《生物化學(xué)雜志》2577086(1982))。蛋白酶對(duì)各種生物學(xué)活性來說都是必需的，例如消化、血塊的形成與溶解、生殖、和對(duì)外來細(xì)胞與器官的免疫反應(yīng)。在人和其他動(dòng)物中，異常的蛋白水解作用與大量疾病狀態(tài)有關(guān)。人嗜中性蛋白酶、彈性蛋白酶和組織蛋白酶G是引起以組織破壞為標(biāo)志的疾病狀態(tài)的原因。這些疾病狀態(tài)包括肺氣腫、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、角膜潰瘍和腎小球性腎炎(Barret《酶抑制劑藥物》Sandler，ed.，University Park Press，Baltimore(1980))。其他蛋白酶、例如纖溶酶、C-1酯酶、C-3轉(zhuǎn)化酶、尿激酶、纖溶酶原激活物、頂體蛋白和激肽釋放酶，在哺乳動(dòng)物的正常生物學(xué)功能中扮演關(guān)鍵角色。在很多情況下，在對(duì)哺乳動(dòng)物進(jìn)行治療的過程中瓦解一種或多種蛋白水解酶的功能是有益的。
絲氨酸蛋白酶例如包括彈性蛋白酶(人白細(xì)胞)、組織蛋白酶G、纖溶酶、C-1酯酶、C-3轉(zhuǎn)化酶、尿激酶、纖溶酶原激活物、頂體蛋白、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶、Xa因子和激肽釋放酶。
人白細(xì)胞酯酶是由多形核白細(xì)胞在炎癥部位釋放的，因此是大量疾病狀態(tài)的誘因。組織蛋白酶G是另一種人嗜中性絲氨酸蛋白酶。具有抑制這些酶活性的能力的化合物預(yù)期具有抗炎作用，可用于痛風(fēng)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和其他炎性疾病的治療以及肺氣腫的治療。胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶是消化酶。這些酶的抑制劑可用于治療胰腺炎。尿激酶和纖溶酶原激活物的抑制劑可用于治療細(xì)胞過度生長(zhǎng)的疾病狀態(tài)，例如良性前列腺肥大、前列腺癌和牛皮癬。
絲氨酸蛋白酶中的凝血酶在止血和血栓形成中占據(jù)核心地位，作為一種多因子蛋白質(zhì)，對(duì)血小板、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、白細(xì)胞、心臟和神經(jīng)元誘發(fā)大量作用。凝固級(jí)聯(lián)通過內(nèi)部途徑的激活(接觸激活)或外部途徑的激活(通過血漿暴露于非內(nèi)皮表面下、對(duì)血管壁的損傷或組織因子釋放而激活)導(dǎo)致一系列集中于凝血酶的生化反應(yīng)。凝血酶分解纖維蛋白原，最終導(dǎo)致形成止血栓(血塊形成)，通過細(xì)胞表面凝血酶受體的獨(dú)特的蛋白水解作用有效地激活血小板(Coughlin《血液學(xué)討論會(huì)》31(4)270-277(1994))，通過一種反饋機(jī)理自我擴(kuò)增它本身的產(chǎn)生。因此，凝血酶功能抑制劑對(duì)心血管疾病和非心血管疾病患者具有治療的可能。
Xa因子是凝固途徑中的另一種絲氨酸蛋白酶。Xa因子與磷脂膜上的Va因子和鈣聯(lián)合形成凝血酶原酶復(fù)合物。該凝血酶原酶復(fù)合物然后將凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶(Claeson《血液凝固和纖維蛋白溶解》5411-436(1994)；Harker《血液凝固和纖維蛋白溶解》5(增刊1)S47-S58(1994))。Xa因子抑制劑被認(rèn)為優(yōu)于直接抑制凝血酶的試劑，這是因?yàn)橹苯拥哪敢种苿┤匀辉试S有顯著的新的凝血酶生成(Lefkovits and Topol《循環(huán)》90(3)1522-1536(1994)；Harker《血液凝固和纖維蛋白溶解》5(增刊1)S47-S58(1994))。
血管內(nèi)血栓的體內(nèi)診斷成像法以前已有報(bào)道。這些成像法使用可檢測(cè)的用放射性原子或順磁性原子標(biāo)記的化合物。例如，用γ放射體In-111標(biāo)記的血小板可以用作顯像劑，用于檢測(cè)血栓(Thakur，M.L.等《血栓研究》9345(1976)；Powers等《神經(jīng)病學(xué)》32938(1982)。用Tc-99m標(biāo)記的血栓溶解酶鏈激酶已被提出用作顯像劑(Wong，美國(guó)專利4418052(1983))。來源于金黃色釀膿葡萄球菌的、用γ放射體I-125和I-131標(biāo)記的蛋白A的纖維蛋白結(jié)合域已被提出用作顯像劑(Pang，美國(guó)專利5011686(1991))。對(duì)纖維蛋白(相對(duì)纖維蛋白而言)具有特異性、并且用Tc-99m標(biāo)記的單克隆抗體已被提出用作顯像劑(Berger等，美國(guó)專利5024829(1991)；Dean等，美國(guó)專利4980148(1990))。順磁性造影劑二亞乙三胺五乙酸釓在通過溶栓治療的急性心肌梗塞患者的磁共振成像中的用途已有報(bào)道(De Roos等《國(guó)際心血管成像雜志》7133(1991))。放射性標(biāo)記和順磁性標(biāo)記的α-酮酰胺衍生物也已被提出用作血栓顯像劑(Abelman等，美國(guó)專利5656600)。
對(duì)非肽類化合物的需求繼續(xù)存在著，該化合物是有效的和選擇性蛋白酶抑制劑，比當(dāng)前可得到的蛋白酶抑制劑具有較高生物利用度和較少副作用。因此，以有效的抑制能力和較低的哺乳動(dòng)物毒性為特征的、新型有效的蛋白酶抑制劑可能是各種疾病狀態(tài)的有價(jià)值的治療劑，包括對(duì)大量哺乳動(dòng)物蛋白水解的疾病狀態(tài)的治療。
發(fā)明概述
本發(fā)明涉及新穎的氨基胍(肼基脒)與烷氧基胍(烷氧基氨基脒)吡嗪酮(pyrazinone)，見下式I。也提供了制備式I化合物的方法。本發(fā)明的新化合物是有效的蛋白酶抑制劑，尤其是胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶，例如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶、纖溶酶和Xa因子。某些化合物通過直接、選擇性抑制凝血酶表現(xiàn)抗凝血酶活性，或者是可用于生成具有抗凝血酶活性的化合物的中間體。還提供了抑制或治療哺乳動(dòng)物異常蛋白水解的方法，和治療哺乳動(dòng)物血栓形成、局部缺血、中風(fēng)、再狹窄或炎癥的方法，也就是將有效量的式I化合物給藥。
本發(fā)明包括一種組合物，用于抑制哺乳動(dòng)物血小板的損失、抑制血小板聚集物的形成、抑制纖維蛋白的形成、抑制血栓形成、和抑制栓塞物形成，該組合物在藥學(xué)上可接受的載體內(nèi)包含本發(fā)明化合物。這些組合物可選地可以包括抗凝劑、抗血小板劑和溶栓劑。該組合物可以加入到血液、血液制品或哺乳動(dòng)物器官中，以達(dá)到所需的抑制作用。
也提供了抑制或治療哺乳動(dòng)物異常蛋白水解的方法，和用于治療下述的方法心肌梗塞；不穩(wěn)定的絞痛；中風(fēng)；再狹窄；深靜脈血栓；由創(chuàng)傷、膿毒癥或腫瘤轉(zhuǎn)移導(dǎo)致的播散性血管內(nèi)凝血；血液透析；心肺旁路術(shù)；成人呼吸窘迫綜合征；內(nèi)毒素性休克；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；潰瘍性結(jié)腸炎；硬結(jié)；轉(zhuǎn)移；化療過程中的凝固性過高；阿耳茨海默氏??；Down氏綜合征；眼內(nèi)纖維蛋白形成；和傷口愈合。本發(fā)明化合物的其他用途是作為抗凝劑，包埋在或者物理連接于用于裝置制造的材料中，該裝置用于血液采集、血液循環(huán)和血液貯存，例如導(dǎo)管、血液透析儀器、血液采集注射器與試管、血線(bloodlines)與斯滕特氏印模(stents)。
本發(fā)明也包括用于減少哺乳動(dòng)物表面血栓形成的方法，是將本發(fā)明化合物以共價(jià)或非共價(jià)方式結(jié)合在該表面上。
另一方面，本發(fā)明包括可用于哺乳動(dòng)物體內(nèi)血栓成像的組合物，該組合物包含能夠在體外被檢測(cè)的本發(fā)明化合物。優(yōu)選的組合物包含本發(fā)明化合物和一種可檢測(cè)的標(biāo)記，例如放射性或順磁性原子。
另一方面，本發(fā)明提供可用于哺乳動(dòng)物體內(nèi)血栓成像的診斷組合物，該組合物包含藥學(xué)上可接受的載體和診斷學(xué)上有效量的本發(fā)明化合物或組合物。
另一方面，本發(fā)明包括可用于哺乳動(dòng)物體內(nèi)血栓成像的方法。
優(yōu)選實(shí)施方式的詳細(xì)說明
本發(fā)明化合物包括式I化合物
或其溶劑化物、水合物或藥學(xué)上可接受的鹽；其中
W是氫、R1、R1OCO、R1CO、R1(CH2)sNHCO或(R1)2CH(CH2)sNHCO，其中的s是0-4；
R1是
R2，
R2(CH2)tC(R12)2，其中的t是0-3，每個(gè)R12可以是相同或不同的，
(R2)(OR12)CH(CH2)p，其中的p是1-4，
(R2)2(OR12)C(CH2)p，其中的p是1-4，
R2C(R12)2(CH2)t，其中的t是0-3，每個(gè)R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以與相鄰的C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基代表的環(huán)，
R2CF2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每個(gè)R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以與相鄰的C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基代表的環(huán)，
R2CH2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每個(gè)R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以與相鄰的C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基代表的環(huán)，
(R2)2CH(CH2)r，其中的r是0-4，每個(gè)R2可以是相同或不同的，其中的(R2)2也可以與CH形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基、C7-12二環(huán)烷基、C10-16三環(huán)烷基代表的環(huán)，或者形成一個(gè)5至7元單環(huán)或二環(huán)的雜環(huán)，該雜環(huán)可以是飽和或不飽和的，并含有一至三個(gè)選自N、O和S的雜原子，
R2O(CH2)p，其中的p是2-4，
(R2)2CF(CH2)r，其中的r是0-4，每個(gè)R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以與C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基、C7-12二環(huán)烷基、C10-16三環(huán)烷基代表的環(huán)，或者形成一個(gè)5至7元單環(huán)或二環(huán)的雜環(huán)，該雜環(huán)可以是飽和或不飽和的，并含有一至三個(gè)選自N、O和S的雜原子，
其中的s是0或1，或
R2CF2C(R12)2；
R2是
苯基、萘基或聯(lián)苯基，它們每個(gè)是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素、羥基、CF3、OCF3、COOH、CONH2或SO2NH2取代，
一個(gè)5至7元單環(huán)或9至10元二環(huán)的雜環(huán)或非雜環(huán)，該環(huán)可以是飽和或不飽和的，其中的雜環(huán)含有一至四個(gè)選自N、O和S的雜原子，其中的雜環(huán)或非雜環(huán)是未取代的或者被鹵素或羥基取代，
C1-7烷基，它是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)羥基、COOH、氨基、芳基、C3-7環(huán)烷基、CF3、N(CH3)2、-C1-3烷基芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基取代，
CF3，
C3-7環(huán)烷基，它是未取代的或者被芳基取代，
C7-12二環(huán)烷基，或
C10-16三環(huán)烷基；
R3是
氫、烷基、環(huán)烷基、烯基、炔基、可選被取代的芳基、可選被取代的芳烷基、可選被取代的雜芳基、三氟甲基、鹵素、羥基烷基、氰基、硝基、甲酰氨基、-CO2RX、-CH2ORX或-ORX，
其中的RX在每種情況中獨(dú)立地是氫、烷基或環(huán)烷基之一，其中所述的烷基或環(huán)烷基可以可選地具有一個(gè)或多個(gè)不飽和度；
R4是氫或鹵素；
R12是
氫，
苯基、萘基或聯(lián)苯基，它們每個(gè)是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素、羥基、CF3、OCF3、COOH或CONH2取代，
一個(gè)5至7元單環(huán)或9至10元二環(huán)的雜環(huán)，該雜環(huán)可以是飽和或不飽和的，并含有一至四個(gè)選自N、O和S的雜原子，
C1-4烷基，它是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)羥基、COOH、氨基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基取代，
CF3，
C3-7環(huán)烷基，
C7-12二環(huán)烷基，或
C10-16三環(huán)烷基；
R5是氫、C1-4烷基或C2-4烯基；
R6是氫、烷基、烯基、芳烷基、芳基、羥基烷基、氨基烷基、單烷基氨基(C2-10)烷基、二烷基氨基(C2-10)烷基或羧基烷基；
R7、R8、R9和R10獨(dú)立地是氫、烷基、芳烷基、芳基、羥基烷基、氨基烷基、單烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基或羧基烷基；
或者R7和R8一起形成-(CH2)u-，其中的u是2至7，優(yōu)選為2至5，而R9和R10是如上所定義的；
或者R9和R10一起形成-(CH2)v-，其中的v是2至7，優(yōu)選為2至5，而R7和R8是如上所定義的；
或者R7和R9一起形成-(CH2)y-，其中的y是0(一條鍵)或1至7，優(yōu)選為0至4，而R8和R10是如上所定義的；
X是氧、NR11或CH＝N(其中的N是鍵合在NR6上的)，
其中的R11是氫、烷基、環(huán)烷基或芳基，其中所述的烷基、環(huán)烷基或芳基可以可選地被氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基、羥基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、芳基、雜芳基、酰氨基、氰基或三氟甲基取代；
Ra、Rb和Rc獨(dú)立地是氫、烷基、羥基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷氧基羰基氧基、氰基或-CO2RW，
其中的RW是烷基、環(huán)烷基、苯基、芐基、
或
其中的Rd和Re獨(dú)立地是氫、C1-6烷基、C2-6烯基或苯基，
Rf是氫、C1-6烷基、C2-6烯基或苯基，Rg是氫、C1-6烷基、C2-6烯基或苯基，Rh是芳烷基或C1-6烷基；
n是0至8；
m是0至6。
在一類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽中，R3是氫、C1-4烷基、C3-7環(huán)烷基或CF3；優(yōu)選為C1-4烷基，m和n各自是0至4。
在一小類該類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽中，R4是氫或鹵素。
在一組該小類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽中，W是H或R1。
在一小組該組化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽中，
R1是
R2，
R2(CH2)tC(R12)2，其中的t是0-3，每個(gè)R12可以是相同或不同的，
R2C(R12)2(CH2)t，其中的t是0-3，每個(gè)R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以與C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基代表的環(huán)，
R2CH2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每個(gè)R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以與C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基代表的環(huán)，
(R2)2CH(CH2)r，其中的r是0-4，每個(gè)R2可以是相同或不同的，其中的(R2)2也可以與CH形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基、C7-12二環(huán)烷基、C10-16三環(huán)烷基代表的環(huán)，或者形成一個(gè)5至7元單環(huán)或二環(huán)的雜環(huán)，該雜環(huán)可以是飽和或不飽和的，并含有一至三個(gè)選自N、O和S的雜原子，
R2CF2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每個(gè)R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以與C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基代表的環(huán)，
R2O(CH2)p，其中的p是2-4；
R2是
苯基或萘基，它們每個(gè)是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素、羥基、CF3、OCF3或SO2NH2取代，
一個(gè)5至7元單環(huán)或9至10元二環(huán)的雜環(huán)或非雜環(huán)，該環(huán)可以是飽和或不飽和的，其中的雜環(huán)含有一至四個(gè)選自N、O和S的雜原子，其中的雜環(huán)或非雜環(huán)是未取代的或者被鹵素或羥基取代，
C1-7烷基，它是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)羥基、COOH、C3-7環(huán)烷基、CF3、N(CH3)2、-C1-3烷基芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基取代，
CF3，或
C3-7環(huán)烷基，它是未取代的或者被芳基取代；
R12是
氫，或
C1-4烷基，它是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)羥基、COOH、氨基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基取代。
在一族該小組化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽中，
R3是H、CH3或CH2CH3；
R4是H或氯；
W是PhCH2CH2，(CH3)3C-，HOOCCH2，CF3CH2，(CH3)2N(CH2)2，PhCH2O(CH2)2，
PhCH(CH3)，PhCH2CH(COOH)，CH3(CH2)5，PhCH2，H，CH3(CH2)4，
CH3CH2CH(CH3)CH2，(Ph)2CHCH2，PhCH2CH(CH3)，PhCH(CH3)CH2，
(CH3)2CH，PhCH(OH)CH2，PhC(CH3)2CH2，(Ph)2CHCH2，或
或
優(yōu)選的R5是氫。
當(dāng)X是NR11時(shí)，優(yōu)選的化合物是其中R11是氫或C1-6烷基的那些，該烷基可選被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)——優(yōu)選為一個(gè)——氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基、羥基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、烷氧羰基、苯基、氰基、三氟甲基、乙酰氨基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、吡咯基或咪唑基取代。
適合的R11包括氫、甲基、乙基、丙基、正丁基、芐基、苯乙基、2-羥基乙基、3-羥基丙基、4-羥基丁基、羧甲基和羧乙基。
最優(yōu)選的化合物是其中X是氧的那些。
優(yōu)選的化合物是式I的那些，其中R6是氫或C1-6烷基。
優(yōu)選的化合物是式I的那些，其中R7、R8、R9和R10獨(dú)立地是氫、C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、C6-10芳基、C2-10羥基烷基或C2-7羧基烷基之一。有用的R7、R8、R9和R10包括氫、甲基、乙基、丙基、正丁基、芐基、苯乙基、2-羥基乙基、3-羥基丙基、4-羥基丁基、2-羧基甲基、3-羧基乙基和4-羧基丙基。
也優(yōu)選這樣的化合物，其中R7與R8或R9與R10聯(lián)合作為一個(gè)亞烷基鏈，分別是-(CH2)u-和-(CH2)v-，其中u和v各自是2-5，最優(yōu)選為2或3。
式I中優(yōu)選的Ra、Rb和Rc是氫、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基或-CO2RW，其中的RW在每種情況中優(yōu)選為C1-4烷基、C4-7環(huán)烷基或芐氧基羰基之一。適合的Ra、Rb和Rc包括氫、甲基、乙基、丙基、正丁基、羥基、甲氧基、乙氧基、氰基、-CO2CH3、-CO2CH2CH3和-CO2CH2CH2CH3。在最優(yōu)選的實(shí)施方式中，Ra、Rb和Rc各自是氫。
關(guān)于Ra、Rb和Rc是-CO2RW，也優(yōu)選為其中的RW是
或
之一，其中的Rd-Rh是如上所定義的。當(dāng)Ra、Rb和Rc是-CO2RW時(shí)，
其中的RW是這些部分之一，所得化合物是藥物前體，具有所需的制劑特征和生物利用度特征。優(yōu)選的每個(gè)Rd、Re和Rg是氫，Rf是甲基，優(yōu)選的Rh包括芐基和叔丁基。
式I中優(yōu)選的n值包括0至6，更優(yōu)選為0至4，最優(yōu)選為0、1或2。
優(yōu)選的m值是0至4，最優(yōu)選為0、1或2。
尤其優(yōu)選的化合物是由式II、III和IV所代表的
或其溶劑化物、水合物或藥學(xué)上可接受的鹽；其中
W定義同上，并具有如上式I所優(yōu)選的含義；
X是-O-、-NH-或-CH＝N-(脒基腙基，其中的NH連接在母體分子的NH上)。X優(yōu)選地連接在環(huán)的3-位或4-位、優(yōu)選為4-位上。
R3是氫、C1-3烷基、鹵素或C1-2烷氧基；
R4是氫或鹵素；
n是0、1、2或3，優(yōu)選為0、1或2；
m是0、1、2或3，優(yōu)選為0或1；
n’是0、1、2或3，優(yōu)選為0、1或2；
m’是0、1、2或3，優(yōu)選為0或1。
本發(fā)明范圍內(nèi)的具體化合物包括如下
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2，2-二苯基乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲氧基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-苯基環(huán)丁基)甲氨基-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-[2-(1-萘)乙基]氨基-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基)氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基-1-丁氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3，4-亞甲二氧基苯基)乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2--[2-吡啶基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2--[2-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2--[3-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2--[4-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3，5-二甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-二氫茚氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3，4-二氟苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[5-二氫茚基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-氟苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基1氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-氟苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-乙基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基丙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3--(3，4-二甲基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-萘乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3--(2，2-二苯基丙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-(3-吲哚基)乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[1-(4-甲基萘)]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2，4-二氟苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基-N’-甲基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[4-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(2，2-二苯基乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-甲基-2-苯基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-乙基-3-(苯乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲基苯基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1--甲基-2-(4-甲氨基-3-吡啶基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1--甲基-2-(3-吡啶基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-環(huán)丙基-2-(3，4-二甲氧基苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2--環(huán)丁基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2--環(huán)丁基-2，2-二氟乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-(3-氟苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2，2-二氟-2-苯基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基環(huán)丙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-(4-氯苯基)-2-環(huán)丙基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-環(huán)丙基-2-(3-吡啶基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-芐基環(huán)丙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2--環(huán)丙基-2-(3-氟苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-環(huán)丙基-2-(3，4-二氟苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2，2-二氟-2-苯基乙氨基)-吡嗪酮，
及其藥學(xué)上可接受的鹽，例如它們的鹽酸鹽、乙酸鹽和三氟乙酸鹽。
也不言而喻的是，本發(fā)明被認(rèn)為包括立體異構(gòu)體以及旋光異構(gòu)體，例如對(duì)映體混合物以及各對(duì)映體和非對(duì)映體，其產(chǎn)生原因是所選擇的該系列化合物中的結(jié)構(gòu)不對(duì)稱性。本發(fā)明化合物也可以具有多晶型，所有多晶型也都包括在本發(fā)明內(nèi)。
式I化合物也可以是溶劑化物的形式，尤其是水合物。水合可以發(fā)生在化合物或包含化合物的組合物的生產(chǎn)過程中，或者由于化合物的吸濕性，經(jīng)過一定時(shí)間可發(fā)生水合。
式I范圍內(nèi)的某些化合物是被稱之為藥物前體的衍生物?！八幬锴绑w”這一表達(dá)方式表示已知直接起效的藥物的衍生物，該衍生物與藥物相比其釋放特性和治療價(jià)值都增強(qiáng)了，并且通過酶或化學(xué)過程轉(zhuǎn)化為活性藥物。有用的藥物前體是其中Ra、Rb和/或Rc是-CO2RW的那些，其中的RW是如上所定義的。見美國(guó)專利5466811和Saulnier等《生物有機(jī)與醫(yī)藥化學(xué)快報(bào)》41985-1990(1994)。
當(dāng)任意組分或式I中的任意可變參數(shù)出現(xiàn)不止一次時(shí)，它每次出現(xiàn)的定義與其他每次出現(xiàn)的定義是無關(guān)的。而且，取代基和/或可變參數(shù)的組合也是允許的，只要這些組合能夠得到穩(wěn)定的化合物即可。
另一方面，本發(fā)明包括可用于哺乳動(dòng)物體內(nèi)血栓成像的組合物，該組合物包含能夠在體外被檢測(cè)的本發(fā)明化合物。優(yōu)選的組合物包含本發(fā)明化合物和一種可檢測(cè)的標(biāo)記，例如放射性或順磁性原子。
另一方面，本發(fā)明提供可用于哺乳動(dòng)物體內(nèi)血栓成像的診斷組合物，該組合物包含藥學(xué)上可接受的載體和診斷學(xué)上有效量的本發(fā)明化合物或組合物。
另一方面，本發(fā)明包括可用于哺乳動(dòng)物體內(nèi)血栓成像的方法。
按照優(yōu)選的方面，有用的化合物是其中R1取代基是被一種可檢測(cè)的標(biāo)記取代的那些，該標(biāo)記例如放射性碘原子，如I-125、I-131或I-123。在這方面，R1優(yōu)選為具有對(duì)位I-123、對(duì)位I-125或?qū)ξ籌-131取代的苯基，或具有間位I-123、間位I-125或間位I-131取代的芐基。
可檢測(cè)的標(biāo)記也可以是放射性或順磁性螯合物，其中有適合的配體(L)結(jié)合在R1取代基上，直接地或者經(jīng)由一個(gè)二價(jià)連接基團(tuán)A”?；蛘撸鶊F(tuán)-A”-L取代式I中的基團(tuán)W。適合的配體指的是能夠螯合放射性或順磁性金屬離子的有機(jī)部分。
這些化合物中，二價(jià)連接基團(tuán)A”包括能夠以共價(jià)方式與游離氨基結(jié)合的基團(tuán)和螯合單元。例如，A”可以是-C(＝S)-、-C(＝O)-、-C(＝NH)-(CH2)6-C(＝NH)-、-C(＝O)-(CH2)6-C(＝O)-、
等。
而且，在由式I代表的化合物中，螯合配體L包括能夠以共價(jià)方式或非共價(jià)方式與放射性或順磁性原子結(jié)合的基團(tuán)。螯合單元包括常用于絡(luò)合放射性或順磁性原子的那些。這些螯合單元含有3至12個(gè)、優(yōu)選為3至8個(gè)亞甲基膦酸根、亞甲基羰基異羥肟酸根、羧亞乙基或尤其為羧亞甲基，它們結(jié)合在氮原子上。如果只有一個(gè)或兩個(gè)酸根結(jié)合在氮原子上，那么這個(gè)氮通過可選被取代的亞乙基或至多四個(gè)被氮或氧或硫原子分隔的亞乙基單元結(jié)合在另一個(gè)具有這些基團(tuán)的氮上。完整的含義優(yōu)選為二亞乙基三胺-N，N，N’，N”，N”-五乙酸(DTPA)。DTPA是本領(lǐng)域熟知的、用于放射性原子銦-111(In-111)、锝-99m(Tc-99m)和順磁性原子釓(Gd)的螯合單元。Khaw等《科學(xué)》209295(1980)；Paik C.H.等的美國(guó)專利4652440(1987)；Gries，H.等的美國(guó)專利4957939(1990)。優(yōu)選的螯合配體L是1-(對(duì)氨基芐基)二亞乙基三胺五乙酸。螯合單元也包括這樣的化合物，其中含有至少四個(gè)巰基或胺部分，并任意組合。這些巰基或胺部分彼此被至少兩個(gè)原子分隔，分隔原子可以是碳、氮、氧或硫。尤其優(yōu)選的螯合單元L是金屬硫蛋白，它也是本領(lǐng)域熟知的、用于Tc-99m的螯合單元。
本文所用術(shù)語“烷基”單獨(dú)或作為另一基團(tuán)的一部分，指至多12個(gè)碳的直鏈和支鏈原子團(tuán)，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、異丁基、戊基、己基、異己基、庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基。
本文所用的術(shù)語“烯基”指2-20個(gè)碳原子的直鏈或支鏈原子團(tuán)，除非鏈長(zhǎng)受此限制，包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。優(yōu)選地，烯基鏈?zhǔn)?至10個(gè)碳原子的長(zhǎng)度，更優(yōu)選為2至8個(gè)碳原子長(zhǎng)度，最優(yōu)選為2至4個(gè)碳原子長(zhǎng)度。
本文所用的術(shù)語“炔基”指2-20個(gè)碳原子的直鏈或支鏈原子團(tuán)，除非鏈長(zhǎng)受此限制，其中在鏈中兩個(gè)碳原子之間存在至少一條叁鍵，包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基等。優(yōu)選地，炔基鏈?zhǔn)?至10個(gè)碳原子的長(zhǎng)度，更優(yōu)選為2至8個(gè)碳原子長(zhǎng)度，最優(yōu)選為2至4個(gè)碳原子長(zhǎng)度。
在所有存在烯基或炔基部分作為取代基的情況中，不飽和鍵、即乙烯基或乙炔基優(yōu)選地不直接連接在氮、氧或硫部分上。
本文所用的術(shù)語“烷氧基”指1至20個(gè)碳原子的直鏈或支鏈原子團(tuán)，除非鏈長(zhǎng)受此限制，鍵合在氧原子上，包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基等。優(yōu)選地，烷氧基鏈?zhǔn)?至10個(gè)碳原子的長(zhǎng)度，更優(yōu)選為1至8個(gè)碳原子長(zhǎng)度。
本文所用的術(shù)語“芳基”單獨(dú)或作為另一基團(tuán)的一部分，指的是單環(huán)或二環(huán)芳族基團(tuán)，環(huán)部分中含有6至12個(gè)碳，優(yōu)選在環(huán)部分中含有6-10個(gè)碳，例如苯基、萘基或四氫萘基。
本文所用的術(shù)語“雜芳基”指具有5至14個(gè)環(huán)原子的基團(tuán)；10或14個(gè)π電子形成環(huán)狀排列；含有碳原子，并含有1、2或3個(gè)氧、氮或硫雜原子(雜芳基的實(shí)例有噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2，3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、吡喃基、異苯并呋喃基、苯并噁唑基、色烯基、呫噸基、phenoxathiinyl、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、4αH-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、口白啶基、菲咯啉基、吩嗪基、異噻唑基、吩噻嗪基、異噁唑基、呋咱基和吩噁嗪基)。
本文所用的術(shù)語“芳烷基”或“芳基烷基”單獨(dú)或作為另一基團(tuán)的一部分，指的是具有芳基取代基的、如上所述的C1-6烷基，例如芐基、苯乙基或2-萘甲基。
本文所用的術(shù)語“環(huán)烷基”單獨(dú)或作為另一基團(tuán)的一部分，指的是含有3至9個(gè)碳原子的環(huán)烷基，優(yōu)選為3至7個(gè)碳原子。典型實(shí)例有環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基和環(huán)壬基。
術(shù)語“C7-12二環(huán)烷基”意在包括二環(huán)[2.2.1]庚基(降冰片基)、二環(huán)[2.2.2]辛基、1，1，3-三甲基二環(huán)[2.2.1]庚基(冰片基)等。
術(shù)語“C10-16三環(huán)烷基”意在包括三環(huán)[5，2，1，02，6]癸基、金剛烷基等。
本文所用的術(shù)語“鹵素”或“鹵”單獨(dú)或作為另一基團(tuán)的一部分，指的是氯、溴、氟或碘，其中氯是優(yōu)選的。
本文所用的術(shù)語“單烷基氨基”單獨(dú)或作為另一基團(tuán)的一部分，指的是被一個(gè)具有1至6個(gè)碳原子的烷基取代的氨基。
本文所用的術(shù)語“二烷基氨基”單獨(dú)或作為另一基團(tuán)的一部分，指的是被兩個(gè)烷基取代的氨基，每個(gè)烷基具有1至6個(gè)碳原子。
本文所用的術(shù)語“羥基烷基”指的是被一個(gè)或多個(gè)羥基部分取代的任意上述烷基。
本文所用的術(shù)語“羧基烷基”指的是被一個(gè)或多個(gè)羧酸部分取代的任意上述烷基。
本文所用的術(shù)語“雜環(huán)”或“雜環(huán)的環(huán)”除非另有注解，代表穩(wěn)定的5至7元單或二環(huán)或穩(wěn)定的7至10元二環(huán)的雜環(huán)系，任意的環(huán)可以是飽和或不飽和的，由碳原子和一至三個(gè)雜原子組成，雜原子選自由N、O和S組成的組，其中的氮和硫雜原子可以可選地是被氧化的，氮雜原子可以可選地是季銨化的，包括任意這樣的二環(huán)基團(tuán)，其中任意上述雜環(huán)是與苯環(huán)稠合的。尤其有用的是這樣的環(huán)，含有一個(gè)氧或硫、一至三個(gè)氮原子、或與一或兩個(gè)氮原子結(jié)合的一個(gè)氧或硫。雜環(huán)可以被連接在任意的雜原子或碳原子上，形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。這樣的雜環(huán)基的實(shí)例包括哌啶基、哌嗪基、2-酮基哌嗪基、2-酮基哌啶基、2-酮基吡咯烷基、2-酮基氮雜基、氮雜基、吡咯基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑基、吡唑烷基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、噁唑基、噁唑烷基、異噁唑基、異噁唑烷基、嗎啉基、噻唑基、噻唑烷基、異噻唑基、奎寧環(huán)基、異噻唑烷基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、噻二唑基、苯并吡喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、呋喃基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、噻吩基、苯并噻吩基、硫嗎啉基、硫嗎啉亞砜、硫嗎啉砜、和噁二唑基。嗎啉代與嗎啉基是相同的。
本文所用的術(shù)語“雜原子”指氧原子(“O”)、硫原子(“S”)或氮原子(“N”)。當(dāng)雜原子是氮時(shí)，它可以形成一個(gè)NRaRb部分，其中的Ra和Rb彼此獨(dú)立地是氫或C1至C8烷基，或者與它們所鍵合的氮一起形成一個(gè)飽和或不飽和的5、6或7元環(huán)。
流程1和2概括了制備式I化合物的合成步驟。
流程1
流程2
流程1和2中，W、R3、R7、R8、R9、R10、Ra、Rb、Rc、n和m是如上所定義的；R4＝Cl或Br；P是一種氨基保護(hù)基團(tuán)，例如芐氧基羰基(Cbz)，P’是一種酯保護(hù)基團(tuán)，例如芐基。
流程1中，利用Mitsunobu偶合操作(Mitsunobu，O.《合成》1(1981))將被保護(hù)的氨基醇1與N-羥基鄰苯二甲酰亞胺偶合，得到化合物3。優(yōu)選的偶合條件包括使用三烷基膦或三芳基膦，例如三苯膦，在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，例如四氫呋喃或二氯甲烷，和偶氮二甲酸二烷基酯，例如偶氮二甲酸二乙酯。利用本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)條件(Greene，T.W.，Wuts，P.G.M.《有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)》第2版，John Wiley and Sons，Inc.New York(1991))，在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，例如乙醇或異丙醇，除去鄰苯二甲酰亞胺保護(hù)基團(tuán)，例如甲胺或肼。使用取代的胍基化劑將所得烷氧基胺胍基化為4，胍基化劑例如N，N’-雙(叔丁氧基羰基)-S-甲基異硫脲(Bergeron，R.J.和McManis，J.S.《有機(jī)化學(xué)雜志》521700(1987))或N-Ra、N-Rb、N-Rc-1H-吡唑-1-甲脒(Bernatowicz，M.S.等《四面體快報(bào)》343389(1993))。氨基的去保護(hù)作用得到中間體5，這是利用本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)操作(Greene，T.W.，Wuts，P.G.M.《有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)》第2版，John Wiley and Sons，Inc.New York(1991))，例如碳上的鈀，在適當(dāng)?shù)娜軇┲型瓿桑缂状蓟蛞掖?。在某些情況下，加入一種酸是有利的，例如氫氯酸。
流程2中，酯保護(hù)的甘氨酸、例如P’＝芐基或乙基，與一種醛、例如乙醛，和一種氰化物、例如氰基三甲基硅烷(TMSCN)，在適當(dāng)?shù)娜軇┲锌s合，例如二氯甲烷，得到氨基腈6。使氨基腈與草酰氯或草酰溴在適當(dāng)?shù)娜軇┲蟹磻?yīng)，例如1，2-二氯苯，得到吡嗪酮7。吡嗪酮7的3-氯或3-溴然后被適當(dāng)?shù)陌诽鎿Q，例如苯乙胺、2，2-二苯基乙胺或4-甲氧基苯乙胺，在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，例如乙酸乙酯，得到化合?。通過本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)操作(Greene，T.W.，Wuts，P.G.M.《有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)》第2版，John Wiley and Sons，Inc.New York(1991))，例如堿水解，如LiOH或NaOH，將酯8在適當(dāng)?shù)娜軇┲修D(zhuǎn)化為酸9，例如四氫呋喃/甲醇/水。其余氯或溴然后可選地通過氫解作用加以除去，反應(yīng)使用一種催化劑，例如碳上的鈀或阮內(nèi)鎳，在適當(dāng)?shù)娜軇┲羞M(jìn)行，例如水，得到9?；蛘?，在P’＝芐基的情況下，芐基酯的去保護(hù)和其余氯或溴的除去可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)，反應(yīng)使用碳上的鈀，在適當(dāng)?shù)娜軇┲羞M(jìn)行，例如四氫呋喃/乙醇，得到9。然后利用典型的氨基酸偶合操作，將酸與胺5偶合，例如BOP或PyBOP，反應(yīng)在適當(dāng)?shù)娜軇?、例如N，N-二甲基甲酰胺，和堿、例如二異丙基乙胺(DIEA)中進(jìn)行，在Ra和Rb＝叔丁氧基羰基(Boc)且Rc＝氫的情況下，然后可選地除去Ra、Rb、Rc。在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，例如二氯甲烷或二噁烷，通過用一種酸處理，例如三氟乙酸或氫氯酸，除去Boc基，得到目標(biāo)化合物10。
用流程3顯示的步驟可以生成其中X是-CH＝NR11-或NR11的化合物。
流程3
利用標(biāo)準(zhǔn)的氨基酸偶合操作，例如BOP或PyBOP，在N，N-二甲基甲酰胺等溶劑和DIEA等堿中，將酸9(按流程2合成)與氨基醇11偶合，生成化合物12。利用醇氧化的常規(guī)操作(例如參見Carey，F(xiàn).A.和Sundberg，R.J.《有機(jī)化學(xué)進(jìn)展B部分反應(yīng)與合成》第3版，Plenum Press，New York(1990))合成對(duì)應(yīng)的醛13，例如Swern氧化(Mancuso，A.J.等《有機(jī)化學(xué)雜志》3329(1976))、氯鉻酸吡啶鎓(Corey，E.J.和Suggs，J.W.《四面體快報(bào)》2647(1975))、重鉻酸吡啶鎓(Corey，E.J.和Schmidt，G.《四面體快報(bào)》399(1979))或三氧化硫吡啶絡(luò)合物/二甲基亞砜(《四面體快報(bào)》281603(1987))。
然后利用標(biāo)準(zhǔn)條件將醛13轉(zhuǎn)化為脒基腙14，例如用氨基胍或取代的氨基胍處理，如氨基胍或2-肼基咪唑啉，反應(yīng)可選地在一種酸的存在下，例如硝酸、氯化氫或溴化氫，在適當(dāng)?shù)娜軇┲羞M(jìn)行，例如乙醇或甲醇，另外可以含有其他溶劑，例如二氯甲烷或四氫呋喃。
脒基腙14向氨基胍15的轉(zhuǎn)化是本領(lǐng)域熟知的還原條件下完成的，例如硼氫化鋰，反應(yīng)在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，例如四氫呋喃或甲醇，在高達(dá)回流的不同溫度下進(jìn)行。作為替代方法，可以使用催化氫化反應(yīng)，催化劑為碳上的鈀。
利用本領(lǐng)域熟知的條件，可以可選地除去化合物14和15中的Ra、Rb和Rc。在Ra和Rb＝叔丁氧基羰基(Boc)且Rc＝氫的情況下，Boc基是通過酸處理而被除去的，例如三氟乙酸或氫氯酸，反應(yīng)在適當(dāng)?shù)娜軇┲羞M(jìn)行，例如二氯甲烷或二噁烷，分別得到化合物16和17。
式I化合物的藥學(xué)上可接受的鹽(以水溶性或油溶性產(chǎn)物或可分散的產(chǎn)物的形式)包括常規(guī)的非毒性鹽或季銨鹽，它們例如是從無機(jī)或有機(jī)酸或堿生成的。酸加成鹽的實(shí)例包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、撲酸鹽、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一酸鹽。堿鹽包括銨鹽，堿金屬鹽、例如鈉和鉀鹽，堿土金屬鹽、例如鈣和鎂鹽，有機(jī)堿的鹽、例如二環(huán)己胺鹽、N-甲基-D-葡糖胺鹽，和氨基酸的鹽、例如精氨酸、賴氨酸等。而且，堿性含氮基團(tuán)可以用這樣的試劑季銨化，例如低級(jí)烷基鹵化物，如甲基、乙基、丙基和丁基的氯、溴和碘化物；硫酸二烷基酯，如硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯和二戊酯；長(zhǎng)鏈鹵化物，如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰基的氯、溴和碘化物；芳烷基鹵化物，如芐基和苯乙基的溴化物等。優(yōu)選用于生成酸加成鹽的酸包括HCl和乙酸。
本發(fā)明化合物代表一類新穎的、金屬蛋白酶、酸蛋白酶、硫醇蛋白酶和絲氨酸蛋白酶的有效抑制劑。被本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物抑制的絲氨酸蛋白酶的實(shí)例包括嗜中性白細(xì)胞彈性蛋白酶，它是一種涉及肺氣腫發(fā)病機(jī)理的蛋白水解酶；胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶，它們是消化酶；胰彈性蛋白酶，和組織蛋白酶G，它也是與白細(xì)胞有關(guān)的胰凝乳蛋白酶樣蛋白酶；凝血酶和Xa因子，它們是血液凝固途徑中的蛋白水解酶。對(duì)嗜熱菌蛋白酶和胃蛋白酶的抑制作用也是本發(fā)明化合物的用途，前者是一種金屬蛋白酶，后者是一種酸蛋白酶。本發(fā)明化合物優(yōu)選地用于抑制胰蛋白酶樣蛋白酶。
對(duì)它們的最終應(yīng)用來說，本發(fā)明化合物的酶抑制特性的效力和其他生化參數(shù)是易于按照本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)生化工藝加以確定的。例如，抑制胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶的化合物的最終應(yīng)用是治療胰腺炎。具體最終應(yīng)用的實(shí)際劑量范圍當(dāng)然取決于所治療的患者或動(dòng)物疾病狀態(tài)的性質(zhì)和嚴(yán)重性，這些是由隨訪的診斷醫(yī)師加以決定的。預(yù)期有用的劑量范圍將是約0.01至10mg每kg每天，即可達(dá)到有效的治療效果。
以抑制凝血酶的能力而卓著的本發(fā)明化合物可以用于多種治療目的。作為凝血酶抑制劑，本發(fā)明化合物抑制凝血酶的產(chǎn)生。因此，這些化合物可用于以異常靜脈或動(dòng)脈血栓形成為特征的狀態(tài)的治療或預(yù)防，這些狀態(tài)涉及凝血酶的產(chǎn)生或作用，包括但不限于深靜脈血栓；發(fā)生在膿毒性休克、病毒感染和癌癥過程中的播散性血管內(nèi)凝血；心肌梗塞；中風(fēng)；冠狀動(dòng)脈旁路；眼內(nèi)纖維蛋白形成；髖部復(fù)位；由溶栓療法或經(jīng)皮經(jīng)腔冠狀血管成形術(shù)(PCTA)導(dǎo)致的血栓形成。其他用途包括所述凝血酶抑制劑作為抗凝劑的用途，包埋在或者物理連接于用于裝置制造的材料中，該裝置用于血液采集、血液循環(huán)和血液貯存，例如導(dǎo)管、血液透析儀器、血液采集注射器與試管、和血線。本發(fā)明化合物也可以在體外血液循環(huán)中用作抗凝劑。
金屬斯滕特氏印模顯示出減少再狹窄的作用，但是也有形成血栓的作用。減少斯滕特氏印模形成血栓的一個(gè)策略是在斯滕特氏印模表面上涂覆、包埋、吸附或共價(jià)結(jié)合凝血酶抑制劑。本發(fā)明化合物可用于該目的。本發(fā)明化合物可以結(jié)合或包埋在可溶性和/或可生物降解的聚合物內(nèi)，然后涂在斯滕特氏印模材料上。這樣的聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、聚羥基-丙基異丁烯酰胺-苯酚、聚羥乙基-天冬氨酰胺-苯酚、被棕櫚酰殘基取代的聚環(huán)氧乙烷-聚賴氨酸、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸與聚乙醇酸的共聚物、聚ε己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、聚原酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯、和水凝膠的交聯(lián)或兩親嵌段共聚物。見歐洲申請(qǐng)761251、歐洲申請(qǐng)604022、加拿大專利2164684和PCT公開說明書WO 96/11668、WO 96/32143和WO 96/38136。
憑藉凝血酶對(duì)平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞等宿主細(xì)胞類型的作用，發(fā)現(xiàn)了本發(fā)明化合物的另外用途，用于成人呼吸窘迫綜合征；炎性反應(yīng)；傷口愈合；再灌注損傷；動(dòng)脈粥樣硬化；和氣囊血管成形術(shù)、atherectomy和動(dòng)脈斯滕特氏印模放置等損傷后繼發(fā)的再狹窄的治療或預(yù)防。
本發(fā)明化合物可用于治療瘤形成和瘤轉(zhuǎn)移以及神經(jīng)變性疾病，例如阿耳茨海默氏病和帕金森氏病。
當(dāng)用作凝血酶抑制劑時(shí)，本發(fā)明化合物給藥的有效量可以在約0.1至約500mg/kg體重的劑量范圍內(nèi)，優(yōu)選為0.1至10mg/kg體重，給藥方案為每日一次或2-4次。
當(dāng)用作凝血酶的抑制劑時(shí)，本發(fā)明化合物可以與溶栓劑聯(lián)合使用，例如組織纖溶酶原激活物、鏈激酶和尿激酶。另外，本發(fā)明化合物可以與其他抗血栓形成藥或抗凝藥聯(lián)合使用，例如但不限于纖維蛋白原拮抗劑和凝血噁烷受體拮抗劑。
凝血酶抑制劑可以與可溶性聚合物偶合，后者作為可定向的藥物載體。這樣的聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥基-丙基異丁烯酰胺-苯酚、聚羥乙基-天冬氨酰胺-苯酚、或被棕櫚酰殘基取代的聚環(huán)氧乙烷-聚賴氨酸。而且，凝血酶抑制劑可以與一類可生物降解的聚合物偶合，后者可用于實(shí)現(xiàn)藥物的控制釋放，例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸與聚乙醇酸的共聚物、聚ε己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、聚原酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯、和水凝膠的交聯(lián)或兩親嵌段共聚物。
人白細(xì)胞彈性蛋白酶是由多形核白細(xì)胞在炎癥部位釋放的，因此是大量疾病狀態(tài)的誘因。本發(fā)明化合物預(yù)期具有抗炎作用，可用于痛風(fēng)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和其他炎性疾病的治療以及肺氣腫的治療。本發(fā)明化合物的白細(xì)胞彈性蛋白酶抑制性質(zhì)是按下述方法測(cè)定的。組織蛋白酶G也涉及關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)和肺氣腫等疾病狀態(tài)，以及由肺部感染導(dǎo)致的腎小球性腎炎和肺感染。在它們的最終應(yīng)用中，式I化合物的酶抑制性質(zhì)是易于為本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)生化工藝所確定的。
本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物的組織蛋白酶G抑制性質(zhì)是按下述方法測(cè)定的。按照Baugh等《生物化學(xué)》15836(1979)的操作，得到部分純化的人組織蛋白酶G制劑。白細(xì)胞顆粒是白細(xì)胞彈性蛋白酶和組織蛋白酶G制劑的主要來源(胰凝乳蛋白酶樣活性)。將白細(xì)胞溶解，分離顆粒。白細(xì)胞顆粒用0.20M乙酸鈉pH 4.0萃取，將萃取液在4℃下對(duì)含有0.05M NaCl的0.05M Tris緩沖液pH 8.0透析過夜。蛋白質(zhì)部分在透析過程中沉淀出來，離心分離之。該部分含有大多數(shù)胰凝乳蛋白酶樣活性的白細(xì)胞顆粒。制備每種酶的特異性酶解物，也就是N-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-對(duì)硝基N-酰苯胺和Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-對(duì)硝基N-酰苯胺。后者不被白細(xì)胞彈性蛋白酶水解。酶制劑在2.00ml 0.10M Hepes緩沖液pH 7.5中進(jìn)行測(cè)定，該緩沖液中含有0.50M NaCl、10％二甲基亞砜和作為酶解物的0.0020M Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-對(duì)硝基N-酰苯胺。對(duì)硝基N-酰苯胺酶解物的水解是在405nm和25℃下進(jìn)行監(jiān)測(cè)的。
本發(fā)明化合物作為嗜中性白細(xì)胞彈性蛋白酶抑制劑和組織蛋白酶G抑制劑應(yīng)用的有用劑量范圍取決于疾病狀態(tài)的性質(zhì)和嚴(yán)重性，這些是由隨訪的診斷醫(yī)師加以確定的，可用于上述疾病狀態(tài)的劑量范圍是0.01至10mg/kg體重每天。
抑制尿激酶或纖溶酶原激活物的本發(fā)明化合物有效地用于治療過度細(xì)胞生長(zhǎng)的疾病狀態(tài)。本發(fā)明化合物也可用于良性前列腺肥大和前列腺癌的治療、牛皮癬的治療和用作墮胎藥。對(duì)它們的最終應(yīng)用來說，本發(fā)明化合物的酶抑制特性的效力和其他生化參數(shù)是易于按照本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)生化工藝加以確定的。這種應(yīng)用的實(shí)際劑量范圍將取決于所治療的患者或動(dòng)物疾病狀態(tài)的性質(zhì)和嚴(yán)重性，這些是由隨訪的診斷醫(yī)師加以決定的。預(yù)期一般的劑量范圍將是約0.01至10mg每kg每天，即可達(dá)到有效的治療效果。
本發(fā)明化合物的其他用途包括對(duì)商品酶試劑進(jìn)行活性部位濃度分析。例如，作為標(biāo)準(zhǔn)試劑供應(yīng)的胰凝乳蛋白酶用于在臨床上定量測(cè)定胰液和糞便中的胰凝乳蛋白酶活性。這種測(cè)定用于診斷胃腸道和胰腺機(jī)能紊亂。胰彈性蛋白酶也是作為商品試劑供應(yīng)的，用于定量測(cè)定血漿中的α1-抗胰蛋白酶。血漿α1-抗胰蛋白酶在若干炎性疾病的進(jìn)程中濃度增加，α1-抗胰蛋白酶缺乏與肺病發(fā)病率的增加有關(guān)。本發(fā)明化合物可用于提高這些測(cè)定的準(zhǔn)確度和再現(xiàn)性，方法是對(duì)作為試劑供應(yīng)的商品彈性蛋白酶進(jìn)行滴定測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)化。見美國(guó)專利4499082。
某些蛋白質(zhì)提取物中的蛋白酶活性在特定蛋白質(zhì)的純化過程中是可能使蛋白質(zhì)分離操作結(jié)果復(fù)雜化和打折扣的經(jīng)常性問題。某些存在于這些提取物中的蛋白酶能夠在純化步驟中被本發(fā)明化合物所抑制，后者與不同蛋白水解酶緊密結(jié)合。
本發(fā)明的藥物組合物能夠?qū)θ我饽軌蝮w驗(yàn)本發(fā)明化合物有益效果的動(dòng)物給藥。這些動(dòng)物中最重要的是人，不過本發(fā)明并不受此局限。
本發(fā)明的藥物組合物能夠通過任意可達(dá)到預(yù)期目的的方式給藥。例如，給藥可以通過腸胃外、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、透皮、頰部或眼部途徑。或者，可以通過口服途徑并行給藥。給藥劑量將取決于受治療者的年齡、健康狀況和體重、并行治療的種類——若有的話、治療頻率、和所需效果的性質(zhì)。
除了藥學(xué)上的活性化合物以外，該新穎的藥物制劑還可含有適合的藥學(xué)上可接受的載體，包括有利于將活性化合物加工成能夠藥用的制劑的賦形劑和助劑。
本發(fā)明的藥物制劑是按照本身已知的方式制造的，例如通過常規(guī)的混合、造粒、成丸、溶解、或凍干過程。因此，通過將活性化合物與固體賦形劑混合可以得到口用藥物制劑，如果需要或必要的話，可選地加入適合的助劑，然后研磨所得混合物，將顆粒混合物加工成片劑或錠劑芯。
適合的賦形劑特別是填充劑，例如糖類，如乳糖或蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇，纖維素制劑和/或磷酸鈣，如磷酸三鈣或磷酸氫鈣，以及粘合劑，例如淀粉糊，如玉米淀粉、小麥淀粉、稻米淀粉、馬鈴薯淀粉，明膠，黃芪膠，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉，和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要的話，可以加入崩解劑，例如上述的淀粉和羧甲基淀粉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、或藻酸或其鹽，例如藻酸鈉。助劑尤其是流動(dòng)調(diào)節(jié)劑和潤(rùn)滑劑，例如硅石、滑石、硬脂酸或其鹽，如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣，和/或聚乙二醇。錠劑芯具有適合的包衣，如果需要的話，該包衣是耐受胃酸的。為此可以使用濃縮的糖溶液，其中可以可選地含有阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆用溶液和適合的有機(jī)溶劑或溶劑混合物。為了形成耐受胃酸的包衣，使用適合的纖維素制劑的溶液，例如鄰苯二甲酸乙酸纖維素或鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素。可以向片劑或糖衣丸劑的包衣中加入染料或顏料，例如，用于鑒別或?yàn)榱嗣枥L各劑活性化合物的組合。
其他可以口服使用的藥物制劑包括由明膠制成的推入配合式膠囊，以及由明膠和甘油或山梨糖醇等增塑劑制成的軟密封膠囊。推入配合式膠囊可以含有顆粒形式的活性化合物，它們可以與乳糖等填充劑、淀粉等粘合劑和/或滑石或硬脂酸鎂等潤(rùn)滑劑以及可選的穩(wěn)定劑混合。在軟膠囊中，活性化合優(yōu)選溶解或懸浮在適宜的液體中，例如脂肪油或液體石蠟。另外，也可以加入穩(wěn)定劑。
適合于腸胃外給藥的制劑包括水溶性活性化合物的水溶液，例如水溶性鹽、堿性溶液和環(huán)糊精包合的絡(luò)合物。尤其優(yōu)選的堿式鹽是銨鹽，例如是用Tris、氫氧化膽堿、Bis-Tris丙烷、N-甲基葡糖胺或精氨酸制備的?？梢允褂靡环N或多種改性或未改性的環(huán)糊精來穩(wěn)定和增加本發(fā)明化合物的水溶性。為此有用的環(huán)糊精公開在美國(guó)專利4727064、4764604和5024998中。
另外，活性化合物可以作為適當(dāng)?shù)挠托宰⑸溆脩腋∫航o藥。適合的親脂性溶劑或載體包括脂肪油、如芝麻油，或合成的脂肪酸酯、如油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400(化合物可溶于PEG-400)。水性注射用懸浮液可以含有增加懸浮液粘度的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇和/或葡聚糖?？蛇x地，懸浮液也可以含有穩(wěn)定劑。
利用交換反應(yīng)，式I化合物可以用放射性碘進(jìn)行標(biāo)記。用熱碘交換冷碘是本領(lǐng)域所熟知的?；蛘撸?jīng)由三丁基甲錫烷基中間體，可以從對(duì)應(yīng)的溴化合物制備放射性碘標(biāo)記的化合物。見美國(guó)專利5122361，引用在此作為參考。
本發(fā)明也包括可用于哺乳動(dòng)物體內(nèi)血栓成像的組合物，其中該組合物是由與放射性原子絡(luò)合的式I化合物組成的。
對(duì)式I化合物來說，適合的放射性原子包括Co-57、Cu-67、Ga-67、Ga-68、Ru-97、Tc-99m、In-111、In-113m、Hg-197、Au-198和Pb-203。某些放射性原子非常適合用在放射化學(xué)成像工藝中。特別是锝-99m(Tc-99m)是成像理想的放射性原子，這是由它的核性質(zhì)所決定的。它是一種γ發(fā)射體，單光子能為140keV，半衰期為約6小時(shí)，易于從Mo-99/Tc-99發(fā)生器獲得。錸-186和-188也具有γ發(fā)射，使其可被成像。優(yōu)選的組合物含有放射性原子Tc-99m。
本發(fā)明組合物適宜通過將式I化合物與適合于外部檢測(cè)的放射性同位素絡(luò)合加以制備。γ發(fā)射體銦-111m和锝-99m是優(yōu)選的放射性原子，因?yàn)樗鼈兛捎忙谜障鄼C(jī)檢測(cè)，并具有良好的體內(nèi)半衰期。
式I化合物可以按照本領(lǐng)域已知的任意多種工藝加以標(biāo)記，得到本發(fā)明的組合物。例如，這些化合物可以通過一種螯合劑進(jìn)行標(biāo)記，例如二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)或金屬硫蛋白，它們都能以共價(jià)方式與式I化合物結(jié)合。
一般，含有锝-99m的本發(fā)明組合物是這樣制備的，先形成锝-99m與一種還原劑和一種水溶性配體的水性混合物，然后使該混合物與由式I代表的本發(fā)明化合物接觸。例如，本發(fā)明的成像化合物是這樣制備的，使锝-99m(氧化態(tài))與具有一種螯合單元的本發(fā)明化合物在一種還原劑的存在下反應(yīng)，在還原態(tài)(IV或V價(jià)態(tài))锝-99m之間形成穩(wěn)定的絡(luò)合物。
本發(fā)明組合物的一種實(shí)施方式是這樣制備的，將具有DTPA螯合單元的式I化合物用锝-99m標(biāo)記。實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)可以通過將預(yù)定量(例如5μg至0.5mg)本發(fā)明化合物與含有檸檬酸鹽緩沖劑和亞錫還原劑的水溶液混合，然后加入含有預(yù)定水平放射性(例如15mCi)的新近洗脫的過锝酸鈉?；旌衔镌谑覝叵卤３趾銣兀缓髮⒎磻?yīng)混合物通過無菌濾器(0.2-0.22微米)裝入屏蔽注射器內(nèi)，如果需要的話，再分散在0.9％的注射鹽水中。
本發(fā)明組合物的另一種實(shí)施方式是這樣制備的，將具有金屬硫蛋白螯合單元的式I化合物用锝-99m標(biāo)記。實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)可通過將含水過锝酸-99m鈉與含水葡萄庚糖酸亞錫混合，形成锝-99m(還原態(tài))與兩分子葡萄庚糖酸鹽的可溶性絡(luò)合物，然后將該溶液與結(jié)合有金屬硫蛋白的式I化合物混合?；旌衔锖銣匾欢〞r(shí)間，使锝-99m從葡萄庚糖酸鹽絡(luò)合物交換到式I化合物的金屬硫蛋白上，從而形成本發(fā)明的锝標(biāo)記組合物。
锝-99m的來源應(yīng)當(dāng)優(yōu)選是水溶性的。優(yōu)選的來源是堿金屬與堿土金屬的過锝酸鹽(TcO4-)。最優(yōu)選的锝-99m是以新鮮過锝酸鈉的形式從無菌锝-99m發(fā)生器(例如常規(guī)的Mo-99/Tc-99m發(fā)生器)中得到的。不過，也可以使用生理學(xué)上可接受的锝-99m的任意其他來源。
用在該方法中的還原劑是生理學(xué)上可接受的，用于將锝-99m從其氧化態(tài)還原為IV或V價(jià)態(tài)，或者用于還原氧化態(tài)的錸?？梢允褂玫倪€原劑是氯化亞錫、氟化亞錫、葡萄庚糖酸亞錫、酒石酸亞錫和連二亞硫酸鈉。優(yōu)選的是亞錫還原劑，尤其是氯化亞錫或葡萄庚糖酸亞錫。還原劑的量是還原锝-99m所必需的，使其以這種放射性同位素還原態(tài)與式I化合物的螯合單元結(jié)合。例如，還原劑是氯化亞錫(SnCl2)，可以使用1-1000μg/ml。尤其優(yōu)選的濃度是約30-500ρg/ml。
檸檬酸與锝-99m迅速絡(luò)合，形成穩(wěn)定的锝-99m-檸檬酸鹽絡(luò)合物。一旦在溫和條件下與式I化合物接觸，锝-99m基本上定量地從檸檬酸鹽絡(luò)合物快速轉(zhuǎn)移到式I化合物的螯合單元上。檸檬酸(例如檸檬酸鈉)的量可以從約0.5mg/ml至介質(zhì)中可溶解的最大量。優(yōu)選的檸檬酸用量范圍從15至30μg/ml。
具有螯合單元的式I化合物的量可以從0.001至約3mg/ml，優(yōu)選為約0.017至約0.15mg/ml。最后，過锝酸鹽形式的锝-99m的用量可以優(yōu)選為約1-50mCi。每mg本發(fā)明化合物的mCi量?jī)?yōu)選為約30-150。
式I化合物與金屬離子-轉(zhuǎn)移配體絡(luò)合物之間的反應(yīng)優(yōu)選是在水溶液中進(jìn)行的，并且式I化合物在反應(yīng)的pH下是穩(wěn)定的。“穩(wěn)定”指化合物仍是可溶性的，并保持對(duì)α-凝血酶的抑制活性。通常，反應(yīng)的pH將從約5至9，優(yōu)選的pH為約6-8。將锝-99m-檸檬酸鹽絡(luò)合物和式I化合物恒溫，溫度優(yōu)選為約20℃至約60℃，最優(yōu)選為約20℃至約37℃，持續(xù)時(shí)間足以使金屬離子從檸檬酸鹽絡(luò)合物轉(zhuǎn)移到式I化合物的螯合單元上。一般地，不到一小時(shí)即可足以在這些條件下完成轉(zhuǎn)移反應(yīng)。
其他本發(fā)明組合物包括In-111標(biāo)記的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明也包括可用于哺乳動(dòng)物體內(nèi)血栓成像的本發(fā)明化合物的組合物，該組合物是由與順磁性原子絡(luò)合的由式I代表的化合物組成的。
優(yōu)選的順磁性原子是原子數(shù)為21至29、42、44和58至70的元素的二價(jià)或三價(jià)離子。適合的離子包括鉻(III)、錳(II)、鐵(III)、鐵(II)、鈷(II)、鎳(II)、銅(II)、鐠(III)、釹(III)、釤(III)和鐿(III)。由于磁矩非常強(qiáng)，釓(III)、鋱(III)、鏑(III)、鈥(III)和鉺(III)是優(yōu)選的。尤其優(yōu)選的順磁性原子是釓(III)。
本發(fā)明組合物可以通過將式I化合物與順磁性原子混合加以制備。例如，將適合的順磁性原子的金屬氧化物或金屬鹽(例如硝酸鹽、氯化物或硫酸鹽)溶解或懸浮在由水和一種醇組成的介質(zhì)中，醇例如甲醇、乙醇或異丙醇。將該混合物加入到等摩爾量式I化合物在相似的含水介質(zhì)中的溶液中，攪拌。反應(yīng)混合物可以適當(dāng)加熱，直至反應(yīng)完成。通過過濾可以分離所形成的不溶性組合物，通過蒸發(fā)溶劑可以分離可溶性組合物。如果螯合單元上的酸根仍然存在于本發(fā)明組合物中，那么可以加入無機(jī)或有機(jī)堿、甚至氨基酸，將酸性絡(luò)合物轉(zhuǎn)化為中性絡(luò)合物，以促進(jìn)同質(zhì)組合物的分離或純化。有機(jī)堿或堿性氨基酸可以用作中和劑，以及無機(jī)堿也是如此，例如鈉、鉀或鋰的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽。
本發(fā)明也包括可用于哺乳動(dòng)物體內(nèi)血栓成像的診斷組合物，該組合物包含藥學(xué)上可接受的載體和診斷學(xué)上有效量的得自式I化合物的組合物。
每劑所需的“診斷學(xué)上有效量”的組合物將取決于給藥途徑、所治療哺乳動(dòng)物的類型和所考慮的具體哺乳動(dòng)物的體格特征。這些因素及其與確定劑量之間的關(guān)系是醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。而且，可以調(diào)整診斷學(xué)上的有效量和給藥方法，使其達(dá)到最佳療效，不過也取決于諸多因素，例如體重、飲食、并行的藥物治療和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員將要考慮的其他因素。在任何方面，用于成像的劑量應(yīng)當(dāng)足以檢測(cè)所針對(duì)血栓部位中的成像劑的存在。通常，放射成像要求由本發(fā)明藥物組合物所提供的劑量為約5至20μCi，優(yōu)選為約10μCi。磁共振成像要求所提供的劑量為約0.001至5mmol/kg、優(yōu)選為約0.005至0.5mmol/kg與順磁原子絡(luò)合的式I化合物。在兩種情況下，本領(lǐng)域已知實(shí)際劑量將取決于血栓的位置。
用于體內(nèi)的“藥學(xué)上可接受的載體”是藥學(xué)領(lǐng)域所熟知的，例如描述在Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack PublishingCo.(A.R.Gennaro edit.1985)中。本發(fā)明的藥物組合物可以用藥學(xué)上可接受的載體配制成用于注射給藥的無菌溶液或懸浮液。特別是注射劑可以制備成常規(guī)劑型，要么是液體溶液或懸浮液、適合于在注射前溶解或懸浮在液體中的固體形式，要么是乳液。適合的賦形劑例如水、鹽水、葡萄糖、甘露糖醇、乳糖、卵磷脂、白蛋白、谷氨酸鈉、鹽酸半胱氨酸等。另外，如果需要的話，可注射的藥物組合物可以含有少量無毒的輔助物質(zhì)，例如潤(rùn)濕劑、pH緩沖劑等。如果需要的話，可以使用促進(jìn)吸收的制劑(例如脂質(zhì)體)。
本發(fā)明也涵蓋為貯存或給藥而制備的診斷組合物。它們另外含有防腐劑、穩(wěn)定劑和染劑。例如，作為防腐劑可以加入苯甲酸鈉、山梨酸和對(duì)羥基苯甲酸的酯。出處同上，1449頁。另外，可以使用抗氧化劑和懸浮劑。
本發(fā)明的體內(nèi)成像方法也提供了若干優(yōu)于以前的成像工藝的優(yōu)點(diǎn)，這些成像工藝用于檢測(cè)或監(jiān)測(cè)血栓的存在、大小、消退或增加。特別是本發(fā)明所提供的化合物、組合物和診斷組合物已經(jīng)被設(shè)計(jì)成與凝血酶極為緊密地結(jié)合，凝血酶是與血栓相關(guān)聯(lián)的，從而減少由未結(jié)合的成像劑產(chǎn)生的循環(huán)放射性或順磁性“背景”。而且，通過冠脈內(nèi)注射本發(fā)明化合物、組合物或診斷組合物而進(jìn)行的體內(nèi)成像預(yù)期幾乎是瞬時(shí)的，這是由于這些成像劑會(huì)立即飽和與血栓結(jié)合的凝血酶。
因此，本發(fā)明也包括用于哺乳動(dòng)物體內(nèi)血栓成像的方法，該方法包括下列步驟(1)將診斷學(xué)上可接受的量的本發(fā)明化合物、組合物或診斷組合物對(duì)哺乳動(dòng)物給藥，和(2)檢測(cè)血管內(nèi)的血栓。
本文所用的術(shù)語“體內(nèi)成像”指哺乳動(dòng)物血栓的檢測(cè)方法，以及監(jiān)測(cè)哺乳動(dòng)物血栓大小、位置和數(shù)量以及血栓溶解或生長(zhǎng)的方法。
該方法在體內(nèi)使用化合物、組合物或診斷組合物時(shí)，“給藥”是通過腸胃外途徑實(shí)現(xiàn)的，以全身或局部定向的方式均可。實(shí)現(xiàn)全身給藥的方法是將本發(fā)明化合物、組合物或診斷組合物注射到適宜和可用的靜脈或動(dòng)脈內(nèi)。這包括但不限于通過ankecubutal靜脈給藥。實(shí)現(xiàn)局部定向給藥的方法是將本發(fā)明化合物、組合物或診斷組合物以接近血流的速度注射到被懷疑在遠(yuǎn)離注射部位含有血栓的靜脈或動(dòng)脈內(nèi)。這包括但不限于直接注射到冠狀動(dòng)脈脈管系統(tǒng)內(nèi)，使冠脈血栓成像，直接注射到頸動(dòng)脈內(nèi)，使腦脈管系統(tǒng)中的血栓成像，或者直接注射到足靜脈內(nèi)，使腿部深靜脈血栓成像。
本發(fā)明組合物向血栓部位的釋放方式也在術(shù)語“給藥”所考慮的范圍內(nèi)。例如，可以將連接有螯合單元的由式I代表的化合物注射到哺乳動(dòng)物內(nèi)，稍后注入放射性原子，從而在血栓部位體內(nèi)形成包含與放射性原子絡(luò)合的式I化合物的組合物?；蛘撸梢詫c放射性原子絡(luò)合的式I化合物的組合物注射到哺乳動(dòng)物內(nèi)。
如前文所述，用在本發(fā)明方法中的化合物、組合物或診斷組合物的“診斷學(xué)上有效的量”將取決于給藥途徑、所治療哺乳動(dòng)物的類型和所治療具體哺乳動(dòng)物的體格特征。這些因素及其與確定劑量之間的關(guān)系是醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。在任何方面，用于體內(nèi)成像的劑量應(yīng)當(dāng)足以檢測(cè)所針對(duì)血栓部位中的成像劑的存在。通常，放射成像要求由本發(fā)明診斷組合物所提供的劑量為約5至20μCi，優(yōu)選為約10μCi。磁共振成像要求由診斷組合物所提供的劑量為約0.001至5mmol/kg、優(yōu)選為約0.005至0.5mmol/kg與順磁原子絡(luò)合的式I化合物。在兩種情況下，本領(lǐng)域已知實(shí)際劑量將取決于血栓的位置。
由于放射性或順磁性原子在血栓部位的存在，使通過成像檢測(cè)血栓成為可能。
與本發(fā)明組合物和診斷組合物相關(guān)的放射性原子優(yōu)選利用一種能夠檢測(cè)γ放射的放射檢測(cè)裝置進(jìn)行成像，例如γ照相機(jī)等。通常，放射成像照相機(jī)利用一種轉(zhuǎn)換介質(zhì)(其中高能γ射線被吸收，一旦恢復(fù)為軌道狀態(tài)即替換發(fā)射光子的電子)、排列在空間檢測(cè)腔中的光感測(cè)器(以測(cè)定所發(fā)射光子的位置)和用于分析腔內(nèi)所檢測(cè)的光子和產(chǎn)生圖像的電路。
與本發(fā)明組合物和診斷組合物相關(guān)的順磁性原子是在磁共振成像(MRI)系統(tǒng)中檢測(cè)的。在這樣的系統(tǒng)中，強(qiáng)磁場(chǎng)用于排列患者體內(nèi)原子的核自旋向量。該磁場(chǎng)受到存在于血栓的順磁性原子的干擾，當(dāng)核恢復(fù)為它們的平衡排列時(shí)讀取到患者的圖像。
下列實(shí)施例闡述而非限制本發(fā)明的方法和組合物。不同條件和參數(shù)的其他適當(dāng)修改和調(diào)整也是正常的，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，顯然也在本發(fā)明的精神和范圍之內(nèi)。
在以下的說明中，α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix表示α-氰基-4-羥基肉桂酸基質(zhì)，Calcd.代表計(jì)算值，F(xiàn)ound代表實(shí)測(cè)值。
實(shí)施例1
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
a.N-[2-(芐氧基羰基氨基)乙氧基]鄰苯二甲酰亞胺
向N-(2-羥基乙基)氨基甲酸芐基酯(5.9g，30mmol)、N-羥基鄰苯二甲酰亞胺(4.9g，30mmol)與三苯膦(7.9g，30mmol)的四氫呋喃(100ml)溶液中加入偶氮二甲酸二乙酯(5.2g，30mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。加入乙酸乙酯(200ml)，用飽和NaHCO3(2×100ml)和鹽水(100ml)洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾。蒸發(fā)濾液后，殘余物用快速柱色譜法純化(二氯甲烷至4％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液)，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(9.3g，91％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.84(m，2H)，7.78(m，2H)，7.37(m，5H)，5.97(brs，1H)，5.14(s，2H)，4.27(t，J＝4.9Hz，2H)，3.51(q，J＝5.2Hz，2H).
b.2-(芐氧基羰基氨基)乙氧基胺
向前一步中制備的N-[2-(芐氧基羰基氨基)乙氧基]鄰苯二甲酰亞胺(1.36g，4.0mmol)的乙醇(20ml)與四氫呋喃(20ml)溶液中加入40％甲胺(2.0ml，25mmol)，在室溫下攪拌1小時(shí)。蒸發(fā)溶劑后，使殘余物通過硅膠(3∶1乙酸乙酯∶己烷至乙酸乙酯)，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(800mg，95％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36(m，5H)，5.47(br s，2H)，5.21(br s，1H)，5.10(s，2H)，3.72(t，J＝5.0Hz，2H)，3.44(q，J＝5.0Hz，2H).
c.[N，N’-二(叔丁氧基羰基)]2-(芐氧基羰基氨基)乙氧基胍
向前一步中制備的2-(芐氧基羰基氨基)乙氧基胺(780mg，3.7mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(20ml)溶液中加入[N，N’-二(叔丁氧基羰基)]脒基吡唑(1.25g，4.0mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜，在高真空下蒸發(fā)溶劑。殘余物用快速柱色譜法純化(0-5％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液)，得到標(biāo)題化合物，為無色的油(1.55g，93％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ9.08(s，1H)，7.67(s，1H)，7.33(m，5H)，6.21(br s，1H)，5.21(br s，1H)，5.11(s，2H)，4.12(t，J＝4.8Hz，2H)，3.54(q，J＝4.9Hz，2H)，1.49(s，9H)，1.46(s，9H).
d.[N，N’-二(叔丁氧基羰基)]2-氨基乙氧基胍
將前一步中制備的[N，N’-二(叔丁氧基羰基)]2-(芐氧基羰基氨基)乙氧基胍(730mg，1.5mmol)與10％碳上的鈀(70mg)在乙醇(20ml)與四氫呋喃(20ml)中的混合物在氫(氣囊)下氫化30分鐘。通過硅藻土過濾除去催化劑，濾液在真空中濃縮。殘余物在Waters Sep-Pak上純化(10g，95∶5二氯甲烷∶用氨飽和的甲醇)，得到標(biāo)題化合物，為無色的油(290mg，61％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ9.08(br s，1H)，4.08(t，J＝5.2Hz，2H)，2.99(q，J＝5.1Hz，2H)，1.50(s，9H)，1.48(s，9H).
e.鹽酸芐基-N-(1-氰基乙基)甘氨酸
在氬氣下，向攪拌著的芐基甘氨酸游離堿(5.0g，30mmol)與乙醛(1.7ml，30mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液中小心地加入三甲基氰基硅(TMSCN)(4.0ml，30mmol)。15小時(shí)后，在真空中除去揮發(fā)性組分，將殘余物溶于乙酸乙酯(200ml)，用鹽水(100ml)洗滌，干燥(Na2SO4)，蒸發(fā)得到油。將該油再次溶解在乙醚(30ml)和乙醇(30ml)中，滴加1M HCl的乙醚溶液(33ml)，得到標(biāo)題化合物(6.60g，100％)，為不完全白色結(jié)晶性沉淀。1H-NMR(300MHz，CD3OD)δ7.31-7.48(m，5H)，5.32(s，2H)，4.68(q，J＝7.0Hz，1H)，4.22(s，2H)，1.73(d，J＝7.1Hz，3H)；CI MSm/z＝192(M+H).Anal.Calcd.for C12H14N2O2.HClC，56.49；H，5.95；N，11.00.FoundC，56.32；H，5.88，N，10.89.
f.1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮
將攪拌著的草酰氯(5.3ml，60mmol)與前一步中制備的鹽酸芐基-N-(1-氰基乙基)甘氨酸(3.82g，15mmol)在1，2-二氯苯(30ml)中的混合物加熱至100℃過夜。在真空中蒸發(fā)溶劑，殘余物用快速柱色譜法純化(20-30％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到固體。加入10％乙酸乙酯的己烷溶液(100ml)，收集固體，得到標(biāo)題化合物，為橙色結(jié)晶性固體(2.7g，55％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.38(m，5H)，5.24(s，2H)，4.89(s，2H)，2.34(S，3H).
g.3-(2-苯乙氨基)-5-氯-6-甲基-1-(芐氧基羰基甲基)-吡嗪酮
向攪拌著的前一步中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮(1.31g，4.0mmol)的乙酸乙酯(10ml)溶液中加入苯乙胺(1.5ml，12mmol)，所得混合物在氮下加熱至回流。2小時(shí)后，反應(yīng)混合物冷卻，用二氯甲烷(100ml)稀釋，用5％檸檬酸(2×50ml)、鹽水(50ml)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾。在真空中蒸發(fā)濾液后，收集固體，用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗滌，得到標(biāo)題化合物，為結(jié)晶性固體(1.5g，91％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.22-7.38(m，10H)，6.11(t，J＝5.8Hz，1H)，5.21(s，2H)，4.79(s，2H)，3.68(q，J＝7.0Hz，2H)，2.93(t，J＝7.0Hz，2H)，2.22(s，3H).
h.3-(2-苯乙氨基)-6-甲基-1-羧甲基吡嗪酮和3-(2-苯乙氨基)-5-氯-6-甲基-1-羧甲基吡嗪酮的混合物
將前一步中制備的3-(2-苯乙氨基)-5-氯-6-甲基-1-(芐氧基羰基甲基)-吡嗪酮(412mg，1.0mmol)與碳上的鈀(10％，100mg)在四氫呋喃(10ml)與乙醇(40ml)中的混合物在氫(氣囊)下攪拌兩天。反應(yīng)物通過硅藻土過濾，玻璃原料用乙醇洗滌，濾液在真空中蒸發(fā)，得到3-(2-苯乙氨基)-6-甲基-1-羧甲基吡嗪酮和3-(2-苯乙氨基)-5-氯-6-甲基-1-羧甲基吡嗪酮的混合物，為淺紅色固體(210mg)，直接用在下面的步驟中，無需進(jìn)一步純化。
i.1-{N-[2-(N’，N”-雙(叔丁氧基羰基)脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮和1-{N-[2-(N’，N”-雙(叔丁氧基羰基)脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮
向前一步中制備的3-(2-苯乙氨基)-6-甲基-1-羧甲基吡嗪酮和3-(2-苯乙氨基)-5-氯-6-甲基-1-羧甲基吡嗪酮的混合物(200mg)、實(shí)施例1步驟d中制備的[N，N’-二(叔丁氧基羰基)]2-氨基乙氧基胍(225mg，0.7mmol)與二異丙基乙胺(180μl，1.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中加入Casto試劑(BOP)(442mg，1.0mmol)。混合物在室溫下攪拌過夜，在高真空下除去溶劑，將殘余物溶于二氯甲烷(100ml)，用10％檸檬酸(2×50ml)和鹽水(50ml)洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥。在真空中蒸發(fā)溶劑后，殘余物用柱色譜法純化(2∶1至3∶1乙酸乙酯∶己烷)，得到1-{N-[2-(N’，N”-雙(叔丁氧基羰基)脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮，為無色泡沫(100mg，23％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ8.42(t，J＝4.8Hz，1H)，7.26(m，5H)，6.68(s，1H)，4.75(s，2H)，4.11(t，J＝4.6Hz，2H)，3.60(m，4H)，2.91(m，2H)，2.15(s，3H)，1.52(s，9H)，1.49(s，9H).
也分離到1-{N-[2-(N’，N”-雙(叔丁氧基羰基)脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮，為無色泡沫(130mg，32％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ8.47(t，J＝4.9Hz，1H)，7.44-7.87(m，3H)，7.25(m，5H)，4.80(s，2H)，4.11(m，2H)，3.65(t，J＝7.0Hz，2H)，3.59(m，2H)，2.93(t，J＝7.1Hz，2H)，2.28(s，3H)，1.52(s，9H)，1.48(s，9H).
j.1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
將前一步中制備的1-{N-[2-(N’，N”-雙(叔丁氧基羰基)脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮(120mg，0.2mmol)與三氟乙酸(2ml)在二氯甲烷(4ml)中的混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。在真空中蒸發(fā)溶劑后，殘余物在WatersSep-Pak上純化(5g，10％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(90mg，89％)。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.95(s，1H)，8.44(t，J＝5.6Hz，1H)，7.73(br s，4H)，7.20-7.30(m，6H)，6.67(s，1H)，4.61(s，2H)，3.81(t，J＝5.4Hz，2H)，3.50(q，J＝6.7Hz，2H)，3.39(q，J＝5.4Hz，2H)，2.86(t，J＝6.9Hz，2H)，2.07(s，3H).Mass spectrum(MALDI-TOF，α-cyano-4-hydroxycinnamicacid matrix)Calcd.for C18H25N7O3388.2(M+H)，410.2(M+Na)；Found388.3，410.4.
實(shí)施例2
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
利用實(shí)施例1步驟j操作，從實(shí)施例1步驟i中制備的1-{N-[2-(N’，N”-雙(叔丁氧基羰基)脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.96(s，1H)，8.46(br s，1H)，7.73(br s，4H)，7.42(t，J＝5.3Hz，1H)，7.18-7.33(m，5H)，4.66(s，2H)，3.81(br s，2H)，3.49(m，2H)，3.36(m，2H)，2.86(t，J＝7.2Hz，2H)，2.18(s，3H).Mass spectrum(MALDI-TOF，α-cyano-4-hydroxycinnamic acidmatrix)Calcd.for C18H24.ClN7O3422.2(M+H)，444.2(M+Na)；Found422.1，444.0.
實(shí)施例3
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2，2-二苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
利用實(shí)施例1步驟g-j操作，從實(shí)施例1步驟f中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮和2，2-二苯基乙胺制備標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.89(br s，1H)，8.42(t，J＝5.5Hz，1H)，7.70(br s，4H)，7.17-7.31(m，10H)，6.74(br s，1H)，6.69(s，1H)，4.57(s，2H)，4.48(t，J＝7.8Hz，2H)，3.91(t，J＝6.6Hz，2H)，3.79(t，J＝5.4Hz，2H)，3.36(t，J＝5.4Hz，2H)，2.06(s，3H).Mass spectrum(MALDI-TOF，α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C24H29N7O3464.3(M+H)，486.2(M+Na)；Found464.3，486.3.
實(shí)施例4
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(2，2-二苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
利用實(shí)施例1步驟g-j操作，從實(shí)施例1步驟f中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮和2，2-二苯基乙胺制備標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.90(br s，1H)，8.41(br s，1H)，7.71(br s，4H)，7.18-7.32(m，10H)，4.63(s，2H)，4.52(t，J＝7.7Hz，2H)，3.89(t，J＝6.3Hz，2H)，3.79(t，J＝5.3Hz，2H)，3.37(t，J＝5.3Hz，2H)，2.17(s，3H).Mass spectrum(MALDI-TOF，α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C24H28ClN7O3498.2(M+H)，520.2(M+Na)；Found498.2，520.2.
實(shí)施例5
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲基苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
利用實(shí)施例1步驟g-j操作，從實(shí)施例1步驟f中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮和4-甲基苯乙胺制備標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.92(s，1H)，8.44(t，J＝5.6Hz，1H)，7.71(brs，4H)，7.11(s，4H)，6.67(s，1H)，4.61(s，2H)，3.81(t，J＝5.4Hz，2H)，3.50(m，2H)，3.38(m，2H)，2.81(t，J＝6.9Hz，2H)，2.27(s，3H)，2.07(s，3H).Mass spectrum(MALDI-TOF，α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C19H27N7O3402.2(M+H)，424.2(M+Na)；Found402.1，424.2.
實(shí)施例6
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲氧基苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
利用實(shí)施例1步驟g-j操作，從實(shí)施例1步驟f中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮和4-甲氧基苯乙胺制備標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.88(s，1H)，8.42(t，J＝5.5Hz，1H)，7.68(br s，4H)，7.15(d，J＝8.6Hz，2H)，6.85(d，J＝8.7Hz，2H)，6.67(s，1H)，4.61(s，2H)，3.81(t，J＝5.3Hz，2H)，3.72(s，3H)，3.50(m，2H)，3.38(m，2H)，2.79(t，J＝6.9Hz，2H)，2.07(s，3H).Mass spectrum(MALDI-TOF，α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C19H27N7O4418.2(M+H)，440.2(M+Na)；Found418.3，440.4.
實(shí)施例7
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-苯基環(huán)丁基)甲氨基-吡嗪酮三氟乙酸酯
a.(1-苯基環(huán)丁基)甲胺
向1-苯基環(huán)丁烷甲腈(0.96g，6.09mmol)的無水四氫呋喃(40ml)溶液中加入1N氫化鋰鋁(LAH)的四氫呋喃溶液(12ml，12mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌2小時(shí)后，用水(10ml)緩慢抵消掉過量的LAH，另用四氫呋喃(20ml)稀釋。然后使其與0.25N含水NaOH(5ml)在環(huán)境溫度下反應(yīng)20小時(shí)，過濾，濾液在真空中濃縮，殘余物用快速柱色譜法純化(10％甲醇的二氯甲烷溶液，用氨氣飽和)，得到標(biāo)題化合物，為黃色的油(0.52g，53％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.32(m，2H)，7.19(m，1H)，7.10(m，2H)，2.93(s，2H)，2.38-2.26(m，2H)，2.18-2.01(m，3H)，1.92-1.82(m，1H)，1.14(bs，2H).
b.3-(1-苯基環(huán)丁基)甲氨基-5-氯-6-甲基-1-(芐氧基羰基甲基)吡嗪酮
將前一步驟產(chǎn)物(0.52g，3.21mmol)與實(shí)施例1步驟f中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮(0.36g，1.08mmol)的乙酸乙酯(15ml)溶液回流3小時(shí)，在真空中除去溶劑。將殘余物溶于二氯甲烷，用10％含水檸檬酸和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾。蒸發(fā)后的濾液用快速柱色譜法純化(20％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到標(biāo)題化合物，為黃色的油(0.35g，71％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.32(m，7H)，7.17(m，3H)，5.86(t，1H，J＝5.5Hz)，5.17(s，2H)，4.73(s，2H)，3.72(d，2H，J＝5.7Hz)，2.35(m，2H)，2.22(m，2H)，2.17(s，3H)，1.89(m，1H).
c.3-(1-苯基環(huán)丁基)甲氨基-6-甲基-1-羧甲基-吡嗪酮
將前一步驟產(chǎn)物(0.33g，0.74mmol)、10％碳上的鈀(O)(0.13g)和固體氫氧化鉀(0.2g，3.6mmol)溶于甲醇、水與四氫呋喃的1∶1∶1混合物(60ml)，通入氮并放置在吸氣器壓力下進(jìn)行脫氣，然后在環(huán)境溫度和氫氣囊下攪拌。24小時(shí)后，反應(yīng)物通過硅藻土過濾，蒸發(fā)濾液，殘余物用快速柱色譜法部分純化(20％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到標(biāo)題化合物(0.16g，65％)，為固體，使用時(shí)無需進(jìn)一步純化。
d.1-{N-[2-(N’，N”-雙{叔丁氧基羰基}脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-苯基環(huán)丁基)甲氨基-吡嗪酮
將前一步驟產(chǎn)物(0.16g，0.48mmol)、Casto試劑(0.24g，0.54mmol)和實(shí)施例1步驟d中制備的[N，N’-二(叔丁氧基羰基)]-2-氨基乙氧基胍(0.16g，0.52mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(10ml)，與三乙胺(0.25ml，1.80mmol)在環(huán)境溫度下反應(yīng)。24小時(shí)后，在真空中除去溶劑，將殘余物溶于二氯甲烷，溶液用10％含水檸檬酸、飽和NaHCO3和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾。蒸發(fā)后的濾液用快速柱色譜法純化(33％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液)，得到標(biāo)題化合物，為澄清的固體(0.11g，37％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ9.15(s，1H)，8.36(t，1H，J＝5Hz)，7.57(s，1H)，7.32(m，2H)，7.18(m，3H)，6.66(s，1H)，5.77(m，1H)，4.72(s，2H)，4.11(m，2H)，3.71(d，2H，J＝5.7Hz)，3.60(dd，2H，J＝8.8Hz，5.0Hz)，2.36(m，2H)，2.26(m，3H)，2.12(s，3H)，1.90(m，1H)，1.51(s，9H)，1.46(s，9H).Mass spectrum(MALDI-TOF，α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)calcd.for C31H45N7O7428.2(M-2Boc+H).Found428.9.
e.1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-苯基環(huán)丁基)甲氨基-吡嗪酮三氟乙酸酯
將前一步驟產(chǎn)物(0.10g，0.17mmol)溶于二氯甲烷(5ml)，與三氟乙酸(2ml)在環(huán)境溫度下反應(yīng)。6小時(shí)后，在真空中除去揮發(fā)性組分，殘余物在Waters Sep-Pak上純化(梯度洗脫10-20％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到標(biāo)題化合物，為吸濕性淺黃色固體(0.10g，100％)。1HNMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ7.33(m，2H)，7.19(m，3H)，6.56(d，1H，J＝1.0Hz)，4.65(s，2H)，3.94(t，2H，J＝5Hz)，3.75(s，2H)，3.48(t，2H，J＝5Hz)，2.43(m，2H)，2.25(m，3H)，2.12(s，3H)，1.93(m，1H).Mass spectrum(MALDI-TOF，gentisic acid matrix)calcd.for C21H29N7O3428.2(M+H)，450.2(M+Na).Found428.8，450.7.
實(shí)施例8
鹽酸1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-[2-(1-萘)乙基]氨基-吡嗪酮
a.2-(1-萘乙基)鄰苯二甲酰亞胺
將1-萘乙醇(2.51g，14.6mmol)、三苯膦(4.57g，17.4mmol)與鄰苯二甲酰亞胺(2.37g，16.1mmol)的四氫呋喃(120ml)溶液與偶氮二甲酸二乙酯(2.80ml，17.8mmol)在環(huán)境溫度下反應(yīng)2小時(shí)。蒸發(fā)后的產(chǎn)物用二乙醚洗滌，在真空干燥器中干燥過夜，得到標(biāo)題化合物(4.34g，99％)，為乳白色固體。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.31(d，1H，J＝8.5Hz)，7.86(m，3H)，7.74(m，3H)，7.60(ddd，1H，J＝8.4Hz，6.9Hz，1.5Hz)，7.50(ddd，1H，J＝8.0Hz，6.9Hz，1.2Hz)，7.41(m，2H)，4.04(m，2H)，3.44(m，2H).
b.2-(1-萘)乙胺
將前一步驟產(chǎn)物(4.30g，14.3mmol)溶于甲醇(30ml)，與40％含水甲胺(20ml)在70℃下反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)物在真空中濃縮，將殘余物溶于二氯甲烷，所得溶液用10％含水HCl和水萃取。含水層用固體KOH堿化，所得溶液用二氯甲烷萃取。后者有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，濾液蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物，為棕色的油(0.83g，34％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.06(m，1H)，7.87(m，1H)，7.74(d，1H，J＝8.0Hz)，7.50(m，2H)，7.37(m，2H)，3.23(t，2H，J＝6.6Hz)，3.11(t，2H，J＝6.6Hz).
c.3-[2-(1-萘)乙基]氨基-5-氯-6-甲基-1-(芐氧基羰基甲基)吡嗪酮
將前一步驟產(chǎn)物(0.82g，4.76mmol)、三乙胺(2.0ml，14mmol)與實(shí)施例1步驟f中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮(1.05g，3.21mmol)的乙酸乙酯(80ml)溶液回流20小時(shí)。蒸發(fā)后，將殘余物溶于二氯甲烷，用10％含水檸檬酸、飽和NaHCO3和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾。濾液然后在真空中蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物，為黃褐色固體(1.49g，68％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.33(d，1H，J＝8.6Hz)，7.86(dd，1H，J＝8Hz，1Hz)，7.75(d，1H，J＝7.8Hz)，7.58(ddd，1H，J＝8.4Hz，6.9Hz，1.5Hz)，7.50(ddd，1H，J＝8.0Hz，6.9Hz，1.2Hz)，7.37(m，7H)，6.26(t，1H，J＝5.9Hz)，5.22(s，2H)，4.80(s，2H)，3.78(m，2H)，3.40(m，2H)，2.24(s，3H).
d.3-[2-(1-萘)乙基]氨基-6-甲基-1-羧甲基-吡嗪酮
向前一步驟產(chǎn)物(1.48g，3.20mmol)、10％碳上的鈀(0)(500mg)與固體KOH(2.05g，36.5mmol)在2∶1∶1四氫呋喃/甲醇/水中的混合物中通入氮?dú)?，抽吸，在環(huán)境溫度和氫(氣囊)下劇烈攪拌。16小時(shí)后，反應(yīng)物通過硅藻土過濾，玻璃原料用甲醇/水洗滌，蒸發(fā)濾液。殘余物用10％含水HCl處理，冷卻，過濾，沉淀用水和乙醚洗滌，在真空中干燥過夜，得到標(biāo)題化合物(0.84g，78％)，為金黃色固體，經(jīng)過NMR分析，它是5-氯與5-氫產(chǎn)物的混合物，用TLC不能分離。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.54(d，0.5H，J＝8.3Hz)，8.25(d，1H，J＝8.2Hz)，7.93(t，2H，J＝7.1Hz)，7.82(t，2H，J＝8.6Hz)，7.51(m，7H)，6.75(s，1H)，4.77(s，1H)，4.74(s，2H)，3.79(m，2H)，3.56(m，1H)，3.40(m，2H)，3.31(m，1H)，2.25(s，1.5H)，2.17(s，3H).
e.1-{N-[2-(N’，N”-雙{叔丁氧基羰基}脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-[2-(1-萘)乙基]氨基-吡嗪酮
將前一步驟產(chǎn)物(0.84g，2.49mmol)、Casto試劑(1.15g，2.60mmol)和實(shí)施例1步驟d中制備的[N，N’-二(叔丁氧基羰基)]-2-氨基乙氧基胍(0.91g，2.55mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(50ml)，在環(huán)境溫度下用三乙胺(1.0ml，7.2mmol)處理。攪拌過夜后，反應(yīng)物在真空中蒸發(fā)，殘余物用快速柱色譜法純化(乙酸乙酯)，得到標(biāo)題化合物(0.79g，50％)，為淺橙色固體。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.17(s，1H)，8.41(m，1H)，8.13(d，1H，J＝8.4Hz)，7.84(m，1H)，7.73(dd，1H，J＝7.5Hz，1.6Hz)，7.58(m，1H)，7.50(m，2H)，7.37(m，3H)，6.72(d，1H，J＝0.9Hz)，6.15(m，1H)，4.77(s，2H)，4.12(m，2H)，3.76(m，2H)，3.61(dd，2H，J＝8.7Hz，5.1Hz)，3.39(t，2H，J＝7.3Hz)，2.14(d，3H，J＝0.7Hz)，1.51(s，9H)，1.47(s，9H).
f.鹽酸1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-[2-(1-萘)乙基]氨基-吡嗪酮
將前一步驟產(chǎn)物(0.79g，1.25mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，與三氟乙酸(5ml)在環(huán)境溫度下反應(yīng)過夜。反應(yīng)物在真空中濃縮，殘余物用快速柱色譜法純化(15％甲醇的二氯甲烷溶液，用氨氣飽和)，蒸發(fā)后的柱部分用4N HCl的甲醇溶液處理，在高真空下濃縮，得到標(biāo)題化合物(0.43g，73％)，為淡黃色固體。
1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.1(s，1H)，8.71(t，1H，J＝5.3Hz)，8.26(d，1H，J＝8.2Hz)，7.94(d，1H，J＝8.1Hz)，7.83(d，1H，J＝8.2Hz)，7.78(bs，4H)，7.56(m，3H)，7.46(t，1H，J＝7.5Hz)，6.73(s，1H)，4.69(s，2H)，3.80(m，4H)，3.42(m，4H)，2.14(s，3H).Mass spectrum(LCMS，ESI pos.)calcd.forC22H27N7O3438.2(M+H).Found438.2.
實(shí)施例9
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基-1-丁氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
以類似于實(shí)施例7的方式，從1-苯基-環(huán)丙烷甲腈制備標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，但是環(huán)丙烷環(huán)在催化氫化過程中被打開。
1HNMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ7.24-7.07(m，5H)，6.47(s，1H)，3.81(t，2H，J＝4.7Hz)，3.62(dd，1H，J＝13.5Hz，6.3Hz)，3.42(dd，1H，J＝13.6Hz，9.0Hz)，3.35(t，2H，J＝4.6Hz)，2.73(m，1H)，2.02(s，3H)，1.72-1.44(m，2H)，0.69(t，3H，J＝7.3Hz).Mass spectrum(MALDI-TOF，gentisic acid matrix)calcd.for C20H29N7O3416.2(M+H)，438.2(M+Na).Found416.4，438.4.
實(shí)施例10
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3，4-亞甲二氧基苯基]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
以類似于實(shí)施例1的方式，從鹽酸3，4-亞甲二氧基苯乙胺制備標(biāo)題化合物，為淡黃色油。
1HNMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ6.70(m，3H)，6.63(s，1H)，5.91(s，2H)，4.67(s，2H)，3.95(t，2H，J＝4.8Hz)，3.61(t，2H，J＝7.3Hz)，3.49(t，2H，J＝4.7Hz)，2.86(t，2H，J＝7.3Hz)，2.17(s，3H).Mass spectrum(MALDI-TOF，α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)calcd.for C19H25N7O5432.2(M+H)，454.2(M+Na).Found432.6，454.8.
實(shí)施例11
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-吡啶基]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
以類似于實(shí)施例1的方式，從2-(2-氨基乙基)吡啶制備標(biāo)題化合物，為橙色的油。1H NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ8.46(d，1H，J＝4.2Hz)，7.74(t，1H，J＝7Hz)，7.34(d，1H，J＝7.7Hz)，7.25(dd，1H，J＝7.1Hz，4.9Hz)，6.71(s，1H)，3.99(t，2H，J＝4.5Hz)，3.72(t，2H，J＝6.7Hz)，3.54(m，2H)，3.11(t，2H，J＝6.7Hz)，2.18(s，3H).Massspectrum(MALDI-TOF，gentisic acid matrix)calcd.for C17H24N8O3389.2(M+H)，411.2(M+Na).Found389.8，411.6.
實(shí)施例12
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
以類似于實(shí)施例7的方式，從2-甲基苯乙腈制備標(biāo)題化合物，為淡橙色油。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.13(s，1H)，8.48(t，1H，J＝5.5Hz)，7.83(bs，4H)，7.12(m，4H)，6.68(d，1H，J＝1.0Hz)，4.63(s，2H)，3.82(t，2H，J＝5.4Hz)，3.47(m，2H)，3.39(q，2H，J＝5Hz)，2.85(m，2H)，2.31(s，3H)，2.08(s，3H).Mass spectrum(LCMS，ESI pos.)calcd.for C19H27N7O3402.2(M+H).Found402.2.
實(shí)施例13
鹽酸1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮
以類似于實(shí)施例7的方式，從3-甲基苯乙腈制備標(biāo)題化合物，為淡黃色油。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.16(s，1H)，8.74(t，1H，J＝5.5Hz)，7.80(bs，4H)，7.19(t，1H，J＝7.5Hz)，7.16(s，1H)，7.12(d，1H，J＝7.5Hz)，7.03(d，1H，J＝7.4Hz)，6.70(s，1H)，4.67(s，2H)，3.82(t，2H，J＝5.2Hz)，3.69(m，2H)，3.39(q，2H，J＝5.3Hz)，2.89(t，2H，J＝7.6Hz)，2.28(s，3H)，2.14(s，3H).Mass spectrum(LCMS，ESI pos.)calcd.forC19H27N7O3402.2(M+H).Found402.2.
實(shí)施例14
鹽酸1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮
以類似于實(shí)施例8的方式，從2-(三氟甲基)苯乙醇制備標(biāo)題化合物，為淡黃色固體。1HNMR
(400MHz，DMSO-d6)δ11.09(s，1H)，8.66(t，1H，J＝5.5Hz)，7.76(bs，4H)，7.70(m，2H)，7.64(t，1H，J＝7.5Hz)，7.46(t，1H，J＝7.6Hz)，6.72(s，1H)，4.67(s，2H)，3.82(t，2H，J＝5.3Hz)，3.71(m，2H)，3.39(q，2H，J＝5.5Hz)，3.11(t，2H，J＝7.3Hz)，2.13(s，3H).Mass spectrum(LCMS，ESI pos.)calcd.for C19H24N7O3F3456.2(M+H).Found456.1.
實(shí)施例15
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
以類似于實(shí)施例8的方式，從3-(三氟甲基)苯乙醇制備標(biāo)題化合物，為白色固體。1HNMR
(400MHz，DMSO-d6)δ11.01(s，1H)，8.47(t，1H，J＝5.6Hz)，7.75(bs，4H)，7.57(m，4H)，6.68(s，1H).4.62(s，2H)，3.81(t，2H，J＝5.4Hz)，3.57(q，2H，J＝6.6Hz)，3.37(m，2H)，2.98(t，2H，J＝7.3Hz)，2.10(s，3H).Mass spectrum(LCMS，ESIpos.)calcd.for C19H24N7O3F3456.2(M+H).Found456.2.
實(shí)施例16
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[4-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
以類似于實(shí)施例7的方式，從4-(三氟甲基)苯基乙腈制備標(biāo)題化合物，為黃褐色固體。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.98(s，1H)，8.45(t，1H，J＝5.5Hz)，7.74(bs，4H)，7.66(d，2H，J＝8.1Hz)，7.47(d，2H，J＝8.0Hz)，6.68(s，1H)，4.62(s，2H)，3.81(t，2H，J＝5.4Hz)，3.38(q，2H，J＝5.4Hz)，2.97(t，2H，J＝7Hz)，2.08(s，3H).Massspectrum(LCMS，ESI pos.)calcd.for C19H24N7O3F3456.2(M+H).Found456.2.
實(shí)施例17
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3，5-二甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
以類似于實(shí)施例7的方式，從3，5-二甲基苯基乙腈制備標(biāo)題化合物，為淡黃色固體。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.88(s，1H)，8.44(t，H，J＝5.7Hz)，7.68(bs，4H)，6.84(s，3H)，6.68(s，1H)，4.61(s，2H)，3.81(t，2H，J＝5.4Hz)，2.77(t，2H，J＝7.6Hz)，2.24(s，6H)，2.08(s，3H).Mass spectrum(LCMS，ESI pos.)calcd.for C20H29N7O3416.2(M+H).Found416.2.
實(shí)施例18
鹽酸1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2，3-二氫化茚基]氨基)-吡嗪酮
以類似于實(shí)施例1的方式，從鹽酸2-氨基-(1，2-二氫化茚)制備標(biāo)題化合物，為白色固體。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.95(s，1H)，8.54(m，1H)，7.69(bs，4H)，7.17(m，4H)，6.71(s，1H)，4.64(s，2H)，3.81(t，2H，J＝5.3Hz)，3.27(dd，2H，J＝16Hz，7.6Hz)，3.05(dd，2H，J＝16Hz，6.7Hz)，2.11(s，3H).Mass spectrum(LCMS，ESI pos.)calcd.forC19H25N7O3400.2(M+H).Found400.3.
實(shí)施例19
鹽酸1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3，4-二氟苯基]乙氨基)-吡嗪酮
以類似于實(shí)施例7的方式，從3，4-二氟苯基乙腈制備標(biāo)題化合物，為白色固體。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.05(s，1H)，8.63(t，1H，J＝5.5Hz)，7.74(bs，4H)，7.46(t，1H，J＝10Hz)，7.36(dt，1H，J＝10.9Hz，8.5Hz)，7.15(m，1H)，6.70(s，1H)，4.66(s，2H)，3.82(t，2H，J＝5.4Hz)，3.66(m，2H)，3.38(m，2H)，2.91(t，2H，J＝7.4Hz)，2.13(s，3H).Mass spectrum(LCMS，ESI pos.)calcd.for C18H23N7O3F2424.2(M+H).Found424.2.
實(shí)施例20
鹽酸1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[5-(2，3-二氫化茚基)]乙氨基)-吡嗪酮
以類似于實(shí)施例7的方式，從5-(2，3-二氫化茚基)-乙腈(F.Lauria和W.Logemann，美國(guó)專利3452085)制備標(biāo)題化合物，為淡黃色固體。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.13(s，1H)， 8.71(t，1H，J＝5.5Hz)，7.78(bs，4H)，7.19(s，1H)，7.14(d，1H，J＝7.7Hz)，7.07(m，1H)，6.70(s，1H)，4.67(s，2H)，3.82(t，2H，J＝5.3Hz)，3.65(m，2H)，2.84(m，6H)，2.13(s，3H)，1.99(pentet，2H，J＝7.4Hz).Mass spectrum(LCMS，ESI pos.)calcd.for C21H29N7O3428.2(M+H).Found428.3.
實(shí)施例21
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-氟苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸鹽
利用實(shí)施例1步驟g-j操作，從實(shí)施例1步驟f中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮和2-氟苯乙胺制備標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.91(s，1H)，8.43(t，J＝5.6Hz，1H)，7.70(br s，4H)，7.30(m，2H)，7.15(m，3H)，6.66(s，1H)，4.61(s，2H)，3.81(t，J＝5.4Hz，2H)，3.37(m，4H)，2.90(t，J＝7.2Hz，2H)，2.06(s，3H).Mass spectrum(MALDI-TOF，α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C18H24FN7O3406.2(M+H)，428.2(M+Na)；Found406.3，428.3.
實(shí)施例22
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸鹽
利用實(shí)施例1步驟g-j操作，從實(shí)施例1步驟f中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮和3，4-二甲氧基苯乙胺制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.95(s，1H)，8.44(t，J＝5.6Hz，1H)，7.72(brs，4H)，6.85(t，J＝8.1Hz，2H)，6.73(d，J＝8.1Hz，2H)，6.67(s，1H)，4.61(s，2H)，3.81(t，J＝5.3Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.71(s，3H)，3.39(m，4H)，2.79(t，J＝7.2Hz，2H)，2.07(s，3H).Mass spectrum(MALDI-TOF．α-cyano-4-hydroxycinnamic acidmatrix)Calcd.for C20H29N7O5448.2(M+H)，470.2(M+Na)；Found448.6，470.4.
實(shí)施例23
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-氟苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸鹽
利用實(shí)施例1步驟g-j操作，從實(shí)施例1步驟f中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮和4-氟苯乙胺制備標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.97(s，1H)，8.45(t，J＝5.6Hz，1H)，7.74(br s，4H)，7.26(m，3H)，7.15(t，J＝8.8Hz，2H)，6.68(s，1H)，4.61(s，2H)，3.81(t，J＝5.4Hz，2H)，3.39(m，4H)，2.85(t，J＝7.3Hz，2H)，2.07(s，3H).Mass spectrum(MALDI-TOF，α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C18H24FN7O3406.2(M+H)，428.2(M+Na)；Found406.6，428.5.
實(shí)施例24
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-乙基苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸鹽
利用實(shí)施例7步驟b-e操作，從實(shí)施例1步驟f中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮和4-乙基苯乙胺制備標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.97(s，1H)，8.44(t，J＝5.6Hz，1H)，7.73(br s，4H)，7.18(m，1H)，7.14(s，4H)，6.67(s，1H)，4.61(s，2H)，3.81(t，J＝5.2Hz，2H)，3.39(m，4H)，2.82(t，J＝7.5Hz，2H)，2.56(q，J＝7.6Hz，2H)，2.07(s，3H)，1.16(t，J＝7.5Hz，3H).Mass spectrum(MALDI-TOF，α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C20H29N7O3416.2(M+H)，438.2(M+Na)；Found416.2，438.2.
實(shí)施例25
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基丙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸鹽
利用實(shí)施例7步驟b-e操作，從實(shí)施例1步驟f中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮和1-甲基苯乙胺制備標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.98(s，1H)，8.43(t，J＝5.6Hz，1H)，7.74(br s，4H)，7.28(m，5H)，7.20(m，1H)，6.66(s，1H)，4.59(s，2H)，3.80(t，J＝5.4Hz，2H)，3.44(t，J＝6.5Hz，2H)，3.38(t，J＝5.4Hz，2H)，3.13(q，J＝7.1Hz，2H)，2.06(s，3H)，1.19(d，J＝7.0Hz，3H).Mass spectrum(MALDI-TOF，(-cyano-4-hydroxycinnamic acidmatrix)Calcd.for C19H27N7O3402.2(M+H)，424.2(M+Na)；Found402.4，424.5.
實(shí)施例26
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(3，4-二甲基苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸鹽
利用實(shí)施例7步驟a-e操作，從3，4-二甲基苯乙腈制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.10(s，1H)，8.47(t，J＝5.5Hz，1H)，7.81(br s，4H)，7.55(m，1H)，7.03(t，J＝7.9Hz，2H)，6.94(d，J＝7.8Hz，1H)，6.68(s，1H)，4.62(s，2H)，3.82(t，J＝5.3Hz，2H)，3.48(m，2H)，3.38(m，2H)，2.78(t，J＝7.5Hz，2H)，2.19(s，3H)，2.17(s，3H)，2.08(s，3H).Massspectrum(MALDI-TOF，α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.forC20H29N7O3416.2(M+H)，438.2(M+Na)；Found416.0，437.9.
實(shí)施例27
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-萘乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸鹽
利用實(shí)施例8步驟a-f操作，從2-萘乙醇制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.90(s，1H)，8.43(t，J＝5.5Hz，1H)，7.87(m，3H)，7.85(s，1H)，7.69(br s，4H)，7.47(m，3H)，6.69(s，1H)，4.61(s，2H)，3.80(t，j＝5.4Hz，2H)，3.61(m，4H)，3.04(t，J＝7.2Hz，2H)，2.07(s，3H).Mass spectrum(LCMS，ESI)Calcd.for C22H27N7O3438.2(M+H)；Found438.2.
實(shí)施例28
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2，2-二苯基丙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸鹽
利用實(shí)施例1步驟g-j操作，從實(shí)施例1步驟f中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮和鹽酸2，2-二苯基丙胺制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.89(s，1H)，8.41(t，J＝5.4Hz，1H)，7.70(br s，4H)，7.32(m，4H)，7.26(m，6H)，6.68(s，1H)，5.75(m，1H)，4.56(s，2H)，4.00(d，J＝5.0Hz，2H)，3.79(t，J＝5.4Hz，2H)，3.36(m，2H)，2.05(s，3H)，1.67(s，3H).Mass spectrum(LCMS，ESI)Calcd.for C25H31N7O3478.2(M+H)；Found478.2.
實(shí)施例29
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-(3-吲哚基)-乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸鹽
利用實(shí)施例1步驟g-j操作，從實(shí)施例1步驟f中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮和色胺制備標(biāo)題化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.98(s，1H)，8.44(t，J＝5.6Hz，1H)，7.74(br s，4H)，7.00-7.60(m，6H)，6.69(s，1H)，4.62(s，2H)，3.81(t，J＝5.3Hz，2H)，3.39(m，4H)，2.97(t，J＝7.4Hz，2H)，2.08(s，3H).Mass spectrum(LCMS，ESI)Calcd.for C24H26N8O3427.2(M+H)；Found429.3.
實(shí)施例30
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[1-(4-甲基萘)]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
以類似于實(shí)施例7的方式，從1-(4-甲基萘)乙腈制備標(biāo)題化合物，為白色固體。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.94(s，1H)，8.45(t，J＝5.6Hz，1H)，8.33(d，J＝7.2Hz，1H)，8.04(d，J＝7.1Hz，1H)，7.72(br s，4H)，7.58(m，2H)，7.28(s，2H)，6.73(s，1H)，4.63(s，2H)，3.82(t，J＝5.4Hz，2H)，3.57(m，2H)，3.40(t，J＝6.4Hz，2H)，3.29(t，J＝7.3Hz，2H)，2.62(s，3H)，2.09(s，3H).Mass spectrum(MALDI-TOF，α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C23H29N7O3452.2(M+H)，474.2(M+Na)；Found452.2，474.3.
實(shí)施例31
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2，4-二氟苯基]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
以類似于實(shí)施例8的方式，從2，4-二氟苯基乙醇制備標(biāo)題化合物，為白色固體。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.03(s，1H)，8.46(t，J＝5.6Hz，1H)，7.77(br s，4H)，7.34(q，J＝7.8Hz，1H)，7.18(t，J＝9.5Hz，1H)，7.03(t，J＝8.0Hz，1H)，6.67(s，1H)，4.62(s，2H)，3.81(t，J＝5.4Hz，2H)，3.51(m，2H)，3.39(t，J＝5.5Hz，2H)，2.89(t，J＝7.1Hz，2H)，2.08(s，3H).Mass spectrum(MALDI-TOF，α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C19H23F2N7O3424.2(M+H)，446.2(M+Na)；Found424.3，446.5.
實(shí)施例32
鹽酸1-{N-[2-(脒基-N’-甲基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[4-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮
向?qū)嵤├?產(chǎn)物(0.09g，0.19mmol)與碳酸氫鈉(0.53g，6.30mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(10ml)中的混合物中加入2ml 4NHCl的乙醇溶液，溶于甲醇/二氯甲烷，再次過濾。濾液然后在真空中濃縮，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體(0.08g，86％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.62(t，1H，J＝5.3Hz)，7.90(bs，3H)，7.18(d，2H，J＝7.9Hz)，7.11(d，2H，J＝7.9Hz)，6.70(s，1H)，4.64(s，2H)，3.91(t，2H，J＝5.2Hz)，3.39(q，2H，J＝5.2Hz)，3.25(s，3H)，2.86(t，2H，J＝7.5Hz)，2.27(s，3H)，2.12(s，3H).Mass spectrum(LCMS.ESIpos.)calcd.for C20H29N7O3416.2(M+H).Found416.7；MS/MS found 374.1(M-C(＝NH)NH2).
實(shí)施例33
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基)羰基甲基-6-甲基-3-(2，2-二氟-2-苯基乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸鹽
利用實(shí)施例1步驟g-j操作，從實(shí)施例1步驟f中制備的1-芐氧基羰基甲基-3，5-二氯-6-甲基吡嗪酮和2，2-二氟-2-苯基乙胺制備標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.89(s.1H)，8.46(t，J＝5.5Hz.1H)，7.69(br s，4H)，7.53(m，2H)，7.50(m，3H)，6.84(t，J＝6.5Hz，1H)，6.64(s，1H).4.62(s，2H)，4.06(dt，J＝6.5，14.4Hz，2H)，3.81(t，J＝5.4Hz，2H)，3.38(m，2H)，2.06(s，3H).Mass spectrum(LCMS，ESI)Calcd.for C18H23F2N7O3424.3(M+H)；Found 424.4.
實(shí)施例34
片劑的制備
如下所述制備分別含有25.0、50.0和100.0mg下列活性化合物的片劑
a.1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基)羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲氧基苯乙氨基)一吡嗪酮；和
b.1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基)羰基甲基-6-甲基-3-(2，2-二苯基乙氨基)-吡嗪酮。
含有25-100mg活性化合物的片劑
將全部活性化合物、纖維素和一部分玉米淀粉混合，造粒得到10％玉米淀粉糊。所得顆粒過篩，干燥，與其余玉米淀粉和硬脂酸鎂混合。然后將所得顆粒壓制成片，每片分別含有25.0、50.0和100.0mg活性成分。
實(shí)施例35
靜脈內(nèi)溶液制劑
如下制備上述活性化合物的靜脈內(nèi)劑型
活性化合物0.5-10.0mg
檸檬酸鈉 5-50mg
檸檬酸1-15mg
氯化鈉1-8mg
注射用水(USP) 適量，至1ml
按照上述用量，在室溫下將活性化合物溶于預(yù)先制備的溶液，該溶液是氯化鈉、檸檬酸與檸檬酸鈉的注射用水溶液(美國(guó)藥典/處方集1995(USP)第1636頁，美國(guó)藥典委員會(huì)Inc.出版，Maryland(1994))。
實(shí)施例36
純化酶的體外抑制作用
試劑所有緩沖鹽從Sigma Chemical Company(St.Louis，MO)獲得，并且是最高純度。酶解物是N-苯甲酰-Phe-Val-Arg-對(duì)硝基N-酰苯胺(Sigma B7632)、鹽酸N-苯甲酰-Ile-Glu-Gly-Arg-對(duì)硝基N-酰苯胺(Sigma B2291)、N-對(duì)甲苯磺酰-Gly-Pro-Lys-對(duì)硝基N-酰苯胺(Sigma T6140)、N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-對(duì)硝基N-酰苯胺(Sigma S7388)和N-CBZ-Val-Gly-Arg-對(duì)硝基N-酰苯胺(Sigma C7271)，從Sigma獲得。N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Arg-對(duì)硝基N-酰苯胺(BACHEM L-1720)和N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Val-對(duì)硝基N-酰苯胺(BACHEM L-1770)從BACHEM(King of Prussia，PA)獲得。
人α-凝血酶、人Xa因子和人纖溶酶從Enzyme ResearchLaboratories(South Bend，Indiana)獲得。牛α-胰凝乳蛋白酶(Sigma C4129)、牛胰蛋白酶(Sigma T8642)和人腎細(xì)胞尿激酶(Sigma U5004)從Sigma獲得。人白細(xì)胞彈性蛋白酶從ElastinProducts(Pacific，MO)獲得。
Ki測(cè)定全部測(cè)定都是以供試化合物抑制酶催化的肽對(duì)硝基N-酰苯胺酶解物的水解作用的能力為基礎(chǔ)的。在典型的Ki測(cè)定中，酶解物是在DMSO中制備的，并稀釋在測(cè)定緩沖液中，后者由50mMHEPES、200mM NaCl組成，pH 7.5。每種酶解物的最終濃度列在下面。一般來說，酶解物的濃度低于用實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定的Km值。將供試化合物制成1.0mg/ml的DMSO溶液。制備8種最終濃度的DMSO稀釋液，濃度跨度達(dá)200倍。在測(cè)定緩沖液中制備酶溶液，濃度列在下面。
在典型的Ki測(cè)定中，向96孔板的每孔中吸移280ml酶解物溶液、10ml供試化合物溶液，將板子在37℃分子裝置(MolecularDevices)板讀數(shù)器中熱平衡＞15分鐘。加入10ml等分試樣的酶引發(fā)反應(yīng)，在405nm下記錄15分鐘內(nèi)的吸光度增加值。對(duì)應(yīng)于不到10％總酶解物水解的數(shù)據(jù)用于計(jì)算。不含供試化合物的樣本速度比率(吸光度的變化速率，為時(shí)間的函數(shù))除以含有供試化合物的樣本速度，以供試化合物濃度的函數(shù)作圖。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸處理，計(jì)算直線的斜率值。斜率的倒數(shù)是用實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定的Ki值。
凝血酶評(píng)價(jià)凝血酶活性的標(biāo)準(zhǔn)是水解酶解物N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Arg-對(duì)硝基N-酰苯胺的能力。在測(cè)定緩沖液中制備酶解物溶液，濃度為32mM(32mM＜＜Km＝180mM)。最終的DMSO濃度是4.3％。將純化的人α-凝血酶在測(cè)定緩沖液中稀釋至濃度為15nM。最終的試劑濃度是[凝血酶]＝0.5nM，[酶解物N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Arg-對(duì)硝基N-酰苯胺]＝32mM。
X因子[FXa]評(píng)價(jià)FXa活性的標(biāo)準(zhǔn)是水解酶解物鹽酸N-苯甲酰-Ile-Glu-Gly-Arg-對(duì)硝基N-酰苯胺的能力。在測(cè)定緩沖液中制備酶解物溶液，濃度為51mM(51mM＜＜Km＝1.3mM)。最終的DMSO濃度是4.3％。將純化的活化人X因子在測(cè)定緩沖液中稀釋至濃度為300nM。最終的試劑濃度是[FXa]＝10nM，[鹽酸N-苯甲酰-Ile-Glu-Gly-Arg-對(duì)硝基N-酰苯胺]＝51mM。
纖溶酶評(píng)價(jià)纖溶酶活性的標(biāo)準(zhǔn)是水解N-對(duì)甲苯磺酰-Gly-Pro-Lys-對(duì)硝基N-酰苯胺的能力。在測(cè)定緩沖液中制備酶解物溶液，濃度為37mM(37mM＜＜Km＝243mM)。最終的DMSO濃度是4.3％。將純化的人纖溶酶在測(cè)定緩沖液中稀釋至濃度為240nM。最終的試劑濃度是[纖溶酶]＝8nM，[N-對(duì)甲苯磺酰-Gly-Pro-Lys-對(duì)硝基N-酰苯胺]＝37mM。
胰凝乳蛋白酶評(píng)價(jià)胰凝乳蛋白酶活性的標(biāo)準(zhǔn)是水解N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-對(duì)硝基N-酰苯胺的能力。在測(cè)定緩沖液中制備酶解物溶液，濃度為14mM(14mM＜＜Km＝62mM)。最終的DMSO濃度是4.3％。將純化的牛胰凝乳蛋白酶在測(cè)定緩沖液中稀釋至濃度為81nM。最終的試劑濃度是[胰凝乳蛋白酶]＝2.7nM，[N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-對(duì)硝基N-酰苯胺]＝14mM。
胰蛋白酶評(píng)價(jià)胰蛋白酶活性的標(biāo)準(zhǔn)是水解N-苯甲酰-Phe-Val-Arg-對(duì)硝基N-酰苯胺的能力。在測(cè)定緩沖液中制備酶解物溶液，濃度為13mM(13mM＜＜Km＝291mM)。最終的DMSO濃度是4.3％。將純化的牛胰蛋白酶在測(cè)定緩沖液中稀釋至濃度為120nM。最終的試劑濃度是[胰蛋白酶]＝4nM，[N-苯甲酰-Phe-Val-Arg-對(duì)硝基N-酰苯胺]＝13mM。
彈性蛋白酶評(píng)價(jià)彈性蛋白酶活性的標(biāo)準(zhǔn)是水解N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Val-對(duì)硝基N-酰苯胺的能力。在測(cè)定緩沖液中制備酶解物溶液，濃度為19mM(19mM＜＜Km＝89mM)。最終的DMSO濃度是4.3％。將純化的人白細(xì)胞彈性蛋白酶在測(cè)定緩沖液中稀釋至濃度為750nM。最終的試劑濃度是[彈性蛋白酶]＝25nM，[N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Val-對(duì)硝基N-酰苯胺]＝19mM。
尿激酶評(píng)價(jià)尿激酶活性的標(biāo)準(zhǔn)是水解N-CBZ-Val-Gly-Arg-對(duì)硝基N-酰苯胺的能力。在測(cè)定緩沖液中制備酶解物溶液，濃度為100mM(100mM＜＜Km＝1.2mM)。最終的DMSO濃度是4.3％。將純化的人腎尿激酶在測(cè)定緩沖液中稀釋至濃度為1.2mM。最終的試劑濃度是[尿激酶]＝40nM，[N-CBZ-Val-Gly-Arg-對(duì)硝基N-酰苯胺]＝100mM。
實(shí)施例1至6化合物的結(jié)果顯示在下表中。
表1
結(jié)果表明，本發(fā)明化合物是凝血酶的有效與高度選擇性抑制劑。
通過對(duì)本發(fā)明的完整描述，對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說不言而喻的是，在廣泛與等價(jià)的條件、配方和其他參數(shù)的范圍內(nèi)，在不影響本發(fā)明或其任意實(shí)施方式的前提下，都可以實(shí)施本發(fā)明。本文所引用的全部專利和公開文獻(xiàn)整體內(nèi)容結(jié)合在此作為參考文獻(xiàn)。
權(quán)利要求
1、式I化合物
或其溶劑化物、水合物或藥學(xué)上可接受的鹽；其中
W是氫、R1、R1OCO、R1CO、R1(CH2)sNHCO或(R1)2CH(CH2)sNHCO，其中的s是0-4；
R1是
R2，
R2(CH2)tC(R12)2，其中的t是0-3，每個(gè)R12可以是相同或不同的，
(R2)(OR12)CH(CH2)p，其中的p是1-4，
(R2)2(OR12)C(CH2)p，其中的p是1-4，
R2C(R12)2(CH2)t，其中的t是0-3，每個(gè)R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以與相鄰的C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基代表的環(huán)，
R2CH2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每個(gè)R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以與相鄰的C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基代表的環(huán)，
R2CF2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每個(gè)R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以與相鄰的C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基代表的環(huán)，
(R2)2CH(CH2)r，其中的r是0-4，每個(gè)R2可以是相同或不同的，其中的(R2)2也可以與相鄰的C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基、C7-12二環(huán)烷基、C10-16三環(huán)烷基代表的環(huán)，或者形成一個(gè)5至7元單環(huán)或二環(huán)的雜環(huán)，該雜環(huán)可以是飽和或不飽和的，并含有一至三個(gè)選自N、O和S的雜原子，
R2O(CH2)p，其中的p是2-4，
(R2)2CF(CH2)r，其中的r是0-4，每個(gè)R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以與相鄰的C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基、C7-12二環(huán)烷基、C10-16三環(huán)烷基代表的環(huán)，或者形成一個(gè)5至7元單環(huán)或二環(huán)的雜環(huán)，該雜環(huán)可以是飽和或不飽和的，并含有一至三個(gè)選自N、O和S的雜原子，
其中的s是0或1，或
R2CF2C(R12)2；
R2是
苯基、萘基或聯(lián)苯基，它們每個(gè)是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素、羥基、CF3、OCF3、COOH、CONH2或SO2NH2取代，
一個(gè)5至7元單環(huán)或9至10元二環(huán)的雜環(huán)或非雜環(huán)，該環(huán)可以是飽和或不飽和的，其中的雜環(huán)含有一至四個(gè)選自N、O和S的雜原子，該環(huán)是未取代的或者被鹵素或羥基取代，
C1-7烷基，它是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)羥基、COOH、氨基、芳基、C3-7環(huán)烷基、CF3、N(CH3)2、-C1-3烷基芳基或雜環(huán)取代，
CF3，
C3-7環(huán)烷基，它是未取代的或者被芳基取代，
C7-12二環(huán)烷基，或
C10-16三環(huán)烷基；
R3是
氫、烷基、環(huán)烷基、烯基、炔基、可選被取代的芳基、可選被取代的芳烷基、可選被取代的雜芳基、三氟甲基、鹵素、羥基烷基、氰基、硝基、甲酰氨基、-CO2RX、-CH2ORX或-ORX，
其中的RX在每種情況中獨(dú)立地是氫、烷基或環(huán)烷基之一，其中所述的烷基或環(huán)烷基可以可選地具有一個(gè)或多個(gè)不飽和度；
R4是氫或鹵素；
R12是
氫，
苯基、萘基或聯(lián)苯基，它們每個(gè)是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素、羥基、CF3、OCF3、COOH或CONH2取代，
一個(gè)5至7元單環(huán)或9至10元二環(huán)的雜環(huán)，該雜環(huán)可以是飽和或不飽和的，并含有一至四個(gè)選自N、O和S的雜原子，
C1-4烷基，它是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)羥基、COOH、氨基、芳基或雜環(huán)取代，
CF3，
C3-7環(huán)烷基，
C7-12二環(huán)烷基，或
C10-16三環(huán)烷基；
R5是氫、C1-4烷基或C2-4烯基；
R6是氫、烷基、烯基、芳烷基、芳基、羥基烷基、氨基烷基、單烷基氨基(C2-10)烷基、二烷基氨基(C2-10)烷基或羧基烷基；
R7、R8、R9和R10獨(dú)立地是氫、烷基、芳烷基、芳基、羥基烷基、氨基烷基、單烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基或羧基烷基；
或者R7和R8和相鄰的C一起形成3至8元的環(huán)烷基，而R9和R10是如上所定義的；
或者R9和R10和相鄰的C一起形成3至8元的環(huán)烷基，而R7和R8是如上所定義的；
或者R7和R9和相鄰的C一起形成3至8元的環(huán)烷基，而R8和R10是如上所定義的；
X是氧、NR11或-CH＝N-，
其中的R11是氫、烷基、環(huán)烷基或芳基，其中所述的烷基、環(huán)烷基或芳基可以可選地被氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基、羥基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、芳基、雜芳基、酰氨基、氰基或三氟甲基取代；
Ra、Rb和Rc獨(dú)立地是氫、烷基、羥基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷氧基羰基、氰基或-CO2RW，
其中的RW是烷基、環(huán)烷基、苯基、芐基、
或
其中的Rd和Re獨(dú)立地是氫、C1-6烷基、C2-6烯基或苯基，Rf是氫、C1-6烷基、C2-6烯基或苯基，Rg是氫、C1-6烷基、C2-6烯基或苯基，Rh是芳烷基或C1-6烷基；
n是0至8；
m是0至6。
2、權(quán)利要求1的化合物，其中
R3是氫、C1-4烷基、C3-7環(huán)烷基或CF3；
m是0至4；和
n是0至4。
3、權(quán)利要求2的化合物，其中R3是C1-4烷基。
4、權(quán)利要求2的化合物，其中R4是氫或鹵素。
5、權(quán)利要求4的化合物，其中W是H或R1。
6、權(quán)利要求5的化合物，其中
R1是
R2，
R2(CH2)tC(R12)2，其中的t是0-3，每個(gè)R12可以是相同或不同的，
R2C(R12)2(CH2)t，其中的t是0-3，每個(gè)R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以與相鄰的C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基代表的環(huán)，
R2CH2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每個(gè)R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以與相鄰的C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基代表的環(huán)，
(R2)CH(CH2)r，其中的r是0-4，R2可以是相同或不同的，其中的(R2)2也可以與相鄰的C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基、C7-12二環(huán)烷基、C10-16三環(huán)烷基代表的環(huán)，或者形成一個(gè)5至7元單環(huán)或二環(huán)的雜環(huán)，該雜環(huán)可以是飽和或不飽和的，并含有一至三個(gè)選自N、O和S的雜原子，
R2CF2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每個(gè)R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以與相鄰的C形成一個(gè)由C3-7環(huán)烷基代表的環(huán)，
R2O(CH2)p，其中的p是2-4；
R2是
苯基或萘基，它們每個(gè)是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素、羥基、CF3、OCF3或SO2NH2取代，
一個(gè)5至7元單環(huán)或9至10元二環(huán)的雜環(huán)或非雜環(huán)，該環(huán)可以是飽和或不飽和的，其中的雜環(huán)含有一至四個(gè)選自N、O和S的雜原子，該環(huán)是未取代的或者被鹵素或羥基取代，
C1-7烷基，它是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)羥基、COOH、C3-7環(huán)烷基、CF3、N(CH3)2、-C1-3烷基芳基或雜環(huán)取代，
CF3，或
C3-7環(huán)烷基，它是未取代的或者被芳基取代；
R12是
氫，或
C1-4烷基，它是未取代的或者被一個(gè)或多個(gè)羥基、COOH、氨基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基取代。
7、權(quán)利要求6的化合物，其中
R3是H、CH3或CH2CH3；
R4是H或氯；
W是PhCH2CH2，(CH3)3C-，HOOCCH2，CF3CH2，(CH3)2N(CH2)2，PhCH2O(CH2)2，PhCH(CH3)，PhCH2CH(COOH)，CH3(CH2)5，PhCH2，H，CH3(CH2)4，CH3CH2CH(CH3)CH2，(Ph)2CHCH2，PhCH2CH(CH3)，PhCH(CH3)CH2，(CH3)2CH，PhCH(OH)CH2，PhC(CH3)2CH2，
或者W是
，或
8、權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的化合物，其中R5是氫。
9、權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的化合物，其中X是NR11或-CH＝N-，其中的R11是氫或C1-6烷基，該烷基可選被一至三個(gè)氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基、羥基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、烷氧羰基、苯基、氰基、三氟甲基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、吡咯基或咪唑基取代。
10、權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的化合物，其中X是氧。
11、權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的化合物，其中R6是氫或C1-6烷基。
12、權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的化合物，其中R7、R8、R9和R10獨(dú)立地是氫、C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、C6-10芳基、C2-10羥基烷基或C2-7羧基烷基中之一。
13、權(quán)利要求12的化合物，其中R7、R8、R9和R10獨(dú)立地是氫、甲基、乙基、丙基、正丁基、芐基、苯乙基、2-羥基乙基、3-羥基丙基、4-羥基丁基、2-羧基甲基、3-羧基乙基和4-羧基丙基中之一，或者R7與R8或R9與R10和相鄰的C形成一個(gè)3至7元碳環(huán)。
14、權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的化合物，其中Ra、Rb和Rc獨(dú)立地是氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基或-CO2RW中之一，其中的RW在每種情況中是C1-4烷基、C4-7環(huán)烷基或芐氧基羰基。
15、權(quán)利要求14的化合物，其中Ra、Rb和Rc獨(dú)立地是氫、甲基、乙基、丙基、正丁基、羥基、甲氧基、乙氧基、氰基、-CO2CH3、-CO2CH2CH3和-CO2CH2CH2CH3中之一。
16、權(quán)利要求15的化合物，其中Ra、Rb和Rc各自是氫。
17、權(quán)利要求14的化合物，其中Ra、Rb和Rc獨(dú)立地是
或
之一，其中的Rd-Rh是如權(quán)利要求1所定義的。
18、權(quán)利要求17的化合物，其中
Rd、Re和Rg各自是氫；
Rf是甲基；和
Rh是芐基或叔丁基。
19、權(quán)利要求1的化合物，具有式II、III或IV之一
或其溶劑化物、水合物或藥學(xué)上可接受的鹽，其中n’和m’各自獨(dú)立地是0-3，R3、R4、W、X、n和m是如權(quán)利要求1所定義的。
20、權(quán)利要求19的化合物，其中
W是PhCH2CH2，(CH3)3C-，HOOCCH2，CF3CH2，(CH3)2N(CH2)2，PhCH2O(CH2)2，PhCH(CH3)，PhCH2CH(COOH)，CH3(CH2)5，PhCH2，H，CH3(CH2)4，CH3CH2CH(CH3)CH2，(Ph)2CHCH2，PhCH2CH(CH3)，PhCH(CH3)CH2，(CH3)2CH，PhCH(OH)CH2，PhC(CH3)2CH2，
或者W是
，或
21、權(quán)利要求1的化合物，它是下列之一
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2，2-二苯基乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲氧基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-苯基環(huán)丁基)甲氨基-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-[2-(1-萘)乙基]氨基-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基-1-丁氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3，4-亞甲二氧基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-吡啶基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2--[4-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3，5-二甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2，3-二氫化茚基]氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3，4-二氟苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[5-(2，3-二氫化茚基)]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-氟苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(3，4-二甲氧基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-氟苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-乙基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基丙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(3，4-二甲基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-萘乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2，2-二苯基丙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-(3-吲哚基)乙氨基-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[1-(4-甲基萘)]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2，4-二氟苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基-N′-甲基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[4-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(2，2-二苯基乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-甲基-2-苯基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-乙基-3-(苯乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲基苯基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-甲基-2-(4-甲氨基-3-吡啶基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-甲基-2-(3-吡啶基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-環(huán)丙基-2-(3，4-二甲氧基苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-環(huán)丁基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-環(huán)丁基-2，2-二氟乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-(3-氟苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2，2-二氟-2-苯基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基環(huán)丙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-(4-氯苯基)-2-環(huán)丙基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-環(huán)丙基-2-(3-吡啶基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-芐基環(huán)丙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-環(huán)丙基-2-(3-氟苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-環(huán)丙基-2-(3，4-二氟苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2，2-二氟-2-苯基乙氨基)-吡嗪酮，
及其藥學(xué)上可接受的鹽。
22、權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的化合物，其中R1包含放射性原子。
23、權(quán)利要求22的化合物，其中所述的放射性原子是放射性碘原子，選自I-125、I-131和I-123。
24、藥物組合物，包含權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
25、藥物組合物，包含權(quán)利要求19的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
26、藥物組合物，包含權(quán)利要求21的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
27、權(quán)利要求1的化合物在制備用于抑制絲氨酸蛋白酶的藥物中的用途。
28、根據(jù)權(quán)利要求27的用途，其中所述的蛋白酶是嗜中性白細(xì)胞彈性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、胰彈性蛋白酶、組織蛋白酶G、凝血酶、Xa因子、嗜熱菌蛋白酶或胃蛋白酶。
29、根據(jù)權(quán)利要求27的用途，其中所述的蛋白酶是凝血酶。
30、權(quán)利要求1的化合物在制備用于減少表面血栓形成的藥物中的用途。
31、權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療哺乳動(dòng)物的由絲氨酸蛋白酶引起的異常蛋白水解的藥物中的用途。
32、權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療哺乳動(dòng)物血栓形成的藥物中的用途。
33、權(quán)利要求1的化合物在制備用于減少哺乳動(dòng)物血液凝固的藥物中的用途。
34、權(quán)利要求22的化合物在制備用于檢測(cè)哺乳動(dòng)物凝血酶的藥物中的用途。
35、根據(jù)權(quán)利要求30的用途，其中所述的表面是斯滕特氏印模。
36、藥物劑型，包含0.1至500毫克權(quán)利要求1的化合物和制藥學(xué)上可接受的載體。
37、根據(jù)權(quán)利要求36的劑型，適合于腸胃外或口服給藥。
38、根據(jù)權(quán)利要求32的用途，該血栓形成與局部缺血、病毒感染、中風(fēng)、再狹窄、心肌梗塞、由創(chuàng)傷導(dǎo)致的播散性血管內(nèi)凝血、冠狀動(dòng)脈旁路術(shù)、髖部復(fù)位、溶栓療法、膿毒癥、血液透析、成人呼吸窘迫綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎、硬結(jié)、轉(zhuǎn)移、化療過程中的凝固性過高、眼內(nèi)纖維蛋白形成、傷口愈合有關(guān)。
39、根據(jù)權(quán)利要求32的用途，該血栓形成與局部缺血、再狹窄、心肌梗塞、冠狀動(dòng)脈旁路術(shù)、髖部復(fù)位、溶栓療法、傷口愈合有關(guān)。
全文摘要
描述了吡嗪酮化合物，包括式I化合物，其中X是O、NR11或CH＝N，R3－R11、Ra、Rb、Rc、W、m和n列在說明書中，及其溶劑化物、水合物或藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明化合物是蛋白酶的有效抑制劑，尤其是胰蛋白酶樣蛋白酶，例如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶、纖溶酶和Xa因子。某些化合物通過對(duì)凝血酶的直接的、選擇性抑制作用，表現(xiàn)抗血栓形成活性。還描述了組合物，用于抑制血小板喪失、抑制血小板聚集物的形成、抑制纖維蛋白的形成、抑制血栓形成和抑制栓子形成。本發(fā)明化合物的其他用途是作為抗凝劑，包埋在或者物理連接于用于裝置制造的材料中，該裝置用于血液采集、血液循環(huán)和血液貯存，例如導(dǎo)管、血液透析儀器、血液采集注射器與試管、血線與斯滕特氏印模。另外，可以通過可檢測(cè)的方式對(duì)該化合物進(jìn)行標(biāo)記，用于體內(nèi)血栓成像。
文檔編號(hào)A61M39/00GK1769274SQ200510093989
公開日2006年5月10日 申請(qǐng)日期1999年6月11日 優(yōu)先權(quán)日1998年6月11日
發(fā)明者魯天保, B·E·湯姆祖克, T·P·馬克唐 申請(qǐng)人:奧瑟－麥內(nèi)爾制藥公司