專利名稱：(22RS)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺的 ...的制作方法
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本發(fā)明涉及通式(I)和(II)兩種差向異構體，
即(22R)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺[通式(I)化合物]和(22S)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺[通式(II)化合物]。
本說明書通式中的虛線(
)表示取代基是α構型，即在環(huán)平面下，楔型線(
)表示取代基是β構型，即在環(huán)平面上。
通式(I)和(II)化合物的代謝產(chǎn)物和代謝前體都在本發(fā)明范圍內。
比例為1∶1的通式(I)和(II)的差向異構體混合物即化合物(22RS)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺(實驗室代碼FCE 28260)已在我們前一國際專利申請W094/03475(參見第15頁化合物41和第45頁實施例5)中公開，而(22R)或(22S)的單一差向異構體沒有在其中具體說明。
已證明該差向異構體混合物是體內及體外都有效的睪酮5α-還原酶抑制劑(參見WO94/03475第33頁表(I)中數(shù)據(jù))，因此可用于需要降低雄激素活性的病例，例如治療良性前列腺增生、乳腺和前列腺癌以及某些皮膚-頭發(fā)(skin-hair)變化，例如治療粉刺、脂溢性皮炎、婦女多毛癥和男子禿頂。
我們已將兩種差向異構體從其差向異構體混合物中分離出，并且評價了它們作為睪酮5α-還原酶抑制劑的活性。
該兩種差向異構體可按照WO94/03475中描述的方法制備，然后分離差向異構體混合物?？赏ㄟ^高壓液相色譜法(HPLC)進行所述分離。
另外，通過將3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酸與先前已拆分過的單一對映體1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺反應可獲得彼此獨立的單一差向異構體。
此外，由于將3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酸與(±)-1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺反應而獲得的相應差向異構體酰胺比相應的3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺差向異構體更易于分離，所以單一純度的差向異構體可有利地按如下獲得a)將3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酸或其衍生物與(±)-1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺反應；b)分離所得(22RS)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酰胺的兩種差向異構體(例如通過硅膠上的快速色譜法)；c)按照已知反應分別將所得的差向異構體轉化為最終的通式(I)和(II)差向異構體。
以下反應方案I(C(22)位的絕對構型是推測的)描述了這一合成途徑
方案I
d)NaOH，H2O，二噁烷/回流/3he)(COCl)2，T甲苯/RT/3hf)(±)-PhCF3(CH3)CNH2，吡啶，CHCl3/回流/5hg)色譜分離h)KMnO4，NalO4，tBuOH/35-40℃/2h
方案I(續(xù))
i)NH3，(CH2OH)2/0-180℃/2hl)H2/PtO2，AcOH/40-50psi/45-50°m)(PhSeO)2O，PhCl/回流/5h
如下文所述，體外抑制人前列腺睪酮5α-還原酶的生物試驗意外地表明，一種差向異構體(分別測試)的活性是另一種的約兩倍，而差向異構體混合物如所預料的具有中間活性。
因此，本發(fā)明的目的是上述兩種通式(I)和(II)差向異構體以及它們作為5α-還原酶抑制劑的用途。
這些差向異構體可用于需要降低雄激素活性的病例，例如治療和/或化學預防良性前列腺增生和前列腺癌。另外，這些差向異構體也可用于治療乳腺癌和某些皮膚-頭發(fā)變化，例如治療粉刺、脂溢性皮炎、婦女多毛癥和男子禿頂。
另外，本發(fā)明涉及含有通式(I)或(II)的差向異構體之一或者其混合物(其中一種差向異構體的含量大大超過另一種)以及一種或多種可藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物。
含有本發(fā)明化合物的藥物組合物通常按照常規(guī)方法制備，并且以適當藥物形式給藥，例如WO94/03475中所述的那些之一。
以下實施例進一步闡明本發(fā)明。
實施例1(22RS)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺氮氣下，經(jīng)30分鐘在3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾烷-17β-羧酸(7克)的氯仿(100毫升)懸浮液中滴加入亞硫酰氯(SOCl2)(35毫升)的氯仿(15毫升)溶液，在冰水浴中保持反應混合物在約+3℃。室溫下攪拌懸浮液1小時，然后真空蒸發(fā)揮發(fā)性化合物。得到白色固體。
將該固體懸浮在氯仿(330毫升)中，將懸浮液冷卻至+3℃；加入吡啶(1.78毫升)，然后加入(±)-1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺(7.1克)，將反應混合物加熱至60℃并保持4小時，然后于室溫攪拌過夜。將反應混合物倒入氯化銨飽和水溶液(500毫升)中，分離有機層，水層用二氯甲烷萃取(2×100毫升)。合并的有機萃取物用水洗滌，以硫酸鈉干燥，真空除去溶劑。將粗品在硅膠上通過快速色譜純化(洗脫液二氯甲烷/丙酮70∶30)，從而得到7.036克(22RS)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺[差向異構體比例50∶50，HPLC(柱Partisphere C8，4.6×250mm；洗脫液乙腈/水50∶50；流速1mL/分鐘；檢測器210nm UV)]。
實施例2通過制備型HPLC將該混合物分離成單一差向異構體儀器PrepLC/System 500(Water Associates)柱2PrepPAK-500/SILICA洗脫液甲苯/乙酸/甲醇100∶3∶3流速150毫升/分鐘檢測器折射率因為X射線結晶學尚沒有確定單一差向異構體的絕對構型，因此用實驗室代碼FCE 29330和FCE 29331分別區(qū)分第一個洗脫下來的差向異構體(Rfsup.)和第二個洗脫下來的化合物(Rfinf.)。FCE 29330NMR(CDCl3)δ7.50-7.33(m，5H，Ph)，6.78(d，1H，H(1))，5.87(bs，1H，NH(21))，5.82(dd，1H，H(2))，5.48(bs，1H，NH(4))，3.33(dd，1H，H(5a))，2.07(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，0.98(s，3H，Me(19))，0.72(s，3H，Me(18)).[α]D+46.7°(c0.89，無水EtOH)FCE 29331NMR(CDCl3)δ7.50-7.33(m，5H，Ph)，6.78(d，1H，H(1))，5.90(bs，1H，NH(21))，5.82(dd，1H，H(2))，5.48(bs，1H，NH(4))，3.33(dd，1H，H(5a))，2.04(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，0.98(s，3H，Me(19))，0.68(s，3H，Me(18)).[α]D+58.3°(c0.061，無水EtOH)實施例3
將外消旋(±)-1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺拆分成單一對映體用(+)-O，O，-二苯甲?；?D-酒石酸處理外消旋(±)-1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺；從異丙醇中結晶出非對映體鹽。5次結晶后，得到部分拆分的胺，其中主要是(+)-對映體[對映體比例(+)/(-)＝88/12]。
類似地，從異丙醇中將外消旋胺與(-)-O，O’-二苯甲酰基-L-酒石酸的非對映體鹽結晶5次后，得到富含(-)-對映體的胺[對映體比例(+)/(-)＝12/88]。
實施例4將3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾烷-17β-羧酸與富含(+)-對映體的胺[對映體比例(+)/(-)＝88/12]反應，得到FCE 29331和FCE 29330混合物，其中FCE29331/FCE 29330的差向異構體比例為88/12(HPLC確定)。
將3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾烷-17β-羧酸與富含(-)-對映體的胺[對映體比例(+)/(-)＝12/88]反應，得到FCE 29331和FCE 29330混合物，其中FCE29331/FCE 29330的差向異構體比例為12/88(HPLC確定)。
實施例5(22RS)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酰胺(化合物(VI))在冷卻至10℃的3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酸(化合物(IV))(2.00克)的甲苯(28毫升)和吡啶(0.640毫升)懸浮液中經(jīng)10分鐘加入草酰氯(0.68毫升)的甲苯(4毫升)溶液。除去冷卻浴，將混合物于室溫攪拌1.5小時。在低于40℃的溫度減壓除去揮發(fā)性化合物。將所得酰氯(化合物(V))溶于氯仿(100毫升)，于冰水浴中冷卻；加入三乙胺(0.876毫升)，然后加入(±)-1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺(2.375克)的氯仿(4毫升)溶液。加熱回流反應混合物4小時。將反應混合物倒入冷卻的飽和氯化鈉水溶液(200毫升)中，用二氯甲烷萃取(3×100毫升)；有機萃取物用水洗滌，以硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑。得到2.150克標題化合物。
在硅膠上通過快速色譜分離兩種差向異構體(洗脫液正己烷/乙酸乙酯70∶30)，得到770毫克較少保留(Rfsup.)的差向異構體和700毫克較多保留(Rfinf.)的差向異構體。
按照類似方法，用富含(+)-對映體的胺[對映體比例(+)/(-)＝88/12]可獲得Rfinf.和Rfsup.差向異構體間具有相同差向異構體比例的最終化合物。該事實表明(+)-胺產(chǎn)生Rfinf.差向異構體。
類似地，用富含(-)-對映體的胺可得到富含Rfsup.差向異構體的最終化合物。
化合物(VIb)(Rfsup.)NMR(CDCl3)δ7.50-7.30(m，5H，Ph)，5.86(bs，1H，NH(21))，5.75(m，1H，H(4))，2.08(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，1.20(s，3H，Me(19))，0.76(s，3H，Me(18)).[α]D+187°(cl，無水EtOH)化合物(VIa)(Rfinf.)NMR(CDCl3)δ7.50-7.30(m，5H，Ph)，5.90(bs，1H，NH(21))，5.75(m，1H，H(4))，2.04(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，1.20(s，3H，Me(19))，0.72(s，3H，Me(18)).[α]D +126°(c1，無水EtOH)17β-[N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)氨基甲酰基]-5-氧代-4-去甲-3，5-斷雄烷-3-酸(Rfinf.)(化合物(VIIa))于約40℃，在N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酰胺(Rfinf.)(化合物(VIa))(1.70克；3.486毫摩爾)的叔丁醇(40毫升)溶液和2M碳酸鈉水溶液(2.09毫升)中經(jīng)約5分鐘同時滴加入2％高錳酸鉀水溶液(1.8毫升)和0.75M偏高碘酸鈉水溶液(30毫升)，加入的速率應使反應混合物一直保持粉紅色。在40℃攪拌1小時15分鐘后，將反應混合物冷卻至室溫，過濾，通過真空蒸發(fā)將叔丁醇從濾液中除去(收集到40毫升溶劑)。然后將溶液冷卻至約0℃，用水稀釋，以1N鹽酸酸化并用乙酸乙酯(4×30毫升)和二氯甲烷(2×30毫升)萃?。皇占降挠袡C萃取物用水(2×30毫升)、鹽水(20毫升)洗滌，用硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑后得到固體狀泡沫，通過快速色譜純化(洗脫液∶正己烷/乙酸乙酯50∶50)而得到1.656克白色固體化合物。NMR(CDCl3)δ7.30-7.50(m，5H，Ph)，5.90(bs，1H，NH)，2.04(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，1.12(s，3H，Me(19))，0.71(s，3H，Me(18)).MS(FAB+)(m/z)508[M+H]+，490[M-H2O+H]+，336[M-C(CF3)CH3Ph+2H]+，173 PhCH3(CF3)C+[α]D+108.2°(c1，無水乙醇 )按照類似方法，以N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酰胺(Rfsup.)(化合物(VIb))開始，可得到差向異構體化合物(化合物VIIb)NMR(CDCl3)δ7.30-7.50(m，5H，Ph)，5.88(bs，1H，NH)，2.08(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，1.14(s，3H，Me(19))，0.78(s，3H，Me(18)).[α]D+80°(c1，無水乙醇)N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-雄甾-5-烯-17β-羧酰胺(Rfinf.)(化合物(VIIIa))在0℃用無水氨氣將17β-[N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)氨基甲?；鵠-5-氧代-4-去甲-3，5-斷雄烷-3-酸(Rfinf.)(化合物(VIIa))(1.540克)的無水乙二醇(35毫升)懸浮液飽和斷酸完全溶解。將所得溶液經(jīng)1小時10分鐘緩慢加熱至180℃，并在該溫度保持20分鐘。然后經(jīng)0.5小時使溫度達室溫。在徹底攪拌下將黃色溶液冷卻至約0℃最終化合物開始沉淀。用水(30毫升)稀釋后，于0℃繼續(xù)攪拌0.5小時，過濾沉淀物，用水洗滌。得到1.36克淡褐色固體，在硅膠上通過快速色譜純化(洗脫液∶正己烷/乙酸乙酯50∶50)，得到1.090克標題化合物。NMR(CDCl3)δ7.50-7.30(m，5H，Ph)，5.88(bs，1H，NH)，4.81(m，1H，H(6))，2.06(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，1.12(s，3H，Me(19))，0.71(s，3H，Me(18)).[α]D+48.5°(c1，無水乙醇)按照類似方法，以17β-[N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)氨基甲?；鵠-5-氧代-4-去甲-3，5-斷雄烷-3-酸(Rfsup.)(化合物(VIIb))開始，得到差向異構體化合物(化合物VIIIb)NMR(CDCl3)δ7.50-7.30(m，5H，Ph)，5.88(bs，1H，NH)，4.78(m，1H，H(6))，2.09(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，1.12(s，3H，Me(19))，0.74(s，3H，Me(18)).[α]D-2°(c1，無水乙醇)N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾烷-17β-羧酰胺(Rfinf.)(化合物(IXa))45℃時，在PtO2(Adams’催化劑)(140毫克)存在下于45psi壓力的氫氣下將N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-雄甾-5-烯-17β-羧酰胺(Rfinf.)(化合物(VIIIa))(700毫克)的冰醋酸(45毫升)溶液氫化1小時。將反應混合物冷卻至室溫，濾除催化劑，減壓除去溶劑。用二氯甲烷溶解殘余物，用1N硫酸、鹽水、碳酸鈉水溶液、鹽水、水洗滌，硫酸鈉干燥，真空除去溶劑。將所得粗制固體在硅膠上通過快速色譜純化(洗脫液甲苯/乙酸乙酯/甲醇75∶20∶5)而得到420毫克標題化合物。NMR(CDCl3)δ7.50-7.30(m，5H，Ph)，5.88(bs，1H，NH(21))，5.55(bs，1H，NH(4))，3.06(dd，1H，H(5a))，2.05(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，0.92(s，3H，Me(19))，0.68(s，3H，Me(18)).[α]D+12°(c1，無水乙醇)按照類似方法，從N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-5-烯-17β-羧酰胺(Rfsup.)(化合物(VIIIb))開始，得到差向異構體化合物(化合物(IXb))NMR(CDCl3)δ7.50-7.30(m，5H，Ph)，5.88(bs，1H，NH(21))，5.55(bs，1H，NH(4))，3.06(dd，1H，H(5a))，2.05(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，0.92(s，3H，Me(19))，0.71(s，3H，Me(18)).[α]D+62°(c1，無水乙醇)N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺(Rfinf.)(FCE 29331)在N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾烷-17β-羧酰胺(Rfinf.)(化合物(IXa))(106毫克)的氯苯(5毫升)溶液中加入苯基亞硒酸酐(108.3毫克)。將溶液回流5小時，同時通過Marcusson裝置除去水。蒸發(fā)溶液，將殘余物溶于二氯甲烷中，用碳酸鈉水溶液、飽和氯化鈉溶液及水洗滌，硫酸鈉干燥。蒸發(fā)溶劑后，將粗品通過快速色譜純化(洗脫液甲苯/乙酸乙酯/甲醇75∶20∶5)而得70毫克標題化合物。NMR(CDCl3)δ7.50-7.33(m，5H，Ph)，6.78(d，1H，H(1))，5.90(bs，1H，NH(21))，5.82(dd，1H，H(2))，5.48(bs，1H，NH(4))，3.33(dd，1H，H(5a))，2.04(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，0.98(s，3H，Me(19))，0.68(s，3H，Me(18)).[α]D+46°(c1，CHCl3)按照類似方法，從N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾烷-17β-羧酰胺(Rfsup.)(化合物(IXb))開始，得到差向異構體化合物FCE29330NMR(CDCl3)δ7.50-7.33(m，5H，Ph)，6.78(d，1H，H(1))，5.87(bs，1H，NH(21))，5.82 dd，1H，H(2))，5.48(bs，1H，NH(4))，3.33(dd，1H，H(5a))，2.07(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，0.98(s，3H，Me(19))，0.72(s，3H，Me(18)).[α]D+21°(c1，CHCl3)如該實施例所示，從(+)-胺獲得FCE 29331，而FCE 29330是從(-)-胺獲得的。
體外5α-還原酶抑制試驗用來自增生人前列腺組織勻漿的粒狀部分作為酶源評價對5α-還原酶的抑制。在140,000×g將前列腺組織勻漿離心而制備粒狀部分。將所得顆粒洗滌數(shù)次后再懸浮在緩沖液中，以含有約10mg蛋白質/毫升的等分保存在-80℃。
在pH 5.5的40mM TRIS-HCl緩沖液中于0.5毫升的終體積進行5α-還原酶試驗，該緩沖液含有1mM二硫蘇糖醇、5mM NADPH、1uM[14C]睪酮、等分酶制劑和不同濃度的抑制劑。在37℃孵育30分鐘后，加入2毫升冷乙醚終止反應，分離有機相，于氮氣下蒸發(fā)，再懸浮于乙酸乙酯中。在硅膠F 254板(Merck)上TLC分離該提取物中的睪酮代謝產(chǎn)物，用氯仿、丙酮和正己烷(2∶1∶2)作為展開溶劑系統(tǒng)。
記錄板上的放射性，通過TLC-分析儀(Berthold)描繪的定量圖分析。通過比較5α-還原代謝產(chǎn)物(5α-二氫睪酮、3α-和3β-雄甾烷二醇)區(qū)域中的14C-放射性和睪酮及5α-還原代謝產(chǎn)物區(qū)域的總放射性計算睪酮5α-還原作用分數(shù)。50％降低對照5α-還原酶活性所需每一化合物的濃度(IC50)通過繪制％抑制對抑制劑濃度的對數(shù)值(log)來確定。
單一差向異構體FCE 29330和FCE 29331所得結果以及外消旋混合物FCE 28260所得結果如下表1所示。
表1FCE 28260的立體異構體對人前列腺5α-還原酶的體外抑制化合物 IC50(nM)FCE 2826012FCE 2933017FCE 293318從表1所示結果可看出，差向異構體FCE 29331的活性是另一差向異構體FCE 29330活性的約2倍?；旌衔颋CE 28260，正如所料，表現(xiàn)出中間活性。
權利要求
1.通式(I)和(II)的差向異構體
即(22R)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺[通式(I)化合物]和(22S)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺[通式(II)化合物]。
2.一種制備權利要求1的通式(I)或(II)的差向異構體的方法，包括從相應差向異構體混合物中分離單一差向異構體。
3.一種制備權利要求1的通式(I)或(II)的差向異構體的方法，包括將3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酸與先前已拆分的1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺的單一對映體反應。
4.一種制備權利要求1的通式(I)或(II)的差向異構體的方法，包括a)將3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酸或其衍生物與(±)-1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺反應；b)分離所得(22RS)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酰胺的兩種差向異構體；c)按照已知反應分別將所得的差向異構體轉化為最終的通式(I)和(II)差向異構體。
5.一種含有權利要求1的通式(I)或(II)的差向異構體之一或者其混合物以及一種或多種可藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物，其中在混合物中一種差向異構體的含量大大超過另一種。
6.一種權利要求1的通式(I)或(II)化合物，用作睪酮5α-還原酶抑制劑。
7.一種權利要求1的通式(I)或(II)化合物，用作為抗雄激素藥物。
8.一種權利要求1的通式(I)或(II)化合物，用在治療和/或化學預防良性前列腺增生或前列腺癌中。
9.一種權利要求1的通式(I)或(II)化合物，用在治療乳腺癌、粉刺、脂溢性皮炎、婦女多毛癥和/或男子禿頂中。
全文摘要
本發(fā)明涉及以下差向異構體可用作睪酮5α-還原酶抑制劑的(22R)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺和(22S)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮雜-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺，并且涉及它們的制備方法和含有它們的藥物組合物。
文檔編號A61K31/58GK1159195SQ96190785
公開日1997年9月10日 申請日期1996年6月28日 優(yōu)先權日1995年7月21日
發(fā)明者A·潘澤里, M·奈西, E·迪·薩勒 申請人:法瑪西雅厄普約翰公司