專利名稱：一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腫瘤細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物的多藥耐藥(multidrug resistance, MDR)是導(dǎo)致腫瘤化學(xué)藥物治療失敗的常見(jiàn)因素。目前國(guó)內(nèi)腫瘤患病率呈上升趨勢(shì)，并且90%的腫瘤患者的死亡在不同程度上受腫瘤細(xì)胞耐藥的影響，因此需要研制新一代耐藥逆轉(zhuǎn)劑。已知某些中藥具有鈣拮抗作用，且藥物作用較溫和，并能在逆轉(zhuǎn)MDR中提高化療效果，具有很好的應(yīng)用和開(kāi)發(fā)前景。研究結(jié)果表明多種機(jī)制參與腫瘤細(xì)胞多藥耐藥形成，主要包括細(xì)胞膜P-糖蛋白(Permeabi 1 ity-glycoprotein, P_gP)、多藥耐藥相關(guān)蛋白(Multidrug Resistance Associated Protein, MRP)的過(guò)度表達(dá)形成藥物外輸泵，使抗癌藥物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)蓄積下降；谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)單獨(dú)或與谷胱甘肽(GSH) —起參與多種細(xì)胞毒代謝及解毒過(guò)程；與細(xì)胞凋亡相關(guān)的因子及基因如bcl-2，P53等異常。國(guó)內(nèi)外針對(duì)上述環(huán)節(jié)進(jìn)行了廣泛研究以尋求拮抗和/或逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞MDR的藥物，體外被證實(shí)具有逆轉(zhuǎn)耐藥活性的化合物或生物制劑很多，但真正進(jìn)入臨床研究的只有異博定、環(huán)孢菌素A等極少數(shù)，而且療效不理想。目前還沒(méi)有一種藥物或方法在臨床被廣泛接受，原因在于現(xiàn)有逆轉(zhuǎn)劑大多為“老藥新用”，逆轉(zhuǎn)耐藥往往不是其主要功能，臨床使用禁忌癥多，毒副作用大；生物制劑在體內(nèi)不穩(wěn)定，難以作用到靶點(diǎn)且毒副反應(yīng)多；臨床耐藥往往數(shù)種機(jī)制同時(shí)參與，只對(duì)單一機(jī)制起作用的逆轉(zhuǎn)劑難以發(fā)揮顯著的效應(yīng)。其中對(duì)于中藥或有效單體成分研究而言，真正能結(jié)合臨床療效和中醫(yī)理論的研究少見(jiàn)。從中醫(yī)藥學(xué)上講，中藥協(xié)同化療治療惡性腫瘤研究已從“扶正” “增效減毒”擴(kuò)展到“抗癌增敏減毒”，并已明確提出中藥的綜合治療概念，假使經(jīng)過(guò)臨床觀察療效確切的某種中藥，其既起到逆轉(zhuǎn)MDR活性，又能體現(xiàn)抗癌活性，并且兩重作用有機(jī)結(jié)合，將使其成為接近理想的腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑，體現(xiàn)出高效、低毒、靶點(diǎn)廣泛的特點(diǎn)。中國(guó)發(fā)明專利CN200710070320. 4公開(kāi)了 “姜黃素在制備腫瘤多藥耐藥預(yù)防劑中的用途”，中國(guó)發(fā)明專利CN200710143393. 1公開(kāi)了“青蒿素在制備抗腫瘤多藥耐藥藥物中的應(yīng)用”；但目前有關(guān)作為腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的中藥組合物的報(bào)道較少。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的首要目的是提供一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物。本發(fā)明的另一目的是提供上述逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥中藥組合物的制備方法。本發(fā)明的目的還在于提供上述逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物的應(yīng)用。本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物，由下述按重量份數(shù)計(jì)的中藥原料制備而成山豆根10 30份，白英10 30份，苦丁茶10 30份，側(cè)佰葉10 30份，葉子花 10 30份。優(yōu)選地，上述逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物由下述按重量份數(shù)計(jì)的中藥原料制備而成山豆根12份，白英12份，苦丁茶18份，側(cè)佰葉12份，葉子花18份。所述逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物的制備方法包括如下步驟(1)將山豆根10 30重量份，白英10 30重量份，苦丁茶10 30重量份，側(cè)佰葉10 30重量份與葉子花10 30重量份混合后加各中藥原料總重量9 10倍量水浸泡2 3小時(shí)，加熱煎煮1. 5 2小時(shí)，傾出煎煮液；藥渣再加各中藥原料總重量8 9倍量水加熱煎煮1 1. 5小時(shí)，傾出煎煮液，將兩次煎煮得到的煎煮液合并過(guò)濾，得到清液；(2)將清液濃縮至相對(duì)密度為1. 05 1. 06后進(jìn)行噴霧干燥，得到噴霧干燥粉；將噴霧干燥粉粉碎至細(xì)度為30 100目，得到逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物。所述步驟O)中的噴霧干燥條件為進(jìn)風(fēng)溫度為140 160°C，出風(fēng)溫度為100 110°c，霧化器轉(zhuǎn)速50 60轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度為3 5ml/分鐘。上述中藥組合物可用于制備逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的藥物。本發(fā)明使用的中藥原料的功效如下山豆根味苦，性寒；有毒；歸肺、胃經(jīng)；白英味苦，性微寒；有小毒；入肝、胃經(jīng)；苦丁茶味甘，苦；性寒；歸肝；肺；胃經(jīng)；側(cè)佰葉味苦、澀，性寒；歸肺、肝、脾經(jīng)；葉子花性味苦，澀；性溫；歸肝經(jīng)；本發(fā)明采用各種中藥原料配伍，起到清熱解毒功效，應(yīng)用在腫瘤多藥耐藥患者治療中，可產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的作用，且該中藥組合物無(wú)毒副作用，起到提高化療藥物療效的有益作用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果實(shí)驗(yàn)研究表明，本發(fā)明中藥組合物的血清與阿霉素聯(lián)合使用可使阿霉素對(duì)白血病細(xì)胞阿霉素耐藥株的半數(shù)抑制濃度IC5tl明顯下降，不同給藥濃度對(duì)白血病細(xì)胞阿霉素耐藥株的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為2. 87 4. 37，且呈濃度正相關(guān)，具有顯著的逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的作用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例1逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物的制備(1)稱取山豆根100g，白英300g，苦丁茶100g，側(cè)佰葉300g和葉子花100g，混合后
加各中藥原料總重量9倍量水浸泡2小時(shí)，加熱煎煮1.證，傾出煎煮液；藥渣再加各中藥原料總重量8倍量水加熱煎煮1.紐，傾出煎煮液，將兩次煎煮得到的煎煮液合并過(guò)濾，得到清液；(2)將清液濃縮至相對(duì)密度為1. 05時(shí)，送入噴霧干燥器進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)風(fēng)溫度控制為140°C，出風(fēng)溫度為100°C，霧化器轉(zhuǎn)速50轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度為:3ml/分鐘，得噴霧干燥粉30克；將噴霧干燥粉粉碎至細(xì)度為100目，得到逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物。實(shí)施例2逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物的制備(1)稱取中藥原料山豆根300g，白英100g，苦丁茶300g，側(cè)佰葉IOOg和葉子花 300g，混合后加各中藥原料總重量10倍量水浸泡3小時(shí)，加熱煎煮池，傾出煎煮液；藥渣再加各中藥原料總重量8倍量水加熱煎煮lh，傾出煎煮液，將兩次煎煮得到的煎煮液合并過(guò)濾，得到清液；(2)清液濃縮至相對(duì)密度為1. 05時(shí)，進(jìn)噴霧干燥器，進(jìn)風(fēng)溫度控制140°C，出風(fēng)溫度10(TC，霧化器轉(zhuǎn)速50轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度為:3ml/分鐘，得噴霧干燥粉50克；將噴霧干燥粉粉碎至細(xì)度為80目，得到逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物。實(shí)施例3逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物的制備(1)稱取中藥原料山豆根120g，白英120g，苦丁茶180g，側(cè)佰葉120g，葉子花 180g，混合后加各中藥原料總重量9. 5倍量水浸泡2. 5小時(shí)，加熱煎煮池，傾出煎煮液；藥渣再加各中藥原料總重量9倍量水加熱lh，傾出煎煮液，將兩次煎煮得到的煎煮液合并過(guò)濾，得到清液；(2)清液濃縮至相對(duì)密度為1. 06時(shí)，進(jìn)噴霧干燥器，進(jìn)風(fēng)溫度控制160°C，出風(fēng)溫度110°C，霧化器轉(zhuǎn)速60轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度為5ml/分鐘，得噴霧干燥粉30克；將噴霧干燥粉粉碎至細(xì)度為30目，得到逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物。實(shí)施例4實(shí)施例1制備的中藥組合物用于逆轉(zhuǎn)多藥耐藥細(xì)胞系K562/ADR耐藥性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下阿霉素是一種抗腫瘤抗生素，可抑制RNA和DNA的合成，對(duì)RNA的抑制作用最強(qiáng)， 對(duì)多種腫瘤均有作用，屬周期非特異性藥物，對(duì)各種生長(zhǎng)周期的腫瘤細(xì)胞都有殺滅作用。本實(shí)施例中白血病細(xì)胞K562/S為敏感株，K562/ADR為白血病細(xì)胞阿霉素耐藥株， 其中K562/ADR是由K562/S細(xì)胞接觸遞增濃度的阿霉素(ADR)誘導(dǎo)而成，具有典型多藥耐藥性。細(xì)胞株均培養(yǎng)于含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中。含藥血清制備NIH小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后，稱重，根據(jù)隨機(jī)數(shù)目表隨機(jī)分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、空白組共4組，每組10只；高劑量組的小鼠按本中藥組合物 40g/kg灌胃給藥，中劑量組按20g/kg灌胃給藥，低劑量組按10g/kg灌胃給藥；空白對(duì)照組以生理鹽水灌胃；給藥濁后，取血離心分離血清，56°C 30min滅活，用RPMI-1640配制不同濃度的血清培養(yǎng)液。逆轉(zhuǎn)耐藥的MTT檢測(cè)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，K562/ADR細(xì)胞以lX105/ml、K562/S以0. 5X105/ml的濃度分別接種于96孔培養(yǎng)板，100 μ 1/孔。在37°C和5% CO2條件下培養(yǎng)過(guò)夜后，加不同濃度的含藥血清和ADR共100μ 1，空白組加相應(yīng)體積的培養(yǎng)液，每組設(shè)4個(gè)平行孔。培養(yǎng)7 后， 每孔加5mg/ml噻唑藍(lán)(MTT) 20 μ 1，再培養(yǎng)4h，傾去培養(yǎng)液，加二甲基亞砜(DMSO) 100 μ 1/ 孔，待完全溶解后，用酶聯(lián)免疫儀在波長(zhǎng)570nm處空白組調(diào)零后讀取吸光度(A)值；取4孔 A值的均數(shù)，求出半數(shù)抑制濃度(IC5tl，細(xì)胞抑制率為50%時(shí)的藥物濃度)；逆轉(zhuǎn)倍數(shù)=空白組IC5tl/試驗(yàn)組IC5tl。表1實(shí)施例1制備的中藥組合物對(duì)K562/ADR耐藥株的逆轉(zhuǎn)作用
權(quán)利要求
1.一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物由下述按重量份數(shù)計(jì)的中藥原料制備而成山豆根10 30份，白英10 30份，苦丁茶10 30份，側(cè)佰葉 10 30份，葉子花10 30份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物由下述按重量份數(shù)計(jì)的中藥原料制備而成山豆根12份，白英12份，苦丁茶18份， 側(cè)佰葉12份，葉子花18份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)將山豆根10 30重量份，白英10 30重量份，苦丁茶10 30重量份，側(cè)佰葉 10 30重量份與葉子花10 30重量份混合后加入各中藥原料總重量9 10倍量的水浸泡2 3小時(shí)，加熱煎煮1. 5 2小時(shí)，傾出煎煮液；藥渣再加各中藥原料總重量8 9 倍量的水加熱煎煮1 1. 5小時(shí)，傾出煎煮液，將兩次煎煮得到的煎煮液合并過(guò)濾，得到清液；(2)將清液濃縮至相對(duì)密度為1.05 1. 06后進(jìn)行噴霧干燥，得到噴霧干燥粉；將噴霧干燥粉粉碎至細(xì)度為30 100目，得到逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物的制備方法，其特征在于所述步驟( 中的噴霧干燥條件為進(jìn)風(fēng)溫度為140 160°C，出風(fēng)溫度為100 110°C，霧化器轉(zhuǎn)速50 60轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度為3 5ml/分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物在制備逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，公開(kāi)一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用。該中藥組合物由下述按重量份數(shù)計(jì)的中藥原料制成山豆根10～30份，白英10～30份，苦丁茶10～30份，側(cè)佰葉10～30份，葉子花10～30份；將所述重量份數(shù)的中藥原料混合后加水浸泡2～3小時(shí)，加熱煎煮后傾出煎煮液，再加水加熱煎煮并傾出煎煮液，煎煮液合并后過(guò)濾，得到的清液經(jīng)濃縮、噴霧干燥、粉碎后過(guò)篩，得到逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物。本發(fā)明中藥組合物的血清與阿霉素聯(lián)合使用可使阿霉素對(duì)白血病細(xì)胞阿霉素耐藥株的半數(shù)抑制濃度明顯下降，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為2.87～4.37，且呈濃度正相關(guān)，具有顯著的逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的作用。
文檔編號(hào)A61K36/81GK102397398SQ20111037716
公開(kāi)日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2011年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月23日
發(fā)明者張榮華, 蔡宇 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)