專利名稱：一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架及其制備方法
一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架及其制備方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于紡織工業(yè)、材料科學(xué)的技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架及其制備方法，以含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液為紡絲液，通過靜電紡絲工藝制備了孔隙率為50 90%的纖維氈，以醇-水混合溶液為后處理劑，獲得力學(xué)性能優(yōu)異的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白纖維氈，制備的纖維氈可作為生物支架用于生物醫(yī)用領(lǐng)域，包括用于長段尿道狹窄或皮膚損傷的修復(fù)。
背景技術(shù)：
無論是長段尿道狹窄還是皮膚損傷，都不同程度地影響患者的生活質(zhì)量。其中長段復(fù)雜性尿道狹窄不僅會引起尿外滲、尿瘺、假道等局部并發(fā)癥，嚴(yán)重者甚至波及泌尿系統(tǒng)其它臟器引起全身性病變。既往以多種自體組織為重建材料的替代療法在復(fù)雜性尿道狹窄的治療中顯示了良好的應(yīng)用前景，但該療法存在“以犧牲正常組織為代價，以手術(shù)創(chuàng)傷修復(fù)組織缺損”的缺憾，不可避免的引起取材部位的并發(fā)癥。組織工程的興起和迅猛發(fā)展為尿道病變的修復(fù)開辟了新的治療途徑。臨床上曾采用小腸黏膜下脫細(xì)胞基質(zhì)(SIQ、膀胱黏膜下脫細(xì)胞基質(zhì)(BAMG)等重建尿道治療長段復(fù)雜性尿道狹窄，但術(shù)后患者易發(fā)生尿道再狹窄、 尿道憩室和尿瘺等并發(fā)癥。究其原因，是因為上述組織工程支架材料無法在體內(nèi)快速血管化。因此開發(fā)合適的組織工程支架，并促其在體內(nèi)早期快速血管化是長段組織工程尿道構(gòu)建的關(guān)鍵要素。
血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種有效的促血管生長因子，能直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞促進血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，增加血管通透性，誘導(dǎo)新生血管形成， 但其半衰期短，僅將外源性VEGF加入移植材料中并不能有效而持久地促其血管化。
解決上述問題的方法一是采用基因工程技術(shù)，使種子細(xì)胞攜帶VEGF基因，但該方法可控性差；二是采用支架材料將VEGF包裹，使其緩釋VEGF。第二種方法的關(guān)鍵是選擇合適的支架材料。目前文獻報道的可降解生物膜主要有兩種一是由動物膠原蛋白或膠原纖維制成的膠原膜，另一種是由聚乳酸和醫(yī)用增塑劑或膠原纖維制成。但這些可降解生物膜植入體內(nèi)后，在降解過程中易產(chǎn)生酸從而可導(dǎo)致植入?yún)^(qū)發(fā)生炎癥反應(yīng)，同時存在著體內(nèi)排斥反應(yīng)的風(fēng)險。
而本發(fā)明的目的在于克服上述缺點，選擇絲素蛋白作為主體高分子材料。其不僅具有優(yōu)異的力學(xué)性能，而且具有良好的生物相容性、可降解性、良好的透氣透濕性、良好的促血管化能力等。公開號為CN 13720203A的中國發(fā)明專利“一種組織工程支架用纖維及其制備方法”公開了一種以天然蠶絲為原料，經(jīng)脫膠、溶解等工序后，采用濕法紡絲工藝制備組織工程支架材料的方法。公開號為CN 101603007A的中國發(fā)明專利“一種細(xì)胞培養(yǎng)載體制備方法”公開了一種以絲素蛋白為主要原料，采用溶液成型制備纖維或膜片的方法。以上技術(shù)所提供的絲素蛋白纖維直徑均為十幾微米到幾十微米。
但支架材料的設(shè)計應(yīng)最大限度仿生人體細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的結(jié)構(gòu)與功能特點，才能有效解決材料的生物相容性問題，調(diào)控生物信號的傳導(dǎo)，誘導(dǎo)細(xì)胞和組織生長，促進機體再生與修復(fù)。細(xì)胞外基質(zhì)的纖維直徑一般介于50 500nm之間，而采用靜電紡技術(shù)制備的纖維直徑范圍一般在3nm 5 μ m,并且由其制備的纖維氈孔隙率高、比表面積大、纖維精細(xì)程度和均一性高、長徑比大，這些特點使電紡纖維可在一定程度上仿生ECM的結(jié)構(gòu)和功能， 為細(xì)胞提供理想的生長、增殖和分化的微環(huán)境。公開號CN 1887362A的中國發(fā)明專利“一種細(xì)胞培養(yǎng)支架材料及其制備方法”公布了一種以蠶絲和膠原蛋白為原料，采用靜電紡技術(shù)制備三維網(wǎng)狀再生絲素蛋白復(fù)合納米纖維無紡氈的方法。但該技術(shù)制備的無紡氈未與生物活性生長因子，如血小板衍生生長因子、胰島素樣生長因子、骨形成蛋白、成纖細(xì)胞生長因子等復(fù)合，因此所制備的三維網(wǎng)狀再生絲素蛋白復(fù)合納米纖維無紡氈不具有功能性。因此本發(fā)明采用靜電紡技術(shù)制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架，至目前為止，國內(nèi)外還未見有關(guān)該種組織工程支架研究和生產(chǎn)的文獻報道或?qū)＠０l(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法，是將含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液進行靜電紡絲，采用乙醇-水混合溶液為后處理劑，然后經(jīng)后拉伸處理的方法。通過該方法制得的再生絲素蛋白組織工程支架為由混合有血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白的再生絲素蛋白纖維構(gòu)成的具有三維交錯網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)特征的纖維氈，其中血管內(nèi)皮生長因子在再生絲素蛋白纖維中分散均勻，保證了其可以逐漸釋放并促進血管生成，同時，該制備過程簡單，易于操作，對環(huán)境無污染。
本發(fā)明的目的在于提供一種生物相容性好、生物降解性優(yōu)異，同時能在體內(nèi)快速血管化的組織工程支架及其制備方法。
本發(fā)明的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架為具有三維交錯網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)特征的纖維氈；其中所述的血管內(nèi)皮生長因子的質(zhì)量占所述再生絲素蛋白纖維總質(zhì)量的3. 5 X ΙΟ"5 9. 5 X 10_5%，所述的牛血清蛋白的質(zhì)量占所述再生絲素蛋白纖維總質(zhì)量的 1. 5 X IO"3 4Χ1(Γ3%。
作為優(yōu)選的技術(shù)方案
如上所述的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架，所述的再生絲素蛋白纖維直徑范圍為200nm 5μπι;所述的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的斷裂伸長率為5% 12%。
如上所述的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架，所述的纖維氈的孔隙率為50 90%。
如上所述的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架，所述的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架用于生物醫(yī)用領(lǐng)域，包括用于長段尿道狹窄或皮膚損傷的修復(fù)。
本發(fā)明還提供了一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法，其步驟為
(1)以蠶繭為原料，經(jīng)脫膠、溶解、透析、濃縮后，制備質(zhì)量百分比為30 40%的再生絲素蛋白水溶液；
所述再生絲素蛋白水溶液的制備步驟如下將蠶繭用質(zhì)量百分比為0. 3 0. 7% 的碳酸鈉水溶液脫膠后，溶解于摩爾濃度為9. 0 9. 5mol/L的溴化鋰水溶液中，得到再生絲素蛋白-溴化鋰水溶液；將此溶液離心、過濾、透析和濃縮，得到質(zhì)量百分比為30 40% 的再生絲素蛋白水溶液；
(2)以水為溶劑，配制血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液，其中血管內(nèi)皮生長因子的質(zhì)量濃度為15 25 μ g/ml，牛血清蛋白的質(zhì)量濃度為0. 6 lmg/ml ；
(3)將所述再生絲素蛋白水溶液與所述血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液以 60 1 130 1的體積比混合，制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液；
(4)以步驟(3)制備的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液為紡絲液，采用靜電紡絲技術(shù)制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白纖維氈；
(5)以乙醇-水混合溶液作為后處理劑，對步驟(4)制備的纖維氈進行后處理，取出晾干，即得到最終含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架；所述的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的斷裂伸長率為5% 12% ；
所述的后處理是指將靜電紡制得的纖維氈浸入所述后處理劑中拉伸1. 125 1. 5倍后，在所述后處理劑中定長浸泡30 120min。
如上所述的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法， 所述的的蠶繭為桑蠶繭、柞蠶繭或蓖麻蠶繭中的一種。
如上所述的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法， 所述的靜電紡絲技術(shù)制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白纖維氈時的紡絲環(huán)境溫度為2 6°C。
如上所述的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法， 所述的醇-水混合溶液中乙醇占乙醇-水混合溶液總體積的75 95%。
有益效果
本發(fā)明創(chuàng)造性地提出了含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法。在保證再生絲素蛋白較高濃度的前提下，避免了有機溶劑(如甲酸、六氟異丙醇等)的使用，不僅降低了生產(chǎn)成本，而且避免了對人體的傷害。按照本發(fā)明的方法制得的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架能在體內(nèi)快速血管化，滿足生物醫(yī)用領(lǐng)域的使用要求。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施方式
，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
本發(fā)明的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架，為混合有血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白的再生絲素蛋白纖維構(gòu)成的具有三維交錯網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)特征的纖維氈，其中血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白在再生絲素蛋白纖維中均勻分散；所述的血管內(nèi)皮生長因子的質(zhì)量占所述再生絲素蛋白纖維總質(zhì)量的3. 5X ΙΟ"5 9. 5X 10_5%，所述的牛血清蛋白的質(zhì)量占所述再生絲素蛋白纖維總質(zhì)量的1.5X10_3 4X10_3%。
所述的再生絲素蛋白纖維的直徑范圍為200nm 5 μ m ；所述的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的斷裂伸長率為5% 12%。
所述的纖維氈的孔隙率為50 90%。
本發(fā)明的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架，用于生物醫(yī)用領(lǐng)域，包括用于長段尿道狹窄或皮膚損傷的修復(fù)。
實施例1
一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法，其步驟為
(1)以桑蠶繭為原料，經(jīng)脫膠、溶解、透析、濃縮后，制備質(zhì)量百分比為30%的再生絲素蛋白水溶液；
所述再生絲素蛋白水溶液的制備步驟如下將桑蠶繭用質(zhì)量百分比為0.3%的碳酸鈉水溶液脫膠后，溶解于摩爾濃度為9. Omol/L的溴化鋰水溶液中，得到再生絲素蛋白-溴化鋰水溶液；將此溶液離心、過濾、透析和濃縮，得到質(zhì)量百分比為30%的再生絲素蛋白水溶液；
(2)以水為溶劑，配制血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液，其中血管內(nèi)皮生長因子的質(zhì)量濃度為15 μ g/ml，牛血清蛋白的質(zhì)量濃度為0. 6mg/ml ；
(3)將所述再生絲素蛋白水溶液與所述血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液以 130 1的體積比混合，制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液；
(4)以步驟C3)制備的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液為紡絲液，在2°C 下采用靜電紡絲技術(shù)制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白纖維氈；所述的再生絲素蛋白纖維的直徑范圍為200nm 1 μ m，所述的纖維氈的孔隙率為90% ；
(5)以乙醇體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇-水混合溶液作為后處理劑，對步驟(4)制備的纖維氈浸入該后處理劑中拉伸1. 125倍后，在所述后處理劑中定長浸泡30min，取出晾干，即得到最終含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架；所述的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的斷裂伸長率為12%。
實施例2
一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法，其步驟為
(1)以柞蠶繭為原料，經(jīng)脫膠、溶解、透析、濃縮后，制備質(zhì)量百分比為33%的再生絲素蛋白水溶液；
所述再生絲素蛋白水溶液的制備步驟如下將柞蠶繭用質(zhì)量百分比為0.4%的碳酸鈉水溶液脫膠后，溶解于摩爾濃度為9. lmol/L的溴化鋰水溶液中，得到再生絲素蛋白-溴化鋰水溶液；將此溶液離心、過濾、透析和濃縮，得到質(zhì)量百分比為33%的再生絲素蛋白水溶液；
(2)以水為溶劑，配制血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液，其中血管內(nèi)皮生長因子的質(zhì)量濃度為17 μ g/ml，牛血清蛋白的質(zhì)量濃度為0. 7mg/ml ；
(3)將所述再生絲素蛋白水溶液與所述血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液以 70 1的體積比混合，制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液；
(4)以步驟C3)制備的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液為紡絲液，在4°C 下采用靜電紡絲技術(shù)制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白纖維氈；所述的再生絲素蛋白纖維的直徑范圍為500nm 2 μ m，所述的纖維氈的孔隙率為81% ；
(5)以乙醇體積分?jǐn)?shù)為80 %的乙醇-水混合溶液作為后處理劑，對步驟(4)制備的纖維氈浸入該后處理劑中拉伸1. 25倍后，在所述后處理劑中定長浸泡50min，取出晾干， 即得到最終含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架；所述的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的斷裂伸長率為10%。
實施例3
一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法，其步驟為
(1)以蓖麻蠶繭為原料，經(jīng)脫膠、溶解、透析、濃縮后，制備質(zhì)量百分比為35%的再生絲素蛋白水溶液；
所述再生絲素蛋白水溶液的制備步驟如下將蓖麻蠶繭用質(zhì)量百分比為0. 5%的碳酸鈉水溶液脫膠后，溶解于摩爾濃度為9. 2mol/L的溴化鋰水溶液中，得到再生絲素蛋白-溴化鋰水溶液；將此溶液離心、過濾、透析和濃縮，得到質(zhì)量百分比為35%的再生絲素蛋白水溶液；
(2)以水為溶劑，配制血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液，其中血管內(nèi)皮生長因子的質(zhì)量濃度為20 μ g/ml，牛血清蛋白的質(zhì)量濃度為0. 8mg/ml ；
(3)將所述再生絲素蛋白水溶液與所述血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液以 90 1的體積比混合，制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液；
(4)以步驟C3)制備的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液為紡絲液，在6°C 下采用靜電紡絲技術(shù)制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白纖維氈；所述的再生絲素蛋白纖維的直徑范圍為SOOnm 3 μ m，所述的纖維氈的孔隙率為72% ；
(5)以乙醇體積分?jǐn)?shù)為85%的乙醇-水混合溶液作為后處理劑，對步驟(4)制備的纖維氈浸入該后處理劑中拉伸1. 375倍后，在所述后處理劑中定長浸泡70min，取出晾干，即得到最終含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架；所述的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的斷裂伸長率為8%。
實施例4
—種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法，其步驟為
(1)以蓖麻蠶繭為原料，經(jīng)脫膠、溶解、透析、濃縮后，制備質(zhì)量百分比為37%的再生絲素蛋白水溶液；
所述再生絲素蛋白水溶液的制備步驟如下將蓖麻蠶繭用質(zhì)量百分比為0. 6%的碳酸鈉水溶液脫膠后，溶解于摩爾濃度為9. 3mol/L的溴化鋰水溶液中，得到再生絲素蛋白-溴化鋰水溶液；將此溶液離心、過濾、透析和濃縮，得到質(zhì)量百分比為37%的再生絲素蛋白水溶液；
(2)以水為溶劑，配制血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液，其中血管內(nèi)皮生長因子的質(zhì)量濃度為22 μ g/ml，牛血清蛋白的質(zhì)量濃度為0. 9mg/ml ；
(3)將所述再生絲素蛋白水溶液與所述血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液以 110 1的體積比混合，制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液；
(4)以步驟C3)制備的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液為紡絲液，在4°C 下采用靜電紡絲技術(shù)制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白纖維氈；所述的再生絲素蛋白纖維的直徑范圍為1 μ m 4 μ m，所述的纖維氈的孔隙率為59% ；
(5)以乙醇體積分?jǐn)?shù)為90 %的乙醇-水混合溶液作為后處理劑，對步驟(4)制備的纖維氈浸入該后處理劑中拉伸1. 4倍后，在所述后處理劑中定長浸泡90min，取出晾干， 即得到最終含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架；所述的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的斷裂伸長率為7%。
實施例5
一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法，其步驟為
(1)以桑蠶繭為原料，經(jīng)脫膠、溶解、透析、濃縮后，制備質(zhì)量百分比為40%的再生絲素蛋白水溶液；
所述再生絲素蛋白水溶液的制備步驟如下將桑蠶繭用質(zhì)量百分比為0.7%的碳酸鈉水溶液脫膠后，溶解于摩爾濃度為9. 5mol/L的溴化鋰水溶液中，得到再生絲素蛋白-溴化鋰水溶液；將此溶液離心、過濾、透析和濃縮，得到質(zhì)量百分比為40%的再生絲素蛋白水溶液；
(2)以水為溶劑，配制血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液，其中血管內(nèi)皮生長因子的質(zhì)量濃度為25 μ g/ml，牛血清蛋白的質(zhì)量濃度為1. Omg/ml ；
(3)將所述再生絲素蛋白水溶液與所述血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液以 60 1的體積比混合，制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液；
(4)以步驟C3)制備的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液為紡絲液，在6°C 下采用靜電紡絲技術(shù)制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白纖維氈；所述的再生絲素蛋白纖維的直徑范圍為1. 5 μ m 5 μ m，所述的纖維氈的孔隙率為50% ；
(5)以乙醇體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇-水混合溶液作為后處理劑，對步驟(4)制備的纖維氈浸入該后處理劑中拉伸1. 5倍后，在所述后處理劑中定長浸泡120min，取出晾干， 即得到最終含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架；所述的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的斷裂伸長率為5%。
權(quán)利要求
1.一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架，其特征是所述的再生絲素蛋白組織工程支架為混合有血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白的再生絲素蛋白纖維構(gòu)成的具有三維交錯網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)特征的纖維氈，其中血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白在所述再生絲素蛋白纖維中均勻分散；所述的血管內(nèi)皮生長因子的質(zhì)量占所述再生絲素蛋白纖維總質(zhì)量的3. 5X ΙΟ"5 9. 5X 10_5%，所述的牛血清蛋白的質(zhì)量占所述再生絲素蛋白纖維總質(zhì)量的 1. 5Χ1(Γ3 4Χ1(Γ3%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架，其特征在于，所述的再生絲素蛋白纖維的直徑范圍為200nm 5μπι;所述的組織工程支架的斷裂伸長率為5% 12%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架，其特征在于，所述的纖維氈的孔隙率為50 90%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架，其特征在于，所述的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架用于生物醫(yī)用領(lǐng)域， 包括用于長段尿道狹窄或皮膚損傷的修復(fù)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法，其特征是包括以下步驟(1)以蠶繭為原料，經(jīng)脫膠、溶解、透析、濃縮后，制備質(zhì)量百分比為30 40%的再生絲素蛋白水溶液；所述再生絲素蛋白水溶液的制備步驟如下將蠶繭用質(zhì)量百分比為0. 3 0. 7%的碳酸鈉水溶液脫膠后，溶解于摩爾濃度為9. 0 9. 5mol/L的溴化鋰水溶液中，得到再生絲素蛋白-溴化鋰水溶液；將此溶液離心、過濾、透析和濃縮，得到質(zhì)量百分比為30 40%的再生絲素蛋白水溶液；(2)以水為溶劑，配制血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液，所述水溶液中血管內(nèi)皮生長因子的質(zhì)量濃度為15 25 μ g/ml，牛血清蛋白的質(zhì)量濃度為0. 6 lmg/ml ；(3)將所述再生絲素蛋白水溶液與所述血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液以 60 1 130 1的體積比混合，制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液；(4)以步驟C3)制備的含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液為紡絲液，采用靜電紡絲技術(shù)制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白纖維氈；(5)以乙醇-水混合溶液作為后處理劑，對步驟(4)制備的再生絲素蛋白纖維氈進行后處理，取出晾干，即得到最終含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架；所述的組織工程支架的斷裂伸長率為5% 12% ；所述的后處理是指將靜電紡制得的纖維氈浸入所述后處理劑中拉伸1. 125 1. 5倍后，在所述后處理劑中定長浸泡30 120min。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法，其特征在于，所述的蠶繭為桑蠶繭、柞蠶繭或蓖麻蠶繭中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法，其特征在于，所述的靜電紡絲技術(shù)制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白纖維氈時的紡絲環(huán)境溫度為2 6°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架的制備方法，其特征在于，所述的乙醇-水混合溶液中乙醇占乙醇-水混合溶液總體積的 75 95%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白組織工程支架及其制備方法，包括(1)以蠶繭為原料，制備再生絲素蛋白水溶液；(2)配制血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白水溶液；(3)將(1)和(2)所制溶液混合，制備含血管內(nèi)皮生長因子的再生絲素蛋白溶液；(4)將(3)制備的溶液作為紡絲液，采用靜電紡絲技術(shù)制備組織工程支架，所述的工程支架為混合有血管內(nèi)皮生長因子和牛血清蛋白的再生絲素蛋白纖維構(gòu)成的具有三維交錯網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)特征的纖維氈；(5)對支架進行后處理，以提高其力學(xué)性能。該方法制備的組織工程支架，可緩釋血管內(nèi)皮生長因子，促進血管生成，其用于生物醫(yī)用領(lǐng)域，包括用于長段尿道狹窄或皮膚損傷的修復(fù)。
文檔編號A61L27/54GK102488929SQ20111042491
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月16日
發(fā)明者張耀鵬, 杭怡春, 潘輝, 范蘇娜, 邵惠麗 申請人:東華大學(xué)