專利名稱：一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法及其制品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，涉及一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法及其制品，特別是涉及一種細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著微米級(jí)大孔的細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法及其制品，具體地說是以氯化鈉晶體作為致孔劑得到一種細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著微米級(jí)大孔的細(xì)菌纖維素支架材料的方法及其制品。
背景技術(shù)：
組織工程是應(yīng)用工程學(xué)和生命科學(xué)的原理與方法，將在體外培養(yǎng)、擴(kuò)增的功能相關(guān)的活細(xì)胞種植于多孔支架，細(xì)胞在支架上增殖、分化，構(gòu)建生物替代物，然后將之移植到組織病損部位，達(dá)到修復(fù)、維持或改善損傷組織功能的一門科學(xué)。其核心內(nèi)容是構(gòu)建一個(gè)由細(xì)胞和生物材料組成的一個(gè)三維復(fù)合體(組織或器官)。目前隨著組織工程的發(fā)展，作為組織工程三要素之一的生物支架材料越來越受到研究人員的重視，已經(jīng)成為影響組織工程發(fā)展的最重要環(huán)節(jié)。組織工程支架材料為細(xì)胞、組織的重建提供了必要的三維空間和力學(xué)支持，起到模擬細(xì)胞外基質(zhì)(Extra cellular matrix, ECM)的作用。具有良好的組織相容性；生物可降解性和適合的降解率；適合的孔徑和孔隙率，利于細(xì)胞的增殖和黏附，以及營養(yǎng)物質(zhì)的滲入和細(xì)胞代謝產(chǎn)物的排出。組織工程支架材料的發(fā)展經(jīng)歷了從微米級(jí)支架，微米級(jí)纖維支架到納米級(jí)纖維支架的過程。對(duì)于支架的構(gòu)建應(yīng)該在宏觀、微觀、納觀上同時(shí)進(jìn)行。這是因?yàn)橛赡z原蛋白、蛋白多糖、糖胺聚糖、層連蛋白和彈性蛋白等組成的體內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)是三維納米結(jié)構(gòu)(50 500nm)，ECM中存在納米尺度的孔、纖維和隆起。它不只具有連接、支持、保水、抗壓及保護(hù)等物理學(xué)作用，而且對(duì)細(xì)胞的基本生命活動(dòng)發(fā)揮全方位的生物學(xué)作用。因此組織工程支架材料應(yīng)該具有能夠模擬細(xì)胞外基質(zhì)的三維納米結(jié)構(gòu)。同時(shí)為了保證細(xì)胞的培養(yǎng)過程中能夠進(jìn)入材料內(nèi)部，組織工程支架材料還應(yīng)具有適合細(xì)胞增殖和黏附的微米級(jí)大孔(50 250 μ m)。細(xì)菌纖維素(Bacterial Cellulose, BC)作為一種優(yōu)良的生物材料，具有其獨(dú)特的物理、化學(xué)和機(jī)械性質(zhì)BC的微纖絲束直徑為3 4nm，而由微纖維束連接成的纖維絲帶寬度為70 SOnm具有天然的三維納米網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)；高抗張強(qiáng)度和彈性模量；高親水性，良好的透氣、吸水、透水性能，非凡的持水性和高濕強(qiáng)度。大量研究表明細(xì)菌纖維素具有良好的體內(nèi)、體外生物相容性和良好的生物可降解性，極好的形狀維持性能和形狀可調(diào)控性。這使得細(xì)菌纖維素本身已經(jīng)可以作為組成工程材料使用，但由于天然的細(xì)菌纖維素沒有微米級(jí)大孔，細(xì)胞只能在表面黏附、增殖，不能進(jìn)入材料內(nèi)部。因此，制備出細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著微米級(jí)大孔的細(xì)菌纖維素支架材料對(duì)其在組織工程中的應(yīng)用尤為重要。最近Backdahl分別使用淀粉、石蠟作為致孔劑在木醋桿菌在發(fā)酵時(shí)制備出具有一定孔徑的三維組織工程細(xì)菌纖維素血管支架材料，材料孔徑、厚度、連通性均可通過改變致孔劑的尺寸和發(fā)酵條件來控制，細(xì)菌纖維素良好的塑型性使得其作為組織工程支架時(shí)，可以更好的控制孔徑與孔隙率以滿足不同組織構(gòu)建時(shí)的需要。但是存在的問題是，發(fā)酵時(shí)間較長，工藝較為復(fù)雜，并且難以完全去除支架材料中制孔劑。中國專利CN101288778A公布了一種采用冰晶作為致孔劑對(duì)發(fā)酵后的細(xì)菌纖維素進(jìn)行處理制備出含有大孔的細(xì)菌纖維素組織工程支架材料的方法。但此方法在冷凍干燥時(shí)由于冰晶升華產(chǎn)生的大孔容易形成塌陷，造成材料結(jié)構(gòu)的破壞。氯化鈉晶體是一種安全、無毒的制孔劑材料，已廣泛用于制備多孔組織工程支架材料。段志軍等將氯化鈉晶體顆粒加入到溶解度較小的聚乙烯醇的二甲基亞砜/水溶液中，均勻攪拌后迅速冷凍，并利用蒸餾水置換出凝膠中的溶劑和氯化鈉顆粒，并得到具有三維多孔結(jié)構(gòu)的聚乙烯醇支架材料。然而氯化鈉晶體顆粒通常是均勻分散在未成型的原料中后才能制備多孔支架材料，而對(duì)于細(xì)菌纖維素膜是一種成型產(chǎn)品，若將其溶解或打漿會(huì)造成細(xì)菌纖維素膜力學(xué)性能滿足不了支架材料的要求，氯化鈉晶體顆粒則不能通過在溶解或打漿的細(xì)菌纖維素原料均勻分散后來制備多孔支架材料，因此需要尋求一種利用氯化鈉晶體在已成型的細(xì)菌纖維素膜制備多孔支架材料的有效方法，并得到孔徑可控的細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著微米級(jí)大孔的細(xì)菌纖維素支架材料。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法及其制品，本發(fā)明的方法在不溶解、打漿分散細(xì)菌纖維素膜的基礎(chǔ)上，通過將氯化鈉晶體作為致孔劑在成型的細(xì)菌纖維素膜上形成多孔結(jié)構(gòu)，其制備過程簡單易行、操作方便、無污染、成本低；通過簡單控制氯化鈉水溶液的濃度、冷凍溫度、冷凍速率等條件可調(diào)控微米級(jí)大孔的孔徑和分布，得到一種能夠滿足組織工程應(yīng)用的細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著微米級(jí)大孔的細(xì)菌纖維素支架材料。本發(fā)明的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，將細(xì)菌纖維素膜浸泡在20 100°C的氯化鈉水溶液中，靜置或攪拌5 30min，再將處理后的細(xì)菌纖維素膜取出，驟冷或逐步降溫至-20 -196°C，待細(xì)菌纖維素膜冷凍成固態(tài)后冷凍干燥；隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，即得到細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 250 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料；所述氯化鈉水溶液的質(zhì)量百分比濃度為該溫度條件下飽和氯化鈉水溶液質(zhì)量百分比濃度的30 100% ；由于氯化鈉在水中的溶解度與水溶液溫度有關(guān)，在某一溫度下可配制的最高濃度為這一溫度時(shí)氯化鈉在水中的飽和濃度。氯化鈉結(jié)晶時(shí)的晶體數(shù)量、晶粒粒徑大小與氯化鈉溶液的濃度、溫度有關(guān)，從而影響了支架材料中大孔的孔徑及分布，因此可以通過改變氯化鈉溶液的濃度、溫度控制細(xì)菌纖維素支架的結(jié)構(gòu)。所述的驟冷是指在Imin內(nèi)迅速將細(xì)菌纖維素膜降溫至_20 _196°C。驟冷時(shí)，晶核迅速形成，晶粒來不及長大，因此形成的孔徑較小。-196°C為液氮通常本身的溫度。作為優(yōu)選的技術(shù)方案其中，如上所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，所述的氯化鈉水溶液的溶劑為二次蒸餾水。如上所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，所述的逐步降溫方法為梯度降溫法或勻速降溫法，降溫至-20 -196°C。
如上所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，所述的梯度降溫法是指按均等遞降的溫度梯度等級(jí)逐步降溫的方法，逐步降溫時(shí)在每個(gè)降溫溫度下保持10-20min ；所述的按均等遞降的溫度梯度等級(jí)是從浸泡溫度20 100°C到冷卻溫度-20 -196°C之間選擇2-5個(gè)均等遞降的降溫溫度。如20°C到-20°C的4個(gè)均等遞降的降溫溫度為10°C、 0°C、-IO0C、-20°C。在每個(gè)降溫溫度下保存10-20min。如上所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，所述的勻速降溫法是指按照一定的降溫速率勻速下降溫度的方法；所述的降溫速率為1 20°C /min。如上所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，所述的冷凍干燥時(shí)間為12 48h。如上所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，所述的水洗為采用二次蒸餾水水洗，水洗溫度為20 100°C，水洗時(shí)間為10 120分鐘，直至水洗后的溶液中不再出現(xiàn)氯離子?？衫寐入x子與某些離子反應(yīng)生成沉淀的特性檢測有無氯離子。如利用銀離子與氯離子反應(yīng)生成氯化銀沉淀來判定。如上所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，所述的細(xì)菌纖維素膜是由木醋桿菌、根瘤菌屬、八疊球菌屬、假單胞菌屬、無色桿菌屬、產(chǎn)堿菌屬、氣桿菌屬或固氮菌屬中的一種或幾種產(chǎn)出的，經(jīng)過分離提純除去菌體蛋白和粘附在纖維素膜上的殘余培養(yǎng)基。分離提純辦法如將細(xì)菌纖維素膜浸泡在質(zhì)量百分含量為1 8%的NaOH水溶液中，在60 100°C的溫度下加熱3 6h，再用二次蒸餾水反復(fù)沖洗至中性。本發(fā)明還提供了一種依據(jù)上述方法制得的細(xì)菌纖維素支架材料，細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 250 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料。其中，所述的細(xì)菌纖維素是由木醋桿菌、根瘤菌屬、八疊球菌屬、假單胞菌屬、無色桿菌屬、產(chǎn)堿菌屬、氣桿菌屬或固氮菌屬中的一種或幾種產(chǎn)出的纖維素。有益效果與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是(1)不需要溶解、打漿分散細(xì)菌纖維素，就可將氯化鈉晶體均勻分散在成型細(xì)菌纖維素膜上，并形成多孔支架材料。(2)細(xì)菌纖維素支架材料的制備過程不使用任何有毒溶劑，不會(huì)帶來環(huán)境污染以及生態(tài)危機(jī)等問題，符合生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的使用要求。(3)以氯化鈉作為主要的致孔劑，避免了冷凍干燥時(shí)由于冰晶升華產(chǎn)生的大孔塌陷現(xiàn)象，保證了支架材料在在宏觀、微觀、納觀上同時(shí)進(jìn)行。(4)制備過程簡單易行、操作方便、無污染、成本低；通過簡單控制氯化鈉水溶液的濃度、冷凍溫度、冷凍速率等條件調(diào)控微米級(jí)大孔的孔徑和分布，得到一種能夠滿足組織工程應(yīng)用的細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著微米級(jí)大孔的細(xì)菌纖維素支架材料。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
實(shí)施例1將細(xì)菌纖維素膜浸泡在20°C的40%的飽和氯化鈉水溶液中，靜置或攪拌30min， 再將處理后的細(xì)菌纖維素膜取出，在Imin中內(nèi)驟冷降溫至-20°C，待細(xì)菌纖維素膜冷凍成固態(tài)后冷凍干燥；隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，水洗溫度為20°C，水洗時(shí)間為30min，直至水洗后的溶液中不再出現(xiàn)氯離子，即得到細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 70 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料；實(shí)施例2將細(xì)菌纖維素膜浸泡在50°C的60%的飽和氯化鈉水溶液中，靜置或攪拌30min， 再將處理后的細(xì)菌纖維素膜取出，在Imin中內(nèi)驟冷降溫至-80°C，待細(xì)菌纖維素膜冷凍成固態(tài)后冷凍干燥；隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，水洗溫度為30°C，水洗時(shí)間為50min，直至水洗后的溶液中不再出現(xiàn)氯離子，即得到細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 100 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料；實(shí)施例3將細(xì)菌纖維素膜浸泡在80°C的80%的飽和氯化鈉水溶液中，靜置或攪拌30min， 再將處理后的細(xì)菌纖維素膜取出，在Imin中內(nèi)驟冷降溫至-120°C，待細(xì)菌纖維素膜冷凍成固態(tài)后冷凍干燥；隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，水洗溫度為60V，水洗時(shí)間為60min，直至水洗后的溶液中不再出現(xiàn)氯離子，即得到細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 140 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料；實(shí)施例4將細(xì)菌纖維素膜浸泡在100°C的100%的飽和氯化鈉水溶液中，靜置或攪拌 30min，再將處理后的細(xì)菌纖維素膜取出，在Imin中內(nèi)驟冷降溫至-196°C，待細(xì)菌纖維素膜冷凍成固態(tài)后冷凍干燥；隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，水洗溫度為 100°C，水洗時(shí)間為120min，直至水洗后的溶液中不再出現(xiàn)氯離子，即得到細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 180 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料；實(shí)施例5將細(xì)菌纖維素膜浸泡在20°C的80%的飽和氯化鈉水溶液中，靜置或攪拌30min， 再將處理后的細(xì)菌纖維素膜取出，逐步降溫至_20°C，選擇2個(gè)降溫梯度溫度為0°C、-20°C， 在每個(gè)降溫溫度下保存lOmin，待細(xì)菌纖維素膜冷凍成固態(tài)后冷凍干燥；隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，水洗溫度為30°C，水洗時(shí)間為30min，直至水洗后的溶液中不再出現(xiàn)氯離子，即得到細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 90 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料；實(shí)施例6將細(xì)菌纖維素膜浸泡在50°C的80%的飽和氯化鈉水溶液中，靜置或攪拌 30min，再將處理后的細(xì)菌纖維素膜取出，驟冷降溫至-40°C，選擇3個(gè)降溫梯度溫度為 20°C、-IO0C, -40°C，在每個(gè)降溫溫度下保存15min，待細(xì)菌纖維素膜冷凍成固態(tài)后冷凍干燥；隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，水洗溫度為50°C，水洗時(shí)間為50min， 直至水洗后的溶液中不再出現(xiàn)氯離子，即得到細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著 50 120 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料；實(shí)施例7
將細(xì)菌纖維素膜浸泡在80°C的80%的飽和氯化鈉水溶液中，靜置或攪拌30min， 再將處理后的細(xì)菌纖維素膜取出，驟冷降溫至_80°C，選擇4個(gè)降溫梯度溫度為40°C、 0°C、-40°C、-8(rC，在每個(gè)降溫溫度下保存18min，待材料溫度平衡后移至下一溫度，待細(xì)菌纖維素膜冷凍成固態(tài)后冷凍干燥；隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，水洗溫度為70°C，水洗時(shí)間為80min，直至水洗后的溶液中不再出現(xiàn)氯離子，即得到細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 180 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料；實(shí)施例8將細(xì)菌纖維素膜浸泡在100°C的100%的飽和氯化鈉水溶液中，靜置或攪拌 30min，再將處理后的細(xì)菌纖維素膜取出，驟冷降溫至-196°C，選擇5個(gè)降溫梯度溫度為 40 0C >-20 0C >-80 0C >-140 0C >-196 0C，在每個(gè)降溫溫度下保存20min，待材料溫度平衡后移至下一溫度，待細(xì)菌纖維素膜冷凍成固態(tài)后冷凍干燥；隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，水洗溫度為100°C，水洗時(shí)間為120min，直至水洗后的溶液中不再出現(xiàn)氯離子， 即得到細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 220 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料；實(shí)施例9將細(xì)菌纖維素膜浸泡在20°C的40%的飽和氯化鈉水溶液中，靜置或攪拌30min， 再將處理后的細(xì)菌纖維素膜取出，勻速降溫速率為10°c /min，降至所需的冷卻溫度-20°c， 以待細(xì)菌纖維素膜冷凍成固態(tài)后冷凍干燥；隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，水洗溫度為20°C，水洗時(shí)間為30min，直至水洗后的溶液中不再出現(xiàn)氯離子，即得到細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 100 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料；實(shí)施例10將細(xì)菌纖維素膜浸泡在50°C的60%的飽和氯化鈉水溶液中，靜置或攪拌30min， 再將處理后的細(xì)菌纖維素膜取出，勻速降溫速率為10°c /min，降至所需的冷卻溫度-80°c， 待細(xì)菌纖維素膜冷凍成固態(tài)后冷凍干燥；隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉， 水洗溫度為50°C，水洗時(shí)間為50min，直至水洗后的溶液中不再出現(xiàn)氯離子，即得到細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 150 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料；實(shí)施例11將細(xì)菌纖維素膜浸泡在80°C的80%的飽和氯化鈉水溶液中，靜置或攪拌 30min，再將處理后的細(xì)菌纖維素膜取出，勻速降溫速率為10°C /min，降至所需的冷卻溫度-140°C，待細(xì)菌纖維素膜冷凍成固態(tài)后冷凍干燥；隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，水洗溫度為80°C，水洗時(shí)間為90min，直至水洗后的溶液中不再出現(xiàn)氯離子，即得到細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 200 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料；實(shí)施例12將細(xì)菌纖維素膜浸泡在100°C的100%的飽和氯化鈉水溶液中，靜置或攪拌 30min，再將處理后的細(xì)菌纖維素膜取出，勻速降溫速率為10°C /min，降至所需的冷卻溫度-196°C，待細(xì)菌纖維素膜冷凍成固態(tài)后冷凍干燥；隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，水洗溫度為100°C，水洗時(shí)間為120min，直至水洗后的溶液中不再出現(xiàn)氯離子，即得到細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 250 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料；
權(quán)利要求
1.一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，其特征是將細(xì)菌纖維素膜浸泡在20 100°C的氯化鈉水溶液中，靜置或攪拌5 30min，再將處理后的細(xì)菌纖維素膜取出，驟冷或逐步降溫至-20 _196°C，待細(xì)菌纖維素膜冷凍成固態(tài)后冷凍干燥；隨后經(jīng)水洗去除氯化鈉，即得到細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 250 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料；所述氯化鈉水溶液的質(zhì)量百分比濃度為該溫度條件下飽和氯化鈉水溶液質(zhì)量百分比濃度的30 100% ；所述的驟冷是指在Imin內(nèi)迅速將細(xì)菌纖維素膜降溫至-20 _196°C。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，其特征在于，所述的氯化鈉水溶液的溶劑為二次蒸餾水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，其特征在于，所述的逐步降溫的方法為梯度降溫法或勻速降溫法。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，其特征在于，所述的梯度降溫法是指按均等遞降的溫度梯度等級(jí)逐步降溫的方法，逐步降溫時(shí)在每個(gè)降溫溫度下保持10-20min ；所述的按均等遞降的溫度梯度等級(jí)是從浸泡溫度20 100°C到冷卻溫度-20 -196°C之間選擇2-5個(gè)均等遞降的降溫溫度。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，其特征在于，所述的勻速降溫法是指按照一定的降溫速率勻速下降溫度的方法；所述的降溫速率為1 20°C / min0
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，其特征在于，所述的冷凍干燥時(shí)間為12 48h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，其特征在于，所述的水洗為采用二次蒸餾水水洗，水洗溫度為20 100°C，水洗時(shí)間為10 120分鐘，直至水洗后的溶液中不再出現(xiàn)氯離子。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法，其特征在于，所述的細(xì)菌纖維素膜是由木醋桿菌、根瘤菌屬、八疊球菌屬、假單胞菌屬、無色桿菌屬、產(chǎn)堿菌屬、 氣桿菌屬或固氮菌屬中的一種或幾種發(fā)酵產(chǎn)出的，并經(jīng)過分離提純除去菌體蛋白和粘附在纖維素膜上的殘余培養(yǎng)基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1 8所述的制備方法所制得的一種細(xì)菌纖維素支架材料，其特征是 細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50 250 μ m大孔的細(xì)菌纖維素支架材料。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種細(xì)菌纖維素支架材料，其特征在于，所述的細(xì)菌纖維素是由木醋桿菌、根瘤菌屬、八疊球菌屬、假單胞菌屬、無色桿菌屬、產(chǎn)堿菌屬、氣桿菌屬或固氮菌屬中的一種或幾種產(chǎn)出的纖維素。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，涉及一種細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法及其制品，特別是涉及一種細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著微米級(jí)大孔的細(xì)菌纖維素支架材料的制備方法及其制品，具體地說是以氯化鈉晶體作為致孔劑得到一種細(xì)菌纖維素納米三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中均勻分布著50～250μm大孔的細(xì)菌纖維素支架材料的方法及其制品。本發(fā)明的方法在不溶解、打漿分散細(xì)菌纖維素膜的基礎(chǔ)上，通過將氯化鈉晶體作為致孔劑在成型的細(xì)菌纖維素膜上形成多孔結(jié)構(gòu)來制備生物醫(yī)用支架材料，其制備過程簡單易行、操作方便、無污染、成本低。
文檔編號(hào)A61L27/20GK102274549SQ20111019176
公開日2011年12月14日 申請(qǐng)日期2011年7月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月10日
發(fā)明者尹娜, 徐秋舒, 李喆, 楊敬軒, 歐陽煬, 洪楓, 王華平, 陳仕艷 申請(qǐng)人:東華大學(xué)