專利名稱：一種ps-脂質(zhì)體合成工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種脂質(zhì)體合成工藝，特別涉及一種PS-脂質(zhì)體合成工藝，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
21世紀(jì)腦研究將是生命科學(xué)研究的主流，隨著我國人民生活水平的提高和人口的老齡化，對于急性腦血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)變性病等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病新型藥物的開發(fā)將變?yōu)楦悠惹小?
脂質(zhì)體(liposome，或稱類脂小球，液晶微囊)以磷脂、膽固醇等類脂質(zhì)為膜材，具有類細胞膜結(jié)構(gòu)，故作為藥物的載體，能被單核吞噬細胞系統(tǒng)吞噬，增加藥物對淋巴組織的指向性和靶組織的滯留性。近年的生物學(xué)研究表明磷脂酰絲氨酸(簡稱PS)作為膜表面的標(biāo)記物在周圍組織的巨噬細胞、血管內(nèi)皮細胞吞噬凋亡細胞的過程中發(fā)揮著極為重要的定向誘導(dǎo)作用，巨噬細胞在進行吞噬作用后能夠產(chǎn)生轉(zhuǎn)化生長因子-β (Transforminggrowth factor-β TGF-β )等抗炎性介質(zhì)，限制炎癥反應(yīng)的發(fā)生。因此,本領(lǐng)域技術(shù)人員急需研發(fā)一種PS-脂質(zhì)體合成工藝。

發(fā)明內(nèi)容
為解決現(xiàn)在技術(shù)中的上述不足，本發(fā)明的目的是提供一種PS-脂質(zhì)體合成工藝，該合成工藝簡單易控制、工藝要求低，且生產(chǎn)過程中無副產(chǎn)物。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的
一種PS-脂質(zhì)體合成工藝，包括以下步驟
(1)、將脂質(zhì)體、人體非必需氨基酸和三氯甲烷按體積百分比混合均勻；
(2)、將(I)中的混合物干餾；
(3)、將(2)的混合物真空干燥，然后加入CMF-PBS，使之成懸濁樣液體；
(4)、將(3)中的懸濁液用超聲波粉碎至成透明樣液體，然后離心，取上清液；
(5)、將(4)中的上清液用SaltoriusFilter (0. 22Mm)過濾滅菌，制得PS-脂質(zhì)體溶液。所述的人體非必需氨基酸為磷脂酰絲氨酸和磷脂酰膽堿。所述的步驟(I)中的體積百分比為
脂質(zhì)體40%-55%
磷脂酰絲氨酸30%-48%
憐脂酸膽喊10%_12%
三氯甲烷5%-9%。作為優(yōu)選的，一種PS-脂質(zhì)體合成工藝，所述的步驟(I)中的體積百分比為 脂質(zhì)體45%
磷脂酰絲氨酸38%
磷脂酰膽堿10%三氯甲烷7%。所述的步驟(4)中的離心溫度為4°C。本發(fā)明的PS-脂質(zhì)體合成工藝，工藝簡單易控制、工藝要求低，且生產(chǎn)過程中無副產(chǎn)物，安全環(huán)保。
具體實施方式
實施例I
將45ml脂質(zhì)體、38ml磷脂酰絲氨酸、IOml磷脂酰膽堿與7ml三氯甲烷混合，混合均勻后干餾，將干餾出來的產(chǎn)物真空干燥后加入CMF-PBS成懸濁樣液體，然后用超聲波粉碎致成透明樣溶液，4°C離心分離后取上清液,用Saltorius Filter (O. 22μηι)過濾滅菌,制得PS-脂質(zhì)體溶液。
實施例2
將55ml脂質(zhì)體、30ml磷脂酰絲氨酸、IOml磷脂酰膽堿與5ml三氯甲烷混合，混合均勻后干餾，將干餾出來的產(chǎn)物真空干燥后加入CMF-PBS成懸濁樣液體，然后用超聲波粉碎致成透明樣溶液，4°C離心分離后取上清液,用Saltorius Filter (O. 22Mm)過濾滅菌,制得PS-脂質(zhì)體溶液。實施例3
將40ml脂質(zhì)體、39ml磷脂酰絲氨酸、12ml磷脂酰膽堿與9ml三氯甲烷混合，混合均勻后干餾，將干餾出來的產(chǎn)物真空干燥后加入CMF-PBS成懸濁樣液體，然后用超聲波粉碎致成透明樣溶液，4°C離心分離后取上清液,用Saltorius Filter (O. 22μηι)過濾滅菌,制得PS-脂質(zhì)體溶液。實施例4
將52ml脂質(zhì)體、31ml磷脂酰絲氨酸、Ilml磷脂酰膽堿與6ml三氯甲烷混合，混合均勻后干餾，將干餾出來的產(chǎn)物真空干燥后加入CMF-PBS成懸濁樣液體，然后用超聲波粉碎致成透明樣溶液，4°C離心分離后取上清液,用Saltorius Filter (O. 22μηι)過濾滅菌,制得PS-脂質(zhì)體溶液。性能測試
將上述實施例1-4制得的PS-脂質(zhì)體進行粒徑、包封率和表面張力的檢測。將PS-脂質(zhì)體溶液用10mmol/L乙酸銨、50mmol/L Tris溶液(PH=7. 5)調(diào)配至O. 3-0. 6g/L，滴在有支持膜的銅網(wǎng)上，濾紙吸干，再滴加鑰酸銨，濾紙吸干，自然干燥30min，電鏡觀察PS-脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)和粒徑大小，在電鏡照片上隨機取10個不同的視野，分別測量PS-脂質(zhì)體的直徑，將此直徑乘以校正系統(tǒng)O. 707即為PS-脂質(zhì)體粒徑。量取PS-脂質(zhì)體溶液O. 5ml，用PBS稀釋至5. Oml，4 °C下，以37000r/min離心30min。棄上清液以去除包裹的PS，沉積于底部的即為脂質(zhì)體小囊，將脂質(zhì)體小囊以PBS稀釋至I. 0ml。分別取200uL脂質(zhì)體小囊液和IOOuL PS-脂質(zhì)體溶液，加入100g/L Triton100溶解，用Folin酚試劑法測定其中蛋白質(zhì)的含量。脂質(zhì)體小囊液中蛋白質(zhì)的含量與脂質(zhì)體溶液中蛋白質(zhì)的含量的比值即為PS-脂質(zhì)體的包封率。取PS-脂質(zhì)體用表面張力儀測定5min。測試結(jié)果見下表。表
權(quán)利要求
1.一種PS-脂質(zhì)體合成工藝，其特征在于包括以下步驟 (1)、將脂質(zhì)體、人體非必需氨基酸和三氯甲烷按體積百分比混合均勻； (2)、將(I)中的混合物干餾； (3)、將(2)的混合物真空干燥，然后加入CMF-PBS，使之成懸濁樣液體； (4)、將(3)中的懸濁液用超聲波粉碎至成透明樣液體，然后離心，取上清液；(5)、將(4)中的上清液用SaltoriusFilter (0. 22Mm)過濾滅菌，制得PS-脂質(zhì)體溶液。
2.如權(quán)利要求I所述的PS-脂質(zhì)體合成工藝，其特征在于所述的人體非必需氨基酸為磷脂酰絲氨酸和磷脂酰膽堿。
3.如權(quán)利要求2所述的PS-脂質(zhì)體合成工藝，其特征在于所述的步驟(I)中的體積百分比為 脂質(zhì)體40%-55% 磷脂酰絲氨酸30%-48% 憐脂酸膽喊10%_12% 三氯甲烷5%-9%。
4.如權(quán)利要求2所述的PS-脂質(zhì)體合成工藝，其特征在于所述的步驟(I)中的體積百分比為 脂質(zhì)體45% 磷脂酰絲氨酸38% 磷脂酰膽堿10% 三氯甲烷7%。
5.如權(quán)利要求I所述的PS-脂質(zhì)體合成工藝，其特征在于所述的步驟(4)中的離心溫度為4°C。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種脂質(zhì)體合成工藝，特別涉及一種PS-脂質(zhì)體合成工藝，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，包括以下步驟(1)、將脂質(zhì)體、人體非必需氨基酸和三氯甲烷按體積百分比混合均勻；(2)、將(1)中的混合物干餾；(3)、將(2)的混合物真空干燥，然后加入CMF-PBS，使之成懸濁樣液體；(4)、將(3)中的懸濁液用超聲波粉碎至成透明樣液體，然后離心，取上清液；(5)、將(4)中的上清液用SaltoriusFilter(0.22μm)過濾滅菌，制得PS-脂質(zhì)體溶液。人體非必需氨基酸為磷脂酰絲氨酸和磷脂酰膽堿。本發(fā)明的PS-脂質(zhì)體合成工藝，工藝簡單易控制、工藝要求低，且生產(chǎn)過程中無副產(chǎn)物，安全環(huán)保。
文檔編號A61K9/127GK102793669SQ20121031350
公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月30日
發(fā)明者張新華, 張若煜 申請人:紹興文理學(xué)院