專利名稱：9-嘌呤基磷酸衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型嘌呤核苷磷酸化酶抑制劑、它們的制備方法及其中間產(chǎn)物，以及它們作為免疫抑制劑、抗淋巴瘤劑、抗白血病劑、抗病毒劑和抗原生動(dòng)物劑的應(yīng)用。
在正常體內(nèi)條件下，嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)催化鳥嘌呤和次黃嘌呤的核糖核苷和脫氧核糖核苷進(jìn)行磷酸裂解，轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的磷酸糖和鳥嘌嶺或次黃嘌嶺。缺乏PNP時(shí)，尿酸濃度極低，而血漿中和尿中PNP的某些核苷底物(如dGuo)的濃度升高。dGuo對(duì)成淋巴細(xì)胞具有毒性，而T-細(xì)胞所受的影響要比B-細(xì)胞大得多。事實(shí)上，在遺傳學(xué)上獲得性PNP缺陷型病人中，B-細(xì)胞免疫球蛋白的產(chǎn)生是正常的，甚至是升高的，但其中的白細(xì)胞則減少，并且T-淋巴細(xì)胞的功能要么完全喪失要么嚴(yán)重受抑制。不受控制的PNP缺陷顯然是不希望的，但在某些情況下，非常需要免疫系統(tǒng)有控制的抑制，尤其是T-細(xì)胞有控制的抑制，例如在T-細(xì)胞白血病的治療中、在器官移植受者中宿主對(duì)移植物反應(yīng)的抑制以及痛風(fēng)病的治療均是如此。本申請(qǐng)人已發(fā)現(xiàn)一類9-嘌呤基膦酸衍生物，它們是PNP有效的抑制劑，因而可用作免疫抑制劑。
更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及式(Ⅰ)新型嘌呤基膦酸衍生物、其互變異構(gòu)體以及其可藥用的鹽，
其中R為
Ar為橋連部分，其相鄰的CH2與一個(gè)環(huán)碳原子相連接，Z與R9-取代的苯基、噻吩或呋喃基的第二個(gè)環(huán)碳原子相連接，Z為亞類(a)、(b)、(c)、(d)或(e)，其中
條件是當(dāng)Z為亞類(b)時(shí)，那么Ar不為呋喃或噻吩基，n為1-5的整數(shù)或0，
R1為-OH或-SH，R2為H或-NH2，R3為H、-NH2、-OH或-NH-NH2，R4為H，R4′為H、OH或F，或R4和R4′與它們相連的碳原子一起形成一酮基，R5為C1～6烷基或R5′，R6為C1～6烷基或R6′，同時(shí)R5′與R6′為H，R7和R8各自為H、F或C1～4烷基，R9為H、Cl、Br、C1～4烷基、C1～6烷氧基、OH、NH2、或CH3，條件是當(dāng)Ar為呋喃或噻吩時(shí)R9不為OH或NH2，X和Y為H、F或Cl，條件是當(dāng)n為0時(shí)X和Y均為H。
這里所用的術(shù)語(yǔ)C1～4或C1～6烷基包括分別含有直至4個(gè)或6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈飽和的低級(jí)脂族烴基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、仲丁基、正丁基、叔丁基、戊基等;C1～6烷氧基為其醚衍生物。橋連其相鄰CH2和Z的“Ar”部分為R9-取代的苯基、呋喃或噻吩基，其中苯基在其1，2-、1，3-或1，4-位被橋連，呋喃和噻吩各自則可通過(guò)2，3-、2，4-，2，5或3，4-位環(huán)碳原子橋連;R9-取代可以是在任何其它合適的環(huán)碳原子上發(fā)生的單取代或雙取代。嘌呤核的6-位可存在烯醇-酮互變異構(gòu)形式。
術(shù)語(yǔ)“可藥用的酸加成鹽”指式Ⅰ堿基化合物的任何無(wú)毒的有機(jī)酸加成鹽或無(wú)機(jī)酸加成鹽。形式合適鹽的無(wú)機(jī)酸的例子有鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸以及酸性金屬鹽(如正磷酸-氫鈉和硫酸氫鉀)。形成合適鹽的有機(jī)酸的例子有一、二和三羧酸，例如乙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、蘋果酸、酒名酸、檸檬酸、抗壞血酸、馬來(lái)酸、羥基馬來(lái)酸、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯基乙酸、肉桂酸、水楊酸以及2-苯氧基苯甲酸。形成合適鹽的其它有機(jī)酸有磺酸(如甲磺酸和2-羥基乙磺酸)。所形成的鹽可以是一酸式鹽，也可以是二酸式鹽，可以是水合物也可以是基本上無(wú)水的形式?？砂匆话愕姆椒ㄖ苽渌崾禁}如將游離堿溶于水溶液、水-醇溶液或含有合適酸的其它合適溶劑中并通過(guò)蒸發(fā)該溶液而加以分離，或者在有機(jī)溶劑中使游離堿反應(yīng)，在這種情況下生成的鹽可直接分離出或通過(guò)濃縮溶液而得到。一般來(lái)說(shuō)，本發(fā)明化合物的酸加成鹽為可溶于水和各種親水性有機(jī)溶劑的結(jié)晶物質(zhì)，并且與其游離堿相比具有更高的熔點(diǎn)和穩(wěn)定性。
通?？赏ㄟ^(guò)縮合反應(yīng)制備式Ⅰ化合物，其中使6-氯嘌呤(2)與活化的(-CH2Ar-Z)取代的膦酸酯(3)反應(yīng)，然后將生成的Ⅰa中間物轉(zhuǎn)變?yōu)楹线m的R、R1、R2、R3-取代的嘌呤衍生物(式Ⅰ)。以下反應(yīng)流程列出了總的縮合反應(yīng)。
其中R1、R2、R3、Ar、Z、R5和R6的定義同前，不同的是當(dāng)Z為亞類(a)時(shí)出現(xiàn)的R4′也可以是甲硅烷基醚，且Q為溴、碘或羥基。
當(dāng)需要進(jìn)行6-氯嘌呤中間物(2)與膦芳基(其中Q為鹵化物)之間的縮合反應(yīng)時(shí)，通常在0-60℃(優(yōu)選室溫)于氫化鈉(NaH)、碳酸鉀(K2CO3)或氟化銫(CsF)(約2當(dāng)量)等堿存在的情況下，將輕微過(guò)量(約10%)的6-氯嘌呤反應(yīng)物(2)于二甲基甲酰胺(DMF)等非反應(yīng)性溶劑中縮合約4-18小時(shí)。
當(dāng)Q為OH時(shí)，是在更加中性并按照Mitsunobu型反應(yīng)，在P(R′)3(其中R′最好為苯基，但包括甲基和異丙基)存在下，使用偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)進(jìn)行縮合，并且縮合反應(yīng)在0-60℃于合適的非反應(yīng)性溶劑中進(jìn)行。
當(dāng)然，在上述反應(yīng)中如果Ar部分帶有的R9取代基受上述縮合反應(yīng)的反應(yīng)條件影響(或改變了嘌呤堿)，則可對(duì)這些取代基進(jìn)行修飾以避免任何不希望有的付反應(yīng)發(fā)生，并在合適的步驟中將它們恢復(fù)到所需形式。例如，如果R9是OH，則可形成中間體酯或醚衍生物，并在適當(dāng)?shù)牟襟E中通過(guò)水解將這些酯或醚恢復(fù)為醇。這些原理是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的，因此在這里沒(méi)必要詳細(xì)說(shuō)明。
在式(3)中的R4、R4′、X和Y均為氫原子這一特殊情形下，最好將式(4)膦酰芳基的溴甲基衍生物與嘌呤(2)縮合，并按照一般方法，最好在鈀炭存在的情況下用氫氣(H2-Pd/C)將所得產(chǎn)物氫化。
當(dāng)需要制備式Ⅰa化合物(其中R4為H，R4′為OH，或R4與R4′一起形成如上所述的酮基時(shí)，應(yīng)用甲硅烷基醚(優(yōu)選叔丁基二甲基甲硅烷基醚)保護(hù)膦酰鹵的羥基部分，即
(其中
+代表叔丁基二甲基甲硅烷基醚)，并在縮合(如前所述)之后通過(guò)酸水解脫去甲硅烷基保護(hù)基，如果所產(chǎn)生的醇需要被氧化，可以應(yīng)用Swern氧化反應(yīng)將醇氧化為所需的酮。實(shí)際上最好先形成甲硅烷基醚，然后活化式3的反應(yīng)物(如下所述)。
可以用本技術(shù)領(lǐng)域熟知的方法制備式3“Q-活化的”反應(yīng)物，最好在用鹵素或羥基進(jìn)行活化之前應(yīng)用其中羥基(若有的話)受保護(hù)的中間體。
最好在催化量的過(guò)氧苯甲酰存在的情況下使用N-溴代琥珀酰亞胺(NBS)或其它合適的N-溴代酰胺進(jìn)行溴化反應(yīng)，并且該反應(yīng)最好在四氯化碳溶劑中進(jìn)行。其中Q為OH的式3反應(yīng)物可直接由(6)通過(guò)與CeAmNO3(硝酸銫銨)反應(yīng)制得，或者通過(guò)將芐基溴(7)轉(zhuǎn)變?yōu)槠湟宜狨?，然后再用催化量的甲醇鈉的甲醇溶液水解該乙酸酯而制得，該反應(yīng)使用的是本領(lǐng)域所熟知的普通方法。
其中Ar、Z、R5和R6的定義同前，不同的是R4′為甲硅烷基醚(而不是OH)，R9為被保護(hù)的羥基而不是OH(若合適的話)。
一旦6-氯嘌呤堿(2)進(jìn)行縮合反應(yīng)產(chǎn)生式Ⅰa化合物，就可按分步方式在8，6-和/或2-位進(jìn)行改變，產(chǎn)生所需R1、R2和R3的式Ⅰ。
為了制備其中R5和R6均為H、R1為OH的式Ⅰ化合物，將Ⅰa相應(yīng)的膦酸二酯(即R5和R6均為烷基)于90℃依次與溴化三甲基甲硅烷(TMSBr)的CH2CCl2溶液、水的乙腈溶液反應(yīng)，最后在HCl(1N)中進(jìn)行反應(yīng)。為了制備一酯(R5為H，R6為烷基，R1為OH)，直接將Ⅰa化合物于90℃用HCl/H2O進(jìn)行水解。
為了制備其中R1為SH的式Ⅰ化合物，將式Ⅰa化合物與硫脲于乙酸中進(jìn)行反應(yīng)。所得6-SH產(chǎn)物用TMSBr處理和水解而脫醚后，得到其中R1為SH且R5和R6為H的化合物。
為了制備其中R1為SH、R2和R3同定義(式Ⅰ)且R4′為H或甲硅烷基醚(-O-SiMe3)的式Ⅰ化合物，將相應(yīng)的6-OH類似物與二聚五硫化二磷反應(yīng)。所得化合物(其中R4′為甲硅烷基醚)可被轉(zhuǎn)變?yōu)槠浯?，并根?jù)需要用這里所述的方法將該醇氧化成其酮類似物。用溴水、N-溴或N-碘酰亞胺(如1，3-二溴-5，5-二甲基-乙內(nèi)酰脲、1，3-二碘-5，5-二甲基乙內(nèi)酰脲、N-碘乙酰胺等，優(yōu)選NBS或NIS，最優(yōu)選的是N-溴乙酰胺(NBA))等溴化劑或碘化劑進(jìn)行鹵化，可用同樣的反應(yīng)物(不同的是R3為H)制備其中R3為NH2或-NH-NH2的式Ⅰ化合物。于合適的溶劑(如水、乙醚、THF、對(duì)二噁烷、低級(jí)鏈烷醇、乙二醇、氯化烴(CCl4、CH2Cl2)、DMF、HMPA或DMSO)中，將所產(chǎn)生的8-鹵類似物與肼在約50-100℃反應(yīng)，最好(但不是必須)使用2-3倍過(guò)量的肼。用阮內(nèi)鎳還原肼可制得相應(yīng)的8-NH2化合物。肼反應(yīng)的8-鹵類似物可用于制備其中R3為OH的化合物，其方法是將8-鹵化合物與芐基醇的堿金屬或堿土金屬鹽反應(yīng)，接著在貴金屬催化劑(如Pd/c)存在下并在大氣壓下用氫氣還原該中間產(chǎn)物。
為了使與合成路線相關(guān)的概念具體化，以及為了更容易地說(shuō)明其中R4為H、R4′為OH或R4和R4′形成所述酮基的(a)亞類化合物的另一合成途徑，特給出以下圖示。
其中-Si+代表叔丁基二甲基甲硅烷基，Ar、X、Y、Bu4NF、TMSBr的定義同前。
可按照本領(lǐng)域類似的普通方法和技術(shù)制備式6芳基膦酸酯;當(dāng)然，合成的具體途徑取決于Z的定義。
若需要制備其中Z為亞類(a)的式6中間物，即式(15)化合物
(其中Ar、R4、R4′、X、Y、R5和R6的定義同式Ⅰ)，其具體的合成途徑主要取決于R4、R4′、X和Y的具體定義。當(dāng)R4和R4′為氫原子時(shí)，其合成方法用圖解法表示如下
其中M為L(zhǎng)i、Na、-ZnBr、MgBr(優(yōu)選Li)，X和Y為H、F或Cl。在該反應(yīng)中，鋰衍生物(17)是在約-78℃于惰性氣流(氬氣)下，將合適的膦酸酯與二異丙基胺鋰(LDA)或丁基鋰在無(wú)水溶劑(如THF)中反應(yīng)而制得，然后將其與芳基溴(16)縮合10-20小時(shí)，并用飽和氯化銨(NH4Cl)水溶液處理該反應(yīng)。其中M為-ZnBr的反應(yīng)物(16和17)的縮合反應(yīng)最好在催化量溴化銅存在下于20℃進(jìn)行。Zn和Mg的溴化衍生物也可按一般方法制備。
可按以下途徑制備其中R4為H、R4′為OH或F或R4與R4′共同形成一酮基(如前面定義)的化合物
于-78℃在氬氣下，將醛(18)與鋰衍生物(19)在THF中反應(yīng)約3小時(shí)，然后在約-78℃～-30℃用飽和NH4Cl水溶液處理該反應(yīng)，得到化合物(20)。在約0℃將化合物(20)與DAST(二乙氨基三氟化硫)在二氯甲烷中反應(yīng)約15-25小時(shí)，并用過(guò)量甲醇處理該反應(yīng)。用草酰氯于DMSO中進(jìn)行Swern氧化反應(yīng)，或者用過(guò)釕酸四丙基銨和N-甲基嗎啉N-氧化物也可將醇(20)氧化為其酮式?；蛘?，通過(guò)化合物(19)(其中M為L(zhǎng)i或-ZnBr)與下式化合物(其中X″為氯或烷氧基)反應(yīng)直接形成酮
在進(jìn)行后一種反應(yīng)以直接制備酮時(shí)，如果X和Y均為H原子，則優(yōu)選X″為烷氧基(如果氧基)，M為鋰;如果X和Y均為F，則優(yōu)選X″為氯，M為-ZnBr。
在R4為H、R4′為OH或R4與R4′形成所述的酮的情況下，如反應(yīng)物(2)與(3)的縮合反應(yīng)所述，最好使用化合物(20)的甲硅烷基醚(如叔丁基二甲基甲硅烷氧基衍生物)。這些甲硅烷基衍生物是通過(guò)在咪唑存在下將化合物19與氯化叔丁基二甲基甲硅烷反應(yīng)而制得的，并用NBS活化所得產(chǎn)物。在后一步驟中按前面所述，用氟化四丁基銨(Bu4NF)進(jìn)行處理可選擇性地脫去甲硅烷基保護(hù)基。
當(dāng)制備其中R4和R4′形成所述酮并且X和Y均為H的式Ⅰa化合物時(shí)，最好利用以下反應(yīng)途徑
應(yīng)當(dāng)指出，當(dāng)需要通過(guò)縮合反應(yīng)制備其中Z為亞類(a)的Ⅰa化合物(其中式3的Q為OH，R4、R4′、X和Y均為H)時(shí)，最好還原亞類(C)中間物，以得到通式3范圍內(nèi)的合適反應(yīng)物。
若需要制備其中Z為亞類(b)的式6中間產(chǎn)物，即式(27)的化合物
(其中Ar′不是呋喃或噻吩橋連部分)，可采用與現(xiàn)有技術(shù)類似的一般方法進(jìn)行制備。一般來(lái)說(shuō)，可按以下反應(yīng)路線制備該中間產(chǎn)物
其中R9′的定義同式Ⅰ中R9的定義(不為OH)，Q′為碘、溴、甲苯磺酸酯、甲磺酸酯或三氟甲磺酸酯離去基團(tuán)，n為1-5的整數(shù)?？s合反應(yīng)是在堿(如NaH、K2CO3或KH)存在下按本技術(shù)領(lǐng)域已知的方法在非水溶劑(如DMF、THF或TMSO中進(jìn)行。在其中n為2這一具體條件下，將甲酚(即鄰、間或?qū)追?與碳酸亞乙酯在KF存在下進(jìn)行反應(yīng)，得到苯甲酸基乙基-1-醇醚，然后在堿存在下于三苯膦(Pφ3)的苯溶液中，通過(guò)與溴反應(yīng)將其轉(zhuǎn)變?yōu)槠?-溴衍生物，得到苯甲酸基乙基溴，按一般方法將其與式(17)鋰衍生物反應(yīng)，得到其中n為2的化合物(30a)。
當(dāng)然，當(dāng)n為O且X和Y均為H時(shí)，最好利用其中Q為甲苯磺酸酯(化合物29)的方法，用存在于DMF中的NaH作為堿。
若需要制備其中Z為亞類(C)的式6化合物，即式31化合物
(其中Ar、X、Y、R5和R6的定義同式Ⅰ)，可采用與現(xiàn)有技術(shù)類似的方法進(jìn)行制備。
當(dāng)其中Y為H、X為H、F或Cl時(shí)，按照以下反應(yīng)路線，將芳基醛(32)與X取代的二膦酸酯的鋰衍生物(33)進(jìn)行縮合
該反應(yīng)于-78℃在THF中進(jìn)行，冷卻前將該混合物溫?zé)嶂良s20℃，然后用飽和NH4Cl水溶液進(jìn)行水解。當(dāng)Y為F、X為H、F或Cl時(shí)，在約40-80℃溫度下于非反應(yīng)性溶劑(DMF或DMSO)中，使亞類(a)化合物(即其中X′為F或Cl的化合物(35))與堿(最好是tBuOK、DMAP的DBU)反應(yīng)進(jìn)行制備。在該反應(yīng)中，通過(guò)脫去X而產(chǎn)生雙鍵。選擇化合物的合適類似物并按照前機(jī)的方法用堿進(jìn)行處理，在脫去HF或HCl后就可制得所需Y和X的化合物(34a)。該反應(yīng)如下所示
當(dāng)需要制備其中Z為亞類(d)的式6中間產(chǎn)物，即式36化合物時(shí)，
于0-20℃，在CH2Cl2中使式(24)化合物與2當(dāng)量DAST反應(yīng)1-5小時(shí)，然后用過(guò)量甲醇處理，可以制得所需產(chǎn)物36。
當(dāng)需要制備其中Z代表亞類(e)的式6化合物，即式37化合物時(shí)
可用式38化合物按一步或二步烯化法進(jìn)行制備。
在一步方法中，Wittig型烯化方法是將式39的磷
與式38化合物(尤其當(dāng)X和Y為F時(shí))反應(yīng);反應(yīng)在-78-0℃于THF中進(jìn)行，該反應(yīng)產(chǎn)生雙鍵?；蛘?，用下式反應(yīng)物(40)
(其中Het為-Sφ、SiMe3、Se、-SMe或SeMe)取代反應(yīng)物39，反應(yīng)后產(chǎn)生式(41)化合物
當(dāng)Het為SiMe3時(shí)，使用Peterson烯化反應(yīng)。(a)，于0-60℃在DMF中使化合物41與NaH反應(yīng);或者(b)，在高溫下使化合物41與酸(如PTSA(對(duì)甲苯磺酸))反應(yīng)。當(dāng)Het不是SiMe3時(shí)，是在約-20℃～20℃的溫度下，在CH2Cl2中使化合物41與含有Et3N或吡啶的PI3或SOCl2、POCl2反應(yīng)。
以下所述的方法可用于制備本發(fā)明的化合物。
合成1〔2〔2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-1，1-二氟乙基〕膦酸制備1A〔2〔2-甲基苯基〕-1，1-二氟乙基〕膦酸二乙酯于-78℃在氬氣和攪拌下，將溶于30ml無(wú)水四呋喃(THF)的30mmol(5.64g)二氟甲烷膦酸二乙酯緩慢加至二異丙基氨基鋰(LDA)的溶液中(于0℃由31mmol正丁基鋰和30mmol二異丙胺于30ml無(wú)水THF中制得)。30分鐘后，向反應(yīng)混合物中加入45mmol(8.33g)2-溴-鄰二甲苯。于-78℃攪拌15小時(shí)后加入20ml氯化銨的飽和水溶液。將粗制混合物蒸發(fā)至干;殘余物懸浮于50ml水中，然后用100ml乙酸乙酯萃取3次。有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥、過(guò)濾和蒸發(fā)得到8g粗產(chǎn)物，再經(jīng)硅膠快速層析純化，得到3.6g1A(產(chǎn)率為41%)。
制備1B〔2〔2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氫-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-1，1-二氟乙基〕膦酸二乙酯將N-(溴-琥珀酰亞胺(3mmol，0.53g)和過(guò)氧苯甲酰(5mg)加到溶液1A(3mmol，0.88g，于20ml四氯化碳中)中。該混合物在燈加熱下回流90分鐘，直至出現(xiàn)固體琥珀酰亞胺。反應(yīng)混合物經(jīng)過(guò)濾除去琥珀酰亞胺，濾液蒸發(fā)至干，得到1.1g油狀物。在攪拌下將該油狀物加到6-氯-烏嘌呤鈉鹽的溶液(于20℃在氬氣下將3.2mmol氫化鈉加到3.9mmol6-氯鳥嘌呤的5ml DMF溶液中制得)中。該反應(yīng)混合物于20℃攪拌20小時(shí)，經(jīng)減壓蒸發(fā)，并通過(guò)硅膠快速層析純化，得到1.15g所需的1B(42%)。
制備1〔2〔2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-1，1-二氟乙基〕膦酸于20℃在氬氣和攪拌下將4mmol(0.5mol)溴化三甲基甲硅烷(TMSBr)加到1C(0.6g，1.3mmol)在5ml無(wú)水二氯甲烷的溶液中，反應(yīng)混合物攪拌20小時(shí)，向其中加入0.5mlTMSBr。20小時(shí)后蒸發(fā)反應(yīng)混合物，殘余物溶于3ml乙腈中，并加入約0.2ml水。
蒸發(fā)混合物，殘余物在7ml 1NHCl中的溶液于100℃加熱20小時(shí)。蒸發(fā)混合物，并在熱水中兩次重結(jié)晶后得到200mg產(chǎn)物(產(chǎn)率38%;母液中所含基本純的產(chǎn)物以后分離)。
合成2〔2〔2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-1，1-二氟乙烯基〕膦酸制備2A〔2〔2-甲基苯基〕-1-氟乙烯基〕膦酸二乙酯將溶于20ml無(wú)水THF的20mmol(6.72g)雙(二乙基膦酰)氟甲烷緩慢加到-78℃的二異丙基氨基鋰的溶液(于0℃將22mmol正丁基鋰加到22mmol二異丙胺的16mlTHF溶液中制得)中。于-78℃保持30分鐘后，向反應(yīng)混合物中加入30mmol(3.5ml)新蒸餾的鄰甲苯甲醛的20mlTHF溶液，于-78℃攪拌2小時(shí)、于20℃攪拌5小時(shí)，加入20ml氯化銨飽和水溶液，并蒸發(fā)至干。殘余物懸浮于30ml水中，并用100ml乙酸乙酯萃取3次。有機(jī)層經(jīng)鹽水洗滌、硫酸鈉干燥、過(guò)濾和蒸發(fā)，得到5g粗品，再通過(guò)硅膠快速層析純化，得到70mmol2A(50%)。
制備2D〔2〔2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氯-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-1-氟乙烯基〕膦酸二乙酯將過(guò)氧苯甲酰(10mg)加到NBS(10mmol)和2A(10mmol)的15ml無(wú)水四氯化碳懸浮液中。混合物用燈加熱回流至所有固體浮起。反應(yīng)混合物經(jīng)過(guò)濾和蒸發(fā)，得到油狀的2C，再將其溶于4ml無(wú)水DMF中，并在攪拌下加到6-氯-烏嘌呤鈉鹽的溶液(于20℃在氬氣下將10mmolNaH(60%溶液，W/V)加到10mmol6-氯-鳥嘌呤的10ml無(wú)水DMF溶液中制得)中。于20℃保溫20小時(shí)后將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干，粗制的殘余物經(jīng)硅膠快速層析直接純化，得到4mmol產(chǎn)物2D(產(chǎn)率為40%)。
制備2〔2〔2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-1-氟乙烯基〕膦酸按照將1C轉(zhuǎn)變?yōu)?所述的方法由2D制備2。
合成3〔2〔2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-1，1，2-三氟乙基〕膦酸制備3A〔2-羥基-2-(2-甲基苯基)1-二氟-乙基〕膦酸二乙酯于-78℃在氬氣和攪拌下，將溶于42ml無(wú)水THF的42.5mmol二乙基氧膦基二氟甲烷(8g)緩慢加到新制備的二異丙基氨基鋰(42.5mmol)于40mlTHF的溶液中。反應(yīng)混合物于-78℃攪拌35分鐘，并向其中加入溶于42mlTHF的7.65g鄰甲苯甲醛(63.75mmol)，于-78℃攪拌4小時(shí)，然后于-78℃加入40ml氯化銨飽和水溶液。減壓蒸發(fā)，殘余物懸浮于水中，用200ml乙酸乙酯萃取3次。有機(jī)層經(jīng)鹽水洗滌、硫酸鈉干燥、過(guò)濾、蒸發(fā)和通過(guò)硅膠快速層析純化，得到10.67g3A，為白色結(jié)晶(產(chǎn)率81%)。
制備3B〔2-氟-2-(2-甲基苯基)1，1-二氟乙基〕膦酸二乙酯于20℃在氬氣和攪拌下，將2.3ml二乙氨基三氟化硫(DAST)滴加到3A(4.6g，15mmol)的20ml無(wú)水二氯甲烷溶液中。于20℃反應(yīng)2小時(shí)后，于0℃向反應(yīng)混合物中緩緩加入過(guò)量的甲醇(5ml)，蒸發(fā)至干，并通過(guò)硅膠快速層析直接純化，得到4.22g產(chǎn)物3B(產(chǎn)率91%)。
制備3C〔2〔2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氯-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-1，1，2-三氟乙基〕膦酸二乙酯按照由1B制備1C所述的方法使3B溴化，并隨后與6-氯鳥嘌呤縮合。
制備3〔2〔2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-1，1，2-三氟乙基〕膦酸按照由1C制備1所述的方法，用TMSBr/CH2Cl2和1NHCl的水溶液脫去保護(hù)后分離出最終產(chǎn)物3。
合成4〔2〔2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-2-羥基-1，1-二氟乙基〕膦酸制備4A〔2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-(2-甲基苯基)1，1-二氟乙基〕膦酸二乙酯于-78℃在氬氣下，將溶于25ml無(wú)水THF的二乙基氧膦基二氟甲烷(4.7g，25mmol)滴加到二異丙基氨基鋰(LDA)的溶液(于0℃將25mmol)正丁基鋰與25mmol二異丙基胺在25mlTHF中反應(yīng)制得)中。于-78℃保持35分鐘后，向反應(yīng)混合物中加入鄰甲苯甲醛(30mmol，3.6g)的20ml無(wú)水THF溶液。于-78℃保持3小時(shí)后，向反應(yīng)混合物中再加入30mmol氯化叔丁基二甲基甲硅烷，于-20℃攪拌2小時(shí)，加入10ml水，蒸發(fā)，用120ml乙酸乙酯萃取3次。收集有機(jī)層，經(jīng)硫酸鈉干燥、過(guò)濾、蒸發(fā)和通過(guò)硅膠快速層析純化，得到8.8g產(chǎn)物4A(21mmol，產(chǎn)率為84%)。
制備4B〔2-(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-〔2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-1，1-二氟乙基〕膦酸二乙酯按照將1A轉(zhuǎn)變?yōu)?C所述的方法由4A制備4B。
制備4C〔2-(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-2-羥基-1，1-二氟乙基〕膦酸二乙酯在攪拌下將12mmol(3.85g)氟化四丁基銨一次加入4B(6mmol)在150mlTHF的溶液中。于20℃攪拌20小時(shí)，蒸發(fā)至干，并通過(guò)硅膠快速層析純化，得到4.8mmol4C(產(chǎn)率為80%)。
制備4〔2〔2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-2-羥基-1，1-二氟乙基〕膦酸通過(guò)所述的兩個(gè)化學(xué)脫去保護(hù)步驟(TMSBr;H3O+)由4C得到化合物4。
合成5〔2-〔2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-2，2-二羥基-1，1-二氟乙基〕膦酸由4C制備5A〔2-〔2-(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-2-羥基-1，1-二氟乙基膦酸二乙酯于-65℃在氬氣和攪拌下，將溶于25ml無(wú)水二氯甲烷的60mmol(4.3ml)DMSO滴加到30ml草酰氯(26ml)在25ml無(wú)水二氯甲烷的溶液中。反應(yīng)混合物于-65℃攪拌5分鐘，加入溶于25mlCH2Cl2的20mmol4C。從冷卻浴中移出反應(yīng)瓶幾分鐘，然后于-65℃再次攪拌該混合物15分鐘，同時(shí)向其中加入100mmol(13.8ml)三乙胺，于-65℃攪拌10分鐘，加入檸檬酸水溶液，于20℃攪拌幾分鐘，用二氯甲烷(3×75ml)萃取，再經(jīng)過(guò)鹽水洗滌、Na2SO4干燥、過(guò)濾、蒸發(fā)和通過(guò)硅膠快速層析純化，得到13.5mmol產(chǎn)物4C(67%)。
制備5〔2〔2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕-2，2-二羥基-1，1-二氟乙基〕膦酸按照由1C制備1所述的兩個(gè)脫去保護(hù)步驟，由5A制得最終產(chǎn)物5。
合成6〔3-〔2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氯-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯氧基〕-1，1-二氟丙基〕膦酸制備6A3-(2-甲基苯氧基)-1-丙醇將300mmol鄰甲酚、334mmol碳酸亞乙酯和325mmol氟化鉀加到100ml無(wú)水DMF中，并于125℃在氬氣下攪拌50小時(shí)，再向其中加入40mmol碳酸亞乙酯和40mmolKF，然后于125℃再攪拌24小時(shí)。
將反應(yīng)混合物冷卻至20℃，過(guò)濾和蒸發(fā)。殘余物通過(guò)硅膠快速層析純化，得到38.6g所需產(chǎn)物(產(chǎn)率85%)。
制備6B3-(2-甲基苯氧基)-1-溴丙烷在攪拌下將10g(62.5mmol)溶于30ml苯(或乙腈)的溴緩慢加到三苯膦(64mmol)的100ml苯(或乙腈)溶液中。15分鐘后，向其中加入溶于35ml苯(或乙腈)的三乙胺(64mmol)，再加入溶于50ml苯(或乙腈)的起始物6A(9.68g;63.7mmol)。反應(yīng)混合物于20℃攪拌20小時(shí)，通過(guò)過(guò)濾(以除去大部分氧化三苯膦)、蒸發(fā)和硅膠快速層析純化，得到9.8g所需產(chǎn)物。
制備6C〔3-(2-甲基苯氧基)-1，1-二氟丙基〕膦酸二乙酯于-78℃在氬氣和攪拌下，將溶于30ml無(wú)水THF的30mmol(5.64g)O，O-二乙基膦酸二氟甲酯緩慢加到37mmolLDA溶液(由31mmol正丁基鋰和31mmol二異丙胺在30mlTHF中制得)中。反應(yīng)混合物于-78℃攪拌30分鐘，向其中加入溶于10ml無(wú)水THF的起始物6B(20mmol)。于-78℃繼續(xù)攪拌3小時(shí)，將溫度緩慢升至20℃，加入氯化銨飽和水溶液。蒸發(fā)粗制混合物并用乙酸乙酯萃取。收集有機(jī)層，經(jīng)水和鹽水洗滌、硫酸鈉干燥、過(guò)濾、蒸發(fā)和通過(guò)硅膠快速層析純化得到40%(16mmol)所需縮合產(chǎn)物。
制備6D〔3-〔2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氯-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯氧基〕-1，1-二氟丙基〕膦酸二乙酯溶于15ml無(wú)水四氫化碳的6mmol起始物6C與6mmolN-溴琥珀酰亞胺和幾毫克過(guò)氧苯甲酰一起用燈加熱35分鐘。過(guò)濾粗品以除去琥珀酰亞胺，濾液蒸發(fā)至干，溶于8ml無(wú)水DMF，于20℃在氬氣下與6.5mmol6-氯-鳥嘌呤和13mmol碳酸鉀一起攪拌24小時(shí)。將混合物蒸發(fā)至干，殘余物懸浮于50ml乙酸乙酯中，經(jīng)氯化銨和鹽水洗滌、硫酸鈉干燥、過(guò)濾、蒸發(fā)和通過(guò)硅膠快速層析純化，得到3mmol所需產(chǎn)物。
制備6〔3〔2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氯-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯氧基〕-1，1-二氟丙基〕膦酸于20℃在氬氣和攪拌下，將新蒸餾的9mmolTMSBr緩慢加到溶于10ml無(wú)水二氯甲烷的起始物6D(3mmol)的溶液中。反應(yīng)混合物于20℃攪拌20小時(shí)，將混合物蒸發(fā)至干。殘余物溶于8ml無(wú)水乙腈中，并加入10mmol水。過(guò)濾分離和收集所形成的白色沉淀，得到所需產(chǎn)物，它不經(jīng)進(jìn)一步純化可直接用于以下步驟。
將溶于10ml1NHCl和2mlTHF的2mmol起始物于90-100℃加熱20小時(shí)。然后冷卻至20℃，蒸發(fā)至干，并溶于三乙銨重碳酸鹽飽和水溶液，過(guò)濾，并通過(guò)加入1NHCl使析出結(jié)晶。
收集白色固體，經(jīng)減壓干燥后得到1.7mmol所需產(chǎn)物，為半水合物。
合成7〔2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯氧基〕甲基磷酸制備7A2-甲基苯氧基甲基膦酸二乙酯于20℃在氬氣和攪拌下，將氫化鈉(8mmol于油中的60%懸浮液)加到溶于10ml無(wú)水DMF的鄰甲酚(8mmol，864mg)溶液中。45分鐘后，向反應(yīng)混合物中加入溶于3mlDMF的O，O-二乙基甲基膦酸酯甲苯磺酸酯衍生物(8mmol，2.54g)，于60℃攪拌20小時(shí)，再經(jīng)過(guò)減壓蒸發(fā)和硅膠快速層析純化，得到1.1g產(chǎn)物(產(chǎn)率69%)。
合成7B〔2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氯-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯氧基〕甲基磷酸二乙酯將膦酸酯7A(1.03g，4mmol)、N-溴琥珀酰亞胺(4.2mmol;743mg)和幾毫克過(guò)氧苯甲酰置于10mlCCl4中，并在加熱燈下加熱回流。35分鐘后，反應(yīng)混合物經(jīng)過(guò)濾和蒸發(fā)，得到1.3g油狀物，將其溶于3ml無(wú)水DMF，并于20℃在氬氣和攪拌下將溶液加到6-氯鳥嘌呤(4.4mmol;745mg)和碳酸鉀(10mmol;1.38g)的6ml無(wú)水DMF懸浮液中。40分鐘后，減壓蒸發(fā)反應(yīng)混合物，并通過(guò)硅膠快速層析純化，得到1.25g所需產(chǎn)物(產(chǎn)率為74%)。
制備7〔2-〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯氧基〕甲基磷酸用TMSBr進(jìn)行化學(xué)脫去保護(hù)，然后按所述方法進(jìn)行水解，得到標(biāo)題化合物。
合成8〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕-苯基〕1，1-二氟-2-丙烯基〕膦酸制備8A〔2-[2-甲基苯基〕1，1-二氟氧乙基〕膦酸二乙酯以保持溫和回流的速率，在攪拌下將溶于50ml二甲氧基乙烷(DME)的50mmol(13.35g)溴二氟甲烷膦酸O，O-二乙酯緩慢加到剛活化的鋅(55mmol)在15mlDME的懸浮液中。反應(yīng)混合物于20℃攪拌20小時(shí)，然后向其中加入溶于15mlDME的60mmol氯化鄰甲苯甲酸(25g)，并于20℃攪拌20小時(shí)。用硅藻土過(guò)濾粗產(chǎn)物，濾液蒸發(fā)至干并通過(guò)硅膠快速層析純化，得到30mmol產(chǎn)物8A(產(chǎn)率60%)。
制備8B〔2-[2-甲基苯基〕1，1-二氟-2-丙烯基〕膦酸二乙基于-78℃在氬氣和攪拌下，將35mmol正丁基鋰(21.8ml1.6N己烷溶液)緩慢加到35mmol溴化甲基三苯鏻的50mlTHF懸浮液中。反應(yīng)混合物于0℃攪拌2小時(shí)，再于-78℃向其中加入溶于30mlTHF的30mmol化合物8A。于-78℃攪拌2小時(shí)、0℃攪拌2小時(shí)后，用飽和氯化銨水溶液使反應(yīng)混合物水解。粗產(chǎn)物減壓蒸發(fā)后用100ml乙酸乙酯萃取3次。經(jīng)過(guò)常規(guī)處理和硅膠快速層析純化，得到18mmol8B(產(chǎn)率60%)。
制備8C〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氯-9H-嘌呤-9-基)甲基〕-苯基〕1，1-二氟-2-丙烯基〕膦酸二乙酯按照由1B制備1C所述的方法將8B溴化，然后與6-氯鳥嘌呤縮合。
制備8〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基〕-苯基〕1，1-二氟-2-丙烯基〕膦酸按照由1C制備1所述的方法，用TMSBr/CH2Cl2和1NHCl的水溶液脫去保護(hù)后，從8C分離出最終產(chǎn)物8。
合成9〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基-苯基〕乙炔基〕膦酸制備9A〔2-[2-甲基苯基〕-2-氧代乙烷膦酸二乙酯于-78℃在氬氣和攪拌下，將100mmol正丁基鋰緩慢加到溶于100mlTHF的100mmol甲基膦酸二乙酯溶液中。于-78℃攪拌2小時(shí)后，向反應(yīng)混合物中加入溶于50mlTHF的50mmol鄰甲苯甲酸甲酯，于-78℃攪拌20小時(shí)，0℃攪拌小時(shí)，然后用氯化銨飽和水溶液進(jìn)行水解。經(jīng)常規(guī)處理和硅膠快速層析純化，得到45mmol產(chǎn)物9A(產(chǎn)率為90%)。
制備9B〔2-[2-甲基苯基〕乙炔基膦酸二乙酯于0℃將61mmol(8ml)二乙氨基三氟化硫(DAST)緩慢加到30mmol9A的50ml無(wú)水二氯甲烷溶液中。反應(yīng)混合物于20℃攪拌30小時(shí)，于0℃緩緩加入過(guò)量甲醇(5ml)。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干并直接通過(guò)硅膠快速層析純化，得到24mmol產(chǎn)物9B(產(chǎn)率80%)。
制備9C〔2-[2〔(2-氨基-1，6-二氫-6-氯-9H-嘌呤-9-基)甲基〕苯基〕乙炔基〕膦酸二乙酯按照由1B制備1C的方法，將9B溴化，然后與6-氯-鳥嘌呤縮合。
制備9〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基苯基〕乙炔基〕膦酸于20℃在氬氣和攪拌下，將20mmol(2.5ml)TMSBr加到9C(5mmol)在25ml無(wú)水二氯甲烷的溶液中。反應(yīng)混合物攪拌20小時(shí)，并通過(guò)減壓蒸發(fā)。殘余物溶于20ml乙腈，加入0.5ml水后沉淀出白色固體。過(guò)濾收集白色固體，并將其溶于15ml0.2NHCl和6mlTHF的混合液中，于60℃將該溶液加熱8小時(shí)，冷卻結(jié)晶后得到最終產(chǎn)物9(1.4mmol，產(chǎn)率28%)。
合成10〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基苯基〕乙烯基〕膦酸制備10B〔2-〔2-甲基苯基〕-乙炔基〕膦酸二乙酯于15℃在氬氣下，將溶于25ml無(wú)水四氫呋喃的38mmol(10.95g)雙(二乙基膦酰)甲烷緩慢加到NaH(42mmol)的20ml無(wú)水四氫呋喃懸浮液中。45分鐘后，于0℃向該反應(yīng)混合物中加入溶于40ml四氫呋喃的38mmol(4.6g)鄰甲苯甲醛。于20℃攪拌18小時(shí)后，向該粗反應(yīng)混合物中加入20ml氯化銨飽和水溶液，然后蒸發(fā)至干。殘余物懸浮于35ml水中，并用100ml乙酸乙酯萃取3次，有機(jī)層經(jīng)鹽水洗滌、硫酸鈉干燥、過(guò)濾和蒸發(fā)，得到11g粗品，再通過(guò)硅膠快速層析純化，得到7.53g產(chǎn)物10A(產(chǎn)率75%)。
制備10B〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氯-9H-嘌呤-9-基)甲基]苯基〕乙烯基〕膦酸二乙酯將過(guò)氧苯甲酰(20mg)加到N-溴琥珀酰亞胺(20mmol)和〔2-〔2-甲基苯基〕-乙烯基〕膦酸二乙酯(20mmol)的15ml無(wú)水四氯化碳懸浮液中。用燈加熱回流混合物至所有固體浮起。過(guò)濾反應(yīng)混合物并蒸發(fā)，得到油狀物，然后將其溶于10ml無(wú)水二甲基甲酰胺中，在攪拌下將其加到6-氯-鳥嘌呤鈉鹽的溶液(于20℃在氬氣下將20mmolNaH加到20mmol6-氯-鳥嘌呤的10ml無(wú)水二甲基甲酰胺溶液中制得)中，反應(yīng)混合物于20℃攪拌20小時(shí)，蒸發(fā)至干，粗制殘余物直接通過(guò)硅膠快速層析純化，得到12mmol產(chǎn)物10B(產(chǎn)率60%)。
制備10〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲基苯基〕乙烯基〕膦酸按照合成1中將1B轉(zhuǎn)化為1時(shí)所述的方法;由10B制備10。
生物應(yīng)用本發(fā)明化合物作為免疫抑制劑、抗淋巴瘤劑、抗白血病劑、抗病毒劑、抗原生動(dòng)物劑以及作為治療痛風(fēng)、牛皮癬和自體免疫疾病藥劑的性能可由其抑制嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)的能力加以證實(shí)?？砂凑誎alckar的偶聯(lián)黃嘌呤氧化酶法，使用肌苷作為底物測(cè)定嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)抑制活性(H.M.Kalckar，J.Biol，Chem.167，429-443(1974)〕。使用0.1MHEPES緩沖液(PH7.4)、范圍在0.05mM至0.15mM4個(gè)濃度的肌苷以及各種濃度的抑制劑，以1mM無(wú)機(jī)磷酸鹽測(cè)定表觀離解常數(shù)(K)。表1列出了式Ⅰ的代表性化合物的Ki，并與底物肌苷的Km值進(jìn)行了比較(利用各種來(lái)源的PNP)。而且，本發(fā)明的化合物已顯示出能夠有效地抗淋巴瘤(人MoLT-4細(xì)胞)，因此具有抗淋巴瘤活性和抗白血病活性。天然代謝產(chǎn)物2′-脫氧鳥苷(約1-10um)的存在對(duì)抗培養(yǎng)基中淋巴瘤細(xì)胞的活性似乎是重要的。
就免疫系統(tǒng)的抑制來(lái)說(shuō)，這里所用的術(shù)語(yǔ)“患者”指哺乳動(dòng)物，如小鼠、大鼠、貓、狗、牛、羊、豬和靈長(zhǎng)類(包括人)。就治療寄生性感染來(lái)說(shuō)，術(shù)語(yǔ)“患者”不僅包括哺乳動(dòng)物，而且還包括其它溫血?jiǎng)游铮缜?包括雞和火雞)。
術(shù)語(yǔ)“原生動(dòng)物”包括原生動(dòng)物門中的肉足鞭毛亞門和孢子蟲亞門。尤其是包括寄生性原生動(dòng)物屬，由于它們?cè)谌嘶蚣茵B(yǎng)動(dòng)物中引起疾病，因而對(duì)人類來(lái)說(shuō)很重要。按照Baker(1969)的分類，已發(fā)現(xiàn)這些屬中的大部分屬于肉足鞭毛亞門中的鞭毛綱和孢子蟲亞門中的晚孢子蟲綱。其例子有組織滴蟲屬、錐蟲屬、賈第蟲屬、毛滴蟲屬、艾美球蟲屬、同形孢子蟲屬、弓漿蟲屬和瘧原蟲屬。
事實(shí)上，本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案是將這些化合物作為抗原生動(dòng)物劑用于治療商用家禽的腸道球蟲。腸道球蟲感染每年使美國(guó)家禽工業(yè)損失數(shù)百萬(wàn)美元。由于球蟲迅速形成抗藥性并且由于應(yīng)用治療球蟲病的某些藥物具有較高的毒性，因此迫切需要一種無(wú)毒性并且使腸道球蟲不易形成抗藥性的有效的抑制球蟲劑。
盡管免疫系統(tǒng)是抵抗引起疾病物質(zhì)的主要防御系統(tǒng)，但它不能夠區(qū)別有用和有害的外來(lái)物質(zhì)，而是將它們統(tǒng)統(tǒng)破壞。在許多情況下，如果有一種不損害個(gè)體的，調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的方式將是非常有用的。本發(fā)明的化合物顯示出這種調(diào)節(jié)作用，可用于治療各種免疫疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和紅斑狼瘡。
抗體循環(huán)和細(xì)胞免疫反應(yīng)在移植組織和器官的排斥反應(yīng)中起作用。除非供者與受者是單卵性雙生胎或者是其本身，否則受者的淋巴細(xì)胞將移植物識(shí)別為“非自身”并立即反應(yīng)，將其摧毀。唯一例外的情況是將移植物到非血管化區(qū)域(特許位點(diǎn))(如眼角膜)，此處沒(méi)有淋巴細(xì)胞循環(huán)，因而不會(huì)致敏和不會(huì)引起免疫反應(yīng)。通過(guò)其它方式抑制免疫反應(yīng)以防止移植物的排斥反應(yīng)并且不嚴(yán)重?fù)p害患者現(xiàn)在是很困難的。由于患者自身的抗感染防御系統(tǒng)已被抑制，因此還必須給予患者大劑量的抗生素。本發(fā)明的化合物在通過(guò)免疫系統(tǒng)的控制調(diào)節(jié)對(duì)移植物產(chǎn)生耐受性方面是有價(jià)值的。另外，這些化合物還具有抗病毒活性。
根據(jù)所用的具體劑量單位、治療期、患者的年令和性別、所治療疾病的性質(zhì)和程度，所服用的活性成分的劑量可在很寬的范圍內(nèi)變動(dòng)。所服用活性成分的總量一般約為1mg/kg-100mg/kg，最好是3mg/kg-25mg/kg。一個(gè)劑量單位可含有25-500mg活性成分，并且每天可服用1次或多次?？砂闯Ｒ?guī)劑量單位形式(口服、非經(jīng)胃腸道服用或局部給藥)將式Ⅰ活性化合物與藥用載體一起服用。優(yōu)選將2-脫氧鳥苷與本發(fā)明的化合物結(jié)合服用。可使用任何有效、無(wú)毒性劑量的2-脫氧鳥苷，通常按約0.5-50mg/kg/day的劑量服用。申請(qǐng)人不僅想到含有2-脫氧鳥苷和式Ⅰ化合物的上述劑量形式，而且還想到單獨(dú)的劑量形式。本發(fā)明化合物也可按獨(dú)立的劑量單位服用。
優(yōu)選的服用途徑是口服?？诜r(shí)可將本發(fā)明的化合物配制成固體或液體制劑，例如膠囊劑、丸劑、片劑、錠劑、糖錠、熔融劑、粉劑、溶液劑、懸浮液劑或乳劑。固體單位劑量形式可以是具有普通硬殼或軟殼明膠膠囊劑，它含有例如表面活性劑、潤(rùn)滑劑和惰性填料(如乳糖、蔗糖、磷酸鈣和玉米淀粉)。在另一實(shí)施方案中，是將本發(fā)明化合物與普通的片劑基質(zhì)(如乳糖、蔗糖和玉米淀粉)與粘合劑(阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠)、用于促進(jìn)片劑服用后破裂和溶解的崩解劑(如土豆淀粉、藻酸、玉米淀粉和瓜耳膠)、用于改善片劑顆粒流動(dòng)性和防止片劑材料粘著于壓片模和壓片沖頭表面的潤(rùn)滑劑(如滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或硬脂酸鋅)、用于增強(qiáng)片劑美感并使其更易于被患者接受的染料、著色劑和調(diào)味劑一起壓制成片劑。用于口服液體劑型的合適賦形劑包括稀釋劑，如水和醇(如乙醇、芐醇、聚乙二醇)，其中加有或未加可藥用的表面活性劑、懸浮劑或乳化劑。
也可非經(jīng)胃腸道服用本發(fā)明化合物，即皮下給藥、靜脈內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、或腹膜內(nèi)給藥，如本發(fā)明化合物與生理上適用的稀釋劑和藥用載體配制成的注射劑，藥用載體可以是無(wú)菌液體或液體混合物，如水，鹽水，葡萄糖及相關(guān)糖的水溶液，醇(如乙醇，異丙醇或十六烷醇)，二元醇(如丙二醇或聚乙二醇)，縮丙三醇(如2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)-4-甲醇)，醚(如聚-(乙二醇)400)，油，酯肪酸，脂肪酸酯或甘油酯，或乙?；舅岣视王ァＦ渲屑佑谢蛭醇涌伤幱帽砻婊钚詣?如肥皂)或去垢劑、懸浮劑(如果膠、聚酸乙烯、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素或羧甲基纖維素)、乳化劑及其它藥用輔助劑?？捎糜诒景l(fā)明非經(jīng)胃腸道配方的油的例子有來(lái)自石油、動(dòng)物或植物的油或合成的油，如花生油、黃豆油、芝麻油、棉子油、玉米油、楊欖油、礦脂和礦物油。合適的脂肪酸包括油酸、硬脂酸和異硬脂酸。合適的脂肪酸酯有油酸乙酯和肉豆蔻動(dòng)酸異丙酯。合適的肥皂包括脂肪堿金屬、銨和三乙醇胺鹽。合適的去垢劑包括陽(yáng)離子去垢劑(如鹵化二甲基二烷基銨、鹵化烷基吡啶鎓和乙酸烷基胺)陰離子去垢劑(如烷基、芳基和烯烴基磺酸酯，烷基、烯烴基、乙醚和單酸甘油酯，硫酸酯以及硫代琥珀酸酯);兩性去垢劑(如β-氨基丙酸烷基酯和2-烷基咪唑啉季銨鹽)以及其混合物。本發(fā)明非經(jīng)胃腸道組合物通常為含有約0.5-25%(重量)活性成分的溶液。使用防腐劑和緩沖液也是有益的。為了減小或消除對(duì)注射位點(diǎn)的刺激，這類組合物可含有親水親油平衡值(HLB)約為12-17的非離子型表面活性劑，其含量為5-15%(重量)。表面活性劑可以是具有上述HLB的單一成分或者是具有所需HLB的兩種或多種成分的混合物。用在非經(jīng)胃腸道配方中的表面活性劑的例子是聚乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯，如脫水山梨醇單油酸酯以及環(huán)氧丙烷與丙二醇縮合而形成的環(huán)氧乙烷與疏水基質(zhì)的大分子量加合物。
含有本發(fā)明化合物的氣溶液或噴霧組合物可施用于皮膚和粘液膜。這類組合物可含有式Ⅰ化合物的微?；腆w或溶液，并且還可含有溶劑、緩沖液、表面活性劑、香料、抗微生物劑、抗氧化劑和推進(jìn)劑。可在加壓下借助推進(jìn)劑施用這類組合物，或者借助可壓縮塑料噴霧瓶、噴霧器或不使用氣體推進(jìn)劑的霧化器來(lái)施用這類組合物。優(yōu)選的氣溶膠或噴霧組合物是鼻噴霧劑。
活性成分也可以緩釋制劑服用，其中式Ⅰ化合物在治療期間通過(guò)載體的擴(kuò)散、滲透或崩解而以受控制的均勻速率逐步釋放。受控制的釋放藥物輸送系統(tǒng)可以補(bǔ)片或繃帶的形式施用于皮膚、頰、舌下、鼻內(nèi)?；蛑踩胙勖す艿难鄄迦胛?，也可為口服逐步浸蝕的片劑或膠囊劑或胃腸長(zhǎng)效制劑。借助緩釋制劑給藥可使機(jī)體組織長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)受到治療有效量或預(yù)防有效量的式Ⅰ化合物的作用。以緩釋制劑服用的化合物的單位劑量約等于有效日劑量乘以載體在機(jī)體內(nèi)存在的最大天數(shù)。緩釋制劑的載體可以為固體、多孔基質(zhì)或貯器的形式，并可由一種或多種天然或合成聚合物制成，這類聚合物包括經(jīng)修飾或未修飾的纖維素、淀粉、明膠、膠原、橡膠、聚烯烴、聚酰胺、聚丙烯酸酯、聚醇、聚醚、聚酯、聚氨基甲酸乙酯、聚砜、聚硅氧烷和聚酰亞胺，以及這些聚合物的混合物或共聚物?？蓪⒓兊氖舰窕衔锛拥骄忈屳d體中，也可將其溶于任何合適的液體或固體載體中，包括形成緩釋載體的聚合物。
本發(fā)明的另一方面是在聯(lián)合治療中使用式Ⅰ嘌呤核苷磷酸酶抑制劑，以增強(qiáng)抗病毒核苷類似物的效力，否則它將受到嘌呤核苷磷酸化酶的作用。
具體地說(shuō)，本發(fā)明包括在聯(lián)合治療中使用式Ⅰ化合物治療逆轉(zhuǎn)象病毒感染，尤其是人，最主要的是人免疫缺陷病毒。優(yōu)選的2′，3′-二脫氧嘌呤核苷是2′，3′-二脫氧腺苷、2′，3′-二脫氧鳥苷、2′，3′-二脫氧硫代肌苷和2′，3′-二脫氧肌苷。
可按照現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法，例如Proc.Nat.Acad.Sei，U.S.A.83，1911(9186)中所述的方法，在受到逆轉(zhuǎn)錄病毒(如HIV)作用的細(xì)胞培養(yǎng)物(如H9細(xì)胞、ATH8細(xì)胞)中測(cè)定PNP抑制劑-二脫氧嘌呤核苷(如式Ⅰ化合物)的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒作用的增強(qiáng)效果。也可按照現(xiàn)有技術(shù)中所熟知的方法，預(yù)先或同時(shí)服用該P(yáng)NP抑制劑，通過(guò)體內(nèi)測(cè)定所得到的血漿中二脫氧嘌呤核苷水平的增加來(lái)確定該增強(qiáng)作用。
如果當(dāng)2′，3′-二脫氧嘌呤核苷存在時(shí)就有有效的PNP抑制作用，那么可以相同或不同途徑以相同或不同配方服用兩種活性成分(2′，3′-二脫氧嘌呤核苷和PNP抑制劑)，或者在獨(dú)立的時(shí)間點(diǎn)上服用上述兩種活性成分。服用活性成分的時(shí)間間隔取決于所獲得的PNP的量以及PNP抑制劑本身降解的速度。由于這些原因，優(yōu)選的劑量是一天2-4次均分劑量，最好將兩種藥劑同時(shí)服用。
已知作為抗病毒劑服用的嘌呤核苷衍生物將被嘌呤核苷磷酸化酶催化，不利地改變?cè)撝苿┑男ЯΑＪ聦?shí)上，催化將導(dǎo)致副作用。還已知本身不被嘌呤核苷磷酸化酶作用的抗病毒化合物(通過(guò)所熟知的機(jī)制，如脲苷脫氨酶的酶促作用，或者通過(guò)未知的機(jī)制)可以成為嘌呤核苷磷酸化酶的作用對(duì)象，從而同樣改變這類化合物的抗病毒作用的效果。由于這一原因，這兩類抗病毒劑均包括在經(jīng)受嘌呤核苷磷酸化酶作用的抗病毒劑這一術(shù)語(yǔ)之中。
本發(fā)明的這一方面也可表述為用經(jīng)受核苷磷酸化酶作用的抗病毒劑治療病毒感染的方法中，其改進(jìn)包括聯(lián)合服用治療上有效量的嘌呤核苷磷酸化酶抑制劑，尤其是包括本發(fā)明通式Ⅰ化合物在內(nèi)的抑制劑。
在本發(fā)明的一又方面，術(shù)語(yǔ)“抗病毒”包括治療病毒和由其引起的病疾-通常已知其適合用核苷類似物治療，例如引起艾滋病的HIV病毒、乙型肝炎病毒和皰疹病毒。
與PNP酶抑制劑進(jìn)行聯(lián)合治療以增強(qiáng)抗病毒效力的具體抗病毒劑是以下化合物(a)下式的二脫氧核苷
其中R1，R2，X 名稱靶病毒OH，H，H 二脫氧肌苷 HIVOH，NH2，H 二脫氧鳥苷 HIV，乙型肝炎病毒OH，NH2，F(xiàn) 3′-F-二脫氧鳥苷 HIVOH，NH2，N33′-疊氮基二脫氧鳥苷 HIV，乙型肝炎病毒NH2，NH2，H 二脫氧二氨基嘌呤核苷 HIV，HBVNH2，H，H 二脫氧腺苷 HIVNH2，NH2，N33′-疊氮基二脫氧二氨 HIV，HBV基嘌呤核苷最后三個(gè)化合物是腺苷脫氨酶的第一底物，(b)下式的二脫氧脫氫核苷
其中R1，R2名稱靶病毒OH，H 二脫氧脫氫肌苷 HIVOH，NH2二脫氧脫氫鳥苷 HIVNH2，H 二脫氧脫氫腺嘌呤 HIV(c)下式的二氧戊環(huán)嘌呤衍生物
其中當(dāng)R1和R2發(fā)生變化(其中R1為OH或NH2，R2為H或NH2)時(shí)，該化合物的靶病毒為HIV和HBV(即乙型肝炎)，(d)下式的氧雜環(huán)丁烷型衍生物
其中R1為OH或NH2，R2為H或NH2。靶病毒為HIV。
應(yīng)當(dāng)一提的是，當(dāng)今用于乙型肝炎(HBV)的兩種最好的抗病毒劑是二脫氧鳥苷(ddGuo)和2，6-二亞氨基二脫氧嘌呤核苷(它為二脫氧鳥苷的“藥物前體”)。
尤其有用的本發(fā)明化合物為下式的PNP抑制劑。
其中R3為H，Ar為2，3-噻吩、2，5-呋喃或3，4-呋喃，Z″為-CH2CF2-P(OH)2，且其中Ar為1，2-苯基，R3為H或NH2，Z″為CH2CF2-P(OH)2，CH2CHFPO(OH)2，CHFCF2PO(OH)2，CHOHCF2PO(OH)2，CH＝CFPO(OH)2，CH＝CHPO(OH)2，或COCF2PO(OH)2.
對(duì)于大部分化學(xué)治療劑來(lái)說(shuō)，其中的某一亞類或某一特定化合物往往比其它化合物更有益。對(duì)式IPNP抑制劑來(lái)說(shuō)，優(yōu)選的化合物是其中R1為OH、R2為NH2、R3為H或NH2、Ar為1，2-苯基或2，3-呋喃或噻吩、R5和R6為H的化合物。優(yōu)選的Z為其中X和Y為F、R4為H、R4′為H或F的(a);其中n為O、X和Y均為H的(b);其中X為F、Y為F或H的(c);其中X為F、Y為F或H的(d);其中X和Y為F、R7和R8為H的(e)。優(yōu)選的具體化合物為實(shí)例1-10的最終產(chǎn)物，以及其3-位氨基類似物。
權(quán)利要求
1.式Ⅰ化合物、其互變異構(gòu)體及其可藥用的鹽，
其中R為
其中Ar為橋連部分，其相鄰的CH2與一個(gè)環(huán)碳原子相連接，Z與R9取代的苯基、噻吩或呋喃基的第二個(gè)環(huán)碳原子相連接，Z為亞類(a)、(b)、(c)、(d)或(e)，其中
條件是當(dāng)Z為亞類(b)時(shí)，那么Ar不為呋喃或噻吩基，n為1-5的整數(shù)或0，R1為-OH或-SH，R2為H或-NH2，R3為H，-NH2，-OH或-NH-NH2，R4為H，R4′為H、OH或F，或R4和R4′與它們連接的碳原子一起形成一酮基，R5為C1～6烷基或R5′，R6為C1～6烷基或R6′，同時(shí)R5′和R6′為H，R7和R8、各自為H、F或C1～4烷基，R9為H、cl、Br、C1～6烷基、C1～6烷氧基、OH、NH2或CH3，條件是Ar為呋喃或噻吩時(shí)，R9不為OH或NH2，X和Y為H、F或Cl，條件是當(dāng)n為O時(shí)X和Y均為H。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R5和R6為H。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1為OH。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R2為NH2。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3為H。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R3為NH2。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中Ar為苯基或噻吩。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，Z為CHFCF2、CH＝CF或CH＝CH。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中R1為OH，R2為NH2，R3為H，Ar為苯基，Z選自-CH2CF2、-CH2CHF、-CHFCF2、CH(OH)CF2、-C(O)CF2、-CH＝CF和-CH＝CH。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中R1為OH，R2為NH2，R3為NH2，Ar為苯基，Z選自-CH2CF2、-CH2CHF、-CHFCF2、CH(OH)CF2、-C(O)CF2、-CH＝CF和-CH＝CH。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述的化合物選自〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)-甲基〕-苯基〕-1，1-二氟乙基〕膦酸，〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)-甲基〕-苯基〕-1-氟乙烯基〕膦酸，〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)-甲基〕-苯基〕-1，1，2-三氟乙基〕膦酸，〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)-甲基〕-苯基〕-2-羥基-1，1-二氟乙基〕膦酸，〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)-甲基〕-苯基〕-2，2-二羥基-1，1-二氟乙基〕膦酸，〔3-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氯-9H-嘌呤-9-基)-甲基〕-苯氧基〕-1，1-二氟丙基〕膦酸，〔2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)-甲基〕-苯氧基〕甲基膦酸，〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)-甲基〕-苯基〕-1，1-二氟-2-丙烯基〕膦酸，〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)-甲基〕-苯基〕乙炔基〕膦酸，〔2-[2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)-甲基〕-苯基〕乙烯基〕膦酸，
12.藥物組合物，它包括權(quán)利要求1的化合物，另外還可含有經(jīng)選擇的可藥用的載體或賦形劑。
13.治療原生動(dòng)物感染的方法，它包括給被感染動(dòng)物服用治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
14.治療病毒感染的方法，它包括給被感染動(dòng)物服用治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
15.治療痛風(fēng)的方法，它包括給患有痛風(fēng)的患者服用治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
16.在用2′，3′-二脫氧嘌呤核苷治療病毒感染的方法中，改進(jìn)之處包括聯(lián)合服用治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
17.在用2′，3′-二脫氧嘌呤核苷治療逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的方法中，改進(jìn)之處包括聯(lián)合服用治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
18.制備式Ⅰ化合物，其互變異構(gòu)體以及其可藥用鹽的方法，
其中R1為-CH2-Ar-Z-P(O)(OH)2，R為橋連部分，其相鄰的CH2與一個(gè)環(huán)碳子相連接，Z與R9-取代的苯基、噻吩或呋喃基的第二個(gè)環(huán)碳原子相連接，Z為亞類(a)、(b)、(c)、(d)或(e)，其中
條件是當(dāng)Z為亞類(b)時(shí)，那么Ar不為呋喃或噻吩基，n為1-5的整數(shù)或0，R1為-OH或-SH，R2為H或-NH2，R3為H，-NH2，-OH或-NH-NH2，R4為H，R4′為H、OH或F，或R4和R4′與它們相連的碳原子一起形成酮基，R7和R8各自為H、F或C1～4烷基，R9為H、Cl、Br、C1～6烷基、C1～6烷氧基、OH、NH2或CH3，條件是當(dāng)Ar為呋喃或噻吩時(shí)，R9不為OH或NH2，X和Y為H、F或Cl，條件是當(dāng)n為O時(shí)，X和Y均為H，該方法包括將下式化合物
(其中R″為
與溴化三甲基甲硅烷在一般的反應(yīng)條件下進(jìn)行反應(yīng)，并根據(jù)需要將反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌幱名}。
全文摘要
本發(fā)明涉及新型嘌呤核苷磷酸化酶抑制劑、它們的制備方法及其中間物，以及它們作為免疫抑制劑、抗淋巴病劑、抗白血病劑、抗病毒劑和抗原生動(dòng)物劑的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P31/12GK1058021SQ9110447
公開日1992年1月22日 申請(qǐng)日期1991年7月3日 優(yōu)先權(quán)日1990年7月4日
發(fā)明者S·赫拉茨, C·丹茲 申請(qǐng)人:默里爾多藥物公司