專利名稱：具有抗癌活性的紅豆杉烷的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種含有抗癌活性的紅豆杉烷(taxane)核的新雙萜。從光譜分析得到結構式(1)的新化合物，相當于在5β，20-環(huán)氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六-羥基紅豆杉-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯的13位與(2R，3S)-N-己?；?3-苯基異絲氨酸形成的酯。
式(1)化合物從紫杉屬類根皮分離出來，產(chǎn)率為0.02%到0.06%。
化合物(1)從其中萃取的植物材料優(yōu)選由紫杉屬栽培品種的根組成，例如TaxusmediacvHicksii的皮。該栽培品種通常用于花園裝飾并供觀賞。該事實避免不加選擇地收獲自生紫杉屬樹根，其生長極為緩慢，及它們隨后快速的死滅。
通過只用氯化的溶劑如二氯甲烷或其與醇如甲醇或乙醇的混合物來萃取化合物(1)。也可通過只用酮如丙酮或與水混合使用來萃取植物材料。
根皮萃取物除含化合物(1)外，還含有一系列其它眾所周知的紅豆杉烷類如紅豆杉醇(2)，cephalomanine(3)及它們各自的10-脫乙?；苌?4)和(5)。從上面紅豆杉烷中分離化合物(1)要求用柱色譜純化。
2R′＝C6H5;R″＝COCH33R′＝-C(CH3)＝CHCH3;R″＝H4R′＝C6H5;R″＝H5R′＝-C(CH3)＝CHCH3;R″＝H
為此目的，硅膠優(yōu)選用作固定相。由脂肪烴如正己烷，環(huán)己烷或正庚烷，或芳香烴如甲苯，和較高極性溶劑如乙酸乙酯或丙酮組成的溶劑混合物用作洗脫劑。
一旦化合物(1)從含有它的色譜餾分中回收，它在從丙酮或異丙醚或其與正己烷或正庚烷的混合物中結晶后得到分離。
新化合物(1)顯示出與抗癌藥紅豆杉醇(2)顯著的結構相似性，其中在紅豆杉烷核13位上結合的側鏈類型不同。因此，除從植物材料萃取外，化合物(1)可通過類似于生產(chǎn)紅豆杉醇(2)的方法(I.Ojima等，Tetrahedron48，6985，1992)半合成。
由于化合物(1)和紅豆杉醇(2)的之間的結構相似性，可以預料前者的類似抗癌活性。
確實，在體外化合物(1)對幾種癌菌種如與乳腺、肺、結腸和卵巢癌有關的菌種拮抗活性可與紅豆杉醇的拮抗活性相媲美，如表1所報告。然而，對于耐阿霉素(ADR)癌細胞及對白血病細胞來說新紅豆杉烷(1)出人意料地表現(xiàn)出比紅豆杉醇更高的活性。
表1-紅豆杉烷(1)和紅豆杉醇(2)對不同癌菌種抑制生長活性的比較(IC50，nM)
癌細胞紅豆杉烷(1)紅豆杉醇(2)L1210(鼠白血病)3.6±0.357.0±3.0A121(人卵巢)8.6±0.46.3±0.3A549(人 NSCLC)3.9±0.35.4±0.5HT-29(人結腸)5.4±0.56.0±0.6MCF7(人乳腺)2.2±0.14.3±0.5MCF7-ADR(耐ADR)430±22>1000在體內研究中，化合物(1)，以含GremophorR水溶液給藥，證明對植入裸鼠的癌是有效的。因此，預想紅豆杉烷用作治療液體癌和耐藥癌如耐阿霉素癌的抗癌藥。
根據(jù)在動物上的活性劑量，化合物(1)對人的劑量為150到250mg/m2之間，2或3周為一個周期，直到轉移消失。
下面實施例舉例說明本發(fā)明化合物的制備實施例1實施例1在5β，20-環(huán)氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羥基紅豆杉-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯的13位與(2R，3S)-N-己?；?3-苯基異絲氨酸形成的酯(式1)50kgTaxusmediacvHicksii粉狀皮在室溫下用130升9∶1二氯甲烷/甲醇混合物萃取，隨后用80升9∶1二氯甲烷/甲醇混合物萃取3次，每次萃取進行24小時。
收集的萃取液真空濃縮，殘余物(4300g)溶于23升9∶1甲苯/丙酮混合物。過濾不溶物后，通過用27kg硅膠，同樣溶劑混合物作為洗脫劑的柱色譜純化。收集含產(chǎn)品(1)的餾分，減壓蒸干。殘余物從80ml1∶1正己烷/丙酮混合物中結晶，得到17.5g化合物(1)，熔點209℃，〔α〕D-42°(C＝0.3，甲醇)，M+am/z847。
化合物(1)的光譜測量數(shù)據(jù)如下IR(nujol)3500-3300，1710，1640cm-1UV(MeOH)222(13900)，232(16250)，274(1130)，282(990)nmCIMS(NH3)，m/z 865(40%，M+NH4)，848(10，MH)，586(30，M+NH4-279)1H-NMR(300 MHz，CDCl3，ppm，J in Hz)5，66(d，J＝7，0;H-2)，3，78(d，J＝7，0;H-3)，4，93(dd，J1＝9，4，J2＝2，0;H-5)，2，54(ddd，J1＝15，5，J2＝9，4，J3＝6，6;H-6α)，1，84(ddd，J1＝15，5，J2＝10，9;J3＝2，0;H-6β)，4，39(ddd，J1＝10，9，J2＝6，6，J3＝4，1;H-7)，6，28(s，H-10)，6，23(t，J＝6，23;H-13)，2，24-2，32(2H，m;H-14)，1，26(s，H-16)，1，14(s，H-17)，1，81(d，J＝1，2;H-18)，1，67(s，H-19)，4，17(d，J＝8，6;H-20α)，4，28(d，J＝8，6;H-20β)，4，65(dd，J1＝4，9，J2＝2，5;H-2′)，5，56(dd，J1＝8，9，J2＝2，5;H-3′)，2，18(t，J＝7，3;H-2″)，1，56(m;H-3″)，1，28-1，20(m;H-4″e H-5″)，0，83(t，J＝6，7;H-6″)，8，10(d，J＝7，8;PhCO H-2 e 6)，7，50(t，J＝7，8;PhCO H-3 e 5)，7，61(t，J＝7，8;PhCO H-4)，7，38(m;3′-PhH-2，3，4，5，6)，2，34(s，COCH3)，2，24(s，COCH3)，6，25(d，J＝8，9;NH)，2，49(d，J＝4，1;7-OH)，1，84(s，1-OH)，3，55(d，J＝4，9;2′-OH).
13C-NMR(75，43 Hz，CDCl3)78，99(C-1)，74，93(C-2)，45，57(C-3)，81，07(C-4)，84，37(C-5)，35，59(C-6)，72，15(C-7)，58，56(C-8)，203，63(C-9)，75，55(C-10)，138，06(C-11)，142，05(C-12)，72，29(C-13)，35，59(C-14)，43，18(C-15)，26，79(C-16)，21，86(C-17)，14，81(C-18)，9，54(C-19)，76，46(C-20)，172，78(C-1′)，73，16(C-2′)，54，53(C-3′)，172，90(C-1″)，36，55(C-2″)，25，34(C-3″)，31，29(C-4″)，22，28(C-5″)，13，83(C-6″)，129，09(PhCO C-1)，130，19(PhCO C-2 e C-6)，128，68(PhCO C-3 e C-5)，133，68(PhCO C-4)，133，11(Ph C-1)，126，94(Ph C-2 e C-6)，128，93(Ph C-3 e C-5)，128，23(Ph C-4)，22，58(COCH3)，20，84(COCH3)，171，23(COCH3)，170，23(COCH3)，166，95(PhCO).
C46H57NO14實驗值%C＝65，11;H＝6，86;N＝1，60計算值%C＝65，15;H＝6，78;N＝1，65.
權利要求
1.在5β，20-環(huán)氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羥基紅豆杉-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯的13位與(2R，3S)-N-己?；?3-苯基異絲氨酸形成的式(1)酯
2.一種制備權利要求1的化合物(1)的方法，其特征在于用氯化的烴或其與低級醇的混合物萃取紫杉屬栽培植物的植物材料，用脂肪烴或芳香烴與具有較高極性的溶劑的混合物作為洗脫劑，層析通過蒸發(fā)溶劑得到的干燥萃取物，以及一旦從含它的餾分中回收后通過結晶純化化合物(1)。
3.按照權利要求2的方法，其特征在于植物材料由Taxus media cv Hicksii的根皮組成。
4.按照權利要求2-3的方法，其特征在于用二氯甲烷/甲醇混合物進行萃取。
5.按照權利要求2-4的方法，其特征在于作為固定相的硅膠和作為洗脫劑的甲苯/丙酮混合物用于色譜分離。
6.按照權利要求2-5的方法，其特征在于丙酮，異丙醚或其與正己烷或正庚烷的混合物用于結晶。
7.含有權利要求1的化合物(1)作為活性成分的具有抗癌活性的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及結構式(I)的新紅豆杉烷，它可從紫杉屬類植物的根皮分離。化合物(1)抗癌活性比紅豆杉醇的抗癌活性高，前者不象后者，對耐阿霉素細胞也有活性，并且作為抗白血病藥。
文檔編號A61K31/337GK1110055SQ94190306
公開日1995年10月11日 申請日期1994年5月3日 優(yōu)先權日1993年5月20日
發(fā)明者B·加貝塔, E·邦博德利 申請人:因迪納有限公司