專利名稱：抗血小板聚集的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗血小板聚集的藥物組合物，該組合物含有鹽酸噻氯匹定(ticlopidine)和尼群地平。具體而言，作為一種抗血小板聚集的藥物制劑，含有的鹽酸噻氯匹定和尼群地平具有協(xié)同作用，可以在保證甚至是提高療效的前提下降低鹽酸噻氯匹定的使用劑量，從而降低對(duì)人體的副作用。
背景技術(shù)：
臨床研究表明，臨床上常見(jiàn)的心腦血管疾病如高血壓、糖尿病、心絞痛、心肌梗塞、腦梗塞及腦出血等疾病，均與血小板功能變化和血液流變學(xué)異常有關(guān)(天津醫(yī)藥，1992，20(11)684)。因此，防止血小板聚集具有重要意義。
鹽酸噻氯匹定是70年代合成的新一代廣譜抗血小板聚集藥物，自80年代起廣泛用于治療心腦血管病、周圍血管及微血管疾病，隨著對(duì)血小板在血栓形成中作用的深入研究，它在血栓栓塞性疾病中的治療地位日趨上升。隨著鹽酸噻氯匹定的廣泛應(yīng)用，其副作用逐漸顯現(xiàn)出來(lái)，有的甚至是嚴(yán)重的副作用，包括中性粒細(xì)胞逐漸缺乏癥、血小板減少癥、肝毒性等，尤為嚴(yán)重的是出現(xiàn)了骨髓抑制，死亡率為百萬(wàn)分之一到百萬(wàn)分之二(中國(guó)新藥雜志，1995，4(3)36)。
國(guó)內(nèi)有關(guān)副作用報(bào)道較少，除應(yīng)用不如國(guó)外普遍外，國(guó)內(nèi)使用劑量較低，也是主要原因(國(guó)外使用劑量為500mg/天，國(guó)內(nèi)為250mg/天)，所以可以推斷降低鹽酸噻氯匹定的使用劑量可以降低鹽酸噻氯匹定的副作用。因此，在保證療效的前提下降低臨床劑量，是降低副反應(yīng)發(fā)生率的有效途徑。
既保證療效又降低副反應(yīng)的一個(gè)重要途徑是制成復(fù)方制劑。一般來(lái)說(shuō)，對(duì)于作用機(jī)制不同但藥理效果一致的藥物，合用后往往產(chǎn)生協(xié)同或相加的藥效。目前，臨床上應(yīng)用的具有抗血小板聚集的藥物有阿斯匹林、潘生丁、天然黃酮類等，雖然鹽酸噻氯匹定與上述幾種藥物作用機(jī)制不同，但有實(shí)驗(yàn)證明鹽酸噻氯匹定與阿斯匹林在抗血小板聚集方面無(wú)協(xié)同作用，與其他幾種藥物聯(lián)合使用的報(bào)道不多見(jiàn)。
在已公開(kāi)的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)(CN1283119)中，將鹽酸噻氯匹定與銀杏提取物制成復(fù)方制劑，其中銀杏提取物為抗氧劑，減輕了鹽酸噻氯匹定的副作用。但該方案不是最優(yōu)的，因?yàn)殂y杏提取物的制備比較復(fù)雜，質(zhì)量難以控制，而且作為原料的銀杏葉來(lái)源有限。所有這些限制了鹽酸噻氯匹定銀杏提取物復(fù)方制劑的使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，而向人們提供一種抗血小板聚集的藥物組合物，主要是為了解決單獨(dú)使用鹽酸噻氯匹定作為抗血栓形成制劑時(shí)各種問(wèn)題，將原料廉價(jià)易得的鈣拮抗劑尼群地平與鹽酸噻氯匹定聯(lián)合使用。由于鹽酸噻氯匹定和尼群地平有協(xié)同作用，并能夠降低鹽酸噻氯匹定用藥劑量并對(duì)血小板聚集的具有良好的抑制作用。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案抗血小板聚集的藥物組合物，含有鹽酸噻氯匹定和尼群地平。該藥物組合物主要用作抗血栓形成的制劑，用于可以使用鹽酸噻氯匹定的疾病場(chǎng)合，通過(guò)鹽酸噻氯匹定和尼群地平的協(xié)同作用，降低了鹽酸噻氯匹定用藥劑量以達(dá)到改善單獨(dú)使用鹽酸噻氯匹定導(dǎo)致副作用的目的并提高對(duì)血小板聚集的抑制。
基于所述發(fā)明，噻氯匹定(5-[(2-氯苯基)甲基]-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-C]吡啶)屬于噻吩并吡啶類，由于其抗血栓形成的性能作為血小板聚集抑制劑廣泛應(yīng)用。二磷酸腺苷(ADP)是由紅細(xì)胞活化血小板和受損內(nèi)皮細(xì)胞釋放的重要血小板激活劑，通過(guò)P2受體導(dǎo)致血小板粘連和聚集。鹽酸噻氯匹定為廣譜抗血小板聚集劑，通過(guò)阻斷血小板的P2AC受體而發(fā)揮如下作用1)防止ADP誘導(dǎo)的腺苷酸環(huán)化酶的抑制；2)防止ADP誘導(dǎo)的對(duì)細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白—血管舒張劑刺激磷蛋白(VASP)磷酸化的抑制；3)防止G蛋白—血小板膜的結(jié)合。但鹽酸噻氯匹定不能抑制ADP誘導(dǎo)的血小板變形和鈣離子跨膜流動(dòng)，因而尚有加強(qiáng)其抗血小板聚集的余地。簡(jiǎn)而言之，認(rèn)為鹽酸噻氯匹定在此具有抗血栓形成的效果。通過(guò)減少血漿中的纖維蛋白原，鹽酸噻氯匹定降低了血液粘度，具有提高血紅細(xì)胞可塑性的效果。除了這些優(yōu)點(diǎn)，仍然存在與血細(xì)胞減少癥、粒細(xì)胞缺乏癥、再生障礙性貧血、腸道副反應(yīng)相關(guān)的問(wèn)題。
其鈣拮抗劑可抑制鈣離子跨膜內(nèi)流，進(jìn)而影響鈣離子在細(xì)胞內(nèi)作用而使整個(gè)細(xì)胞功能發(fā)生改變，其中包括抑制血小板聚集，改進(jìn)低氧血癥時(shí)血流變異常，改善紅細(xì)胞變形能力，降低血粘度，防止血栓形成。另外鈣拮抗劑其他功能如降低心肌耗能及耗氧、擴(kuò)張血管、減輕氧自由基損傷、抑制內(nèi)皮素分泌等都有利于與血小板聚集相關(guān)的疾病的治療。試驗(yàn)證明，硝苯地平、尼卡地平、川芎嗪、氟桂嗪等鈣拮抗劑均有明顯的抗血小板聚集作用。尼群地平是化學(xué)合成藥，原料價(jià)廉易得。尼群地平與其它鈣拮抗劑比較副作用較小，具有溫和持久的降壓作用，在臨床上用作抗高血壓藥。尼群地平也具有明顯的抗血小板聚集作用，同時(shí)，它的平均消除半衰期為8～12小時(shí)，與鹽酸噻氯匹定的8小時(shí)相當(dāng)，因此可以假設(shè)二者合用能夠產(chǎn)生協(xié)同作用。
本發(fā)明實(shí)驗(yàn)證明了尼群地平與鹽酸噻氯匹定有很好的協(xié)同作用，在保證鹽酸噻氯匹定療效的前提下大大降低了鹽酸噻氯匹定的劑量。
基于所述發(fā)明，在組合物中，含有100重量份鹽酸噻氯匹定和1.7～26重量份尼群地平。對(duì)于100重量份鹽酸噻氯匹定優(yōu)選含有3～4重量份尼群地平。
基于所述發(fā)明的藥物組合物可經(jīng)腸給藥，諸如口服。所述組合物特別可配制成片劑、膠囊劑等固體制劑。在這個(gè)方面，藥劑包括指定量的鹽酸噻氯匹定和尼群地平，以及在藥物制備中常用的稀釋劑、載體和助劑。例如片劑可包括活化填料、顆粒、稀釋劑、結(jié)合劑、消散劑、潤(rùn)滑劑、穩(wěn)定劑、顏色、甜料或香味劑。
上述制備的配制品的單位劑量應(yīng)含有25～250mg鹽酸噻氯匹定，或優(yōu)選50～100mg。相應(yīng)地尼群地平的單位劑量應(yīng)為1～10mg，或優(yōu)選2～4mg?；谒霭l(fā)明的藥物組合物的每日用量取決于給藥方法或治療條件，但在口服情況下，成人每日優(yōu)選給藥1-4次。
鹽酸噻氯匹定與尼群地平以29∶1合用時(shí)產(chǎn)生明顯的協(xié)同作用，產(chǎn)生相當(dāng)藥效時(shí)可使鹽酸噻氯匹定的劑量降低一半。以擬定的制劑規(guī)格(每片含鹽酸噻氯匹定75mg，尼群地平3mg)給藥，每日只需服用150～300mg鹽酸噻氯匹定，低于單用鹽酸噻氯匹定量(500mg/日)，相應(yīng)地服用尼群地平6～12mg，亦低于尼群地平用于抗高血壓時(shí)20mg/日的最低劑量，因而不會(huì)對(duì)患者血壓造成較大影響，鈣拮抗劑常見(jiàn)的副作用如心率加快，面部潮紅，頭痛等，也不易產(chǎn)生。合用后小鼠尾出血時(shí)間延長(zhǎng)明顯(與噻氯匹定比較，相同尾出血時(shí)間劑量降低近6倍)。
根據(jù)本發(fā)明，可以顯而易見(jiàn)地得出使用與鹽酸噻氯匹定等當(dāng)量的噻氯匹定或其他的噻氯匹定鹽與尼群地平制成組合物也可以達(dá)到本發(fā)明所述的鹽酸噻氯匹定和尼群地平的藥物組合物的效果。所述的噻氯匹定的鹽可以是有機(jī)或無(wú)機(jī)鹽。合適的例子有硫酸噻氯匹定、氫溴酸噻氯匹定、甲磺酸噻氯匹定、馬來(lái)酸噻氯匹定、富馬酸噻氯匹定等。
本發(fā)明的特點(diǎn)在于含有所述鹽酸噻氯匹定和尼群地平的藥物組合物，具有很好的抑制血小板聚集的功效。將鹽酸噻氯匹定制成復(fù)方，可以降低劑量，減輕毒副反應(yīng)，提高療效，具有一定的臨床使用價(jià)值。可廣泛用于臨床上常見(jiàn)的心腦血管疾病如高血壓、糖尿病、心絞痛、心肌梗塞、腦梗塞及腦出血等疾病同時(shí)，還能降低成本，減輕患者負(fù)擔(dān)，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
基于下列非限定性的實(shí)施例將更詳細(xì)地解釋本發(fā)明。制備實(shí)施例將合格的片芯(剔除粉末、有缺損的片)放入包衣鍋中，吹入熱風(fēng)，待片芯溫度至40～50℃左右時(shí)，均勻噴入包衣液，衣膜不能太薄，以達(dá)到遮光效果。包衣增重量控制在3～5％，干燥，即得。
給藥容積20ml/kg。
動(dòng) 物1)、家兔 體重2.5±0.5kg，雄性，每組5只，沈陽(yáng)藥科大學(xué)動(dòng)物室提供，新西蘭種白兔，動(dòng)物一級(jí)合格。
2)、大鼠 體重220±20g，雄性，每組10只。
3)、小鼠 體重20±2g，雄性，每組10只，大小鼠分別為SD、昆明種，均由沈陽(yáng)藥科大學(xué)動(dòng)物室提供，動(dòng)物合格證號(hào)遼實(shí)動(dòng)物合字第517號(hào)實(shí)驗(yàn)1、對(duì)ADP誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)血小板聚集性的影響。
將受試動(dòng)物均分5組，每組10只，受試物的劑量為鹽酸噻氯匹定∶尼群地平＝140.0mg/kg∶4.8mg/kg，70.0mg/kg∶2.4mg/kg，35.0mg/kg∶1.2mg/kg；空白對(duì)照組給相當(dāng)容積0.5％CMC Na陽(yáng)性對(duì)照藥為鹽酸噻氯匹定200mg/kg。每天1次，連續(xù)3天，于末次給藥后1.5h，在清醒狀態(tài)下從眼球后靜脈叢取血，用3.8％枸櫞酸鈉抗凝(1∶9)，常規(guī)制備PRP和PPP，聚集劑ADP由上海生化廠生產(chǎn)，以7.4％磷酸緩沖液配成使對(duì)照組50±10％血小板聚集的ADP濃度0.1mM·20ul，應(yīng)用DAM-3型雙通道血小板聚集儀測(cè)定各組血小板聚集體，按公式聚集抑制％＝(對(duì)照組聚集％-給藥組聚集％)/對(duì)照組聚集％×100％求出各組聚集抑制％。以聚集率為觀察指標(biāo)進(jìn)行組間比較，顯著性檢驗(yàn)。
試驗(yàn)結(jié)果如表1所示，在所選擇劑量范圍內(nèi)，各給藥組血小板聚集率均明顯下降，與對(duì)照組比較有非常顯著差異。隨劑量增加聚集抑制率亦呈上升趨勢(shì)。表1復(fù)方鹽酸噻氯匹定對(duì)ADP誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)血小板聚集性影響(X±SD)組別 劑量 動(dòng)物數(shù) 血小板聚集抑制mg/kg只％ ％對(duì)照組 - 10 51.4±4.8 -T+N140.0+4.810 6.8±2.9**88.0±6.470.0+2.4 10 13.8±4.6**72.3±9.235.0+1.2 10 22.8±9.5**53.9±19.8N 200.110 11.7±4.9**77.4±27.5與對(duì)照組比較**P＜0.01 注T鹽酸噻氯匹定 N尼群地平實(shí)驗(yàn)2、對(duì)膠原誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)血小板聚集性的影響受試動(dòng)物分組，給藥方式劑量、血小板聚集性測(cè)定方法均與實(shí)驗(yàn)1相同，聚集劑膠原為Sigma公司生產(chǎn)(C-8886，Lot108e8015)。表2 復(fù)方鹽酸噻氯匹定對(duì)膠原誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)血小板聚集性影響(X+SD)組別劑量 動(dòng)物數(shù) 血小板聚集抑制mg/kg只％ ％對(duì)照組- 10 45.7±5.2 -T+N 140.0+4.8 10 15.3±5.0**66.570.0+2.410 21.3±7.6**53.435.0+1.210 27.9±6.0**38.9N 200.0 10 21.9±9.9 56.0與對(duì)照組比較**P＜0.01 注T鹽酸噻氯匹定 N尼群地平試驗(yàn)結(jié)果如表2所示，在所選擇劑量范圍內(nèi)，各給藥組血小板聚集率明顯下降，與對(duì)照組比較有非常顯著差異，且隨劑量增加，抑制率亦呈上升趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)3、對(duì)凝血酶誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)血小板聚集性的影響受試動(dòng)物分組，給藥方式，劑量，血小板聚集性測(cè)定方法均與實(shí)驗(yàn)1相同，聚集劑凝血酶為Sigma公司生產(chǎn)(T4265，Lot(5)36F94781)。
試驗(yàn)結(jié)果如表3所示，在所選擇劑量范圍內(nèi)，各給藥組對(duì)血小板聚集性有明顯抑制作用，其聚集率與對(duì)照組比較有非常顯著差異。表3復(fù)方鹽酸噻氯匹定對(duì)凝血酶誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)血小板聚集性影響(X±SD)組別 劑量 動(dòng)物數(shù) 血小板聚集抑制mg/kg只 ％ ％對(duì)照組 - 10 49.3±5.8-T+N 140.0+4.8 10 10.8±3.2**77.370.0+2.4 10 31.4±7.1**36.335.0+1.2 10 43.2±6.4**19.5N 200 10 23.5±5.6**52.3與對(duì)照組比較**P＜0.01、*P＜0.05 注T鹽酸噻氯匹定 N尼群地平實(shí)驗(yàn)4、對(duì)血小板粘附性的影響(膠原粘附法)將25只家兔隨機(jī)均分成5組，設(shè)空白對(duì)照組，鹽酸噻氯匹定/尼群地平3個(gè)劑量組分別為36.4mg/1.25mg/kg、18.2mg/0.63mg/kg、9.1mg/0.32mg/kg及鹽酸噻氯匹定104mg/kg受試動(dòng)物按上述劑量ig給藥每天1次，連續(xù)3天，于末次給藥后1.5h，常規(guī)在耳緣靜脈取血，制備PRP，PPP及酸溶性膠原，在血小板聚集儀t測(cè)定硅化比濁管內(nèi)加入膠原前(膠原終濃度為0.05mg/ml)后血小板數(shù)(以PPP調(diào)節(jié)PRP使血小板數(shù)為300,000±20,000/μl按公式 其中A為加入膠原前血小板數(shù)，B為加入膠原后血小板數(shù)，以血小板粘附率(％)為觀察指標(biāo)，各給藥組與對(duì)照組進(jìn)行組間比較，t-檢驗(yàn)。
試驗(yàn)結(jié)果表明，ig復(fù)方鹽酸噻氯匹定，在所選擇劑量范圍內(nèi)對(duì)家兔體外法血小板粘附性有明顯抑制作用。表4 復(fù)方鹽酸噻氯匹定對(duì)家兔血小板粘附性的影響組別劑量 動(dòng)物數(shù)血小板數(shù)(1×105/ul) 血小板粘附率mg/kg 只 加膠原前 加膠原后 差值％對(duì)照組- 53.04±0.18 1.50±0.16 1.54±0.1850.7T+N16.4+1.25 53.00±0.16 2.26±0.65 0.74±0.53**24.718.2+6.3 52.96±0.18 1.82±0.34 0.94±0.29**38.59.1+0.32 53.06±0.17 1.66±0.23 1.40±0.2445.8N 104.0 52.94±0.20 1.94±0.32 1.00±0.20**34.0與對(duì)照組比較**P＜0.01 注T鹽酸噻氯匹定 N尼群地平實(shí)驗(yàn)5、血小板依賴性血栓形成試驗(yàn)對(duì)家兔頸總動(dòng)脈血栓形成的影響受試動(dòng)物分組，給藥方式、劑量同實(shí)驗(yàn)4，于末次給藥后用戊巴比妥鈉以30mg/kg麻醉、游離頸總動(dòng)脈，用細(xì)針將長(zhǎng)約3cm絲線穿入頸總脈內(nèi)，在動(dòng)脈內(nèi)保存2小時(shí)后，剪除頸總動(dòng)脈，除去絲線，稱血栓濕重，計(jì)算血栓形成抑制率。血栓形成抑制率＝[對(duì)照組血栓濕重-給藥組血栓濕重]/對(duì)照組血栓濕重×100％。表5 復(fù)方鹽酸噻氯匹定家兔血小板血栓形成的影響組別 劑量 動(dòng)物數(shù) 血栓濕重 血栓形成抑制率mg/kg 只mg ％對(duì)照組 - 5 14.1±3.0 -T+N 72.8+2.5 5 5.8±2.6**58.936.4+1.255 7.3±2.0**48.218.2+0.635 10.0±2.6*29.1N 208.05 6.9±1.6**51.1與對(duì)照組比較*P＜0.05、**P＜0.01 注T鹽酸噻氯匹定 N尼群地平試驗(yàn)結(jié)果如表5所示，在所選擇劑量范圍內(nèi)復(fù)方鹽酸噻氯匹定對(duì)家兔血小板血栓形成呈明顯抑制作用。實(shí)驗(yàn)6、對(duì)血小板依賴性血栓形成家兔血漿血栓烷B2和6-酮-PGF1α含量的影響除設(shè)空白對(duì)照組外，其余各組給藥方式，劑量均同實(shí)驗(yàn)5，多組受試動(dòng)物均于給藥前及制作血栓后2小時(shí)(取血栓前)分別采血，按中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院東亞免疫技術(shù)研究所藥盒說(shuō)明，用消炎痛-EDTA-Na2抗凝，采用FJ2008 r兔疫計(jì)數(shù)器(西安核子儀器廠)測(cè)定，血漿TXB2，6Keto-PGF1α含量，以上述兩指標(biāo)給藥前，與制作血栓后含量之差進(jìn)行組間比較，顯著性測(cè)定。
如表6所示試驗(yàn)結(jié)果表明，此復(fù)方提前3天用藥可減少由于頸總動(dòng)脈血栓制作所導(dǎo)致的TXB2增加。給藥的高中劑量組給藥前后TXB2含量差值與模型對(duì)照組給藥前后TXB2差值間有明顯差異(P＜0.05)，但對(duì)6-Keto-PGF1α含量無(wú)明顯影響。陽(yáng)性對(duì)照藥噻氯匹定單方，雖提前給藥3天，但對(duì)由于頸總動(dòng)脈制作引起的TXB2含量增加無(wú)明顯影響，與模型對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。表6 復(fù)方鹽酸噻氯匹定對(duì)家兔頸總動(dòng)脈血栓制作前后血漿TXB2，6Keto-PGF1含量影響組別 劑量動(dòng)物數(shù)血小板數(shù)(1×105/ul)6Keto-PGF1mg/kg 只 給藥前 給藥(血栓制用)后 差值 TXB2％空白對(duì)照 -5 324.8±104.7 380.2±91.155.4±21.317.738.3±16.1 50.2±12.1 9.8±7.2對(duì)照組-5 367.2±82.81160.4±358.1 793.4±298.6△△8.938.8±9.1 110.0±31.970.7±24.0△△T+N 72.8+2.5 5 348.0±91.0816.2±133.4 388.4±71.4*19.429.5±7.3 104.7±18.075.2±17.936.4+1.25 5 378.9±70.0819.2±154.2 450.2±138.0*16.832.3±9.0 107.9±24.075.6±22.518.2+0.63 5 426.4±86.51152.2±155.4 725.0±150.6 9.832.6±7.7 103.4±24.171.0±21.2N 208.0 5 360.6±78.91059.8±124.1 699.6±131.2 9.041.7±11.2 104.8±20.563.1±9.9與對(duì)照組比較*P＜0.05，與空白對(duì)照組比較△△P＜0.01注T鹽酸噻氯匹定 N尼群地平實(shí)驗(yàn)7、復(fù)方鹽酸噻氯匹定對(duì)小鼠尾出血時(shí)間的影響將50只雄性小鼠均分5組，受試物劑量為鹽酸噻氯匹定/尼群地平分別為98.0/3.36mg/kg，49.0/1.68mg/kg、24.5/0.84mg/kg，另設(shè)陽(yáng)性對(duì)照藥組鹽酸噻氯匹定100mg/kg；空白對(duì)照組，給相當(dāng)容積的溶劑。
灌胃給藥、每天1次，連續(xù)3天，于末次給藥后1.5小時(shí)，將小鼠固定，尾垂直、距尾尖1.5mm處剪斷尾部后，將尾部置入37℃生理鹽水中，記錄每組每只鼠尾出血時(shí)間即剪斷尾尖開(kāi)始至血停止流出為止。出血時(shí)間超過(guò)10分鐘者以600S(10min)計(jì)算。
試驗(yàn)結(jié)果如表7所示，與空白對(duì)照組比較復(fù)方鹽酸噻氯匹定明顯延長(zhǎng)小鼠尾出血時(shí)間，其間有非常顯著差異。
表7 復(fù)方鹽酸噻氯匹定對(duì)小鼠尾出血時(shí)的影響(X±SD)組別劑量 動(dòng)物數(shù) 血小板聚集mg/kg 只％空白對(duì)照 - 10119.6±23.8T+N98.0+3.36 10392.9±34.6**49.0+1.68 10284.6±37.0**24.5+0.84 10206.6±33.0**N 140.0 10189.0±27.4**與空白對(duì)照組比較**P＜0.01 注T鹽酸噻氯匹定 N尼群地平實(shí)驗(yàn)8、小鼠肺血栓形成試驗(yàn)將100只小鼠隨機(jī)均分5組，給藥方式劑量同試驗(yàn)7，于末次給藥后1.5h，小鼠尾靜脈注射膠原和腎上腺素強(qiáng)復(fù)合誘導(dǎo)劑5.0ml/kg(膠原2.5mg/kg+腎上腺素2mg/kg)，注射速度為0.1ml/5sec，觀察小鼠3min內(nèi)死亡情況，以每組死亡動(dòng)物數(shù)及保護(hù)率為觀察指標(biāo)。
試驗(yàn)結(jié)果如表8所示，試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)X2檢驗(yàn)，表明在選擇劑量范圍內(nèi)復(fù)方鹽酸噻氯匹定對(duì)膠原和腎上腺素誘導(dǎo)小鼠肺血栓致死呈明顯保護(hù)作用。表8復(fù)方鹽酸噻氯匹定對(duì)膠原+腎上腺素復(fù)合物誘發(fā)小鼠肺血栓致死的影響組別 劑量 死亡動(dòng)物/受試動(dòng)物 保護(hù) ED50X2Pmg/kg (只) (％) mg/kg，day對(duì)照組 - 18/20T+N 98.0+3.36 5/20 75.051.6/1.8 14.7315 ＜0.0149.0+1.68 9/20 55.0 7.2934＜0.0124.5+0.84 13/2035.0 2.2939＞0.05N100 10/2050.0 5.8333＜0.05注T鹽酸噻氯匹定 N尼群地平試驗(yàn)結(jié)論綜上試驗(yàn)結(jié)果表明，鹽酸噻氯匹定與尼群地平按一定比例使用，對(duì)二磷酸腺苷，膠原，凝血酶等血小板誘導(dǎo)聚集劑誘導(dǎo)的受試動(dòng)物血小板聚集過(guò)程有明顯抑制作用，對(duì)膠原一腎上腺素復(fù)合物誘發(fā)小鼠肺血栓形成致死亦有明確顯保護(hù)作用。明顯延長(zhǎng)小鼠尾出血時(shí)間。對(duì)家兔頸總動(dòng)脈血栓形成亦有明顯抑制作用，并明顯減少因血栓形成所致的血漿TXB2含量增加，對(duì)血漿6Keto-PGF1α含量無(wú)明顯影響。實(shí)驗(yàn)9、復(fù)方鹽酸噻氯匹定中多種組分對(duì)藥效或毒性影響的試驗(yàn)摘要以ADP誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)法血小板聚集抑制率為指標(biāo)，用金氏概率相加法研究不同劑量，不同比例鹽酸噻氯匹定與尼群地平相互作用關(guān)系，其中尼群地平/鹽酸噻氯匹定＝2.4mg/70.0mg/kg組q＝1.20，協(xié)同作用最好。用正交設(shè)計(jì)方法L9(32)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明在尼群地平/鹽酸噻氯匹定＝2.4/70.0mg/kg時(shí)，對(duì)ADP誘導(dǎo)的體內(nèi)法血小板的抑制作用，以鹽酸噻氯匹定為主。用直觀法處理數(shù)據(jù)，鹽酸噻氯匹定和尼群地平的極差值(R值)分別為26.0和9.4；F-檢驗(yàn)結(jié)果表明鹽酸噻氯匹定F值為36.81(P＜0.05)，尼群地平F值為4.25F(P＞0.05)。
試驗(yàn)?zāi)康奶接扄}酸噻氯匹定與尼群地平配伍后對(duì)ADP誘導(dǎo)的大鼠體內(nèi)血小板聚集的抑制作用及較好的配伍關(guān)系受試藥物鹽酸噻氯匹定(ticlopidine，T)，沈陽(yáng)華泰藥物研究所自制(現(xiàn)已批準(zhǔn)正式生產(chǎn))生產(chǎn)，批號(hào)970302含量98.9％。
尼群地平(nitrendipine)南京制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)960104，含量99.4％。上述藥品均由沈陽(yáng)華泰藥物研究所提供。
尼群地平臨用前用0.5％CMC-Na混懸成較高濃度混懸液鹽酸噻氯匹定用0.9％Na配制，每次灌胃給藥體積為20.0ml/mg。
動(dòng)物 沈陽(yáng)藥科大學(xué)動(dòng)物室提供Wistar大鼠，雄性，體重250±20g，動(dòng)物總數(shù)160只，每組10只，動(dòng)物合格證號(hào)為遼實(shí)動(dòng)質(zhì)合字517。
試驗(yàn)方法1、鹽酸噻氯匹定、尼群地平合并用藥效果的研究受試動(dòng)物在飼養(yǎng)觀察寶內(nèi)觀察一周(觀察室溫度20±3℃，相對(duì)濕度30～70％，12小時(shí)光照，由動(dòng)物室提供標(biāo)準(zhǔn)食餌，飲自來(lái)水。受試動(dòng)物按如下表隨機(jī)分組。每天ig給藥1次，連續(xù)3天，于末次給藥后1.0小時(shí)，在清醒狀態(tài)下，從眼底取血，用3.8％枸椽酸鈉抗凝，常規(guī)制備PRP，PPP，選擇引起對(duì)照組50±10％血小板聚集的ADP終濃度為3.0～6.0umol/L，并以此ADP量測(cè)定各給藥組血小板聚集率的均數(shù)與對(duì)照組聚集率均數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，顯著性檢驗(yàn)，并求出多給藥組血小板聚集抑制率。(聚集抑制％＝對(duì)照聚集％-給藥聚集％)/對(duì)照聚集％×100％)。以抑制率為指標(biāo)，按公式q=EABEA+EB-EA·EB,]]>求出組Q值，其中尼群地平/噻氯匹定＝2.4∶70.0mg/kg，組q值最大，q＝1.2，說(shuō)明兩藥按此比例配值對(duì)ADP誘導(dǎo)體內(nèi)法血小板聚集的抑制呈協(xié)同作用(詳見(jiàn)表10)。表9 鹽酸噻氯匹定尼群地平合并用藥效果研究分組一覽表藥品 劑量(mg/kg)N 2.4 4.8 9.6T 35.0 70.0 140.0N+T2.4+35.0 2.4+70.0 2.4+140.04.8+35.0 4.8+70.0 4.8+140.09.6+35.0 9.6+70.0 9.6+140.0注T鹽酸噻氯匹定 N尼群地平2、鹽酸噻氯匹定-尼群地平的優(yōu)化組合試驗(yàn)試驗(yàn)分組及試驗(yàn)結(jié)果如表10所示，按L9(32)列正交表，以血小板聚集抑制率為指標(biāo)，通過(guò)直觀法分析，結(jié)果表明鹽酸噻氯匹定R＝22.0，尼群地平R＝9.4；F-檢驗(yàn)，結(jié)果表明；鹽酸噻氯匹定F＝36.810(P＜0.05)，尼群地平F＝4.257(R＞0.05)。
試驗(yàn)結(jié)果在鹽酸噻氯匹定、尼群地平組成的復(fù)方中，以鹽酸噻氯匹定70.0mg/kg，尼群地平2.4mg/kg對(duì)ADP誘導(dǎo)的大鼠體內(nèi)法血小板聚集呈明顯抑制作用，用金氏概根率相加法證明，兩藥按此比例配伍，藥效增強(qiáng)，呈協(xié)同作用，q＝1.2。表10 鹽酸噻氯匹定、尼群地平合并用藥效果分析(對(duì)ADP誘導(dǎo)體內(nèi)法血小板聚集性的影響)n＝10組 別劑量 血小板聚集率 抑制率 Q值mg/kg ％對(duì)照組 - 51.4±4.8 -尼群地平組A A19.613.7±4.8 73.3±25.1A24.829.9±13.542.0±23.4A32.439.2±9.7 23.6±19.2鹽酸噻氯匹定組B B1140.0 11.7±4.9 77.4±27.5B270.0 17.8±7.3 65.4±10.1B335.0 21.4±10.758.4±20.9尼群地平/鹽 A1B110.7±4.5 792±10.2 0.84酸噻氯匹定組 A1B29.7±5.7 81.1±9.8 0.89A1B324.1±13.450.2±28.40.56A2B18.3±3.4 83.8±6.6 0.96A2B211.0±2.8 78.6±5.4 0.98A2B324.1±16.152.6±30.70.70A3B18.3±3.1 83.8±5.9 1.01A3B26.8±2.9 88.0±6.4 1.20A3B316.9±4.4 67.0±8.4 0.96L9(32)表11不同比例尼群地平(A)、鹽酸噻氯匹定(B)兩藥復(fù)方制劑對(duì)ADP誘導(dǎo)體內(nèi)法血小板聚集性影響試驗(yàn)號(hào) 尼群地平(A) 鹽酸噻氯匹定(B)抑制率(mg/kg)(mg/kg) ％1 2.4 35.0 67.0±8.42 2.4 70.0 88.0±6.43 2.4 140.0 83.8±5.94 4.8 35.0 52.6±30.75 4.8 70.0 78.6±5.46 4.8 140.0 83.8±6.67 9.6 35.0 50.2±28.48 9.6 70.0 81.1±9.89 9.6 140.0 79.2±10.2因素A，K1＝238.8 因素BK1＝169.8∑y＝664.3K2＝215.0 K2＝247.7y＝664.3/9＝73.8K3＝210.5 K3＝246.8K1＝79.6 K1＝56.6 ∑y2＝50592.49K2＝71.7 K2＝82.6K3＝70.2 K3＝82.3極差R 9.4 26.0表12 不同比例尼群地平(A)鹽酸噻氯匹定(B)對(duì)ADP誘導(dǎo)血小板聚集抑制作用方差分析表(體內(nèi)法)F0.05(2∶2)＝19.0變異來(lái)源 離心差平方和(1) 自由度(n) 均方(MS) F P(1) (2)(3) (4)＝(2)÷(3) 5 (6)A因素 154.18277.09 4.257 ＞0.05B因素 1333.14 2666.5736.81 ＜0.05誤差72.45 418.11總計(jì)1559.7權(quán)利要求
1.一種抗血小板聚集的藥物組合物，其特征在于所述的組合物中含鹽酸噻氯匹定和尼群地平。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗血小板聚集的藥物組合物，其特征在于含有100重量份的鹽酸噻氯匹定和1.7～26重量份的尼群地平。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗血小板聚集的藥物組合物，其特征在于含有100重量份鹽酸噻氯匹定，尼群地平的優(yōu)選含量為3～4重量份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3所述的抗血小板聚集的藥物組合物，其特征在于其可配制成固體形式的單位劑量。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗血小板聚集的藥物組合物，其特征在于可配制成片劑或膠囊劑形式的單位劑量。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗血小板聚集的藥物組合物，其特征在于其中所述的單位劑量含有25～250mg的鹽酸噻氯匹定和1～10mg的尼群地平。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗血小板聚集的藥物組合物，其特征在于其優(yōu)選的單位劑量含有50～100mg的鹽酸噻氯匹定和2～4mg的尼群地平。
全文摘要
一種抗血小板聚集的藥物組合物，組合物中含有鹽酸噻氯匹定和尼群地平。具體含有100重量份的鹽酸噻氯匹定和1.7～26重量份的尼群地平。其中尼群地平的優(yōu)選含量為3～4重量份。按上述重量配比該組合物可制成固體形式的單位劑量。該藥物組合物對(duì)血小板聚集具有很好的抑制作用，主要用作抗血栓形成的制劑，用于可以使用鹽酸噻氯匹定的疾病場(chǎng)合，通過(guò)鹽酸噻氯匹定和尼群地平的協(xié)同作用，可以在保證甚至是提高療效的前提下降低鹽酸噻氯匹定的使用劑量，還能降低成本，減輕患者負(fù)擔(dān)，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
文檔編號(hào)A61K31/4365GK1401321SQ02133068
公開(kāi)日2003年3月12日 申請(qǐng)日期2002年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月29日
發(fā)明者王鵬 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)華泰藥物研究所