專利名稱：超聲對(duì)比劑劑量配方的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一般的診斷顯像劑領(lǐng)域，特別涉及一種能夠提供增強(qiáng)的圖像和持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)的圖像的超聲對(duì)比劑(ultrasound contrast agent)劑量配方。
背景技術(shù)：
當(dāng)利用超聲來(lái)獲得人或動(dòng)物內(nèi)部器官和結(jié)構(gòu)的圖像時(shí)，當(dāng)超聲波、聲能波以一定的頻率(當(dāng)超過(guò)該頻率時(shí)，能被人耳所感知)穿過(guò)人體時(shí)會(huì)被反射。不同類型的身體組織對(duì)超聲波的反射不同，由反射不同內(nèi)部結(jié)構(gòu)的超聲波所產(chǎn)生的反射可以被檢出并通過(guò)電子學(xué)方法轉(zhuǎn)換為可視圖像。對(duì)于一些醫(yī)療情況，獲得人們感興趣的器官或結(jié)構(gòu)的有用的圖像尤其困難，這是因?yàn)樵谟扇狈?duì)比增強(qiáng)劑的超聲波的反射而產(chǎn)生的超聲波圖像中，上述結(jié)構(gòu)的細(xì)節(jié)不能充分地從周圍的組織中被分辯出來(lái)。通過(guò)向感興趣的器官或其他結(jié)構(gòu)中給予超聲對(duì)比劑來(lái)提高超聲波圖像中的對(duì)比度，從而本質(zhì)上改善對(duì)某些生理和病理狀況的檢測(cè)和觀察。在有些情況下，對(duì)超聲對(duì)比劑自身運(yùn)動(dòng)的檢測(cè)是非常重要的。例如，由特定的心血管異常引起的獨(dú)特的血流模式只有通過(guò)對(duì)血流給予超聲對(duì)比劑并觀察血流或血容量才可以被識(shí)別。當(dāng)超聲波穿過(guò)身體并被反射以產(chǎn)生能夠據(jù)此作出內(nèi)科診斷的圖像時(shí)，用作超聲對(duì)比劑的材料通過(guò)影響超聲波而發(fā)揮作用。不同類型的物質(zhì)以不同的方式和不同的程度影響超聲波。此外，由對(duì)比增強(qiáng)劑所引起某些效果比其它試劑更容易被測(cè)量和觀察。在選擇理想的超聲對(duì)比劑組合物時(shí)，人們通常更喜歡那些當(dāng)超聲波穿過(guò)身體時(shí)對(duì)超聲波具有最顯著作用的物質(zhì)。此外，對(duì)超聲波的作用應(yīng)該易于測(cè)量。氣體是用作超聲對(duì)比劑的較好的介質(zhì)。氣體在使用之前必須固定化， 其可以作為表面活性劑固定化氣泡或者通過(guò)用膠囊包在脂質(zhì)體或者微粒中。在超聲波圖像中可以看到三種主要的對(duì)比增強(qiáng)效果，即，背反射、射束衰減、和聲速差分。已有多種天然的和合成的聚合物被用于包封例如空氣等超聲對(duì)比劑，這些聚合物有助于制造給藥后持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)的超聲對(duì)比劑。Schneider等在Invest. Radiol. , Vol 27、 pp. 134-139(1992)中描述了三種微米級(jí)的、填充空氣的、合成的、聚合物顆粒。據(jù)報(bào)道這些顆粒在血漿中以及使用壓力下穩(wěn)定。然而，在2. 5MHz時(shí)它們的回聲反射性低。另一種微泡 '混懸物F1I從超聲處理后的蛋白肝i乳中被獲得。Feinstein等，.T. Am. Coll. Cardiol. ,Vol. 11, pp. 59-65 (1988)。Feinstein描述了具有良好的體外穩(wěn)定性、大小適合于肺與肺內(nèi)腔之間通道(transpulmonary passage)的微泡的制備。然而，由于這些微泡在壓力下不穩(wěn)定，它們?cè)隗w內(nèi)壽命短暫，半衰期大約為幾秒鐘(與一個(gè)循環(huán)過(guò)程近似相等)。Gottlieb, S.等， T. Am. Soc. Echo. , Vol. 3, pp. 328 (1990)，摘要；和 Shapiro, J. R.等，T. Am. Coll. Cardiol. Vol. 16, pp.1603-1607(1990)。
Rasor Associates公司也在WO 80/02365中對(duì)明膠包封的微泡進(jìn)行了描述。所述明膠包封的微泡是通過(guò)“聚結(jié)”明膠而形成的。分子生物系統(tǒng)公司(Molecular Biosystems, Inc.)在W096/04018中對(duì)包封在含氟材料的殼體內(nèi)部的氣體微泡進(jìn)行了描述。Fritzch等報(bào)道了用半乳糖微晶(SHU454和SHU508)固定化的微泡。Fritzsch， T.等，Invest. Radiol. Vol. 23 (Suppl I), pp. 302-305 (1988);和 Fritzseh T.等，Invest. Radiol. ,Vol. 25 (Suppll) 160-161 (1990)。該微泡在體外持續(xù)15分鐘但在體內(nèi)持續(xù)不到20 秒。Rovai,D.等，T. Am. Coll. Cardiol. , Vol. 10,pp. 125—134(1987);和 Smith,M.等，Τ. Am. Coll. Cardiol. , Vol. 13, pp. 1622-1628(1989)。Schering Aktiengesellschaft 在歐洲專利EP 398935中公開(kāi)了用于超聲波顯像的微膠囊密封氣體或揮發(fā)性液體的制備以及用途， 其中，微膠囊由合成聚合物或多糖形成。Sintetica在歐洲專利458745中公開(kāi)了一種用于治療或診斷目的的空氣或氣體微球，該微球被能夠分散在含水載體中的界面沉積聚合物薄膜所包縛，用于注射到宿主動(dòng)物體內(nèi)或用于口腔、直腸或尿道給藥。Delta生物工程有限公司在WO 92/18164號(hào)專利中描述了一種用于成像的微粒的制備方法，該方法通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)水溶液進(jìn)行噴霧干燥形成具有內(nèi)含氣體的空心球體。WO 93/25242號(hào)專利描述了用于超聲波成像的微粒的合成方法，所述微粒的結(jié)構(gòu)為在聚氰基丙烯酸酯或聚酯的外殼內(nèi)部含有氣體。WO 92/21382公開(kāi)了一種微粒對(duì)比劑的制造，所述微粒對(duì)比劑包括含有氣體的共價(jià)鍵結(jié)合的基質(zhì)，其中，所述基質(zhì)為碳水化合物。Unger在美國(guó)專利第5，334，381號(hào)和5，123，414號(hào)以及5，352，435號(hào)中描述了用作超聲對(duì)比劑的脂質(zhì)體，其包括氣體、氣體前體例如pH活化或光活化氣體前體，以及其他的液體或固體對(duì)比增強(qiáng)劑。其他人鑒于被包封的氣體的效果，也提出了與空氣相比增強(qiáng)顯像的氟化氣體的應(yīng)用。Quay在美國(guó)專利No. 5，393，524中公開(kāi)了包括全氟化碳在內(nèi)的多種試劑在超聲波顯像中增強(qiáng)反襯度的應(yīng)用。上述試劑由經(jīng)挑選的氣體小氣泡或微泡組成，其在溶液中顯示出較長(zhǎng)的壽命，并且足夠小以至于能夠穿過(guò)肺，這使得其能夠在心血管系統(tǒng)及其他重要器官的超聲波圖像中得以應(yīng)用。Bracco在歐洲專利554213公開(kāi)了氟化烴氣體對(duì)預(yù)防微泡在曝露于血流壓力時(shí)的崩解的作用。Nycomed在W095/23615專利中公開(kāi)了一種用于顯像的微膠囊，該微膠囊由包含全氟化碳的溶液例如蛋白質(zhì)溶液等凝結(jié)而形成。麻省理工學(xué)院 (Massachusetts Institute of Technology)在專利 W095/03357 中公開(kāi)了一種由聚乙二醇-聚(丙交酯-共-乙交酯)塊狀聚合物形成的微粒，該微粒內(nèi)包封有顯像劑，包含氣體例如空氣和全氟化碳。如同Sonus藥物公司在W094/16739中所描述的，當(dāng)固體和液體反射聲波達(dá)到一個(gè)相似的程度，眾所周知，氣體是用作超聲對(duì)比劑的更有效且更受歡迎的介質(zhì)。 事實(shí)上，如WO 94/16739的實(shí)施例12所示，當(dāng)對(duì)小型豬給藥時(shí)，蛋白質(zhì)微膠囊由于產(chǎn)生安全問(wèn)題(以及功效問(wèn)題)而不予考慮。美國(guó)專利6，132，699和5，611，344都描述了在合成聚合物外殼中使用全氟化碳來(lái)增強(qiáng)對(duì)比度的方法。美國(guó)專利5，837，221描述一種生產(chǎn)多孔聚合物微粒的方法，該方法將疏水性試劑合并入聚合物中來(lái)增加回聲反射性。有數(shù)種超聲對(duì)比劑在美國(guó)和歐洲都獲批準(zhǔn)，用于很有限的強(qiáng)心劑用藥。 OPTISON0 (Amersham, Mallinkrodt)包含含有八氟丙燒氣體的熱變性人白蛋白微膠囊。 每毫升微球體混懸物包含5-8 X IO8個(gè)平均直徑為2-4. 5微米粒度范圍和220 μ g的八氟丙烷。這些微球體還沒(méi)有被批準(zhǔn)用于心肌血流評(píng)估，僅僅被批準(zhǔn)用于心室增強(qiáng)作用。在較高的丸劑劑量下(5mL混懸物或1100 μ g八氟丙烷)，心室增強(qiáng)作用持續(xù)達(dá)5分鐘。DEFINITY0 (Bristol Myers醫(yī)學(xué)成像)包含含有脂類微球體的八氟丙烷,其中脂類殼由磷脂DPPA、DPPCJP mPEG-DPPE組成。每毫升混懸物包含I. 2 X IO10個(gè)微粒，該微粒的平均直徑在I. 1-3. 3微米的粒度范圍內(nèi)且具有ΙΙΟΟμ g八氟丙烷。該試劑僅僅被批準(zhǔn)用于心室增強(qiáng)作用，而沒(méi)有被批準(zhǔn)用于心肌血流評(píng)估。在700 μ L的丸劑劑量(用于70kg的人)下或5133 μ g的氣體下，試劑在心室內(nèi)增強(qiáng)作用的持續(xù)時(shí)間大約為3. 4分鐘。IMAGENt0 (Photogen公司)包含含有全氟己烷的脂類微球體，其中，脂類外殼由磷脂DMPC組成。每毫升混懸物包含I. 4X109個(gè)微粒和92μ g的全氟己烷，其中，該微粒具有小于3微米的平均直徑。該試劑僅僅被批準(zhǔn)用于心室增強(qiáng)作用，而沒(méi)有被批準(zhǔn)用于心肌血流評(píng)估。在O. 43毫升的丸劑劑量(用于70kg的人)下或的氣體下，試劑在心室內(nèi)的增強(qiáng)作用的平均持續(xù)時(shí)間大約為2. 6分鐘。在任何情況下，這些商品試劑僅具有有限的應(yīng)用，沒(méi)有被批準(zhǔn)用于除心室增強(qiáng)作用之外的其他應(yīng)用，這些試劑在心室的平均顯像增強(qiáng)持續(xù)時(shí)間為5分鐘或更少。仍然缺少能夠增強(qiáng)心血管系統(tǒng)特別是心肌和心室的顯像且具有較長(zhǎng)持續(xù)時(shí)間的商業(yè)超聲對(duì)比劑。現(xiàn)有技術(shù)中描述的試劑，當(dāng)作為丸劑或短浸劑給藥時(shí)，產(chǎn)生的心肌圖像的持續(xù)時(shí)間明顯小于處理一個(gè)完整的心臟測(cè)試所需要的時(shí)間。一般地，現(xiàn)有技術(shù)的藥劑所提供的圖像其用于心肌時(shí)的持續(xù)時(shí)間不到一分鐘。人們希望獲得這樣的試劑，它能夠提供的增強(qiáng)顯像持續(xù)時(shí)間在心肌中為超過(guò)一分鐘和/或在心室中為大于5分鐘。因此，本發(fā)明的目的在于提供一種尤其適用于強(qiáng)心劑的劑量配方，其包含微粒，其中，微粒能夠提供增強(qiáng)的圖像和持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)的圖像。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種試劑盒，用于在超聲波顯像方法中包含微粒的劑量配方給藥。

發(fā)明內(nèi)容
人們已經(jīng)開(kāi)發(fā)了具體的劑量配方并已經(jīng)將其用于臨床研究，該劑量配方使用了聚合物微粒，將能夠提供顯著且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)的增強(qiáng)顯像的全氟化碳?xì)怏w合并入其中。該劑量配方典型地包括一、二或直到五個(gè)劑量，最好為一個(gè)或兩個(gè)劑量的微粒，所述微粒由最好含有脂類的生物相容的聚合物形成，其含有在體溫時(shí)為氣體的全氟化碳。所述微粒以對(duì)增強(qiáng)超聲波顯像有效的劑量給患者投藥，在心室內(nèi)的持續(xù)時(shí)間為大于五分鐘和/或在心肌中為大于一分鐘，劑量范圍從O. 025到8. Omg微粒/kg體重。優(yōu)選給患者給藥的劑量范圍為從
0.05到4. Omg微粒/kg體重。在一個(gè)優(yōu)選方案中，在心室中超聲波顯像的增強(qiáng)作用持續(xù)大于9分鐘，和/或在心肌中則為大于2分鐘。劑量配方典型地用小瓶或注射器提供。在一個(gè)典型的配方中，劑量配方呈干粉形式，使用之前需用無(wú)菌水重新配制，具體而言向裝有干粉的小瓶或注射器內(nèi)添加水， 然后搖動(dòng)以產(chǎn)生等滲或等壓的微粒懸浮液。在這些劑量配方的優(yōu)選方案中，懸浮液包含
1.0-3. 5 X IO9微粒/mL，或25_50mg微粒/mL，最優(yōu)選的濃度是懸浮液包含I. 5-2. 8 X IO9微粒/mL或30-45mg微粒/mL。在一個(gè)優(yōu)選方案中,微粒的平均粒度小于8微米、最好是平均粒度為I. 8-3. O微米。在最佳方案中，氣體是0 4、化4、(^6、(^6、(^8、(^8、(^1(|、或SF6。在優(yōu)選方案中，氣體是全氟正丁燒(n-perf luorobutane) (C4F10),以75-500 μ g/mL的微?；鞈椅锏慕o藥量提供；優(yōu)選全氟正丁烷以100-400 μ g/mL的微?；鞈椅锏慕o藥量提供；最好是全氟正丁烷以150-350 μ g/mL的微?；鞈椅锏慕o藥量提供；或者氣體是八氟正丙烷，以75-375 μ g/mL 的微粒混懸物的給藥量提供，最好為以120-300U g/mL的微?；鞈椅锏慕o藥量提供。在最佳方案中，微粒由合成聚合物形成，所述合成聚合物例如有聚醇酸，包括聚乳酸、聚輕基乙酸、和聚(乳酸-共-輕基乙酸)，聚乙交酯(polyglycolides)、聚交酯和聚(丙交酯共乙交酯)，聚原酸酯(polyorthoesters)、聚酰胺、聚碳酸酯、聚烯烴 (polyalkylenes)，例如聚乙烯和聚丙烯，聚烷撐二醇，例如聚乙二醇，聚氧化烯烴例如聚環(huán)氧乙烷，聚乙烯醇、聚戊酸、和聚(丙交酯共己內(nèi)酯)、衍生物、共聚物及其混合物，以及相對(duì)于聚合物重量以0. 01-30被％的比例含有一個(gè)疏水化合物的聚合物，最好為以0. 01-30wt% (脂類重量/聚合物重量)的比例含有脂類的聚合物。在一個(gè)特別優(yōu)選方案中，脂類為二油?；字Ｄ憠A(di ο I eoylpho sphat idyl cho line) (DOPC)、二肉豆蘧?；字Ｄ憠A (dimyristoylphosphatidyIchoI in, DMPC)、雙十五酸基憐脂酸膽喊(dipentadecanoylph osphat idyl cho line, DPDPC)、二月桂酸基憐脂酸膽喊(dilauroylphosphatidylcholine， DLPC)、二棕櫚?；字Ｄ憠A(dipalmi toy lphosphat idyl choline, DPPC)、二硬 脂?；字Ｄ憠A(di stearoy lphosphat idyl choline, DSPC)、二花生?；字Ｄ憠A(diarachidoy lphosphat idyl choline, DAPC)、二山箭炔?；字Ｄ憠A (dibehenoy lphosphat idyl cho line, DBPC)、雙二十三燒酸基憐脂酸膽喊(ditricosanoyl phosphatidylcholine DTPC)、二木脂酸基憐脂酸膽喊(dilignoceroylphatidylcholine DLGPC);或磷脂酰乙醇胺。最好是，微粒中的合成聚合物是聚(丙交酯共乙交酯)，丙交酯對(duì)乙交酯的比例為 50 50(即I : I)，重均分子量在20，000-40，000道爾頓的范圍內(nèi)，微粒中的疏水化合物是DAPC，比例為5 6.6% (DAPC重量/聚合物重量)。劑量配方可以以包含微粒干粉的小瓶或注射器形式提供，或者以包含重懸浮微粒溶液的試劑盒形式提供。典型地，干粉的小瓶或注射器中也包含賦形劑例如糖或食鹽，使得溶液等滲，或者重新配制后等滲。然后，將此劑量配方作為丸劑或注射劑通過(guò)注射給患者給藥，在整個(gè)30分鐘的期間內(nèi)進(jìn)行顯像。微粒在多種診斷顯像程序中都很有用，包括超聲波顯像、磁共振成像、熒光檢查、X 射線和計(jì)算機(jī)化層析檢查。在用于心臟病學(xué)應(yīng)用例如心肌血流評(píng)估和心室增強(qiáng)作用的臨床試驗(yàn)中對(duì)微粒進(jìn)行了檢驗(yàn)。
具體實(shí)施例方式這里，對(duì)改進(jìn)后的方法、微粒、試劑盒、和用于超聲波顯像的劑量配方進(jìn)行描述。微粒在各種診斷超聲波顯像的應(yīng)用中非常有用，特別在超聲程序中例如血管顯像和超聲波心動(dòng)描記法例如心肌血流評(píng)估、心肌血容量評(píng)估和心室增強(qiáng)作用中非常有用。I.定義除非另作說(shuō)明，和通常所使用的一樣，術(shù)語(yǔ)"微粒"包括"微球體"和"微膠囊"，以及其他的微粒。微粒在形狀上可以是球形的或非球形的。這里"微膠囊"一般被定義為具有一個(gè)包圍著氣體核心的外部聚合物殼的微粒?！拔⑶蝮w"被定義為可以是固體球形，或者由遍及充滿氣體的聚合物的氣孔所形成的蜂窩狀構(gòu)造或海綿樣結(jié)構(gòu)的多孔球形。一些微球體可以包含由遍及聚合物外殼的充滿氣體的氣孔所形成的具有蜂窩狀構(gòu)造或海綿樣結(jié)構(gòu)的外部聚合物外殼。對(duì)于這類微球體，該外部聚合物外殼包圍內(nèi)部的氣體核心。和通常所使用的一樣，術(shù)語(yǔ)"劑量(dosage)"和"藥量(dose)"是同義詞，表示一次給予的物質(zhì)量，或產(chǎn)生預(yù)期診斷或?qū)Ρ刃Ч璧奈镔|(zhì)量。這里所使用的術(shù)語(yǔ)"劑量配方"，是指小瓶或其他容器例如注射器，其包含一個(gè)或多個(gè)劑量的要求產(chǎn)生預(yù)期診斷或?qū)Ρ刃Ч奈镔|(zhì)。與常規(guī)一樣，這里"患者的部位"是指患者身上的一個(gè)特定的區(qū)域或部分。在有些情況下，"患者的部位"是指遍及患者全身的部位。這種部位的例子有肺部、胃腸部、心血管部位(包括心肌組織或心肌(例如心臟肌肉)、心室的室、圍鰓腔、瓣膜功能)、腎部位以及身體的其他部位、組織、器官等等、包括脈管組織和循環(huán)系統(tǒng)、以及有病的組織、包括癌組織。"患者的部位"例如包括將要被診斷圖像顯像的部位。盡管患者的部位"也"可能是體外的，但是最好在體內(nèi)。
脈管組織"表示血管(包括動(dòng)脈、靜脈、毛細(xì)血管等)。
'胃腸部位"包括食管、胃、小腸和大腸以及直腸所定義的部位。
與習(xí)慣一樣，這里" 與習(xí)慣一樣，這里J
與習(xí)慣一樣，這里與習(xí)慣一樣，這里患者部位。與習(xí)慣一樣，這里
顯像部位。與習(xí)慣一樣，這里穿過(guò)心臟的心室。與習(xí)慣一樣，這里與習(xí)慣一樣，這里
腎部位"是指腎和直接連接腎的脈管組織，包括腹主動(dòng)脈。 目標(biāo)部位"和"目標(biāo)區(qū)"交叉使用，均表示希望藥劑到達(dá)的
欲顯像部位"和"顯像部位"交叉使用，均表示患者的預(yù)期
心室血流或心室增強(qiáng)作用"是指血流以一個(gè)或多個(gè)心臟循環(huán)
心房血流"是指血流以一個(gè)或多個(gè)循環(huán)穿過(guò)心臟的心房。 心肌血流"是指血液以一個(gè)或多個(gè)循環(huán)數(shù)在心臟肌肉或心肌的脈管組織中(包括在心臟的血管中)的流動(dòng)。與習(xí)慣一樣，這里"心肌血容量"是指在心臟肌肉或心肌的脈管組織中的血液的量。與習(xí)慣一樣，這里
張周期和收縮周期。與習(xí)慣一樣，這里像在亮度上的增加。與習(xí)慣一樣，這里相對(duì)增加了的圖像。與習(xí)慣一樣，這里^與習(xí)慣一樣，這里
心動(dòng)周期"是指心臟的一個(gè)完整的收縮周期，包括心臟的舒
增加的亮度"是指與沒(méi)有超聲對(duì)比劑而獲得的圖像相比，圖
增強(qiáng)的顯像"是指與沒(méi)有超聲對(duì)比劑而獲得圖像相比，亮度
持續(xù)時(shí)間"是指顯像的增加亮度可以被檢出的總時(shí)間。
冠狀動(dòng)脈血管擴(kuò)張劑"是指生理活性物質(zhì)例如雙嘧哌胺醇 (dipyridamole)或腺苷,當(dāng)這些藥物被患者服用時(shí),能夠引起心血管部位脈管組織的擴(kuò)張。II.微粒
在優(yōu)選方案中，微粒包含聚合物、脂類和全氟化碳?xì)怏w。微?？梢约劝⑶蝮w也包含微膠囊，或只包含微球體或微膠囊。聚合物在優(yōu)選方案中，微粒由合成聚合物形成。合成聚合物產(chǎn)生生物相容且無(wú)生物材料污染的微粒。另外，優(yōu)選合成聚合物，是因?yàn)楹铣删酆衔镌隗w外和體內(nèi)可再生合成和降解。根據(jù)體內(nèi)穩(wěn)定性所需要的時(shí)間選擇聚合物，該例如時(shí)間是分布到欲顯像的部位所需要的時(shí)間， 以及顯像所需要的時(shí)間。合成聚合物可以被修飾以產(chǎn)生性質(zhì)不同的微粒(例如，改變分子量和/或功能基團(tuán))。典型的合成聚合物有聚醇酸例如聚乳酸、聚羥基乙酸、和聚(乳酸共羥基乙酸)、 聚乙交酯(polyglycolides)、聚交酯、聚(丙交酯共乙交酯)及其混合物、聚酐、聚原酸酯 (polyorthoesters)、聚酰胺、聚碳酸酯、聚烯烴,例如聚乙烯和聚丙烯、聚二醇例如聚乙二醇、氧化聚烯烴例如聚環(huán)氧乙烷聚乙烯醇、聚戊酸、和聚(丙交酯共己內(nèi)酯)、及其衍生物、 共聚物和混合物。這里“衍生物”包括化學(xué)基團(tuán)經(jīng)取代、加成的聚合物，例如本領(lǐng)域技術(shù)人員通常使用的烷基、烷撐、羥基化、氧化及其他修飾。優(yōu)選的可生物降解的聚合物的具體例子包括醇酸例如乳酸和羥基乙酸的聚合物、聚交酯、聚乙交酯(polyorthoesters)、聚(丙交酯共乙交酯)、與PEG的共聚物、聚酐、 聚(鄰)酯、聚氨酯、聚(丁酸)、聚(戊酸)、聚(丙交酯共己內(nèi)酯)及其共聚物。最佳優(yōu)選聚合物是聚(丙交酯共乙交酯)，其中丙交酯對(duì)乙交酯的比例為50 50(即I : I)且聚合物的重均分子量在20，000-40, 000道爾頓范圍內(nèi)。重均分子量(Mw)是基于單個(gè)聚合物鏈分布內(nèi)具有給定分子量的分子質(zhì)量而計(jì)算出的平均分子量。Mw可以用凝膠滲透色譜法 (GPC)來(lái)測(cè)定。疏水化合物在一個(gè)優(yōu)選方案中，如美國(guó)專利No. 5，837，221所描述的，聚合物包括一種疏水化合物。通常，例如脂類，它是疏水性的且在聚合物內(nèi)部的量是一個(gè)有效劑量，結(jié)合這樣的化合物會(huì)通過(guò)微粒限制水的滲透和/或吸收，也因此限制了微粒中氣體的損失。這會(huì)有效增加由包含脂類、合成聚合物和包封有氣體尤其是氟化氣體例如全氟化碳的微粒所提供的增強(qiáng)顯像的持續(xù)時(shí)間。能夠用來(lái)固定聚合物微粒內(nèi)部氣體的脂類包括但不局限于下列種類的脂類脂肪酸及其衍生物、甘油單酯、甘油二酯和甘油三酯、磷脂、鞘脂類、膽固醇和類固醇衍生物、萜烯和維生素。脂肪酸及其衍生物可以包括(但不局限于)飽和和不飽和脂肪酸、奇數(shù)和偶數(shù)的脂肪酸、順?lè)串悩?gòu)體、以及脂肪酸衍生物包括乙醇、酯、酸酐、羥基脂肪酸和前列腺素。可以使用的飽和和不飽和脂肪酸包括但不局限于具有12-22個(gè)碳原子的直鏈或支鏈分子。可以使用的飽和脂肪酸的例子包括但是不局限于月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸和硬脂酸?？梢允褂玫牟伙柡椭舅岬睦影ǖ遣痪窒抻谠鹿鹚?、抹香鯨酸、肉豆蘧烯酸、棕櫚油酸、 巖芹酸和油酸。可以使用的支鏈脂肪酸的例子包括但是不局限于異月桂酸、異肉豆蘧酸、 異棕櫚酸、異硬脂酸和異戊二烯類。脂肪酸衍生物包括12-(((7' -二乙氨基香豆素-3-) 羰基)甲氨基)_硬脂酸；N-[12_(((7' 二乙氨基香豆素-3-)羰基)甲基氨基)十八?；鵠-2-氨基棕櫚酸、N- 丁二酰-二油酰磷脂?；掖及泛妥貦磅?高半胱氨酸；和/或它們的組合物?？梢允褂玫母视蛦熙?、甘油二酯、甘油三酯及其衍生物包括但是不局限于分子的碳原子數(shù)為6-24之間的脂肪酸或脂肪酸的混合物，二半乳糖基二甘油酯、I，2- 二油?；?sn-甘油；I，2- 二棕櫚酰基-sn-3- 丁二?；视停缓虸，3- 二棕櫚?；鵢2_ 丁二酰基甘油。能夠使用的磷脂包括但是不局限于磷脂酸、帶有飽和與不飽和脂類的卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰衍生物、心磷脂、和酰基烷基磷脂。磷脂的例子包括但是不局限于二油?；字Ｄ憠A(dioleoylphosphatidylcholine) (DOPC)、二肉豆蘧?；字Ｄ憠A (dimyri stoy lphosphat idyl cho line, DMPC)、雙十五酸基憐脂酸膽喊(dipentadecanoylp hosphat idyl cho line, DPDPC)、二月桂酸基憐脂酸膽喊(dilauroylphosphatidylcholine, DLPC)、二棕櫚?；字Ｄ憠A(dipalmi toy lphosphat idyl choline, DPPC)、二硬 脂酰基磷脂酰膽堿(di stearoy lphosphat idyl choline, DSPC)、二花生?；字Ｄ憠A(diarachidoy lphosphat idyl choline, DAPC)、二山箭炔?；字Ｄ憠A (dibehenoy lphosphat idyl cho line, DBPC)、雙二十三燒酸基憐脂酸膽喊(ditricosanoyl phosphatidylcholine DTPC)、二木脂酸基憐脂酸膽喊(dilignoceroylphatidylcholine DLPC);和磷脂酰乙醇胺,例如二油酰基磷脂?；掖及?dioleoylphosphatidylethanola mine)或I-十六烷基-2-棕櫚酰甘油磷酸乙醇胺。也可以使用帶有不對(duì)稱的?；?例如帶有一個(gè)6碳原子的?；満土硪粋€(gè)12碳原子的?；?的合成磷脂?？梢允褂玫那手惏ㄉ窠?jīng)酰胺、鞘磷脂、腦苷脂類、神經(jīng)節(jié)苷脂、腦硫脂和溶血腦硫脂。神經(jīng)鞘脂的例子包括但是不局限于神經(jīng)節(jié)苷脂GM和GM2?？梢允褂玫念惞檀及ǖ遣痪窒抻谀懝檀?、膽固醇硫酸酯、膽固醇半琥珀酸酯、6-(5-膽固醇-3 β-氧)己基-6-氨基-6-脫氧-I-硫代-a D-乳糖吡喃糖苷、6-(5-膽留烯_3β_氧)己基6_氨基6_脫氧-I-硫代-a D-甘露卩比喃糖苷以及(膽留烯基-4' -二甲基-35-胺基)丁酸酯?？梢允褂玫钠渌闹惢衔锇ㄉ蛹捌溲苌?，以及油和衍生油，例如硬脂酰胺。許多陽(yáng)離子脂類都可以使用，例如D0TMA，N-[I-(2，3-二氧化油?；?丙基-N，N， N-三甲基氯化物；D0TAP、1，2-二氧化油酰基-3-(三甲氨基)丙烷；和D0TB、1，2-二油?；?3- (4'-三甲基)丁酰基-sn-甘油。最優(yōu)選的脂類是磷脂，最好為DPPC、DAPC, DSPC、DTPC、DBPC, DLPC,最好為DPPC、 DSPC、DAPC 和 DBPC。脂類的含量范圍為O. 01-30% (脂類重量/聚合物重量)；最好為O. 1-20% (脂類重量/聚合物重量)，最優(yōu)選為1-12% (脂類重量/聚合物重量)。當(dāng)微粒由本發(fā)明所述的方法形成時(shí)，其大小可以得到良好的重現(xiàn)。這里，除非另作說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)顆粒的"大小"或"直徑"是指數(shù)均粒子大小。下面列舉一個(gè)可用于定義數(shù)均粒子大小(Xn)的等式的例子。
權(quán)利要求
1.一種試劑盒，其包含一種劑量配方和用于重新配制該劑量配方的溶液，其中該劑量配方包含微球體，所述微球體含有聚醇酸或者其共聚物或混合物、以及疏水化合物，并且所述微球體包封有在體溫下為氣體的全氟化碳?xì)怏w，并且其中所述微球體是具有蜂窩狀構(gòu)造或海綿樣結(jié)構(gòu)的多孔球形，并且其中所述微球體為干粉，并且所述微球體用溶液重新配制形成等滲懸浮液，該懸浮液中的微球體濃度為1.0X109到 3. 5 X IO9微球體/mL懸浮液或微球體質(zhì)量濃度為25 50mg微球體/mL懸浮液，并且其中劑量配方中所述微球體的劑量范圍為O. 5 4. Omg微球體/kg體重,從而適合于在心肌中提供與沒(méi)有服用對(duì)比劑時(shí)相比大于I分鐘的增強(qiáng)超聲波圖像。
2.如權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述懸浮液中的微球體濃度范圍為I.5 X IO9到2. 8 X IO9微球體/mL的懸浮液或微球體質(zhì)量濃度為30到45mg微球體/mL的懸浮液。
3.如權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述微球體具有小于8微米的平均粒度。
4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述微球體具有I.9 2. 6微米的平均粒度。
5.如權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述劑量從O.5mg微球體/kg體重、2. Omg 微球體/kg體重和4. Omg微球體/kg體重中選擇。
6.如權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述氣體選自CF4、C2F4,C2F6, C3F6, C3F8, C4F8、C4F10 ο
7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述氣體是全氟正丁烷，以75 500μ g/ mL給藥量的微球體懸浮液提供。
8.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述氣體是全氟正丁烷，以100 400 μ g/mL給藥量的微球體懸浮液提供。
9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述氣體是全氟正丁烷，以150 350 μ g/mL給藥量的微球體懸浮液提供。
10.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述氣體是八氟正丙烷，以75 375 μ g/mL給藥量的微球體懸浮液提供。
11.如權(quán)利要求10所述的試劑盒，其特征在于，所述八氟正丙烷以120 300μ g/mL給藥量的微球體懸浮液提供。
12.如權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述疏水化合物與所述聚醇酸或者其共聚物或混合物以O(shè). 01 30% (疏水化合物重量/聚醇酸或者其共聚物或混合物重量)的比例混合。
13.如權(quán)利要求12所述的試劑盒，其特征在于，所述疏水化合物為脂類。
14.如權(quán)利要求13所述的試劑盒，其特征在于，所述脂類是磷脂，選自二油?；字Ｄ憠A、二肉豆蘧?；字Ｄ憠A、雙十五?；字Ｄ憠A、二月桂?；字Ｄ憠A、二棕櫚?；字Ｄ憠A、二硬脂?；字Ｄ憠A、二花生酰基磷脂酰膽堿、二山崳炔?；字Ｄ憠A、雙二十三烷?；字Ｄ憠A、二木脂?；字Ｄ憠A和磷脂酰乙醇胺。
15.如權(quán)利要求14所述的試劑盒，其特征在于，所述聚醇酸共聚物是丙交酯與乙交酯的比例為I : I、重均分子量為20 40kDa的聚(丙交酯共乙交酯)，所述脂類是以5 .6.6% (脂類重量/聚醇酸共聚物重量)的比例與所述聚醇酸共聚物混合的二花生酰磷脂酰膽堿。
16.如權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述懸浮液進(jìn)一步含有一種或多種選自糖、鹽和表面活性劑的賦形劑。
17.一種制造用于超聲對(duì)比顯像的組合物的方法，包括在溶液中懸浮含有聚醇酸或者其共聚物或混合物、以及疏水化合物的微球體；將所述懸浮液放入小瓶或注射器中；冷凍所述懸浮液；使所述小瓶?jī)龈梢栽谛∑炕蜃⑸淦髦挟a(chǎn)生干粉；和用在體溫下為氣體的全氟化碳?xì)怏w回充冷凍干燥器以得到組合物，其中所述組合物包含微球體，并且所述微球體包封有全氟化碳?xì)怏w，并且其中所述微球體是具有蜂窩狀構(gòu)造或海綿樣結(jié)構(gòu)的多孔球形，并且其中所述微球體為干粉，并且當(dāng)微球體在使用之前用藥學(xué)可接受的載體進(jìn)行重新配制時(shí)，它們可形成第二懸浮液， 該第二懸浮液是等滲懸浮液，其中的微球體濃度為I. O X IO9到3. 5 X IO9微球體/mL第二懸浮液或微球體質(zhì)量濃度為25 50mg微球體/mL第二懸浮液，并且其中劑量配方中所述微球體的劑量范圍為O. 5 4. Omg微球體/kg體重,從而適合于在心肌中提供與沒(méi)有服用對(duì)比劑時(shí)相比大于I分鐘的增強(qiáng)超聲波圖像。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，所述懸浮液進(jìn)一步含有賦形劑。
19.一種制造用于超聲對(duì)比顯像的組合物的方法，包括將含有聚醇酸或者其共聚物或混合物、以及疏水化合物的溶液中微球體干法混合；將混合物放入小瓶或注射器中；抽真空后，用在體溫下為氣體的全氟化碳?xì)怏w充滿小瓶或注射器以得到組合物，其中所述組合物包含微球體，所述微球體包封有全氟化碳?xì)怏w，并且其中所述微球體是具有蜂窩狀構(gòu)造或海綿樣結(jié)構(gòu)的多孔球形，并且其中所述微球體為干粉，并且當(dāng)微球體在使用之前用藥學(xué)可接受的載體進(jìn)行重新配制時(shí)，它們可形成等滲懸浮液， 該懸浮液中的微球體濃度為I. OX IO9到3. 5 X IO9微球體/mL懸浮液或微球體質(zhì)量濃度為 25 50mg微球體/mL懸浮液，并且其中劑量配方中所述微球體的劑量范圍為O. 5 4. Omg微球體/kg體重,從而適合于在心肌中提供與沒(méi)有服用對(duì)比劑時(shí)相比大于I分鐘的增強(qiáng)超聲波圖像。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，所述混合物進(jìn)一步含有賦形劑。
全文摘要
臨床研究已經(jīng)實(shí)施并開(kāi)發(fā)了具體的劑量配方，該劑量配方使用了能夠提供顯著增強(qiáng)顯像且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)的全氟化碳?xì)怏w，將其并入聚合物的微粒開(kāi)發(fā)而成。劑量配方包括由生物相容聚合物和全氟化碳形成的微粒，其中，聚合物最好混有脂類，全氟化碳在體溫下為氣體。所述微粒以對(duì)增強(qiáng)超聲波顯像有效的劑量給患者給藥，在心室的時(shí)間為大于5分鐘和/或在心肌中為大于一分鐘，劑量范圍為0.025到8.0mg微粒/kg體重。劑量范圍優(yōu)選為0.05到4.0mg微粒/kg體重。所述劑量配方一般是裝在小瓶?jī)?nèi)提供。在一個(gè)典型的配方中，劑量配方由使用之前需用無(wú)菌水重新配制的干粉形成，具體而言向裝有干粉的小瓶或注射器內(nèi)添加水，然后搖動(dòng)以產(chǎn)生等滲的或等滲壓的微粒懸浮液。
文檔編號(hào)A61K49/22GK102600485SQ201210028040
公開(kāi)日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2004年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月4日
發(fā)明者唐納德·E·柴克林Ⅲ, 理查德·沃勒維奇, 茱麗·斯常博, 霍華德·伯恩斯坦 申請(qǐng)人:阿庫(kù)斯菲爾公司