專利名稱：L－肉毒堿和衍生物用于降低神經(jīng)酰胺水平和增強抗轉錄病毒活性的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及L-肉毒堿、其衍生物和它們的藥用鹽的新的治療應用，它們與用于治療HIV-感染和AIDS的抗轉錄病毒藥結合使用。更具體地說，本發(fā)明涉及L-肉毒堿、其中直鏈或支鏈的?；哂?-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和其藥用鹽的應用，它們與逆轉錄酶的類核苷抑制劑、逆轉錄酶的非核苷抑制劑和HIV蛋白酶抑制劑結合使用，用于降低神經(jīng)酰胺水平和提高前述抗轉錄病毒藥對HIV-感染患者的活性。
能造成人免疫缺陷病毒1或2(HIV-1，HIV-2)感染發(fā)展的大多數(shù)致病機理直接或間接地與免疫系統(tǒng)的一般激活狀態(tài)有關。
免疫系統(tǒng)的慢性激活增強了病毒復制，這是通過一些有助于HIV表達的細胞因子的分泌和通過保持激活的免疫細胞的回復達到的，所述的免疫細胞是作為HIV的靶細胞并有助于它的復制。
而且，免疫系統(tǒng)持續(xù)激活的狀態(tài)會誘導這種性質(例如提高的編程性細胞死亡)的反常，因此會導致免疫應答減弱的發(fā)展。
這樣就形成了一種惡性循環(huán)逐漸喪失免疫系統(tǒng)的應答能力→病毒傳播→減少病毒的排除→免疫系統(tǒng)的慢性激活。上述過程可經(jīng)歷數(shù)年直到免疫系統(tǒng)出現(xiàn)顯著的破壞而導致無法控制的病毒復制以及發(fā)生感染的機會，或者是成為獲得型免疫缺陷綜合癥(AIDS)。
在上述列出的致病機理的基礎上，很清楚任何抗HIV治療都必須有助于減少病毒的復制和阻斷免疫系統(tǒng)的破壞。
就抗轉錄病毒的治療而言，不幸地是HIV是以高度的遺傳變異性為特征的，這種變異主要起源于逆轉錄酶精確性的基本喪失。轉錄病毒酶缺少控制可能的轉錄錯誤的酶系統(tǒng)，結果是產(chǎn)生病毒的變體-在病毒復制功能的范圍內-這就會造成逐步地避開免疫系統(tǒng)和對于抗轉錄病毒藥的耐藥性。在使用疊氮胸苷(zidovudine)(AZT，ZDV)時，單獨治療的情況下臨床效果的喪失是眾所周知的事實。最近公開的抗轉錄病毒藥如2，3-雙脫氧胞苷(zalcitabine)[ddc]、2，3-雙脫氧肌苷(didanosine)[ddI]和lamivudine[3TC]有同樣的問題。
最近發(fā)現(xiàn)神經(jīng)酰胺刺激HIV的表達。還有，神經(jīng)酰胺是能夠誘導細胞的編程性細胞死亡的因素之一，表現(xiàn)為由于HIV感染而使感染主體的神經(jīng)酰胺增加，并且造成TCD4和TCD8淋巴細胞的缺失。因此，顯然神經(jīng)酰胺濃度或代謝的變化可以影響HIV感染主體的病毒負載和細胞的編程性細胞死亡(Papp B.等，AIDS，Res.Hum.Retrovirus，10(7)，775-80)。
驚人地是，發(fā)現(xiàn)L-肉毒堿和其衍生物，即其中直鏈或支鏈的?；哂?-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和它們的藥用鹽至少能夠抑制25％的神經(jīng)酰胺合成，當它們與抗轉錄病毒藥如AZT、雙脫氧胸苷(stavudine)[d4T]、氟胸苷(florothymidine)[FLT]、疊氮尿苷(azidouridine)[Azdu]、無環(huán)核苷磷酸鹽[PMEA]、HIV-1特異性核苷[TSAO]、2，3-雙脫氧胞苷[ddc]、2，3-雙脫氧肌苷[ddI]]和lamivudine[3TC]、二吡啶并二吖庚因酮、四氫咪唑并苯并二吖庚因、吡啶酮或L藥、雙雜芳基哌嗪、α-苯胺基苯乙酰胺衍生物、喹唑啉(quinaxoline)衍生物、Ro-31-8959、U-81749、KNI-227、SC-52151、HOE/BAY 793等結合使用時，能夠提高這些藥物的抗轉錄病毒活性和保護免疫系統(tǒng)的作用。
除了內鹽以外，L-肉毒堿或?；鵏-肉毒堿的藥用鹽還包括與不會增加不希望有的毒性或副作用的酸形成的任何鹽。這些酸是藥學技術領域中普通熟練的藥學家和專業(yè)人員所熟知的。
適當鹽的非限制性實例包括氯化物；溴化物；碘化物；天門冬氨酸鹽，特別是酸性天門冬氨酸鹽；檸檬酸鹽，特別是酸性檸檬酸鹽；酒石酸鹽；磷酸鹽，特別是酸性磷酸鹽；富馬酸鹽，特別是酸性富馬酸鹽；甘油磷酸鹽；葡糖磷酸鹽；乳酸鹽；馬來酸鹽，特別是酸性馬來酸鹽；乳清酸鹽；草酸鹽，特別是酸性草酸鹽；硫酸鹽，特別是酸性硫酸鹽；三氯乙酸鹽；三氟乙酸鹽和甲磺酸鹽。
特別優(yōu)選的是L-肉毒堿。乙?；?、丙?；?、丁?；?、戊?；彤愇祯；鵏-肉毒堿。
L-肉毒堿和上述定義的其衍生物與抗轉錄病毒劑加起來結合用藥通常是通過口服或腸胃外給藥途徑，日劑量范圍是1-500mg/kg，特別優(yōu)選劑量是20-100mg/kg，L-肉毒堿和上述定義的其衍生物與抗反轉錄病毒劑的比例是1∶40至40∶1，特別的優(yōu)選比例為1∶10至10∶1。
合適地，用藥是采取單位劑量形式，其中包括活性成分和也可包括賦形劑，以及本領域熟練技術人員所熟知的活性成分，例如葡聚糖、TNF-α抑制劑(如五氧葉綠素)、谷胱甘肽和其它抗氧化劑藥物(如乙?；腚装彼?、免疫調節(jié)藥、免疫抑制或化學治療劑，維生素和微量元素。
最后，應注意到所有這些提出在治療HIV感染和AIDS時，其它堿性氨基酸，特別是賴氨酸，堿性氨基酸酰基衍生物和它們的藥用鹽能夠降低神經(jīng)酰胺水平和能夠增強抗轉錄病毒藥的活性。
下述實施例的目的是說明本發(fā)明，而不以任何方式限制可能的范圍。
實施例1對13個患有AIDS的患者將L-肉毒堿(每天口服8g，共4周)和AZT(每天口服600mg)一起用藥的效果進行評價，這些患者的血清和細胞內的肉毒堿和乙?；舛緣A水平正常，并且在這之前至少已經(jīng)用AZT治療了(每天口服600mg)6個月。
進行如下測定在結合治療之前患者僅用AZT治療(T0)，用L-肉毒堿-AZT結合治療4周后(T1)和中斷用L-肉毒堿治療而僅用AZT治療1個月后(T2)。采用特異的單克隆抗體用流動血細胞計數(shù)測定TCD4淋巴細胞(每mm3的淋巴細胞數(shù)目)，在用propydium iodide染色以后用流動血細胞計數(shù)測定編程性細胞死亡的(apoptotic)淋巴細胞，用次二倍體核對細胞進行定量(每50,000細胞中淋巴細胞的數(shù)目)。通過聚合酶鏈反應對HVI-1 RNA定量以測定病毒的負載(每毫升血漿中病毒顆粒的數(shù)目)(Roche的Amplicor HIV測定系統(tǒng))。統(tǒng)計過程使用Wilcoxon檢驗。
結果列于下表1。
表1<
對同一主體按照DAG(二?；视?激酶試驗(Cifone M.G.等，J.Exp.Med.，180(4)，1547-52)測定淋巴細胞中的神經(jīng)酰胺，由結合治療前測定的48±8pmol/106淋巴細胞(T0)減低到27±5pmol/106淋巴細胞(T1)(p＜0.01)，在中斷L-肉毒堿治療1個月以后再次升高至38±9pmol/106淋巴細胞(T2)。
此結果清楚地說明單獨用AZT治療，即使比前述的6個月(T0)時間更長，也達不到用L-肉毒堿-AZT結合治療4周(T1)在免疫學和病毒學方面達到的改進效果，這種改進在中斷治療后(T2)下降。
實施例24個患有AIDS的患者每天口服600mgAZT進行治療，在它們之中，有2名患者還每天施用3g L-肉毒堿。治療的總時間為6個月。在治療前后進行肌肉的活組織檢查。在聲處理和均化活組織檢查的材料之后，于治療前后測定肌肉細胞中的神經(jīng)酰胺水平。如實施例1所述測定同一肌肉均化物中的病毒負載。
結果列于下表2。
表2<
>
很明顯，與單獨用AZT治療相比，用L-肉毒堿-AZT結合治療在減少病毒負載和降低神經(jīng)酰胺水平，也包括在肌肉中的水平方面顯然更為有效。
權利要求
1. L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的酰基具有2-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和它們的藥用鹽在制備適用于降低神經(jīng)酰胺水平以治療HIV-感染和AIDS的藥物中的用途。
2.權利要求1的用途，它們是與逆轉錄酶的類核苷抑制劑、逆轉錄酶的非核苷抑制劑和HIV蛋白酶抑制劑結合使用，用于制備適用于降低神經(jīng)酰胺水平和提高前述抗轉錄病毒藥治療HIV-感染和AIDS的活性的藥物。
3.權利要求1或2的用途，其中使用的是L-肉毒堿。
4.權利要求1或2的用途，其中的?；舛緣A是異戊基L-肉毒堿。
5.權利要求1或2的用途，其中使用的是堿性氨基酸、酰基化堿性氨基酸或其藥用鹽。
6.用于降低神經(jīng)酰胺水平以治療HIV-感染和AIDS的口服或腸胃外給藥的藥物組合物，該組合物包括能有效降低神經(jīng)酰胺水平的活性成分量的L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的?；哂?-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和它們的藥用鹽，和至少一種藥學上可接受的賦形劑。
7.與逆轉錄酶的類核苷抑制劑、逆轉錄酶的非核苷抑制劑和HIV蛋白酶抑制劑結合使用的，用于治療HIV-感染和AIDS的口服或腸胃外給藥的藥物組合物，該組合物包括能有效降低神經(jīng)酰胺水平和病毒負載以及能夠提高HIV-感染的患者的免疫能力量的L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的?；哂?-6個碳原子的酰基L-肉毒堿和它們的藥用鹽，和至少一種藥學上可接受的賦形劑。
8.用于降低神經(jīng)酰胺水平和提高抗轉錄病毒藥的效果以治療HIV-感染和AIDS的口服或腸胃外給藥的單位劑型中的藥物組合物，該組合物包括至少一種選自逆轉錄酶的類核苷抑制劑、逆轉錄酶的非核苷抑制劑或HIV蛋白酶抑制劑的抗轉錄病毒藥，能有效降低神經(jīng)酰胺水平和病毒負載以及能夠提高HIV-感染的患者的免疫能力量的L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的?；哂?-6個碳原子的酰基L-肉毒堿和它們的藥用鹽，和至少一種藥學上可接受的賦形劑。
9.權利要求6或7的藥物組合物，其中L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的酰基具有2-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和它們的藥用鹽的量是日劑量為1-500mg/kg的L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的?；哂?-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和它們的藥用鹽以及抗轉錄病毒藥，L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的酰基具有2-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和它們的藥用鹽與抗轉錄病毒藥的比例是1∶40至40∶1。
10.權利要求6或7的藥物組合物，其中L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的酰基具有2-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和它們的藥用鹽的量是日劑量為20-100mg/kg的L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的?；哂?-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和它們的藥用鹽以及抗轉錄病毒藥，L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的?；哂?-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和它們的藥用鹽與抗轉錄病毒藥的比例是1∶10至10∶1。
11.單位劑量形式的權利要求8的口服或腸胃外給藥的藥物組合物，其中L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的?；哂?-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和它們的藥用鹽的量是日劑量為1-500mg/kg的L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的?；哂?-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和它們的藥用鹽以及抗轉錄病毒藥，L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的?；哂?-6個碳原子的酰基L-肉毒堿和它們的藥用鹽與抗轉錄病毒藥的比例是1∶40至40∶1。
12.單位劑型的權利要求8的口服或腸胃外給藥的藥物組合物，其中L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的?；哂?-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和它們的藥用鹽的量是日劑量為20-100mg/kg的L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的?；哂?-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和它們的藥用鹽以及抗轉錄病毒藥，L-肉毒堿、其中的直鏈或支鏈的?；哂?-6個碳原子的?；鵏-肉毒堿和它們的藥用鹽與抗轉錄病毒藥的比例是1∶10至10∶1。
13.權利要求1-12任意一項的藥物組合物，其中還含有至少一種選自葡聚糖、α-TNF抑制劑、抗氧化劑藥物、免疫調節(jié)劑、免疫抑制劑、化學治療劑、維生素和微量元素的組分。
全文摘要
本發(fā)明提供了L－肉毒堿。其衍生物和它們的藥用鹽與抗轉錄病毒藥結合使用以降低神經(jīng)酰胺水平和提高所述抗轉錄病毒藥治療HIV－感染和AIDS的活性的新用途。
文檔編號A61K31/221GK1193912SQ96196529
公開日1998年9月23日 申請日期1996年7月19日 優(yōu)先權日1995年8月3日
發(fā)明者S·莫里逖 申請人:希格馬托制藥工業(yè)公司, 門德斯公司