專利名稱：新城疫病毒的用途和制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新城疫病毒用于防治人類疾病的技術(shù)領(lǐng)域。
新城疫病毒是副粘液病毒屬的代表種，是禽類的一種高度感染的致死性疾病。可侵襲呼吸道胃腸道以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)。在感染禽類的血液、腦、內(nèi)臟、糞便和口鼻分泌物中可發(fā)現(xiàn)本病毒。目前各國(guó)都采用預(yù)防接種作為控制新城疫毒的主要措施。預(yù)防接種的疫苗有弱毒活疫苗和無(wú)活疫苗，弱毒活疫苗有弱毒疫苗和中等毒疫苗兩類。
本發(fā)明的目的是，將新城疫病毒疫苗用于防治人類疾病，使其產(chǎn)生較好的治療效果，并對(duì)人類無(wú)害。
本發(fā)明采用禽類用的新城疫病毒疫苗，防止人類疾病，采用弱毒活疫苗防治呼吸道病毒感染、病毒性角膜炎、慢性活動(dòng)性肝炎、巨細(xì)胞病毒感染、乙型腦炎、肺炎、腹瀉、流行性出血熱、成骨肉瘤、肺腺癌、鼻咽癌、肝癌、食道癌、白血病、愛滋病、免疫調(diào)節(jié)性疾病。
本發(fā)明采用的弱毒活疫苗是弱毒株、F株(III系苗)，B1株(II系苗)、Sota株(IV系苗)、中等毒疫苗毒株為I系苗，Rakiu株，Komorov株，Rlertfordshire株(Herts33)和Mukteswer株。
本發(fā)明經(jīng)研究試驗(yàn)得新城疫病毒是干擾素誘異劑、進(jìn)入機(jī)體后，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生干擾素，干擾素作為一種細(xì)胞因子具有廣泛的生物學(xué)功能，如抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、調(diào)控細(xì)胞增殖和分化。當(dāng)新城疫病毒進(jìn)入機(jī)體就可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生干擾素。即內(nèi)源性干擾素(白動(dòng)免疫性)。這種自身產(chǎn)生的干擾素比特異性抗體產(chǎn)生要早，持久，有阻止疾病發(fā)生的作用。干擾素的主要作用就是對(duì)巨噬細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的功能有促進(jìn)作用，可調(diào)動(dòng)機(jī)體免疫系統(tǒng)殺傷腫瘤細(xì)胞，所以是一種增強(qiáng)免疫、抗腫瘤、抗病毒的較理想制劑。
本發(fā)明用于防治人類疾病的新城疫病毒疫苗的制備方法可簡(jiǎn)述為先取雞胚，然后進(jìn)行雞胚接種之后，收獲尿液，再做血凝試驗(yàn)和效力試驗(yàn)，血凝效價(jià)要求為10-11，當(dāng)收集尿液血凝效價(jià)達(dá)不到10-11者，需要繼續(xù)傳代，使血凝效價(jià)提高，或通過超速離心濃縮后，使其效價(jià)提高，提取疫苗后，做毒株抗原性試驗(yàn)，免疫原性試驗(yàn)、濃縮、純化病毒后，抽樣進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)達(dá)到通常試驗(yàn)要求后保存。
本發(fā)明用于防治人類疾病的新城疫病毒疫苗的制備方法可詳述為一、雞胚購(gòu)買SPF受精雞蛋38℃-39℃孵育9-10天，SPF無(wú)特定病原雞(無(wú)細(xì)菌、霉菌、支原體及外源病毒)。
二、雞胚接種1、取孵育9-10天雞胚，在檢卵燈上劃出氣室境界并在絨毛尿囊膜發(fā)育良好區(qū)和氣室端的蛋殼上標(biāo)記，用碘酒精消毒，鋸一注射用小孔。(勿傷及卵膜)。
2、將雞蛋固定于蛋架上，用無(wú)菌注射器抽取毒株尿液，由注射小孔刺入0.5-1cm，注射0.1-0.2ml。
3、注射畢用膠布沾95％酒精火燒消毒或石臘封注射孔。
4、雞卵放入36℃溫箱中孵育，每日檢視1-2次，孵育48小時(shí)內(nèi)將死雞胚丟棄。
三、收獲尿液嚴(yán)格無(wú)菌操作1、接種孵育48-120小時(shí)存活的雞胚，置2-8℃冷卻4-24小時(shí)，將氣室端用碘酒精消毒。
2、擊破氣室之卵殼，沿氣室周圍剪除卵殼，撕去殼膜與絨毛尿囊膜，用吸管吸出尿液置無(wú)菌瓶中。
四、血凝試驗(yàn)取收集尿液0、1ml做血凝試驗(yàn)，血凝效價(jià)≥1∶160為感染。
五、效力試驗(yàn)計(jì)算半數(shù)感染量ID50無(wú)菌生理鹽水10倍稀釋尿液分三個(gè)濃度尿囊腔接種10日令雞胚各5只，各只雞胚接種新收集之尿液0、1ml36℃孵育48-120小時(shí)，取出尿液做血凝試驗(yàn)，血凝效價(jià)≥1∶160為感染。
本發(fā)明治療用血凝效價(jià)要求10-11，凡收集尿液血凝效價(jià)達(dá)不到10-11者需要繼續(xù)傳代，使血凝效價(jià)提高，或通過超速離心濃縮后，使其效價(jià)提高，提取疫苗完畢，然后再進(jìn)行以下操作。
六、毒株之抗原性免疫大白鼠后采血取血清做血凝抑制試驗(yàn)。
七、免疫原性接種小白鼠后采血進(jìn)行細(xì)胞免疫試驗(yàn)。
八、濃縮、純化病毒將收集之尿液效價(jià)在10-11者，經(jīng)差速離心即低速、中速、超速、最后取沉淀物(病毒)加入適量無(wú)菌生理鹽水，計(jì)算濃縮倍數(shù)。
九、保存-30℃以下保存或按需要生理鹽水稀釋分裝后-30℃保存?zhèn)溆茫蛳♂屢河?640(內(nèi)有酚紅指示劑)稀釋分裝。
口服滴鼻用可用10-11尿液分裝冰凍保存。
肌肉注射用嚴(yán)格無(wú)菌操作將濃縮之病毒按需要用無(wú)菌生理鹽水分裝安瓿冰凍保存或凍干保存。
如用死疫苗，應(yīng)將病毒尿液或濃縮的病毒采用紫外線或甲醛滅活。
十、抽樣進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)，達(dá)到通常的試驗(yàn)要求后保存。
采用本發(fā)明的制備方法，將新城疫病毒苗用于防治人類疾病，已初步做了癌癥患者的臨床，抑制病情的發(fā)展效果較好，未有任何不良反應(yīng)。同時(shí)動(dòng)物試驗(yàn)，小白鼠100多只肌肉注射，靜脈注射，小白鼠無(wú)反應(yīng)和致死現(xiàn)象。
1、免疫調(diào)節(jié)及生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的動(dòng)物試驗(yàn)
①巨噬細(xì)胞吞噬紅血球試驗(yàn)計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。
②天然殺傷細(xì)胞(NK)測(cè)定。
③淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)(T細(xì)胞試驗(yàn))。
④細(xì)胞激活因子的測(cè)定——干擾素測(cè)定。
⑤其他細(xì)胞免疫測(cè)定方法——LAK細(xì)胞活性測(cè)定。
⑥影響特異性體液免疫功能的實(shí)驗(yàn)方法。
2、體內(nèi)抗癌試驗(yàn)肉瘤180試驗(yàn)檢測(cè)腫瘤抑制率已初步得出結(jié)果；腹水癌及白血病動(dòng)物試驗(yàn)檢測(cè)生命延長(zhǎng)率。
3、雞胚尿液的生化變化4、動(dòng)物用藥后的生理變化、體溫、脈搏、心電圖、血壓等。
5、致畸試驗(yàn)用藥后母鼠15只均已繁殖一代，無(wú)畸形。
經(jīng)初步試驗(yàn)和臨床應(yīng)用得出新城疫病毒疫苗用于防治本發(fā)明所述的人類疾病，無(wú)害，效果較好，與現(xiàn)在臨床上使用的干擾素相比，具有制備簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉的優(yōu)點(diǎn)，與現(xiàn)有治療本發(fā)明所述防治的疾病所用藥物相比，療效有顯著提高。
權(quán)利要求
1.用于防治人類疾病的新城疫病毒的用途，其特征在于用于防治呼吸道病毒感染、病毒性角膜炎、慢性活動(dòng)性肝炎、巨細(xì)胞病毒感染、乙型腦炎、肺炎、腹瀉、流行性出血熱、成骨肉瘤、肺腺癌、鼻咽癌、肝癌、食道癌、白血病、愛滋病、免疫調(diào)節(jié)性疾病。
2.用于防治人類疾病的新城疫病毒的制備方法，先取雞胚，然后進(jìn)行雞胚接種之后，收獲尿液，再做血凝試驗(yàn)和效力試驗(yàn)，其特征在于血凝效價(jià)要求為10-11，當(dāng)收集尿液血凝效價(jià)達(dá)不到10-11者，需要繼續(xù)傳代，使血凝效價(jià)提高，或通過超速離心濃縮后，使其效價(jià)提高，提取疫苗后，做毒株抗原性試驗(yàn)，免疫原性試驗(yàn)，濃縮、純化病毒后，抽樣進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)，達(dá)到通常試驗(yàn)要求后保存。
全文摘要
本發(fā)明涉及新城疫病毒用于防治人類疾病的技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明采用禽類用的新城疫病毒疫苗，防治呼吸道病毒感染、病毒性角膜炎、慢性活動(dòng)性肝炎、巨細(xì)胞病毒感染、乙型腦炎、肺炎、腹瀉、流行性出血熱、成骨肉瘤、肺腺癌、鼻咽癌、肝癌、食道癌等。經(jīng)初步試驗(yàn)和臨床應(yīng)用得知，治療效果較好、無(wú)害。與現(xiàn)在臨床上使用的干擾素相比，具有制備簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K39/155GK1138485SQ9511049
公開日1996年12月25日 申請(qǐng)日期1995年6月16日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月16日
發(fā)明者秦民德, 董仲甫, 郭文茂, 郭恒 申請(qǐng)人:秦民德