專(zhuān)利名稱(chēng)：：預(yù)防和治療腫瘤疾病的白藜蘆醇和小白菊內(nèi)酯復(fù)方的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及小白菊內(nèi)酯或取衍生物或可藥用鹽和三羥基芪(白藜蘆醇)或三羥基芪糖苷或取可藥用鹽或酯的復(fù)方組合物在抗腫瘤或輔助抗瘤方面的應(yīng)用。技術(shù)背景小白菊內(nèi)酯為一倍半萜內(nèi)酯類(lèi)化合物，分子中含有一cc-亞甲基卞內(nèi)酯基團(tuán)。對(duì)小白菊內(nèi)酯的研究頗多，歐美用小白菊治療偏頭疼和關(guān)節(jié)疼痛，其主要成分為小白菊內(nèi)酯，近年來(lái)對(duì)小白菊內(nèi)酯的研究發(fā)現(xiàn)，小白菊內(nèi)酯還具有抗腫瘤活性，如可抑制結(jié)腸癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、白血病癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。PCT/US00/34469公開(kāi)了用小白菊內(nèi)酯來(lái)抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)。白黎盧醇(Resveratrol)，化學(xué)名稱(chēng)為芪三酚，屬于多酚類(lèi)化合物。廣泛存在于葡萄、花生和多種藥用植物中，目前至少已經(jīng)在21個(gè)科、31個(gè)屬的72種植物中發(fā)現(xiàn)了白黎蘆醇。對(duì)白黎蘆醇生理功能的認(rèn)識(shí)源于WHO的一項(xiàng)流行病學(xué)調(diào)查，流行病學(xué)調(diào)查資料顯示，法國(guó)人血管疾病的發(fā)病率明顯低于其他國(guó)家，這與其紅葡萄酒的攝入量較高有關(guān)，進(jìn)一步研究證實(shí)，白黎蘆醇是紅葡萄酒中發(fā)揮心血管保護(hù)作用的主要物質(zhì)。白黎蘆醇具有廣泛的生物學(xué)活性，如抗癌、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗凝血、抗氧化、抗菌、免疫調(diào)節(jié)及神經(jīng)保護(hù)等。白黎蘆醇對(duì)致癌的3個(gè)主要階段均具有化學(xué)防癌活性，它具有抗氧化性和抗突變作用，并且可以誘導(dǎo)第二期藥代酶(抗起始活性)；它可以傳遞抗炎作用并有抑制環(huán)氧合酶(COX)和過(guò)氧化氫酶的功能(抗促進(jìn)作用)；它還可以誘導(dǎo)人類(lèi)早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞的分化(抗發(fā)展作用)及抑制核糖核酸還原酶作用，而核糖核酸還原酶是細(xì)胞增生中DNA合成所必需的物質(zhì)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種(A)小白菊內(nèi)酯或取衍生物或可藥用鹽和(B)三羥基芪(白藜蘆醇)或三羥基芪糖苷或取可藥用鹽或酯的復(fù)方組合物。本發(fā)明中，組分(A)和(B)可以以混合物的形式存在于藥物制劑中，也可以以分別包裝的形式存在與各自的藥物制劑中。本發(fā)明涉及聯(lián)合應(yīng)用小白菊內(nèi)酯或取衍生物或可藥用鹽和三羥基芪或三羥基芪糖苷或取可藥用鹽或酯來(lái)治療或輔助治療腫瘤疾病，其中"聯(lián)合應(yīng)用"這些活性成分是指共同給藥，即幾乎共同給出小白菊內(nèi)酯或小白菊內(nèi)酯衍生物及其可藥用鹽和三羥基芪或三羥基芪糖苷及其可藥用鹽和酯，或給予包含所述活性組分混合物的組合物。以下，為使本說(shuō)明書(shū)簡(jiǎn)潔，下文僅述及小白菊內(nèi)酯，可以理解，本描述也適用與上述小白菊內(nèi)酯衍生物及其可藥用鹽。同樣地，下文僅述及三羥基芪(白藜蘆醇)，也可以理解為，本描述也適用于三羥基貧-3-p-單-D-葡萄糖苷(白藜蘆醇苷)或其可藥用鹽或酯。本發(fā)明中，小白菊內(nèi)酯衍生物是指由小白菊內(nèi)酯Qw3位雙鍵和含氮化合物經(jīng)反應(yīng)所形成的衍生物，其中含氮化合物可以是二甲基氨、二乙基氨、甲基乙基氨、吡啶、哌啶。其可藥用鹽是至小白菊內(nèi)酯含氮衍生物與酸形成的不引起不需要的毒副作用的任何鹽，這些酸是藥學(xué)專(zhuān)業(yè)人員公知的。本發(fā)明中，三羥基芪或三羥基芪-3-J3-單-D-葡萄糖苷的可藥用鹽是指其與堿形成的不引起不需要的毒副作用的任何鹽，這些堿是藥學(xué)專(zhuān)業(yè)人員公知的；三羥基芪或三羥基芪-3-(3-單-D-葡萄糖苷的酯是指其與有機(jī)酸或酸酐反應(yīng)形成的不引起不需要的毒副作用的任何酯，這些有機(jī)酸或酸酐也是藥學(xué)專(zhuān)業(yè)人員所公知的。本發(fā)明中，(A)小白菊內(nèi)酯或取衍生物或可藥用鹽，和(B)三羥基芪(白藜蘆醇)或三羥基芪糖苷或取可藥用鹽或酯；其中組分(A)和組分(B)的重量比為1:100-100:1，并且優(yōu)選為1:50-50:1。本發(fā)明中，小白菊內(nèi)酯為從植物小白菊或廣玉蘭葉中或其它含小白菊內(nèi)酯的植物中提取分離得到，也可以是通過(guò)合成方式得到，小白菊內(nèi)酯衍生物主要通過(guò)合成得到；白藜蘆醇為從植物葡萄、虎杖或花生葉中提取分離得到或通過(guò)合成方法得到。本發(fā)明可治療或輔助其它抗腫瘤藥物治療腫瘤疾病。已證明本發(fā)明聯(lián)合應(yīng)用能非常有效的抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。由組分(A)和組分(B)產(chǎn)生的抗腫瘤協(xié)同效果可通過(guò)試驗(yàn)得到證實(shí)，以下通過(guò)藥理試驗(yàn)對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。具體實(shí)施例1、體外藥理作用細(xì)胞株乳腺癌細(xì)胞HBL-100、肝癌細(xì)胞BEL-7402、肝癌細(xì)胞(H22)。將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的乳腺癌細(xì)胞和肝癌細(xì)胞用CM-1640培養(yǎng)基配成2xl05/ml細(xì)胞懸液，加入96孔圓底細(xì),培養(yǎng)板內(nèi)，每孔0.2ml，再分別加入小白菊內(nèi)酯(PNT)、白藜蘆醇(Res)、小白菊內(nèi)酯+白黎蘆醇(l:l)，使其濃度均為1.0、2.5、5.0、10.0tig/ml，每一測(cè)試濃度5孔，置37"、5%<:02飽和濕度條件下培養(yǎng)72小時(shí)，用MTT法在酶聯(lián)檢測(cè)儀570nm波長(zhǎng)測(cè)得吸光(A)值。計(jì)算出本發(fā)明提取物對(duì)各細(xì)胞株的抑制率。抑制率氣"lll^)xl00n/0。結(jié)果見(jiàn)表1對(duì)照組A值_本發(fā)明體外對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制率(％)_,胸性PNT(ug/mL)Res(ug/mL)1:1的PNT+Res(ug/mL)一—lo5.010.01.02.55.010.01.02.55.0iot"HBL-100^^^^^^^^^T"BEL-7402173969821531577815437589H-22223051792127467321336982由上表可知，小白菊內(nèi)酯、白藜蘆醇、小白菊內(nèi)酯+白藜蘆醇在1.0-10.0ug/mL的濃度范圍內(nèi)，對(duì)乳腺癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞均有一定的抑制作用，并呈劑量依賴(lài)關(guān)系，在10.0ug/mL時(shí)抑制作用最強(qiáng)。與單獨(dú)用藥相比，聯(lián)合用藥在5.0ug/mL時(shí)即表現(xiàn)出明顯的協(xié)同增強(qiáng)作用效果，與單獨(dú)用藥相比，差異有顯著性(P0.05)。2、體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)將復(fù)蘇的肝癌H22細(xì)胞加入到RPMI-1640培養(yǎng)液中(含100g丄"青霉素、100g丄"的鏈霉素及小牛血清)，于37"，50mL丄"CO4咅養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3d后傳代，輕輕吹打細(xì)胞成單細(xì)胞懸浮液，調(diào)節(jié)計(jì)數(shù)成1.0x1091/1。將含1.0xlO、L"的肝癌細(xì)胞懸浮液0.2mL接種在6只Balb/c小鼠腹腔10d后，抽取小鼠腹水離心計(jì)數(shù)后，將1.0x1091/1的肝癌細(xì)胞懸浮液0.2mL分別注射到50只Balb/c小鼠腹股溝皮下，于接種第二天，隨機(jī)分為5組，瘤旁邊分別注射小白菊內(nèi)酯100mg/kg、白藜蘆醇100mg/kg、小白菊內(nèi)酯+白藜蘆醇(50mg/kg+50mg/kg)、小白菊內(nèi)酯+白藜蘆醇(100mg/kg+100mg/kg)及等量生理鹽水，連續(xù)10d，于停藥后第二天處死動(dòng)物，同時(shí)摘取腫瘤，稱(chēng)取質(zhì)量并計(jì)算抑瘤率。結(jié)果見(jiàn)表2表2對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝細(xì)胞的抑瘤率(5±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與陰性對(duì)照組相比，*P<0.01;與Res或PNT組相比，#P<0.05各組均能顯著抑制小鼠肝癌移植瘤的生長(zhǎng)，與對(duì)照組相比，差異顯著(PO.Ol)，聯(lián)合用藥作用更強(qiáng)，PNT+Res(100+100mg/kg)組與單獨(dú)用藥相比，差異具有顯著性(P〈0.05)。說(shuō)明小白菊內(nèi)酯和白藜蘆醇聯(lián)合用藥，與單獨(dú)用藥相比，在劑量等同的情況下，有明顯的協(xié)同增強(qiáng)效果。下文提到的是本發(fā)明制劑說(shuō)明性而非限定性實(shí)施例(1)小白菊內(nèi)酯10g白藜蘆醇500g(2)小白菊內(nèi)酯500g白藜戸醇10g(3)小白菊內(nèi)酯200g白藜戸醇200g(4)哌啶基小白菊內(nèi)酯100g白藜蘆醇苷200g(5)鹽酸哌啶基小白菊內(nèi)酯200g白藜蘆醇苷100g(6)小白菊內(nèi)酯200g白藜戸醇200g5曙FU100g(7)小白菊內(nèi)酯300g白藜蘆醇100g紫杉醇50g上述組合物通過(guò)適宜的制劑工藝，加上一些適宜的藥用輔料，可制成口服、非腸道、直腸或透皮給藥的固體、半固體、液體、半液體、粉末、顆粒或脂質(zhì)體形式。權(quán)利要求1.一種抗腫瘤藥物組合物，由(A)小白菊內(nèi)酯或小白局內(nèi)酯衍生物或其可藥用鹽和(B)三羥基芪或三羥基芪糖苷或其可藥用鹽或酯組成，其中(A)與(B)以混合物形式或分別包裝形式存在藥物中。2、如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述小白菊內(nèi)酯衍生物為其Cu.n位雙鍵與含氮化合物反應(yīng)所形成的小白菊內(nèi)酯衍生物。3、如權(quán)利要求2所述的組合物，其中含氮化合物主要為二甲基氨、二乙基氨、甲基乙基氨、吡錠或哌啶。4、如權(quán)利要求1所述的組合物，其中組分(B)為3,4，，5-三羥基芪或3,4，,5-三羥基芪-3-P-單-D-葡萄糖苷或其可藥用鹽或酯。5、如權(quán)利要求1所述的組合物，其中組分(A)與(B)的重量比為1:100-100:1。6、如權(quán)利要求5所述的組合物，其中組分(A)與(B)的重量比為1:50-50:1。7、如權(quán)利要求1-6所述的組合物在制備具有抗腫瘤和腫瘤輔助治療作用藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種以混合物或分包裝形式存在的由(A)小白菊內(nèi)酯或取衍生物或可藥用鹽和三羥基芪或三羥基芪糖苷或取可藥用鹽或酯的復(fù)方組合物，該組合物可用于治療或輔助治療腫瘤疾病，對(duì)肝癌的抑制作用具有較強(qiáng)的作用。文檔編號(hào)A61K31/045GK101269065SQ20071011945公開(kāi)日2008年9月24日申請(qǐng)日期2007年7月25日優(yōu)先權(quán)日2007年7月25日發(fā)明者熊?chē)?guó)裕申請(qǐng)人:北京星昊醫(yī)藥股份有限公司