專(zhuān)利名稱：用作金屬蛋白酶抑制劑的吡咯烷－2－羧酸酰肼衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的目標(biāo)化合物是有用的金屬蛋白酶，如鋅蛋白酶特別是鋅水解酶抑制劑，這類(lèi)化合物可有效地預(yù)防和治療一些與越來(lái)越多出現(xiàn)的血管收縮相關(guān)聯(lián)的疾病狀態(tài)。這種疾病的例子有高血壓、冠狀動(dòng)脈疾病、心臟功能不足、腎臟和心肌局部缺血、腎臟功能不足、透析、大腦局部缺血、心臟梗塞、偏頭痛、蛛網(wǎng)膜下腔出血、雷諾氏綜合癥和肺部高壓。此外這類(lèi)化合物是用于抑制移植物排斥、器官保護(hù)和治療眼科疾病的有用的抑制細(xì)胞生長(zhǎng)劑和大腦保護(hù)劑。
內(nèi)皮素是存在三種異構(gòu)體的肽，這三種異構(gòu)體是ET-1，ET-2和ET-3，它們各自被三種各截然不同的基因編碼。它們最初是1988年由Yanagisawa在豬內(nèi)皮細(xì)胞的條件培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)的(Yanagisawa M；Kurihara H；Kimura S；Tomobe Y；Kobayashi M；Mitsui Y；YazakiY；Goto K；Masaki T血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的一種新的強(qiáng)烈的血管收縮肽[參閱注解]，NARURE(1988年3月31日)，332(6163)卷，411～5頁(yè))。這些活性的ET是帶有兩個(gè)分子內(nèi)二硫橋鍵的21個(gè)氨基酸的肽。它們是由203～212氨基酸的前原蛋白質(zhì)產(chǎn)生的，此前原蛋白質(zhì)被具有弗林蛋白酶特征的肽鏈內(nèi)切酶處理成生物惰性的大-內(nèi)皮素(大-ET)。這些大-ET在氨基酸21和22之間水解斷裂而被特殊地處理為成熟的各種ET，氨基酸21和22分別是色氨酸21-纈氨酸22(大-ET-1、大ET-2)和在大-ET-3中為色氨酸21-異亮氨酸22。早在1988年就假定是一種特殊的金屬蛋白酶造成這種特殊的斷裂。在1994年從牛腎上腺純化并克隆了ECE-1(內(nèi)皮素轉(zhuǎn)變酶-1)(Xu D、Emoto N、Giaid A、Slaughter C、Kaw S、de Witt D、Yanagisawa M“ECE-1一種促進(jìn)大-內(nèi)皮素-1的蛋白水解活性的膜-結(jié)合金屬蛋白酶”，Cell(1994年)78期473～485頁(yè))。
ECE-1是膜結(jié)合的II型鋅-肽鏈內(nèi)切酶，具有最佳中性pH值及鋅結(jié)合的不固定HExxHx(＞20)E。它屬于亞族M13，具有包括活性部位的大的681氨基酸胞外結(jié)構(gòu)域。M13族的其它成員有NEP24.11(中性肽鏈內(nèi)切酶)、PEX、一種磷酸鹽調(diào)節(jié)的中性肽鏈內(nèi)切酶、及凱爾血型蛋白，此蛋白最近被描述為大-ET3加工酶。人類(lèi)血統(tǒng)的M13族成員的特征是高的分子量(＞80kDa)、保存許多二硫橋鍵和復(fù)雜的糖基化模式。最近解決了NEP的結(jié)構(gòu)。(Oefner等J.Mol.Biol.2000年，296卷，341-349頁(yè))。ECE的催化區(qū)域結(jié)構(gòu)和有關(guān)人類(lèi)M13蛋白酶明顯地比基體金屬蛋白酶(MMP)的成員大(＞650個(gè)氨基酸)。MMP族屬于metzincins，顯示典型的HExxHxxGxxH模式，與MMP族不同，M13族成員是包括HExxHx(＞20)E模式的gluzincins。這兩個(gè)族在催化區(qū)域結(jié)構(gòu)的大小、結(jié)構(gòu)和配體的鋅配位模式方面無(wú)疑是不同的。兩個(gè)族的活性部位顯示了明顯的差異，這種差異對(duì)抑制劑的類(lèi)型和潛在的選擇性有明顯的影響。
因此，本發(fā)明的一個(gè)方面是提供了用于選擇性抑制ECE-1的化合物，尤其是化學(xué)式(I)的化合物，及其藥用的酯和/或藥用鹽 其中R1是氫、烷基羰基，或芳基羰基；R2是烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、環(huán)烷基、鹵代烷基、羧烷基、氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基烷基、烷氧羰基烷基、鏈炔基、芳基、芳烷基、芳烷基(烷氧羰基)烷基、芳基羰基烷基、芳氧基烷基、芳基鏈烯基、芳基(烷氧羰基)烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基烷基；R3是氫、芳基、烷基或芳烷基、芳基磺?；?、雜芳基磺?；?；R4是氫、芳烷基、烷基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、烷基磺?；?、芳基磺?；?、芳烷基磺酰基、雜芳基磺酰基、羧烷基、羧烷基磺?；?、或烷氧羰基烷基；或基團(tuán)-NR3R4或R5-[N-N(R4)]-R3形成飽和或不飽和5-或6-元脂肪族環(huán)；R5是氫、烷基磺?；⒎蓟酋；?、雜芳基磺?；?、烷氧羰基、芳氧基羰基、雜芳氧基羰基、烷基羰基、芳基羰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜環(huán)基、(單-或二烷基氨基)-烷基羰基、(單-和二烷基)氨基磺?；⒎及被驶?、烷基、烷基羰基、烷氧羰基、芳基、芳烷基、芳基烷氧羰基或雜芳基；R6是氫、烷基、芳基或羧烷基；X是-S(O)2-、-S(O)2-NH-、-C(O)-，-C(O)NR6或C(O)-O-。
這里所使用的術(shù)語(yǔ)“烷基”，單獨(dú)地或結(jié)合的，是指含有最多7個(gè)、優(yōu)選最多4個(gè)碳原子的直-鏈或支-鏈烷基，例如甲基、乙基、正丙基、2-甲基丙基(異-丁基)、1-甲基乙基(異-丙基)、正丁基和1，1-二甲基乙基(叔丁基)。
術(shù)語(yǔ)“羧基”指基團(tuán)-C(O)OH。
術(shù)語(yǔ)“氨基甲?；敝富鶊F(tuán)-C(O)NH2。
術(shù)語(yǔ)“羰基”指基團(tuán)-C(O)-。
術(shù)語(yǔ)“鹵素”指氟、溴、氯和碘，優(yōu)選氟和/或氯，最優(yōu)選氟。
術(shù)語(yǔ)“磺?；敝富鶊F(tuán)-S(O2)-。
術(shù)語(yǔ)“鏈烯基”指定義與烷基相同的烴鏈中含有至少一個(gè)烯屬雙鍵(包括例如乙烯基、烯丙基及丁烯基)術(shù)語(yǔ)“鏈炔基”指定義與烷基相同的烴鏈中含有至少一個(gè)烯屬三鍵(包括例如丙炔基，丁炔-(1)-基等)。
術(shù)語(yǔ)“烷氧基”，單獨(dú)的或結(jié)合的，是指烷基醚基團(tuán)，其中術(shù)語(yǔ)‘烷基’具有上述含義，如甲氧基、乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，正丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基等。
術(shù)語(yǔ)“烷氧羰基”指化學(xué)式為-C(O)Rc的基團(tuán)，其中Rc是上文定義的烷氧基。
術(shù)語(yǔ)“羥基”指基團(tuán)-OH；術(shù)語(yǔ)“氰基”指基團(tuán)-CN。
術(shù)語(yǔ)“羥烷基”是指被羥基取代的上文定義的烷基。
術(shù)語(yǔ)“硫代烷基”指被-SH基團(tuán)取代的上文定義的烷基。
術(shù)語(yǔ)“鹵代烷基”指被一至三個(gè)鹵素原子，優(yōu)選氟取代的上文定義的烷基，例如三氟甲基、2，2，2-三氟乙基等。
“羧烷基”是指被HOOC-基團(tuán)取代的上文定義的低級(jí)-烷基。
術(shù)語(yǔ)“烷基羰基”，單獨(dú)的或結(jié)合的，是指從鏈烷羧酸衍生的?；?，即烷基-C(O)-，如乙酰基、丙?；⒍□；?、戊酰基、4-甲基戊?；取?br> 術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”，單獨(dú)的或結(jié)合的，表示有3～8個(gè)、優(yōu)選3～6個(gè)碳原子的飽和環(huán)烴基團(tuán)，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基等。
術(shù)語(yǔ)“氨基”指基團(tuán)-NH2。
術(shù)語(yǔ)R2的“芳基”，單獨(dú)的或結(jié)合的，指芳香族碳環(huán)基團(tuán)，即芳香族或部分芳香族的6元或10元環(huán)，例如苯基、萘基或四氫萘基，優(yōu)選苯基或萘基，及最優(yōu)選苯基。此芳基部分可任選地被一個(gè)或多個(gè)，優(yōu)選1～5個(gè)、更優(yōu)選1～3個(gè)基團(tuán)取代。這些基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素，優(yōu)選氟；烷氧羰基，例如甲基羰基；羧基；氰基；烷基；烷氧基；苯基；苯氧基；三氟甲基；三氟甲氧基。更優(yōu)選氟、烷氧羰基、烷基、三氟甲基和三氟甲氧基，及最優(yōu)選氟。最優(yōu)選的芳香族基團(tuán)是被一個(gè)或多個(gè)氟原子取代的萘基或苯基，例如萘基、2，3，4，5，6-五氟苯基或聯(lián)苯基。
術(shù)語(yǔ)R3和R6的“芳基”，單獨(dú)的或結(jié)合的，指芳香族碳環(huán)基團(tuán)，即芳香族或部分芳香族的6元或10元環(huán)，例如苯基、萘基或四氫萘基，優(yōu)選苯基或萘基，及最優(yōu)選苯基。此芳基部分任選被一個(gè)或多個(gè)，優(yōu)選1～5個(gè)、更優(yōu)選1～3個(gè)基團(tuán)取代。這些基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素，優(yōu)選氟；烷氧羰基，例如甲基羰基；羧基；氰基；烷基；烷氧基；苯基；苯氧基；三氟甲基；三氟甲氧基；羥基；烷基酰氨基例如乙酰氨基；硝基；烷基磺酰基，例如甲基磺酰基。更優(yōu)選烷基或烷氧基。
術(shù)語(yǔ)R4的“芳基”，單獨(dú)的或結(jié)合的，指芳香族碳環(huán)基團(tuán)，即芳香族或部分芳香族的6元或10元環(huán)，例如苯基、萘基或四氫萘基，優(yōu)選苯基或萘基，及最優(yōu)選苯基。此芳基部分任選被一個(gè)或多個(gè)，優(yōu)選地1-3個(gè)基團(tuán)取代。這些基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素，優(yōu)選氟；烷氧羰基，例如甲基羰基；羧基；氰基；烷基；烷氧基；苯基；苯氧基；三氟甲基；三氟甲氧基；環(huán)己基；羥基；烷基酰氨基，例如乙酰氨基；硝基；烷基磺?；?，例如甲基磺酰基。更優(yōu)選氟、氯、溴、烷氧基、羧基、烷氧羰基，及最優(yōu)選氟。芳香族基團(tuán)的實(shí)例是苯基、2，4，5-三氟苯基和2，4-二氟苯基。
術(shù)語(yǔ)R5的“芳基”，單獨(dú)的或結(jié)合的，指芳香族碳環(huán)基團(tuán)，即芳香族或部分芳香族的6元或10元環(huán)，例如苯基、萘基或四氫萘基，優(yōu)選苯基或萘基，及最優(yōu)選苯基。此芳基部分任選被一個(gè)或多個(gè)、優(yōu)選1～5個(gè)、更優(yōu)選1-3個(gè)基團(tuán)取代。這些基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、優(yōu)選氟；烷氧羰基，例如甲基羰基；羧基；氰基；烷基；烷氧基；苯基；苯氧基；三氟甲基；三氟甲氧基。更優(yōu)選烷基或烷氧基，例如甲基或甲氧基。這些芳基基團(tuán)的實(shí)例有4-甲基-苯基和4-甲氧基-苯基。
術(shù)語(yǔ)“芳氧基”指上文定義的芳基通過(guò)氧連接到母體結(jié)構(gòu)上，即芳基-O-。
術(shù)語(yǔ)R4的“雜芳基”，單獨(dú)的或結(jié)合的，指一價(jià)單-或二環(huán)芳香族基團(tuán)，它具有5～10個(gè)、優(yōu)選具有5～6個(gè)環(huán)原子，并含有一個(gè)到三個(gè)雜原子、優(yōu)選含有一個(gè)雜原子，雜原子如獨(dú)立地選自氮、氧或硫。雜芳基的實(shí)例有噻吩基、異噁唑基、噻唑基、吡啶基、吡咯基、咪唑基、四唑基，優(yōu)選吡啶基、異噁唑基和噻唑基。任選地，雜芳基可獨(dú)立地被單-、雙-或三-取代，取代基為苯基、烷基、烷基羰基、烷氧羰基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基、烷氧羰基烷基，優(yōu)選烷基。
術(shù)語(yǔ)R3或R5的“雜芳基”，單獨(dú)的或結(jié)合的，指一價(jià)單-或二環(huán)芳香族基團(tuán)，它具有5～10個(gè)、優(yōu)選具有5～6個(gè)環(huán)原子，并含有一個(gè)到三個(gè)雜原子、優(yōu)選含有一個(gè)雜原子，雜原子如獨(dú)立地選自氮、氧或硫。雜芳基的實(shí)例有吡啶基、噻吩基、異噁唑基、異喹啉基、喹啉基、吲哚基、嘧啶、噠嗪和吡嗪，優(yōu)選噻吩基、呋喃基、吡咯烷基、吲哚基和異噁唑基。這些雜芳基基團(tuán)可任選獨(dú)立地被單-、二-或三-取代，取代基是苯基、烷基、烷基羰基、烷氧羰基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基，氧，烷氧羰基烷基，優(yōu)選烷基。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”，單獨(dú)的或結(jié)合的，指非-芳香族單-或二環(huán)的一價(jià)基團(tuán)，它具有5～10個(gè)、優(yōu)選5～6個(gè)環(huán)原子，并含有一個(gè)到三個(gè)雜原子、優(yōu)選含有一個(gè)雜原子，雜原子如獨(dú)立地選自氮、氧或硫。這些雜環(huán)可任選被取代，取代基獨(dú)立地選自鹵素、烷基、烷氧基、氧代羧基、烷氧羰基等；和/或在仲氮原子(即-NH-)上被烷基、芳基烷氧羰基、烷基羰基取代；或在叔氮原子(即＝N-)上被氧化。雜環(huán)基團(tuán)的實(shí)例是嗎啉基、吡咯烷基、哌啶基等。
術(shù)語(yǔ)“二聚體形式”是指化合物中兩個(gè)同樣的化學(xué)式I化合物的兩個(gè)R1基團(tuán)被普通單鍵替代；或其中R1是谷胱甘肽-S-、或半胱氨酸-S-或酯、和/或它們的烷基羰基或芳基羰基衍生物，如乙?；腚装彼?S-或苯甲酰半胱氨酸-S-，優(yōu)選谷胱甘肽-S-、半胱氨酸-S-、乙酰基半胱氨酸-S-或苯甲酰半胱氨酸-S-。
術(shù)語(yǔ)“藥用鹽”指保留游離堿或游離酸的生物有效性和性質(zhì)的那些鹽，這些游離堿或游離酸是生物或其他方面合乎需要的。這些鹽由無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸形成，無(wú)機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；有機(jī)酸如乙酸、丙酸、羥基乙酸、丙酮酸、草酸、馬來(lái)酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸等。此外這些鹽可通過(guò)在游離酸中加入無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿來(lái)制備。無(wú)機(jī)堿衍生的鹽包括，但不限于，鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂鹽等。有機(jī)堿衍生的鹽包括，但不限于，伯、仲和叔胺、取代胺包括自然存在的取代胺、環(huán)狀胺和堿性離子交換樹(shù)脂的鹽，如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、賴氨酸、精氨酸、N-乙基哌啶、哌啶、聚乙烯亞胺樹(shù)脂等的鹽。
“藥用的酯”是指通式(I)的化合物可在官能團(tuán)處衍生，所提供的衍生物能夠在體內(nèi)轉(zhuǎn)化回到母體化合物。這種化合物的實(shí)例包括生理上可接受的及代謝中易變的酯類(lèi)衍生物，如甲氧基甲基酯，甲硫基甲基酯和新戊酰氧基甲基酯。此外，與代謝中易變的酯類(lèi)似，能夠在體內(nèi)產(chǎn)生通式(I)的母體化合物的任何生理上可接受的通式(I)化合物的等價(jià)物都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
化學(xué)式(I)的化合物可用于抑制哺乳動(dòng)物的金屬蛋白酶活性，特別是鋅水解酶的活性。更明確地，化學(xué)式(I)的化合物是有用的治療和預(yù)防一些失調(diào)的藥物，這些失調(diào)與內(nèi)皮素-轉(zhuǎn)變酶(ECE)活性引起的疾病相關(guān)聯(lián)。對(duì)這種酶的抑制將有用于治療心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療及控制月經(jīng)、青光眼。此外該化合物是有用的抑制細(xì)胞生長(zhǎng)劑和大腦保護(hù)劑，用于抑制移植物排斥、器官保護(hù)及治療眼科疾病。
更詳細(xì)地，本發(fā)明涉及下列化學(xué)式(I)的化合物，及其二聚體形式，和/或它們的藥用酯和/或藥用鹽，優(yōu)選它們的藥用酯和/或藥用鹽，及最優(yōu)選它們的藥用鹽 其中R1是氫、烷基羰基或芳基羰基；(是烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、環(huán)烷基、鹵代烷基、羧烷基、氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧基烷基、烷氧羰基烷基、鏈炔基、芳基、芳烷基、芳烷基(烷氧羰基)烷基、芳羰基烷基、芳氧基烷基、芳基鏈烯基、芳基(烷氧羰基)烷基、雜芳基、雜芳烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基烷基；R3是氫、芳基、烷基、或芳烷基、芳基磺?；?、雜芳基磺酰基；R4是氫、芳烷基、烷基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺?；㈦s芳基磺酰基、羧烷基、羧烷基磺?；?、或烷氧羰基烷基；或基團(tuán)-NR3R4或R5-[N-N(R4)]-R3形成飽和或不飽和的5-或6-元脂肪族環(huán)；R5是氫、烷基磺?；⒎蓟酋；?、雜芳基磺?；?、烷氧羰基、芳氧基羰基、雜芳氧基羰基、烷基羰基、芳基羰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜環(huán)基、(單-或二烷基氨基)-烷基羰基、(單-和二烷基)氨基磺?；⒎蓟被驶?、烷基，烷基羰基，烷氧羰基，芳基，芳烷基，芳基烷氧羰基或雜芳基；R6是氫、烷基、芳基或羧烷基；X是-S(O)2-、-S(O)2-NH-、-C(O)-、-C(O)NR6或C(O)-O-。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及其中R1是氫的化合物。
在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2是烷基、鹵代烷基、烷基氨基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烷基氨基、芳基、芳烷基、芳氧基、芳烷基氨基、芳基烷氧基、雜芳基、氨基或(單-和二烷基)氨基；更優(yōu)選烷基、鹵代烷基、烷基氨基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烷基氨基、芳基、芳烷基或雜芳基；更更優(yōu)選芳基或雜芳基；及最優(yōu)選芳基。在R2的定義中，術(shù)語(yǔ)芳基尤其表示萘基或苯基，其中苯基任選被一個(gè)或多個(gè)氟取代或被一個(gè)苯基取代，例如R2是萘基、2，3，4，5，6-五氟苯基或聯(lián)苯基。
根據(jù)本發(fā)明，R3優(yōu)選為氫或烷基，最優(yōu)選氫。
在上述化合物中R4優(yōu)選氫、芳烷基、烷基、芳基磺?；㈦s芳基磺?；?、環(huán)烷基烷基或羧烷基，更優(yōu)選氫、烷基、芳烷基、環(huán)烷基、芳基磺酰基或羧烷基，最優(yōu)選氫、烷基、環(huán)烷基、羧烷基或芳烷基，甚至更優(yōu)選氫、烷基或芳烷基，例如氫、2，4，5-三氟芐基、2，4-二氟芐基、芐基、甲基、乙基、異丙基、異丁基、芐基或HO2C-CH2-、或環(huán)烷基丙基甲基。
在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中R5是氫、烷基羰基、烷氧羰基、烷基磺?；?、芳基、芳烷基、芳基羰基、(單-和二烷基氨基)烷基羰基、(單-和二烷基)氨基磺?；⒎蓟檠豸驶?、芳基氨基羰基、芳基磺?；?、雜芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺酰基、芳基氨基羰基、雜芳基或雜環(huán)基，更優(yōu)選芳基、芳烷基、芳基羰基、芳基烷氧基、芳基氨基羰基、芳基磺?；?、雜芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺酰基、芳基氨基羰基、雜芳基或雜環(huán)基，更優(yōu)選芳基磺?；?、芳烷基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺?；?，及最優(yōu)選4-甲基-苯磺?；?、芐基、4-甲氧基苯磺?；?、(1H-吲哚-3-基)乙酰基、噻吩-2-基或3，5-二甲基-異噁唑-4-磺?；?br> 在上述化合物中X優(yōu)選-SO2-、-C(O)-，及最優(yōu)選-SO2-。
在本發(fā)明最優(yōu)選的實(shí)施方案中的化合物是可用化學(xué)式(II)來(lái)描述的化合物及其藥用酯和/或鹽 其中R1，R2，R3，R4，R5和X的定義同上。
在本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是氫；R2是萘基或苯基，其中苯基任選地被一個(gè)或多個(gè)氟取代，或被一個(gè)苯基取代；R3是氫或烷基；R4是氫、烷基或芳基烷基；R5是芳基磺?；?、芳烷基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺酰基；及X是-SO2-。
本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的化合物是實(shí)施例中說(shuō)明的化合物。尤其本發(fā)明包括根據(jù)化學(xué)式(I)或(II)的選自下組的化合物a)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼；b)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；c)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-酰肼；d)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；e)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；f)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-苯磺?；?酰肼；g)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼；h)(2S，4R)4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-[(1H-吲哚-3-基)-乙?；鵠-酰肼；i)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-噻吩-2-磺?；?酰肼；j)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(3，5-二甲基-異噁唑-4-磺?；?-酰肼；k)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-環(huán)丙基甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；1)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺?；?-N’-(2，4，5-三氟-芐基)-酰肼；m)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；n)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丙基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；o)(2S，4R)-[N’-[4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-N-(4-甲基-苯磺?；?-肼基]-乙酸；p)(2S，4R)-1-(聯(lián)苯基-4-磺?；?-4-巰基-吡咯烷-2-羧酸N’-甲基-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼；q)(2S，4R)-4-巰基-1-(2，3，4，5，6-五氟-苯磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；r)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-(4-甲氧基-苯磺酰基)-酰肼；s)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；及t)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-芐基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼。
放射免疫測(cè)定(對(duì)ECE-抑制的E，參閱下文)中這些化合物顯示的IC50值為大約50nM～1μM。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，這些組合物含有上文定義的化合物和藥用的賦形劑。
本發(fā)明一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案涉及上文定義的化合物作為藥劑制造中活性成分的用途，該藥劑包含上文定義的化合物，用于預(yù)防和治療內(nèi)皮素-轉(zhuǎn)化酶(ECE)的活性引起的疾病，尤其是心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細(xì)胞生長(zhǎng)關(guān)聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護(hù)性適應(yīng)癥和器官保護(hù)。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及上述化合物治療或預(yù)防一些疾病的用途，這些疾病與心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病有關(guān)聯(lián)，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細(xì)胞生長(zhǎng)關(guān)聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護(hù)性適應(yīng)癥和器官保護(hù)。
此外本發(fā)明包括的上述化合物可用作治療的活性物質(zhì)，特別在與鋅水解酶活性有關(guān)的疾病的范圍，這些疾病如心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，以及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細(xì)胞生長(zhǎng)關(guān)聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護(hù)性適應(yīng)癥和器官保護(hù)。
本發(fā)明還包括一種方法，用于治療和/或預(yù)防處理心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細(xì)胞生長(zhǎng)關(guān)聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護(hù)性適應(yīng)癥和器官保護(hù)，此方法包括將上文定義的化合物引入到人類(lèi)或動(dòng)物肌體中。
本發(fā)明還涉及使用上文定義的化合物來(lái)抑制鋅水解酶的活性。
本發(fā)明還涉及制備上文定義的化合物的方法，它包括化學(xué)式III的化合物 其中R1，R2和X的定義同上文，及A是HS-保護(hù)基，a)與HNR3NR4R5反應(yīng)來(lái)引入酰肼；或b)HNR3NR4R5中R5為保護(hù)基團(tuán)接著轉(zhuǎn)換或引入R3和R4；可任選地接著轉(zhuǎn)換R5和/或R2-X基團(tuán)為不同的R5和/或R2-X基團(tuán)、和/或脫保護(hù)基和/或者釋放硫醇，及其中R3、R4和R5的定義同上。
本發(fā)明還涉及任何時(shí)候根據(jù)上述方法制造的上述化合物。
化學(xué)式(I)的化合物可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法或下述方法來(lái)制備。
除非另外指明，取代基R1、R2、R3、R4、R5、R6和X與上述相同。流程1 流程1的步驟a)描述了羥基和氨基的全硅烷化，例如化合物1與六甲基二硅烷基胺/140℃反應(yīng)，接著與R2SO2Cl在THF中反應(yīng)或全部轉(zhuǎn)換成下述其他R2X或與重碳酸二丁酯/NaHCO3在二噁烷/H2O中反應(yīng)(BOC保護(hù))。對(duì)于構(gòu)型倒置的情況，生成的醇2用MeSO3H/Ph3P/DIAD在甲苯中處理(室溫～80℃)(通過(guò)甲磺酸鹽)；或用LiBr/DEAD/Ph3P在THF中處理(4℃～室溫)(通過(guò)溴化物)；或用Ph3P/CCl4在CH2Cl2中處理(3℃～室溫)(通過(guò)氯化物)。在保持構(gòu)型的情況(通過(guò)甲磺酸鹽)，醇2可通過(guò)與MeSO2Cl/吡啶/DMAP(0℃～室溫)的反應(yīng)轉(zhuǎn)化為化學(xué)式3化合物。
為了引入保護(hù)的硫醇部分，化學(xué)式3的化合物被例如三苯基甲硫醇或4-甲氧基芐基硫醇及K-Ot-Bu在DMF中處理(對(duì)Br0℃～室溫；對(duì)Cl0℃；對(duì)甲磺酸鹽室溫～100℃)。酯4用水性LiOH在THF中水解(0℃～室溫)給出酸5。
最終化合物的合成由流程2表示。
合成由酸1a的預(yù)活化(N-羥基-2-吡啶酮、N，N-二環(huán)己基碳二亞胺、4-乙基嗎啉在CH2Cl2中，在室溫)開(kāi)始，接著與一種烷基肼(NHR3NHR4)反應(yīng)(步驟a)，或酯1b直接用肼(NH2NH2·H2O)在EtOH中(在室溫)處理生成羧酸酰肼2(R3、R4、R5＝H)。以下列方式完成成為游離硫醇3的轉(zhuǎn)換當(dāng)PG(保護(hù)基團(tuán))是Tr時(shí)，通過(guò)與例如TFA/Et3SiH在0℃～室溫反應(yīng)；或者當(dāng)PG是PMB時(shí)通過(guò)與例如TFA/Et3SiH在0～80℃的反應(yīng)(步驟b)。
在羧酸酰肼2(R3、R4、R5＝H)的情況，通過(guò)還原氨基化引入R4由醛在EtOH中形成亞胺，接著用NaBH3CN在THF中還原給出化合物4(步驟c)。為引入新的R5，在R4是烷基(R5＝H)的情況，通過(guò)與ClCOR5、ClCO2R5、ClSO2R5或ClSO2NR5，iPr2NEt或Huenig堿-CH2Cl2，在催化量DMAP或DMAP-聚合物或R5NCO的存在下，室溫在THF中反應(yīng)給出化合物4，化合物4脫保護(hù)生成上述最終的硫醇5(步驟c和b)。
化合物2或4選擇性地脫BOC保護(hù)基(TFA、CH2Cl2在0℃)，接著與ClCO2R2、NEM或iPr2Net、CH2Cl2或R2NCO在THF中在0℃～室溫反應(yīng)(或轉(zhuǎn)換成在上文引入R5中所述的全部其它R2X)給出化合物7(步驟e)。如上述脫去硫醇保護(hù)基給出最終的硫醇8(步驟b)。
流程3出示了合成酰肼的不同方法。
酸1預(yù)活化(N-羥基-2-吡啶酮、N，N-二環(huán)己基碳二亞胺、4-乙基嗎啉在CH2Cl2中，在室溫)，接著與烷基-肼羧酸芐酯(NHR3NHR4)反應(yīng)(步驟a)給出酰肼2，酰肼2用HBr在AcOH中于0℃轉(zhuǎn)化為3(步驟b)。也可通過(guò)預(yù)活化及與NHR3NR4R5反應(yīng)從1直接轉(zhuǎn)換到3(步驟c)。新R3的引入是用鹵化物/NaH在DMF中(在0℃～室溫，直接到化合物4，步驟e)反應(yīng)來(lái)完成的。用下列方法脫保護(hù)基生成硫醇5在PG是Tr的情況，通過(guò)與例如TFA/Et3SiH在0℃～室溫反應(yīng)，或在PG是PMB的情況，通過(guò)與例如TFA/Et3SiH在0℃～80℃反應(yīng)(步驟d)。流程3
流程4表示合成酰肼另外的路線。
酸1預(yù)活化(N-羥基-2-吡啶酮、N，N-二環(huán)己基碳二亞胺、4-乙基嗎啉在CH2Cl2中，在室溫)接著與2-烷基-肼羧酸叔丁酯(NHR3NHBOC)反應(yīng)(步驟a)給出酰肼2，用三乙基硅烷在TFA中0～80℃處理給出硫醇3(步驟b)。用鹵代烷(R5-鹵化物)和DMF及用NaH作為堿烷基化(0℃～室溫)生成化合物4，化合物4用Et3SiH/TFA脫保護(hù)基(如流程1所述)后給出硫醇5(步驟c、d)。
選擇性脫BOC-保護(hù)基(TFA在CH2Cl2中到化合物6)接著在催化量DMAP或DMAP-poly存在下與ClCO2R4、ClSO2R4、iRr2NBt或NEM在CH2Cl2中于室溫反應(yīng)給出化合物7(R4＝R5)和8，將它們分離并脫保護(hù)基(如流程所述用Et3SiH/TFA)生成硫醇5(步驟e、f和d)。非完全取代的酰肼8可進(jìn)一步被烷基化(R5-鹵化物，及DMF/NaH，0℃～室溫)，并脫保護(hù)基(如流程1所述用Et3SiH/TFA)生成硫醇5(步驟g和d)。流程4 流程5表示酰肼1進(jìn)一步的轉(zhuǎn)化。在iPr2EtN存在下在THF中用γ-溴代烷?；弱；?0℃～室溫)給出化合物2，化合物2環(huán)化(NaH在DMF中，室溫)，分離兩個(gè)異構(gòu)體并脫去硫醇的保護(hù)基(Et3SiH/TFA，如流程1所述)給出酰肼3和4。流程5 制備化學(xué)式5的化合物可按照流程6的反應(yīng)路線流程1中敘述了由羥基脯氨酸合成起始原料1。回流30分鐘TFA/三異丙基脫保護(hù)基給出硫醇2，硫醇2被連接到樹(shù)脂上。既可在開(kāi)始或在NR3NR4R5處理后引入最終的R2X(流程9)。在第二種情況下，用本領(lǐng)域已知的方法將起始酸1的R2X(＝BOC)轉(zhuǎn)化為易變的非酸性保護(hù)基團(tuán)(例如R2X＝FMOC時(shí)，步驟a首先用40％TFA在CH2Cl2中室溫下選擇性脫BOC-保護(hù)基，接著以NaHCO3作為堿與Fmoc-Osu在二噁烷/水中反應(yīng))，這些方法在例如M.Bodanszky和A.Bodanszky著“The Practice of Peptide Synthesis”中有說(shuō)明，該書(shū)1984年由Springer Verlag在Berlin出版。流程6
如下制備樹(shù)脂(步驟b)連接劑4-(α，α-二苯基羥甲基)苯甲酸用TPTU、DIEA在DMF中活化，并加入二苯甲基胺樹(shù)脂3。然后此樹(shù)脂用硫醇2在CH2Cl2/TFA處理給出樹(shù)脂負(fù)載的起始材料5。
流程7出示在樹(shù)脂1上合成最終的化合物此合成從預(yù)活化酸1(TPTU、Huenig堿，在DMF中在室溫)開(kāi)始，接著與烷基-肼(NH2NHR4)反應(yīng)(步驟a)給出中間體2a，2b或4(R3、R4、R5＝H，步驟c)。用TFA/iPr3SiH在CH2Cl2中于室溫完成與樹(shù)脂的脫離給出游離的硫醇3(步驟b)。在羧酸酰肼4的情況，通過(guò)與ClCOR5、ClCO2R5、ClSO2R5或ClSO2NR5在DMF中反應(yīng)引入新的R5給出化合物2，化合物2可任選被烷基化(鹵代烷/DBU，在DMF中)給出二取代酰肼6(步驟d和f)。如上述與樹(shù)脂脫離給出最終的硫醇3。在酰肼4與ClSO2R5反應(yīng)的情況，發(fā)生了化合物2a和2b的雙磺?；?步驟d)，這些化合物如同相應(yīng)的硫醇3一樣，可在脫離樹(shù)脂后分離。
如果R2X是FMOC化合物2脫保護(hù)基(20％哌啶/DMF，然后與ClCO2R2、吡啶、DMF或R2NCO在DMF中于室溫反應(yīng)或轉(zhuǎn)換為上文R4-引入中所述的全部其它R2X)給出化合物5(步驟e)。如上述烷基化(鹵代烷/DBU在DMF中)和脫樹(shù)脂保護(hù)基給出最終的硫醇3(步驟f和b)。
可通過(guò)各種本領(lǐng)域普通技術(shù)人員了解的體外和體內(nèi)試驗(yàn)，來(lái)證明化學(xué)式(I)的化合物抑制金屬蛋白酶活性特別是鋅水解酶活性的能力。
A)細(xì)胞培養(yǎng)如說(shuō)明(Schweizer等1997年，Biochem.J.，328卷871-878頁(yè))直到融合前在“細(xì)胞工廠”培養(yǎng)穩(wěn)定的人類(lèi)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系(ECV304)。在融合時(shí)用胰島素/EDTA溶液洗脫細(xì)胞并用低速離心收集細(xì)胞。此細(xì)胞粒用磷酸鹽緩沖的pH7.0的鹽水洗滌一次并在-80℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br> B)從ECV304細(xì)胞中增溶ECE如果沒(méi)有另外說(shuō)明，全部程序在0～4℃下進(jìn)行。有1×109個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞粒懸浮在50ml緩沖液A(20mM Tris/HCl，pH7.5，含有5mM MgCl2、100μM PMSF、20μM E64、20μM亮肽素)中并超聲破碎。所生成的細(xì)胞均漿在100,000gav下離心60分鐘。按照說(shuō)明棄去上層清液，所生成的膜小球在50ml緩沖液A中勻化并離心。重復(fù)兩次在緩沖液A中洗滌膜的碎片，最終制備的膜在4℃在50ml緩沖液B(緩沖液A+0.5％吐溫20(v/v)、0.5％CHAPS(w/v)、0.5％毛地黃皂苷(w/v))中勻化并攪拌2小時(shí)。然后如說(shuō)明沉積剩余的膜碎片。所生成的透明上層清液含有溶解的ECE，并以1.0ml的等分試樣在-120℃儲(chǔ)存直到使用。
C)ECE試驗(yàn)該試驗(yàn)測(cè)量人類(lèi)大ET-1產(chǎn)生的ET-1。為測(cè)量高數(shù)量的樣品在96孔板中來(lái)完成試驗(yàn)。并使用特別先進(jìn)的和最佳的涂布技術(shù)，在相同的孔中進(jìn)行酶反應(yīng)和所產(chǎn)生的ET-1的放射免疫測(cè)定。
D)涂板Fluoronunc Maxisorp white(編碼437796)96孔板在UV Stratalinker2400(Stratagene)中以1焦耳能量照射30分鐘。然后此96孔板每孔注入300μl蛋白質(zhì)A溶液(2μg/ml在0.1M Na2CO3中，pH9.5)，并在4℃孵育48小時(shí)。涂過(guò)的板在使用前可在4℃最多儲(chǔ)存3星期。
使用前棄去蛋白質(zhì)A溶液，且此板在4℃用在0.1M Na2CO3中pH為9.5的0.5％牛血清白蛋白(BSA)封閉2小時(shí)。
板用雙蒸水洗滌，并已準(zhǔn)備好進(jìn)行ECE試驗(yàn)。
E)篩選試驗(yàn)試驗(yàn)化合物在DMSO中溶解并稀釋。在孔中放入10μl DMSO，接著放入含有200ng大ET-1的125μl試驗(yàn)緩沖液(50mM Tris/HCl，pH7.0，1μMN-(2-(巰甲基)-1-氧-3-苯丙基)-甘氨酸(Thiorphan)、0.1％NaN3、0.1％牛血清白蛋白)。通過(guò)加入50μl溶解的ECE(在試驗(yàn)緩沖液中稀釋1∶30～1∶60倍(v/v))開(kāi)始酶反應(yīng)。酶反應(yīng)在37℃進(jìn)行30分鐘。加入10μl pH7.0的150mMETDA使酶反應(yīng)停止。
放射免疫測(cè)定ET-1的放射免疫測(cè)定基本按照以前的說(shuō)明(Lffler，B.-M.和Maire，J.-P.，1994年，Endothelium 1273-286頁(yè))來(lái)完成。在含有EDTA停止酶反應(yīng)的混合物的板中加入25μl試驗(yàn)緩沖液，試驗(yàn)緩沖液含有20000cpm的(3-(125I)酪氨酸)-內(nèi)皮素-1和25μl的ET特效的抗血清AS-3(在試驗(yàn)緩沖液中稀釋?zhuān)?∶1000)。這些板在混合下在4℃培養(yǎng)過(guò)夜。然后，用洗板器吸去液相，用雙蒸水將板洗滌一次。在此洗過(guò)的板中加入200μl閃爍液(Microscint 40LSC-Cocktail，Packard，編碼6013641)，在Topcount計(jì)數(shù)器上對(duì)板上每孔計(jì)數(shù)2分鐘。
在板上用合成的ET-1以最終濃度為每孔0～3000pg的ET-1制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。全部板都測(cè)試了最大ECE活性(在10μl DMSO存在下)的對(duì)照樣品和產(chǎn)生ET-1免疫反應(yīng)活性本底(在10mM EDTA或100μM磷酰二肽存在下)的對(duì)照樣品。測(cè)定重復(fù)進(jìn)行三次。
F)動(dòng)力學(xué)測(cè)試通過(guò)改變測(cè)試中使用的底物濃度，可使用所述試驗(yàn)格式來(lái)測(cè)定所使用的ECE制劑及不同的ECE抑制劑的動(dòng)力學(xué)特征(即Km，Ki)。
G)以細(xì)胞為基礎(chǔ)的ECE試驗(yàn)如已發(fā)表的(Schweizer等1997年，Biochem.J.，328卷871-878頁(yè))，MDCK細(xì)胞穩(wěn)定地表達(dá)人類(lèi)ECE-1c。在24孔板上培養(yǎng)的細(xì)胞在濕潤(rùn)空氣/CO2(19∶1)氣氛中融合在Dulbecco改進(jìn)的Eagles介質(zhì)(DMEM)中，此介質(zhì)中補(bǔ)充了10％(v/v)牛胎兒血清(FBS)、0.8mg/ml geneticin、100i.u./ml青霉素和100μg/ml鏈霉素。在ECE試驗(yàn)前，用0.5ml DMEM-HBSS(1∶1)、pH7.0的補(bǔ)充了0.1％(w/v)牛血清白蛋白的10mM HEPES代替上述介質(zhì)。加入溶在DMSO中的抑制劑，使其最終濃度為1％。加入0.42μM人的大ET-1使酶反應(yīng)開(kāi)始，并在培養(yǎng)器中于37℃使酶反應(yīng)進(jìn)行1.5小時(shí)。在培養(yǎng)結(jié)束時(shí)迅速移出培養(yǎng)介質(zhì)，如上述用放射免疫測(cè)定法分析等分試樣中產(chǎn)生的ET-1。
通過(guò)測(cè)量磷酰二肽(IC500.8±0.2μM)和CGS 314447(IC5020±4nM)特有的抑制常數(shù)，來(lái)驗(yàn)證ECE篩選試驗(yàn)[De Lombaert，Stephane、Stamford，LisaB.、Blanchard，Louis、Tan，Jenny、Hoyer，Denton、Diefenbacher，Clive G.、Wei，Dongchu、Wallace，Eli M.、Moskal，Michael A.等“內(nèi)皮素-轉(zhuǎn)變酶和中性肽鏈內(nèi)切酶24.11的有效的非-肽雙重抑制劑”，Bioorg.Med.Chem.Lett.，(1997年)，7卷(8期)，1059～1064頁(yè)]。用與文獻(xiàn)所述沒(méi)有明顯不同的方法由IC50值測(cè)量?jī)煞N抑制劑，但所用的測(cè)量試驗(yàn)規(guī)程不同。在這種以細(xì)胞為基礎(chǔ)的試驗(yàn)中磷酰二肽顯示的IC50為4μM。因?yàn)槿鏓CE被包埋在正常血漿膜環(huán)境中，此試驗(yàn)還給出了另外有關(guān)在更加生理的條件下抑制劑抑制效力的信息。重要的是要說(shuō)明此篩選試驗(yàn)是在1μM N-(2-(巰甲基)-1-氧-3-苯丙基)-甘氨酸存在的情況下完成的，用以阻止由于NEP24.11的作用造成的任何潛在的大ET-1的降解。在存在或不存在N-(2-(巰甲基)-1-氧-3-苯丙基)-甘氨酸的情況下測(cè)量ET-1產(chǎn)生的初步試驗(yàn)中，在MDCK-ECE-lc轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中都不存在NEP活性。在后來(lái)的試驗(yàn)中不再在培養(yǎng)介質(zhì)中加N-(2-(巰甲基)-1-氧-3-苯丙基)-甘氨酸。
根據(jù)上述方法，本發(fā)明的化合物在放射免疫測(cè)定(對(duì)ECE-抑制的E)中顯示的IC50值為大約50nM～大約1000μM。優(yōu)選化合物顯示的值為50nM～1μM。
如上所述，含有化學(xué)式I的化合物的藥物，如同制造這種藥物的方法都是本發(fā)明的目標(biāo)，該方法包括將一個(gè)或多個(gè)化學(xué)式I的化合物、及如果需要，將一種或多種其它有治療價(jià)值的物質(zhì)帶到蓋倫氏制劑的給藥形式中。
藥物組合物可以口服給藥，例如以藥片、帶涂層的藥片、糖衣丸、硬的或軟的凝膠膠囊、溶液、乳液或懸浮液形式。還可實(shí)行直腸給藥例如使用栓劑；局部或經(jīng)由皮膚給藥，例如使用藥膏、乳劑、凝膠或溶液；或非腸道給藥例如使用可注射的溶液。
為了制備藥片、帶涂層藥片、糖衣丸或硬凝膠膠囊，本發(fā)明化合物可與藥物惰性的無(wú)機(jī)或有機(jī)賦形劑混合。藥片、糖衣丸或硬凝膠膠囊適宜的賦形劑的實(shí)例包括乳糖、玉米淀粉或它們的衍生物；滑石粉；硬脂酸或它們的鹽。
用于軟凝膠膠囊適宜的賦形劑包括例如植物油、蠟、脂肪、半-固態(tài)或液態(tài)多元醇等；然而根據(jù)活性成分的本性，可能有軟凝膠膠囊根本不需要賦形劑的情況。
制備溶液和糖漿可使用的賦形劑包括例如水、多元醇、蔗糖、轉(zhuǎn)化糖和葡萄糖。
注射液可使用的賦形劑包括例如水、醇、多元醇、甘油和植物油。
栓劑和局部或經(jīng)由皮膚的用藥可使用的賦形劑包括例如天然或硬化油、蠟、脂肪和半-固態(tài)或液態(tài)多元醇。
藥物組合物還可包含防腐劑、抗氧劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、增味劑、改變滲透壓的鹽、緩沖液、涂層劑或抗氧劑。它們還可包含其他治療上有價(jià)值的試劑。
其中以化學(xué)式I的化合物有效量給藥的劑量依賴于具體活性成分的本性、患者的年齡和需求及用藥的方式。一般考慮劑量為每天0.1～100mg/kg體重，雖然如果表明需要，可超越所引用的上限。
下面提供具體的實(shí)施例作為幫助實(shí)踐本發(fā)明的指南，而無(wú)意限制本發(fā)明的范圍。
縮寫(xiě)詞EtOH乙醇；THF四氫呋喃；Et2O乙醚；MeOH甲醇；CH2C12二氯甲烷；EDCIN-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；HOBT1-羥基苯并三唑；DBU1，8-二氮雜雙環(huán)-[5.4.0]-十一碳-7-烯(1，5-5)；LAH氫化鋁鋰；LDA二異丙酰胺基鋰；DEAD偶氮二羧酸二乙酯；DIAD偶氮二羧酸二異丙酯；DMAP4-二甲氨基吡啶；DMAP-聚合物聚合物-負(fù)載的(聚苯乙烯基2％DVB樹(shù)脂，約1.6mmol“DMAP”/g樹(shù)脂)4-(N-芐基-N-甲基氨基)吡啶；NEMN-乙基嗎啉；NMMN-甲基嗎啉；TBAF氟化四丁基銨；DIEA二乙胺；DMF二甲基甲酰胺；TFA三氟乙酸；TPTU四氟硼酸[2-(2-吡啶酮-1-基)-1，1，3，3-四甲基]uronium鹽；iPr2NEtHuenigs堿或N-乙基二異丙基胺；FMOC-Osu9-芴基甲氧基羰基-N-羥基琥珀酰亞胺酯。實(shí)施例1起始原料(酯-流程1)將40g(220mmol)L-羥基脯氨酸甲酯-鹽酸鹽(在甲苯中懸浮兩次并在減壓下蒸發(fā)除去水)懸浮在600ml六甲基二硅烷基胺中并回流2小時(shí)。溶液在減壓下蒸發(fā)并溶于100ml THF中，緩慢加入49.9g(220mmol)2-萘-磺酰氯在200ml THF中的溶液并室溫?cái)嚢?6小時(shí)。加入150ml H2O，1小時(shí)后蒸發(fā)溶劑。剩余物在水/乙酸乙酯(3×)之間分配，有機(jī)相用10％NaCl洗滌，并用Na2SO4干燥給出60.4g(82％)(2S，4R)-4-羥基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯，MS335 (M+)。流程1 類(lèi)似物L(fēng)-羥基脯氨酸芐酯-鹽酸鹽和1-萘磺酰氯給出(2S，4R)-4-羥基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸芐酯。MS411(MH+)；L-羥基脯氨酸芐酯-鹽酸鹽和甲磺酰氯給出(2S，4R)-4-羥基-1-甲磺?；?吡咯烷-2-羧酸芐酯，mp132～133℃，MS300(MH+)；L-羥基脯氨酸甲酯-鹽酸鹽和甲磺酰氯用CH2Cl2萃取后給出(2S，4R)-4-羥基-1-甲磺?；?吡咯烷-2-羧酸甲酯，mp115.5-117℃，MS164(M-COOMe)。
通過(guò)甲磺酸鹽將13.9ml(215mmol)甲磺酸、29.8ml(215mmol)三乙胺和58.7g(224mmol)三苯基膦在150ml甲苯中的兩相溶液加到60g(179mmol)(2S，4R)-4-羥基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯的300ml甲苯懸浮液中，懸浮液被機(jī)械攪拌。加入44.9ml(233mmol)偶氮二羧酸二異丙基酯(放熱！)后，將溶液在80℃加熱2.5小時(shí)。室溫加入300ml水，用乙酸乙酯(3×300ml)萃取。有機(jī)相用10％KHSO4(2×100ml)水溶液、10％NaCl(2×150ml)洗滌、Na2SO4干燥及蒸發(fā)，給出180g粗產(chǎn)物，快速色譜(乙酸乙酯/己烷1∶1)給出63.7g(86％)的(4S，2S)-4-甲磺酰氧基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯。
室溫將64.2g(167mmol)三苯基甲硫醇緩慢加入到17.9g(160mmol)叔丁醇鉀在300ml DMF的溶液中，并機(jī)械攪拌30分鐘。然后在20℃加入63g(152mmol)(4S，2S)-4-甲磺酰氧基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯在300ml DMF中的溶液，在末端用冰浴冷卻。反應(yīng)物在100℃加熱1.3小時(shí)，冷卻，蒸發(fā)到400ml并用250ml飽和的NH4Cl水溶液/乙酸乙酯萃取(3×300)。有機(jī)相用10％NaCl水溶液洗滌、干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)?？焖偕V(CH2Cl2/MeOH 99∶1)給出58.6g(65％，(2S，4R)/(2R，4R)-異構(gòu)體約為4∶1，1H-NMR)及9.2g(10％，(2S，4R)/(2R，4R)-異構(gòu)體約為1∶1，1H-NMR)(2S，4R)-1-(萘-2-磺酰基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸甲酯，MS594(MH+)。
類(lèi)似物(2S，4R)-4-羥基-1-甲磺?；?吡咯烷-2-羧酸甲酯在80℃ 3.75小時(shí)后給出(4S，2S)-4-甲磺酰氧基-1-(甲磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯，它與三苯基甲硫醇在100℃加熱45分鐘給出(2S，4R)-1-甲磺?；?4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸甲酯((2S，4R)/(2R，4R)-異構(gòu)體約為9∶1，1H-NMR)，MS482(MH+)；(2S，4R)-4-羥基-1-甲磺?；?吡咯烷-2-羧酸芐酯在80℃ 5小時(shí)后給出(2S，4S)-1-甲磺?；?4-甲磺酰氧基-吡咯烷-2-羧酸芐酯，它與4-甲氧基芐基硫醇/叔丁醇鉀加熱30分鐘給出(2S，4S)-1-甲磺酰基-4-甲磺酰氧基-吡咯烷-2-羧酸芐酯，mp 91-92℃，MS453(M+NH4+)。
通過(guò)溴化物在溫度1.5～4.5℃之間用0.5小時(shí)往76.5g(291.6mmol，6當(dāng)量)三苯基膦的650ml THF溶液中加入44.6ml(286.8mmol，5.9當(dāng)量)DEAD在70ml THF中的溶液。溶液攪拌0.5小時(shí)，然后加入42.2g(486.1mmol，10當(dāng)量)LiBr，反應(yīng)混合物再冷卻到4℃以加入20g(48.6mmol)(2S，4R)-4-羥基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸芐酯在75mlTHF中的溶液。室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入水及將此懸浮液濃縮并再溶于700ml乙酸乙酯和水。分層，無(wú)機(jī)相用100ml乙酸乙酯(3x)萃取，合并的有機(jī)層用鹽水洗滌、MgSO4干燥并蒸發(fā)。通過(guò)結(jié)晶從乙酸乙酯/己烷中移出氧化三苯基膦，母液用使用己烷∶乙酸乙酯3∶1的硅膠柱色譜純化，產(chǎn)生13.4g(62％)無(wú)色固體(2S，4S)-4-溴-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸芐酯，mp97-98℃，MS473(MH+)。
在0℃用4.4ml(31.5mmol，1.15當(dāng)量)4-甲氧基芐硫醇處理在150mlDMF中的3.38g(30.1mmol，1.1當(dāng)量)叔丁醇鉀。溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后加入12.99g(27.4mmol)(2S，4S)-4-溴-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸芐酯在100ml DMF中的溶液。反應(yīng)物室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，真空下除去DMF，剩余物再溶于乙酸乙酯和1M KHSO4水溶液。分層，有機(jī)相用鹽水洗滌、Na2SO4干燥并蒸發(fā)。油狀粗產(chǎn)物用己烷/乙酸乙酯(3∶1～2∶1)作淋洗液通過(guò)硅膠快速色譜純化，產(chǎn)生7.23g(48％)淺黃色固體(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸芐酯，mp90-91℃，MS547(M+)。
類(lèi)似物(2S，4R)-4-羥基-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯與4-甲氧基芐硫醇/叔丁醇鉀給出(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐硫烷基)-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯，MS382(MH+)。
(2S，4R)-4-羥基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯與4-甲氧基芐硫醇/叔丁醇鉀給出無(wú)色油狀(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯，MS472(MH+)。
通過(guò)氯化物((2S，4R)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯本發(fā)明中間體的合成是本領(lǐng)域已知的，例如在國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)WO 9820001和歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)EP-A-696593中有述)將374g(1.48mol)(2S，4R)-4-羥基-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯在1.6升CH2Cl2中的溶液用680g(2.6mol)三苯基膦處理，冷卻到3～5℃并用1.24升(12.8mol)CCl4處理10分鐘。在此溫度2小時(shí)后停止冷卻，反應(yīng)溫度在2小時(shí)期間上升到35℃。冷卻回到20℃并再攪拌45分鐘。加入4升正庚烷，反應(yīng)蒸發(fā)到2.9升，冷卻到0℃，過(guò)濾，剩余物用同樣的方法處理兩次，第三次將剩余物再溶解在2升CH2Cl2中，蒸發(fā)溶劑，用己烷/叔-丁基甲基醚9∶1作淋洗液通過(guò)硅膠過(guò)濾。蒸發(fā)溶劑給出347g(89％)(2S，4S)-4-氯-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯，MS246(MH+)。
冷卻(-3℃)76g(0.68mol)叔丁醇鉀在1.5升DMF中的溶液并緩慢地(1.5小時(shí))用202g(0.73mol)三苯基甲硫醇在0.8升DMF中的溶液處理(最高1℃)。在0℃ 2.5小時(shí)后，加入161g(0.61mol)(2S，4S)-4-氯-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯在0.35升DMF中的溶液。反應(yīng)在2℃攪拌過(guò)夜，蒸發(fā)，溶于1.5升乙酸乙酯，傾入2.7升飽和NH4Cl水溶液并用乙酸乙酯萃取(2×)。有機(jī)相用飽和NaHCO3水溶液洗滌，Na25O4干燥并蒸發(fā)。使用己烷/乙酸乙酯(95∶5～7∶3)的硅膠高效液相色譜給出268g(87％)(2S，4R)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯，MS504(MH+)。實(shí)施例2水解(流程1)在0℃往14.8g(31.6mmol)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯的950ml THF溶液中加入950ml 0.1MLiOH(95mmol)。溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)，用冰水稀釋?zhuān)尤?M KHSO4(pH2)酸化，用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，Na2SO4干燥并蒸發(fā)，產(chǎn)物用乙酸乙酯/己烷結(jié)晶，產(chǎn)生13.15g(90％)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸無(wú)色固體，MS456(MH+)。
采用類(lèi)似方法制備下列化合物淺棕色泡沫狀(2S，4R)-1-甲磺酰基-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸，MS466(M-H-)；(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯，MS366(M-H-)；可根據(jù)下列參考文獻(xiàn)制備其它化合物2-(異丁基)肼羧酸叔丁酯(Faessler，Alexander；Bold，Guido；Capraro，Hans-Georg；Cozens，Robert；Mestan，Juergen；Poncioni，Bernard；Roesel，Johannes；Tintelnot-Blomley，Marina；Lang，Marc具有口服生物可利用性的氮雜-肽類(lèi)似物作為有效的人類(lèi)免疫缺乏病毒I-型蛋白酶抑制劑，J.Med.Chem.(1996)，39(16)，3203-3216)。
2-(甲基)肼羧酸叔丁酯(Lenman，Morag M.；Lewis，Arwel；Gani，David稠合1，2，5-三氮雜-1，5-二酮和一些N2-和N3-取代的衍生物的合成順式-肽基脯氨酰胺可能的構(gòu)象模擬，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1(1997)，16期，2297-2311)。
N-甲基-肼羧酸芐酯(Lenman，Morag M.；Lewis，Arwel；Gani，David稠合1，2，5-三氮雜-1，5-二酮和一些N2-和N3-取代的衍生物的合成順式-肽基脯氨酰胺可能的構(gòu)象模擬，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1(1997)，16期，2297-2311)。實(shí)施例3合成酰肼實(shí)施例3a程序A(流程2)(步驟1)在4.4g(9.6mmol)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸的200ml CH2Cl2溶液中加入1.2g(10.8mmol，1.1當(dāng)量)N-羥基-2-吡啶酮，接著在0℃在30分鐘期間加入2.2g(10.7mmol，1.1當(dāng)量)N，N-二環(huán)己基碳二亞胺在25ml CH2Cl2中的溶液。在加入4.2ml(33.0mmol，3.4當(dāng)量)NEM和1.9g(mmol，1.05當(dāng)量)異丁基肼·硫酸鹽以前，此懸浮液在此溫度再攪拌4小時(shí)。反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。此懸浮液用0.55ml(9.6mmol，1.0當(dāng)量)冰乙酸的10ml水溶液處理并攪拌1.5小時(shí)，用NaHCO3(5％)水溶液稀釋并用CH2Cl2萃取。合并的有機(jī)相用1MKHSO4溶液、水和鹽水洗滌，Na2SO4干燥并蒸發(fā)。用己烷研制生成5.02g(定量)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-酰肼，它直接用于后面的反應(yīng)。
(步驟2)在10mlTFA中的222mg(0.42mmol)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-酰肼用0.68ml(4.2mmol，10當(dāng)量)三乙基硅烷在80℃處理90分鐘。真空下蒸發(fā)溶劑，粗產(chǎn)物用快速色譜純化，產(chǎn)生148mg(86％)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-酰肼淺黃色晶體，MS408(MH+)。
采用類(lèi)似方法制備下列化合物由(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸和b)芐肼接著脫保護(hù)基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-酰肼白色固體，MS442(MH+)；c)對(duì)甲苯磺?；陆又摫Ｗo(hù)基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼白色固體，MS506(MH+)；d)甲肼接著脫保護(hù)基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-甲基-酰肼白色晶體，MS366(MH+)；由(2S，4R)-1-甲磺?；?4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸和對(duì)-甲苯磺?；陆又摫Ｗo(hù)基(2S，4R)-4-巰基-1-甲磺?；?吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼白色晶體，MS394(MH+)。實(shí)施例3b程序B (程序A的步驟1接著步驟3～4一流程2)(步驟3)在0℃用5.6ml(32.6mmol，4當(dāng)量)N-乙基二異丙基胺、3.1g(16.3mmol，2當(dāng)量)對(duì)甲苯磺酰氯和100mg(0.8mmol，0.1當(dāng)量)DMAP處理在450ml CH2Cl2中的4.3g(3.15mmol)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-酰肼，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，加入2.05g(16.1mmol，2當(dāng)量)MeNHCH2CO2K，溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入1MKHSO4溶液并分相。有機(jī)層用飽和NaHCO3萃取，無(wú)機(jī)層用CH2Cl2洗滌。合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，Na2SO4干燥和蒸發(fā)。粗的剩余物用己烷∶乙酸乙酯2∶1作淋洗液的快速色譜純化，生成2.68g(48％)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼，它可直接用于下面的反應(yīng)。
(步驟4)在2.68g(3.9mmol，1當(dāng)量)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷酮-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼的100mlTFA溶液中加入6.2ml(39mmol，10當(dāng)量)三乙基硅烷，混合物在80℃加熱1.5小時(shí)、真空濃縮及再溶于甲苯并蒸發(fā)。用己烷研制生成粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物進(jìn)一步用己烷∶乙酸乙酯1∶1的快速色譜純化產(chǎn)生1.65g(74％)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼白色晶體，MS562(MH+)。
采用類(lèi)似方法制備下列化合物(步驟1，3，4)由(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸b)和甲肼，接著與對(duì)-甲苯磺酰氯反應(yīng)并脫保護(hù)基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-酰肼白色晶體，MS520(MH+)；c)和異丁肼·硫酸鹽，接著與4-叔丁基-苯基磺酰氯反應(yīng)并脫保護(hù)基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-叔丁基-苯磺?；?-N’-異丁基-酰肼白色晶體，MS604(MH+)；d)和甲肼，接著與甲磺酰氯反應(yīng)并脫保護(hù)基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-甲磺酰基-N’-甲基-酰肼白色固體，MS444(MH+)；e)和異丁肼·硫酸鹽，接著與甲磺酰氯反應(yīng)并脫保護(hù)基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-甲磺?；?酰肼白色晶體，MS486(MH+)；f)和芐肼，接著與甲磺酰氯反應(yīng)并脫保護(hù)基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-甲磺酰基-酰肼白色晶體，MS520(MH+)；g)和芐肼，接著與對(duì)-甲苯磺酰氯反應(yīng)并脫保護(hù)基(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-酰肼白色晶體，MS596(MH+)；由(2S，4R)-1-甲磺?；?4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸a2)與芐肼，接著與甲磺酰氯反應(yīng)并脫保護(hù)基(2S，4R)-4-巰基-1-甲磺?；?吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-甲磺?；?酰肼白色固體，MS408(MH+)；b2)與異丁基肼·硫酸鹽，接著與甲磺酰氯反應(yīng)并脫保護(hù)基(2S，4R)-4-巰基-1-甲磺?；?吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-甲磺?；?酰肼無(wú)色固體，MS450(MH+)；c2)與異丁基肼·硫酸鹽，接著與對(duì)-甲苯磺酰氯反應(yīng)并脫保護(hù)基(2S，4R)-4-巰基-1-甲磺酰基-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼無(wú)色固體，MS374(MH+)；d2)與異丁基肼·硫酸鹽，接著與4-叔丁基-苯磺酰氯反應(yīng)并脫保護(hù)基(2S，4R)-4-巰基-1-甲磺?；量┩?2-羧酸N’-(4-叔丁基-苯磺?；?-N’-異丁基-酰肼白色晶體，MS492(MH+)；實(shí)施例3c程序C(流程2)與程序A，B類(lèi)似(步驟1，3)，由(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯和甲肼，接著用對(duì)-甲苯磺酰氯處理，得到(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷-1-羧酸1-叔丁酯，它可直接用于后面的反應(yīng)。
(步驟5)將在10ml CH2Cl2中的2.37g(4.3mmol)(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷-1-羧酸1-叔丁酯用4ml TFA在0℃處理，在冰箱中保持過(guò)夜。蒸去溶劑，粗料用甲苯(2×)和己烷(3×)溶解并蒸發(fā)，產(chǎn)生(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺酰基)-肼基羰基]-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷的TFA鹽粗產(chǎn)物，它沒(méi)有進(jìn)一步純化可用于下面的反應(yīng)。
(步驟6)在0℃往250mg(0.44mmol，1.0當(dāng)量)(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺酰基)-肼基羰基]4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷酮·TFA的5ml CH2Cl2溶液中加入360μl(2.1mmol，4.8當(dāng)量)N-乙基二異丙胺和70μl(0.56mmol，1.2當(dāng)量)氯甲酸苯酯。溶液室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，加入1N KHSO4分相，無(wú)機(jī)相用CH2Cl2萃取，有機(jī)層用1M KHSO4和鹽水洗滌、Na2SO4干燥并蒸發(fā)。
(步驟7)粗料再溶于10ml TFA，室溫加入700μl(4.4mmol，10當(dāng)量)三乙基硅烷，溶液在80℃攪拌70分鐘。蒸發(fā)并用采用己烷∶乙酸乙酯1∶1的快速色譜純化、接著冷凍干燥產(chǎn)生149.2mg(75％)(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-羧酸苯酯白色固體，MS450(MH+)。
用相同的方式(步驟6，7)制備下列化合物由(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺酰基)-肼基羰基]-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷·TFA和氯甲酸正丁酯、氯甲酸異-丙酯、丁基氨磺酰氯、環(huán)丙基氨磺酰氯、芐基氨磺酰氯(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-羧酸丁酯無(wú)色膠狀物，MS430(MH+)；(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-羧酸異丙酯白色固體，MS416(MH+)；(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺酰基)-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-磺酸丁基酰胺白色凍干固體，MS463(M-H)-；(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-磺酸環(huán)丙基酰胺白色凍干固體，MS447(M-H)-；(2S，4R)-2-[N’-甲基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-磺酸芐基酰胺白色凍干固體，MS497(M-H)-；根據(jù)規(guī)程(步驟5～7)，由(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺酰基)-肼基羰基]-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷-1-羧酸1-叔丁酯用氯甲酸異-丙基酯、氯甲酸正丁酯、氯甲酸芐酯、氯甲酸苯酯、喹啉-8-磺酰氯、噻吩-2-磺酰氯、芐基氨磺酰氯、丁基氨磺酰氯或環(huán)丙基氨磺酰氯處理給出下列化合物(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-羧酸異丙基酯白色固體，MS458(MH+)；(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-羧酸丁酯白色固體，MS472(MH+)；(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-羧酸芐基酯白色固體，MS506(MH+)；(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-羧酸苯酯白色固體，MS492(MH+)；
(2S，4R)-4-巰基-1-(喹啉-8-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-芐基)-酰肼白色固體，MS563(MH+)；(2S，4R)-4-巰基-1-(噻吩-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-芐基)-酰肼白色固體，MS518(MH+)；(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-磺酸芐基酰胺白色凍干固體，mp 67℃，MS539(M-H)-；(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-磺酸丁基酰胺白色凍干固體，MS467(M-H)-；(2S，4R)-2-[N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯基磺?；?-肼基羰基]-4-巰基-吡咯烷-1-磺酸環(huán)丙基酰胺白色凍干固體，MS489(M-H)-。實(shí)施例3d程序D-直接由酯形成(流程3)類(lèi)似Ruye Xing和Robert P.HanzlikJ.Med.Chein.1998，41，1344-1351的方法進(jìn)行下列反應(yīng)(步驟8)在5g(10.6mmol，1當(dāng)量)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸甲酯的20ml甲醇溶液中加入6.45ml(110mmol，10當(dāng)量)水合肼，溶液在室溫?cái)嚢?天。蒸發(fā)溶劑，接著用EtOH、乙醚和己烷溶解并蒸發(fā)。真空干燥淺黃色固體給出(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸酰肼，mp130℃，MS472(MH+)。
(步驟9)將150mg(0.3mmol，1.0當(dāng)量)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸酰肼的5ml TFA溶液和0.65ml三異丙基硅烷在室溫?cái)嚢?天，蒸發(fā)溶劑，剩余物再溶于飽和NaHCO3溶液乙酸乙酯中，分相后無(wú)機(jī)相用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)相用水和鹽水洗滌。柱色譜得到68mg(61％)白色泡沫狀(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸酰肼，MS352(MH+)。流程3 實(shí)施例3e程序E-中間體(流程3)類(lèi)似程序D步驟8，由(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸甲酯和水合肼制備下列化合物(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸酰肼灰白色固體，mp 172℃，MS594(MH+)。
(步驟10)在室溫向3.0g(5.05mmol)(2S，4R)-1-(萘-2-磺酰基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸酰肼的乙醇懸浮液中加入0.56ml(5.6mmol，1.1當(dāng)量)苯甲醛，反應(yīng)混合物在80 C加熱3小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，剩余物用乙酸乙酯∶己烷1∶1作淋洗液的硅膠快速色譜純化，產(chǎn)生2.75g(80％)白色泡沫狀的(2S，4R-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸亞芐基-酰肼，MS682(MH+)。
(步驟11)向2.48g(3.64mmol)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸亞芐基-酰肼中加入228.6mg(3.64mmol，1.0當(dāng)量)NaBH3CN在12.4ml THF中的溶液，接著加入在8.7ml THF中的691.8mg(3.64mmol，1.0當(dāng)量)甲苯-4-磺酸。該溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)，另外加入mmol，0.3當(dāng)量NaBH3CN，反應(yīng)在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂?zhuān)名}水、飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，Na2SO4干燥及蒸發(fā)溶劑。
剩余物溶于11ml 1M NaOH和15ml THF中并攪拌1小時(shí)，用乙酸乙酯稀釋并加入9ml 1M KHSO4，接著加入5％NaHCO3溶液。此微堿性溶液用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用水和鹽水洗滌、Na2SO4干燥并蒸發(fā)產(chǎn)生2.45g(98％)白色泡沫狀的(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’芐基-酰肼，MS684(MH+)。(類(lèi)似于Alexander Fssler，Guido Bold，Hans-Georg Capraro，Robert Cozens，Jurgen Mestan，Bernard Poncioni，Johannes Rsel，Marina Tintelnot-Blomley，and Marc LangJ.Med.Chem.1996年，39卷，16期，3203-3216頁(yè).)用類(lèi)似的方法由(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸酰肼和2，5-二氟-苯甲醛制備下列化合物(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-酰肼白色泡沫體，MS720(MH+)。實(shí)施例3e程序E-最終產(chǎn)物(流程3)(步驟12)在0℃往200mg(0.3mmol)(2S，4R)-1-(萘-2-磺酰基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-酰肼的3ml CH2Cl2溶液中加入60μl(0.35mmol，1.2當(dāng)量)N，N-二異丙基乙胺、72.5mg(0.35mmol，1.2當(dāng)量)4-甲氧基苯磺酰氯和22.5mg(0.12當(dāng)量)DMAP-聚合物。室溫將懸浮液振動(dòng)3天，另外加入25μl(0.15mmol，0.5當(dāng)量)N，N二異丙基乙胺、31mg(0.15mmol，0.5當(dāng)量)4-甲氧基苯磺酰氯和22.5mg(0.12當(dāng)量)DMAP-聚合物，繼續(xù)反應(yīng)1天。過(guò)濾并用CH2Cl2洗滌樹(shù)脂后，濃縮有機(jī)相，粗料通過(guò)快速色譜純化得到152mg(61％)(2S，4R)-1-(萘-2-磺酰基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼，其可直接用于后面的反應(yīng)。
(步驟13)在0C向148mg(0.17mmol)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼的3.0mlTFA溶液中加入276μl(1.73mmol，10當(dāng)量)三乙基硅烷?；旌衔镌谑覝?cái)嚢?0分鐘，蒸發(fā)溶劑，剩余物再溶于乙酸乙酯、飽和NaHCO3水溶液中，分層，無(wú)機(jī)相用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，Na2SO4干燥并蒸發(fā)。剩余物用乙酸乙酯∶己烷(1∶1.5～1∶1)的梯度通過(guò)快速色譜純化產(chǎn)生76mg(72％)白色泡沫狀的(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼，MS612(MH+)。
用類(lèi)似方法由(2S，4R)-1-(萘-2-磺酰基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基酰肼和對(duì)甲苯酰氯、乙酰氯、對(duì)甲氧苯甲酰氯反應(yīng)接著脫保護(hù)基制備下列化合物(b)(2S，4R)-4-甲基-苯甲酸N-芐基-N’-[4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-酰肼白色泡沫體，MS560(MH+)。
(c)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-乙?；?N’-芐基-酰肼白色固體，mp64℃，MS484(MH+)。
(d)(2S，4R)-4-甲氧基-苯甲酸N-芐基-N’-[4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-酰肼白色泡沫體，MS576(MH+)。
由(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-酰肼和2，4-二氟苯甲酰氯、2-噻吩碳酰氯、甲磺酰氯、甲氧基苯磺酰氯、2-噻吩磺酰氯、苯磺酰氯、4-氟苯磺酰氯
(e)(2S，4R)-2，4-二氟-苯甲酸N-(2，5-二氟-芐基)-N’-[4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-酰肼白色泡沫體，MS618(MH+)。
(f)(2S，4R)-噻吩-2-羧酸N-(2，5-二氟-芐基)-N’-[4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-酰肼白色泡沫體，MS588(MH+)。
(g)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-N’-甲磺?；?酰肼白色泡沫體，MS556(MH+)。
(h)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼白色泡沫體，MS648(MH+)。
(i)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-N’-(噻吩-2-磺?；?-酰肼白色泡沫體，MS624(MH+)。
(j)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-N’-苯磺?；?酰肼白色泡沫體，MS618(MH+)。
(k)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-N’-(4-氟-苯磺?；?-酰肼白色泡沫體，MS636(MH+)。實(shí)施例3f根據(jù)流程4合成類(lèi)似于程序A-步驟1，由(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸和N-甲肼羧酸芐酯制備中間體(2S，4R)-N’-[4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-N-甲肼羧酸芐酯灰白色晶體，MS620(MH+)。
(步驟14)將2.45g(1.52mmol)(2S，4R)-N’-[4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-N-甲肼羧酸芐酯溶于9ml乙酸，在0℃加入9ml HBr(33％乙酸溶液)并在0℃攪拌4小時(shí)。濃縮溶液，剩余物溶于CH2Cl2和飽和NaHCO3水溶液中，分層，無(wú)機(jī)相用CH2Cl2萃取，合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，Na2SO4干燥。粗產(chǎn)物用乙酸乙酯∶己烷1∶1的快速色譜純化產(chǎn)生380mg(44％)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-芐基-N-甲基-酰肼白色固體，mp83.2℃，MS576(MH+)。
根據(jù)流程2(步驟4)脫保護(hù)基給出(2S，4R)4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N-芐基-N-甲基-酰肼白色固體。mp69℃，MS456(MH+)。
(步驟16)將在7.5mlDMF中的180mg(0.31mmol)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N-芐基-N-甲基-酰肼在0℃用16.5mg(0.34mmol，1.1當(dāng)量)NaH和21μl(0.34mmol，1.1當(dāng)量)碘甲烷處理，溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)，溶液用水和CH2Cl2稀釋?zhuān)窒?，無(wú)機(jī)層用CH2Cl2萃取，合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，Na2SO4干燥并蒸發(fā)。粗料通過(guò)快速色譜用乙酸乙酯∶己烷2∶1到乙酸乙酯的梯度淋洗純化得到110mg(60％)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N，N-二甲基-酰肼，它用流程2所述規(guī)程脫保護(hù)(步驟4)給出(2S，4R)4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N，N-二甲基-酰肼白色固體，mp133.2℃，MS470(MH+)。流程4 13)N-甲肼羧酸芐酯，N-羥基-2-吡啶酮，DDC，NEM，CH2Cl214)HBr，AcOH15)TFA，Et3SiH16)NaH，RBr，DMF17)TFA，Et3SiH實(shí)施例3g根據(jù)流程5合成類(lèi)似程序A-步驟1，由(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸和2-(甲基)肼羧酸叔丁酯制備中間體(2S，4R)-N’-[4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-N’-甲肼羧酸叔丁酯白色晶體，MS586(MH+)。
(步驟19)在室溫向200mg(0.34mmol)(2S，4RR)-N’-[4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羰基]-N’-甲肼羧酸叔丁基酯的10ml TFA溶液中加入0.54ml(3.4mmol，10當(dāng)量)三乙基硅烷，溶液在80℃攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)溶劑，粗料用乙酸乙酯/己烷通過(guò)快速色譜純化生成61.6mg(40％)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-三氟乙酰基-酰肼白色固體，MS461(MH+)。
(步驟20，21)根據(jù)程序(流程4，步驟16)，由(2S，4R)-N’-[4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-N’-甲肼羧酸叔丁酯和溴化芐制備(2S，4R)-N’-[4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-N’-甲基-N-芐基-肼羧酸叔丁酯，它根據(jù)流程2(步驟4)直接脫BOC和PMB-保護(hù)基給出無(wú)色油狀的(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-芐基-N-甲基酰肼，MS456(MH+)。
(步驟22)在9ml CH2Cl2中的2g(3.4mmol)(2S，4R)-N’-[4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-N’-甲肼羧酸叔丁酯用3.4mlTFA處理2小時(shí)。濃縮溶液，再溶于甲苯并蒸發(fā)。剩余物溶于乙酸乙酯和飽和NaHCO3水溶液中，分層，無(wú)機(jī)層用乙酸乙酯萃取，合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，Na2SO4干燥及濃縮生成1.67g(定量)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-酰肼白色固體，MS486(MH+)。
(步驟23)向1.67g(3.4mmol)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-酰肼中加入0.78g(4.08mmol，1.2當(dāng)量)甲苯磺酰氯、0.7ml(4.08mmol，1.2當(dāng)量)N-乙基二異丙基胺和106mg(0.17mmol，0.05當(dāng)量)DMAP-樹(shù)脂，接著3天后再加入324mg(1.7mmol，0.5當(dāng)量)甲苯磺酰氯。過(guò)濾反應(yīng)物，加入1M HCl，無(wú)機(jī)相用CH2Cl2萃取。合并的有機(jī)相用鹽水洗滌、Na2SO4干燥并濃縮。粗產(chǎn)物用乙酸乙酯∶己烷1∶2通過(guò)快速色譜純化產(chǎn)生350mg(13％)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷2-羧酸N-甲基-N’N’-二-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼白色固體，MS794(MH+)；和630mg(29％)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼白色固體，MS640(MH+)。
這些化合物根據(jù)流程2(步驟4)脫保護(hù)基給出(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’N’-二-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼白色晶體，mp110℃，MS674(MH+)。
(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼白色晶體，mp103.5℃，MS520(MH+)。
(步驟25，26)根據(jù)程序(流程4，步驟16)，由(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼和溴化芐制備(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-芐基-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼，它根據(jù)流程2(步驟4)直接脫保護(hù)基給出(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-芐基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼白色固體，mp82.5℃，MS610(MH+)。流程5 16)NaH，BnBr，在DMF中17)Et3SiH，在TFA中實(shí)施例3h合成環(huán)狀化合物(流程6)(步驟27)在0℃向150mg(0.25mmol)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸酰肼的65ml THF溶液中加入52μl(0.3mmol，1.2當(dāng)量)iPr2EtN和29μl(0.25mmol)4-溴丁?；?。溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)，將溶液濃縮并再溶于乙酸乙酯/H2O中，無(wú)機(jī)相用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌并用Na2SO4干燥。用乙酸乙酯∶己烷1∶1的柱色譜純化得到170mg(92％)(2S，4R)-1-(萘-2-磺?；?-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-溴-丁?；?-酰肼，它溶于120mlDMF中并用17mg(0.38mmol，55％在礦物油中)NaH處理，溶液攪拌2小時(shí)，濃縮并溶于乙酸乙酯/H2O中。無(wú)機(jī)相用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌并用Na2SO4干燥。粗產(chǎn)物通過(guò)柱色譜純化，得到75mg(45％)白色泡沫狀(2S，4R)-4-三苯甲硫烷基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸(2-氧代-吡咯烷-1-基)-酰胺和40mg(25％)白色泡沫狀的(2S，4R)-1-[4-三苯甲硫烷基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-四氫噠嗪-3-酮。這兩個(gè)化合物分別在0℃～室溫在TFA(2ml/mmol三苯甲硫烷基)中用10當(dāng)量三乙基硅烷處理，直到檢測(cè)不到離析物為止，分別生成白色泡沫狀的(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸(2-氧代-吡咯烷-1-基)-酰胺，MS420(MH+)；及白色泡沫狀的(2S，4R)-1-[4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-四氫-噠嗪-3-酮，MS420(MH+)。流程6 27)Br(CH2)3COCl、iPr2NEt、THF28)NaH、DMF、室溫，接著分離兩個(gè)化合物29)Et3SiH、TFA實(shí)施例4酰肼衍生物的固相合成結(jié)構(gòu)單元合成(流程7)(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁酯(19.48g，53mmol)用TFA(80ml)在CH2Cl2(120ml)中處理15分鐘。減壓濃縮反應(yīng)混合物，所生成的深紅色油狀物在乙醚/正己烷(1∶4v/v，860ml)中研制。收集沉淀的鹽并減壓干燥(18.9g)，直接用于下一步。
(2S，4R)-4-(4-甲氧基-芐基硫烷基)-吡咯烷-2-羧酸的TFA鹽(18.9g，53mmol)，在1，4-二噁烷/含有NaHCO3(17.8g，212mmol)的H2O(300ml)中用Fmoc-OSu(19.7g，58.3mmol)處理，并機(jī)械攪拌16小時(shí)。反應(yīng)混合物用水(400ml)稀釋并用乙醚(2×)洗滌。加入乙酸乙酯(400ml)和HCl(25％，50ml)。有機(jī)相用H2O、飽和NaCl萃取和洗滌，用MgSO4干燥。過(guò)濾并減壓濃縮得到泡沫狀產(chǎn)物(22.5g)。流程7 1.40％TFA/CH2Cl22.Fmoc-Osu，NaHCO3，H2O，1，4-二噁烷3.TFA，三異丙基硅烷上述泡沫狀產(chǎn)物(20.7g，42.3mmol)溶于TFA(350ml)中，加入三異丙基硅烷(43.5ml)?；旌衔锘亓?.5小時(shí)，并減壓濃縮。加入乙醚(100ml)及正己烷(300ml)產(chǎn)生沉淀物。傾出上清液，減壓并在高真空下干燥沉淀物得到白色泡沫狀的(2S，4R)-4-硫烷基-1-(芴基甲氧基羰基)-吡咯烷-2-羧酸(9.6g，MS370 MH+)樹(shù)脂衍生化(流程8)連接劑4-(α，α-二苯基羥甲基)苯甲酸(18.3g，60mmol)用TPTU(17.8g，60mmol)、DIEA(30.8ml、180mmol)在DMF(無(wú)水，250ml)中活化3分鐘。將混合物加到含有二苯甲胺樹(shù)脂(負(fù)載-NH2量為0.9mmol/g，44.4g)的燒瓶中，燒瓶振動(dòng)1小時(shí)。在過(guò)濾器上收集該樹(shù)脂并用(DMF/異丙醇，3次交替)、CH2Cl2、乙醚洗滌及干燥54.65g，0.65mmol/g(以重量增加計(jì)算的負(fù)載量)。
向上述CH2Cl2洗滌過(guò)的樹(shù)脂(46.9g，30mmol)中加入在CH2Cl2(無(wú)水，550ml)中的(2S，4R)-4-硫烷基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸(12.2g，36mmol)和TFA(80ml)的混合物。將紅色的混合物振動(dòng)1.5小時(shí)，然后過(guò)濾樹(shù)脂，用(CH2Cl2/異丙醇，3次交替)、CH2Cl2、乙醚洗滌并干燥42g，0.65mmol/g(以重量增加計(jì)算的負(fù)載量)。
向上述CH2Cl2洗滌過(guò)的樹(shù)脂(33.5g，22mmol)中加入CH2Cl2(無(wú)水，450ml)中的(2S，4R)-4-硫烷基-1-(芴基甲氧基羰基)-吡咯烷-2-羧酸(9.7g，26mmol)和TFA(67ml)的混合物。將紅色混合物振動(dòng)1.5小時(shí)，然后過(guò)濾樹(shù)脂，用(CH2Cl2/異丙醇，3次交替)、CH2Cl2、乙醚洗滌并干燥42g，0.59mmol/g(以重量增加計(jì)算的負(fù)載量)。流程8 1.4-(α，α-二苯基羥甲基)苯甲酸，四氟硼酸[O-(1，2-二氫-2-氧代吡啶-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基]uronium鹽(TPTU)，Huenig堿2.(2S，4R)4-硫烷基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸或(2S，4R)-4-硫烷基-1-(芴基甲氧基羰基)-吡咯烷-2-羧酸，TFA，CH2Cl2實(shí)施例5平行的固相化學(xué)(流程9)典型程序步驟1，2由上述(2S，4R)-4-硫烷基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸(0.4g，0.26mmol)衍生的樹(shù)脂用DMF(無(wú)水，5ml)、TPTU(0.18g，0.61mmol)、DIEA(0.21ml，1.21mmol)處理10分鐘。真空下除去DMF溶液，反應(yīng)瓶中加入芐氧基碳酰肼(0.13g，0.77mmol)在DMF(無(wú)水，3ml)中的溶液。反應(yīng)混合物振動(dòng)0.5小時(shí)，在過(guò)濾器上收集樹(shù)脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、CH2Cl2、乙醚洗滌并干燥。
樹(shù)脂(440mg)用40％TFA/CH2Cl2(10ml)、三異丙基硅烷(0.5ml)處理10分鐘，收集濾液并減壓濃縮，剩余物從乙酸(10ml)中冷凍-干燥產(chǎn)生41mg(2S，4R)-N’-[4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-肼羧酸芐酯白色凍干產(chǎn)物，MS508.3(MNa+)。
通過(guò)上述程序平行制備的其他化合物在表1中出示。流程9 3.NH2NHR4，TPTU，Huenig堿，DMF4.NH2NH2·H2O，TPTU，DMF5.R4SO2Cl，DMF，脫離樹(shù)脂后分離給出兩種產(chǎn)物(R3＝R4)6.R5鹵化物，DBU，DMF7.20％哌啶/DMF，然后R2-X-鹵化物、吡啶在DMF中典型程序步驟3，2上述由(2S，4R)-4-硫烷基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸(0.5g，0.33mmol)衍生的樹(shù)脂用DMF(無(wú)水，5ml)、TPTU(0.19g，0.65mmol)、DIEA(0.22ml，1.3mmol)處理10分鐘。真空下除去DMF溶液，反應(yīng)瓶中加入4-甲氧基苯磺酰肼(0.20g，1.00mmol)的DMF(無(wú)水，5ml)溶液。反應(yīng)混合物振動(dòng)1小時(shí)，在過(guò)濾器上收集樹(shù)脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、CH2Cl2、乙醚洗滌并干燥。
樹(shù)脂(540mg)用40％TFA/CH2Cl2、三異丙基硅烷(0.5ml)處理15分鐘，收集濾液并減壓濃縮，剩余物通過(guò)制備型RP-HPLC純化，匯集所需的級(jí)分，由乙酸(10ml)冷凍-干燥生成(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼白色凍干產(chǎn)物，MS520.1(MH-)通過(guò)上述程序平行制備的其他化合物在表1中出示。典型程序步驟3，6，2由上述(2S，4R)-4-硫烷基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸(4.3g，2.75mmol)衍生的樹(shù)脂用DMF(無(wú)水，30ml)、TPTU(1.63g，5.50mmol)、DIEA(1.41ml，8.25mmol)處理15分鐘。真空下除去DMF溶液，反應(yīng)瓶中加入甲苯-4-磺酰肼(1.54g，8.25mmol)的DMF(無(wú)水，30ml)溶液。反應(yīng)混合物振動(dòng)16小時(shí)，在過(guò)濾器上收集樹(shù)脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、CH2Cl2、乙醚洗滌并干燥。典型的烷基化步驟例如向樹(shù)脂(0.8g，0.45mmol)中加入DMF(無(wú)水，10ml)、二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(0.08ml，0.54mmol)、2，5-二氟溴化芐(0.11g，0.54mmol)，混合物振動(dòng)16小時(shí)，在過(guò)濾器上收集樹(shù)脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、CHCl2、乙醚洗滌并干燥。
樹(shù)脂(0.16g)用40％TFA/CH2Cl2(10ml)、三異丙基硅烷(0.5ml)處理15分鐘，收集濾液并減壓濃縮，剩余物用制備型RP-HPLC純化，所需級(jí)分匯集并由乙酸中冷凍-干燥產(chǎn)生(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟芐基)-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼白色凍干產(chǎn)物，MS632.0(MH+)。
通過(guò)上述程序平行制備的其他化合物在表1中出示。還得到了二取代產(chǎn)物。典型程序步驟4，5，2上述由(2S，4R)-4-硫烷基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸(1.0g，0.65mmol)衍生的樹(shù)脂，用DMF(無(wú)水，10ml)、TPTU(0.39g，1.3mmol)、DIEA(0.45ml，2.6mmol)處理10分鐘。真空下除去DMF溶液，反應(yīng)瓶加入水合肼(25％，0.42ml，3.25mmol)的DMF(無(wú)水，8ml)溶液。反應(yīng)混合物振動(dòng)1小時(shí)，在過(guò)濾器上收集樹(shù)脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、CH2Cl2、乙醚洗滌并干燥。
在此樹(shù)脂(0.22g，0.14mmol)中加入DMF(無(wú)水，3ml)、DIEA(0.10ml，0.60mmol)、4-氟苯磺酰氯(0.11g，0.56mmol)，混合物振動(dòng)3.5小時(shí)，在過(guò)濾器上收集樹(shù)脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、CH2Cl2、乙醚洗滌及干燥。
此樹(shù)脂(0.25mg)用40％TFA/CH2Cl2(10ml)、三異丙基硅烷(0.5ml)處理15分鐘，收集濾液并減壓濃縮，剩余物通過(guò)制備型RP-HPLC純化，匯集所需級(jí)分并從乙酸(10ml)中冷凍-干燥得到(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-氟-苯磺?；?-酰肼白色凍干產(chǎn)物，MS510.2(MH-)。
通過(guò)上述程序平行制備的其他化合物在表1中出示。典型程序步驟3，7，2由上述(2S，4R)-4-硫烷基-1-(芴基甲氧基羰基)-吡咯烷-2-羧酸(20.1g，11.9mmol)衍生的樹(shù)脂用DMF(無(wú)水，150ml)、TPTU(7.1g，23.8mmol)、DIEA(6.1ml，35.7mmol)處理10分鐘。真空下除去DMF溶液，反應(yīng)瓶中加入甲苯-4-磺酰肼(6.65g，35.7mmol)的DMF(無(wú)水，100ml)溶液。反應(yīng)混合物振動(dòng)16小時(shí)，在過(guò)濾器上收集樹(shù)脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、DMF洗滌。
用20％哌啶/DMF(2×5分鐘)實(shí)現(xiàn)Fmoc基團(tuán)的脫去。
吡咯烷取代反應(yīng)按照例如
在此樹(shù)脂(0.60g，0.30mmol)中加入DMF(無(wú)水，6ml)、吡啶(0.12ml，1.50mmol)、8-喹啉磺酰氯(0.08g，0.36mmol)，混合物振動(dòng)16小時(shí)，在過(guò)濾器上收集此樹(shù)脂，用(DMF/異丙醇交替三次)、CH2Cl2、乙醚洗滌并干燥。
此樹(shù)脂(0.25mg)用40％TFA/CH2Cl2(10ml)、三異丙基硅烷(0.5ml)處理15分鐘，收集濾液并減壓濃縮，剩余物用制備型RP-HPLC純化，匯集所需級(jí)分，從乙酸(10ml)中冷凍-干燥得到(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-氟-苯磺?；?-酰肼白色凍干產(chǎn)物，MS505.3(MH-)。
通過(guò)上述程序平行制備的其他化合物在表1中出示。
實(shí)施例A以常規(guī)方式加工含有下列成分的片劑
實(shí)施例B以常規(guī)方式加工含有下列成分的膠囊
實(shí)施例C注射液可具有下列組分
實(shí)施例D500mg化學(xué)式I的化合物懸浮在3.5ml Myglyol 812和0.08g芐醇中。懸浮液被充入一個(gè)帶有劑量閥門(mén)的容器中。通過(guò)閥門(mén)在壓力下在容器中充入5.0g氟里昂12。通過(guò)振動(dòng)使氟里昂溶于Myglyol-芐醇混合物中。此噴霧容器含有可單獨(dú)使用的大約100次單次劑量。
權(quán)利要求
1.通式I的化合物，和它們的藥用酯，和/或它們的藥用鹽 其中R1是氫、烷基羰基、或芳基羰基；R2是烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、環(huán)烷基、鹵代烷基、羧烷基、氨基烷基、(單-和二烷基)氨基烷基、烷氧基烷基、烷氧羰基烷基、鏈炔基、芳基、芳烷基、芳烷基(烷氧羰基)烷基、芳基羰基烷基、芳氧基烷基、芳基鏈烯基、芳基(烷氧羰基)烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)烷基；R3是氫、芳基、烷基或芳烷基、芳基磺?；?、雜芳基磺?；?；R4是氫、芳烷基、烷基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、烷基磺?；⒎蓟酋；⒎蓟榛酋；?、雜芳基磺?；?、羧烷基、羧烷基磺酰基或烷氧羰基烷基；或基團(tuán)-NR3R4或R5-[N-N(R4)]-R3形成飽和或不飽和的5-元或6-元脂肪環(huán)；R5是氫、烷基磺酰基、芳基磺?；?、雜芳基磺酰基、烷氧羰基、芳氧基羰基、雜芳氧基羰基、烷基羰基、芳基羰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜環(huán)基、(單-或二烷基氨基)-烷基羰基、(單-和二烷基)氨基磺?；?、芳氨基羰基、烷基、烷基羰基、烷氧羰基、芳基、芳基烷基、芳基烷氧羰基或雜芳基；R6是氫、烷基、芳基或羧烷基；X是-S(O)2-、-S(O)2-NH-、-C(O)-、-C(O)NR6或C(O)-O-。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化學(xué)式(I)的化合物，其中R1是氫。
3.根據(jù)權(quán)利要求1～2中任意一項(xiàng)的化合物，其中R2是烷基、鹵代烷基、烷基氨基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烷基氨基、芳基、芳烷基、芳氧基、芳烷基氨基、芳基烷氧基、雜芳基、氨基、或(單-和二烷基)氨基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3中任意一項(xiàng)的化合物，其中R2是烷基、鹵代烷基、烷基氨基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烷基氨基、芳基、芳烷基或雜芳基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4中任意一項(xiàng)的化合物，其中R2是芳基或雜芳基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1～5中任意一項(xiàng)的化合物，其中R2是芳基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6中任意一項(xiàng)的化合物，其中R2是萘基或苯基，其中苯基任選地被一個(gè)或多個(gè)氟取代或被一個(gè)苯基取代。
8.根據(jù)權(quán)利要求1～7中任意一項(xiàng)的化合物，其中R2是萘基、2，3，4，5，6-五氟苯基或聯(lián)苯基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1～8中任意一項(xiàng)的化合物，其中R3是氫或烷基。
10.根據(jù)權(quán)利要求1～9中任意一項(xiàng)的化合物，其中R3是氫。
11.根據(jù)權(quán)利要求1～10中任意一項(xiàng)的化合物，其中R4是氫、芳烷基、烷基、芳基磺酰基、雜芳基磺?；?、環(huán)烷基烷基或羧烷基。
12.根據(jù)權(quán)利要求1～11中任意一項(xiàng)的化合物，其中R4是氫、烷基、芳烷基、環(huán)烷基、芳基磺?；螋韧榛?。
13.根據(jù)權(quán)利要求1～12中任意一項(xiàng)的化合物，其中R4是氫、烷基、環(huán)烷基、羧烷基或芳烷基。
14.根據(jù)權(quán)利要求1～13中任意一項(xiàng)的化合物，其中R4是氫、烷基或芳基烷基。
15.根據(jù)權(quán)利要求1～14中任意一項(xiàng)的化合物，其中R4是氫、2，4，5-三氟芐基、2，4-二氟芐基、芐基、甲基、乙基、異丙基、異丁基、芐基或HO2C-CH2-、或環(huán)烷基丙基甲基。
16.根據(jù)權(quán)利要求1～15中任意一項(xiàng)的化合物，其中R5是氫、烷基羰基、烷氧羰基、烷基磺?；?、芳基、芳烷基、芳基羰基、(單-和二烷基氨基)烷基羰基、(單-和二烷基)氨基磺酰基、芳基烷氧羰基、芳基氨基羰基、芳基磺?；㈦s芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺?；?、芳基氨基羰基、雜芳基或雜環(huán)基。
17.根據(jù)權(quán)利要求1～16中任意一項(xiàng)的化合物，其中R5是芳基、芳烷基、芳基羰基、芳基烷氧基、芳基氨基羰基、芳基磺?；?、雜芳基羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺?；⒎蓟被驶?、雜芳基或雜環(huán)基。
18.根據(jù)權(quán)利要求1～17中任意一項(xiàng)的化合物，其中R5是芳基磺酰基、芳烷基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺?；?br> 19.根據(jù)權(quán)利要求1～18中任意一項(xiàng)的化合物，其中R5是4-甲基-苯磺酰基、芐基、4-甲氧基苯磺?；?、(1H-吲哚-3-基)乙?；?、噻吩-2-基、或3，5-二甲基-異噁唑-4-磺?；?br> 20.根據(jù)權(quán)利要求1～19中任意一項(xiàng)的化合物，其中X是-SO2-、-C(O)-。
21.根據(jù)權(quán)利要求1～20中任意一項(xiàng)的化合物，其中X是-SO2-。
22.根據(jù)權(quán)利要求1～21中任意一項(xiàng)的化合物，其化學(xué)式為
23.根據(jù)權(quán)利要求1～22中任意一項(xiàng)的化合物，其中R1是氫；R2是萘基或苯基，其中苯基任選地被一個(gè)或多個(gè)氟取代或被一個(gè)苯基取代；R3是氫或烷基；R4是氫、烷基或芳基烷基；R5是芳基磺?；?、芳烷基、雜芳基烷基羰基、雜芳基磺?；?；及X是-SO2-。
24.根據(jù)權(quán)利要求1～23中任意一項(xiàng)的化合物，選自a)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丁基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；b)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；c)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-酰肼；d)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；e)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；f)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-苯磺酰基-酰肼；g)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼；h)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺酰基)-吡咯烷-2-羧酸N’-[(1H-吲哚-3-基)-乙?；鵠-酰肼；i)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-噻吩-2-磺?；?酰肼；j)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(3，5-二甲基異噁唑4-磺?；?-酰肼；k)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-環(huán)丙基甲基-N’-(4-甲基-苯磺酰基)-酰肼；l)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺酰基)-N’-(2，4，5-三氟-芐基)-酰肼；m)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(2，5-二氟-芐基)-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；n)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-異丙基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；o)(2S，4R)-[N’-[4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羰基]-N-(4-甲基-苯磺?；?-肼基]-乙酸；p)(2S，4R)-1-(聯(lián)苯基-4-磺酰基)-4-巰基-吡咯烷-2-羧酸N’-甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；q)(2S，4R)-4-巰基-1-(2，3，4，5，6-五氟-苯磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；r)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N’-芐基-N’-(4-甲氧基-苯磺?；?-酰肼；s)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼；及t)(2S，4R)-4-巰基-1-(萘-2-磺?；?-吡咯烷-2-羧酸N-甲基-N’-芐基-N’-(4-甲基-苯磺?；?-酰肼。
25.一種藥物組合物，它含有根據(jù)權(quán)利要求1～24中任意一項(xiàng)的化合物及一種或多種藥用賦形劑。
26.權(quán)利要求1～24的化合物作為活性成分在制造藥物中的用途，這些藥物用于預(yù)防和治療由內(nèi)皮素-轉(zhuǎn)變酶(ECE)活性引起的一些疾病，尤其是心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病，高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細(xì)胞生長(zhǎng)有關(guān)的疾病、眼科和大腦保護(hù)性適應(yīng)癥及器官保護(hù)的用途。
27.根據(jù)權(quán)利要求1～24中任意一項(xiàng)的化合物的用途，用于治療或預(yù)防與心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病關(guān)聯(lián)的疾病，以及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細(xì)胞生長(zhǎng)關(guān)聯(lián)的疾病、眼科及大腦保護(hù)性適應(yīng)癥和器官保護(hù)。
28.根據(jù)權(quán)利要求1～24中任意一項(xiàng)的化合物用作治療的活性物質(zhì)，特別在與鋅水解酶活性關(guān)聯(lián)的疾病的范圍，這些疾病如心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病，高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細(xì)胞生長(zhǎng)關(guān)聯(lián)的疾病、眼科和大腦保護(hù)性適應(yīng)癥及器官保護(hù)。
29.一種治療和/或預(yù)防處理心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病的方法，和用于創(chuàng)傷治療及控制月經(jīng)、青光眼、與抑制細(xì)胞生長(zhǎng)關(guān)聯(lián)的疾病、眼科和大腦保護(hù)性適應(yīng)癥及器官保護(hù)的方法，該方法包括將根據(jù)權(quán)利要求1～24中任意一項(xiàng)的化合物給予人類(lèi)或動(dòng)物服用。
30.一種制備權(quán)利要求1～24中任意一項(xiàng)定義的化合物的方法，該方法包括將化學(xué)式III的化合物 其中R1、R2和X的定義如上文，及A是HS-保護(hù)基團(tuán)，a)與HNR3NR4R5反應(yīng)以引入酰肼；或b)HNR3NR4R5中R5為保護(hù)基團(tuán)，接著轉(zhuǎn)換或引入R3和R4；可任選地接著轉(zhuǎn)換R5和/或R2-X基團(tuán)為不同的R5和/或R2-X基團(tuán)、和/或脫保護(hù)基及或者釋放硫醇，及其中R3、R4和R5的定義與權(quán)利要求1～21中任意一項(xiàng)所定義的相同。
31.根據(jù)權(quán)利要求30的方法制備的化合物。
32.上文定義的發(fā)明。
全文摘要
本發(fā)明涉及化學(xué)式(I)的化合物及其藥用的酯和/或鹽，化學(xué)式(I)中R
文檔編號(hào)A61P15/00GK1443163SQ01813048
公開(kāi)日2003年9月17日 申請(qǐng)日期2001年7月11日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月19日
發(fā)明者約翰內(nèi)斯·埃比, 亨麗埃塔·德姆洛, 埃里克·阿爾吉里斯·基塔斯 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司