專利名稱：清開靈活性組分梔子提取物在制備抗多重耐藥菌的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及桅子的一種新的醫(yī)藥用途，具體地說是在桅子提取物制備抗多重耐藥菌藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
多重耐藥菌(multiple resistant bacteria)是指有多重耐藥性的病原菌,即一種微生物對(duì)三類(比如氨基糖苷類、紅霉素、B —內(nèi)酰胺類)或三類以上抗生素同時(shí)耐藥。其中最為多見的是NDM-1、MDR-TB、MDR-MRSA以及常在I⑶中出現(xiàn)的鮑曼不動(dòng)桿菌和銅綠假單胞菌。NDM-1 (NewDelhimetallo-β-lactamase-1,新德里金屬 β -內(nèi)酸胺酶)，又名 NDM-1細(xì)菌，是一種耐碳青霉烯類的酶。NDM-1基因常由質(zhì)粒攜帶，但也整合在細(xì)菌的染色體上，易于在不同的菌株間傳播和擴(kuò)散，NDM-1編碼的蛋白單體分子量為28kDa，它的序列和其他MBL的序列相似性很低。NDM-1主要分布在腸桿菌科和鮑曼不動(dòng)桿菌中，攜帶NDM-1的細(xì)菌 不但包括條件致病菌，也包括致病菌，如常見的志賀氏菌、霍亂、綠膿假單胞桿菌等。它具有高度耐藥性，幾乎可以水解臨床常用的一線抗菌藥物，包括β_內(nèi)酰胺類、碳青霉烯類、氟喹諾酮類、氨基糖苷等。長(zhǎng)期以來，抗生素藥物的濫用，是催生多重耐藥菌的重要原因。目前，多重耐藥菌感染呈現(xiàn)出增長(zhǎng)趨勢(shì)，但抗菌藥物選擇方案卻很少，因此重耐藥菌感染已成為全球性棘手問題。桅子(菌草科植物桅子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果實(shí))為清熱解毒復(fù)方中藥清開靈注射液的主要原料藥，具有護(hù)肝、利膽、降壓、鎮(zhèn)靜、止血、消腫等作用，在中醫(yī)臨床常用于治療黃疸型肝炎、扭挫傷、高血壓、糖尿病等癥，并且具有良好的效果。開發(fā)和研究桅子更多更好的醫(yī)藥功效，是許多中醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域的重要研究課題之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是要開發(fā)桅子提取物的新醫(yī)藥用途，同時(shí)為臨床提供一種可有效拮抗多重耐藥菌的藥物。本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)長(zhǎng)期研究發(fā)現(xiàn)桅子提取物對(duì)含NDM-1耐藥基因細(xì)菌具有顯著地抑制作用，且與藥物濃度成正比，從而發(fā)明了桅子提取物的一種新的醫(yī)藥用途，即完成了桅子提取物在制備抗多重耐藥菌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的桅子提取物可按照常規(guī)的中藥提取方法進(jìn)行。本發(fā)明在此提供的方法如下(I)取桅子適量，加水煎煮兩次，，過濾，合并兩次濾液；(2)所得濾液減壓濃縮，放冷后在攪拌下加乙醇使含醇量達(dá)60%，冷藏，過濾，濾液回收乙醇,加水稀釋,過濾；(3)將所得濾液上大孔吸附樹脂，依次用水、乙醇洗脫，收集洗脫液，過濾，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，得桅子提取物，冷藏。
其中，步驟(I)中，加水煎煮，第一次加8倍量的水，煮沸2小時(shí)，第二次加6倍量的水，煮沸I小時(shí)；步驟(2)中，加水稀釋至相對(duì)密度1. 05 1. 2 (60°C);步驟(3)中，洗脫劑水用量是5 7倍量柱體積、乙醇是8 10倍量柱體積的40%乙醇。本發(fā)明所述桅子提取物，可按照現(xiàn)有技術(shù)所述方法制備成顆粒、沖劑、射劑、膠囊等藥物制劑。本發(fā)明中所述的多重耐藥菌是指含有NMD-1基因的多重耐藥菌，包括乙酸鈣不動(dòng)桿菌(Acinetobacter calcoaceticus)、鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumannii,A. baumannii)、嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)或含 NDM-1 耐藥基因大腸桿菌(Escherichia coli)。
上述含NDM-1耐藥基因檢測(cè)菌株為革蘭氏陰性菌，具有較強(qiáng)的致病性和抗生素耐藥性。其中，乙酸鈣不動(dòng)桿菌和鮑曼不動(dòng)桿菌可引起肺部感染、傷口及皮膚感染、泌尿生殖系統(tǒng)感染、菌血癥菌血癥、腦膜炎等，麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌能引起嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)感染等，含NDM-1耐藥基因大腸桿菌可引發(fā)對(duì)腸道感染且對(duì)抗生素具有抗藥性。更進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供了桅子提取物在制備抗乙酸鈣不動(dòng)桿菌藥物中的應(yīng)用，即桅子提取物在制備治療和/或預(yù)防乙酸鈣不動(dòng)桿菌引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。更進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供了桅子提取物在制備抗鮑曼不動(dòng)桿菌藥物中的應(yīng)用，即桅子提取物在制備治療和/或預(yù)防鮑曼不動(dòng)桿菌引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。更進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供了桅子提取物在制備抗嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌藥物中的應(yīng)用，即桅子提取物在制備治療和/或預(yù)防嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。更進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供了桅子提取物在制備抗含NDM-1耐藥基因細(xì)菌藥物中的應(yīng)用。更進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供了桅子提取物在制備抗含NDM-1耐藥基因大腸桿菌藥物中的應(yīng)用，即桅子提取物在制備治療和/或預(yù)防含NDM-1耐藥基因大腸桿菌引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述桅子制劑可用于治療上述由含NDM-1耐藥基因多重耐藥細(xì)菌引發(fā)的疾病，如含NDM-1耐藥基因多重耐藥細(xì)菌引發(fā)的腸道感染、呼吸系統(tǒng)感染、傷口及皮膚感染、泌尿生殖系統(tǒng)感染、菌血癥菌血癥、腦膜炎等，尤其是適用于治療由乙酸鈣不動(dòng)桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌或含NDM-1耐藥基因大腸桿菌引發(fā)的疾病。本發(fā)明所述藥物制劑在作為本發(fā)明的用途使用時(shí)，其具體用量時(shí)可根據(jù)臨床實(shí)驗(yàn)以及患者的具體情況確定。
具體實(shí)施方案以下通過實(shí)施例和試驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果。實(shí)施例1桅子提取物的制備方法(I)取桅子適量，加水煎煮兩次，第一次加8倍量的水，煮沸2小時(shí)，第二次加6倍量的水，煮沸I小時(shí)，過濾，合并兩次濾液；(2)所得濾液減壓濃縮至原藥材量1. 5 2倍體積時(shí),放冷后在攪拌下加乙醇使含醇量達(dá)60%，冷藏，過濾，濾液回收乙醇，加水稀釋到相對(duì)密度為1. 05 1. 2 (60°C )，過濾；(3)將所得濾液上大孔吸附樹脂，依次用5 7倍量柱體積的水、8 10倍量柱體積的40%乙醇洗脫，收集洗脫液，過濾，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，得桅子提取物，冷藏。藥效學(xué)試驗(yàn)試驗(yàn)例I桅子提取物對(duì)含NDM-1耐藥基因細(xì)菌的抑菌效果研究本藥效學(xué)試驗(yàn)所采用的檢測(cè)菌株乙酸I丐不動(dòng)桿菌(Acinetobactercalcoaceticus, A.calcoaceticus)、鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumannii,A.baumannii)和嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia, S. maltophilia),均含有 blaNDM-Ι 耐藥基因；pGEX-4T-NDMl_DH5 α 是含 NDM-1 重組質(zhì)粒的大腸桿菌(Escherichia coli, E. coli) ；pGEX-4T-NDM-l-BL21 (在大腸桿菌 BL21 中表達(dá)NDM-1)是含NDM-1重組質(zhì)粒的大腸桿菌(Escherichia coli, E. coli)，其質(zhì)粒上帶有GST標(biāo)簽。上述菌株均由中國(guó)人民解放軍疾病預(yù)防控制所提供。配制LB瓊脂培養(yǎng)基，高壓冷卻至60°C時(shí)，取桅子提取物，按1:9 (藥物L(fēng)B，V/V)t匕例配制不同濃度藥物(O. lg/ml、0. 2g/ml、0. 3g/ml)平板,瓊脂厚度3_4mm,制備藥物平板，備用。研究梔子對(duì)含NDM-1耐藥基因細(xì)菌進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)將4株含NDM-1基因耐藥菌株乙酸鈣不動(dòng)桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌及大腸桿菌PGEX-4T-NDM1-DH5 α分別接種于含16 μ g/ml亞胺培南的LB液體培養(yǎng)基中，37°C、200rpm培養(yǎng)過夜，次日菌液用無(wú)菌PBS緩沖液稀釋10倍后，分別吸取2 μ I接種于藥物瓊脂平板表面或采用劃線法接種，平板置于37°C孵育24h左右，觀察各菌株生長(zhǎng)狀況，得梔王提取物的抑菌性測(cè)定結(jié)果，見表I。采用瓊脂稀釋法對(duì)桅子提取物的最小抑菌濃度(MIC)進(jìn)行測(cè)定，將耐藥菌株接種于不同藥物濃度的瓊脂平板上，37°C孵育24h左右，觀察各菌株生長(zhǎng)狀況，抑制菌株不能生長(zhǎng)的最小藥物濃度(MIC值)分別為乙酸鈣不動(dòng)桿菌O. 3g/ml、鮑曼不動(dòng)桿菌O. 3g/ml、嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌 O. 2g/ml、pGEX-4T-NDM-l-BL21 O. 3g/ml。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明桅子對(duì)耐藥菌株均有抑制作用，隨著藥物濃度的增加，抑制作用明顯增強(qiáng)，說明桅子對(duì)含NDM-1耐藥基因耐藥菌都有抑制作用，且抑菌效果明顯；藥物對(duì)不同檢測(cè)菌株的抗菌能力不同，MIC也有所差異，具有較強(qiáng)的廣譜抗含NDM-1耐藥基因耐藥菌的能力。表I桅子提取物濃度對(duì)菌株的影響
權(quán)利要求
1.桅子提取物在制備抗多重耐藥菌的藥物中的應(yīng)用。
2.桅子提取物在制備抗含NDM-1耐藥基因細(xì)菌藥物中的應(yīng)用。
3.桅子提取物在制備抗乙酸鈣不動(dòng)桿菌藥物中的應(yīng)用。
4.桅子提取物在制備抗鮑曼不動(dòng)桿菌藥物中的應(yīng)用。
5.桅子提取物在制備抗嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌藥物中的應(yīng)用。
6.桅子提取物在制備抗含NDM-1耐藥基因大腸桿菌藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)所述應(yīng)用，其特征在于，所述桅子提取物由桅子藥材，加水煎煮兩次，過濾，合并濾液，所得濾液減壓濃縮，放冷后在攪拌下加乙醇使含醇量達(dá)60%，冷藏，過濾，濾液回收乙醇，加水稀釋到相對(duì)密度為1. 05 1. 2(60°C)，過濾，所得濾液上大孔吸附樹脂，依次用5 7倍量柱體積的水、8 10倍量柱體積的40%乙醇洗脫，收集洗脫液，過濾，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及清開靈活性組分梔子提取物對(duì)乙酸鈣不動(dòng)桿菌(Acinetobacter calcoaceticus)、鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumannii，A.baumannii)、嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)及含NDM-1耐藥基因大腸桿菌(Escherichia coli)具有抑制作用，因此它可用于抑制這些細(xì)菌病并治療和/或預(yù)防這些細(xì)菌引起的疾病。
文檔編號(hào)A61K36/744GK102988537SQ20121055017
公開日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2012年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月17日
發(fā)明者劉軍鋒, 袁靜, 張狀年, 黃留玉, 李 東, 王雪松, 姜海 申請(qǐng)人:河北神威藥業(yè)有限公司