專利名稱：一種甲殼素膜及其在眼科治療中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種甲殼素制品的應(yīng)用，特別是涉及一種甲殼素膜及其在眼科治療中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
角膜病是我國主要的致盲眼病。在眼表疾病方面，如致病菌感染引起的眼角膜潰瘍，眼科手術(shù)或機械力造成的眼表創(chuàng)傷，酸堿等造成的眼表灼傷等，其治療多采用眼藥水點滴治療，以期控制感染，促進(jìn)創(chuàng)面愈合。但由于藥物在眼部存留時間很短，點滴用藥次數(shù)頻繁，給患者增加了用藥困難，也對眼睛造成刺激，可能使一些患者眼疾加重。在深部角膜病方面，角膜潰瘍、深層角膜損傷和角膜全層裂傷等，其治療需要使用抗生素滴眼液預(yù)防感染，包扎促進(jìn)修復(fù)，或手術(shù)修復(fù)，嚴(yán)重時需要進(jìn)行角膜移植。但由于角膜供體來源匱乏，制約角膜移植手術(shù)的廣泛開展。因此，眼科疾病治療的新技術(shù)新方法的研究得到廣泛重視，如新的給藥方式、眼科生物新材料、組織工程角膜等研究。眼科生物材料研究和應(yīng)用已有較多文獻(xiàn)報道。羊膜具有促進(jìn)成纖維細(xì)胞再生和膠原組織的再構(gòu)建作用，對促進(jìn)角膜上皮愈合、減輕炎癥反應(yīng)、抑制瘢痕增生都具有較好的功效，在眼表重建中廣泛應(yīng)用。羊膜作為角膜細(xì)胞貼附生長的載體也得到較多研究，Koizumi等(Koizumi N et al.Cornea, 2000)用人羊膜作為角膜細(xì)胞貼附生長的載體，將兔角膜緣干細(xì)胞植片種植其上進(jìn)行培養(yǎng)， 14天后上皮細(xì)胞覆蓋整個羊膜且貼附良好，對兔進(jìn)行自體移植可達(dá)到上皮化。但羊膜是一層非常薄的膜，松軟不易固定，操作難度，因此構(gòu)建角膜組織比較困難，也存在病毒傳播的風(fēng)險。近年來，從動物體提取的膠原作為支架材料被用于多種組織工程修復(fù)研究中，由于膠原是體內(nèi)組織器官的組成成分，因此生物相容性較好，有利于細(xì)胞貼附生長。2000年，Elizabeth用膠原海綿為載體分別培養(yǎng)角膜上皮細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)角膜細(xì)胞可在膠原海綿上生長遷移，并能表現(xiàn)出正常生理狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)和特征，但膠原海綿培養(yǎng)基質(zhì)細(xì)胞形成的組織透明度僅能達(dá)到正常角膜的50%，達(dá)不到臨床研究的要求。殼聚糖是一種天然高分子多糖，是D-葡萄糖胺通過P -1，4糖苷鍵相連的直鏈氨基多糖，殼聚糖生物材料的生物降解性及其在角膜病治療也有廣泛研究報道。1988年盧鳳琦等研究了殼聚糖膜的降解與生物相容性，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)殼聚糖膜體內(nèi)植入2 8周內(nèi)炎細(xì)胞浸潤較絲線重，至16周時纖維化程度加大，說明殼聚糖膜在體內(nèi)有一定程度的炎癥反應(yīng)。2007年郭晟研究了殼聚糖膜用于眼表堿燒傷預(yù)防瞼球粘連的效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用殼聚糖膜的家兔均發(fā)生角膜穿孔，眼內(nèi)容物脫出。2001年姚子昂等研究了兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞在殼聚糖膜、殼聚糖與硫酸軟骨素共混膜上的培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兔角膜細(xì)胞與殼聚糖膜的相容性較差，培養(yǎng)24小時后細(xì)胞開始聚集脫落，而在殼聚糖與硫酸軟骨素共混膜上的生長情況較好，未發(fā)現(xiàn)聚集脫落現(xiàn)象，但仍不十分理想，在長期培養(yǎng)過程中，細(xì)胞脫落。這些研究表明殼聚糖作為眼科植入用生物材料還存在一定缺陷，這些缺陷多被認(rèn)為是由于殼聚糖的氨基的正電性造成。
甲殼素也是一種天然高分子多糖，是N-乙?；?D-葡萄糖胺通過￠-1,4糖苷鍵相連的直鏈氨基多糖，廣泛存在于節(jié)肢動物的外殼，對節(jié)肢動物的體壁構(gòu)建、肢體再生具有重要作用。與殼聚糖不同的是，甲殼素的氨基具有乙?；?，沒有正電性。甲殼素可被生物體降解，其降解產(chǎn)物是機體生物合成的原料，因此甲殼素具有較好的生物活性和生物安全性，特別是對機體再生修復(fù)具有較好的生物活性。但由于甲殼素分子內(nèi)、分子間的強氫鍵相互作用，分子間結(jié)構(gòu)緊密有序，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，不溶解于水，也不溶解于一般的稀酸、稀堿溶液和一般有機溶劑，極大地限制了甲殼素的研究、開發(fā)和應(yīng)用。因此將甲殼素作為生物材料直接開發(fā)的技術(shù)積累還較少，影響了甲殼素新材料研究的深入和應(yīng)用。很多研究者在甲殼素的溶解方面做了大量研究，包括篩選適當(dāng)?shù)娜軇┻M(jìn)行溶解，包括對甲殼素進(jìn)行親水性改性，還包括降低甲殼素的分子量等?，F(xiàn)已證明甲殼素可以溶解于LiCl/N，N-二甲基乙酰胺、六氟異丙醇，也可以溶解于低溫處理的尿素和堿的水溶液中，還可以溶解于甲酸中，為甲殼素生物材料研究奠定了基礎(chǔ)。甲殼素溶解于甲酸中，溶解后制成1% -10%的溶膠，將甲殼素溶膠在潔凈的聚苯乙烯板或玻璃平板等平板上延流，并干燥成膜。將干燥后的膜片調(diào)節(jié)PH值并水洗至中性，并再次在聚苯乙烯板或玻璃平板上干燥，得到透明的甲殼素膜。甲殼素膜的厚度可以根據(jù)甲殼素溶膠的濃度和延流成膜時溶膠的使用量進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而得到厚度不同的膜。甲殼素膜的厚度可以在10um-5mm，或者更薄，或者更厚，根據(jù)用途進(jìn)行厚度調(diào)節(jié)。甲殼素膜可以制成致密的膜，也可以制成有孔隙的膜，在制備甲殼素溶膠時，在溶膠中加入NaCl、KCl、CaCl2等小分子無機物或小分子有機物等作為致孔劑，則在甲殼素溶膠成膜后經(jīng)水洗、干燥后，在甲殼素膜上形成小的孔徑，能夠增加甲殼素膜的通透性。甲殼素膜可以制成不同形狀，如平整膜、曲率膜、長方形膜、正方形膜、圓形膜、多邊形膜等，也可以根據(jù)使用需要進(jìn)行裁剪，或再次加工，其中符合人眼睛曲率的甲殼素膜更適合眼科使用。制備甲殼素膜可以進(jìn)行輻照滅菌或環(huán)氧乙烷滅菌，制成無菌甲殼素膜，還可以在無菌條件下制備甲殼素膜。在制備甲殼素膜時，可以根據(jù)甲殼素膜的用途，在甲殼素膠液中添加其它物質(zhì)，提高甲殼素膜的生物性能。如添 加硫酸軟骨素，透明質(zhì)酸等氨基多糖，提高甲殼素膜的促進(jìn)細(xì)胞生長和創(chuàng)面愈合功能。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種甲殼素膜及其在眼科治療中的應(yīng)用，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，滿足現(xiàn)有技術(shù)的需求。一種甲殼素膜，其特征是由甲殼素組成，或是以甲殼素為主要原材料，由甲殼素與氨基糖以重量比為1: (0 0.5)的比例組成；所述的氨基糖是硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸、肝素、羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖、羥丙基殼聚糖、磺酸化殼聚糖、琥珀酰殼聚糖、羥乙基琥珀酰殼聚糖、羥丙基琥珀酰殼聚糖、羧甲基甲殼素、羥乙基甲殼素、羥丙基甲殼素、磺酸化甲殼素中的I種至3種。上述的甲殼素膜在制備促進(jìn)角膜上皮的損傷修復(fù)、減輕角膜水腫的生物材料或醫(yī)療器械中應(yīng)用，作為促進(jìn)角膜上皮的損傷修復(fù)、減輕角膜水腫的生物材料或醫(yī)療器械開發(fā)。上述的甲殼素膜在制備眼科用藥的載體生物材料中應(yīng)用，作為眼科藥物載體生物材料或醫(yī)療器械開發(fā)。上述的甲殼素膜在制備細(xì)胞生長的載體支架生物材料中應(yīng)用，在構(gòu)建組織工程角膜上皮、組織工程角膜基質(zhì)、組織工程角膜內(nèi)皮的生物材料或醫(yī)療器械中應(yīng)用，作為組織工程角膜上皮、組織工程角膜基質(zhì)、組織工程角膜內(nèi)皮的生物材料或醫(yī)療器械開發(fā)。甲殼素膜是一種高分子多糖膜，具有較好的機械強度和柔韌性，不溶于水，可以被生物降解，無毒性，具有較好的生物相容性，可以在眼科治療中應(yīng)用，為眼科疾病的治療提供一個新的技術(shù)手段。
具體實施例方式實施例1甲殼素膜I的制備稱取高純度的甲殼素粉3.0gjPTvlOOml甲酸中，再加入0.5gNaCl做為致孔劑，室溫下用玻璃棒攪拌溶解，得甲殼素膠體溶液。將膠體溶液在PE塑料板上流延鋪膜，在通風(fēng)櫥中常溫干燥。干燥后的膜用蒸餾水浸泡洗滌至中性，常溫干燥，輻照滅菌，得平整的甲殼素膜I。實施例2甲殼素膜2的制備稱取高純度的甲殼素粉2.8g，加入IOOml甲酸中，再加入0.2g透明質(zhì)酸，室溫下用玻璃棒攪拌溶解，得甲殼素-透明質(zhì)酸膠體溶液。用移液器吸取一定量的甲殼素-透明質(zhì)酸膠體溶液，加入在電機驅(qū)動下能旋轉(zhuǎn)的曲率直徑為14mm的聚四氟乙烯棒的凹槽中，開啟電機，旋轉(zhuǎn)速度控制在600 800轉(zhuǎn)/min，使膠體溶液在凹槽中形成均勻的膠膜層，自然條件下離心干燥，制成曲率膜。干燥后的膜用蒸餾水浸泡洗滌至中性，常溫干燥，輻照滅菌，得有孔徑和曲率的甲殼素膜2。實施例3甲殼素膜3的制備稱取高純度的甲殼素粉2.2g，加入IOOml甲酸中，再加入0.5g硫酸軟骨素和0.3g羧甲基殼聚糖，室溫下用玻璃棒攪拌溶解，得甲殼素-硫酸軟骨素-羧甲基殼聚糖膠體溶液。用移液器吸取一定量的甲殼素-硫酸軟骨素-羧甲基殼聚糖膠體溶液，加入在電機驅(qū)動下能旋轉(zhuǎn)的曲率直徑為14mm的聚四氟乙烯棒的凹槽中，開啟電機，旋轉(zhuǎn)速度控制在600 800轉(zhuǎn)/min，使膠液在凹槽中形成均勻的膠膜層，自然條件下離心干燥，制成曲率膜。干燥后的膜用蒸餾水浸泡洗滌至中性，常溫干燥，輻照滅菌，得有孔徑和曲率的甲殼素膜3。實施例4甲殼素膜4的制備稱取高純度的甲殼素2.0g，加入IOOml甲酸中，再加入0.3g羥乙基殼聚糖、0.2g磺酸化甲殼素和0.5g硫酸軟骨素，室溫下用玻璃棒攪拌溶解，得甲殼素-羥乙基殼聚糖-磺酸化甲殼素-硫酸軟骨素膠體溶液。用移液器吸取一定量的甲殼素-羥乙基殼聚糖-磺酸化甲殼素-硫酸軟骨素膠體溶液，加入在電機驅(qū)動下能旋轉(zhuǎn)的曲率直徑為14_的聚四氟乙烯棒的凹槽中，開啟電機，旋轉(zhuǎn)速度控制在600 800轉(zhuǎn)/min，使膠液在凹槽中形成均勻的膠膜層，自然條件下離心干燥，制成曲率膜。干燥后的膜用蒸餾水浸泡洗滌至中性，常溫干燥，輻照滅菌，得有孔徑和曲率的甲殼素膜4。實施例5甲殼素膜作為促進(jìn)眼角膜上皮損傷修復(fù)愈合的生物材料新西蘭兔眼角膜上皮 損 傷模型的制備及分組治療:實驗用新西蘭兔24只(體重2.5 3.0Kg)，分為正常對照眼、空白對照眼、膜I實驗眼、膜3實驗眼、膜3載藥實驗眼。具體操作如下:新西蘭兔耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉麻醉(lmL/kg)，將直徑為1.1cm的無菌濾紙片浸入醫(yī)用酒精中l(wèi)min，貼敷至兔右眼角膜中央30s，造成右眼角膜上皮損傷，之后用生理鹽水沖洗。損傷的兔角膜上皮用刮刀輕輕刮除上皮層，用熒光素鈉試紙條對上皮染色，將損傷的右眼于裂隙燈的鈷藍(lán)光下觀察損傷區(qū)域，并記錄損傷面積。24只眼角膜上皮損傷的新西蘭兔右眼分為膜I實驗眼、膜3實驗眼、膜3載藥實驗眼和空白對照眼，各6只。膜I實驗眼和膜3實驗眼分別用甲殼素膜I和甲殼素膜3貼附于兔右眼眼表的損傷位，縫合上下眼瞼；膜3載藥實驗眼將6片甲殼素膜3在3ml左氧氟沙星滴眼液中浸泡2分鐘后貼附于兔右眼眼表的損傷位，縫合上下眼瞼；空白對照眼則不貼附甲殼素膜，直接縫合上下眼瞼。全部新西蘭兔的左眼不進(jìn)行任何損傷，為正常對照眼，共24只正常對照組眼。實驗后新西蘭兔單籠飼養(yǎng)，正常飲食。膜I實驗眼、膜3實驗眼和空白對照眼每天用左氧氟沙星滴眼液滴損傷眼3-4次，每次I滴，連續(xù)3d。實驗后第3d，分別打開3只膜I實驗眼、3只膜3實驗眼和3只膜3載藥實驗眼縫合的眼瞼，取出甲殼素膜，打開3只空白對照眼縫合的眼瞼，分別對角膜上皮進(jìn)行熒光素鈉試紙條染色，裂隙燈鈷藍(lán)光下觀察尚未愈合的損傷區(qū)域，記錄未愈合面積。實驗后第7d，分別打開另3只膜I實驗眼、另3只膜3實驗眼和另3只膜3載藥實驗眼縫合的眼瞼，取出甲殼素膜，打開另3只空白對照眼縫合的眼瞼，分別對角膜上皮進(jìn)行熒光素鈉試紙條染色，裂隙燈鈷藍(lán)光下觀察角膜上皮的愈合情況。實驗結(jié)果:實驗后第3d，膜I實驗眼、膜3實驗眼和膜3載藥實驗眼均有少量分泌物，輕度畏光，無水腫現(xiàn)象，損傷的角膜上皮有75%的區(qū)域得到修復(fù)；空白對照眼分泌物較多，畏光，有明顯水腫現(xiàn)象，損傷的角膜上皮有50%的區(qū)域得到修復(fù)。實驗后第7d，3組實驗眼無分泌物，無水腫，損傷的上皮已完全修復(fù)，實驗眼與正常對照眼無明顯差異；空白對照眼有I只恢復(fù)正常，2只有水腫，無分泌物。實驗結(jié)果顯示，甲殼素膜I和甲殼素膜3均具有促進(jìn)角膜上皮的損傷修復(fù)、減輕角膜水腫的作用，具有加速眼角膜上皮損傷的修復(fù)愈合功能，同時甲殼素膜I和甲殼素膜3的促進(jìn)角膜上皮損傷修復(fù)和減輕角膜水腫作用效果相似。實驗還顯示，用載有抗生素左氧氟沙星滴眼液的甲殼素膜3貼附眼表和用左氧氟沙星滴眼液每日滴眼，均能有效預(yù)防損傷眼的感染，同樣達(dá)到治療的效果，但甲殼素膜作為抗生素藥物載體可以減少每日滴眼液的使用，減輕滴眼液對眼睛的刺激作用。實施例6甲殼素膜作為眼角膜上皮細(xì)胞生長的載體支架生物材料無菌條件下取傳代培養(yǎng)2次的新西蘭兔角膜上皮細(xì)胞2瓶，各用0.25%的胰蛋白酶液Iml室溫下消化5min后，加入含20%新生牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基3ml終止反應(yīng)，用移液槍輕輕吹吸，使細(xì)胞均勻分散開。實驗設(shè)膜2組、膜3組和對照組，每組5個重復(fù)。將消化后的角膜上皮細(xì)胞調(diào)節(jié)密度為2 X 105/ml，分別接種到48孔板中鋪有甲殼素膜2 (凹面朝上)的5個細(xì)胞培養(yǎng)孔、鋪有甲殼素膜3 (凹面朝上)的5個細(xì)胞培養(yǎng)孔和5個沒有甲殼素膜的細(xì)胞培養(yǎng)孔(對照組)，每孔350iU，于37°C、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別于接種培養(yǎng)后2d、4d倒置顯微鏡下觀察角膜上皮細(xì)胞在甲殼素膜上的生長情況和細(xì)胞與膜貼附的情況，掃描電子顯微鏡下觀察細(xì)胞的附著情況。實驗結(jié)果顯示，細(xì)胞接種后2d和4d，角膜上皮細(xì)胞在甲殼素膜2和甲殼素膜3上的生長狀態(tài)良好，胞體透明。培養(yǎng)2d 時，細(xì)胞呈多角狀或梭形，培養(yǎng)4d時，細(xì)胞呈多邊形，形狀規(guī)則，2種甲殼素膜上的細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞密度與對照組無明顯差異。分別用眼科鑷取出貼附上皮細(xì)胞的甲殼素膜2和甲殼素膜3各2個膜片，分別置于裝有IOml細(xì)胞培養(yǎng)基的小三角瓶中，置振蕩器中l(wèi)OOr/min振蕩2min，倒置顯微鏡下觀察膜片上有無細(xì)胞明顯脫落現(xiàn)象。觀察結(jié)果顯示，振蕩后細(xì)胞仍在膜上保持良好形態(tài)，膜片完整，沒有明顯細(xì)胞脫落現(xiàn)象。掃描電鏡觀察到角膜上皮細(xì)胞伸出許多絲足緊密貼附于甲殼素膜上，細(xì)胞呈多角形，形態(tài)正常，表面有許多微絨毛。上述觀察結(jié)果表明，甲殼素膜2和甲殼素膜3均具有支持角膜上皮細(xì)胞生長的作用。實施例7甲殼素膜作為眼角膜基質(zhì)細(xì)胞生長的載體支架生物材料無菌條件下取傳代培養(yǎng)2次的新西蘭兔角膜基質(zhì)細(xì)胞2瓶，各用0.25%的胰蛋白酶液Iml室溫下消化5min后，加入含15%新生牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基3ml終止反應(yīng)，用移液槍輕輕吹吸，使細(xì)胞均勻分散開。實驗設(shè)膜I組、膜3組和對照組，每組5個重復(fù)。將消化后的角膜基質(zhì)細(xì)胞調(diào)節(jié)密度為2X105/ml，分別接種到48孔板中鋪有甲殼素膜I的5個細(xì)胞培養(yǎng)孔、鋪有甲殼素膜3 (凹面朝上)的5個細(xì)胞培養(yǎng)孔和5個沒有甲殼素膜的細(xì)胞培養(yǎng)孔(對照組)，每孔350 yl，于37°C、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別于接種培養(yǎng)后2d、4d倒置顯微鏡下觀察角膜基質(zhì)細(xì)胞在甲殼素膜上的生長情況和細(xì)胞與膜貼附的情況。實驗結(jié)果顯示， 細(xì)胞接種后2d和4d，角膜基質(zhì)細(xì)胞在甲殼素膜I和甲殼素膜3上的生長狀態(tài)良好，胞體透明，形態(tài)呈梭形或紡錘形，融合形成細(xì)胞單層，2種甲殼素膜上的細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞密度與對照組無明顯差異。分別取出貼附基質(zhì)細(xì)胞的甲殼素膜I和甲殼素膜3各2片，分別置于裝有IOml細(xì)胞培養(yǎng)基的小三角瓶中，置振蕩器中100r/min振蕩2min，倒置顯微鏡下觀察，振蕩后細(xì)胞仍在膜上保持良好形態(tài)，膜片完整，沒有明顯細(xì)胞脫落。因此，甲殼素膜I和甲殼素膜3均具有支持角膜基質(zhì)細(xì)胞生長的作用。實施例8甲殼素膜作為眼角膜內(nèi)皮細(xì)胞生長的載體支架生物材料無菌條件下取傳代培養(yǎng)2次的新西蘭兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞2瓶，各用0.25%的胰蛋白酶液Iml室溫下消化5min后，加入含20%新生牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基3ml終止反應(yīng)，用移液槍輕輕吹吸，使細(xì)胞均勻分散開。實驗設(shè)膜3組、膜4組和對照組，每組5個重復(fù)。將消化后的角膜內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)節(jié)密度為4 X 105/ml，分別接種到48孔板中鋪有甲殼素膜3 (凹面朝上)的5個細(xì)胞培養(yǎng)孔、鋪有甲殼素膜4 (凹面朝上)的5個細(xì)胞培養(yǎng)孔和5個沒有甲殼素膜的細(xì)胞培養(yǎng)孔(對照組)，每孔350iU，于37°C、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別于接種培養(yǎng)后2d、4d倒置顯微鏡下觀察角膜內(nèi)皮細(xì)胞在甲殼素膜上的生長情況和細(xì)胞與膜貼附的情況。實驗結(jié)果顯示，細(xì)胞接種后2d和4d，角膜內(nèi)皮細(xì)胞在甲殼素膜3和甲殼素膜4上的生長狀態(tài)良好，胞漿豐富，胞體透明。培養(yǎng)4d時，細(xì)胞間以偽足相連接，出現(xiàn)“拉網(wǎng)”現(xiàn)象，細(xì)胞密集區(qū)域連接成片，細(xì)胞呈近六角形或多角形，2種甲殼素膜上的細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞密度與對照組無明顯差異。用眼科鑷取出貼附內(nèi)皮細(xì)胞的甲殼素膜3和甲殼素膜4各2片，分別置于裝有IOml細(xì)胞培養(yǎng)基的小三角瓶中，置振蕩器中100r/min振蕩2min，倒置顯微鏡下觀察，振蕩后細(xì)胞仍在膜上保持良好形態(tài)，膜片完整，沒有明顯細(xì)胞脫落。上述觀察結(jié)果表明，甲殼素膜3和甲殼素膜4均具有支持角膜內(nèi)皮細(xì)胞生長的作用。上述實施例1 實施例4中所述的透明質(zhì)酸、硫酸軟骨素、羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖、磺酸化甲殼素均為氨基糖；所述的甲殼素膜，是由甲殼素組成的膜，或是以甲殼素為主要原材料，由甲殼素與氨基糖以重量比為1: (0 0.5)的比例組成；所述的甲殼素可以有兩種來源，一是由蝦蟹殼脫鈣、脫色素、脫蛋白制得，二是由蝦蟹殼制得的甲殼素經(jīng)脫乙酰基后制得殼聚糖，再由殼聚糖經(jīng)乙?；频眉讱に兀瑑煞N來源的甲殼素均有不溶于水，不溶于1%醋酸溶液的特性；所述的氨基糖可以是硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸、肝素、羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖、羥丙基殼聚糖、磺酸化殼聚糖、琥珀酰殼聚糖、羥乙基琥珀酰殼聚糖、羥丙基琥珀酰殼聚糖、羧甲基甲殼素、羥乙基甲殼素、羥丙基甲殼素、磺酸化甲殼素中的I種至3種；所述的甲殼素膜是平整膜或是曲率膜，形狀是長方形膜、正方形膜、圓形膜或多邊形膜，其中優(yōu)選圓形曲率膜，特別是符合人眼睛的圓形曲率膜。一定比例的氨基糖的添力口，一方面增加了甲殼素膜的通透性，另一方面可以有效促進(jìn)角膜組織細(xì)胞的生長，促進(jìn)角膜組織損傷的修復(fù)，也進(jìn)一步增加了甲殼素膜在體內(nèi)的生物相容性。上述甲殼素膜具有較好的機械強度、柔韌性和通透性，不溶于水，可以被生物體降解，無毒性，具有較好的生物相容性。實施例5顯示了甲殼素膜具有促進(jìn)角膜上皮的損傷修復(fù)、減輕角膜水腫的作用，具有加速眼角膜上皮損傷的修復(fù)愈合的功能。實施例5還顯示了甲殼素膜是眼科用藥的良好載體，可以減少每日滴眼液的使用，減輕滴眼液對眼睛的刺激作用，同樣達(dá)到治療的效果。實施例6 實施例8顯示了甲殼素膜支持角膜上皮細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的生長，細(xì)胞形態(tài)正常，細(xì)胞貼附牢固，因此甲殼素膜是角膜上皮細(xì)胞、角膜基質(zhì)細(xì)胞、角膜內(nèi)皮細(xì)胞生長的良好載體生物材料。由此以甲殼素膜為細(xì)胞生長的載體支架材料，體外構(gòu)建組織工程角膜上皮、組織工程角膜基質(zhì)、組織工程角膜內(nèi)皮，通過移植手術(shù)，對角膜上皮損傷、角膜基質(zhì)損傷、角膜內(nèi)皮損傷進(jìn)行修復(fù)。因此，甲殼素膜可以在制備促進(jìn)角膜上皮的損傷修復(fù)、減輕角膜水腫的生物材料或醫(yī)療器械中應(yīng)用，作為促進(jìn)角膜上皮的損傷修復(fù)、減輕角膜水腫的生物材料或醫(yī)療器械進(jìn)行開發(fā)。甲殼素膜可以在制備眼科用藥的載體生物材料中應(yīng)用，作為眼科藥物載體生物材料或醫(yī)療器械進(jìn)行開發(fā)。甲殼素膜還可以在制備角膜上皮細(xì)胞、角膜基質(zhì)細(xì)胞、角膜內(nèi)皮細(xì)胞生長的載體支架生物材料中應(yīng)用，在構(gòu)建組織工程角膜上皮、組織工程角膜基質(zhì)、組織工程角膜內(nèi)皮的生物材料或醫(yī)療器械中應(yīng)用，作為組織工程角膜上皮、組織工程角膜基質(zhì)、組織工程角膜內(nèi)皮的支架材料或醫(yī)療器械進(jìn)行開發(fā)。因此，甲殼素膜作為生物材料或醫(yī)療器械開發(fā)，在眼科治療中應(yīng)用，為眼科疾病的治療提供一個新的技術(shù)手段，具有廣 闊的應(yīng)用前景。
權(quán)利要求
1.一種甲殼素膜，其特征是由甲殼素組成，或是以甲殼素為主要原材料，由甲殼素與氨基糖以重量比為1: (0 0.5)的比例組成；所述的氨基糖是硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸、肝素、羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖、羥丙基殼聚糖、磺酸化殼聚糖、琥珀酰殼聚糖、羥乙基琥珀酰殼聚糖、羥丙基琥珀酰殼聚糖、羧甲基甲殼素、羥乙基甲殼素、羥丙基甲殼素、磺酸化甲殼素中的I種至3種。
2.如權(quán)利要求1所述的甲殼素膜，其特征是平整膜，或是曲率膜，形狀是長方形膜、正方形膜、圓形膜或多邊形膜，其中優(yōu)選圓形曲率膜，特別是符合人眼睛的圓形曲率膜。
3.如權(quán)利要求1所述的甲殼素膜在制備促進(jìn)角膜上皮的損傷修復(fù)、減輕角膜水腫的生物材料或醫(yī)療器械中應(yīng)用，作為促進(jìn)角膜上皮的損傷修復(fù)、減輕角膜水腫的生物材料或醫(yī)療器械開發(fā)。
4.如權(quán)利要求1所述的甲殼素膜在制備眼科用藥的載體生物材料中應(yīng)用，作為眼科藥物載體生物材料或醫(yī)療器械開發(fā)。
5.如權(quán)利要求1所述的甲殼素膜在制備細(xì)胞生長的載體支架生物材料中應(yīng)用，在構(gòu)建組織工程角膜上皮、組 織工程角膜基質(zhì)、組織工程角膜內(nèi)皮的生物材料或醫(yī)療器械中應(yīng)用，作為組織工程角膜上皮、組織工程角膜基質(zhì)、組織工程角膜內(nèi)皮的生物材料或醫(yī)療器械開發(fā)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種甲殼素制品的應(yīng)用，特別是涉及一種甲殼素膜及其在眼科治療中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域。其中甲殼素膜，其特征是由甲殼素組成，或是以甲殼素為主要原材料，由甲殼素與氨基糖以重量比為1∶(0～0.5)的比例組成。
文檔編號A61L31/10GK103239762SQ20131019199
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月23日
發(fā)明者劉萬順, 韓寶芹, 隋鮮鮮, 邵凱 申請人:中國海洋大學(xué)