專利名稱：4-(苯基-哌啶-4-基亞基-甲基)-苯甲酰胺衍生物及其在治療疼痛、焦慮或胃腸疾病中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的化合物、其制備方法、用途以及含有該新化合物的藥物組合物。該新化合物適用于治療、特別是疼痛、焦慮和功能性胃腸疾病。
背景技術(shù)：
已經(jīng)確定，δ受體在許多身體功能例如循環(huán)和疼痛系統(tǒng)中起著作用。因此發(fā)現(xiàn)，δ受體的配體可能可以用作止痛劑和/或抗高血壓藥劑。δ受體的配體還顯示出具有免疫調(diào)節(jié)活性。
目前已經(jīng)確定了至少三種不同的類阿片(opioid)受體(μ、δ和κ)，并且所有這三種受體在許多物種、包括人的中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中均清晰可見。當(dāng)一種或多種這些受體被活化時，在各種動物模型中均觀察到痛覺缺失。
少數(shù)例外的是，目前可供選擇的阿片類δ配體是天然肽類的，并且不適用于全身給藥。非肽δ-激動劑的一個實例是SNC80(Bilsky E.J.等，Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，273(1)，pp.359-366(1995))。無論如何，仍然需要選擇性的δ-激動劑，這些激動劑不僅僅具有改善的選擇性，而且具有改善的副作用特性。
因此，本發(fā)明的問題是發(fā)現(xiàn)比現(xiàn)有的μ興激動劑具有改善的止痛作用、同時具有改善的副作用特性以及具有改善的系統(tǒng)功效的新的止痛劑。
已經(jīng)確定存在于現(xiàn)有技術(shù)中的止痛劑有許多缺點，即它們的藥物動力學(xué)差，并且當(dāng)全身給藥時不能止痛。此外，已經(jīng)證明，當(dāng)系統(tǒng)給藥時，現(xiàn)有技術(shù)中所述的優(yōu)選的δ激動劑化合物顯示出顯著的驚厥作用。
我們現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)某些化合物具有出人意料的改善的性質(zhì)，即改善的δ-激動劑功效、體內(nèi)功效、藥物動力學(xué)、生物利用度、體外穩(wěn)定性和/或低毒性。
發(fā)明概述本發(fā)明的新化合物由式I所定義 其中R1選自下列基團之一(i)苯基； (ii)吡啶基； (iii)噻吩基； (iv)呋喃基 (v)咪唑基
(vi)三唑基 (vii)吡咯基 (viii)噻唑基 (ix)吡啶基-N-氧化物 其中每個R1苯基環(huán)和R1雜芳環(huán)任選地和獨立地被1、2或3個獨立選自直鏈或支鏈C1-C6烷基、NO2、CF3、C1-C6烷氧基、氯、氟、溴和碘的取代基進一步取代。苯基環(huán)或雜芳環(huán)上的取代基可以出現(xiàn)在所述環(huán)系上的任何位置；本發(fā)明的另一具體實施方式
是圖I的化合物，其中R1如上所定義，并且每個R1苯基環(huán)和R1雜芳環(huán)可以進一步獨立地被甲基取代。
本發(fā)明的另一具體實施方式
是圖I的化合物，其中R1是苯基、吡咯基、吡啶基、噻吩基或呋喃基，它們?nèi)芜x地在R1苯基或R1雜芳環(huán)上帶有1或2個優(yōu)選的取代基。
本發(fā)明的另一具體實施方式
是圖I的化合物，其中R1是苯基、吡咯基或吡啶基，它們?nèi)芜x地在R1苯基或R1雜芳環(huán)上帶有1或2個優(yōu)選的取代基。
本發(fā)明的另一具體實施方式
是圖I的化合物，其中R1是噻吩基或呋喃基，它們?nèi)芜x地在R1雜芳環(huán)上帶有1或2個優(yōu)選的取代基。
本發(fā)明還包括式I化合物的鹽和旋光對映體，包括旋光對映體的鹽。
當(dāng)R1苯基環(huán)和R1雜芳環(huán)被取代時，優(yōu)選的取代基選自CF3、甲基、碘、溴、氟和氯中的任何一個。
在反應(yīng)方案1中的反應(yīng)步驟g，參見下文，使用鈀催化劑例如Pd(PPh3)4、在堿例如碳酸鈉存在下，通過通式II的中間體化合物與3-氨基苯基硼酸(boronic acid)反應(yīng)進行 其中PG是尿烷或尿烷保護基如Boc和CBZ或芐基或取代的芐基保護基例如2，4-二甲氧基芐基，得到通式III化合物
然后在標準條件下將其脫保護，并在還原條件下使用通式R1-CHO化合物將其烷基化，得到通式I化合物。
本發(fā)明的新化合物適用于治療、特別是治療各種疼痛如慢性痛、神經(jīng)性疼痛、急性痛、癌痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎引起的疼痛、偏頭痛、內(nèi)臟性痛等。當(dāng)然，該列舉不是窮舉。
本發(fā)明化合物適于用作免疫調(diào)節(jié)劑，特別是用于自身免疫疾病如關(guān)節(jié)炎，用于皮膚移植、器官移植和類似的外科手術(shù)需要，用于膠原病、各種變應(yīng)性疾病，用作抗腫瘤劑和抗病毒劑。
本發(fā)明適用于如下的疾病狀態(tài)，其中在范例中存在或者涉及類阿片受體的變性或機能障礙?？梢园ㄔ谠\斷技術(shù)和成象應(yīng)用例如正電子發(fā)射斷層照相(PET)中使用同位素標記的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明化合物適用于治療腹瀉、抑郁、焦慮和與壓力有關(guān)的疾病例如外傷后應(yīng)激癥、恐慌癥、廣泛性焦慮癥、社交恐怖癥和強制性障礙；小便失禁、各種精神疾病、咳嗽、肺水腫、各種胃腸疾病例如便秘、功能性胃腸疾病如腸道易激綜合征和功能性消化不良、帕金森氏病和其他運動障礙、外傷性腦損傷、中風(fēng)、心肌梗塞后的心保護、脊髓損傷和藥物成癮包括酒精、尼古丁、阿片樣物質(zhì)和其他藥物濫用，以及用于治療交感神經(jīng)系統(tǒng)疾病例如高血壓。
本發(fā)明化合物適于用作止痛劑以用于全身性麻醉和監(jiān)護麻醉護理。經(jīng)常采用具有不同性質(zhì)的試劑的組合以達到保持麻醉狀態(tài)所需的平衡效果(例如記憶缺失、痛覺缺失、肌肉松弛和鎮(zhèn)靜)。在該組合中包括吸入麻醉劑、安眠藥、抗焦慮藥、神經(jīng)肌肉阻滯劑和阿片樣物質(zhì)。
上述式I中的任何化合物在制備治療上述任何疾病的藥物中的用途也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本發(fā)明另一方面是患上述任何疾病患者的治療方法，該方法是將有效量的上述式I化合物對需要該治療的患者給藥。
本發(fā)明另一方面是通式II和III的中間體，
其中PG是氨基甲酸酯保護基例如Boc或CBZ，或者芐基或取代的芐基保護基如2，4-二甲氧基芐基。
制備方法實施例下面將通過反應(yīng)方案和實施例詳細描述本發(fā)明，這些反應(yīng)方案和實施例不應(yīng)解釋為對本發(fā)明的限制。
反應(yīng)方案1合成溴乙烯中間體6。
中間體24-(二甲氧基-磷酰基甲基)-苯甲酸甲酯。
在氮氣氛下，將原料1(11.2g，49mmol)與亞磷酸三甲酯(25mL)的混合物回流5小時。與甲苯共蒸餾除去過量的亞磷酸三甲酯，得到定量產(chǎn)率的化合物21HNM NMR(CDCl3)δ3.20(d，2H，J＝22Hz，CH2)，3.68(d，3H 10.8Hz，OCH3)，3.78(d，3H，11.2Hz，OCH3)，3.91(s，3H，OCH3)，7.38(m，2H，Ar-H)，8.00(d，2H，J＝8Hz，Ar-H)。
中間體34-(t-甲氧羰基-亞芐基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯。
在-78℃，向化合物2在無水THF中的溶液(200mL)中滴加二異丙基氨基鋰(32.7mL 1.5M，在己烷中，49mmol)。然后將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，加入N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(9.76g，49mmol，在100mL無水THF中)。12小時后，反應(yīng)混合物用水(300mL)終止反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取(3×300mL)。合并的有機相用MgSO4干燥并蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物，該產(chǎn)物經(jīng)閃式色譜純化，得到化合物3，為白色固體(5.64g，35％)IR(NaCl)3424，2974，2855，1718，1688，1606，1427，1362，1276cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.44(s，9H)，2.31(t，J＝5.5Hz，2H)，2.42(t，J＝5.5Hz，2H)，3.37(t，J＝5.5Hz，2H)，3.48(t，J＝5.5Hz，2H)，3.87(s，3H，OCH3)，6.33(s，1H，CH)，7.20(d J＝6.7Hz，2H，Ar-H)，7.94(d，J，＝6.7Hz，2H，Ar-H)；13C NMR(CDCl3)δ28.3，29.2，36.19，51.9，123.7，127.8，128.7，129.4，140.5，142.1，154.6，166.8。
中間體4(4-甲氧羰基-苯基)-甲基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯。
在0℃，向化合物3(5.2g，16mmol)和K2CO3(1.0g)在無水二氯甲烷(200mL)中的混合物中加入溴(2.9g，18mmol)在30mL CH2Cl2中的混合物。在室溫保持1.5小時，濾出K2CO3后，將該溶液濃縮。然后將殘余物溶解在乙酸乙酯(200mL)中，用水(200mL)、0.5M HCl(200mL)和鹽水(200mL)洗滌，用MgSO4干燥。除去溶劑，得到粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物從甲醇中重結(jié)晶，得到化合物4，為白色固體(6.07g，78％)IR(NaCl)3425，2969，1725，1669，1426，1365，1279，1243cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.28(s，9H)，1.75(m，1H)，1.90(m，1H)，2.1(m，2H)，3.08(br，2H)，3.90(s，3H，OCH3)，4.08(br，3H)，7.57(d，J＝8.4Hz，2H，Ar-H)7.98(d，J＝8.4Hz，2H，Ar-H)；13C NMR(CDCl3)δ28.3，36.6，38.3，40.3，52.1，63.2，72.9，129.0，130.3，130.4，141.9，154.4，166.3。
中間體54-[溴-4-羧基苯基)-亞甲基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯。
將化合物4(5.4g 11mol)在甲醇(300mL)和2.0M NaOH(100mL)中的溶液在40℃加熱3小時。過量收集固體，并真空干燥過夜。將干燥的鹽溶解在40％乙腈/水中，并用濃鹽酸調(diào)節(jié)至pH2。過濾分離出產(chǎn)物5(3.8g，87％)，為白色粉末1H NMR(CDCl3)δ1.45(s，9H，tBu)，2.22(dd，J＝5.5Hz，6.1Hz，2H)，2.64(dd，J＝5.5Hz，6.1Hz，2H)，3.34(dd，J＝5.5Hz，6.1Hz，2H)，3.54(dd，J＝5.5Hz，6.1Hz，2H)，7.35(d，J＝6.7Hz，2H，Ar-H)，8.08(d，J＝6.7Hz，2H，Ar-H)；13C NMR(CDCl3)δ28.3，31.5，34.2，44.0，115.3，12 8.7，129.4，130.2，137.7，145.2，154.6，170.3。
中間體64-[溴-(4-二異丙基氨基甲?；?苯基)-亞甲基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯。
在室溫，向酸(5)(50.27g，0.127mol，1.0當(dāng)量)在乙酸乙酯(350ml)中的輕懸浮液中加入二異丙胺(71.10ml，0.510mol，4.0當(dāng)量)和2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU，44.90g，0.140mol，1.1當(dāng)量)。攪拌所得淡白色懸浮液兩天后，加入水(200ml)終止反應(yīng)，并分離兩相。水相用二氯甲烷(100ml)反萃取兩次。合并的有機相用1M HCl溶液(150ml)和鹽水(100ml)洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，得到淡黃色油。粗產(chǎn)物在叔丁基甲基醚(300ml)中重結(jié)晶。濾液經(jīng)閃式色譜純化，用在己烷中的30％乙酸乙酯洗脫，并從(10∶90)乙酸乙酯∶己烷混合物中重結(jié)晶。合并白色固體產(chǎn)物(47.28g，產(chǎn)率78％)。
反應(yīng)方案2實施例1和中間體9的合成途徑
中間體7N，N-二異丙基-4-(3-氨基苯基-哌啶-4-基亞基-甲基)-苯甲酰胺。
在室溫，向溴乙烯6(9.09g，18.96mmol，1.0當(dāng)量)在甲苯(100ml)中的溶液中加入2-氨基硼酸(3.12g，22.75mmol，1.2當(dāng)量)，然后加入乙醇(20ml)和碳酸鈉(2M水溶液，23.7ml，47.4mmol，2.5當(dāng)量)。用氮氣吹掃15分鐘后，向該混合物中加入四(三苯基膦)鈀(0)(1.58g，1.37mmol，0.072當(dāng)量)，然后升溫至90℃。攪拌過夜后，使反應(yīng)物冷卻至室溫，分離各相。有機相用水(50ml)、然后用鹽水(50ml)洗滌兩次。水相用二氯甲烷(80ml)反萃取。后一有機相用水(50ml)、然后用鹽水(50ml)洗滌兩次。合并有機相，用硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)閃式色譜純化，用在己烷中的50％乙酸乙酯洗脫(6.06g，65％)。
中間體94-[1-(3-氨基-苯基)-1-哌啶-4-基亞基-甲基]-N，N-二異丙基-苯甲酰胺。
在室溫，向氨基甲酸酯7(5.20g，10.6mmol，1.0當(dāng)量)在二氯甲烷(100ml)中的溶液中加入三氟乙酸(TFA)(8.15ml，105.8mmol，10.0當(dāng)量)。攪拌3小時后，加入2M氫氧化鈉水溶液(100ml)終止反應(yīng)。分離各相。有機相用2M氫氧化鈉水溶液(50ml)洗滌兩次，用硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，得到3.81g所需化合物(92％)。
一等分脫保護的胺(450mg，1.15mmol)經(jīng)反相制備HPLC純化(梯度在A中的10％-5 0％B，A0.1％TFA水溶液；B0.1％TFA的乙腈溶液)。減壓濃度餾分并用2M氫氧化鈉水溶液中和至pH＝10。該混合物用乙酸乙酯(20ml)萃取兩次。合并有機相，用硫酸鈉干燥，過濾。向該混合物中加入在乙醚中的1M HCl溶液(4ml，約3.5當(dāng)量)。然后減壓濃縮所得混合物。白色固體與乙醚一起研制，并減壓濃縮，得到336.7mg產(chǎn)物。
1H NMR(δ，ppm)(400MHz，CD3OD)7.51(t，J＝8.4Hz，1H，Ar-H)；7.20-7.38(m，7H，Ar-H)；3.81(br s，1H，NCH)；3.61(br s，1H，NCH)；3.26(m，4H，NCH2)；2.59(m，4H，NCH2)；1.48(br s，6H，CH3)；1.13(br s，6H，CH3)元素分析實測值C，57.88；H，7.08；N，7.54。C25H33N3O x 3.5HCl的計算值C，57.84；H，7.09；N，8.09％。
實施例1N，N-二異丙基-4-(3-氨基苯基-N-芐基-哌啶-4-基亞基-甲基)-苯甲酰胺。
(i)制備N，N-二異丙基-4-(溴-N-芐基-哌啶-4-基亞基-甲基)-苯甲酰胺(化合物10)在室溫，用在二氯甲烷(25mL)中的TFA(25mL)處理如上制備的化合物6(2.26g，5.0mmoL)。2小時后，濃縮反應(yīng)混合物，得到殘余物(化合物8)，將其溶解在乙腈(20mL)中，并在室溫與芐基溴(5.0mmol)反應(yīng)2小時。濃縮反應(yīng)混合物，然后溶解在乙酸乙酯(100mL)中。有機溶液用1N NH4OH和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥。除去溶劑，得到粗產(chǎn)物，經(jīng)閃式色譜純化，得到化合物8。
在0℃，向胺(8)(4.76g，13.6mmol)在二氯甲烷(120mL)中的的溶液中加入三乙胺(5.7mL，41.0mmol)和芐基溴(1.8mL，15.1mmol)。使反應(yīng)物逐漸溫?zé)嶂潦覝兀?4小時后，反應(yīng)物用水(1×100mL)洗滌，用硫酸鎂干燥有機層，過濾并濃縮。殘余物經(jīng)閃式色譜純化，用在己烷中的50％-60％乙酸乙酯洗脫，得到3.80g(產(chǎn)率64％)產(chǎn)物。
(ii)N，N-二異丙基-4-(3-氨基苯基-N-芐基-哌啶-4-基亞基-甲基)-苯甲酰胺(實施例1)向裝有8.5g溴乙烯(10)的燒瓶中加入二甲苯(120mL)、乙醇(80mL)和3-氨基苯基硼酸(3.96g，1.5eq)。使該溶液脫氣30分鐘，然后經(jīng)套管加入碳酸鈉水溶液(29.0mL，2N，3.0eq，脫氣30分鐘)。然后加入四三苯基膦鈀(1.67g，0.075eq)。將反應(yīng)混合物脫氣10分鐘，然后在80℃攪拌過夜。將反應(yīng)物冷卻，用水稀釋，經(jīng)硅藻土墊過濾。除去有機物，水層用乙醚萃取(2×100mL)。合并的有機提取物用無水硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。殘余物經(jīng)閃式色譜純化，用2％MeOH/CH2Cl2至4％MeOH/CH2Cl2洗脫。
實施例1(另一制備方法)N，N-二異丙基-4-(3-氨基苯基-N-芐基-哌啶-4-基亞基-甲基)-苯甲酰胺。
在室溫，向胺9(375mg，0.96mmol，1.0當(dāng)量)在四氫呋喃(20ml)中的溶液中加入苯甲醛(117μl，1.15mmol，1.2當(dāng)量)。攪拌10分鐘后，向溶液中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(265mg，1.25mmol，1.3當(dāng)量)。攪拌過夜后，反應(yīng)混合物用二氯甲烷(10ml)和2M氫氧化鈉水溶液(15ml)稀釋。分離各相，有機相用鹽水(15ml)洗滌。前一水相用二氯甲烷反萃取三次(15ml)。合并有機相，用硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)反相制備HPLC純化(梯度在A中的10％-50％B，A0.1％TFA水溶液；B0.1％TFA的乙腈溶液)。減壓濃縮餾分，并用2M氫氧化鈉水溶液中和至pH＝11。該混合物然后用乙酸乙酯萃取兩次(30ml)。合并有機相，用硫酸鈉干燥，過濾。向該混合物中加入在乙醚中的1M HCl溶液(4ml，約3.5當(dāng)量)。然后減壓濃縮所得混合物。白色固體用乙醚研制并減壓濃縮，得到294mg產(chǎn)物(產(chǎn)率53％)。
1H NMR(δ，ppm)(400MHz，DMSO)7.56(s，2H，Ar-H)；7.41(m，4H，Ar-H)；7.22(d，J＝7.4Hz，2H，Ar-H)；7.08-7.15(m，4H，Ar-H)；6.96(s，1H，Ar-H)；4.26(s，2H，NCH2Ar)；4.00(br s，2H，NH2)；3.60(br s，2H，NCH)；3.32(br s，2H，CH2)；3.00(brs，2H，CH2)；257(m，4H，NCH2)；1.31(br s，6H，CH3)；1.06(br s，6H，CH3)元素分析實測值C，64.33；H，7.10；N，6.40。C32H39N3O x 3.2HCl的計算值C，64.23；H，7.11；N，7.02％。
按照下列一般合成方法制備了附加的實施例2-13。上面對實施例1所述的方法是典型的。
向化合物7在無水四氫呋喃(THF)中的溶液中加入醛(1-1.5eq)，然后加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1-1.6eq)。在室溫和氮氣氛下攪拌反應(yīng)物延長的時間(6-48小時)以確保反應(yīng)完全。然后對反應(yīng)混合物進行標準的后處理和標準的純化。THF的量不是關(guān)鍵的。優(yōu)選的用量是每克胺約30mL。
合成實施例的分析數(shù)據(jù)示于下表1中。
表1合成實施例的分析數(shù)據(jù)。



藥物組合物本發(fā)明新化合物可口服給藥、舌下給藥、肌內(nèi)給藥、皮下給藥、局部給藥、鼻內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、胸內(nèi)給藥、靜脈內(nèi)給藥、硬膜外給藥、鞘內(nèi)給藥、腦室內(nèi)給藥和通過注射到關(guān)節(jié)內(nèi)來給藥。
優(yōu)選的給藥途徑是口服給藥、靜脈內(nèi)給藥或肌內(nèi)給藥。
劑量將取決于給藥途徑、疾病嚴重程度、患者年齡和體重，以及臨床醫(yī)師在決定最適于特定患者的個體治療方案和劑量水平時通常所考慮的其它因素。
為了用本發(fā)明化合物制備藥物組合物，惰性可藥用載體可以是固體或液體。固體形式的制劑包括粉劑、片劑、可分散粒劑、膠囊、扁囊劑和栓劑。
固體載體可以是一種或多種還起稀釋劑、矯味劑、助溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑或片劑崩解劑作用的物質(zhì)；其也可以是包囊材料。
在粉劑中，載體是細分散的固體，其與細分散的活性組分形成混合物。在片劑中，活性組分與具有所需粘合性質(zhì)的載體以適當(dāng)比例混和，并壓制成所需形狀和大小。
為了制備栓劑組合物，首先將低熔點蠟例如脂肪酸甘油酯與可可脂的混合物熔化，然后通過例如攪拌將活性組分分散在該熔化物中。將熔化的均勻混合物倒入具有適宜大小的模子中，讓其冷卻和固化。合適的載體有碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、乳糖、糖、果膠、糊精、淀粉、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點蠟、可可脂等。
鹽包括但不限于可藥用鹽。在本發(fā)明范圍內(nèi)的可藥用鹽的實例包括乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、酒石酸氫鹽、氫溴化物、乙酸鈣鹽、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽、丙酸酯十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽(glucaptate)、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇酰基對氨基苯胂酸鹽、己雷瑣酚鹽、哈胺鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥萘甲酸鹽、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、撲酸鹽(雙羥萘酸鹽)、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、堿式乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽、triethiodide和芐星鹽。在本發(fā)明范圍內(nèi)的非可藥用鹽的實例包括氫碘酸鹽、高氯酸鹽和四氟硼酸鹽。由于具有有利的物理和/或化學(xué)性質(zhì)例如結(jié)晶性，可藥用鹽也可能是有用的。
優(yōu)選的可藥用鹽是鹽酸鹽、硫酸鹽和酒石酸氫鹽。鹽酸鹽和硫酸鹽是特別優(yōu)選的。
術(shù)語組合物意欲包括這樣的制劑，即活性組分與包囊材料的制劑，其中包囊材料作為載體提供膠囊，活性組分(具有或不具有其它載體)在膠囊中被載體包圍，由此載體與活性組分有關(guān)聯(lián)。類似地，也包括扁囊劑。
片劑、粉劑、扁囊劑和膠囊可用作適于口服給藥的固體劑型。
液體形式的組合物包括溶液、懸浮液和乳劑。對于適于非胃腸道給藥的液體制劑，可提及的實例有活性組分的無菌水或水-丙二醇溶液。液體組合物還可以在含水丙二醇溶液中配制成溶液。
口服給藥的水溶液可通過將活性組分溶解在水中，并按照需要加入合適的著色劑、矯味劑、穩(wěn)定劑和增稠劑來制得。水懸浮液可通過將細分的活性組分與粘性材料例如天然或合成樹膠、樹脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和藥物制劑領(lǐng)域已知的其它懸浮劑一起分散在水中來制得。
藥物組合物優(yōu)選呈單位劑型的形式。在單位劑型中，組合物被分成含有適當(dāng)量活性組分的單位劑量。單位劑型可以是包裝的制劑，含有不連續(xù)量的制劑的包裝，例如包裝的片劑、膠囊和在小瓶或安瓿中的粉劑。單位劑型還可以是膠囊、扁囊劑或片劑自身，或者其可以是適當(dāng)數(shù)目的任何這些包裝的形式。
生物評價體外模型細胞培養(yǎng)物A.在裝有不含鈣的DMEM、10％FBS、5％BCS、0.1％Pluronic F-68和600μg/ml新霉素的搖瓶內(nèi)，讓表達克隆的人μ、δ和κ受體和新霉素抗性的人293 S細胞在懸浮液中于37℃和5％CO2下生長。
B.稱重小鼠和大鼠腦，在冰冷的PBS(含有2.5mM EDTA，pH7.4)中洗滌。在冰冷的裂解緩沖液(50mM Tris，pH7.0，2.5mM EDTA，在臨用前加入苯甲磺酰氟(0.5M在DMSO∶乙醇中的貯備液)至終濃度為0.5mM)中，用polytron將腦勻化15秒(小鼠)或30秒(大鼠)。
膜制備將細胞離心，重新懸浮在裂解緩沖液(50mM Tris，pH7.0，2.5mMEDTA，在臨用前加入PMSF(0.1M在乙醇中的貯備液)至終濃度為0.1mM)中，在冰上培養(yǎng)15分鐘，然后用polytron勻化30秒。將懸浮液在4℃以1000g(最大)離心10分鐘。把上清液在冰上保存，將離心沉淀重新懸浮，并如上所述離心。將兩次離心所獲得的上清液合并，并以46,000g(最大)離心30分鐘。將離心沉淀重新懸浮在冷的Tris緩沖液(50mM Tris/Cl，pH7.0)中，并再次離心。將最后的離心沉淀重新懸浮在膜緩沖液(50mM Tris，0.32M蔗糖，pH7.0)中。將在聚丙烯管中的等份試樣(1ml)在干冰/乙醇中冷凍，在-70℃貯藏直至使用。通過用SDS改進的Lowry分析測定蛋白濃度。
結(jié)合測定將膜在37℃融化，在冰上冷卻，經(jīng)過25規(guī)格的針頭3次，稀釋到結(jié)合緩沖液(50mM Tris，3mM MgCl2，1mg/ml BSA(Sigma A-7888)，pH7.4，經(jīng)由0.22μm濾器過濾后在4℃貯藏，并且向其中新加入了5μg/ml抑肽酶，10μM苯丁抑制素，10μM diprotin A，沒有DTT)中。將100μl等份試樣加到含有100μl適當(dāng)放射配體和100μl不同濃度測試化合物的冰冷的12×75mm聚丙烯管中。分別不在和在10μM納洛酮存在下測定總的(TB)和非特異性(NS)結(jié)合。將所述管渦旋，在25℃培養(yǎng)60-75分鐘，然后將內(nèi)容物迅速真空過濾，并用約12ml/管冰冷的洗滌緩沖液(50mM Tris，pH7.0，3mM MgCl2)經(jīng)由在0.1％聚乙烯亞胺中預(yù)浸泡至少2小時的GF/B濾器(Whatman)洗滌。將濾器在含有6-7ml閃爍液體的小瓶中浸泡至少12小時后，用β計數(shù)器測定保留在濾器上的放射性(dpm)。如果測定是在96-孔平板上進行，過濾是在96孔PEI浸泡的單濾器上進行的，將其用3×1ml洗滌緩沖液洗滌，并在烘箱中于55℃干燥2小時。加入50μl MS-20閃爍液體/孔后，將濾器平板在TopCount(Packard)中計數(shù)。
功能測定通過測定化合物受體復(fù)合物激活GTP與受體所偶聯(lián)的G-蛋白結(jié)合的程度來測定化合物的激動活性。在GTP結(jié)合測定中，將GTP[γ]35S與測試化合物和膜混和，其中所述膜得自表達克隆的人阿片樣物質(zhì)受體的HEK-293S細胞或得自勻化的大鼠和小鼠腦。激動劑次級這些膜中的GTP[γ]35S結(jié)合。從劑量-反應(yīng)曲線中確定EC50和Emax值。用δ拮抗劑納曲吲哚將劑量-反應(yīng)曲線右移，以證實激動活性是經(jīng)由δ受體介導(dǎo)的。
關(guān)于大鼠腦GTP的操作將大鼠腦膜在37℃融化，經(jīng)過25-規(guī)格的鈍頭針頭3次，在GTPγS結(jié)合液(50mM Hepes，20mM NaOH，100mM NaCl，1mM EDTA，5mMMgCl2，pH7.4，新加入1mM DTT，0.1％BSA)中稀釋。最后將120μlGDP加到膜稀釋液中。從有10個點的劑量-反應(yīng)曲線確定EC50和Emax值，所述劑量-反應(yīng)曲線是在300μl中用適當(dāng)量的膜蛋白(20μg/孔)和100000-130000dpm的GTPγ35S/孔(0.11-0.14μM)制作的。不在或在3μM SNC-80存在下確定基礎(chǔ)和最大刺激的結(jié)合。
數(shù)據(jù)分析特異性結(jié)合(SB)計算為TB-NS，在不同測試化合物存在下的SB以對照SB的百分比表示。在特異性結(jié)合的放射配體置換中，關(guān)于配體的IC50值和Hill系數(shù)(nH)是用logit圖或曲線擬合程序例如Ligand，GraphPad Prism，SigmaPlot或ReceptorFit計算的。Ki值是用Cheng-Prussoff公式計算的。在至少3條置換曲線中報告關(guān)于測試的配體的IC50、Ki和nH的平均值±S.E.M.值。本發(fā)明化合物的生物活性如表2所示。
表2生物數(shù)據(jù)
受體飽和實驗放射配體Kδ值是通過用合適的放射配體在細胞膜上進行結(jié)合測定來進行的，其中放射配體的濃度是所估計的Kδ值的0.2至5倍(如果所需放射配體的量是可行的，最高達10倍)。特異性放射配體結(jié)合是用μmol/mg膜蛋白表示。各個實驗的Kδ和Bmax值是通過依據(jù)以點模型，將特異性結(jié)合的(B)對nM游離(F)放射配體非線性擬合而獲得的。
使用Von Frey試驗測定機械異常性疼痛使用Chaplan等人(1994)描述的方法，在早晨8點至下午4點之間進行測試。將大鼠放置在有機玻璃籠子中的金屬絲網(wǎng)狀地板上，該金屬絲網(wǎng)狀底面可以讓大鼠的爪子穿過，讓它們熟悉環(huán)境10-15分鐘。測試區(qū)域是左后爪的中部足底。讓爪子與一系列δVon Frey細絲接觸，這些細絲具有對數(shù)增加的剛度(0.41、0.69、1.20、2.04、3.63、5.50、8.51和15.14克；Stoelting，III，USA)。用足以引起輕微的對著爪子彎曲的力將Von Frey細絲從網(wǎng)狀地板垂直施加到足底表面上，并保持大約6至8秒。如果爪子迅速縮回，則記錄為正反應(yīng)。在除去細絲時立即退縮也視為正反應(yīng)。步行移動視為模糊反應(yīng)，在這種情況下，重復(fù)刺激。
試驗方案對于FCA治療組，在手術(shù)后第1天測試動物。使用Dixon的上下法(1980)測定50％縮回閾值。用在系列細絲中間的2.04g的細絲開始測試。無論是增加還是減少，刺激總是以連續(xù)途徑給予。當(dāng)爪子對于開始選擇的細絲沒有縮回反應(yīng)時，則給予更強的刺激；在有爪子縮回反應(yīng)時，下一次給予更弱的刺激。通過該方法的最佳閾值計算需要在緊挨著50％閾值的鄰近區(qū)域中的6個反應(yīng)，并且當(dāng)發(fā)生第一次反應(yīng)改變，例如閾值第一次交叉時，計數(shù)這6個反應(yīng)。當(dāng)閾值落在刺激范圍的外面時，分別賦予15.14(正常敏感性)或0.41(最大異常性疼痛)的值。使用慣例將所得正反應(yīng)和負反應(yīng)模式制成表，X＝?jīng)]有縮回反應(yīng)；0＝縮回反應(yīng)，并且使用下述公式以內(nèi)插值替換法獲得50％縮回閾值50％g閾值＝10(Xf+Kδ)/10,000其中Xf＝所用的最后一個Von Frey細絲的值(對數(shù)單位)；k＝關(guān)于正/負反應(yīng)模式的表格值(參見Chaplan等人(1994))；且δ＝刺激之間的平均差值(對數(shù)單位)。在這里，δ＝0.224。
依據(jù)Chaplan等人(1994)，將Von Frey閾值轉(zhuǎn)化成最大可能效果的百分比(％MPE)。使用下述公式計算％MPE 給藥測試化合物在von Frey測試之前，給大鼠注射(皮下、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)注射或口服)測試物，測試化合物給藥與von Frey測試之間的時間長短根據(jù)測試化合物的性質(zhì)來改變。
扭曲試驗當(dāng)腹膜內(nèi)施用到小鼠中時，乙酸會引起腹部收縮。之后小鼠會以典型模式伸展它們的身體。當(dāng)施用鎮(zhèn)痛藥物時，就很少能觀測到所述動作，并且選擇該藥物作為可能的良好候選對象。
只有當(dāng)出現(xiàn)下列要素時，才考慮是完全和典型的扭曲反射動物不處于運動中；后背下部輕微凹陷；可觀察到兩個爪子的足底面。在該測定中，以1至100μmol/kg給藥后，本發(fā)明化合物表現(xiàn)出對扭曲反應(yīng)的顯著抑制。
(i)溶液制備乙酸(AcOH)將120μL乙酸加到19.88ml蒸餾水中以獲得終體積為20ml，終濃度為0.6％的AcOH溶液。然后將該溶液混和(渦旋)，并準備注射。
化合物(藥物)制備各種化合物，并依據(jù)標準操作溶解在最合適的載體中。
(ii)溶液給藥在測試之前20、30或40分鐘(依據(jù)化合物類別及其特征)，將化合物(藥物)以10ml/kg(指小鼠平均體重)的劑量口服給藥、腹膜內(nèi)給藥(i.p.)、皮下給藥(s.c.)或靜脈內(nèi)給藥(i.v.)。當(dāng)化合物中央給藥時心室內(nèi)(i.c.v.)或鞘內(nèi)(i.t.)給藥，給予1L的體積。
AcOH在臨測試之前以10ml/kg(指小鼠平均體重)的劑量在兩個位點腹膜內(nèi)給藥(i.p.)。
(iii)測試觀察動物(小鼠)20分鐘，記錄反應(yīng)(扭曲反射)次數(shù)，在試驗結(jié)束時匯總。將小鼠保持在具有接觸褥草的獨立的“鞋盒”離子中。一般同時觀察4只小鼠1只對照小鼠，3只給藥治療的小鼠。
對于焦慮和焦慮樣適應(yīng)癥，已經(jīng)在用大鼠進行的gellerseifter沖突試驗中確認了其效力。
對于功能性胃腸障礙適應(yīng)癥，可采用Coutinho SV等人在AmericanJournal of Physiology-Gastrointestinal & Liver Physiology.282(2)G307-16，2002 Feb中描述的測定，使用大鼠來確認其效力。
權(quán)利要求
1.式I化合物及其鹽 其中R1選自下列基團之一(i)苯基； (ii)吡啶基； (iii)噻吩基； (iv)呋喃基 (v)咪唑基 (vi)三唑基 (vii)吡咯基 (viii)噻唑基 (ix)吡啶基-N-氧化物 其中每個R1苯基環(huán)和R1雜芳環(huán)任可以獨立地被1、2或3個獨立選自直鏈或支鏈C1-C6烷基、NO2、CF3、C1-C6烷氧基、氯、氟、溴和碘的取代基進一步取代。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中每個R1苯基環(huán)和R1雜芳環(huán)可以進一步獨立地被選自甲基、CF3、氯、氟、溴和碘的取代基取代。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中每個R1苯基環(huán)和R1雜芳環(huán)可以進一步獨立地被甲基取代。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是苯基、吡咯基、吡啶基、噻吩基或呋喃基。
5.權(quán)利要求1的化合物，選自下列任何一個4-[1-(3-氨基-苯基)-1-(1-芐基-哌啶-4-基亞基)-甲基]-N，N-二異丙基苯甲酰胺，4-[1-(3-氨基-苯基)-1-(1-吡啶-2-基甲基-哌啶-4-基亞基)-甲基]-N，N-二異丙基苯甲酰胺，4-[1-(3-氨基-苯基)-1-(1-吡啶-4-基甲基-哌啶-4-基亞基)-甲基]-N，N-二異丙基-苯甲酰胺，4-[1-(3-氨基-苯基)-1-(1-呋喃-2-基甲基-哌啶-4-基亞基)-甲基]-N，N-二異丙基-苯甲酰胺，4-[1-(3-氨基-苯基)-1-(1-呋喃-3-基甲基-哌啶-4-基亞基)-甲基]-N，N-二異丙基-苯甲酰胺，4-(1-(3-氨基-苯基)-1-(1-噻吩-2-基甲基-哌啶-4-基亞基)-甲基]-N，N-二異丙基-苯甲酰胺，4-[1-(3-氨基-苯基)-1-(1-噻吩-3-基甲基-哌啶-4-基亞基)-甲基]-N，N-二異丙基-苯甲酰胺，4-[1-(3-氨基-苯基)-1-(1-噻唑-2-基甲基-哌啶-4-基亞基)-甲基]-N，N-二異丙基-苯甲酰胺，4-{1-(3-氨基-苯基)-1-[1-(1H-咪唑-2-基甲基)-哌啶-4-基亞基]-甲基}-N，N-二異丙基-苯甲酰胺，4-{1-(3-氨基-苯基)-1-[1-(1H-咪唑-4-基甲基)-哌啶-4-基亞基]-甲基}-N，N-二異丙基-苯甲酰胺，4-{1-(3-氨基-苯基)-1-[1-(4-甲氧基-芐基)-哌啶-4-基亞基]-甲基}-N，N-二異丙基-苯甲酰胺，4-{1-(3-氨基-苯基)-1-[1-(4-溴-芐基)-哌啶-4-基亞基]-甲基}-N，N-二異丙基-苯甲酰胺，和4-[1-(3-氨基-苯基)-1-(1-吡咯-2-基甲基-哌啶-4-基亞基)-甲基]-N，N-二異丙基-苯甲酰胺。
6.前述任-權(quán)利要求的化合物，其是鹽酸鹽、二鹽酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、二三氟乙酸鹽或檸檬酸鹽。
7.式I化合物的制備方法，包括使用鈀催化劑例如Pd(PPh3)4、在堿例如碳酸鈉存在下，將通式II化合物與3-氨基苯基硼酸反應(yīng) 其中PG是氨基甲酸酯保護基如Boc和CBZ或芐基或取代的芐基保護基例如2，4-二甲氧基芐基，得到通式III化合物 然后在標準條件下將其脫保護，并在還原條件下使用通式R1-CHO化合物將其烷基化，得到通式I化合物。
8.用于治療的權(quán)利要求1的化合物。
9.權(quán)利要求1的式I化合物在制備治療疼痛、焦慮或功能性胃腸疾病藥物中的用途。
10.含有權(quán)利要求1的式I化合物作為活性成分以及可藥用載體的藥物組合物。
11.治療疼痛的方法，該方法是將有效量的權(quán)利要求1的式I化合物對需要控制疼痛的患者給藥。
12.治療功能性胃腸疾病的方法，該方法是將有效量的權(quán)利要求1的式I化合物對患有所述功能性胃腸疾病的患者給藥。
13.治療焦慮的方法，該方法是將有效量的權(quán)利要求1的式I化合物對患有焦慮的患者給藥。
14.通式II的化合物 其中PG是氨基甲酸酯保護基例如Boc或CBZ，或者芐基或取代的芐基保護基如2，4-二甲氧基芐基。
15.通式III的化合物 其中PG是氨基甲酸酯保護基例如Boc或CBZ，或者芐基或取代的芐基保護基如2，4-二甲氧基芐基。
全文摘要
本申請公開和要求保護通式I化合物及其鹽以及含有該新化合物的藥物組合物及其治療、特別是控制疼痛、焦慮和功能性胃腸疾病應(yīng)用，其中R
文檔編號A61K31/4523GK1509271SQ02810186
公開日2004年6月30日 申請日期2002年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2001年5月18日
發(fā)明者W·布朗, C·瓦爾波爾, Z·魏, ǘ, W 布朗 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司