專利名稱：一種地錦草提取物、制備工藝及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種地錦草提取物、制備工藝及其應(yīng)用，屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
地錦草為大戟科植物地錦草或斑地錦干燥的全草，為多年生草本植物，具有清解毒、利濕退黃、活血止血、抗病原等功能。現(xiàn)代研究表明，地錦草主要含可水解性鞣質(zhì)類和槲皮素、山萘素等黃酮類化合物；藥理研究證明其具有抗菌、抗病毒、抗氧化、護(hù)肝、止血等生物活性。目前地錦草的提取均采用普通的水提醇沉或單純的醇提，其鞣質(zhì)、脂溶性雜質(zhì)較多、純度低，干燥后提取物的引濕性過大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的地錦草提取物制備工藝，經(jīng)該工藝制備的提取物具有良好的抑制耐藥性禽源大腸桿菌的作用。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是地錦草提取物的制備工藝，其特征是，依次包括以下步驟(1)取地錦草，加入70%的乙醇回流提取2次，每次3小時(shí)，70%的乙醇加入量每次為地錦草質(zhì)量的8倍；(2)合并兩次提取液，然后將提取液加入到濃縮罐中，控制濃縮罐內(nèi)溫度為 90士 1°C進(jìn)行濃縮，至濃縮液相對密度為1. 025 ；(3)將濃縮液置聚酰胺柱上，分別用水，30%乙醇，50%乙醇梯度洗脫，每個(gè)梯度洗脫至無色；收集50 %乙醇洗脫液置濃縮罐中，控制濃縮罐內(nèi)溫度為90 士 1 °C，濃縮至相對密度為1.025 ；(4)將濃縮后的50%乙醇洗脫液送入噴霧干燥器，控制容器內(nèi)進(jìn)風(fēng)口溫度為 180士5°C，出風(fēng)口溫度為60 70°C，進(jìn)行噴霧干燥得到便于存放的地錦草提取物。上述乙醇的百分?jǐn)?shù)均為重量百分?jǐn)?shù)。上述工藝制得的地錦草提取物的主要成分及含量為總黃酮(槲皮素、山萘素、異黃酮、雙黃酮、查爾酮等)含量為M 27wt%，其中以槲皮素為主，地錦草提取物中槲皮素含量為12 Hwt %。該提取物具有良好的抑制耐藥性禽源大腸桿菌的作用。本發(fā)明的有益效果是經(jīng)聚酰胺柱洗脫后得到的產(chǎn)品，去除了可消解性鞣質(zhì)成分， 使最終的提取物得到了純化，為產(chǎn)品進(jìn)行下一步的開發(fā)應(yīng)用奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明本工藝制備的地錦草提取物具有良好的抑制耐藥性禽源大腸桿菌的作用。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
1、儀器與材料地錦草購自濟(jì)南市建聯(lián)中藥有限公司中藥飲片廠，產(chǎn)地為山東。聚酰胺柱40CmX200Cm 制造廠家天津阿托茲精細(xì)化工有限公司實(shí)驗(yàn)菌種來自臨床經(jīng)鑒定具有耐藥性的禽源大腸桿菌2、地錦草提取物制備取地錦草藥材50kg，置提取罐內(nèi)，加入70%乙醇400Kg，加熱回流3小時(shí)，濾過，濾渣加入70 %乙醇400Kg，加熱回流3小時(shí)，濾過，濾液合并，置濃縮罐中，控制濃縮罐內(nèi)溫度為90士 1°C，濃縮至相對密度為1.025，放冷。將濃縮液置40cmX 200cm聚酰胺柱內(nèi)，調(diào)節(jié)洗脫液流速為5L/min，用水洗脫至無色(5小時(shí))，再用30%乙醇洗脫至無色G小時(shí))，然后用50%乙醇洗脫至無色(5小時(shí))，收集50%乙醇洗脫液置濃縮罐中，控制濃縮罐內(nèi)溫度為90士 1°C，濃縮至相對密度為1.025， 放冷。將濃縮后的50%乙醇洗脫液送入噴霧干燥器內(nèi)，控制容器內(nèi)進(jìn)風(fēng)口溫度為 180士5°C，出風(fēng)口溫度為60 70°C，進(jìn)行噴霧干燥，得噴干粉2kg。上述乙醇的百分?jǐn)?shù)均為重量百分?jǐn)?shù)。3、地錦草提取物抑菌實(shí)驗(yàn)3. 1藥液制備用IOg提取物，加入IOOml無菌蒸餾水，攪拌，3000轉(zhuǎn)/min離心，去除不溶物，高壓滅菌，即得。3. 2細(xì)菌懸液的制備用接種環(huán)將耐藥大腸桿菌接種于營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基， 37°C培養(yǎng)M小時(shí)，傳種于無菌肉湯培養(yǎng)基中，經(jīng)18小時(shí)培養(yǎng)，再傳種于無菌肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)6小時(shí)，將菌液濃度做1 100稀釋3. 3抑菌實(shí)驗(yàn)取無菌小試管，每管加肉湯培養(yǎng)基1ml。取藥液Iml加入第1管， 混勻后取Iml加入第2管，第1管補(bǔ)加肉湯培養(yǎng)基1ml，第2管混勻后取Iml加入第3管， 第2管補(bǔ)加肉湯培養(yǎng)基1ml，如此連續(xù)稀釋至第10管，從第10管取出Iml棄掉，第11管用anl肉湯培養(yǎng)基做對照，這樣1 10管為倍比稀釋的藥液(按提取物折算即1 40，
1 80......1 20480)。第1 9和第11管每管各加菌液0.05ml，第10管不加菌液。
將所有試管充分混勻，置37°C培養(yǎng)M小時(shí)，觀察結(jié)果。3. 4結(jié)果判斷要求藥液對照管即第10管無大腸桿菌生長，菌液對照管即第11管有大腸桿菌生長正常，實(shí)驗(yàn)方為有效。以抑制大腸桿菌生長的藥液最高稀釋度為抗菌效價(jià)。 以能抑制大腸桿菌生長的最高稀釋度為最低抑菌濃度MIC。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。結(jié)果顯示本工藝制備的地錦草提取物對耐藥性的禽源大腸桿菌的最低抑菌濃度 MIC 為 5120。4、槲皮素含量測定4. 1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液(50 50)為流動(dòng)相；檢測波長360nm。4. 2對照品溶液的制備精密稱定槲皮素對照品適量，加80%甲醇制成每ImL 含20 μ g的溶液，即得。4. 3供試品溶液的制備取本品粉末約0. 03g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，密封，稱定重量，超聲提取5分鐘，取出，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液20mL，精密加入25%鹽酸7mL，置85°C水浴中水解30min，取出，迅速放冷，轉(zhuǎn)至50mL容量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。4. 4測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得。4. 5計(jì)算公式
權(quán)利要求
1.一種地錦草提取物，其特征是，由地錦草提取制得，其總黃酮含量為M 27wt%;所述總黃酮以槲皮素為主，所述地錦草提取物中槲皮素含量為12 Hwt%。
2.權(quán)利要求1所述的地錦草提取物的制備工藝，其特征是，依次包括以下步驟(1)取地錦草，加入70%的乙醇回流提取2次，每次3小時(shí)，70 %的乙醇加入量每次為地錦草質(zhì)量的8倍；(2)合并兩次提取液，然后將提取液加入到濃縮罐中，控制濃縮罐內(nèi)溫度為90士1°C進(jìn)行濃縮，至濃縮液相對密度為1. 025 ；(3)將濃縮液置聚酰胺柱上，分別用水，30%乙醇，50%乙醇梯度洗脫，每個(gè)梯度洗脫至無色；收集50%乙醇洗脫液置濃縮罐中，控制濃縮罐內(nèi)溫度為90士 1°C，濃縮至相對密度為 1. 025 ；(4)將濃縮后的50%乙醇洗脫液送入噴霧干燥器，控制容器內(nèi)進(jìn)風(fēng)口溫度為 180士5°C，出風(fēng)口溫度為60 70°C，進(jìn)行噴霧干燥制得產(chǎn)品。
3.權(quán)利要求1所述的地錦草提取物在抑制耐藥性禽源大腸桿菌方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種地錦草提取物、制備工藝及其應(yīng)用，屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明將地錦草經(jīng)回流提取、提取液濃縮，然后將濃縮液置聚酰胺柱上，分別用水，30％乙醇，50％乙醇梯度洗脫，收集50％乙醇洗脫液，洗脫液經(jīng)濃縮、干燥制得。其主要成分及含量為總黃酮含量為24～27wt％，其中以槲皮素為主，含量為12～14wt％。本發(fā)明經(jīng)聚酰胺柱洗脫后得到的產(chǎn)品，去除了可消解性鞣質(zhì)成分，使最終的提取物得到了純化，為產(chǎn)品進(jìn)行下一步的開發(fā)應(yīng)用奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明本工藝制備的地錦草提取物具有良好的抑制耐藥性禽源大腸桿菌的作用。
文檔編號A61K36/47GK102302538SQ20111025560
公開日2012年1月4日 申請日期2011年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月1日
發(fā)明者張傳津, 蘇梅, 高迎春 申請人:山東華爾康獸藥有限公司