專利名稱：改性蠶絲的制備方法及其在制備止血材料中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，特別涉及一種止血高分子材料。
技術背景
在戰(zhàn)場上、自然災害中及各種日常突發(fā)性事故中，不可控制的過量出血往往是導致50-80%傷員死亡的主要原因。有效的控制出血成為挽救患者傷亡的關鍵要素。新研發(fā)的桑蠶絲蛋白具有良好的生物相容性、生物可降解性、迅速止血和促進傷口愈合等優(yōu)點。
蠶絲是天然大分子聚合物，天然蠶絲主要由絲素蛋白和絲膠蛋白組成，而絲素蛋白的主要成分有甘氨酸(gly)，丙氨酸(ala)及絲氨酸(ser)。蠶絲蛋白纖維表面疏水， 血漿蛋白與絲素蛋白之間存在強的疏水相互作用，能交聯(lián)血漿蛋白從而凝血；此外，凝血因子也能交聯(lián)絲素蛋白形成凝塊。作為止血材料，天然蠶絲可用堿性肥皂水煮將絲膠蛋白去掉(脫膠)，僅僅只保留絲素蛋白；此外，絲素蛋白應適當改變其晶體結構，增加吸水性、蛋白酶再吸收及血漿吸收，才能更好的發(fā)揮止血功能。天然蠶絲成本低廉，原材料充沛，易于操作，在潮濕環(huán)境中強度也較大、對于生長的細胞有生物適應性，藥物可滲透性，生物相容性好，可降解等優(yōu)點，廣泛運用于生物醫(yī)學、生物技術領域，是可研發(fā)的最具發(fā)展?jié)摿Φ闹寡牧稀０l(fā)明內容
本發(fā)明的目的之一在于提供改性蠶絲的制備方法及所得的產(chǎn)品，該方法使蠶絲在二級結構發(fā)生變化，以β折疊為主，通過該方法所得產(chǎn)品具有較好的止血效果。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案為 改性蠶絲的制備方法，具體包括以下步驟A脫膠處理取天然蠶絲，用脫膠溶液對天然蠶絲進行充分的脫膠處理，得脫膠蠶絲； B改性處理將步驟A所得脫膠蠶絲用水和/或體積分數(shù)為1-20%的有機溶劑在37-100°C條件下處理不低于4小時，得改性蠶絲；所述有機溶劑為甲醇、乙醇、甲酸和甲醛和三氟乙酸中的任一種。
進一步，將步驟B改性處理后所得的改性蠶絲用水漂洗干凈，室溫自然晾干或 37°C烘干，得改性蠶絲。
進一步，步驟A中的脫膠處理具體為取天然蠶絲，用脫膠溶液對天然蠶絲進行充分的脫膠處理，在蒸餾沸水煮不低于0. 5小時后，得脫膠蠶絲；所述脫膠溶液為質量分數(shù)為 0.1%-10%的陰離子表面活性劑溶液或質量分數(shù)為0. 1%-10%的碳酸鈉溶液；所述天然蠶絲和陰離子表面活性劑溶液的質量體積比以g/ml計為1:10-1:1000。
進一步，步驟A中所述陰離子表面活性劑為質量分數(shù)為0. 25%的十二烷基硫酸鈉或肥皂；進一步，所述碳酸鈉溶液的溫度為90-100°C ；進一步，步驟B中，所述處理溶液為蒸餾水、體積分數(shù)為1-20%的有機溶劑。
進一步，步驟B中，改性處理的溫度為65°C。
所述的制備方法制得的改性蠶絲。
本發(fā)明的目的之二在于提供一種改性蠶絲的新應用，該應用為止血技術提供了新思路。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案為 所述的改性蠶絲在制備止血材料中的應用。
進一步，所述改性蠶絲止血劑量為0. 01-lg/L。
本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明所涉及的改性蠶絲，主要成分為絲素蛋白，通過改造，降低了絲素蛋白的結晶度；改性蠶絲止血效果優(yōu)于日本及美國學者使用二元溶液改造的蠶絲材料。絲素蛋白經(jīng)處理適度改性后，蛋白二級結構主要為折疊結構，降低了無規(guī)則卷曲結構，這個結構能利于更好地結合血小板，進而迅速促進血栓形成。其所述改性蠶絲材料穩(wěn)定性佳；在使用相同劑量的情況下，所述改性蠶絲材料與二元溶液處理改性蠶絲材料及云南白藥相比，促凝血效果更好。


為了使本發(fā)明的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結合附圖對本發(fā)明作進一步的詳細描述，其中圖1為改造的止血蠶絲材料體外凝結實驗，其中a為蠶絲直接脫膠后檢測結果；b 為本發(fā)明的所述改性蠶絲材料檢測結果；c為二元溶液(10%Ca(No3)2甲醇)處理檢測結果。各種絲素蛋白材料均取0. 01克加入抗凝兔血中，其中b在加入后20秒就出現(xiàn)凝結現(xiàn)象，該圖為加入各物質后20分鐘拍攝。結果顯示本發(fā)明的止血蠶絲材料在體外能迅速促進血凝結；圖2為改造的止血蠶絲材料掃描電鏡觀察圖譜，其中a為蠶絲直接脫膠后檢測結果； b為所述改性蠶絲材料檢測結果；c為二元溶液(10%Ca(No3)2甲醇)處理檢測結果；圖3為改性蠶絲材料體外凝結實驗掃描電鏡觀察圖譜，a為脫膠蠶絲；b為本發(fā)明處理的蠶絲材料；c為二元溶液(10%Ca(No3)2甲醇)處理的蠶絲； 圖4為止血蠶絲材料大鼠肝臟止血。
具體實施方式
為了使本發(fā)明的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚，下面對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行詳細的描述。以下將參照附圖，對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行詳細描述。優(yōu)選實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件進行。
實施例1改性蠶絲的制備 1脫膠處理天然蠶絲中主要包括兩種蛋白質大約70-80%的絲素蛋白和大約20-28%的絲膠蛋白。 此外還有少量(1-2%)由天然脂肪、鹽和絲蛋白灰組成的“雜質”。脫膠的目的就是使絲膠溶解。脫膠的方法可具體參照《張雨青.蠶絲脫膠方法的比較分析》。也可以采用質量分數(shù)為 0.1%-10%的陰離子表面活性劑溶液或質量分數(shù)為0. 1%-10%的碳酸鈉溶液，其中，陰離子表面活性包括十二烷基硫酸鈉、肥皂等。當使用質量分數(shù)為0.1%-10%的碳酸鈉溶液作為脫膠溶液時，最好使用沸水。總之，目的在于使絲膠充分溶解。并用蒸餾去洗滌去除絲膠。
2改性處理將脫膠處理后的蠶絲用蒸餾水和/或有機溶液進行改性處理，具體為在37°C條件下處理不小于4小時，其目的在于改變絲素蛋白的二級結構。無論是蒸餾水與有機溶液混合后在37°C條件下處理4小時，還是蒸餾水或有機溶液混合后在37°C條件下處理4小時，或用蒸餾水及有機溶液分別在37°C條件下處理共計4小時，均可實現(xiàn)增加β折疊的目的。本實施例采用的是蒸餾水與有機溶液混合后在37°C條件下處理4小時的方案。
蒸餾水、有機溶劑處理工藝參數(shù)詳見表1。
權利要求
1.改性蠶絲的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟 A脫膠處理取天然蠶絲，用脫膠溶液對天然蠶絲進行充分的脫膠處理，得脫膠蠶絲； B改性處理將步驟A所得脫膠蠶絲用水和/或體積分數(shù)為1-20%的有機溶劑在37-100°C條件下處理不低于4小時，得改性蠶絲；所述有機溶劑為甲醇、乙醇、甲酸和甲醛和三氟乙酸中的任一種。
2.根據(jù)權利要求1所述的改性蠶絲的制備方法，其特征在于，將步驟B改性處理后所得的改性蠶絲用水漂洗干凈，室溫自然晾干或37°C烘干，得改性蠶絲。
3.根據(jù)權利要求1所述的改性蠶絲的制備方法，其特征在于，步驟A中的脫膠處理具體為取天然蠶絲，用脫膠溶液對天然蠶絲進行充分的脫膠處理，在蒸餾沸水煮不低于0. 5小時后，得脫膠蠶絲；所述脫膠溶液為質量分數(shù)為0. 1%-10%的陰離子表面活性劑溶液或質量分數(shù)為0. 1%-10%的碳酸鈉溶液；所述天然蠶絲和陰離子表面活性劑溶液的質量體積比以 g/ml 計為 1:10-1:1000。
4.根據(jù)權利要求3所述的改性蠶絲的制備方法，其特征在于，步驟A中所述陰離子表面活性劑為質量分數(shù)為0. 25%的十二烷基硫酸鈉或肥皂。
5.根據(jù)權利要求3所述的改性蠶絲的制備方法，其特征在于，所述碳酸鈉溶液的溫度為 90-100°C。
6.根據(jù)權利要求3所述的改性蠶絲的制備方法，其特征在于，步驟B中，所述溶液為蒸餾水、體積分數(shù)為10%的有機溶劑。
7.根據(jù)權利要求1所述的改性蠶絲的制備方法，其特征在于，步驟B中，改性處理的溫度為650C 0
8.權利要求1-7任一項所述的制備方法制得的改性蠶絲。
9.權利要求1所述的改性蠶絲在制備止血材料中的應用。
10.根據(jù)權利要求7所述的應用，其特征在于所述改性蠶絲止血劑量為0.01-lg/L。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種止血高分子材料，為改性蠶絲，其制備方法，具體包括以下步驟取天然蠶絲，用脫膠溶液對天然蠶絲進行充分的脫膠處理，得脫膠蠶絲；將所得脫膠蠶絲用蒸餾水和/或體積分數(shù)為1-20%的甲醇、乙醇、甲酸和甲醛和三氟乙酸任一種在37-100℃條件下處理不低于4小時，得改性蠶絲；其通過改性，降低了絲素蛋白的結晶度，蛋白二級結構主要為β-折疊結構，降低了無規(guī)則卷曲結構，這個結構能利于更好地結合血小板，進而迅速促進血栓形成，改性蠶絲材料穩(wěn)定性佳，促凝血效果更好。
文檔編號A61L15/42GK102505453SQ201110336690
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月31日 優(yōu)先權日2011年10月31日
發(fā)明者吳玉章, 楊霞 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學