專利名稱：烏司他丁作為制備抗hiv-1病毒藥物的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及烏司他丁作為制備抗Hiv-I病毒藥物的應用。
背景技術：
AIDS自1970年以來就以驚人的速度在全球蔓延，近年來在防治艾滋病方面取得巨大的進展，但仍缺乏根治HIV感染的有效藥物?，F階段的治療目標是最大限度和持久的降低病毒載量；獲得免疫功能重建和維持免疫功能；提高生活質量；降低HIV相關的發(fā)病率和死亡率。治療方法包括一般性治療、抗病毒治療、恢復和改善免疫功能的治療和機會性感染及惡性腫瘤的治療。其中抗病毒是治療的關鍵。隨著HIV蛋白酶抑制劑的出現，就出現了高效抗反轉錄病毒聯合療法(highly active anti-retroviral therapy, HAART)的應用，大大提高了抗HIV的療效，顯著改善了 AIDS患者的生活質量和預后，使AIDS的治療前進了一大步。當前主要的抗病毒藥物已獲批準進入市場的有16種，主要分三大類核苷類反轉錄酶抑制劑(NRTI)、非核苷類反轉錄酶抑制劑(NNRTIs)和蛋白酶抑制劑(PI)。其中蛋白酶抑制劑(protease inhibitor, PI) :HIV_1蛋白酶是一個對稱的二聚體，在該酶的催化下，HIV有兩種蛋白前體裂解為成熟蛋白，所以此酶對病毒的復制非常重要。蛋白酶抑制劑能通過抑制蛋白酶即阻斷HIV復制和成熟過程中所必需的蛋白質合成，從而抑制HIV的復制。此類制劑包括
A.沙奎那韋(saquinavir):高效高選擇性的HIV蛋白酶抑制劑。本品作用于HIV繁殖的后期，與HIV蛋白酶的激活點結合，使之失去結合和水解斷裂多肽的功能。本品抑制HIV蛋白酶與其它抗HIV病毒藥如疊氮胸苷，抑制HIV逆轉錄酶的作用靶酶系不同，無交叉耐藥病毒產生。600mg，2次/d或3次/d。副作用可有惡心、嘔吐、腹瀉等消化道癥狀，亦可見頭痛，轉氨酶升高等。B.茚地那韋(indinavir) : (HIV蛋白酶抑制劑，和其他抗逆轉錄病毒藥物聯合使用。800mg，3次/d。副作用有惡心、嘔吐、頭痛、乏力、眩暈、皮疹等，并可致非結合膽紅素升聞、血小板減少、腎結石、血糖升聞及脂肪重新分布等。C.奈非那韋(nelfinavir) :750mg,3次/d。副作用有腹灣、高血糖等。D.利托那韋(ritonavir) =HIV-I和HIV-2天冬氨酸蛋白酶的口服有效抑制劑，阻斷該酶促使產生形態(tài)學上成熟HIV顆粒所需的聚蛋白，使HIV顆粒因而保持在未成熟的狀態(tài)，從而減慢HIV在細胞中的蔓延，以防止新一輪感染的發(fā)生和延遲疾病的發(fā)展。本品對齊多夫定敏感的和齊多夫定與沙喹那韋耐藥的HIV株一般均有效。300 600mg，2次/d。副作用有惡心、嘔吐、腹瀉、乏力、感覺異常、肝功能不良、甘油三酯升高、尿酸增加、血糖升高
坐寸o上述三類藥物多數都有不良反應，單用很難有效抑制病毒的復制，且易產生耐藥。因此，強調聯合用藥。聯合用藥的方案很多，目前多以一種蛋白酶抑制劑加兩種NRTI制劑，或兩種蛋白酶抑制劑加一兩種NRTI制劑，常見的聯合方案有沙奎那韋ZDV 3TC ;或奈非那韋D4T ddi ;或茚地那韋ZDV ddi ;或利托那韋ZDV ddc ;或沙奎那韋利托那韋D4T 3TC。使用這些聯合方案治療，能同時抑制HIV復制過程的多個環(huán)節(jié)，可高效抑制HIV復制，最大限度降低耐藥性，提高患者生活質量和存活率，顯著降低母嬰垂直傳播的危險性等。關于抗病毒治療的時機HAART聯合方案應用所取得的療效，重新喚起人們戰(zhàn)勝獲得性免疫缺陷綜合征的信心。一度使許多醫(yī)師認為越早治療，效果越好。但是隨著應用時間的延長，人們發(fā)現盡管聯合治療能夠抑制血液中的病毒載量到測不到的水平，但是要清除淋巴細胞、巨噬細胞和神經組織內藏匿的病毒并不容易，可能要治療幾十年甚至終身服藥。然而，服藥期間，除了消化道反應和骨髓抑制等常見副作用以外，這些藥物引起的其他嚴重的毒副作用，患者的依從性、順應性比較差，加以HIV的抗藥性越來越大，抗藥性毒株的傳播越來越嚴重等等，迫使醫(yī)師慎重考慮治療時機。目前主張①已發(fā)展至AIDS者，無論⑶4及病毒載量的值高低如何，都應進行治療?、跓o癥狀者的，CD4〈200X106/L，雖然病毒載量測不出也應治療；@CD4細胞 >200X 106/L，但〈350X 106/L，病毒載量不高，患者無癥狀，此時的治療仍有爭論；④無癥狀者的⑶4>350X 106/L，病毒載量>55000拷貝數，目前大多主張治療；⑤無癥狀者的⑶4>350X 106/L，病毒載量〈55000拷貝數，現大多主張繼續(xù)監(jiān)控⑶4量；⑥間斷治療。

發(fā)明內容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種既可以在感染HIV后的窗口期防止AIDS的發(fā)病，又可以對已患AIDS的患者有治療作用，防止復發(fā)，而且沒有明顯的毒副作用的抗HIV-I病毒的藥物。技術方案本發(fā)明所述的烏司他丁作為制備抗HIV-I病毒藥物的應用，烏司他丁的濃度為200 400ii g/ml o優(yōu)選地，所述烏司他丁的濃度為400 ii g/ml，在該濃度下，可以對HIV-I病毒達到100%抑制率。優(yōu)選地，所述烏司他丁的濃度為200 ii g/ml，在該濃度下，可以對HIV-I病毒達到99%抑制率，同時，對細胞的毒性作用更小，經濟成本更低。所述藥物中還包括可藥用輔料。所述藥物可以為凍干粉針劑，所述可藥用輔料為甘露醇、乳糖、水解明膠、氯化鈉或葡糖糖中的任意一種或幾種。所述藥物也可以為注射液，所述可藥用輔料為注射用水、甘露醇、氯化鈉或葡萄糖中的任意一種或幾種。有益效果1、本發(fā)明藥物可以在感染HIV后的窗口期立即使用，也可以用于AIDS已經發(fā)生的不同階段，與已上市的藥物相比毒副作用??；2、本發(fā)明藥物，在烏司他丁的濃度為400 ii g/ml時，可以對HIV-I病毒達到100%抑制率，而且在細胞毒試驗中，沒有明顯的細胞毒性作用；3、多年來，在使用本發(fā)明藥物活性成分烏司他丁治療急性胰腺炎的臨床觀察中未發(fā)現明顯的毒副作用，因此是相對安全的。
具體實施例方式下面對本發(fā)明技術方案進行詳細說明，但是本發(fā)明的保護范圍不局限于所述實施例。 實施例本發(fā)明烏司他丁作為制備抗HIV-I病毒藥物的應用，烏司他丁的濃度為200 400 u g/ml，濃度為400 u g/ml時可達到100%的抑制率。利用烏司他丁制備的抗HIV-I病毒藥物，可以在感染HIV后的窗口期立即使用，也可以用于AIDS已經發(fā)生的不同階段。窗口期給藥量為烏司他丁 10萬U，用5%葡萄糖注射液500ml溶解1-2次/日，靜脈點滴。當進入AIDS病時期則與各種逆轉錄酶抑制劑聯合應用。藥物通常以靜脈途徑給藥，主要劑型為凍干針劑或注射液劑。藥物為凍干粉針劑時，可藥用輔料為甘露醇、乳糖、水解明膠、氯化鈉或葡糖糖中的任意一種或幾種，在使用時可以溶解于滅水菌或各種其它注射用滅菌介質中。藥物為注射液時，可藥用輔料為注射用水、甘露醇、氯化鈉或葡萄糖中的任意一種或幾種。下面提供本發(fā)明抗艾滋病病毒的藥效學研究試驗
I、材料與藥物
I. I藥物烏司他丁用水充分溶解后，用透析袋透析后，用1640培育基稀釋成不同濃度(烏司他丁藥品由大連北方生物制品廠生產);
I.2試劑P24試劑盒購自美國Organon Teknika公司，MTT (Thiazoll blue)購自Sigma公司；
1.3細胞MT4細胞系采培養(yǎng)獲得，培養(yǎng)基為RPMI-1640加10%胎牛血清，1%谷氨酰
胺，1%青鏈霉素；
1.4病毒HIV-I病毒德國株，中國預防醫(yī)學科學院病毒所保存?zhèn)鞔?、實驗方法
2.I對HIV-I急性感染的抑制試驗
將HIV-I融化后稀釋至I萬TCID 50/ml,取Iml稀釋后的病毒液加入離心后并棄上清的500萬MT4細胞(1800轉/分鐘離心5分鐘)，置37°C溫箱中作用2小時。取出后離心，棄上清，用1640洗一次，用20%胎牛血清的培養(yǎng)基至50萬細胞/ml，將配好的感染細胞和對應的不同濃度的烏司他丁加入培養(yǎng)板。置37°C，5% CO2孵箱中。48小時后換液，繼續(xù)孵育48小時。取基上清用美國Organon Teknika公司P24抗原試驗盒測定P24抗原。根據計算出各孔中病毒濃度，計算藥物對病毒復制的抑制率。2.2 MTT細胞毒試驗
將MT4細胞用含20%胎牛血清的培養(yǎng)基配至50萬/ml，加100 ill配好的細胞和100 ill的烏司他丁入96孔培養(yǎng)板，37°C，5% CO2孵箱中培養(yǎng)6天，取出后每孔吸除150 上清，力口入新配的MTT (0. 25%)25iil，37°C下作用4小時，向每孔中加入100 ylDMSO充分溶解所形成的結晶，用BIO-RAD公司550型酶標儀讀數(570nm)，計算細胞存活率?；嬎惴椒榧毎种坡?(細胞對照孔OD值一加藥細胞孔OD值)+細胞對照孔OD值X 100%。3、結果
3.1抗HIV-I實驗結果
權利要求
1.烏司他丁作為制備抗HIV-I病毒藥物的應用，烏司他丁的濃度為200 400u g/ml。
2.根據權利要求I所述的應用，其特征在于所述烏司他丁的濃度為400y g/ml。
3.根據權利要求I所述的應用，其特征在于所述烏司他丁的濃度為200y g/ml。
4.根據權利要求I所述的應用，其特征在于所述藥物中還包括可藥用輔料。
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于所述藥物為凍干粉針劑，所述可藥用輔料為甘露醇、乳糖、水解明膠、氯化鈉或葡糖糖中的任意一種或幾種。
6.根據權利要求4所述的應用，其特征在于所述藥物為注射液，所述可藥用輔料為注射用水、甘露醇、氯化鈉或葡萄糖中的任意一種或幾種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種烏司他丁作為制備抗HIV-1病毒藥物的應用，烏司他丁的濃度為200～400μg/ml。本發(fā)明藥物可以在感染HIV后的窗口期立即使用，也可以用于AIDS已經發(fā)生的不同階段；本發(fā)明藥物，在烏司他丁的濃度為400μg/ml時，可以對HIV-1病毒達到100%抑制率，而且在細胞毒試驗中，沒有明顯的細胞毒性作用。
文檔編號A61P31/18GK102614502SQ201210123158
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月25日 優(yōu)先權日2012年4月25日
發(fā)明者徐宗昆 申請人:徐宗昆