專利名稱：一種抗感染、抗病毒以及解熱鎮(zhèn)痛的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽及金銀花制成的用于抗感染、抗病毒以及解熱鎮(zhèn)痛的藥物組合物，及其制備方法和用途，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
2、背景技術(shù)由于目前對(duì)如青霉素、阿莫西林等許多傳統(tǒng)抗生素抗藥性的蔓延已引起了醫(yī)藥界的高度關(guān)注和重視，多種耐藥性菌株大量出現(xiàn)及新病毒的出現(xiàn)，使難治性感染越來越多。與此同時(shí)，由于傳統(tǒng)中草藥等天然藥物的配伍或有效成分的組合物往往具有互補(bǔ)、協(xié)同增效作用，亦不產(chǎn)生耐藥性，因而對(duì)天然藥物的發(fā)掘和研究日益受到重視。
穿心蓮為爵床科植物穿心蓮Andrographis paniculata(Burm.f.)Ness的干燥地上部分，具有清熱解毒、涼血、消腫的功效，其主要活性成分為穿心蓮內(nèi)酯。14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽是從穿心蓮提取的穿心蓮內(nèi)酯。經(jīng)半合成后，制成了使具有高度生物活性的穿心蓮的衍生物，使給藥途徑更直接，藥理作用更強(qiáng)，毒副作用更小，具有解熱、消炎、殺菌、抗病毒的作用。藥理研究表明其鉀鈉鹽(即炎琥寧)能抑制早期毛細(xì)血管通透性增高與炎性滲出和水腫，能特異性地興奮垂體-腎上腺皮質(zhì)功能，促進(jìn)ACTH釋放，增加垂體前葉中ACTH的生物合成；體外具有滅活腺病毒、流感病毒、呼吸道病毒等多種病毒的作用；動(dòng)物試驗(yàn)有抗早、中孕作用。其鉀鹽(即穿琥寧)具有解熱、鎮(zhèn)靜、增加機(jī)體對(duì)病原體感染的應(yīng)急能力，對(duì)流感病毒、肺炎腺病毒、腸合胞病毒及呼吸道合胞病毒有滅活作用。其結(jié)構(gòu)式如下。
R＝Na+K+炎琥寧R＝H+K+穿琥寧金銀花(Flos Lonicerae)為忍冬科忍冬屬植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)及同屬多種植物的干燥花蕾或帶初開的花，味甘、性寒，為臨床常用中藥，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱、消腫收斂等功效；現(xiàn)代藥理作用研究表明，金銀花具有抑菌、抗病毒、抗炎、解熱、保肝、止血、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用。
金銀花化學(xué)成分復(fù)雜，已鑒別出的就有60多種。其中最主要的有效成分為木犀草苷，為黃酮類化合物，揮發(fā)油亦是其重要的藥理成分，近年來國內(nèi)外學(xué)者通過氣質(zhì)聯(lián)用已分離出數(shù)十種揮發(fā)油；綠原酸類有機(jī)化合物和三萜皂類亦為其有效成分。
大量的藥理和臨床研究表明，14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽和金銀花在抗感染、抗病毒以及解熱鎮(zhèn)痛等方面有良好的療效。目前用于治療細(xì)菌、病毒等致病微生物引起的感染和/或具有解熱鎮(zhèn)痛作用的藥物雖有不少，但它們大多作用單一，或只有抗菌作用，或只有抗病毒作用。所以需要有一種同時(shí)具有抗菌、抗病毒感染、抗炎和解熱鎮(zhèn)痛作用的藥物，其有效成分含量高，顯效快，毒副作用小。而炎琥寧和金銀花配伍正具備以上特點(diǎn)。而且，利用14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽與金銀花的相互作用進(jìn)行配伍組方，制備治療抗菌、抗病毒感染、抗炎以及解熱鎮(zhèn)痛等方面的藥物，尚未見報(bào)道。
3、發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種用于抗感染、抗病毒以及解熱鎮(zhèn)痛的藥物組合物及其制備方法和用途，其特征在于它是由14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽和金銀花制成的，其重量比為14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽10～160份、金銀花1000～16000份；優(yōu)選為14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽20～80份、金銀2000～8000花份；最優(yōu)為14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽40份、金銀花4000份。
以上組成是按重量份作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減小，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為原料，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。
以上組成，若以克為單位，可以制成100～10000次用量的制劑，如作為注射劑，可制成100～10000支，每次用量1～10支。如作為片劑，可制成100～10000片，每次服用1～10片。
以上重量配比的比例是經(jīng)過科學(xué)篩選得到的，對(duì)于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過100％上文所述的14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽為單鉀鹽、單鈉鹽、鉀鈉鹽、單鎂鹽、單鈣鹽、單鋅鹽，優(yōu)選單鉀鹽、單鈉鹽或鉀鈉鹽。且目前已有試驗(yàn)證明，14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯的單鉀鹽、單鈉鹽或鉀鈉鹽等不同鹽類之間的變化，對(duì)其藥效作用并不會(huì)有明顯的影響。
本發(fā)明藥物還可以由一定比例的14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽和金銀花提取物制成，其重量配比為1∶1～60，優(yōu)選配比為1∶7～30，最優(yōu)配比為1∶14。金銀花提取物可利用現(xiàn)有技術(shù)的制備方法獲得，例如可利用中國專利申請(qǐng)CN200510044262.9的制備方法獲得。金銀花提取物得率為10～15％，其中綠原酸含量不低于1.5％，木犀草苷含量不低于0.10％，總綠原酸含量不低于5.0％。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種用于制備治療抗菌、抗病毒感染、抗炎以及解熱鎮(zhèn)痛等方面疾病的藥物。本發(fā)明藥物組合物具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳化痰、解熱、保肝、止血、降血脂、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用。主要用于急、慢性肝炎，上呼吸道感染、支氣管肺炎、病毒性肺炎、發(fā)熱等疾病。
該組合物可以加一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，以口服、鼻吸入或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊、軟膠囊、分散片、口服液、顆粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、緩釋片、緩釋膠囊、控釋片、控釋膠囊，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其它液體制劑如糖漿等；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、水或油懸浮劑等，如水針、凍干粉針、無菌粉針、輸液等；還可以將其制成滴眼劑。本組合物的優(yōu)選的形式是注射劑或口服制劑。
本發(fā)明的藥物可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
本發(fā)明在制成注射劑時(shí)，為了增加其溶解度，可以加入吐溫-80等增溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本發(fā)明經(jīng)過藥理學(xué)研究和藥效動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證明，由14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽與金銀花為主要成分制成的藥物，可以降低體外抑菌的最小抑菌濃度，對(duì)被細(xì)菌感染的小鼠有明顯的保護(hù)作用，對(duì)由松節(jié)油所致的耳腫脹的小鼠有明顯的抗炎作用，對(duì)小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖量明顯有抑制作用，還可以對(duì)菌苗引起的家兔體溫升高有明顯的抑制作用。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證明，14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽與金銀花合并用藥呈協(xié)同作用，藥效明顯增強(qiáng)。
本發(fā)明組合物具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)提供了一種用于抗感染、抗病毒以及解熱鎮(zhèn)痛的藥物組合物及其制備方法和用途，滿足了臨床急需；(2)通過對(duì)配伍組方的研究，本發(fā)明組合物經(jīng)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，藥效優(yōu)于單獨(dú)使用14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽或金銀花，14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽與金銀花合并用藥呈協(xié)同作用；(3)還提供了最優(yōu)組方及最優(yōu)配比；(4)以14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽直接投料，制備工藝簡單，避免了提取時(shí)造成的藥物損失和由于原藥材質(zhì)量差異造成的不同產(chǎn)品質(zhì)量差異較大的缺點(diǎn)，使藥品純度更高，雜質(zhì)少；
(5)安全性高，質(zhì)量均勻穩(wěn)定；(6)減小了相對(duì)用藥劑量，具有廣泛的應(yīng)用前景。
本發(fā)明藥物組分的用量是經(jīng)過發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在下述重量份范圍內(nèi)都具有較好療效。
以下通過實(shí)驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果，這些實(shí)驗(yàn)例包括本發(fā)明藥物組合物的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，其中的14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽以其鉀鈉鹽(即炎琥寧)為例，本發(fā)明組合物以下簡稱寧金組合物。實(shí)驗(yàn)例中的金銀花提取物來自實(shí)施例1。
實(shí)驗(yàn)例1 寧金組合物合并用藥藥效研究供試品陰性對(duì)照組氯化鈉注射液，自制；陽性對(duì)照組左氧氟沙星注射液，自制；炎琥寧組炎琥寧注射液，自制；金銀花提取物組金銀花提取物注射液，自制；寧金組合物注射液(炎琥寧和金銀花提取物不同劑量配比1/7～1/30)組9組(炎+金＝40mg+280mg；炎+金＝40mg+400mg；炎+金＝40mg+560mg；炎+金＝40mg+800mg；炎+金＝40mg+1120mg；炎+金＝40mg+1200mg)，自制。
供試菌種金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、甲型鏈球菌、肺炎雙球菌。
供試液的制備取陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組、炎琥寧組、金銀花提取物組、寧金組合物注射液(炎琥寧和金銀花提取物不同劑量配比)組(炎+金＝40mg+280mg；炎+金＝40mg+400mg；炎+金＝40mg+560mg；炎+金＝40mg+800mg；炎+金＝40mg+1120mg；炎+金＝40mg+1200mg)，分別配制成濃度為8mg/ml的供試液，系列稀釋為4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml的供試液。
菌懸液的制備將上述供試菌種用適宜的斜面活化后，以無菌水制成含菌數(shù)約為108個(gè)/ml菌懸液。
最低抑菌濃度(MIC)的測定配制細(xì)菌液體培養(yǎng)基，按每管準(zhǔn)確量取8ml，分裝試管，細(xì)菌每個(gè)菌種分裝21支，于121.3℃溫?zé)釡缇?0分鐘，然后準(zhǔn)確量取8mg/ml、4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml系列濃度的藥物1ml，注入已滅菌的液體培養(yǎng)基中，每一個(gè)濃度重復(fù)3次，每一系列接種一種菌，每支試管準(zhǔn)確注入0.1ml菌懸液，細(xì)菌置培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)1～2d，觀察生長現(xiàn)象。另一系列不接種任何菌種作為空白對(duì)照。
最低抑菌濃度，細(xì)菌用OD值表示，在550nm波長下用721型分光光度計(jì)測定細(xì)菌培養(yǎng)液的OD值，培養(yǎng)液OD值與培養(yǎng)液內(nèi)細(xì)菌繁殖速度成正相關(guān)；培養(yǎng)后的培養(yǎng)物與空白對(duì)照在721分光光度計(jì)上進(jìn)行比色測定，以二者吸收完全相同，培養(yǎng)基中沒有菌生長的最低濃度作為寧金注射液的最低抑菌濃度。結(jié)果見表1。
表1寧金組合物對(duì)供試菌的最低抑菌濃度(MIC)
注表中最低抑菌濃度為平均值。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果寧金組合物對(duì)各供試菌種的最低抑菌濃度分別與陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組、炎琥寧組、金銀花提取物組的最低抑菌濃度相比較，前者對(duì)每一供試菌種的最低抑菌濃度均明顯小于后面四者的。寧金組合物各個(gè)劑量配比組都對(duì)供試的細(xì)菌均有明顯的抑菌作用，對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC值為0.125mg/ml，對(duì)大腸桿菌為0.5mg/ml，對(duì)枯草芽孢桿菌的為0.25mg/ml，對(duì)甲型鏈球菌的小于0.125mg/ml，對(duì)肺炎雙球菌的為0.25mg/ml。其中以炎+金＝40mg+560mg的劑量配比抑菌作用最強(qiáng)。提示炎琥寧與金銀花配伍有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例2 寧金組合物小鼠體內(nèi)抑菌實(shí)驗(yàn)供試品對(duì)照組氯化鈉注射液，自制；炎琥寧組炎琥寧注射液，自制；金銀花提取物組金銀花提取物注射液，自制；寧金組合物注射液(炎琥寧和金銀花提取物不同劑量配比)組3組(炎+金＝40mg+400mg；炎+金＝40mg+560mg；炎+金＝40mg+800mg)，自制。
受試動(dòng)物健康小鼠60只，體重23～29g，雌雄兼用，隨機(jī)分為對(duì)照組、炎琥寧組、金銀花提取物組、寧金組合物注射液組(炎+金＝40mg+400mg；炎+金＝40mg+560mg；炎+金＝40mg+800mg)，共6組，每組10只。
菌液用5％胃膜素稀釋金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎雙球菌混懸液，含菌量均為1010個(gè)/ml。
實(shí)驗(yàn)方法每只小鼠腹腔注射菌液0.5ml感染，注射菌液后1、6小時(shí)分別腹腔注射氯化鈉注射液、炎琥寧注射液、金銀花注射液、寧金組合物注射液(炎+金＝40mg+400mg；炎+金＝40mg+560mg；炎+金＝40mg+800mg)，給藥劑量均為20mg/kg。感染后觀察24小時(shí)動(dòng)物生存數(shù)，判斷藥品保護(hù)作用。結(jié)果見表2。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果金黃色葡萄球菌感染小鼠各治療組中，寧金組合物注射液組(不同劑量配比)對(duì)感染小鼠的保護(hù)作用明顯強(qiáng)于炎琥寧注射液、金銀花提取物和對(duì)照組。大腸桿菌感染小鼠各治療組的結(jié)果，與金黃色葡萄球菌實(shí)驗(yàn)組相似。肺炎雙球菌感染小鼠各治療組中，寧金組合物注射液組(不同劑量配比)的作用明顯高于其它三組的，尤其是與金銀花提取物組相比較，作用差異顯著。其中以炎+金＝40mg+560mg的劑量配比的作用最強(qiáng)。
表2寧金組合物對(duì)感染小鼠的保護(hù)作用
*小鼠處于瀕死狀態(tài)而被處死。
實(shí)驗(yàn)例3 寧金組合物對(duì)小鼠抗炎實(shí)驗(yàn)供試品對(duì)照組氯化鈉注射液，自制；炎琥寧組炎琥寧注射液，自制；金銀花提取物組金銀花提取物注射液，自制；寧金組合物注射液組(炎琥寧和金銀花提取物)炎+金＝40mg+560mg，分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制。
受試動(dòng)物昆明種小鼠60只，雄性，體重18～22g，隨機(jī)分為6組。
實(shí)驗(yàn)方法取昆明種小鼠60只，雄性，隨機(jī)分為6組，每組10只，各組小鼠分別腹腔給與對(duì)照藥及受試藥。實(shí)驗(yàn)分為6組，分別給與寧金組合物注射液10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg，金銀花20mg/kg和炎琥寧20mg/kg，另設(shè)一組陰性對(duì)照給予同體積生理鹽水，間隔12h給藥3次。末次給藥后30min，以松節(jié)油接觸右耳5s，15min后脫頸處死小鼠，用直徑6mm的打孔器將雙耳同等部位切下，稱取左右耳片重量，計(jì)算致炎耳片增重。結(jié)果見表3。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各給藥組都具有明顯的抗炎作用(*P＜0.05和**P＜0.01)。其中寧金組合物的作用強(qiáng)于單用炎琥寧或金銀花(#P＜0.05)。證明炎琥寧和金銀花配伍有很好的抗炎作用，且與組合物的給藥劑量有關(guān)，給藥劑量為20mg/kg時(shí)作用最好。
表3寧金組合物對(duì)松節(jié)油所致小鼠耳腫脹的作用
注*P＜0.05，**P＜0.01，與對(duì)照組相比；#P＜0.05，與炎琥寧組或金銀花提取物組相比實(shí)驗(yàn)例4 寧金組合物的解熱實(shí)驗(yàn)供試品對(duì)照組氯化鈉注射液，自制；炎琥寧組炎琥寧注射液，自制；金銀花提取物組金銀花提取物注射液，自制；寧金組合物注射液組(炎琥寧和金銀花提取物)炎+金＝40mg+560mg，分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制。
受試動(dòng)物健康大耳白家兔，雌雄兼用，體重2.4～2.8kg。于實(shí)驗(yàn)前兩天，每天測家兔正常肛門溫度4次，選肛門溫每天波動(dòng)不超過0.2℃的家兔48只，隨機(jī)分為6組。
致熱源傷寒、副傷寒三聯(lián)菌苗，市購。
實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)當(dāng)日早晨先測動(dòng)物的基礎(chǔ)體溫，以0.5ml/kg的傷寒、副傷寒三聯(lián)菌苗給家兔耳靜脈注射致熱，半小時(shí)后分別測肛溫，并靜脈注射相應(yīng)的藥物。給藥后每1小時(shí)測肛溫一次，共4次，以不同時(shí)間所測肛溫與基礎(chǔ)肛溫之差值，為體溫變化的指標(biāo)。結(jié)果見表4。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各給藥組都具有明顯的解熱作用(*P＜0.05和**P＜0.01)。其中寧金組合物對(duì)菌苗引起的家兔體溫升高有明顯的抑制作用，且較單獨(dú)使用炎琥寧或金銀花持續(xù)時(shí)間長，用藥4小時(shí)后仍有解熱效果。且與組合物的給藥劑量有關(guān)，給藥劑量為20mg/kg時(shí)作用最好。
表4寧金組合物對(duì)菌苗致熱家兔的解熱作用(x±s；n＝8)
注*P＜0.05，**P＜0.01，與對(duì)照組相比；#P＜0.05，與炎琥寧組或金銀花提取物組相比。
實(shí)驗(yàn)例5寧金組合物注射劑體內(nèi)抗病毒實(shí)驗(yàn)供試品感染對(duì)照組流感病毒液(FM1)，自制；炎琥寧組炎琥寧注射液，自制；金銀花提取物組金銀花提取物注射液，自制；寧金組合物注射液組(炎琥寧和金銀花提取物)炎+金＝40mg+560mg，分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制。
受試動(dòng)物昆明種小鼠60只，雌雄各半，體重14～15g，隨機(jī)分為6組。
實(shí)驗(yàn)方法取昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，分別為感染對(duì)照組、炎琥寧組、金銀花提取物組、寧金組合物注射液組(炎+金＝40mg+560mg)分為低、中、高三個(gè)劑量組，每組10只。將小鼠用乙醚輕度麻醉，以1000個(gè)LD50流感病毒液(FM1)滴鼻感染。從感染前一天開始腹腔注射給藥，每天2次。病毒感染48小時(shí)處死小鼠，解剖取肺，摘取左側(cè)中葉肺固定，按病理切片常規(guī)脫水、包埋、制作石蠟切片。以間接免疫熒光法染色，以熒光素標(biāo)記的抗感染病毒血清作示蹤源，通過間接免疫熒光結(jié)合，觀察感染鼠肺內(nèi)特異性的病毒抗原，判斷藥物對(duì)病毒增殖的作用，熒光陽性數(shù)多，表明病毒顆粒增殖多。結(jié)果見表5。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果寧金組合物對(duì)小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖量明顯有抑制作用。炎琥寧組、金銀花提取物組與感染對(duì)照組比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但寧金組合物與炎琥寧組、金銀花提取物組相比，有顯著差異。證明炎琥寧和金銀花配伍有協(xié)同增效作用，且與組合物的給藥劑量有關(guān)，給藥劑量為20mg/kg時(shí)作用最好。
表5寧金組合物對(duì)小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖量的影響(x±s；n＝10)
注*P＜0.05，與感染對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)例6 小鼠注射給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)(1)實(shí)驗(yàn)方法供試品寧金組合物注射液(自制，炎琥寧40mg，金銀花提取物560mg)。
受試動(dòng)物小鼠，每組雌雄各5只，雄性體重24～28g，雌性體重21～24g。
給藥途徑靜脈注射、腹腔注射。
給藥劑量尾靜脈注射50mg/kg，腹腔注射100mg/kg。
觀察項(xiàng)目死亡數(shù)、一般狀態(tài)、體重、剖檢、半數(shù)致死劑量。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果死亡數(shù)未出現(xiàn)死亡。
一般狀態(tài)未見異常變化。
體重于給藥前1天，給藥日，給藥后1、3、7、14天測量；未見異常變化。
剖檢心、肝、肺、腎等組織未見異常變化。
(3)結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)死亡，推測寧金組合物注射液對(duì)雌雄小鼠靜脈給藥的半數(shù)致死劑量(LD50)均大于50mg/kg，腹腔注射給藥的半數(shù)致死劑量(LD50)均大于100mg/kg。
實(shí)驗(yàn)例7 注射用寧金組合物穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)供試品注射用寧金組合物(自制，炎琥寧40mg，金銀花提取物560mg)考察項(xiàng)目性狀、PH值、澄明度長期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果將本品置溫度25℃±2℃、相對(duì)濕度60％±10％的條件下放置6個(gè)月、12個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明組合物注射液長期放置基本穩(wěn)定。
具體實(shí)施方式
以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。實(shí)施例2～12中的金銀花提取物來自實(shí)施例1。
實(shí)施例1 金銀花提取物的制備(1)稱取金銀花藥材100kg，加水溫浸30分鐘，煎煮二次。第一次加水量5000ml，時(shí)間1小時(shí)；第二次加水量5000ml，時(shí)間1小時(shí)，濾過，合并濾液。
(2)濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(70～80℃)，放冷至40℃，緩緩加入乙醇使含醇量達(dá)75％，充分?jǐn)嚢瑁o置12小時(shí)。
(3)濾取上清液，回收乙醇至無醇味，加入3～4倍量水，靜置12小時(shí)。
(4)濾取上清液，濃縮至相對(duì)密度為1.15～1.20(70～80℃)，放冷至40℃，加入乙醇使含醇量達(dá)85％，靜置12小時(shí)以上。
(5)濾取上清液，回收乙醇至無醇味，噴霧干燥，即可。金銀花提取物的含量結(jié)果和得率見表6。
表6金銀花提取物的含量結(jié)果和得率
實(shí)施例2 寧金組合物粉針劑的制備處方處方1炎琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)EDTA-2NA0.3g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方2穿琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)EDTA-2NA0.3g甘露醇 300g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支2、具體步驟1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無菌處理。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)取配液量80％的無菌注射用水，先加入EDTA-2NA溶解完全，再將炎琥寧(或穿琥寧)和金銀花提取物加入，加熱攪拌溶解完全。再加入甘露醇加熱攪拌溶解完全，補(bǔ)加無菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的PH值。
6)經(jīng)0.22um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍-45℃5小時(shí)，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時(shí)，然后升溫至25℃真空干燥3小時(shí)。
9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例3 寧金組合物水針劑的制備1、處方處方1炎琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)EDTA-2NA0.1g注射用水加至1000ml共制備 1000支處方2穿琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)EDTA-2NA0.1g注射用水加至1000ml共制備 1000支2、具體步驟2)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
3)取配液量80％的注射用水，先加入EDTA-2NA溶解完全，再加入處方量的炎琥寧(或穿琥寧)和金銀花提取物，加熱攪拌溶解完全。
4)補(bǔ)加注射用水至全量。
5)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
6)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的PH值。
7)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
8)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
9)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
10)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
11)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。
12)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例4 寧金組合物氯化鈉輸液的制備1、處方處方1炎琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)EDTA-2NA10.0g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方2穿琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)EDTA-2NA10.0g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶2、具體步驟1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量20％的注射用水先將EDTA-2NA溶解完全，再將炎琥寧(或穿琥寧)和金銀花提取物加入，加熱攪拌溶解完全。將氯化鈉用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合并兩溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的PH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例5 寧金組合物葡萄糖輸液的制備1、處方處方1炎琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)EDTA-2NA10.0g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方2穿琥寧40g金銀花提取物 560g(相當(dāng)于原藥材4000g)EDTA-2NA 10.0g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶1、具體步驟1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量20％的注射用水先將EDTA-2NA溶解完全，再將炎琥寧(或穿琥寧)和金銀花提取物加入，加熱攪拌溶解完全。將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合并兩溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的PH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例6 寧金組合物片劑的制備1、處方處方1炎琥寧40g金銀花提取物 560g(相當(dāng)于原藥材4000g)淀粉 120.0g微晶纖維素40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉4.0g共制備1000片處方2穿琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)淀粉120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片2、具體步驟1)將炎琥寧(或穿琥寧)和金銀花提取物粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將炎琥寧(或穿琥寧)、金銀花提取物、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例7 寧金組合物膠囊劑的制備1、處方處方1炎琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)淀粉60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂1.0g共制備 1000粒處方2穿琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)淀粉60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂1.0g共制備 1000粒2、具體步驟1)將炎琥寧(或穿琥寧)和金銀花提取物粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將炎琥寧(或穿琥寧)、金銀花提取物、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊。
10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例8 寧金組合物軟膠囊劑的制備1、處方處方1炎琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)大豆油 500.0g大豆磷脂50g蜂蠟50g共制備 1000粒處方2穿琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)大豆油 500.0g大豆磷脂50g蜂蠟50g共制備 1000粒2、具體步驟
將處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷，加入炎琥寧(或穿琥寧)和金銀花提取物研勻，壓制成軟膠囊即可。
實(shí)施例9 寧金組合物顆粒劑的制備1、處方處方1炎琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)糖粉1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方2穿琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)糖粉1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包2、具體步驟1)將蔗糖粉碎過100目篩備用。將炎琥寧(或穿琥寧)和金銀花提取物粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將炎琥寧(或穿琥寧)、金銀花提取物與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材，4)過20目篩制顆粒。
5)顆粒在60℃的條件下烘干。
6)干顆粒過18目篩整粒。
7)取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量。
8)包裝，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例10 寧金組合物滴丸劑的制備1、處方處方1炎琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)聚乙二醇6000600g處方2穿琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)聚乙二醇6000600g
2、具體步驟將聚乙二醇6000在水浴中加熱熔融，待全部熔融后加入炎琥寧(或穿琥寧)和金銀花提取物，攪拌溶解，60目篩過濾，保持60℃滴入冷至10℃以下的液體石蠟中制成丸。
實(shí)施例11 寧金組合物口服液制備1、處方處方1炎琥寧40g金銀花提取物 560g(相當(dāng)于原藥材4000g)EDTA-2NA 1.0g苯甲酸鈉 15g甜菊甙10g水加至10000ml共制備1000支處方2穿琥寧40g金銀花提取物 560g(相當(dāng)于原藥材4000g)EDTA-2NA 1.0g苯甲酸鈉 15g甜菊甙10g水加至10000ml共制備1000支2、具體步驟1)先將EDTA-2NA用配液量60％的水溶解完全，再將炎琥寧(或穿琥寧)和金銀花提取物加入加熱攪拌溶解完全。
2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述兩個(gè)溶液，補(bǔ)加水至全量。
4)過0.8um的微孔濾膜過濾。
5)半成品化驗(yàn)。
6)灌裝。成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例12 寧金組合物滴眼劑制備1、處方處方1炎琥寧40g金銀花提取物 560g(相當(dāng)于原藥材4000g)EDTA-2NA 1.0g氯化鈉70g尼泊金乙酯3.0g水加至10000ml
處方2穿琥寧 40g金銀花提取物560g(相當(dāng)于原藥材4000g)EDTA-2NA1.0g氯化鈉 70g尼泊金乙酯 3.0g水 加至10000ml2、具體步驟1)先將EDTA-2NA用配液量60％的水溶解完全，再將炎琥寧(或穿琥寧)和金銀花提取物加入，加熱攪拌溶解完全。
2)氯化鈉和尼泊金乙酯用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述兩個(gè)溶液，補(bǔ)加水至全量。測定并調(diào)節(jié)PH值。
4)過0.8um的微孔濾膜過濾。
5)半成品化驗(yàn)。
6)灌裝。成品全檢，包裝入庫。
權(quán)利要求
1.一種用于抗感染、抗病毒以及解熱鎮(zhèn)痛的藥物組合物，其特征在于該組合物由14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽和金銀花制成，其重量比為14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽10～160份、金銀花1000～16000份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于其中的14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽和金銀花的重量比為14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽20～80份、金銀花2000～8000份。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于其中的14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽和金銀花的重量比為14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽40份、金銀花4000份。
4.如權(quán)利要求1-3所述的任一藥物，其特征在于所述的金銀花經(jīng)過提取加工得到金銀花提取物，再與14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽混合加工制成藥學(xué)上可接受的制劑。
5.如權(quán)利要求1～3所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟a.稱取金銀花藥材，加水溫浸，煎煮，濾過，合并濾液；b.濾液濃縮，調(diào)密度，放冷，加入乙醇，充分?jǐn)嚢?，靜置；c.濾取上清液，回收乙醇，加水，靜置；d.濾取上清液，回收乙醇，噴霧干燥，即得金銀花提取物；e.將14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽、金銀花提取物與藥物可接受的載體混合，制成制劑。
6.如權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于該藥物還可以由14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽和金銀花提取物制成，其重量比為1∶1～60，其中的金銀花提取物中綠原酸含量不低于1.5％，木犀草苷含量不低于0.10％，總綠原酸含量不低于5.0％。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物，其特征在于該藥物還可以由14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽和金銀花提取物制成，其重量比為1∶7～30，其中的金銀花提取物中綠原酸含量不低于1.5％，木犀草苷含量不低于0.10％，總綠原酸含量不低于5.0％。
8.如權(quán)利要求1～7所述的任一藥物組合物，其特征在于其中的14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽為單鉀鹽、單鈉鹽或鉀鈉鹽。
9.如權(quán)利要求1～3，6～7所述的任一藥物組合物，其特征在于該組合物可制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
10.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型為注射劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種用于抗感染、抗病毒以及解熱鎮(zhèn)痛的藥物組合物及其制備方法和用途，該組合物由14－脫羥－11，12－二脫氫穿心蓮內(nèi)酯－3，19－二琥珀酸半酯鹽和金銀花制成，其重量比為14－脫羥－11，12－二脫氫穿心蓮內(nèi)酯－3，19－二琥珀酸半酯鹽10～160份、金銀花1000～16000份；該藥物還可以由14－脫羥－11，12－二脫氫穿心蓮內(nèi)酯－3，19－二琥珀酸半酯鹽和金銀花提取物制成，其重量比為1∶1～60，可制成各種藥學(xué)上可接受的劑型；該組合物具有協(xié)同增效作用，穩(wěn)定性好，比單用同劑量的炎琥寧或金銀花提取物的效果大大提高。
文檔編號(hào)A61K9/08GK1939380SQ20051004481
公開日2007年4月4日 申請(qǐng)日期2005年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月26日
發(fā)明者蔡軍 申請(qǐng)人:蔡軍