專利名稱：新的甾類化合物及其制法、用途和含有它們的藥物組物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在20位含有氨基取代鏈的新甾類化合物、它們的制備方法及該方法的中間體、它們作為藥物的用途以及含有它們的藥物組合物。
本發(fā)明的目的之一是式(I)化合物及其酸加成鹽 其中R1和R2可相同或不同且各自代表含有1至12個(gè)碳原子的烷基或具有7至15個(gè)碳原子的芳烷基，或者R1和R2與它們所連的氮原子一起形成5元或6元飽和雜環(huán)，該雜環(huán)任選含有選自氧、氮和硫的另一雜原子；在α位的R3代表含有1至8個(gè)碳原子的烷基；n表示2至15的整數(shù)R4代表含有1至12個(gè)碳原子的烷基；R5代表氫原子、含有至多12個(gè)碳原子的?；蚝兄炼?2個(gè)碳原子的烷基；波浪線表示不對稱中心17和20與R或S絕對構(gòu)型無關(guān)。
當(dāng)R1、R2、R4和R5代表含有1至12個(gè)碳原子的烷基時(shí)，所述烷基可以是下列基團(tuán)之一甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、正己基、2-甲基戊基、2，3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、2，2-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2，2-二甲基己基、3，3-二甲基己基、3-甲基-3-乙基戊基、壬基、2，4-二甲基庚基或正癸基。優(yōu)選甲基、乙基、異丙基。
當(dāng)R1和R2代表含有7至15個(gè)碳原子的芳烷基時(shí)，優(yōu)選芐基或苯乙基。
當(dāng)R1和R2與它們所連的氮原子一起形成任選含有選自氧、氮和硫的另一雜原子的5元或6元飽和雜環(huán)時(shí)，所述雜環(huán)優(yōu)選哌啶子基、嗎啉代、硫代嗎啉代、哌嗪子基(piperazino)或吡啶烷子基(pyrrolidino)。
當(dāng)R3代表含有1至8個(gè)碳原子的烷基時(shí)，它可以是下列基團(tuán)之一甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、正己基、2-甲基戊基、2，3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、2，2-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、3-乙基戊基。優(yōu)選甲基。
所謂具有至多12個(gè)碳原子的?；鶅?yōu)選指的是選自乙?；?、丙酰基、丁?；?、苯甲?；?、戊?；⒓乎；?、丙烯酰基和丁烯?；幕鶊F(tuán)。還可提及的是甲?；?br> 本發(fā)明自然地?cái)U(kuò)展到式(I)化臺(tái)物的酸加成鹽，例如與下列酸形成的鹽鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、乙酸、甲酸、丙酸、苯甲酸、馬來酸、富馬酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、草酸、二羥乙酸、天冬氨酸、鏈烷磺酸如甲或乙磺酸、芳基磺酸如苯或?qū)妆交撬嵋约胺蓟人?。?yōu)選鹽酸鹽。
本發(fā)明的一個(gè)更具體的目的是上面定義的且其中n等于2的通式(I)化合物及其酸加成鹽。
本發(fā)明的一個(gè)更具體的目的是上面定義的對應(yīng)于通式(I′)的通式(I)化合物及其酸加成鹽 其中R1和R2具有上述相同的定義。
本發(fā)明的一個(gè)十分具體的目的是式(I)的下列化合物及其酸加成鹽(20R)-(8α，9β，13α，14β，17α)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇，(20S)-(8α，9β，13α，14β，17α)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇，(20R)-(8α，9β，13α，14β，17β)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇，(20S)-(8α，9β，13α，14β，17β)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇。
本發(fā)明的一個(gè)十分具體的目的是式(I)的下列化合物
(20S)-(8α，9β，13α，14β，17α)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇，及其酸加成鹽。
本發(fā)明的另一目的是上面定義的式(I)產(chǎn)物的制備方法，其特征在于使式(II)產(chǎn)物 (其中R3定義同上)，適宜地與?；瘎┗蛲榛瘎┓磻?yīng)制得式(IIA)產(chǎn)物 其中R3的定義同上，R′5的定義除氫之外與上面定義的R5相同；使式(II)或(IIA)產(chǎn)物與氰化劑反應(yīng)制得式(III)產(chǎn)物 其中R3和R5的定義同上，且其中的波浪線表示該產(chǎn)物以純的立體異構(gòu)體(17α-OH，17β-CN)或(17α-CN，17β-OH)形式存在或以混合物形式存在；使式(III)產(chǎn)物進(jìn)行脫水反應(yīng)制得式(IV)產(chǎn)物 其中R3和R5的定義同上；使式(IV)產(chǎn)物進(jìn)行16-17雙鍵的還原反應(yīng)制得式(V)產(chǎn)物 其中波浪線表示CN取代基位于17α或17β位，或?yàn)?7α和17β的混合物形式，且R3和R5的定義同上；使式(V)產(chǎn)物與由上面定義的R4基團(tuán)衍生的有機(jī)金屬試劑反應(yīng)，然后再與酸水解試劑反應(yīng)，制得式(VI)產(chǎn)物 其中R3、R4和R5的定義同上，且其中的波浪線表示COR4取代基位于17α或17β位，或?yàn)?7α和17β的混合物形式使式(VI)產(chǎn)物與羥胺鹽反應(yīng)制得式(VII)產(chǎn)物 其中R3、R4和R5的定義同上，且其中的波浪線表示C(R4)＝N-OH取代基位于17α或17β位，或?yàn)?7α和17β的混合物形式，肟處于順式或反式位置，或?yàn)轫樖胶头词降幕旌衔镄问剑皇故?VII)產(chǎn)物進(jìn)行肟的還原反應(yīng)制得式(VIII)產(chǎn)物 其中波浪線表示NH2取代基位于20R或20S位，或?yàn)?0R和20S的混合物形式，且R3、R4和R5的定義同上；使式(VIII)產(chǎn)物與下式的酰鹵反應(yīng)x-CO-(CH2)n′-NR1R2其中X代表鹵原子，R1和R2如上所定義，n′等于n-1，n如上所定義；然后，必要時(shí)使中間形成的二?；衔镌?位上進(jìn)行選擇性水解，制得式(IX)產(chǎn)物 其中波浪線，R1、R2、R3、R4、R5和n′的定義同上；使式(IX)產(chǎn)物進(jìn)行酰胺的酮基的還原反應(yīng)；然后，如果需要和必需的話，按任意次序進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)下列的反應(yīng)—在3位上的酰化反應(yīng)—在3位上的烷基化反應(yīng)，—在3位上的酰氧基的皂化反應(yīng)，—不同立體異構(gòu)體的分離，—與有機(jī)酸或無機(jī)酸的成鹽反應(yīng)。
?；瘎﹥?yōu)選為羧酸衍生物，例如存在于堿如吡啶中的酰氯或酸酐。
按照常規(guī)方法，進(jìn)行任意烷基化反應(yīng)，優(yōu)選使用的烷基化劑為烷基鹵如烷基碘或硫酸烷基酯。
氯化劑優(yōu)選為氰化鈉或鉀，該氰化反應(yīng)優(yōu)選在低級(jí)醇如甲醇中在乙酸存在下進(jìn)行。
脫水反應(yīng)可使用脫水劑如在吡啶中的磷酰氯來進(jìn)行。
16-17雙鍵的還原反應(yīng)可通過催化氫化反應(yīng)進(jìn)行，氫化劑為在催化劑如鈀/炭或銠試劑如Wilkinson試劑存在下的氫氣，或該還原反應(yīng)可通過與在乙醇中的硼氫化鈉反應(yīng)或與甲醇中的鎂反應(yīng)來進(jìn)行。
該還原反應(yīng)可以是立體有擇的并使所得的CH取代基位于17α或17β位，或者該還原反應(yīng)也可以是非立體有擇的。必要時(shí)，然后用常規(guī)方法如結(jié)晶或色譜法分離所得的立體異構(gòu)體的混合物(17α＋17β)。
R4基團(tuán)衍生物的有機(jī)金屬試劑為常規(guī)試劑即有機(jī)鋰化合物(R4-Li)、有機(jī)鎂化合物(R4-Mg-X)，X為選自Cl、Br和I的鹵素。優(yōu)選的是Br。
與有機(jī)金屬反應(yīng)之后的酸水解反應(yīng)使中間形成的亞胺水解。該水解在用于亞胺水解的常規(guī)條件下在酸介質(zhì)如鹽酸、草酸或乙酸中進(jìn)行。
式(VII)肟的生成優(yōu)選通過在堿如吡啶、蘇打或碳酸鈉存在下與羥胺鹽酸鹽的反應(yīng)來進(jìn)行。
式(VII)產(chǎn)物的還原反應(yīng)可用不同的方法進(jìn)行。例如用在催化劑如鈀/炭或二氧化鈀存在下的氫氣作為氫化劑的催化氫化，或通過在乙酸介質(zhì)中的鋅進(jìn)行反應(yīng)，在醇如乙醇或正丙醇中的鈉進(jìn)行反應(yīng)，或通過加入在二甘醇二甲醚中的二硼烷。
該還原反應(yīng)既可以是立體有擇的并得到20R或20S位的產(chǎn)物，或者該還原反應(yīng)也可以是非立體有擇的。然后，必要時(shí)用常規(guī)方法如結(jié)晶或色譜法分離所得的20R＋20S立體異構(gòu)體和混合物。
式X-CO-(CH2)n′-NR1R2化合物(其中X為選自Cl、Br和I的鹵素，n′、R1和R2如上所述)與式(VIII)化合物的縮合反應(yīng)在堿性介質(zhì)中優(yōu)選在非質(zhì)子偶極溶劑如二甲基甲酰胺(DMF)中進(jìn)行。該反應(yīng)優(yōu)選在三乙胺/二甲基甲酰胺(TEA/DMF)介質(zhì)中進(jìn)行。
中間可形成的O-酰基化合物的選擇性水解在常規(guī)條件下使用堿試劑如在低級(jí)醇如甲醇或乙醇中的碳酸鈉或碳酸鉀來進(jìn)行。
式(IX)化合物酰胺的酮基的還原反應(yīng)可使用金屬氫化物如氫化鋁鋰(AlLiH4)在非質(zhì)子偶極溶劑如四氫呋喃(THF)或乙醚中進(jìn)行，或使用堿性硼氫化物如硼氫化鈉(NaBH4)在酸如乙酸存在下進(jìn)行。
如果需要和必需的話，在3位的-OH基團(tuán)的?；蛲榛磻?yīng)可用上述方法進(jìn)行。
如果需要和必需的話，皂化反應(yīng)優(yōu)選在堿如碳酸鈉或碳酸鉀、叔丁醇鉀或乙炔化鋰存在下在乙二胺中進(jìn)行，該皂化反應(yīng)也優(yōu)選在低級(jí)醇如甲醇或乙醇中進(jìn)行。
如果需要和必需的話，按照常規(guī)方法如結(jié)晶或色譜法進(jìn)行各種立體異構(gòu)體的分離。
與酸的成鹽反應(yīng)在常規(guī)條件下進(jìn)行。該操作優(yōu)選用鹽酸的乙醚溶液進(jìn)行。
在制備式(III)產(chǎn)物的氰化劑反應(yīng)、制備式(VI)產(chǎn)物的有機(jī)金屬試劑反應(yīng)或制備式(VII)產(chǎn)物的羥胺鹽反應(yīng)的過程中，可得到酰氧基被水解的式(III)、(VI)或(VII)產(chǎn)物。
本發(fā)明提供了上面定義的方法，其中酰氧基已被水解的式(III)、(VI)或(VII)產(chǎn)物必要時(shí)可再?；?。
式(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)產(chǎn)物也可以以立體異構(gòu)體的混合物形式得到。如果需要或必需的話，將這些產(chǎn)物進(jìn)行分離這些立體異構(gòu)體的操作。
因此，本發(fā)明提供了上面定義的方法，其中包括必要時(shí)分離在式(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)產(chǎn)物的制備方法中得到的不同的立體異構(gòu)體。
本發(fā)明的產(chǎn)物具有1)對σ受體的強(qiáng)親和力(參見藥理試驗(yàn))；2)對于鈣流入精子的活性。
試驗(yàn)結(jié)果表明在固定于σ受體的產(chǎn)物中，一些通過刺激鈣流入精子產(chǎn)生作用。另一些通過抑制所刺激的鈣的流入產(chǎn)生作用，或通過黃體酮(一種結(jié)合在σ受體上的分子)不產(chǎn)生作用。
這些性質(zhì)證明了本發(fā)明的產(chǎn)物在治療中的用途。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是上面定義的式(I)產(chǎn)物及其可藥用的酸加成鹽用作藥物。
本發(fā)明的一個(gè)具體目的是上面定義的對應(yīng)于式(I′)的產(chǎn)物及其可藥用的酸加成鹽用作藥物。
本發(fā)明的一個(gè)更具體的目的是通式(I)的下列化合物及其可藥用的酸加成鹽用作藥物-(20R)-(8α，9β，13α，14β，17α)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇，-(20S)-(8α，9β，13α，14β，17α)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇，-(20R)-(8α，9β，13α，14β，17β)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇，-(20S)-(8α，9β，13α，14β，17β)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇。
在本發(fā)明的藥物中，特別值得提及的是通式(I)的下列化合物-(20S)-(8α，9β，13α，14β，17α)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇及其可藥用的酸加成鹽。
具有激動(dòng)活性的式(I)產(chǎn)物刺激鈣流入精子。因此本發(fā)明的相應(yīng)的藥物可用于治療特征在于精子的生育力不足的某些不育癥。
具有拮抗活性的式(I)產(chǎn)物抑制鈣流入精子。因此本發(fā)明的相應(yīng)的藥物可有效地用于控制頂體反應(yīng)，由此必然影響精子的生育力。所以它們可用作避孕藥特別是雄性避孕藥。
這些化合物也可用于獸醫(yī)領(lǐng)域作為家養(yǎng)動(dòng)物(如狗、貓……)的雄性避孕藥，或用于限制有害動(dòng)物特別是嚙齒動(dòng)物或鴿子的繁殖。
有用的劑量隨所治療的疾病的性質(zhì)和給藥途徑而變化。例如，一個(gè)成年人口服的日劑量10至1000mg。
本發(fā)明提供了含有至少一種上面定義的藥物化合物作為活性成份的藥物組合物。
可經(jīng)消化道、非胃腸道或局部途徑，例如特別是對于婦女可通過經(jīng)皮途徑，或在獸醫(yī)領(lǐng)域可通過注射特別是皮下注射途徑，使用式(I)化合物。這些化合物可被配制成普通劑型或糖包衣片劑、膠囊劑、粒劑、栓劑、注射制劑、陰道栓劑、軟膏劑、乳油劑、凝膠劑、微球粒劑、植入劑、貼劑，這些劑型可按常規(guī)方法制備。
一種或多種活性成份可與常用于這些藥物組合物的賦形劑混合，例如滑石粉、阿拉伯樹膠、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、可可脂、含水或非水載體、來源于動(dòng)物或植物的脂肪物質(zhì)、石蠟衍生物、乙二醇類、各種潤濕劑、分散劑或乳化劑、防腐劑。
本發(fā)明的另一目的是式(IIA)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)產(chǎn)物，除其中R′5為含有至多12個(gè)碳原子的烷基的式(IIA)產(chǎn)物外，作為新的工業(yè)產(chǎn)品特別地用于本發(fā)明方法的實(shí)施中。
按照下列參考文獻(xiàn)所述的方法制得式(II)產(chǎn)物-J.H.HUTCHINSON等人，Tetrahedron Letters 1985 26(15)p.1819-1822-L.L.SMITH等人，J.Am.Chem.Soc.1966 3120-3128。
下列實(shí)施例說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1(20R)-(8α，9β，13α，14β，17α)-20-((二甲氨基)乙基)氨基-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇，步驟A8α，9β，13α，14β-3-乙酰氧基雌甾-1，3，5(10)-三烯-17-酮將33.5ml乙酐加到33.3g對映體雌甾酮(按J.H.HUTCHINSON等人，Tetrahedron Letters 1985，26(15)p.1819-1822所述方法制備)的67ml吡啶懸浮液中。觀察到稍有放熱的溶解，溫度從18℃升至32℃。在18±2℃下攪拌18小時(shí)，然后將全部溶液倒入冰冷卻的水(660ml)/22°Be′鹽酸(76ml)的混合物中。結(jié)晶后，將懸浮液靜置1小時(shí)、過濾、用水洗滌并干燥，得到38.7g所需的粗產(chǎn)物，用83ml無水乙醇熱和冷重結(jié)晶純化，接著用L2S活性炭處理。過濾并干燥后，得到32.7g所需產(chǎn)物(M.P.＝128℃)。步驟B(8α，9β，13α，14β，17β)-3-(乙酰氧基)17-羥基雌甾-1，3，5(10)-三烯-17-甲腈，在惰性氣體氣氛下將91.6g氰化鉀加到32.7g步驟A所制備的雌甾酮乙酸鹽的654ml甲醇和167ml乙酸溶液中，在室溫下攪拌16小時(shí)。然后將330ml冰-水混合物加到懸浮液中。觀察到稍有結(jié)晶后，將反應(yīng)介質(zhì)傾入3升冰冷卻的水中，接著過濾并用水洗滌。將未干燥的粗產(chǎn)物再溶于1.2升乙酸乙酯中，然后洗滌有機(jī)相、干燥、過濾并濃縮直至結(jié)晶。冷卻至-10℃1小時(shí)后，進(jìn)行過濾、接著洗滌并干燥，得到27.2g所需產(chǎn)物(M.P.＝198～200℃)。步驟C；(8α，9β，13α，14β)-3-羥基雌甾-1，3，5(10)，16-四烯-17-甲腈，將27.2g步驟B所得的產(chǎn)物的82ml吡啶和25ml磷酰氯溶液加熱回流4小時(shí)，然后將反應(yīng)介質(zhì)冷卻至20℃，并傾入450ml碎冰中。觀察到放熱沉淀后，加入稀釋至1/5的硫酸使pH接近為1。用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，接著用水洗滌，然后用碳酸氫鈉溶液洗滌，干燥，過濾并減壓蒸發(fā)至干。將殘余物再溶于60ml乙醇中，然后在0℃下攪拌1小時(shí)，接著過濾并干燥。得到17.7g所需產(chǎn)物(M.P.＝120℃)。步驟D(8α，9β，13α，14β，17α)-3-羥基雌甾-1，3，5(10)-三烯-17-甲腈在氮?dú)夥障聦?.425升氫氣在14分鐘內(nèi)導(dǎo)入17.7g步驟C所得的產(chǎn)物的354ml乙酸乙酯和8.85g 10％氫氧化鈀/炭的懸浮液中，攪拌30分鐘。過濾并減壓下蒸發(fā)至干，將干燥的萃取物再溶于90ml乙醇中，在-10℃溫度下攪拌1小時(shí)，接著分離干燥，得到15.35g所需產(chǎn)物(M.P.＝144.5℃；(α)D＝-100°(c＝1％CHCl3))。步驟E(8α，9β，13α，14β，17α)-3-羥基-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-20-酮在惰性氣氛下，將121ml甲基碘在回流下用1小時(shí)加到46g鎂銷片的307ml苯和307ml乙醚的混合物中。將反應(yīng)介質(zhì)加熱回流30分鐘，并加入現(xiàn)場制備的15.35g步驟D所得的產(chǎn)物的154ml苯和154ml乙醚溶液。回流下攪拌93小時(shí)。停止回流，將懸浮液緩慢傾入水/冰水混合物中，加入340ml乙酸(pH＝4)。濃縮后，進(jìn)行分離，接著洗滌并干燥。得到13.7g粗產(chǎn)物，將其在840ml丙酮和0.6g 3SA活性炭中純化、過濾、濃縮至5體積，在-10℃下攪拌1小時(shí)，分離并干燥。得到12.2g所需產(chǎn)物(M.P.＝248℃，(α)D＝-156.6°(c＝0.5％CHCl3))。步驟F(8α，9β，13α，14β，17α)-20-羥亞氨基-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇在氮?dú)夥障拢瑢?.5g羥胺鹽酸鹽加到10g步驟E所得的產(chǎn)物的100ml吡啶溶液中，然后將全部溶液加熱至80-85℃1小時(shí)30分鐘。接著加入310ml軟化水，觀察到產(chǎn)物結(jié)晶，分離出晶體，在回流下用120ml乙醇重結(jié)晶。加入另外的75ml軟化水，觀察到產(chǎn)物大量結(jié)晶。在0℃下攪拌30分鐘，接著分離并干燥。得到9.45g所需產(chǎn)物(M.P.＝234℃)。步驟G(20S)-(8α，9β，13α，14β，17α)-20-氨基-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇將7.35g步驟F所得的產(chǎn)物的550ml(＋用于清洗的368ml)的乙酸溶液加到2.94g二氧化鉑的304ml乙酸懸浮液中，用總吸收體積1075ml的氫氣氫化6小時(shí)30分鐘。獲得鹽酸鹽過濾后，減壓下進(jìn)行濃縮，直至得到干燥的提取物，然后將其溶于酸介質(zhì)中，該酸介質(zhì)由4.15ml鹽酸、53.5ml乙醇和1.2ml水混合物組成。將92ml乙醚加到所得的溶液中，并在0℃下攪拌1小時(shí)，然后分離并干燥。用0.5％鹽酸在50ml乙醇中通過回流溶解重結(jié)晶粗鹽酸鹽，并在0＋5℃下攪拌1小時(shí)，接著分離。獲得堿將140ml軟化水在加熱回流下緩慢地加到已純化的鹽酸鹽在堿混合物的溶液中，該堿混合物由11ml三乙胺、64ml乙醇和27ml水組成，觀察到結(jié)晶，在0＋5℃下攪拌1小時(shí)，接著分離并干燥。得到3.77g粗堿，在120ml乙醇中通過回流溶解純化，在常壓氮?dú)夥障聺饪s至40ml體積，在0°＋5℃下攪拌1小時(shí)，接著分離并干燥，得到3.285g所需產(chǎn)物(M.P.＝235℃)。步驟H(20S)-(8α，9β，13α，14β，17α)-2-二甲氨基--N-(3-羥基-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-20-基)乙酰胺將12g N，N-二甲基甘氨酰氯鹽酸鹽迅速加到處于惰性氣體中在80℃下得到的步驟C所得產(chǎn)物的91.5ml二甲基甲酰胺和28.4ml三乙胺溶液中，然后冷卻至＋5℃，接著攪拌3小時(shí)，傾入370ml酸式碳酸鈉的550ml冰＋水飽和溶液中，攪拌1小時(shí)，接著用100ml二氯甲烷萃取3次。用水、碳酸氫鈉溶液、鹽水溶液洗滌。合并有機(jī)溶液，減壓下濃縮，直至得到6g干燥的提取物。
在惰性氣氛下將殘余物溶于37ml甲醇和11ml 5N碳酸鈉中，接著攪拌l小時(shí)，直至全部溶解，緩慢加入220ml軟化水，鼓泡通入二氧化碳(pH8)，加入14.7ml三乙胺，攪拌15分鐘，用250ml然后用100ml二氯甲烷萃取，用100ml水洗滌5次，干燥有機(jī)溶液，用3SA活性炭處理，過濾、減壓下濃縮，直至得到干燥萃取物(油狀)，通過兩個(gè)輸送器用乙醇重結(jié)晶。得到6.15g所需粗產(chǎn)物，將其回流下溶于80ml乙醇中，用L2S活性炭處理，過濾，常壓下濃縮至40ml體積，觀察到結(jié)晶，加入10ml水，在0°＋5℃下攪拌1小時(shí)，接著分離并干燥，得到3.03g所需產(chǎn)物(M.P.＝226℃)。步驟I(20S)-(8α，9β，13α，14β，17α)-20-(((二甲氨基-)乙基)氨基-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇在20℃溫度下，將3.03g步驟H所得的產(chǎn)物加到處于惰性氣氛下的1.845g氫化鋁鋰和5.25g氯化鋁的131ml四氫呋喃懸浮液中，將全部溶液回流24小時(shí)，冷卻至0＋5℃后，加入20ml乙酸乙酯，然后加入100ml飽和氯化鈉溶液。過濾懸浮液，接著將其溶于水/6NHCl混合物(80ml/50ml)，過濾，溶于60ml 60％乙醇和8ml三乙胺中并過濾。
將水加到溶液中，觀察到沉淀，用二氯甲烷進(jìn)行萃取，接著洗滌、干燥、用L2S活性炭處理，減壓下濃縮直至得到1.9g干燥的萃取物。將干燥的萃取物回流下溶于60ml乙酸乙酯和4滴三乙胺中歷時(shí)15分鐘，然后減壓下濃縮溶液，直至得到30ml體積，冷卻至0＋5℃1小時(shí)，分離并干燥，得到1.03g所需產(chǎn)物(M.P.＝177℃，(α)D＝-80.6°(c＝0.5％EtOH)。元素分析C24H38ON2＝370.56C H N計(jì)算值(％)77.7810.347.56實(shí)測值(％)77.9 10.3 7.4藥理實(shí)驗(yàn)方法人精子的制備人精液來自健康供者。用Percoll梯度(47.5-95％)離心分離出運(yùn)動(dòng)的精子，然后再懸浮于含有下列成份的高滲BWW介質(zhì)中166mMNaCl、5mM KCl、1.3mM CaCl2、1.2mM KH2PO4、1.2mM MgSO4、5.5mM葡萄糖、21mM乳酸鈉、0.25mM丙酮酸鈉、25mM NaHCO3、20mM Hepes和0.8％HSA(410mosm/升)，室溫下pH 7.4。細(xì)胞內(nèi)鈣的測定將運(yùn)動(dòng)的精子在BWW/HSA獲能介質(zhì)中培養(yǎng)至少2小時(shí)，然后用Fura 2-AM(最終濃度2μm)在37℃下培養(yǎng)(濃度5-10×106/ml)45分鐘。用不含HSA的BWW在600g離心洗滌10分鐘后，將精子再懸浮，濃度為4×106/ml。在37℃下用熒光分光計(jì)以激發(fā)波長340和380nm(PTIM 2001-Kontron)或340、360和380nm(Hitachi F2000-B.Braun Science Tec.)測定熒光信號(hào)。在505nm處記錄熒光的發(fā)射。將溶于無水乙醇中的被試驗(yàn)的黃體酮或產(chǎn)物加到最終濃度為0.1％乙醇的培養(yǎng)介質(zhì)中。當(dāng)發(fā)現(xiàn)黃體酮的拮抗作用時(shí)，在黃體酮之前2分鐘將產(chǎn)物加到介質(zhì)中。在各劑量加完后，將5μm伊屋諾霉素加到試樣中測定最大的熒光信號(hào)，然后用0.05％ Triton X-100使精子滲透，并加入10mM EGTA(pH9.5)以便測定最小的熒光信號(hào)。按照Grunkiewicz等人所述的方法(Grunkiewicz G.，Poenie M.和Tsien R.Y.(1985)J.Biol.Chem.260，3440-3450)，用上面所得的數(shù)值計(jì)算細(xì)胞內(nèi)鈣([Ca2+]i)的濃度。細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的結(jié)果用相對于任意設(shè)定為1的基準(zhǔn)之值來表示。σ受體相對結(jié)合親和力的測定用大鼠腦和睪丸膜制劑評估相對結(jié)合親和力。膜的制備使用來自Iffa Credo且重大約200g的雄性Sprague-Dawley大鼠。使動(dòng)物斷頭致死，取出腦和睪丸，并用Ultrathurax在4℃下在10至25體積的50mM Tris-HCl緩沖液(pH7.7)中均化。將均化漿在4℃30,000g下離心15分鐘，然后通過再懸浮(在相同的緩沖液中)和在相同條件下的離心分離洗滌小丸3次。將用此方法得到的膜在-80℃下貯存。培養(yǎng)所用的σ受體的標(biāo)記物是具有比活性3404 GBq/mmol的NEN的3HPPP(丙基-3-(3-羥基苯基)哌啶)。
將膜再懸浮于50mMTris-HCl緩沖液(pH8.0)中以便得到睪丸的蛋白濃度大約為0.6mg/ml，腦的蛋白濃度大約為1mg/ml。用3nM3HPPP在逐漸增加的參考產(chǎn)物(氟哌啶醇)或試驗(yàn)產(chǎn)物濃度的情況下將勻漿等份試樣在25℃下培養(yǎng)(總體積0.5ml)90分鐘。培養(yǎng)結(jié)束后，使用預(yù)先用0.05％聚乙烯亞胺預(yù)處理過的Whatman GF/C過濾器快速過濾從游離的3HPPP中分離出結(jié)合在膜上的3HPPP。然后用5ml Tris-HCl緩沖液洗滌沉淀兩次。加入20mlAqualyte閃爍液體(Baker)后，進(jìn)行放射性計(jì)數(shù)。相對結(jié)合親和力(RBA)的計(jì)算繪出下列兩條曲線結(jié)合的氚化標(biāo)記物的百分?jǐn)?shù)100×B/BO作為未標(biāo)記的參考產(chǎn)物的濃度對數(shù)的函數(shù)或作為未標(biāo)記的試驗(yàn)產(chǎn)物的濃度對數(shù)的函數(shù)。
確定下列等式的直線I50＝100(BO/BO＋Bmin/BO)/2I50＝100(1＋Bmin/BO)/2＝50(1＋Bmin/BO)BO＝在無任何未標(biāo)記的產(chǎn)物存在下結(jié)合的氚化標(biāo)記物的濃度。
B＝在未標(biāo)記的產(chǎn)物濃度為X時(shí)結(jié)合的氚化標(biāo)記物的濃度。
Bmin＝在極大過量的未標(biāo)記的參考產(chǎn)物(5,000nm)存在下結(jié)合的氚化標(biāo)記物的濃度。
直線I50和曲線的交點(diǎn)用來計(jì)算在受體上氚化標(biāo)記物的特異性結(jié)合抑制50％時(shí)未標(biāo)記的參考產(chǎn)物(CH)和未標(biāo)記的試驗(yàn)產(chǎn)物(CX)的濃度之值。試驗(yàn)產(chǎn)物的相對結(jié)合親和力(RBA)由如下公式確定RBA＝100(CH)/(CX)氟哌啶醇的RBA任意設(shè)定為100。藥理試驗(yàn)1-對σ受體的相對結(jié)合親和力腦(大鼠) 睪丸(大鼠)參考氟哌啶醇 100.0100.0黃體酮0.7 0.3雌甾酮 ＜0.06＜0.1實(shí)施例1的產(chǎn)物(產(chǎn)物U) 4.3 58.02-細(xì)胞內(nèi)鈣的測定用不同劑量10-8M至10-5M的產(chǎn)物U預(yù)處理2分鐘后，10-5M黃體酮對[Ca2+]i的作用，平均值±SEN n＝3僅用 U10-6M U10-7M U10-6M U10-5M黃體酮 ＋黃體酮 ＋黃體酮 ＋黃體酮＋黃體酮3.67±0.97 3.33±0.87 4.26±1.93 2.63±0.57 1.0±0.0
這些結(jié)果用相對于設(shè)定為1的基準(zhǔn)值來表示。這三次實(shí)驗(yàn)的基準(zhǔn)值為176.70±22.90mM。
10-5M實(shí)施例產(chǎn)物對10-5M黃體酮的作用的拮抗作用，平均值±SEM n＝8。
僅用黃體酮僅用U10-5M 用U10-5M預(yù)處理2分鐘10-5M ＋黃體酮10-5M5.76±0.840.95±0.05 0.95±0.05這些結(jié)果用相對于設(shè)定為1的基準(zhǔn)值來表示。結(jié)論對人精子細(xì)胞內(nèi)鈣的作用濃度為10-5M的黃體酮誘導(dǎo)[Ca2+]i的短暫增加，隨后是[Ca2+]i稍大于基準(zhǔn)值的第二階段。
當(dāng)將實(shí)施例產(chǎn)物(10-5M)在黃體酮之前2分鐘加到介質(zhì)中時(shí)，它完全拮抗了黃體酮的作用。
對σ受體的相對結(jié)合親和力(RBA)本發(fā)明的產(chǎn)物和黃體酮能夠置換3H PPP。用大鼠腦膜計(jì)算的RBA也已用于評估睪丸，結(jié)果已列入上述表中。
腦和睪丸的RBA值不同可以用在這兩種器官中各種類型的σ受體位點(diǎn)的不同分布來解釋。
因此，這些產(chǎn)物如實(shí)施例1的產(chǎn)物作為拮抗劑時(shí)可抑制頂體反應(yīng)，所以可用作雄性避孕藥。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物及其酸加成鹽 其中R1和R2可相同或不同且各自代表含有1至12個(gè)碳原子的烷基或具有7至15個(gè)碳原子的芳烷基，或者R1和R2與它們所連的氮原子一起形成5元或6元飽和雜環(huán)，該雜環(huán)任選含有選自氧、氮和硫的另一雜原子；在α位的R3代表含有1至8個(gè)碳原子的烷基；n表示2至15的整數(shù)；R4代表含有1至12個(gè)碳原子的烷基；R代表氫原子、含有至多12個(gè)碳原子的?；蚝兄炼?2個(gè)碳原子的烷基；波浪線表示不對稱中心17和20與R或S絕對構(gòu)型無關(guān)。
2.權(quán)利要求1定義的通式(I)化合物及其酸加成鹽，其中n等于2。
3.權(quán)利要求1定義的對應(yīng)于通式(I′)的通式(I)化合物及其酸加成鹽 其中R1和R2定義同上。
4.權(quán)利要求1定義的式(I)化合物，它們是下述化合物(20R)-(8α，9β，13α，14β，17α)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇，(20S)-(8α，9β，13α，14β，17α)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇，(20R)-(8α，9β，13α，14β，17β)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇，(20S)-(8α，9β，13α，14β，17β)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇，及上述化合物的酸加成鹽。
5.權(quán)利要求1定義的式(I)化合物，它們是(20S)-(8α，9β，13α，14β，17α)-20-(((二甲氨基)乙基)氨基)-19-去甲孕甾-1，3，5(10)-三烯-3-醇及其酸加成鹽。
6.權(quán)利要求1定義的式(I)產(chǎn)物的制備方法，其特征在于使式(II)產(chǎn)物 其中R3與權(quán)利要求1的定義相同，適宜地與?；瘎┗蛲榛瘎┓磻?yīng)制得式(IIA)產(chǎn)物 其中R3的定義同上，R′5的定義除氫之外與權(quán)利要求1中的R5定義相同；使式(II)或(IIA)產(chǎn)物與氰化劑反應(yīng)制得式(III)產(chǎn)物 其中R3和R3的定義同上，且其中的波浪線表示該產(chǎn)物以純立體異構(gòu)體(17α-OH，17β-CN)或(17α-CN，17β-OH)形式存在或以混合物形式存在；使式(III)產(chǎn)物進(jìn)行脫水反應(yīng)制得式(IV)產(chǎn)物 其中R3和R5的定義同上；使式(IV)產(chǎn)物進(jìn)行16-17位雙鍵的還原反應(yīng)制得式(V)產(chǎn)物 其中波浪線表示CN取代基位于17α或17β位，或?yàn)?7α和17β的混合物形式，R3和R5的定義同上；使式(V)產(chǎn)物與由權(quán)利要求1定義的R4基團(tuán)衍生的有機(jī)金屬試劑反應(yīng)，接著與酸水解試劑反應(yīng)，制得式(VI)產(chǎn)物 其中R3、R4和R5的定義同上，且其中的波浪線表示COR4取代基位于17α或17β位，或?yàn)?7α和17β的混合物形式；使式(VI)產(chǎn)物與羥胺鹽反應(yīng)制得式(VII)產(chǎn)物 其中R3、R4和R5的定義同上，且其中的波浪線表示C(R4)＝N-OH取代基位于17α或17β位，或?yàn)?7α和17β的混合物形式，而且肟處于順式或反式位置，或?yàn)轫樖胶头词降幕旌衔镄问?；使?VII)產(chǎn)物進(jìn)行肟的還原反應(yīng)制得式(VII)產(chǎn)物 其中波浪線表示NH2取代基位于20R或20S位，或?yàn)?0R和20S的混合物形式，R3、R4和R5的定義同上；使式(VII)產(chǎn)物與下式的酰鹵反應(yīng)x-CO-(CH2)n′-NR1R2其中X代表鹵原子，R1和R2如權(quán)利要求1所定義，n′等于n-1，n如權(quán)利要求1所定義；然后，必要時(shí)使中間形成的二?；衔镌?位上進(jìn)行選擇性水解，制得式(IX)產(chǎn)物 其中波浪線，R1、R2、R3、R4、R5和n′的定義同上；使式(IX)產(chǎn)物進(jìn)行酰胺酮基的還原反應(yīng)；然后如果需要和必需的話，按任意次序進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)下列的反應(yīng)—在3位上的?；磻?yīng)—在3位上的烷基化反應(yīng)，—在3位上的酰氧基的皂化反應(yīng)，—不同立體異構(gòu)體的分離，—與有機(jī)酸或無機(jī)酸的成鹽反應(yīng)。
7.權(quán)利要求1定義的式(I)化合物及其可藥用的酸加成鹽用作藥物。
8.權(quán)利要求2-4中任一項(xiàng)定義的式(I)化合物及其可藥用的酸加成鹽用作藥物。
9.權(quán)利要求5定義的式(I)化合物及其可藥用的酸加成鹽用作藥物。
10.含有至少一種權(quán)利要求7-9中任一項(xiàng)定義的藥物作為活性成份的藥物組合物。
11.作為新的工業(yè)產(chǎn)品的權(quán)利要求6定義的式(IIA)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)產(chǎn)物，但其中R′5為含有至多12個(gè)碳原子的烷基的式(IIA)產(chǎn)物除外。
全文摘要
本發(fā)明公開了式(I)化合物及其酸加成鹽，其中各取代基定義參見說明書；還公開了它們的制備方法、它們作為藥物的用途、含有它們的藥物組合物、以及所得的新的中間體。
文檔編號(hào)A61P43/00GK1118352SQ9510383
公開日1996年3月13日 申請日期1995年3月31日 優(yōu)先權(quán)日1994年4月1日
發(fā)明者A·邦菲爾斯, D·菲利伯特 申請人:魯索-艾克勒夫公司