專利名稱：治療腫瘤疾病組合物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及作為HIV天冬氨酸蛋白酶(如HIV-1或HIV-2蛋白酶)抑制劑的所述化合物及基鹽，尤其是其可藥用鹽在治療腫瘤和制備用于預(yù)防、尤其是治療腫瘤的藥物組合物中的用途，還涉及使用這些化合物及相應(yīng)的藥物組合物治療腫瘤的方法。
下列文獻(xiàn)尤其描述了上述HIV天冬氨酸蛋白酶，例如由HIV-1或HIV-2得到的HIV-1或HIV-2蛋白酶的抑制劑及其鹽和其制備，據(jù)信HIV-1或HIV-2被認(rèn)為且被描述為引起AIDS的致病菌，這些文獻(xiàn)是本發(fā)明申請者的歐洲專利申請，申請?zhí)?2810678.0，公開號EP0532466(1993年3月17日公開)；NewJersey的Merck&Co.，Inc.的歐洲專利申請，申請?zhí)?9303539.4，公開號EP0337714(1989年10月18日公開)；NewJersey的Merck&Co.，Inc.的歐洲專利申請，申請?zhí)?9308555.5，公開號EP0356223(1990年2月28日公開)；NewJersey的Merck&Co.，Inc.的歐洲專利申請，申請?zhí)?0313848.5，公開號EP0434365(1991年6月26日公開)；本發(fā)明申請者的歐洲專利申請，申請?zhí)?1108828.4，公開號EP0459465(1991年12月4日公開)或本發(fā)明者的歐洲專利申請，申請?zhí)?9810923.6，公開號EP0374098(1990年6月20日公開)。在這些申請中沒有一個建議了本發(fā)明的用途。上述后兩份申請的英文文本對應(yīng)于南非專利ZA91/4136(1992年2月26日授權(quán))和ZA89/9558(1990年8月29日授權(quán))。上述專利申請引入本文作為參考；尤其包括其中提及的單一化合物在此引入用以描述本發(fā)明的用途。羥基酯化的化合物也是可行的，例如被低級鏈烷?；缫阴；セ?，或尤其是被低級烷氧基-低級烷氧基-低級鏈烷酰基或低級烷氧基-低級烷氧基-低級烷氧基-低級鏈烷?；セ?這些化合物可以通過游離化合物與激活的或當(dāng)即激活的低級烷氧基-低級烷氧基-低級鏈烷酸或低級烷氧基-低級烷氧基-低級烷氧基-低級鏈烷酸，如該酸的氯化物反應(yīng)來制備，所述酸的氯化物可通過如在二氯甲烷中用1-氯-N，N-2-三甲基-1-丙烯胺，在約0℃下制得，然后在吡啶存在下，酰氯(如經(jīng)蒸發(fā)濃縮分離后的)與具有一游離羥基的相應(yīng)HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑在二噁烷中反應(yīng))。
優(yōu)選那些式I化合物，或當(dāng)有成鹽基團(tuán)存在時的這些化合物的鹽，或這些化合物的羥基保護(hù)的衍生物或其鹽， 其中R1是氫；低級烷氧羰基；雜環(huán)羰基；未取代的或被多至三個相互獨(dú)立地選自于氟、鹵代低級烷基，低級鏈烷?；?、磺基、低級烷基磺?；颓杌幕鶊F(tuán)取代的芐氧羰基；其中雜環(huán)是通過碳原子連接的雜環(huán)氧羰基；其中相連的羰基被硫羰基取代的上述羰基中的一個；雜環(huán)基磺?；坏图壨榛酋；?；或N-(雜環(huán)基-低級烷基)-N-低級烷基；-氨基羰基；B1是一個價鍵或一個N-端與R1相連且C-端在攜有R2-CH2-的碳原子上與氨基相連的α-氨基酸二價殘基，R2和R3各自獨(dú)立地是其它苯基或環(huán)己基，這些基團(tuán)是未取代的或被一至三個相互獨(dú)立地選自于羥基、低級烷氧基、鹵素、鹵代低級烷基、磺基、低級烷基磺?；?、氰基和硝基的基團(tuán)取代的，A1是連接-C=0和A2間的鍵或是一個N-端與-C=0基相連且C-端與A2相連的α-氨基酸二價殘基，A2是一個N-端與A1相連且C-端與NR4R5基相連的α-氨基酸二價殘基，或者A1與A2一起形成一個二肽的二價殘基，該殘其的中央酰胺鍵是被還原的且其N-端與-C=O基相連、C-端與NR4R5基相連，及R4和R5與相連的氮原子一起形成未取代的或取代的硫代嗎啉代或嗎啉代，本發(fā)明申請者的歐洲專利申請，申請?zhí)枮?2810678.0，公開號為EP0532466(1993年3月17日公開)的專利申請中描述了此類化合物及它們的制備方法。
本發(fā)明所用的化合物已知作為活性組份，治療由HIV引起的疾病，如AIDS。其作用方式依賴于對HIV天冬氨酸蛋白酶的抑制，HIV天冬氨酸蛋白酶由逆病毒本身在其基因組中編碼，并且它對于完整的新病毒粒子的成熟是必需的。
由于在當(dāng)今世界腫瘤是死亡的主要原因之一，因此提供治療腫瘤的方法和手段是一個長期的目標(biāo)。特別是因?yàn)榭赡艿哪[瘤疾病數(shù)量眾多和種類多樣，故不斷需要新的藥物組合物，這些組合物依靠其活性組份的效力適用于治療盡可能廣泛的腫瘤或治療十分特定的腫瘤。
根據(jù)本發(fā)明，已令人驚奇地發(fā)現(xiàn)本文上下文所述的HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑具有顯著的預(yù)防和治療腫瘤疾病(包括腫瘤遷移的形成)的活性，這可以由例如實(shí)施例部分的以實(shí)施例方式說明的動物實(shí)驗(yàn)看出。在這些動物實(shí)驗(yàn)中，對患腫瘤或因施加腫瘤細(xì)胞(例如通過移植腫瘤碎片或注射腫瘤細(xì)胞系)而導(dǎo)致患腫瘤的溫血動物，例如大鼠、荷蘭豬及特別是小鼠進(jìn)行了觀察，在試驗(yàn)動物發(fā)作腫瘤之前、同時或之后用本文上下文所述的HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑、特別是式I化合物或其鹽治療。所述HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑抑制腫瘤的生長。它們是有價值的抗腫瘤活性成份。
本文上下文提及的HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑對腫瘤、尤其是對那些入侵性腫瘤的生長和腫瘤遷移的形成，特別是對胰腺、肺、腸、卵巢或胸部腫瘤有顯著的活性。
本文上下文提及的HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑，特別是式I化合物尤其是可用于預(yù)防和治療腫瘤，還例如腫瘤遷移的形成，腫瘤遷移是形成胞質(zhì)分裂素-或激素-依賴性腫瘤，如胰腺、肺、腸、卵巢或胸部腫瘤的基礎(chǔ)。
上述HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑，尤其是式I化合物，尤其可用于雌激素-依賴性腫瘤，如胰腺、腸、胸部腫瘤，這些腫瘤表現(xiàn)為雌激素-依賴性生長及其腫瘤遷移。
上述HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑，尤其是式I化合物，更特別地可用于胸部例如腋下淋巴結(jié)的雌激素-依賴性腫瘤及其腫瘤遷移。
所述被治療的腫瘤尤其涉及那些自身不對HIV天冬氨酸蛋白酶(如HIV-1和/或HIV-2蛋白酶)的抑制應(yīng)答的腫瘤。
抑制天冬氨酸蛋白酶的實(shí)施例及相應(yīng)的測試方法可見于Jupp等人的Biochem.J.265，871～878(1990)中，同時例如依照EP0532466(見上)中所述的方法可對HIV-1蛋白酶進(jìn)行抑制。
HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑，尤其是式I化合物可以以其本身或以藥物組合物的形式，通過給溫血動物，特別是人與適宜的賦形劑或載體一起經(jīng)腸道或非胃腸道施用而使用。優(yōu)選地將它們施用于粘膜，如鼻腔、直腸或陰道粘膜，或施用于眼粘膜，或經(jīng)口或其它途徑施用，如經(jīng)皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或腹膜內(nèi)，或經(jīng)皮施用。
活性成份的劑量特別依賴于溫血動物的種類，機(jī)體的防御狀況、施用方式及腫瘤的性質(zhì)和部位。
根據(jù)本發(fā)明的HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑、尤其是式I化合物用于制備藥物組合物，該組合物含有(特別是在治療溫血動物、主要是人的腫瘤中需此處理)，藥理有效量的活性成份及顯著量的(至少一種)可藥用載體，所述載體適用于經(jīng)腸道，如經(jīng)口、或經(jīng)非胃腸道施用，并且是無機(jī)的或有機(jī)的固體或液體。
依據(jù)本發(fā)明可制備的藥物組合物是給溫血動物(人和動物)經(jīng)腸道(如經(jīng)鼻、頰、直腸或口)或經(jīng)非胃腸道(如肌內(nèi)或靜脈內(nèi))施用的組合物，該組合物只含有有效量的藥理活性成份或還含有顯著量的可藥用載體。該活性成份的劑量依賴于溫血動物的種類、體重、年齡和個體條件、個體藥代動力學(xué)數(shù)據(jù)，被治療的疾病及施用方式。
本發(fā)明還涉及用于人或動物體治療方法中的藥物組合物、其制備方法(尤其作為腫瘤治療的藥劑)及治療腫瘤、特別是上述那些腫瘤的方法。
在治療患腫瘤溫血動物的腫瘤方法范圍內(nèi)，尤其是給需此治療的溫血動物施用抗腫瘤有效量的HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑，特別是式I化合物或其可藥用鹽。在治療溫血動物腫瘤的方法中，尤其是給需此治療的溫血動物施用抗腫瘤有效量的HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑或其可藥用鹽(其中有成鹽基團(tuán)存在)。
施用于溫血動物的劑量可據(jù)種類、年齡、個體條件、施用方式及癥狀而改變，如對體重約為70Kg的人，每人每天尤其是施用約從3mg到約10g、優(yōu)選從約40mg到約4g、例如約從150mg到1.5g，優(yōu)選分為一至三個單次劑量施用，該劑量例如可以是相同的。通常，兒童接受成人劑量的一半。如果需要，治療可持續(xù)治療腫瘤和/或防止腫瘤遷移形成所需的時間。
HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑，尤其是式I化合物可單獨(dú)使用或與其它藥理有效物質(zhì)一起使用。例如它們可與下列物質(zhì)一起使用，(a)聚酰胺生物合成酶抑制劑，如鳥氨酸脫羧酶抑制劑或S-腺嘌呤核苷蛋氨酸脫羧酶抑制劑，(b)蛋白激酶C抑制劑，(c)胰蛋白激酶抑制劑，(d)細(xì)胞分裂素，(e)負(fù)性生長調(diào)節(jié)劑，(f)Aromatase抑制劑，(g)抗雌激素或(h)傳統(tǒng)的抑制細(xì)胞生長的活性成份，如阿霉素。
該藥物組合物含有約1%到約95%，優(yōu)選約20%到約90%的活性成份。依據(jù)本發(fā)明制備的藥物組合物，例如可以是單一劑量形式的，如安瓿、小瓶、栓劑、糖衣丸、片劑或膠囊。其它劑型有如軟膏劑、霜劑、糊劑、泡沫劑、酊劑、唇膏劑、滴劑、噴霧劑、分散劑等。
根據(jù)本發(fā)明，以本來已知的方式制備藥物組合物，例如，通過經(jīng)典的溶解，凍干、混合，制?；蛑聘喾椒?。
優(yōu)選使用活性成份的溶液，還有懸浮液或分散液，尤其是等滲水溶液，懸浮液或分散液，也可用例如只含有活性成份或還含有載體如甘露醇的凍干組合物，臨用前配制成這類溶液，分散液或懸浮液。該藥物組合物可以是滅菌的和/或可含有賦形劑，如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑和/或乳化劑、增溶劑、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖液，并且該組合物用本來已知的方法制備，如經(jīng)典的溶解或凍干方法。上述溶液或懸浮液中可含有提高粘性的物質(zhì)，如羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素、糊精、聚乙烯吡咯烷酮或明膠。
油性懸浮劑含有通常用于注射目的、作為油性組份的植物油，合成油或半合成油。在此尤其可以提及作為這類組份的液態(tài)脂肪酸酯，該類酯含有作為酸組份的具有8至22個、尤其是12至22個碳原子的長鏈脂肪酸，例如月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕櫚酸、十七烷酸、硬脂酸、廿烷酸、山崳酸或相應(yīng)的不飽和酸如油酸、反油酸、芥酸、巴西烯酸或亞油酸，如果需要可加入抗氧劑，如維生素E、β-胡蘿卜素或3，5-二一叔丁基-4-羥基甲苯。這些脂肪酸酯的醇組份最多具有6個碳原子，并且是一元醇或多元醇，例如是一元、二元或三元醇，如甲醇，乙醇、丙醇、丁醇或戊醇或它們的異構(gòu)體，但特別是乙二醇和丙三醇。因此提出下列脂肪酸酯的例子油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、“Labrafil M 2375”(聚氧乙烯三油酸甘油酯，Gattefosse，Paris)、“Miglycol 812”(具有C8到C12鏈長的不飽和脂肪酸三甘油酯，Hüls AG，Germany)，但尤其是植物油，如棉子油，杏仁油，橄欖油，蓖麻油、芝麻油、豆油，更尤其是花生油。
按一般方法在無菌條件下制備注射組合物；并將該組合物裝入安瓿或小瓶中并密封該容器。
口服藥物組合物可通過將活性成份與固體載體混合獲得，如果需要可將得到的混合物制粒并加工，如果需要或必須，在加入適宜的賦形劑后制成片劑、糖衣丸或膠囊，或通過優(yōu)選與磷脂制備成分散液，并將其裝入小瓶中制得。還可以將活性組份摻入塑性載體中使其以測定量擴(kuò)散或釋放。
適宜的載體尤其是填充劑，例如糖(如乳糖、葡萄糖、蔗糖(sucrose)、蔗糖(saccharose)、甘油、甘露醇或山梨醇)、纖維素制品和/或磷酸鈣(如磷酸三鈣或磷酸氫鈣)，還有粘合劑(如硅酸鋁鎂，使用的淀粉膏如玉米、小麥、大米或土豆淀粉、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、和/或聚乙烯吡咯烷酮)，和/或如果需要可有崩解劑(如上述淀粉、還有羧甲基淀粉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、藻酸或其鹽如藻酸鈉)。賦形劑主要有流動調(diào)節(jié)劑和潤滑劑，例如硅酸、滑石粉、硬脂酸或其鹽如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣，和/或聚乙二醇。使用適當(dāng)?shù)倪x擇性腸包衣來提供糖衣丸核，在此尤其使用可含有阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦的濃縮糖溶液，或在適宜有機(jī)溶劑中的包衣溶液，或者為制備腸包衣，使用適宜的纖維素制品，如鄰苯二甲酸乙基纖維素酯或鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素酯溶液。膠囊有明膠制的干填充膠囊，也有明膠和一種增塑劑如甘油或山梨醇制的軟性密封膠囊。該干填充的膠囊可含有顆粒形式的活性成份和例如填充劑如乳糖、粘結(jié)劑如淀粉、和/或滑動劑如滑石粉或硬脂酸鎂，如果需要還可有增塑劑。在軟性膠囊中的活性成份優(yōu)選溶于或懸浮于合適的油性賦形劑中如脂肪油、石蠟油或液體聚乙二醇，同樣也可加入穩(wěn)定劑和/或抗菌劑。例如為了用于區(qū)分目的或表明不同劑量的活性成份，可將染料或色素加到片劑或糖衣丸包衣中或加到膠囊套中，或加入調(diào)味劑或甜味劑。
特別優(yōu)選的藥物組合物是磷脂穩(wěn)定的活性成份分散液，優(yōu)選口服施用，該分散液含有a)式(A)的一種或幾種磷脂 其中RA是C10-20的?；琑B是氫或C10-20的?；琑a、Rb和Rc為氫或C1-4的烷基且n為2到4的整數(shù)，如果需要含有b)一種或幾種其它的磷脂c)該活性成份和d)一種可藥用液體載體，且如果需要還可有其它賦形劑和/或防腐劑。
制備這些分散液的方法如下將組份a)和c)或a)、b)和c)的溶液或懸浮液(優(yōu)選a)和b)的重量比例為從201到15，更優(yōu)選從51到11)轉(zhuǎn)入用水稀釋的分散液中，然后通過例如離心、凝膠過濾、超濾或特別是透析(如切向透析、優(yōu)選在水中)除去有機(jī)溶劑，之后優(yōu)選在加入賦形劑或防腐劑后，以及如果需要，通過加入可藥用緩沖物質(zhì)如磷酸鹽或有機(jī)酸(純的或溶于水中)如乙酸或檸檬酸來建立可接受的pH值(優(yōu)選pH從3到6，如pH4～5)，優(yōu)選將該分散液濃縮(除非它已具有合適的活性成份濃度)到活性成份濃度為2至30mg/ml、更優(yōu)選從10至20mg/ml，根據(jù)上述最后提到的方法，優(yōu)選通過超濾(如果使用進(jìn)行切向透析和超濾的設(shè)備)來除去有機(jī)溶劑以達(dá)到優(yōu)選的濃度。
按照這一方法制備的磷脂穩(wěn)定的分散液在室溫至少可穩(wěn)定數(shù)小時，無論組份的配比如何，它都可以再恢復(fù)，并且它是毒理上可接受的，因而它特別適于給人口服。
所得分散液的顆粒大小是可以變化的，優(yōu)選從約1.0×10-8到約1.0×10-5m，更優(yōu)選約10-7到約2×10-6m。
根據(jù)Eur.J.ofBiochem.79，11-21(1977)上給出的IPC-IUB生化命名委員會(CBN)建議的“脂類的命名”對式A磷脂進(jìn)行了命名并對碳原子標(biāo)出順序。
在式A的磷脂中，定義為C10-20?；腞A和RB優(yōu)選為具有偶數(shù)個碳原子的直鏈C10-20鏈烷?；熬哂幸粋€雙鍵和偶數(shù)個碳原子的直鏈C10-20鏈烯?；?。
具有偶數(shù)個碳原子的直鏈C10-20鏈烷?；鶠槔缯轷；⒄耐轷；?、正十六烷酰基或正十八烷?；?。
具有一個雙鍵和偶數(shù)個碳原子的直鏈C10-20鏈烯?；抢?-順、6-反，9-順或9-反-十二烯?；?、-十四烯?；?、-十六烯酰基、-十八烯酰基或-二十烯?；貏e是9-順-十八烯?；?油?；?。
式A的磷脂中，n為2到4的整數(shù)，優(yōu)選2。式中的-(CnH2n)基團(tuán)是未分枝或分枝的亞烷基，如1，1-亞乙基、1，1-、1，2-或1，3-亞丙基或者1，2-、1，3-或1，4-亞丁基。優(yōu)選1，2-亞乙基(n=2)。
式A的磷脂是例如天然生成的腦磷脂(其中Ra、Rb和Rc為氫)或天然生成的卵磷脂(其中Ra、Rb和Rc為甲基)，例如從大豆、牛腦、牛肝或雞蛋中得到的、有著不同的或相同的酰基基團(tuán)RA和RB的腦磷脂或卵磷脂或其混合物。
優(yōu)選合成的、基本上純的具有不同或相同的?；鶊F(tuán)RA和RB的式A磷脂。
術(shù)語“合成的”式A磷脂定義為關(guān)于RA和RB具有一致組成的磷脂。這類合成的磷脂優(yōu)選下面定義的卵磷脂和腦磷脂，這類磷脂的?；鶊F(tuán)RA和RB有確定的結(jié)構(gòu)并由純度高于約95%的確定的脂肪酸衍生得到。RA和RB可以相同或不同且可以是不飽和的或飽和的。RA優(yōu)選為飽和的如正十六烷酰基，而RB則優(yōu)選不飽和的如9-順-十八烯?；?油酰基)。
術(shù)語“天然生成”的式A磷脂定義為關(guān)于RA和RB沒有一致組成的磷脂。這類天然磷脂同樣是卵磷脂和腦磷脂，它們的?；鶊F(tuán)RA和RB的結(jié)構(gòu)是不可確定的，并且它們從天然生成的脂肪酸混合物衍生而來。
術(shù)語“基本上純的”磷脂是指純度高于70%(重量)的式A磷脂，該純度可通過適當(dāng)?shù)臏y定方法，例如紙層析來確定。
特別優(yōu)選的是基本上純的式A磷脂，其中RA是具有偶數(shù)個碳原子的直鏈C10-20鏈烷?；襌B是具有一個雙鍵和偶數(shù)個碳原子的直鏈C10-20鏈烯?；?。Ra、Rb和Rc為甲基且n是2。
在一種特別優(yōu)選的式A磷脂中，RA是正十二烷?；⒄耐轷；⒄轷；蛘送轷；襌B是9-順-十二烯?；?、9-順-十四烯?；?-順-十六烯?；?、9-順-十八烯酰基或9-順-二十烯?；?。Ra、Rb、Rc是甲基且n是2。
一種更特別優(yōu)選的式A磷脂是合成的1-正十六烷?；?2-(9-順-十八烯酰基)-3-烯-卵磷脂，純度高于95%。
優(yōu)選的天然的、基本上純的式A磷脂尤其是從大豆或雞蛋中得到的卵磷脂(L-α-卵磷脂)。
式A磷脂中的酰基也常使用括號中給出的名稱9-順-十二烯?；?樟烯?；?，9-順-十四烯?；?肉豆蔻腦?；?，9-順-十六烯?；?棕櫚油?；?。6-順-十八烯?；?petroseloyl)，6-反-十八烯?；?petroselaidoyl)，9-順-十八烯酰基(油?；?，9-反-十八烯?；?反油?；?，11-順-十八烯?；?vaccenoyl)，9-順-二十烯?；?gadoleoyl)，正-十二烷?；?月桂酰基)，正-十四烷?；?肉豆蔻酰基)，正-十六烷?；?棕櫚?；?，正-十八烷?；?硬脂?；?，正-廿烷?；?花生酰基)。
其它優(yōu)選的磷脂是磷脂酸(3-烯-磷脂酸)與上述提到的酰基基團(tuán)的酯，如磷脂酰絲氨酸和磷脂酰乙醇胺。
微溶的活性成份也可以以水溶的可藥用鹽(如上定義的)形式存在。
該液體載體d)含有組份a)、b)和c)或a)和c)，成為脂質(zhì)體，它在從數(shù)天到數(shù)周的時期內(nèi)沒有固體物或固體聚集(如膠束)，含有上述組份的再生形式和液體也可施用，優(yōu)選口服，如果需要可經(jīng)過濾后施用。
該液體載體d)可含有可藥用的例如水溶性無毒賦形劑(例如適于產(chǎn)生等滲條件的水溶性賦形劑)，如離子添加劑(例如氯化鈉)；或非離子添加劑(結(jié)構(gòu)模型)(如山梨醇、甘露醇或葡萄糖)，或脂質(zhì)體分散液的水溶性穩(wěn)定劑，如乳糖、果糖或蔗糖。
除水溶性賦形劑外，該載體液體還含有乳化劑，濕潤劑或表面活性劑(它們用于液體藥物制劑中)，特別是乳化劑如油酸，脂肪酸多元醇酯型的非離子表面活性劑如脫水山梨醇的單月桂酸酯、單油酸酯、單硬脂酸酯或單棕櫚酸酯，脫水山梨醇的三硬脂酸酯或三油酸酯，脂肪酸多元醇酯的聚氧乙烯加合物如聚氧乙烯脫水山梨醇的單月桂酸酯、單油酸酯、單硬脂酸酯、單棕櫚酸酯、三硬脂酸酯或三油酸酯，聚乙二醇脂肪酸酯如聚氧乙基(polyoxyethyl)硬脂酸酯、聚乙二醇-400-硬脂酸酯，聚乙二醇-2000-硬脂酸酯，尤其是Pluronic 型或Synperonic 型(ICI)的環(huán)氧乙烷/環(huán)氧丙烷嵌段聚合物(Wyandotte Chem.Corp.)。
優(yōu)選的防腐劑是例如抗氧劑(如抗壞血酸)，或抗菌劑(如山梨酸或苯甲酸)。
軟膏劑是水包油乳液，它含有70%，但優(yōu)選20-50%的水或水相。適宜的油相主要是烴類，例如Vaseline ，石蠟油或硬石蠟，以改善結(jié)合水能力，它們優(yōu)選含有適宜的羥基化合物，例如脂肪醇或其酯，如鯨醇或羊毛蠟醇(如羊毛蠟)。乳化劑是相應(yīng)的親脂性物質(zhì)，例如脫水山梨醇脂肪酸酯(Spans )，如脫水山梨醇油酸酯和/或脫水山梨醇異硬脂酸酯。加到水相中的添加劑是例如濕潤劑，如多元醇(例如甘油、丙二醇、山梨醇和/或聚乙二醇)，或防腐劑和香料。
油性軟膏劑是無水的，它含有的基質(zhì)主要是烴類，例如石蠟，Vasline 或石蠟油，還有天然的或部分合成的脂肪，例如可可脂肪酸三甘油酯，或優(yōu)選硬化油(如氫化的花生油或蓖麻油)，還有脂肪酸的部分甘油酯，例如甘油單和/或二硬脂酸酯，并且還有例如增加水吸收性的脂肪醇，與軟膏劑有關(guān)的所提及的乳化劑和/或添加劑。
霜劑是水包油的乳液，它含有大于50%的水。尤其使用脂肪醇作油基，如月桂醇、鯨蠟醇或硬脂醇，脂肪酸如棕櫚酸或硬脂酸，液態(tài)到固態(tài)蠟如肉豆蔻酸異丙酯、羊毛蠟或蜂蠟，和/或烴類，例如Vasline (凡士林)或石蠟油。適宜的乳化劑是主要有親水性的表面活性物質(zhì)，如相應(yīng)的非離子乳化劑，例如多元醇的脂肪酸酯或其環(huán)氧乙烷加合物，如聚甘油脂肪酸酯或聚乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯(Tweens )，且還有聚氧乙烯脂肪醇酯或脂肪酸酯，或相應(yīng)的離子乳化劑，例如脂肪醇硫酸的堿金屬鹽，如月桂基硫酸鈉，鯨蠟基硫酸鈉或硬脂酰硫酸鈉，它們常在有脂肪醇如鯨蠟醇或硬脂醇存在下使用。加到水相中的添加劑特別是那些能減少霜劑發(fā)干的試劑，例如多元醇、如甘油、山梨醇、丙二醇和/或聚乙二醇，且還有防腐劑和香料。
膏劑為霜劑和軟膏，它們有吸收分泌的粉末組份，例如金屬氧化物，如氧化鈦或氧化鋅，還有滑石粉和/或硅酸鋁，這些組份的目的是使存在的潮濕和分泌凝結(jié)。
泡沫劑是從壓力容器中施用的，該劑是氣溶膠形式的液體水包油乳液，其中鹵代烴作推進(jìn)劑，如氯-氟-低級烷烴(如二氯二氟甲烷和二氯四氟乙烷)，或優(yōu)選沒有鹵代的氣態(tài)烴，空氣，N2O或二氧化碳。特別使用那些上面與軟膏劑和霜劑有關(guān)部分中所用的那些成分作為油相，且那里述及的添加劑也用于油相中。
酊劑和溶液一般有含水-醇型基質(zhì)，基質(zhì)中特別加入多元醇(例如甘油、乙二醇和/或聚乙二醇)，減少蒸發(fā)的濕潤劑及貯存油脂的物質(zhì)(例如低分子量聚乙二醇的脂肪酸酯)，也就是說溶于含水混合物中的親脂性物質(zhì)，該物質(zhì)代替乙醇除掉皮膚上的油脂物質(zhì)，而且，如果需要，可加入其它賦形劑和添加劑。
特別適用的是實(shí)施例中描述的藥物組合物。
上面使用的定義式I化合物的術(shù)語在本文中優(yōu)選有下列含義除非有相反的定義說明，在本發(fā)明的描述中，用于定義基團(tuán)(如低級烷基、低級烷氧羰基等)的術(shù)語“低級”意為；所定義的基團(tuán)含有多達(dá)并包括7個、且優(yōu)選多達(dá)并包括4個碳原子。
取代基R1、B1、R2、R3、A1和/或A2及由R4和R5與相連的氮原子形成的取代硫代嗎啉代或嗎啉代中含有的不對稱碳原子可以是(R)-、(S)-或(R，S)-構(gòu)型的。因此，本發(fā)明的化合物可以是異構(gòu)體混合物或單一異構(gòu)體形式的，尤其是非對映異構(gòu)混合物、對映體對或單一對映體形式的。
用于描述本發(fā)明的一般術(shù)語和名稱優(yōu)選具有下列含義，在定義的各種范圍內(nèi)使用任何結(jié)合的或本文所述基團(tuán)中的個別基團(tuán)來代替一般的定義是可能的低級烷氧羰基R1優(yōu)選含有支鏈低級烷基，特別是仲一或叔-低級烷基，例如丁氧羰基，如叔丁氧羰基或異丁氧羰基。特別優(yōu)選叔丁氧羰基。
雜環(huán)羰基R1尤其含有含1至3個雜原子的五或六元雜環(huán)，這些雜原子獨(dú)立地選自S、O或N；該雜環(huán)是不飽和的或完全或部分飽和的且是單個或多至三個苯并稠合的、環(huán)戊二烯并-、環(huán)己二烯并(cyclohexa-)，或環(huán)庚三烯并稠合的，所述稠環(huán)含有另一個氮原子為雜原子也是可行的，例如選自下述的雜環(huán)基團(tuán)吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、β-卡啉基、及這些基團(tuán)的苯并稠合的，環(huán)戊二烯并-，環(huán)己二烯并-或環(huán)庚三烯并稠合衍生物，它們可以是完全或部分飽和的，但優(yōu)選部分飽和的，或選自吡啶基羰基例如吡啶基-3-羰基、嗎啉基羰基例如嗎啉基羰基和苯并呋喃?；?-苯并呋喃酰基，并且還可選擇性地或另外是四氫異喹啉基羰基，如四氫異喹啉基-3-羰基，優(yōu)選四氫異喹啉基-3-羰基。
芐氧羰基R1是未取代的或被相互獨(dú)立地選自下列基團(tuán)的多至三個基團(tuán)取代氟、鹵代低級烷基如三氟甲基或五氟乙基，低級烷酰基如乙?；⒈；⒍□；蛐挛祯；?，磺基，低級烷基磺?；缂谆酋；⒁一酋；?、正丙基磺?；虍惐酋；颓杌?。芐氧羰基優(yōu)選未取代的或在苯環(huán)上鄰位、間位或?qū)ξ槐幌铝腥〈〈模貏e是對位取代的，所述取代基選自氟、三氟甲基、磺基、甲基磺?；⒁一酋；颓杌缙S氧羰基、氟代苯甲氧羰基(如對氟代苯甲氧羰基)、三氟甲基苯基甲氧羰基(如對三氟甲基苯基甲氧羰基)、甲磺酰苯基甲氧羰基(如對甲基磺酰苯基甲氧羰基)或氰苯基甲氧羰基(如對氰苯基甲氧羰基)。
雜環(huán)氧羰基R1尤其包括含有1至3個雜原子的五或六元雜環(huán)，這些雜原子獨(dú)立地選自S、O或N，該雜環(huán)是不飽和的或完全或部分飽和的，且是單個或多至三個苯并稠合的、環(huán)戊二烯并-、環(huán)己二烯并-或環(huán)庚三烯并-稠合的，所述稠環(huán)含有另一個氮原子為雜原子也是可行的，例如選自下述的雜環(huán)基團(tuán)吡咯基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、吡嗪基、嘧啶基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、β-卡啉基及這些基團(tuán)的苯并稠合的、環(huán)戊二烯并-環(huán)己二烯并-或環(huán)庚三烯并-稠合衍生物，它們也可以是完全或部分飽和的，通過一環(huán)上碳原子與氧羰基的氧相連的優(yōu)選雜環(huán)基團(tuán)選自吡咯基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、吡嗪基、嘧啶基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、β卡啉基及這些基團(tuán)的全部或部分飽和的衍生物，如這些基團(tuán)的部分飽和衍生物或吲哚-3-基-氧羰基、苯并噻唑-6-基-氧羰基或喹啉-8-基-氧羰基。在尤其特別優(yōu)選的變化的R1定義中，取代基雜環(huán)氧羰基定義下的基團(tuán)并不包括在定義的全部范圍內(nèi)。
在所述的基團(tuán)中，連接的羰基基團(tuán)被硫羰基基團(tuán)取代是可行的。優(yōu)選羰基基團(tuán)。
低級烷基磺?；鶅?yōu)選甲基磺?；⒁一酋；?、正丙基磺酰基或異丙基磺?；?。其中R1是低級烷基磺?；沂Ｓ嗟幕鶊F(tuán)如前所定義的式I化合物，式I化合物的定義中刪除，或者它們是特別優(yōu)選的。
雜環(huán)磺酰基優(yōu)選含有對雜環(huán)羰基R1所述的一個雜環(huán)，它是未取代的或被低級烷基，如甲基或乙基取代，優(yōu)選的雜環(huán)含有至少一個與磺酰基中的硫原子相連的氮原子，特別是哌啶子基磺?；蜻哙?1-基-磺?；?、吡咯烷-1-基-磺?；?、咪唑烷-1-基-磺?；?、嘧啶-1-基-磺?；?、喹啉-1-基磺?；?、嗎啉代磺酰基或硫代嗎啉代磺?；貏e優(yōu)選的硫代嗎啉代磺?；騿徇酋；?它們是未取代的或被低級烷基，如甲基在不與磺?；蛟酉噙B的氮原子上取代。從定義的式I化合物中可刪除其中R1是雜環(huán)磺酰基且剩余基團(tuán)如前所定義的式I化合物，或者它們是特別優(yōu)選的。
N-(雜環(huán)-低級烷基)-N-低級烷基-氨基羰基R1優(yōu)選含有對雜環(huán)羰基R1所述的一個雜環(huán)，特別是吡啶基(如2-、3-或4-吡啶基)、吡嗪基、嘧啶基、嗎啉基(如嗎啉代)、硫代嗎啉基(如硫嗎啉代)，或喹啉基(如2-或3-喹啉基)，并且特別優(yōu)選的是N-(雜環(huán)甲基)-N-甲基-氨基羰基，例如N-(吡啶基甲基)-N-甲基-氨基羰基(如N-(2-吡啶基甲基)-N-甲基氨基羰基)。從定義的式I化合物中可刪除其中R1是N-(雜環(huán)-低級烷基)-N-低級烷基-氨基羰基且剩余基團(tuán)如前所定義的式I化合物，或者它們是特別優(yōu)選的。
N-端與R1相連且C-端在攜有R2-CH2-的碳原子上與氨基相連的α-氨基酸的二價殘基B1優(yōu)選選自甘氨酸(H-Gly-OH)、丙氨酸(H-Ala-OH)、纈氨酸(H-Val-OH)、正纈氨酸(α-氨基戊酸)、亮氨酸(H-Leu-OH)、異亮氨酸(H-Ile-OH)、正亮氨酸(α-氨基己酸，H-Nle-OH)、絲氨酸(H-Ser-OH)、高絲氨酸(α-氨基-γ-羥基丁酸)蘇氨酸(H-Thr-OH)、甲硫氨酸(H-Met-OH)、半胱氨酸(H-Cys-OH)、脯氨酸(H-Pro-OH)、反-3-和反-4-羥基脯氨酸、苯丙氨酸(H-Phe-OH)、對氟苯丙氨酸(H-(p-F-Phe)-OH)、酪氨酸(H-Tyr-OH)、對甲氧基-苯丙氨酸(H-(P-CH3O-Phe)-OH)、4-氨基苯丙氨酸、4-氯代苯丙氨酸、4-羧基苯丙氨酸、β-苯基絲氨酸(β-羥基苯丙氨酸)、苯基甘氨酸、α-荼基丙氨酸(H-Nal-OH)、環(huán)己基丙胺酸(H-Cha-OH)、環(huán)己基甘氨酸、色氨酸(H-Trp-OH)、二氫吲哚-2-羧酸、1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、氨基丙二酸、氨基丙二酸單酰胺、天冬氨酸(H-Asp-OH)、天冬酰胺(H-Asn-OH)、谷氨酸(H-Glu-OH)、谷氨酰胺(H-Gln-OH)、組氨酸(H-His-OH)、精氨酸(H-Arg-OH)、賴氨酸(H-Lys-OH)、δ-羥基賴氨酸、鳥氨酸(α，δ-二氨基戊酸)、α，γ-二氨基丁酸和α，β-二氨酸丙酸，或選擇地且此外還可以是4-氰基-苯丙氨酸(H-(p-CN-Phe)-OH)，尤其優(yōu)選疏水性的氨基酸基團(tuán)，如脯氨酸、苯丙氨酸、對氟苯丙氨酸、對甲氧基苯丙氨酸、酪氨酸、苯基甘氨酸、α-荼基丙氨酸、環(huán)己基丙氨酸、環(huán)己基甘氨酸或脂族α-氨基酸(選自甘氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、丙氨酸、亮氨酸、正亮氨酸和異亮氨酸，特別是纈氨酸，所述每種氨基酸是D-、L-或(D、L)-型的，優(yōu)選L-型且該酸尤其與R1基相連，該R1基選自低級烷氧羰基如叔丁氧羰基，和雜環(huán)羰基如嗎啉代羰基。
在式I中，當(dāng)B1為一個鍵時，R1直接與氨基氮原子相連，該氮原子與攜有R2-CH2-基的碳原子相連。
苯基或環(huán)己基R2和R3是未取代的或被多至三個相互獨(dú)立地選自下述的基團(tuán)取代羥基，低級烷氧基(如甲氧基或乙氧基)，鹵素(如氟)，鹵代低級烷基(如三氟甲基)，磺基，低級烷基磺酰基(如甲基-或乙基-磺?；?，氰基和硝基，優(yōu)選被這些基團(tuán)中的一個或二個取代，特別是被選自下述的基團(tuán)取代羥基、甲氧基、氟、三氟甲基、磺基、低級烷基磺?；?如甲基-或乙基-磺?；?和氰基，苯基特別優(yōu)選被氟和氰基取代，而環(huán)己基特別優(yōu)選被氟、三氟甲基、磺基和低級烷基磺基，更優(yōu)選被氟取代；所述的取代基連于苯或環(huán)己基環(huán)的2-，3-或4-位，特別是連于4-位，例如在苯基、環(huán)己基中，為4-氟-或4-氰基-苯基或4-氟環(huán)己基，尤其是4-氰基苯基或4-氟苯基。
特別優(yōu)選的是R2和R3的如下結(jié)合其中R2和R3基中至少一個基團(tuán)被下述的一個或多至三個基團(tuán)取代，這些基團(tuán)選自氫，特別是氟、鹵代低級烷基(尤其是三氟甲基)、磺基、低級烷基磺?；?尤其是甲基或乙基磺?；?、氰基和硝基，一個取代基則特別優(yōu)選氟和氰基。
更優(yōu)選的是R2選自苯基、4-羥基苯基、4-甲氧苯基、4-氟苯基、環(huán)己基和4-三氟甲基苯基，而R3則選自苯基、4-羥基苯基、4-甲氧苯基、環(huán)己基、4-氟苯基、4-三氟甲基苯基和4-氰基苯基。
更特別優(yōu)選的R2選自苯基、4-氟苯基和環(huán)己基，而R3則選自苯基、環(huán)己基、4-氟苯基、4-甲氧基苯基和4-氰基苯基。
所給出的最優(yōu)選的結(jié)合是R2為苯基和R3為苯基；R2為環(huán)己基和R3為4-氰基苯基；R2為環(huán)己基和R3為4-氰苯基；及R2和R3均為一個環(huán)己基?？蛇x擇地或此外給出的優(yōu)選的結(jié)合還有R2為苯基和R3為4-氟苯基；R2為苯基和R3為4-氰基苯基；R2為4-氟苯基和R3為4-氟苯基；R2為4-氟苯基和R3為4-三氟甲基苯基；R2為4-三氟甲基苯基和R3為苯基；R2為4-三氟甲基苯基和R3為4-氟苯基；R2為4-三氟甲基苯基和R3為4-三氟甲基苯基；R2為羥基苯基和R3為苯基；R2為苯基和R3為羥基苯基；R2為苯基和R3為4-甲氧基苯基；R2為羥基苯基和R3為羥基苯基；及R2為環(huán)己基和R3為4-甲氧基苯基。
羥基基團(tuán)，特別是式I化合物中在攜有R2-CH2-基的碳原子鄰接的碳原子上的羥基可以是游離的或被保護(hù)形式的，特別是游離的或以生理上可裂解的酯的形式保護(hù)的，例如以低級烷酰氧基(如乙酰氧基)形式保護(hù)的。上述羥基優(yōu)選游離形式的。
N-端與-C=0基相連且C-端與A2相連的α-氨基酸的二價殘基是例如上面對B2所述的一個α-氨基酸，它們可以是(D)-、(L)-或(D，L)一型的，優(yōu)選是(D)-或(L)-型，尤其是(L)-型。優(yōu)選的是疏水性α-氨基酸，特別是對B1所述的脂族疏水性α-氨基酸，例如甘氨酸、纈氨酸或異亮氨酸。所述α-氨基酸中與A2相連的羧基是未還原的或被還原的，特別是被還原成一個亞甲基，如在所述的疏水性α-氨基酸中，例如在還原的氨基酸殘基Gly(還原)、Val(還原)、Ile(還原)，尤其是在Val(還原)中，尾基(還原)表明相應(yīng)氨基酸殘基的羧基還原成亞甲基。
當(dāng)A1為一個鍵時，A2直接與攜有R3-CH2-基的碳原子上的羧基相連。
N-端與A1相連且C-端與NR4R5基團(tuán)相連的α-氨基酸二價殘基，例如上面對B1所述的α-氨基酸，這些氨基酸可以是(D)-、(L)-或(D，L)-型的，優(yōu)選(D)-或(L)-型的，特別是(L)-型的。優(yōu)選是的對B1所述的疏水性α-氨基酸，如甘氨酸，纈氨酸、苯丙氨酸，對氟苯丙氨酸、酪氨酸、對甲氧基苯丙氨酸、苯基甘氨酸、α-荼基丙氨酸、環(huán)己基丙氨酸或環(huán)己基甘氨酸，優(yōu)選甘氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、對氟苯丙氨酸、對甲氧基苯丙氨酸或環(huán)己基丙氨酸，所述殘基是(D)-或(L)-型的，但優(yōu)選(L)-型的(除苯丙氨酸優(yōu)選(D)-或(L)-型外。)一個由A1和A2形成的，中央肽鍵被還原且N-端與-C=0基相連、C-端與NR4R5基團(tuán)相連的二肽二價殘基優(yōu)選由兩個上述疏水性α-氨基酸組成，特別是由選自Gly(還原)、Val(還原)和Ile(還原)的N-端氨基殘基及選自甘氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、對甲氧基苯丙氨酸、環(huán)己基丙氨酸和對氟苯丙氨酸的C-端氨基酸組成。
特別優(yōu)選A1和A2一起形成一個二肽的二價殘基，該殘基分子式為Val-Phe，Ile-Phe，Val-Cha，Ile-Cha，Val-Gly，Val-(p-F-Phe)，Val-(p-CH3O-Phe)，Gly-(p-F-Phe)；且可選擇的或另外的二肽殘基分子式為Val-Tyr，Ile-Tyr，Gly-Tyr，Ile-Gly或Val-Val；其中的氨基酸為(D)-或(L)-型，優(yōu)選(L)-型(除(L)-Val-Phe中的Phe是(L)-或(D)-型外)，或者是其具有還原的中央酰胺的衍生物，例如分子式為Val(還原)-Phe，其N-端與-C=0基相連且C-端與NR4R5基相連。
本發(fā)明的優(yōu)選形式涉及式Ⅰ化合物，其中B1為上述的一種α-氨基酸二價殘基，基團(tuán)A1和A2中的一個為一個鍵且另一個為上述的一種α-氨基酸；或者涉及這樣的式Ⅰ化合物，其中B1是一個鍵，A1和A2各自為一個上述的α-氨基酸二價殘基或A1和A2一起形成一個上述的中央酰胺鍵還原的二肽二價殘基。
由R4和R5與相連氮原子一起形成的硫代嗎啉代或嗎啉代是未取代的或在一個或多個碳原子上被取代，優(yōu)選在一個碳原子上被取代，取代基為低級烷基(如乙基、丙基、丁基、異丁基或叔丁基)、苯基-或荼基-低級烷基(如芐基、1-或2-荼甲基或芐基-1-或芐基-2-乙基，特別是苯基-1-或苯基-2-乙基)、羥基、低級烷氧基(如甲氧基、乙氧基或叔丁氧基)、氨基、低級烷基氨基(如甲氨基或乙氨基)、或二-低級烷基氨基(如二甲氨基或二乙氨基)、低級烷?；?如乙酰基或丙?；?、苯基-或荼基-低級烷酰基(如芐基乙?；?-或2-荼基乙?；?、羧基、低級烷氧羰基(如異丙氧羰基或叔丁氧羰基)、苯基-、荼基-或芴基-低級烷氧羰基(如芐氧羰基、1-或2-荼基甲氧羰基或9-芴基甲氧羰基)、氨基甲?；?、一-或二-低級烷基氨基甲?；?如二甲基氨基甲?；?、一-或二-羥基-低級烷基氨基甲酰基(如二羥基甲基氨基甲?；?、磺基、低級烷基磺酰基(如甲基磺?；蛞一酋；?、苯基-或荼基-磺?；?其中芐基可被低級烷基如甲基或乙基取代，例如苯基磺?；蚣妆交酋；?、氨磺?；Ⅺu素(如氟或氯)、氰基、硝基和/或氧代。
更特別優(yōu)選R4和R5與相連氮原子一起形成未取代的硫代嗎啉代或嗎啉代，尤其是未取代的嗎啉代。
HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑，特別是式I化合物的鹽主要是酸加成鹽，與堿形成的鹽或當(dāng)有數(shù)種成鹽基團(tuán)存在時，也可選擇性地為混合鹽或內(nèi)鹽。
特別優(yōu)選的鹽是可藥用的無毒性鹽，尤其是式I化合物的可藥用無毒性鹽。
這類鹽的形成，例如是通過具有酸性基團(tuán)(如羧基或磺基基團(tuán))的HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑，特別是式I化合物與適宜的堿形成的這類鹽，例如由元素周期表中的Ⅰa、Ⅰb、Ⅱa和Ⅱb族金屬衍生的無毒金屬鹽，如特別適宜的堿金屬(如鋰、鈉或鉀鹽)或堿土金屬鹽(如鎂或鈣鹽)，還有鋅鹽或銨鹽，以及那些與有機(jī)胺形成的鹽(例如與未取代或羥基取代的一、二或三烷基胺、尤其是一、二或三低基烷基胺形成的鹽)，或與季胺化合物形成的鹽，如與N-甲基-N-乙基胺、二乙胺、三乙胺、一、二、或三-(2-羥基-低級烷基)-胺如一、二或三-(2-羥乙基)-胺，2-羥基-叔丁基胺或三(羥甲基)甲胺、N，N-二低級烷基-N-(羥基-低級烷基)-胺(如N，N-二甲基-N-(2-羥乙基)-胺或三(2-羥乙基胺)，N-甲基-D-葡糖胺或季胺鹽，如四丁基銨鹽形成的鹽。具有堿性基團(tuán)(如氨基)的式Ⅰ化合物可形成酸加成鹽，如與無機(jī)酸，例如氫鹵素(如氫氯酸)、硫酸或磷酸形成的鹽，或與有機(jī)羧酸，磺酸或膦酸或N-取代的氨基磺酸(例如乙酸、丙酸、乙醇酸、琥珀酸、馬來酸、羥基馬來酸、甲基馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、葡糖酸、葡糖二酸、葡糖醛酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、水楊酸、4-氨基水楊酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、embonicacid、煙酸或異煙酸)形成的鹽，還有與氨基酸如上述α-氨基酸形成的鹽，以及與甲磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、乙烷-1，2-二磺酸、苯磺酸、4-甲基苯磺酸、荼-2-磺酸、2-或3-磷酸甘油酸、葡萄糖-6-磷酸、N-環(huán)己基氨基磺酸(形成環(huán)己基氨基磺酸鹽)形成的鹽或與其它酸性有機(jī)化合物如抗壞血酸形成的鹽。具有酸性基團(tuán)和堿性基團(tuán)的式I化合物也可以形成內(nèi)鹽。
在中間步驟中，如在藥物組合物制備的中間步驟中，為分離和精制的目的，也可使用藥學(xué)上不可接受的鹽。
術(shù)語“化合物”和“鹽”表示也包括單個化合物和單個鹽。
本文上下文中，凡是涉及的HIV冬氨酸蛋白酶抑制劑，特別是式I化合物(并且也稱作“活性物質(zhì)”、“化合物”等)意在包括在適宜和有利環(huán)境中，當(dāng)有成鹽基團(tuán)存在時的相應(yīng)的可藥用鹽。
本發(fā)明優(yōu)選涉及含有式I化合物的藥物組合物，或通過施用式Ⅰ化合物以及選擇的或另外的式Ⅰ化合物(其中R1為嗎啉代磺?；騈-(2-吡啶甲基)-N-甲氨基羰基且其余基團(tuán)如下定義)、有成鹽基團(tuán)存在的這些化合物的可藥用鹽進(jìn)行治療的用途或過程或方法，式I化合物中R1是氫，叔丁氧羰基，異丁氧羰基，吡啶-3-羰基，嗎啉代羰基，3-苯并呋喃?；?，1，2，3，4-四氫-異喹啉-3-羰基，被多至三個相互獨(dú)立地選自下列的基團(tuán)取代的芐氧羰基氟、鹵代低級烷基、低級鏈烷酰基、磺基、低級烷基磺?；颓杌蚱渲须s環(huán)是通過一個碳原子相連的雜環(huán)氧羰基，所述雜環(huán)選自吡咯基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、吡嗪基、嘧啶基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、β-咔啉基及這些基團(tuán)的全部或部分飽和的衍生物，或者R1的定義中是不存在雜環(huán)氧羰基的，B1為一個共價鍵或一個N-端與R1相連且C-端在攜有R2-CH2-基的碳原子上與氨基相連的α-氨基酸的二價殘基，優(yōu)選疏水性氨基酸殘基，例如脯氨酸、苯丙氨酸、對氟苯丙氨酸、苯基甘氨酸、α-荼基丙氨酸、環(huán)己基丙氨酸、環(huán)己基甘氨酸或一個選自下述的脂族α-氨基酸甘氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、丙氨酸、亮氨酸、正亮氨酸或異亮氨酸、特別是纈氨酸，所述每種α-氨基酸優(yōu)選是(D)-、(L)-或(D，L)-型的，特別是L-型的并且上述的每種氨基酸優(yōu)選被一個R1下所述選自氫、N-叔丁氧羰基和嗎啉代羰基的基團(tuán)取代，R2和R3各自獨(dú)立地是苯基或環(huán)己基，它們是未取代的或被一個或二個相互獨(dú)立地選自下述的基團(tuán)取代羥基、甲氧基、氟、磺基、低級烷基磺?；⑷谆颓杌?，正如上一般定義中所示，A1，如上一般定義所示，是一個N-端與-C=0相連，C-端與A2相連的疏水性α-氨基酸的二價殘基，A2，優(yōu)選如上一般定義所示，是一個N-端與A1相連，C-端與NR4R5基相連的疏水性α-氨基酸二價殘基，上述氨基酸殘基是(D)-或(L)-型的，優(yōu)選(L)-型(除苯丙氨酸是(L)-或(D)-型外)，特別地A1與A2形成一個二肽二價殘基，其分子式為Val-Phe，Ile-Phe，Ile-Cha，Ile-Gly，Val-Val，Val-Gly，Val-(p-F-Phe)，Val-Tyr，Val-(p-CH3O-Phe)或(Gly-p-F-Phe)，其中的氨基酸為(D)-或(L)-型，特別是(L)-型，除(L)-Val-Phe中的Phe為(L)-或(D)-型外；或者A1和A2形成一個二肽二價殘基，它含有兩個疏水性的α-氨基酸，優(yōu)選那些上述一般定義下的兩種氨基酸，該殘基的中央酰胺鍵被還原且其N-端與-C=0基相連，C-端與NR4R5基團(tuán)相連(如上一般定義所示)，例如具有Val(還原)-Phe分子式的殘基，并且
R4和R5與相連的氨原子一起形成硫代嗎啉代或嗎啉代，特別是嗎啉代，式I化合物中在與攜有R2-CH2-基的碳原子相鄰的碳原子上的羥基是游離形式的或被低級鏈烷?；Ｗo(hù)，特別是游離形式的；且在R1的定義中可刪去雜環(huán)氧羰基。
本發(fā)明特別涉及含有式I化合物的藥物組合物，或通過施用式I化合物以及有成鹽基團(tuán)存在的那些可藥用化合物進(jìn)行治療的用途過程或方法，式I化合物中R1是氫、叔丁氧羰基、異丁氧羰基、吡啶-3-羰基、嗎啉代羰基、3-苯并呋喃?；?，2，3，4-四氫-異喹啉-3-羰基，或者可選擇地或另外還是嗎啉代磺?；騈-(2-吡啶基甲基)-N-甲基-氨基羰基，B1是一個鍵或一個N-末端與R1結(jié)合且C-末端在帶有R2-CH2-的碳原子上與氨基結(jié)合的α-纈氨酸二價殘基，在后一種情況下R1優(yōu)選為氫、叔丁氧羰基或嗎啉代羰基，或者R1可選擇地或另外還是嗎啉代磺?；騈-(2-吡啶基甲基)-N-甲基-氨基羰基，R2和R3各自獨(dú)立為苯基或環(huán)己基，那些基團(tuán)是未取代的或者被一或兩個相互獨(dú)立地選自羥基、甲氧基、氟和氰基的基團(tuán)(特別是被一個所述基團(tuán))取代，優(yōu)選在4-位取代，例如4-羥苯基、4-甲氧苯基、4-氟苯基、4-氰基苯基或4-氟環(huán)己基，例如在上述一般定義中特別優(yōu)選的所述R2與R3的結(jié)合中，或者可選擇地或另外R2和R3不同，它們各自獨(dú)立為苯基或環(huán)己基，(所述苯基或環(huán)己基是未取代的或者被一個或兩個彼此獨(dú)立地選自三氟甲基、氰基和氟的基團(tuán)、特別是被一個所述基團(tuán)取代，優(yōu)選在4-位取代)，例如4-三氟甲基苯基、4-氰基苯基或4-氟苯基，A1與A2一起形成下式的二肽二價殘基Val-Phe，、Ile-Phe，、Val-Cha、Ile-Cha、Ile-Gly、Val-Val、Val-Gly、Val-(p-F-Phe)，Val-Tyr、Val-(p-CH3O-Phe)、Gly-(p-F-Phe)、或者是其具有還原中心酰胺鍵的式Val(red)-Phe的衍生物，其N-末端與-C=0基結(jié)合且C-末端與NR4R5基結(jié)合，和R4和R5與結(jié)合的氮原子一起為硫代嗎啉代或嗎啉代，特別是嗎啉代，式I化合物中在與帶有R2-CH2-基團(tuán)的碳原子相鄰的碳原子上的羥基是游離的或被乙?；Ｗo(hù)的，游離的式I化合物及其中所有其他基團(tuán)如上所定義的被護(hù)形式、或其鹽是特別優(yōu)選的。
重要的是涉及含有式I化合物的藥物組合物，或通過施用式I化合物進(jìn)行治療用途或過程或方法，式I中R1是低級烷氧羰基，特別是仲或叔低級烷氧羰基或甲氧羰基，B1是一個鍵，R2和R3是苯基，A1是纈氨酰、特別是(L)-纈氨酰，A2是苯丙氨酰、特別是(L)-苯丙氨酰，并且R4和R5與結(jié)合的氮原子一起為嗎啉代。
非常重要的是涉及含有式I化合物的藥物組合物，或通過施用式I化合物進(jìn)行治療的用途或過程或方法，式I中R1是叔丁氧羰基，B1是一個鍵，R2和R3是苯基，A1是纈氨酰、特別是(L)-纈氨酰，A2是苯丙氨酰、特別是(L)-苯丙氨酸，并且R4和R5與結(jié)合的氮原子一起為嗎啉代。
非常重要的是涉及含有式Ⅰ化合物的藥物組合物，或通過施用式Ⅰ化合物進(jìn)行治療的用途或過程或方法，式Ⅰ中R1是叔丁氧羰基，B1是一個鍵，R2是苯基，R3是4-甲氧苯基，A1是纈氨酰、特別是(L)-纈氨酰，A2是苯丙氨酰，特別是(L)-苯丙氨酰，并且R4和R5與結(jié)合的氮原子一起為嗎啉代。
非常重要的是涉及含有式I化合物的藥物組合物，或者通過施用式I化合物進(jìn)行治療的用途或過程或方法，式I中R1是叔丁氧羰基，B1是一個鍵，R2是環(huán)己基，R3是甲氧苯基，A1是纈氨酰、特別是(L)-纈氨酰，A2是苯丙氨酰、特別是(L)-苯丙氨酰，并且R4和R5與結(jié)合的氮原子一起為嗎啉代。
最重要的是涉及含有式I化合物的藥物組合物，或者通過施用實(shí)施例中所述式I化合物進(jìn)行治療的用途或過程或方法，優(yōu)選在其中所述條件下。
下列實(shí)施例用于說明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍溫度為攝氏度(℃)。如果未指明溫度，則反應(yīng)在室溫進(jìn)行。在薄層硅膠板上，通過在下列溶劑系統(tǒng)中進(jìn)行薄層層析(TLC)測定Rf值，Rf值表示所討論的該物質(zhì)的滲出增長相對于洗脫液前沿部分的滲出增長的比率。
TLC洗脫劑系統(tǒng)A己烷/乙酸乙酯11B乙酸乙酯-C己烷/乙酸乙酯41D己烷/乙酸乙酯21E己烷/乙酸乙酯31F二氯甲烷/甲醇91
G氯仿/甲醇/水/冰醋酯85131.50.5H己烷/乙酸乙酯12縮寫“Rf(B)”例如表示在B溶劑系統(tǒng)中測定的Rf值。溶劑之間的量的比例總是以體積份(v/v)表示。在柱層析所用洗脫劑系統(tǒng)的定義中，所用溶劑的量的比例也是以體積份(v/v)表示。
所用其他簡寫和縮寫的含義如下Boc叔丁氧羰基Bop苯并三唑-1-基氧-順(二甲氨基)六氟磷酸鏻brine飽和氯化鈉溶液DCC二環(huán)己基碳二亞胺DEPC焦羧酸二乙酯(diethylpyrocarboxylate)DMF二甲基甲酰胺DMSO二甲基亞砜ether乙醚FAB-MS快速原子轟擊質(zhì)譜h小時HOBt1-羥基苯并三唑IR紅外光譜min分鐘org有機(jī)m.p.熔點(diǎn)Pd/C披鈀活性炭(催化劑)TBAF四丁基氟化銨(三水合物)
TFA三氟乙酸THF四氫呋喃TLC薄層色譜Z芐氧羰基根據(jù)快速原子轟擊(FAB-MS)法得到質(zhì)譜數(shù)據(jù)。質(zhì)譜數(shù)據(jù)與質(zhì)子化的分子離子(M+H)+有關(guān)。
IR光譜數(shù)據(jù)以cm-1給出，所用溶劑在圓括弧中表示)。
用肽化學(xué)中常規(guī)的縮寫表示天然α-氨基酸的二價殘基。α-碳原子上的構(gòu)型以前綴(L)-或(D)-表示。
HPLC梯度Ⅰ20%→100%a)在b)中，經(jīng)過20分鐘。
Ⅱ20%→100%a)在b)中，經(jīng)過35分鐘。
Ⅲ20%→100%a)在b)中，經(jīng)過20分鐘+100%a)經(jīng)過8分鐘。
洗脫劑a)乙腈+0.05%TFA；洗脫劑b)水+0.05%TFA。裝有反相物質(zhì)C18-Nucleosil 柱(平均粒度5μm，用十八烷基硅烷共價衍生的硅膠，Macherey & Nagel，Düren，F(xiàn)ederal Republic of Germany)。在215nm經(jīng)UV吸收測定。保留時間(tRet)以分鐘給出。流速1ml/min。
簡寫-Phe[C]Phe-殘基是指5(S)-氨基-2(R)-芐基-4(S)-羥基-6-苯基己酸，它具有下式
相似地，殘基-Phe[C](p-CH3O)Phe-表示5(S)-氨基-4(S)-羥基-2(R)-4-甲氧芐基-6-苯基-己酸，一個2-(4-甲氧苯基)-甲基基團(tuán)取代了上式中的2-苯甲基基團(tuán)的殘基。
實(shí)施例1Boc-Phe[C]Phe-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺向330.3mg 5(S)-Boc-氨基-4(S)-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基-2(R)-苯甲基-己?；?(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺的3ml無水DMF溶液中加入247.2mg TBAF，然后在室溫攪拌該反應(yīng)混合物4.5小時。將此無色溶液倒入50ml水中，并用乙酸乙酯萃取4次。每次用25ml碳酸氫鈉溶液洗滌合并的提取液2次、用水洗滌兩次、并用鹽水洗滌1次，然后用硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑后，將殘余物從己烷中結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物。TLC Rf(B)=0.5；FAB-MS(M+H)+=729。
如下制備原料
la)N-3(S)-(Boc-氨基)-2(R，S)-羥基-4-苯基-1-三甲基甲硅烷基-丁烷用冰浴保持溫度在38℃，將24.7g鎂置于100ml無水乙醚中，然后用35分鐘向其中加入少量碘，同時往其中加入132.5ml氯甲基三甲基硅烷和300ml乙醚。然后在室溫攪拌所得反應(yīng)混合物1.5小時。冷卻至-60℃后，用40分鐘加入48.6g N-Boc-苯基-丙氨酸(制備D.J.Kempf，J.Org.Chem.51，3921(1986))的1.1升乙醚懸浮液。用90分鐘將反應(yīng)混合物加熱至室溫，然后在此溫度再攪拌90分鐘，然后倒入2升冰水和1.5升10%檸檬酸水溶液中。用500ml乙醚萃取分離的水相2次。將全部乙醚提取液用500ml 10%檸檬酸溶液洗滌，并用鹽水洗滌2次。用硫酸鈉干燥后，進(jìn)行真空濃縮，所得標(biāo)題化合物不需另外純化即可進(jìn)一步使用。TLC Rf(C)=0.6；FAB-MS(M+H)+=338。
1b)1-苯基-3-丁烯-2(S)-胺在5℃，用10分鐘，向18.8gN-3(S)-(Boc-氨基)-2-(R，S)-羥基-4-苯基-1-三甲基甲硅烷基-丁烷的420ml二氯甲烷溶液中加入35.6ml約48%的三氟化硼合乙醚溶液。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌16小時，冷卻至10℃，并用20分鐘加入276ml4N氫氧化鈉溶液。分離水相，并且每次用400ml二氯甲烷萃取2次。用鹽水洗滌合并的有機(jī)提取液，并用硫酸鈉干燥。標(biāo)題化合物不需另外純化即可進(jìn)一步使用。TLCRf(G)=0.15；IR(二氯甲烷)(cm-1)；3370，3020，2920，1640，1605。
1c)N-Boc-1-苯基-3-丁烯-2(S)-胺將21.5g 1-苯基-3-丁烯-2(S)-胺溶于500ml無水二氯甲烷中，并向其中滴加38.3g Boc酐的250ml二氯甲烷溶液。在室溫攪拌1.5小時后，將反應(yīng)混合物濃縮至100ml，然后用1.5升乙醚稀釋，并接連用400ml 10%檸檬酸洗滌2次、用400ml水洗滌1次、用400ml飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌1次、用鹽水洗滌2次，并且用硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑后，經(jīng)色譜(SiO2，己烷/乙酸乙酯95/5至80/20)進(jìn)行純化，將標(biāo)題化合物從己烷中結(jié)晶。M.P.67-68℃；TLC Rf(C)=0.4；FAB-MS(M+H)+=248。
ld)2(R)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-環(huán)氧乙烷在0-5℃，用15分鐘，向1.45g，N-Boc-1-苯基-3-丁烯-2(S)-胺的20ml二氯甲烷溶液中加入9.74g間氯過苯甲酸的50ml二氯甲烷溶液。在此溫度攪拌18小時后，將反應(yīng)混合物在室溫加熱下再攪拌8小時使反應(yīng)完全，然后倒入冰冷卻的10%碳酸鈉溶液中。用乙醚萃取水相3次。合并的有機(jī)相接連用10%亞硫酸鈉溶液洗滌3次、用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌3次、用硫代硫酸鈉溶液和鹽水洗滌，并用硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑后，經(jīng)柱色譜(SiO2，己烷/乙酸乙酯4/1)純化標(biāo)題化合物，并以己烷中結(jié)晶。M.p.51-52℃；TLC Rf(C)=0.33；FAB-MS(M+H)+=264。
le)5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-3(R，S)-乙酯基-二氫呋喃-2-(3H)-酮向26ml丙二酸二乙酯的260ml無水乙醇溶液中分批加入3.4g鈉。當(dāng)鈉消耗完后(約1.5小時)，用10分鐘滴加13g2(R)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-環(huán)氧乙烷的100ml乙醇溶液。在室溫攪拌5小時后，將反應(yīng)混合物倒入1.5升冰水中，并用10%檸檬酸調(diào)節(jié)至pH4。用乙醚萃取4次后，合并的有機(jī)相接連用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌2次、用鹽水洗滌1次、再用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌、用水洗滌并再用鹽水洗滌。蒸發(fā)溶劑后，經(jīng)柱色譜(SiO2，己烷/乙酸乙酯4/1)得到標(biāo)題化合物。TLC Rf(C)=0.22；FAB-MS(M+H)+=378。
lf)5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-3(R，S)-乙酸基-3-苯甲基-二氫呋喃-2(3H)-酮向2.76g鈉的410ml無水乙醇溶液中加入23.8g5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-3(R，S)-乙酯基-二氫呋喃-2(3H)-酮的410ml無水乙醇溶液和14.4ml芐基溴。在室溫和氣氛下將該反應(yīng)混合物攪拌18小時，然后倒入冰和10%檸檬酸的混合物中。用乙醚萃取3次后，用水和鹽水洗滌全并的有機(jī)提取液，并用硫酸鈉干燥。濃縮后，得到無色油狀標(biāo)題化合物，該標(biāo)題化合物不需另外純化即可用于下一反應(yīng)步驟。TLC Rf(C)=0.4；FAB-MS(M+H)+=468。
lg)5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-3(R)-苯甲基-二氫呋喃-2-(3H)-酮和5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-3(S)-苯甲基-二氫呋喃-2-(3H)-酮在室溫，用5分鐘，向10g 5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-3(R，S)-乙酯基-3-苯甲基-二氫呋喃-2-(3H)-酮的175ml二甲氧基乙烷溶液中滴加81.4ml1M氫氧化鋰水溶液。在室溫攪拌該反應(yīng)混合物15小時，蒸發(fā)溶劑后，將所得殘余物倒入500ml 10%檸檬酸中，并用乙醚萃取3次。合并的乙醚相用鹽水洗滌1次，并用硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑后，得到9.8g粗品羧酸，將其在90℃于450ml甲苯中加熱14小時脫羧化，得到標(biāo)題化合物。經(jīng)柱色譜(己烷/乙酸乙酯9/1)純化該產(chǎn)物，首先得到5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-3(R)-苯甲基-二氫呋喃-2-(3H)-酮[TLC Rf(C)=0.3；FAB-MS(M+H)+=396]，然后得到5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-3(S)-苯甲基-二氫呋喃-2-(3H)-酮[TLC Rf(C)=0.25；FAB-MS(M+H)+=396]。-3(R)-苯甲基-二氫呋喃-2-(3H)-酮的方法進(jìn)行合成α)5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-3(R)-苯甲基-二氫呋喃-2-(3H)-酮(A.E.DeCamp，A.T.Kawaguchi，R.P.Volante，and I.Shinkai，F(xiàn)etrahedron Lett.32，1867(1991))。在氮?dú)夥障?，?73g Zn/Cu(制備R.D.Smith，H.E.Simmons，W.E.Parham，M.D.Bhavsar，Org.Synth.，Coll.Vol5.855(1973))和280ml二甲基乙酰胺加到375g(1.65mol)3-碘丙酸乙酯[制備170mg 2-溴丙酸乙酯(Fluka；Buchs，Switzerland)]和950g碘化鈉的1.8升丙酮懸浮液過濾，將濾液部分蒸發(fā)濃縮，倒入約2.5升乙醚中，用1.0升1%硫代硫酸鈉溶液洗滌，最后用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)濃縮。蒸餾(83℃；20毫巴)得到純的3-碘丙酸乙酯MS(M+)=228；1H-NMR(200MHz，CDCL3)4.17(q，7Hz，2H)；3.34和2.97(2t，7Hz，2×2H)；1.28(t，7Hz，3H)]在1700ml甲苯中的溶液中，將該混合物在室溫劇烈攪拌1小時，并在80℃劇烈攪拌4小時(→高烯醇化鋅溶液)。在第二裝置中(氮?dú)夥障?，略微冷卻，使內(nèi)部溫度在15-25℃，向122ml(0.40mol)原鈦酸四異丙酯的350ml甲苯和1900ml二氯甲烷溶液中加入127ml(1.14mol)四氯化鈦，然后在室溫攪拌該混合物15分鐘(→黃色溶液)并冷卻到-40℃(三氯鈦異丙醇鹽部分結(jié)晶)。將冷卻至室溫的高烯醇化鋅溶液在氬氣氛下經(jīng)G3多孔玻璃過濾器過濾，保持溫度在-30℃至-25℃，將其滴加至三氯鈦異丙醇鹽中(→深紅色溶液)，將該溶液在-25℃攪拌5分鐘，并冷卻至-40℃。然后將233g(0.85mol)N-Boc-苯丙氨酸的1500ml二氯甲烷(制備D.J.Kempf，J.Org.Chem.51，3921(1986)，然后從己烷中結(jié)晶(0℃，約18小時)，用冷己烷洗滌，干燥)溶液滴加至其中，并將所得混合物在-22至-18℃攪拌15小時，最后在0℃攪拌1小時。將反應(yīng)混合物溶于10升冰水和12升叔丁基甲基醚中，并劇烈攪拌7-10分鐘。分離水相，用10升乙醚萃取兩次；將有機(jī)相用8升水、8升飽和碳酸氫鈉溶液、用8升水和5升鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)濃縮(→結(jié)晶5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-羥基-6-苯基-己酸乙酯)。在100℃和氬氣氛下，將上述中間體在6500ml甲苯和230ml乙酸中加熱2.5小時。在攪拌下將冷卻的反應(yīng)混合物倒入6升冰水中，分離水相并用2000ml甲苯萃取兩次，有機(jī)相用5升飽和碳酸氫鈉溶液洗滌、用5升40%亞硫酸氫鈉溶液、用4升水和4升鹽水洗滌，并用硫酸鈉干燥。蒸發(fā)濃縮有機(jī)相，得到約300g殘余物，加入800ml己烷(攪拌幾小時至反應(yīng)完全)，得到結(jié)晶內(nèi)酯，根據(jù)HPLC，它含有約10%的(5R)-差向異構(gòu)體(TLC Rf(E)=0.08；tRet(Ⅱ)=18.8分鐘)。該物質(zhì)用于下一步反應(yīng)。經(jīng)柱層析(SiO2，己烷/乙酸乙酯2∶1)可以得到純的標(biāo)題化合物，TLC Rf(E)=0.14；tRet(II)=19.2。
β)5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-3(R)-苯甲基-二氫呋喃-2-(3H)-酮(A.K.Ghosh，S.P.Mckee，and W.J.Thompson，J.Org.Chem.56，6500(1991))。在氮?dú)夥障拢瑢?943g(6.32mol)5(S)-[(1S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-二氫呋喃-2-(3H)-酮的12.0升THF和1.9升1，3-二甲基-3，4，5，6-四氫-2(1H)-嘧啶酮溶液冷卻至-75℃，并且在低于-70℃的內(nèi)部濁度下，加入在THF(Aldrich)中的14000ml二(三甲基甲硅烷基)氨基化鋰(1M)，然后在-75℃攪拌該混合物20分鐘。隨后用1小時滴加835ml(7.00mol)芐基溴，內(nèi)部溫度不要超過約-70℃，并在-75℃攪拌該混合物30分鐘使反應(yīng)完全。然后在-75至-70℃，向澄清溶液中加入2320ml丙酸(90分鐘)，然后再加入2320ml水(1小時)，將溫度升至-10℃。將該反應(yīng)混合物倒入30升乙酸乙酯和35升10%檸檬酸溶液中；分離水相并用2×10升乙酸乙酯萃取。用3×12升飽和碳酸氫鈉溶液、20升鹽水和2×20升水洗滌有機(jī)相并濃縮，然后將油狀殘余物溶于10升甲苯中并蒸發(fā)濃縮至殘余體積約5升。蒸發(fā)殘余物經(jīng)4Kg Merch硅膠(0.063-0.200mm)過濾、用甲苯洗滌并從己烷(4升己烷/每Kg粗產(chǎn)物)中結(jié)晶粗產(chǎn)物得到標(biāo)題化合物TLC Rf(D)=0.54；FAB-MS(M+H)+=414。]lh)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-羥基-6-苯基-2(R)-苯甲基己酸在20℃、用20分鐘將176ml 1M氫氧化鋰溶液滴加至17.6g 5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-3(R)-苯甲基-二氫呋喃-2-(3H)-酮的710ml乙二醇二甲醚和352ml水的溶液中。然后在室溫攪拌該反應(yīng)混合物1.5小時并蒸發(fā)溶劑。將殘余物倒入1升冷的10%檸檬酸中，并且每次用800ml乙酸乙酯對該酸性溶液萃取三次。首先用800ml水、然后用800ml鹽水洗滌該合并的提取液。在用硫酸鈉干燥的有機(jī)溶液后，蒸餾掉溶劑。該粗品標(biāo)題化合物無需進(jìn)一步純化即可用于下步反應(yīng)。FAB-MS(M+H)+=414。
1i)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基-2(R)-苯甲基己酸伴隨攪拌將8g咪唑和10g叔丁基二甲基氯硅烷加至6.35g5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-羥基-6-苯基-2(R)-苯甲基己酸的90mlDMF溶液中。在室溫攪拌18小時后，將澄清的黃色溶液倒入冰水中并每次用250ml乙酸乙酯萃取三次。按順序洗滌合并的提取物，即用10%檸檬酸洗滌三次，用水洗滌一次，用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌三次并最后用鹽水洗滌一次。在用硫酸鈉干燥后，蒸發(fā)溶劑并將得到的叔丁基二甲基甲硅烷基醚(13.5g)溶于53mlTHF中，并用53ml乙酸和20ml水處理。在室溫攪拌3小時后，將該混合物倒入水中并用乙醚萃取三次。用水洗滌該合并的醚提取物二次、用鹽水洗滌一次，然后用硫酸鈉干燥。濃縮后通過柱層析(SiO2，己烷/乙酸乙酯3.5/1.5)純化粗產(chǎn)物，得到標(biāo)題化合物。TLC Rf(D)=0.37；FAB-MS(M+H)+=528。
1j)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基-2(R)-苯甲基-己?；?(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺室溫下，在約2ml DMF中將250mg 5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基-2(R)-苯甲基-己酸的3ml DMF溶液與230.5mg BOP，70.4mg HOBT和182.6ml N-甲基嗎啉攪拌30分鐘，然后加入189.5mg H-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺[制備，見lk)至ln)]。在室溫16小時后，蒸發(fā)濃縮該反應(yīng)混合物，將殘余物在三份乙酸乙酯、水、飽和碳酸氫鈉、水和鹽水之間分配。用硫酸鈉干燥干燥有機(jī)相并蒸發(fā)濃縮，得到標(biāo)題化合物粗產(chǎn)物；TLC Rf(A)=0.24；FAB-MS(M+H)+=843。
1k)Z-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺將4.49gZ-(L)-Phe-OH的190ml二氯甲烷溶液冷卻至0℃，并加入3.09gDCC。在0℃攪拌20分鐘后，用15分鐘滴加1.31ml嗎啉的10ml二氯甲烷溶液。在室溫攪拌該反應(yīng)混合物24小時，在過濾掉沉淀的二環(huán)己基脲之后，用二氯甲烷、碳酸氫鈉水溶液和鹽水順序地洗滌。用硫酸鈉干燥并濃縮，得到從醚中結(jié)晶出的粗標(biāo)題化合物。TLC Rf(B)=0.55。
1l)H-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺通過在室溫用計算量的氫氣氫化1小時，將5.5g Z-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺與1.5g 10% Pb/C的150ml甲醇溶液轉(zhuǎn)化標(biāo)題化合物。在濾掉催化劑之后，將反應(yīng)混合物濃縮，在用乙酸乙酯稀釋后用飽和的碳酸氫鈉溶液洗滌所得溶液，用硫酸鈉干燥并減壓濃縮。經(jīng)柱層析(與實(shí)施例1n相似)后得到純的標(biāo)題化合物。TLC Rf(F)=0.3。
1m)Z-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺將1.75g DCC加至2.14g Z-(L)-Val-OH的80ml絕對冰冷的二氯甲烷溶液中，在該溫度攪拌20分鐘后用15分鐘滴加2g H-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺。在室溫攪拌該反應(yīng)混合物24小時，并將形成的脲濾掉。用碳酸氫鈉溶液和鹽水順序地洗滌濾液，在用硫酸鈉干燥之后進(jìn)行濃縮。與乙醚一起攪拌，過濾去除不溶殘余物，濃縮得到標(biāo)題化合物，該化合物無需附加的純化即可進(jìn)一步加工。TLC Rf(F)=0.7。
1n)H-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺與實(shí)施例1l)相似，通過用0.5g10%Pb/C在150ml甲醇中進(jìn)行氫化，將3.9g Z-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺轉(zhuǎn)化成粗的標(biāo)題化合物，該化合物通過柱層析(SiO2，二氯甲烷至二氯甲烷/甲醇97.5至2.5(v/v))。TLC Rf(F)=0.4。
實(shí)施例2Boc-Phe[C](p-CH3O)Phe-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺與實(shí)施例1)相似，用301mg(0.95mmol)TBAF 的5mlDMF溶液將417mg(0.48mmol)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基-2(R)-(對甲氧基-苯甲基)-己?；?(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺脫保護(hù)，得到標(biāo)題化合物，TLC Rf(F)=0.4；tRet(I)=15.8分鐘；FAB-MS(M+H)+=759。
按下文制備原料a)對-甲氧芐基碘在室溫，將1.7ml(12.8mmol)4-甲-氧芐基氯(Fluka；Buchs/Switzerand)的25ml丙酮溶液與9.4g(62.6mmol)碘化鈉一起攪拌。90分鐘后反應(yīng)氣相色譜表明反應(yīng)完全，于是將反應(yīng)混合物倒入醚中并用10%硫代硫酸鈉溶液和鹽水洗滌。用Na2SO4干燥有機(jī)相并蒸發(fā)濃縮得到標(biāo)題化合物；1H-NMR(200MHz，CD3OD3.78(s，3H)，4.54(s，2H)，6.8-6.95和7.2-7.4(2m，各2H)。
b)5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯基-乙基]-3(R)-(對-甲氧基苯甲基)-二氫呋喃-2-(3H)-酮在-75℃，用19.5ml二(三甲基甲硅烷基)氨基化鋰(1M)的THF溶液對40ml THF中的2.98g(9.74mmol)5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-二氫呋喃-2-(3H)-酮溶液進(jìn)行脫質(zhì)子，并用20ml THF中的2.9g(11.7mmol)對-甲氧芐基碘進(jìn)行烷基化(45min)。進(jìn)行柱層析(SiO2，己烷/乙酸乙酯21)并用二異丙醚煮解得到純標(biāo)題化合物；TLC Rf(D)=0.32；tRet(I)=16.7min。
c)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-羥基-6-苯基-2(R)-(對-甲氧基芐甲基)己酸用16ml 1M氫氧化鋰溶液水解43ml二甲氧基乙烷和11ml水中的1.7g(3.99mmol)5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-3(R)-(對-甲氧基苯甲基)-二氫呋喃-2-(3H)-酮。在醚中進(jìn)行攪拌，提到純的標(biāo)題化合物TLC Rf(F)=0.53；tRet(I)=14.2min；FAB-MS(M+Na)+=466。
d)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基-2(R)-(對-甲氧基苯甲基)-己酸與實(shí)施例1i)相似，用1.4g(9.64mmol)叔丁基二甲氯硅烷和1.17g(17.2mmol)咪唑?qū)?0ml DMF中的0.93g(2.10mmol)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-羥基-6-苯基-2(R)-(對-甲氧基-苯甲基)-己酸進(jìn)甲硅烷基化。用在甲醇(23ml)/THF(7ml)/水(7ml)中的1.7g碳酸鉀水解該甲硅烷基酯官能團(tuán)，并在己烷中攪拌該粗產(chǎn)物，得到標(biāo)題化合物；tRet(I)=20.6min；FAB-MS(M+H)+=558。
e)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基-2(R)-(對-甲氧基苯甲基)-己酰基-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺將在5.2ml NMM/CH3CN(0.25M)中的300mg(0.537mmol)5(S)-(Boc-氨基-4(S)-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-苯基-2(R)-(對-甲氧基-苯甲基)-己酸和197mg(0.59mmol)H-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺(實(shí)施例1n)與224mg(0.59mmol)HBTU反應(yīng)；tRet(I)=22.1min；FAB-MS(M+H)+=873。
f)5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-二氫呋喃-2-(3H)-酮(與A.E.DeCampetal.，TetrahedronLett.32，1867(1991)相似)在氮?dú)夥障拢瑢?.03gZn/Cu(制備見R.D.Smith，H.E.Simmons，W.E.Parham，M.D.Bhasvar，Org.Synth.，Coll.Vo(5，855(1973))和12.96ml二甲基乙酰胺加至17.4g2-碘丙酸乙酯的130ml甲苯溶液中，然后在室溫劇烈攪拌該混合物1小時并在80℃劇烈攪拌4小時(產(chǎn)生相應(yīng)的高烯醇化鋅溶液)。在第二個裝置中(氮?dú)夥障?，在略微冷卻下，將5.90ml(53.8mmol)四氯化鈦加至5.58ml(18.9mmol)原鈦酸四異丙酯的1.64ml甲苯和91.8ml二氯甲烷溶液中，并在室溫攪拌該混合物15分鐘(得到黃色溶液)，冷卻至-40℃(三氯鈦異丙醇鹽部分結(jié)晶)。使用套管將冷卻至室溫的高烯醇化鋅溶液從金屬固體中傾析出去，并保持在-40℃至-30℃溫度下將其滴加至三氯鈦異丙醇鹽中(得到深紅色溶液)，將該溶液加熱至-25℃5分鐘，再冷卻至-40℃。然后滴加9.0gN-Boc-苯丙氨酸(制備D.J.Kempf，J.Org.Chem.51，3921(1986))的32.8ml二氯甲烷溶液，并將該反應(yīng)混合物在約-20℃和最終在0℃攪拌15小時。將該反應(yīng)混合物倒入0.5Kg冰水和0.5升乙醚中，并劇烈攪拌10分鐘。分離水相并用兩份乙醚萃取；將有機(jī)相用兩份水、飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)濃縮，得到中間體結(jié)晶5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-羥基-6-苯基-己酸乙酯。將此中間體在195ml甲苯和9ml乙酸中于80℃加熱2.5小時。向該反應(yīng)混合物中加入0.5ml水，分離有機(jī)相并用兩份乙醚萃?。粚⒂袡C(jī)相用飽和碳酸氫鈉溶液、水和鹽水洗滌，并用硫酸鈉干燥。通過蒸發(fā)，部分濃縮有機(jī)相，并加入己烷，得到晶狀標(biāo)題化合物，根據(jù)分析，它含有約10%4(R)-差向異構(gòu)體(TLC(Rf)(E)=0.08)。經(jīng)柱層析(SiO2，己烷/乙酸乙酯)，得到純的標(biāo)題化合物；TLC(Rf(E)=0.14；[α]D=17.7(C=1；乙醇)。
實(shí)施例35(S)-(Boc-氨基)-4(S)-羥基-6-環(huán)己基-2(R)-(4-甲氧苯基-甲基)-己?；?(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺與實(shí)施例1類似，將在15ml DMF中的3.93g(4.469mmol)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-環(huán)己基-2(R)-(4-甲氧苯基-甲基)-己酰-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺與2.82g(8.94mmol)TBAF三水合物反應(yīng)，得到標(biāo)題化合物。經(jīng)沉淀(己烷)純化該標(biāo)題化合物。TLC Rf(B)=0.64；tRet(Ⅲ)=17.34分鐘；FAB-MS(M+H)+=765。如下制備起始化合物a)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-(叔丁基二甲基)甲硅烷氧基-6-環(huán)己基-2(R)-(4-甲氧基苯-甲基)-己酰基-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺用6.02g(18.49mmol)碳酸銫和9.1ml(92.46mmol)甲基碘處理在70ml二噁烷中的4g(4.623mmol)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-(叔丁基二甲基)甲硅烷氧基-6-環(huán)己基-2(R)-(4-羥基苯甲基)-己?；?(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺溶液，然后加熱至50℃。在1.25小時后再加入同樣數(shù)量的碳酸銫和甲基碘。在2.15小時和4小時后再次加入同樣數(shù)量的甲基碘。在50℃攪拌5.75小時后，將反應(yīng)混合物倒入冰/水并用二氯甲烷萃取3次。用硫酸鈉干燥后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮該反應(yīng)混合物。如此得到的標(biāo)題化合物無需進(jìn)一步純化即可被進(jìn)一步加工。TLC Rf(H)=0.36；tRet(Ⅲ)=24min；FAB-MS(M+H+)=880。
b)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-(叔丁基甲基)甲硅烷氧基-6-環(huán)己基-2(R)-(4-羥基苯甲基)-己?；?(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺在有4g10%Pd/C存在條件下氫化在400ml甲醇中的19.5g(20.41mmol)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-環(huán)己烷-2(R)-(4-芐氧基苯基-甲基)-己?；?(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺。完成氫化后得到的標(biāo)題化合物無需另外純化即可進(jìn)一步反應(yīng)；TLC Rf(A)0.28；tRet(Ⅲ)=21.99min；FAB-MS(M+H+)=866。
c)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-(叔丁基二甲基)甲硅烷氧基-6-環(huán)己基-2(R)-(4-芐氧苯基-甲基)-己酰基-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺將在40ml DMF中的3g(4.69mmol)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-6-環(huán)己基-2(R)-(4-芐氧基-芐基)-己酸與1.91g(5.16mmol)H-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺一起在冰浴中冷卻至5℃，然后加入0.783ml(5.16mmol)DEPC和2.3ml(16.41mmol)三乙胺。在室溫攪拌1.5小時后，將反應(yīng)混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取三次。合并的有機(jī)相用水、飽和碳酸氫鈉溶液(兩次)和鹽水進(jìn)行洗滌。在用硫酸鈉干燥之后，進(jìn)行減壓濃縮。通過柱層析(SiO2，己烷/乙酸乙酯1/1)純化標(biāo)題化合物；TLC Rf(A)=0.3；tRet(Ⅲ)=25.3min；FAB-MS(M+H+)=955。
d)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-(叔丁基二甲基)甲硅烷氧基-6-環(huán)己基-2(R)-(4-芐氧基芐基)-己酸與實(shí)施例1i)相似，用35.8g(237.6mmol)叔丁基二甲基氯硅烷和30g(237.6mmol)咪唑?qū)?88ml DMF中的28.8g(54.8mmol)5(S)-(Boc-氨基)-(4(S)-羥基-6-環(huán)己基-2(R)-(4-芐氧基-芐基)-己酸轉(zhuǎn)化成標(biāo)題化合物。用柱層析(SiO2，己烷/乙酸乙酯4/1至1/1)純化該標(biāo)題化合物；TLC Rf(E)=0.33；tRet(Ⅲ)=23.72min。
e)5(S)-(Boc-氨基)-4(S)-羥基-6-環(huán)己基-2(R)-(4-芐氧基-芐基)-己酸與實(shí)施例1h)相似，用在10ml1，2-二甲氧基乙烷中的2.4g(4.728mmol)5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-環(huán)己基乙基]-3(R)-(4-芐氧基-芐基)-二氫呋喃-2-(3H)-酮與9.45ml1MLiOH溶液反應(yīng)，得到標(biāo)題化合物。通過從己烷中結(jié)晶純化該標(biāo)題化合物。
TLC Rf(E)=0.33；tRet(Ⅲ)=18min；FAB-MS(M+H+)=526。
f)5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-環(huán)己基乙基]-3(R)-(4-芐氧基-芐基)-二氫呋喃-2-(3H)-酮(似A.K.Ghoshetal.，J.Org.Chem.56，6500(1991))，在-75℃，30.9g(99.26mmol)5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-環(huán)己基乙基]-二氫呋喃-2-(3H)-酮與200ml(200mmol)二(三甲基甲硅烷基)氨基鋰(Aldrich)1M在THF中反應(yīng)成標(biāo)題化合物，在-75℃伴隨攪拌用30分鐘滴加34g(104.8mmol)4-芐氧基芐基碘完全該反應(yīng)。再次冷卻至-75℃，加入丙酸，然后加入水。將反應(yīng)混合物加熱至0℃，用乙酸乙酯稀釋，用10%檸檬酸溶液、飽和碳酸鈉溶液和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)濃縮。通過柱層析(SiO2，己烷/乙酸乙酯4/1至1/1)和結(jié)晶方法(己烷/乙酸乙酯)純化該標(biāo)題化合物；TLC Rf(C)=0.33；tRet(Ⅲ)=20.41min；FAB-MS(M+H+)=508。
g)5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-環(huán)己基乙基]-二氫呋喃-2-(3H)-酮在室溫，常壓、有0.5g Nishmura催化劑存在下氫化5g(16.37mmol)5(S)-[1(S)-(Boc-氨基)-2-苯乙基]-二氫呋喃-2-(3H)-酮的50ml甲醇溶液2小時。過濾除去催化劑，隨后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮并在高真空下干燥。TLC Rf(D)=0.5；FAB-MS(M+H+)=312。
實(shí)施例4抑制小鼠模型中人乳腺癌的生長通過皮下植入MCF-7系(AmericamTypeCultureCollection，Maryland，USA；參見H.D.Soule等人的J.Nat.CancerInst.51，1409-1416(1973))人乳腺癌碎片(約25mg)，給2×6只雌性Balb/c nu/nu-小鼠(Bomholtgard，用在穿孔塑料管“Silastic ”中的5mg雌二醇進(jìn)行雌激素刺激(Dow Chemical，Michigam，USA))植入腫瘤。在腫瘤長至約30-100mm3體積后(13天后)，給6只小鼠(試驗(yàn)組)每天兩次施用劑量為50mg/Kg的Boc-Phe-[C]Phe-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺(以2mg/ml的濃度溶于5%二甲基亞砜溶液和在水中的20%羥丙基-β-環(huán)糊精中，通過將試驗(yàn)化合物溶于二甲基亞砜中并用羥丙基-β-環(huán)糊精水溶液稀釋制備)，共給藥25天。通過將該溶液引入實(shí)驗(yàn)動物的喉內(nèi)口服用藥。另外6只小鼠(對照組)平行地接受安慰劑(在20%羥丙基-β-環(huán)糊精水溶液中的5%二甲基亞砜溶液。25天后(用藥50一次)測得下列腫瘤體積(平均值)對照組(安慰劑)腫瘤體積0.96cm3。
試驗(yàn)組(Boc-Phe[C]Phe-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺)腫瘤體積0.30cm3。
與對照組相比，在用Boc-Phe[C]-Phe-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺治療的動物中，腫瘤生長明顯降低。
通過沿著腫瘤的縱軸(L)和與其垂直的軸(D)測量直徑(在活的動物中通過用測徑規(guī)測量)，測定腫瘤的生長。腫瘤體積以下式計算
π×L×D2/6(Evans，B.D.，等人，Brit.J.Cancer 45，466-468(1982))。
實(shí)施例5明膠溶液將另外含有20%環(huán)糊精的實(shí)施例1所述的式I化合物的無菌過濾溶液與無菌的、用苯酚防腐的明膠溶液在無菌條件下一起加熱混合，以此方式得到具有下列組成的1.0ml溶液活性成分3mg明膠150.0mg苯酚4.7mg含20%環(huán)糊精的蒸餾水1.0ml實(shí)施例6注射用無菌干燥物將5mg實(shí)施例1所述式I化合物溶于含有20mg甘露糖醇和20%環(huán)糊精(作為增溶劑)的1ml水溶液中。將該溶液無菌過濾，并在無菌條件下裝入2ml安瓿中，深度冷凍并冷凍干燥。在使用前，將該凍干物溶于1ml蒸餾水或1ml蒸餾水或1ml生理鹽水溶液中。該溶液經(jīng)肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥。也可以將該制劑裝入雙窒、可隨意使用的注射器中。
實(shí)施例7鼻噴霧劑將500mg實(shí)施例1中所述式I化合物的磨細(xì)粉末(＜0.5μm)懸浮于3.5ml Myglyol 812 和0.08g芐醇的混合物中。將此懸浮液裝入帶有計量閥的容器中。加壓使5.0g Freon 12 經(jīng)閥門進(jìn)入容器中。振搖，使“Freon”溶于Myglyol/芐醇混合物中。該噴霧容器含有約100次劑量，可分別施用。
實(shí)施例8膜包衣片對下列成分進(jìn)行加工，制備10000片，每片含100mg活性成分的該種片劑活性成分1000g玉米淀粉680g膠態(tài)硅酸200g硬脂酸鎂20g硬脂酸50g羧甲基淀粉鈉250g水足量將實(shí)施例1所述式I化合物、50g玉米淀粉和膠態(tài)硅酸與含有250g玉米淀粉和2.2Kg無鹽水的淀粉膏一起壓成濕料塊。將該料塊通過3mm篩孔的篩，并在45°于流化床干燥器中干燥30分鐘。使干燥的顆粒通過1mm篩孔的篩，并與預(yù)篩過的330g玉米淀粉、硬脂酸鎂、硬脂酸和羧甲基淀粉鈉的混合物(1mm篩)混合，將其壓制成略微隆起的圓頂狀片。
實(shí)施例9口服分散液1將625mg實(shí)施例1所述的式I化合物，Boc-Phe[C]Phe-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺和625mgPOPC(1-棕櫚酰-2-油酰卵磷脂=1-十六酰-2-(9-順-十八酰)-3-sn-卵磷脂溶于25ml乙醇中。將該溶液用10倍量的水稀釋。為此，將上述乙醇型溶液在室溫、以10ml/分鐘的速度滴加至所述量的水中。通過在1750ml水(System排出限為100kD的Minitan 700cm2聚醚砜膜，由Millipore(USA))提供)中切向滲析(Cross Flow Filtration)，從混合物中除去乙醇。采用該系統(tǒng)，通過超濾將該混合物濃縮至15mg活性成分。在加入1.24mg/ml檸檬酸和1.24mg/ml磷酸氫二鈉·2H2O調(diào)節(jié)pH至4.2，并且加入1mg/ml山梨酸作為抗菌防腐劑之后，將此分散液再濃縮至15mg/ml，并裝入例如20ml容量的小瓶中。分散顆粒的直徑為0.1-2μm。它們在+2至8℃下至少可穩(wěn)定6個月，并適于口服。
實(shí)施例10口服分散液2與實(shí)施例9類似進(jìn)行制備，不同的是用25mg活性成分和50mgPOPC制備乙醇型溶液。
實(shí)施例11口服分散液3與實(shí)施例9類似進(jìn)行制備，不同的是用25mg活性成分和125mgPOPC制備乙醇型溶液。
實(shí)施例12口服分散液4與實(shí)施例9類似進(jìn)行制備，不同的是用50mg活性成分和50mgPOPC制備乙醇型溶液。
實(shí)施例13口服分散液5與實(shí)施例9-12之中任一方法類似進(jìn)行制備，不同的是用活性成分以及用從大豆中得到的卵磷脂或從蛋黃中得到的卵磷脂(70-100%純度)代替POPC制備乙醇型溶液。如果需要，加入5mg/ml濃度的抗氧劑，如抗壞血酸。
權(quán)利要求
1.HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑或其鹽(有成鹽基存在時)，或其羥基酯化的衍生物或其鹽(有成鹽基存在時)在制備用于治療溫血動物腫瘤的藥物組合物中的用途。
2.式I的HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑或此類化合物的鹽(有成鹽基存在時)，或此類化合物的羥基被保護(hù)的衍生物或其鹽在制備用于治療溫血動物腫瘤的藥物組合物中的用途， 其中R1是氫；低級烷氧羰基；雜環(huán)基羰基；未取代的或被多至三個相互獨(dú)立地選自于氟、鹵代低級烷基、低級鏈烷?；⒒腔?、低級烷基磺?；颓杌鶊F(tuán)取代的芐氧羰基；其中雜環(huán)是通過碳原子連接的雜環(huán)氧羰基；其中相連的羰基被硫羰基取代的上述羰基中的一個；雜環(huán)基磺?；坏图壨榛酋；?；或N-(雜環(huán)基-低級烷基)-N-低級烷基-氨基羰基；B1是一個價鍵或一個N-端與R1相連且C-端在攜有R2-CH2-的碳原子上與氨基相連的α-氨基酸二價殘基，R2和R3各自獨(dú)立地是其它苯基或環(huán)己基，這些基團(tuán)是未取代的或被-至三個相互獨(dú)立地選自于羥基、低級烷基、鹵素、鹵-低級烷基、磺基、低級烷基磺酰基、氰基和硝基的基團(tuán)取代的，A1是連接-C=0和A2間的鍵或是一個N-端與-C=0基相連且C-端與A2相連的α-氨基酸二價殘基，A2是一個N-端與A1相連且C-端與NR4R5基相連的α-氨基酸二價殘基，或者A1與A2一起形成一個二肽的二價殘基，該殘其的中央酰胺鍵被還原的且其N-端與-C=0基相連、C-端與NR4R5基相連，及R4和R5與相連的氮原子一起形成未取代的或取代的硫嗎啉代或嗎啉代，
3.根據(jù)權(quán)利要求2式Ⅰ的化合物，或此類化合物的可藥用鹽(當(dāng)有成鹽基團(tuán)存在時)的用途，其中R1是氫，叔丁氧羰基，異丁氧羰基，吡啶-3-羰基，嗎啉代羰基，3-苯并呋喃?；?，1，2，3，4-四氫-異喹啉-3-羰基，被多至三個相互獨(dú)立地選自下列的基團(tuán)取代的芐氧羰基氟、鹵代低級烷基、低級鏈烷酰基、磺基、低級烷基磺?；颓杌蚱渲须s環(huán)是通過一個碳原子相連的雜環(huán)氧羰基，所述雜環(huán)選自吡咯基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、吡嗪基、嘧啶基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、β-咔啉基及這些基團(tuán)的全部或部分飽和的衍生物，或者R1的定義中不存在雜環(huán)氧羰基，B1為一個鍵或一個N-端與R1相連且C-端在攜有R2-CH2-基的碳原子上與氨基相連的α-氨基酸二價殘基，R2和R3各自獨(dú)立地是苯基或環(huán)己基，它們是未取代的或被一個或二個相互獨(dú)自地選自下述的基團(tuán)取代羥基、甲氧基、氟、磺基、低級烷基磺酰基、三氟甲基和氰基，A1是一個N-端與-C=O相連，C-端與A2相連的疏水性α-氨基酸二價殘基，A2是一個N-端與A1相連，C-端與NR4R5基相連的疏水性α-氨基酸二價殘基，上述氨基酸殘基是(D)-或(L)-型的，或A1和A2形成一個二肽二價殘基，它含有兩個疏水性的α-氨基酸，該殘基的中央酰胺鍵被還原且其N-端與-C=0基相連，C-端與NR4R5基相連，并且R4和R5與相連的氮原子一起形成硫代嗎啉代或嗎啉代；式I化合物中在與攜有R2-CH2-基的碳原子相鄰的碳原子上的羥基是游離形式的或被代級鏈烷?；Ｗo(hù)，特別是游離形式的；且在R1的定義中也可刪去雜環(huán)氧羰基。
4.根據(jù)權(quán)利要求2式I化合物或此類化合物的可藥用鹽(當(dāng)有成鹽基存在時)的用途，其中R1是氫，叔丁氧羰基，異丁氧羰基，吡啶-3-羰基，嗎啉代羰基，3-苯并呋喃?；?，2，3，4-四氫-異喹啉-3-羰基，嗎啉代磺?；騈-(2-吡啶基甲基)-N-甲基-氨基羰基，B1為一個鍵或一個N-端與R1基相連，C-端在攜有R2-CH2-的碳原子上與氨基結(jié)合的α-氨基酸二價殘基，R2和R3是各自獨(dú)立的苯基或環(huán)己基，這些基團(tuán)是未取代的或被一個或二個相互獨(dú)立地選自下述的基團(tuán)取代羥基、甲氧基、氟、三氟甲基和氰基，A1和A2一起形成下式的二肽二價殘基，Val-Phe，Ile-Phe，Val-Che，Ile-Cha，Ile-Gly，Val-Val，Val-Gly，Val-(p-F-Phe)，Val-Tyr，Val-(p-CH3O-Phe)，Gly-(p-F-Phe)，或者是其具有還原中心酰胺鍵的式Val(red)-Phe的衍生物，其N-端與-C=0基結(jié)合且C-端與NR4R5基結(jié)合，和R4和R5與相連的氮原子一起為硫代嗎啉代或嗎啉代，式I化合物中在與帶有R2-CH2-基團(tuán)的碳原子相鄰的碳原子上的羥基是游離的或被乙酰基保護(hù)的，
5.根據(jù)權(quán)利要求2式I化合物的用途，其中R1是低級烷氧?；?，B1為一個鍵，R2和R3是苯基，A1是纈氨酰，A2是苯丙氨酰，且R4和R5與相連的氮原子一起形成嗎啉代。
6.根據(jù)權(quán)利要求2的式I化合物的用途，其中R1是低級烷氧羰基，B1為一個鍵，R2和R3是苯基，A1是纈氨酰，A2是苯丙氨酰，且R4和R5與結(jié)合的氮原子一起形成嗎啉代。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中HIV天冬氨酸蛋白酶抑制劑是指Boc-Phe[C]Phe-(L)-Val-(L)-Phe-嗎啉-4-基酰胺。
8.根據(jù)權(quán)利要求2式I化合物的用途，其中R1是低級烷氧羰基，B1為一個鍵，R2是苯基且R3是4-甲氧苯基，A1是纈氨酰，A2是苯丙氨酰，并且R4和R5與結(jié)合的氮原子一起形成嗎啉代。
9.根據(jù)權(quán)利要求2式I化合物的用途，其中R1是低級烷氧羰基，B1為一個鍵，R2是環(huán)己基且R3是4-甲氧苯基，A1是纈氨酰，A2是苯丙氨酰，并且R4和R5與相連的氮原子一起形成嗎啉代。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9的任何一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中被治療的腫瘤是那些自身不對HIV天冬氨酸蛋白酶抑制產(chǎn)生應(yīng)答的腫瘤。
11.一種用權(quán)利要求1至9中任一權(quán)利要求所述的化合物制備治療溫血動物腫瘤的藥物組合物的方法。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中被治療的腫瘤是那些不對HIV天冬氨酸蛋白酶抑制應(yīng)答的腫瘤。
全文摘要
本發(fā)明涉及HIV天冬氨酸蛋白酶，例如HIV-1或HIV-2蛋白酶的抑制劑及其鹽在制備用于預(yù)防和尤其是治療腫瘤疾病的藥物組合物中的用途，涉及抑制腫瘤生長，特別是那些不對HIV天冬氨酸蛋白酶抑制應(yīng)答的腫瘤生長的前體藥物，以及用這些化合物和含這些化合物的藥物組合物治療腫瘤的方法。
文檔編號A61P35/00GK1108955SQ9410554
公開日1995年9月27日 申請日期1994年5月16日 優(yōu)先權(quán)日1993年5月17日
發(fā)明者J·勒塞爾, U·里根納斯, M·蘭格, G·波爾德, F·庫明 申請人:西巴-蓋爾基股份公司