專利名稱：抗菌肽及其在制備抗耐藥菌藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗菌肽及其衍生物，具體地說(shuō)涉及一組抗菌肽及其在制備抗耐藥菌藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
抗生素的發(fā)現(xiàn)在人類醫(yī)學(xué)史上具有重要的意義，它的使用挽救了無(wú)數(shù)的生命，使人的預(yù)期壽命增加了十年以上。但是隨著人們對(duì)抗生素的廣泛使用，細(xì)菌也逐漸適應(yīng)并對(duì)其產(chǎn)生了耐藥性。雖然目前臨床上使用的抗生素有上百種之多，但都屬于化學(xué)小分子，新研制的抗生素也一般是其結(jié)構(gòu)修飾物，很難解決細(xì)菌對(duì)抗生素耐藥的問(wèn)題。隨著耐藥菌問(wèn)題的出現(xiàn)，新型的抗耐藥菌的抗生素的研發(fā)已成為國(guó)際上廣泛關(guān)注的問(wèn)題。 自然界中的許多生物，如昆蟲、兩棲類動(dòng)物、植物和哺乳類動(dòng)物都會(huì)產(chǎn)生保護(hù)機(jī)體的具有抗菌活性的小分子肽。這些抗菌肽能與生物體的細(xì)胞膜發(fā)生作用，從而達(dá)到殺死細(xì)菌、真菌和病毒的作用。昆蟲抗菌肽都帶有不同數(shù)量的正電荷，其作用機(jī)制在于，它所帶的正電荷能與細(xì)菌細(xì)胞膜的磷脂雙分子層的負(fù)電荷結(jié)合，從而影響膜上的離子通道，增加通透性，使細(xì)菌死亡，同時(shí)抗菌肽還可以和膜上的脂多糖結(jié)合，減輕由細(xì)菌感染引起的臨床癥狀。目前國(guó)際上已經(jīng)報(bào)道的抗菌肽有數(shù)百種，其抗菌范圍很廣，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌、真菌和病毒都有抑制作用，由于抗菌肽是利用生物體自身免疫機(jī)制而達(dá)到抗菌作用，與抗生素的作用有很大不同，故其對(duì)目前臨床上的耐藥菌仍具有殺菌作用，被國(guó)際上認(rèn)為是一類具有廣闊應(yīng)用前景的新型抗菌藥。但是直接利用天然抗菌肽作為抗菌藥物的嘗試很少。主要原因有很多天然抗菌肽的抗菌活性不高，而且收率低；很多抗菌肽有很強(qiáng)的溶血副作用。如從蜜蜂毒液中提取的蜂毒肽，它具有很強(qiáng)的抗菌活性，但同時(shí)也具有溶血副作用，而使蜂毒肽作為抗菌藥物的應(yīng)用受到很大的限制。

發(fā)明內(nèi)容
解決的技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明通過(guò)固相合成的方法，合成了一組具有較高抗耐藥菌活性、較低溶血副作用的抗菌肽及其衍生物。同時(shí)，將這些抗菌肽應(yīng)用于制備治療耐藥性革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌的藥物中。技術(shù)方案本發(fā)明的內(nèi)容涉及一組具有如下結(jié)構(gòu)的抗菌肽衍生物
抗菌肽，該肽由21個(gè)氨基酸組成，所述氨基酸序列如SEQ ID NO. I所示。上述氨基酸序列中的第12位為Asn、第15位為Ser和第16位為Gly，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。上述氨基酸序列中的第12位為Asn、第15位為Thr和第16位為Ala，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 3所示。上述氨基酸序列中的第12位為Gin、第15位為Ser和第16位為Gly，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 4所示。上述氨基酸序列中的第12位為Gin、第15位為Thr和第16位為Ala，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 5所示。上述氨基酸序列中的第12位為Asn、第15位為Ser和第16位為Ala，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 6所示。上述抗菌肽在制備抗耐藥菌藥物中的應(yīng)用。上述抗菌肽在抑制耐藥菌的應(yīng)用。
有益效果
I.提供了一組抗菌肽衍生物，由21個(gè)氨基酸組成，降解后成為氨基酸被人體吸收利用，無(wú)抗生素殘留。2.用固相合成法制備具有較高抗耐藥菌活性的抗菌肽衍生物，制備方法簡(jiǎn)單，合成工藝和產(chǎn)品質(zhì)量容易控制，適合于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)；同時(shí)，對(duì)環(huán)境友好，無(wú)任何有害物質(zhì)產(chǎn)生。3.本發(fā)明涉及的抗菌肽衍生物不僅能殺滅非耐藥細(xì)菌，對(duì)耐藥性細(xì)菌也具有強(qiáng)烈的抑殺作用，一次用藥能同步殺滅耐藥和非耐藥菌，有效解決臨床傳統(tǒng)抗生素的選擇問(wèn)題。4.具有強(qiáng)烈的內(nèi)毒素中和作用。敗血癥病人經(jīng)抗生素治療后，大量?jī)?nèi)毒素釋放，弓丨起嚴(yán)重的臨床癥狀(如聞熱、低血壓等)，是病人聞死亡率的原因之一，本廣品能有效中和細(xì)菌內(nèi)毒素，有效提聞病人的生存率。5.溶血實(shí)驗(yàn)和急性局部刺激實(shí)驗(yàn)表明，6種抗菌肽衍生物的濃度在2. 5 mg/mL時(shí)均未發(fā)生溶血反應(yīng)，產(chǎn)品安全性較高；具有較低的急性毒性刺激反應(yīng)。
具體實(shí)施例方式以下具體實(shí)施方式
不以任何形式限制本發(fā)明的技術(shù)方案，凡是采用等同替換或等效變換的方式所獲得的技術(shù)方案均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例I
抗菌肽衍生物的固相合成
通過(guò)以FMOC (9-芴甲氧羰基)為保護(hù)基團(tuán)的固相合成法合成抗菌肽。用95 %三氟乙酸、2. 5 %水和2. 5 %三異丙甲硅烷(TIA)將其從樹(shù)脂上裂解。在乙醚反復(fù)沉淀后，通過(guò)反相高效液相色譜純化多肽。純化中采用C18反相柱以含O. 05 %三氟乙酸的O % 60 %乙腈為流動(dòng)相，3 mL/ min的流速進(jìn)行梯度洗脫。再將多肽以I mg/ mL的濃度溶解在氧化緩沖液(100 mmol/ L醋酸銨，pH8. 5)中，并在室溫下不斷攪拌3 d，使其充分氧化折疊形成二硫鍵。最終用反相HPLC純化至95%以上，凍干備用，所得抗菌肽序列如下
①Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Gln-Arg-Arg-Thr-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met (Tl)；,
②Gly-Ser-Lys-Lys-Pro-Val-Pro-Ile-Ile-Tyr-Cys-Asn-Arg-Arg-Ser-Gly-Lys-Cys-Gln-Arg-Met (T2)；
權(quán)利要求
1.抗菌肽，其特征在于該肽由21個(gè)氨基酸組成，所述氨基酸序列如SEQID NO. I所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗菌肽，其特征在于所述氨基酸序列中的第12位為Asn、第15位為Ser和第16位為Gly，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗菌肽，其特征在于所述氨基酸序列中的第12位為Asn、第15位為Thr和第16位為Ala，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 3所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗菌肽，其特征在于所述氨基酸序列中的第12位為Gin、第15位為Ser和第16位為Gly,其氨基酸序列如SEQ ID NO. 4所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗菌肽，其特征在于所述氨基酸序列中的第12位為Gin、第15位為Thr和第16位為Ala，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 5所示。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗菌肽，其特征在于所述氨基酸序列中的第12位為Asn、第15位為Ser和第16位為Ala,其氨基酸序列如SEQ ID NO. 6所示。
7.權(quán)利要求I 6所述抗菌肽在制備抗耐藥菌藥物中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求I 6所述抗菌肽在抑制耐藥菌的應(yīng)用。
全文摘要
抗菌肽及其在制備抗耐藥菌藥物中的應(yīng)用，該肽由21個(gè)氨基酸組成，所述氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。體內(nèi)外研究表明，6種抗菌肽對(duì)大部分臨床分離的耐藥性細(xì)菌具有強(qiáng)烈的抑殺作用；并能顯著降低耐藥菌引起的敗血癥模型的死亡率；溶血實(shí)驗(yàn)和急性局部刺激實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，6種衍生物在2.5mg/mL時(shí)未發(fā)生溶血反應(yīng)，無(wú)急性毒性刺激反應(yīng)。
文檔編號(hào)A61K38/16GK102807610SQ201210324668
公開(kāi)日2012年12月5日 申請(qǐng)日期2012年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月5日
發(fā)明者吳國(guó)球 申請(qǐng)人:東南大學(xué)