專利名稱：無羈萜-3β-醇在制備抗血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及無羈萜-3 β -醇的應(yīng)用，具體地說，涉及無羈萜-3 β -醇在制備抗血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
血管性癡呆(Vascular Dementia，VD)是指各種腦血管疾病引起的腦功能障礙而產(chǎn)生的獲得性智能損害綜合癥。以記憶、認(rèn)知功能缺損為主，可伴有言語、運(yùn)動(dòng)、視空間及人格障礙為主要臨床表現(xiàn)的一組神智異常癥候群。血管性癡呆是中老年人群的多發(fā)病、常見病，是老年期癡呆的主要類型之一。統(tǒng)計(jì)表明，在歐美國(guó)家中，血管性癡呆占老年癡呆總數(shù)的15%;在中國(guó)、日本等亞洲國(guó)家，血管性癡呆占老年癡呆總數(shù)的50%。目前，我國(guó)的血管性癡呆患病率為324/10萬，彡65歲人群中血管性癡呆的患病率為1. 3%。在各種腦血管疾病中，缺血性腦病的發(fā)病率最高，也是血管性癡呆最主要的致病因素。研究表明，腦缺血引起的遲發(fā)性神經(jīng)元損傷以細(xì)胞凋亡為主，而大腦皮質(zhì)和海馬神經(jīng)元凋亡與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)，是導(dǎo)致學(xué)習(xí)、記憶障礙的重要因素，這也是目前研究血管性癡呆的熱點(diǎn)之一。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，凋亡的發(fā)生既是凋亡相關(guān)基因表達(dá)的結(jié)果，又受許多內(nèi)外因素的調(diào)節(jié)?？赡芘c以下幾個(gè)因素有關(guān)①缺血缺氧本身激活了凋亡發(fā)生基因；②腦缺血再灌注后產(chǎn)生大量自由基對(duì)神經(jīng)細(xì)胞造成嚴(yán)重?fù)p傷的同時(shí)，也誘導(dǎo)了凋亡的發(fā)生；③Ca2+ 超載激活一系列鈣依賴性酶促反應(yīng)，促進(jìn)了凋亡的發(fā)生。目前，血管性癡呆治愈尚較困難，但多能通過藥物治療改善癥狀。主要的治療原則包括①用腦代謝賦活劑(輔酶Q1(l、胞二磷膽堿)和腦循環(huán)促進(jìn)劑(氫化麥角堿、氟桂嗪)激活腦代謝，間接抑制癡呆的發(fā)展。腦代謝賦活劑主要通過促進(jìn)葡萄糖吸收、代謝，繼發(fā)擴(kuò)張腦血管，改善營(yíng)養(yǎng)代謝，而腦循環(huán)促進(jìn)劑是直接擴(kuò)張腦血管的藥物；②治療神經(jīng)傳遞阻滯的藥物，如金剛烷胺能促進(jìn)多巴胺釋放，抑制其重?cái)z??；高泛酸鈣可促進(jìn)葡萄糖的腦內(nèi)吸收和代謝，增加腦組織內(nèi)5-羥色胺濃度和腦血流量，明顯改善神經(jīng)癥狀；乙酰膽堿前體藥(卵磷脂、氯化膽堿)和膽堿脂酶抑制劑(毒扁豆堿、四氫胺基吡啶)通過增加乙酰膽堿系統(tǒng)的功能，改善神經(jīng)癥狀；神經(jīng)肽能夠提高老年人認(rèn)識(shí)、記憶能力，減輕抑郁和無力癥狀；③對(duì)癥治療，常用甲硫達(dá)嗪、氟奮乃靜、氟呱丁醇等控制血管性癡呆患者急躁和過激行為；常用利他林、氯酯酰改善血管性癡呆患者抑郁癥狀；常用安定改善血管性癡呆患者焦慮癥狀。無羈萜-3 β -醇，提取于衛(wèi)矛科植物衛(wèi)矛[Euonymus alatus (Thunb. ) Sieb.] 及冬青衛(wèi)矛[Euonymus japonicus Thunb.]白勺卩十；菊禾斗植物澤蘭[Eupatorium japonicum Thunb.]的葉、莖；大戟科植物金剛綦[Euphorbia antiquorum L.]及重陽(yáng)木[Bischofia polycarpa (Levi. ) Airy Shaw]的莖、葉。分子式C3(1H520，分子量4 . 73，CAS 登錄號(hào) 5085-72-3，化學(xué)名稱24, 25，26-Trinoro 1 eanan-3-o 1, 5，9，13-trimethyl-, (3a, 4b, 5b, 8a, 9b, 10a, 13a, 14b)-。我們研究發(fā)現(xiàn)，無羈萜_3 β -醇可以有效抑制血管性癡呆大鼠神經(jīng)組織形態(tài)學(xué)改變，提高血管性癡呆大鼠的認(rèn)知、學(xué)習(xí)和記憶能力，明顯減輕血管性癡呆癥狀，治療效果優(yōu)于麥角新堿、胞二磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供無羈萜-3 β -醇在制備抗血管性癡呆的藥物方面的新用途。具體地說，本發(fā)明涉及無羈萜-3 β -醇在制備抗血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。其中，所述血管性癡呆，其特征在于，因各種腦血管疾病引起的腦功能障礙而產(chǎn)生的獲得性智能損害綜合癥，以記憶、認(rèn)知功能缺損為主，可伴有言語、運(yùn)動(dòng)、視空間及人格障礙為主要臨床表現(xiàn)的一組神智異常癥候群。本發(fā)明所述無羈萜-3 β -醇提取于衛(wèi)矛科植物衛(wèi)矛[Euonymus alatus (Thunb.) Sieb.]及冬青衛(wèi)矛[Euonymus japonicus Thunb.]的葉；菊科植物澤蘭[Eupatorium japonic· Thunb.]的葉、莖；大戟科植物金剛綦[Euphorbia antiquorum L.]及重陽(yáng)木 [Bischofia polycarpa (Levi. ) Airy Shaw]的蓮、葉。本發(fā)明所述藥物是指以無羈萜-3 β-醇為主要活性成分，與可藥用載體制成的醫(yī)療上可接受的制劑，如片劑、丸劑或膠囊劑等。本發(fā)明所述藥物，其服用量以無羈萜-3 β-醇計(jì)成人，l(Tl5mg/次，3次/日；兒童，ο. Γο. ang/kg·次，3次/日，即可達(dá)到抑制血管性癡呆臨床癥狀的效果，特別地，孕婦等特殊人群服用時(shí)需遵醫(yī)囑。本發(fā)明所述無羈萜-3 β -醇可以直接通過市售得到，也可以通過植物提取得到。本發(fā)明通過大鼠跳臺(tái)試驗(yàn)、大鼠避暗試驗(yàn)證明了天然產(chǎn)物無羈萜-3 β-醇可以有效提高血管性癡呆大鼠的認(rèn)知、學(xué)習(xí)、記憶能力，治療效果優(yōu)于麥角新堿、胞二磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂。本發(fā)明通過光鏡觀察發(fā)現(xiàn)，無羈萜-3 β -醇明顯抑制血管性癡呆大鼠海馬CAl區(qū)三層錐體細(xì)胞排列紊亂、錐體細(xì)胞腫脹、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、星形膠質(zhì)細(xì)胞增生、部分錐體細(xì)胞胞體變小或呈三角形、頂樹突延長(zhǎng)、核固縮和破裂、胞漿嗜伊紅色、基質(zhì)疏松伴微空泡形成、血管周圍有紅細(xì)胞滲出等形態(tài)學(xué)改變。本發(fā)明通過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，無羈萜-3 β -醇明顯抑制管性癡呆大鼠海馬CAl區(qū)錐體細(xì)胞胞核固縮、染色質(zhì)聚集、異染色質(zhì)增多、核周高電子密度團(tuán)塊出現(xiàn)、線粒體嵴融合等形態(tài)學(xué)改變。本發(fā)明的有益效果在于
1、本發(fā)明提供了無羈萜-3β-醇的新用途，其對(duì)血管性癡呆癥狀有很好的抑制作用。 無羈萜-3 β -醇明顯抑制血管性癡呆大鼠海馬CAl區(qū)三層錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變，有效提高血管性癡呆大鼠的認(rèn)知、學(xué)習(xí)、記憶能力，治療效果優(yōu)于氫化麥角堿、胞二磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂。
2、本發(fā)明采用的無羈萜-3β -醇提取來自純天然原料，化學(xué)結(jié)構(gòu)和分子量明確，質(zhì)量可控，符合國(guó)際市場(chǎng)第三代中藥產(chǎn)品的要求，有廣闊的市場(chǎng)前景。如果研究成功，將提高我國(guó)傳統(tǒng)中藥的國(guó)際地位，對(duì)保障人類健康及提高老年人生活質(zhì)量做出貢獻(xiàn)。


圖1無羈萜-3β_醇對(duì)血管性癡呆大鼠跳臺(tái)、避暗試驗(yàn)潛伏期的影響(殳±s)(與血管性癡呆模型組比較，*P<0.05 ；與高劑量無羈萜-3 β-醇組比較，#〈0.05)。
試驗(yàn)結(jié)果顯示，無羈萜-3 β -醇明顯提高血管性癡呆大鼠跳臺(tái)、避暗試驗(yàn)潛伏期，并且具有顯著的劑量依賴性；與氫化麥角堿、胞二磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂對(duì)照組比較， 有明顯差異(P < 0. 05)。圖2無羈萜_3β-醇對(duì)血管性癡呆大鼠跳臺(tái)、避暗試驗(yàn)錯(cuò)誤次數(shù)的影響(^ 士 S)
(與血管性癡呆模型組比較，*Ρ<0. 05 ；與高劑量無羈萜-3 β-醇組比較，#<0. 05)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，無羈萜-3 β-醇明顯減少血管性癡呆大鼠跳臺(tái)、避暗試驗(yàn)錯(cuò)誤次數(shù)，并且具有顯著的劑量依賴性；與氫化麥角堿、胞二磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂對(duì)照組比較，有明顯差異(P < 0. 05)。圖3 無羈萜-3 β-醇對(duì)血管性癡呆大鼠海馬CAl區(qū)皮層錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響(光鏡0. 4ΚΧ )。血管性癡呆模型組海馬CAl區(qū)三層錐體細(xì)胞排列紊亂；部分錐體細(xì)胞腫脹，并有炎細(xì)胞浸潤(rùn)，星形膠質(zhì)細(xì)胞增生；部分錐體細(xì)胞胞體變小或呈三角形，頂樹突延長(zhǎng)， 有核固縮和破裂現(xiàn)象，胞漿呈均勻嗜伊紅色；部分錐體細(xì)胞胞核變淺，基質(zhì)疏松伴微空泡形成；血管周圍有紅細(xì)胞滲出，個(gè)別可見小血管增生。高劑量無羈萜-3 β-醇明顯抑制海馬 CAl錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，細(xì)胞形態(tài)基本正常，可見典型的三層細(xì)胞排列。圖4無羈萜-3β-醇對(duì)血管性癡呆大鼠海馬CAl區(qū)皮層錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響 (電鏡UKX )。血管性癡呆模型組海馬CAl區(qū)錐體細(xì)胞胞核固縮，染色質(zhì)聚集成團(tuán)、邊集，異染色質(zhì)增多，核周可見高電子密度團(tuán)塊；線粒體腫脹，有嵴融合并出現(xiàn)空泡變性。高劑量無羈萜-3 β -醇明顯抑制海馬CAl錐體細(xì)胞胞核及細(xì)胞器損傷，細(xì)胞器形態(tài)基本正常。
具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例及試驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明的無羈萜-3 β-醇的新用途及其有益效果，但不用來限制本發(fā)明的范圍。試驗(yàn)例1 檢測(cè)無羈萜-3 β -醇對(duì)大鼠跳臺(tái)、避暗試驗(yàn)的影響。1、藥物無羈萜-3 β-醇(上?？婆d商貿(mào)有限公司)、氫化麥角堿(上海華太藥業(yè)股份有限公司)、胞二磷膽堿(蘇州天馬精細(xì)化學(xué)品股份有限公司)、高泛酸鈣(上海佳倫生物科技有限公司)、金剛烷胺(石家莊市三和藥業(yè)有限公司)、卵磷脂(廣州邦利生物科技有限公司)。2、儀器大鼠跳臺(tái)記錄系統(tǒng)(淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司)、大鼠避暗儀(淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司)。3、動(dòng)物Sprague-Dawley (SD)大鼠，6周齡、雄性、180 220g、清潔級(jí)(河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。4、實(shí)驗(yàn)分組分組(1)空白對(duì)照組健康SD大鼠20只，每天清晨空腹三蒸水灌胃(灌胃容量為10ml/kg)，連續(xù)灌胃8周；(2)血管性癡呆模型組2V0法制備血管性癡呆大鼠模型20只；(3)低劑量無羈萜-3 β -醇組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹無羈萜-3 β -醇溶液灌胃(灌胃濃度0. lmg/kg,灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周； (4)中劑量無羈萜-3 β -醇組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹無羈萜-3 β -醇溶液灌胃(灌胃濃度0. 5mg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周；(5)高劑量無羈萜-3 β -醇組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹無羈萜-3 β -醇溶液灌胃(灌胃濃度1.0mg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周；(6)氫化麥角堿組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹氫化麥角堿溶液灌胃(灌胃濃度2. Omg/kg,灌胃容量為IOml/ kg)給藥，連續(xù)灌胃8周；(7)胞二磷膽堿組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹胞二磷膽堿溶液灌胃(灌胃濃度1. Omg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周；(8)高泛酸鈣組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹高泛酸鈣溶液灌胃(灌胃濃度ang/kg， 灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周；(9)金剛烷胺組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹金剛烷胺溶液灌胃(灌胃濃度0. 5mg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃 8周；(10)卵磷脂組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹卵磷脂溶液灌胃(灌胃濃度 0. ang/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周。5、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容大鼠跳臺(tái)試驗(yàn)、大鼠避暗試驗(yàn)。6、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(^ 士 s)表示。組間差異比較用ANOVA 及Newman-Student多重比較；t檢驗(yàn)分析，由SPSS 13. O統(tǒng)計(jì)軟件完成，雙側(cè)P < 0. 05認(rèn)為差異有顯著性。7、結(jié)果
7. 1 無羈萜-3 β-醇對(duì)血管性癡呆大鼠跳臺(tái)試驗(yàn)的影響試驗(yàn)結(jié)果顯示，無羈萜-3 β -醇明顯提高血管性癡呆大鼠跳臺(tái)試驗(yàn)潛伏期、減少錯(cuò)誤次數(shù)，并且具有顯著的劑量依賴性；與氫化麥角堿、胞二磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂對(duì)照組比較，存在明顯的差異(P <0.05)。(結(jié)果見表1)
表1無羈萜-3 β-醇對(duì)血管性癡呆大鼠跳臺(tái)試驗(yàn)的影響(^ 士 s)
權(quán)利要求
1.無羈萜-3β -醇在制備抗血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無羈萜-3β -醇，其特征在于，提取于衛(wèi)矛科植物衛(wèi)矛 [Euonymus alatus (Thunb.) Sieb.]及冬青衛(wèi)矛[Euonymus japonicus Thunb.]白勺0十； 菊科植物澤蘭[Eupatorium japonicum Thunb.]的葉、莖；大戟科植物金剛綦[Euphorbia antiquorum L]及重陽(yáng)木[Bischofia polycarpa (Levi.) Airy Shaw]的蓮、葉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無羈萜-3β -醇，其特征在于，分子式=C3tlH52O,分子量 428. 73，CAS 登錄號(hào)5085-72_3，化學(xué)名稱24，25，26-Trinoro 1 eanan-3-o 1, 5，9，13-trime thyl-, (3a, 4b, 5b, 8a, 9b, 10a, 13a, 14b)-，結(jié)構(gòu)式
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血管性癡呆，其特征在于，因各種腦血管疾病引起的腦功能障礙而產(chǎn)生的獲得性智能損害綜合癥，以記憶、認(rèn)知功能缺損為主，可伴有言語、運(yùn)動(dòng)、視空間及人格障礙為主要臨床表現(xiàn)的一組神智異常癥候群。
全文摘要
本發(fā)明提供了天然產(chǎn)物無羈萜-3β-醇在制備抗血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明經(jīng)在體動(dòng)物試驗(yàn)驗(yàn)證，無羈萜-3β-醇可以有效抑制血管性癡呆大鼠神經(jīng)組織形態(tài)學(xué)改變，提高血管性癡呆大鼠的認(rèn)知、學(xué)習(xí)和記憶能力，明顯減輕血管性癡呆癥狀。
文檔編號(hào)A61P25/18GK102397279SQ20111036633
公開日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2011年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月18日
發(fā)明者孫瑞利, 尹雅玲, 張群妹, 朱利紅, 李嘉, 李建華, 李鵬, 楊麗霞, 楊靜, 段樹鵬, 王倩倩, 王國(guó)紅, 白瑞櫻, 趙蘊(yùn), 陳麗, 高建輝 申請(qǐng)人:新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院