專利名稱：脂質(zhì)結(jié)合核酸的制作方法
脂質(zhì)結(jié)合核酸本發(fā)明涉及一種能夠結(jié)合脂質(zhì),優(yōu)選磷脂、更優(yōu)選I-磷酸鞘氨醇(sphingosine)的核酸分子；其用于分別制造藥劑、診斷劑和檢測(cè)劑的用途；一種包含所述核酸分子的組合物；一種包含所述核酸分子的復(fù)合物；一種用于使用所述核酸分子來篩選活性由脂質(zhì)或脂質(zhì)的類似物介導(dǎo)的拮抗劑的方法；以及一種用于檢測(cè)所述核酸分子的方法。脂質(zhì)和脂質(zhì)衍生物因其作為細(xì)胞膜中的結(jié)構(gòu)組分或作為β氧化作用或糖酵解的底物的功能而最為知名。近年來，脂質(zhì)和脂質(zhì)衍生物已被認(rèn)定為一種在疾病中起重要作用的信號(hào)傳導(dǎo)分子。存在生物活性脂質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)分子的許多實(shí)例，包括磷脂，諸如磷脂酸肌醇(phosphatidyl inositol)(縮寫為 PI)、憐脂酸絲氨酸(phosphatidyl serine)
(縮寫為PS)、二脂酰甘油(diacylglyceride)(縮寫為DAG)、磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol)(縮寫為PG)和磷脂酸(phosphatidic acid)(縮寫為PA);溶血磷脂酰膽堿 (lysophosphatidyl choline)、血小板活化因子和心磷脂(cardiolipin)。脂質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)分子的其它實(shí)例包括類二十燒酸(eicosanoid),其涵蓋大麻素(cannabinoid)、前列腺素(prostaglandin)、異類二十燒酸(isoeicosanoid)和白三烯(Ieukotriene)。脂質(zhì)可充當(dāng)?shù)诙攀够蛲ㄟ^直接與其自身特定受體相互作用來起作用。脂質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)路徑是通過各種不同刺激物活化的且涉及于一系列不同細(xì)胞過程(包括粘著、運(yùn)動(dòng)性、增殖、細(xì)胞凋亡和分化)的調(diào)控中。鞘脂及其衍生物具有細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)功能且在人疾病中起重要作用。另一且重要類別的脂質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)分子為鞘脂；其包括神經(jīng)酰胺(ceramide)、神經(jīng)酰胺-I-磷酸酯、鞘磷脂、鞘氨醇、鞘氨醇-I-磷酸酯、二氫鞘氨醇(sphinganine)和二氫鞘氨醇-I-磷酸酯。I-磷酸鞘氨醇(縮寫為SlP)為一種380道爾頓(Dalton)的磷脂，分子式為C18H38NO5P0 SlP曾經(jīng)被認(rèn)為僅是神經(jīng)酰胺的一種分解產(chǎn)物，目前已知其在不同生物過程，諸如細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞增殖、血管生成和淋巴細(xì)胞遷移中具有重要功能(關(guān)于綜述，參見Kim等，Biochim Biophys Acta. 20091791:692-6 ;Maceyka等，J Lipid Res. 2009 50增刊:S272_6 ；Takabe 等，Pharmacol Rev. 200860 (2) : 181-95)。在SlP的其它功能之中，SlP具有抗細(xì)胞凋亡作用且促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。其前體鞘氨醇和神經(jīng)酰胺具有相反功能，從而誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞死亡。因?yàn)镾lP及其前體展現(xiàn)所述相反作用，所以認(rèn)為主要由鞘氨醇磷酸酶和鞘氨醇激酶的相互影響控制的不同鞘氨醇代謝物的相對(duì)平衡而非其絕對(duì)量決定細(xì)胞命運(yùn)。這個(gè)復(fù)雜調(diào)控系統(tǒng)稱為“鞘脂變阻器(sphingolipid rheostat)”。新近研究已暗示SlP及其代謝物以及其前體神經(jīng)酰胺為TNF- a、ILl β和其它細(xì)胞因子的第二信使。各種證據(jù)支持SlP作為負(fù)責(zé)細(xì)胞增殖和存活的第二信使的作用。然而，同時(shí)，許多SlP的生物作用為充當(dāng)細(xì)胞表面上S IP的五個(gè)G蛋白偶聯(lián)受體(縮寫為S1PR)的配體的結(jié)果。最初鑒定為孤兒受體且命名為內(nèi)皮分化基因(縮寫為EDG)，其目前已重命名為 EDG1/S1P” EDG5/S1P2、EDG3/S1P3、EDG6/S1P4、EDG8/S1P5,且加以表征。各受體偶聯(lián)于雜二聚G蛋白(Gq、GU G12-13)，從而活化下游信號(hào)傳導(dǎo)分子，諸如Rho家族的小 GTP 酶(Zhou 和 Murthy, Am J Physiol Cell Physiol. 2004，286:C1130_C1138 ；Kume等，J Pharmacol Exp The r. 2007320:766-773)、有絲分裂原(mitogen)活化的蛋白質(zhì)激酶(Guo 等，Eur J Biochem. 1998257:403-408 ;Sato 等，Mol Pharmacol. 199955:126-133 ；Dikic 等，Nature. 1996383:547-550.)、憐脂酶 C/D (Okamoto 等，J BiolChem. 1998273:27104-27110 ；Gonda 等，Biochem J. 1999337:67-75 ;Banno 等，JBiolChem. 1999274:27385-27391)等。SlPR的表達(dá)為廣布的且SlP影響巨大范圍的細(xì)胞反應(yīng)，包括粘著、收縮、運(yùn)動(dòng)性、形態(tài)發(fā)生、增殖和分化，從而暗示SlP牽涉于血管張力的調(diào)控、傷口愈合、免疫細(xì)胞的遷移、神經(jīng)元信號(hào)傳導(dǎo)、血管生成、繁殖和心血管功能中。反應(yīng)的范圍取決于受體在細(xì)胞和組織中的表達(dá)樣式和相應(yīng)效應(yīng)物。因此，在例如內(nèi)皮細(xì)胞中，活化特定 SlPR 可具有與活化另一 SlPR 相反的作用(Lee 等，Mol Cell. 2001 8:693-704. ；Kimura等，Biochem J. 2000348:71-76. ;Ryu 等，Circ Res. 2002 90:325-332.)?；罨环N SlPR 可差異性調(diào)控 Rho 家族的 GTP 酶(Garcia 等，J Clin Invest. 2001108:689-701 ;Gon 等，ProcNatl Acad Sci USA. 2005102:9270-9275 ;Liu 等，J Clin Invest. 2000 106:951-961)。此夕卜，存在與其它生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)路徑的相互影響。存在于循環(huán)血液和淋巴中的SlP主要由血小板、活化肥大細(xì)胞和單核吞噬細(xì)胞制備且分泌。發(fā)現(xiàn)SlP的濃度介于O. ImM至ImM之間，有時(shí)可達(dá)5mM，但僅一部分可用于活化S1PR，因?yàn)榇蠖鄶?shù)SlP結(jié)合于白蛋白(albumin)或其它血漿蛋白。內(nèi)源性SlP水平的改變可導(dǎo)致病理生理學(xué)病狀，包括炎癥和自體免疫性疾病、哮喘、血管生成、心臟病、癌癥、眼病和腦血管疾病。因?yàn)镾lP的許多作用被認(rèn)為由SlP與一種或若干種SlPR的相互作用或結(jié)合介導(dǎo)，所以治療方法已集中于靶向受體。已鑒定并描述眾多不同SlP受體拮抗劑和激動(dòng)劑。其對(duì)各種SlPR的特異性和親和力不同且因此顯示各種功能概況。最先進(jìn)的化合物芬戈莫德(Fingolimod)，也稱為FTY720，為一種前藥且在體內(nèi)被磷酸化。磷酸化形式為SlPR SlP1,S1P3、SlP4和SlP5的激動(dòng)劑且被證明在移植和自體免疫性疾病的模型中高度有效。其當(dāng)前處于治療多發(fā)性硬化癥的3期臨床試驗(yàn)中。由于不同SlPR具有相反作用，所以有興趣鑒定對(duì)各種受體具有特定選擇性的分子。干擾SlP依賴性病理生理學(xué)的另一方法在于影響內(nèi)源性SlP水平。這個(gè)可通過靶向SlP激酶以改變通過使鞘氨醇磷酸化制備的SlP的量或通過靶向SlP磷酸酶以影響脫磷酸SlP的量來實(shí)現(xiàn)。影響內(nèi)源性生物活性SlP水平的另一方法是通過由與中和劑的分子相互作用直接抑制SlP作用來實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明描述一種中和SlP的方法。構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)的問題在于提供一種工具，其特異性與脂質(zhì)，優(yōu)選磷脂、更優(yōu)選SlP相互作用。更具體地，構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)的問題在于提供一種基于核酸的工具，其特異性與脂質(zhì)，優(yōu)選磷脂、更優(yōu)選SlP相互作用。構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)的另一問題在于提供一種制造用于治療人或非人疾病的藥劑的工具，其中所述疾病的特征為脂質(zhì)，優(yōu)選磷脂、更優(yōu)選S1P，直接或間接涉及于所述疾病的 致病機(jī)制中。構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)的另一問題在于提供一種制造用于診斷疾病的診斷劑的工具，其中所述疾病的特征為脂質(zhì)，優(yōu)選磷脂、更優(yōu)選S1P，直接或間接涉及于所述疾病的致病機(jī)制中。構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)的這些和其它問題由所附獨(dú)立權(quán)利要求的主題解決。優(yōu)選實(shí)施方案可取自附屬權(quán)利要求。更具體地，在也為第一方面的第一實(shí)施方案的第一方面，構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)的問題由能夠結(jié)合脂質(zhì)的核酸分子解決。在第一方面的也為第一方面的第一實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二實(shí)施方案中，核酸為活性由脂質(zhì)介導(dǎo)的拮抗劑。在第一方面的也為第一方面的第一和第二實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第三實(shí)施方案中，脂質(zhì)為磷脂，所述磷脂優(yōu)選為I-磷酸鞘氨醇。在第一方面的也為第一方面的第一、第二和第三實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第四實(shí)施方案中，核酸分子包含中心核苷酸鏈段，其中所述中心核苷酸鏈段包含核苷酸序列5， WAUUGCCGAWUGUAACGCCUUWAGAGAAAGCACUAG3，或·
5，WAUUGCCGWUGUAACGCCUUWAGAGAAAGCACUAG3，且其中脂質(zhì)優(yōu)選為I-磷酸鞘氨醇。在第一方面的也為第一方面的第四實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第五實(shí)施方案中，中心核苷酸鏈段包含選自 5’AAUAGCCGUUGAAACGCCUUUAGAGAAGCACUAG 3 ’、5 ’ AAUAGCCGAUGAAACGCCUUUAGAGAAGCACUAG 3’ 和 5’ AAUAGCCGAAUGAAACGCCUUAAGAGAAGCACUAG 3’ 的組的核苷酸序列。在第一方面的也為第一方面的第四和第五實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第六實(shí)施方案中，核酸分子在5’ _>3’方向上包含第一末端核苷酸鏈段、中心核苷酸鏈段和第二末端核苷酸鏈段，其中第一末端核苷酸鏈段包含三至六個(gè)核苷酸，且第二末端核苷酸鏈段包含三至六個(gè)核苷酸。在第一方面的也為第一方面的第四和第五實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第七實(shí)施方案中，核酸分子在5’ _>3’方向上包含第二末端核苷酸鏈段、中心核苷酸鏈段和第一末端核苷酸鏈段，其中第一末端核苷酸鏈段包含三至六個(gè)核苷酸，且第二末端核苷酸鏈段包含三至六個(gè)核苷酸。在第一方面的也為第一方面的第六和第七實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第八實(shí)施方案中，第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列 5’ CASX4X5X63’，其中X1為A或不存在，X2為G或不存在，X3為S或不存在，X4為S或不存在，X5為C或不存在，且X6 Su或不存在。在第一方面的也為第一方面的第六、第七和第八實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第九實(shí)施方案中，第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X63’，其中a) X1 為 A, X2 為 G, X3 為 S, X4 為 S, X5 為 C,且 X6 為 U 或WX1 不存在，\為6，X3 為 S，X4 為 S，X5SC,且 X6 SU 或c) X1為A, X2為G, X3為S, X4為S, X5為C,且X6不存在或
(I)X1不存在，\為6，X3為S，X4為S，X5為C，且X6不存在。在第一方面的也為第一方面的第六、第七、第八和第九實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第十實(shí)施方案中，a)第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’AGCGUG 3’且第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACG⑶3’或b)第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’GCGUG 3’且第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACGC 3’。在第一方面的也為第一方面的第六、第七和第八實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第十一實(shí)施方案中，第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X63’，其中 a) X1不存在，X2不存在，X3為S，X4為S，X5為C，且X6不存在或WX1不存在，X2為G，X3為S，X4S S，X5不存在，且乂6不存在或CU1不存在，X2不存在，X3為S，X4為S，X5不存在，且X6不存在。在第一方面的也為第一方面的第六、第七、第八和第十一實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第十二實(shí)施方案中，a)第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’CGUG 3’且第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACG 3’或b)第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ GCUG 3’且第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CAGC 3’或c)第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ GGUG 3’且第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACC 3’，優(yōu)選地第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’CGUG 3’且第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACG 3’。在第一方面的也為第一方面的第六、第七和第八實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第十三實(shí)施方案中，第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X63’，其中X1不存在，X2不存在，X3為S或不存在，X4為S或不存在，X5不存在，且X6不存在。在第一方面的也為第一方面的第六、第七、第八和第十三實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第十四實(shí)施方案中，第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’GUG 3’且第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CAC 3’。在第一方面的也為第一方面的第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三和第十四實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第十五實(shí)施方案中，中心核苷酸鏈段為結(jié)合I-磷酸鞘氨醇所必需。在第一方面的也為第一方面的第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四和第十五實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第十六實(shí)施方案中，第一末端核苷酸鏈段和第二末端核苷酸鏈段任選彼此雜交,其中在雜交后,形成雙鏈結(jié)構(gòu)。在第一方面的也為第一方面的第十六實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第十七實(shí)施方案中，雙鏈結(jié)構(gòu)由三至六個(gè)堿基對(duì)組成。在第一方面的也為第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六和第十七實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第十八實(shí)施方案中，核酸分子包含根據(jù)SEQ. ID. No 12至26、41和42中的任一者的核苷酸序列，優(yōu)選根據(jù)SEQ. ID. No 12、13、15、18、19、23至26,41和42中的任一者的核苷酸序列，更優(yōu)選根據(jù)SEQ ID No 12、18、23、24、41和42中的任一者的核苷酸序列。在第一方面的也為第一方面的第一、第二和第三實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第十九實(shí)施方案中，核酸分子包含根據(jù)SEQ. ID. NO. 18的核苷酸序列或與其同源的核酸分子,其中同源性為至少85%。在第一方面的也為第一方面的第一、第二和第三實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二十實(shí)施方案中，核酸分子包含根據(jù)SEQ. ID. NO. 41的核苷酸序列或與其同源的核酸分子,其中同源性為至少85%。在第一方面的也為第一方面的第一、第二和第三實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二i 實(shí)施方案中，核酸分子包含根據(jù)SEQ. ID. NO. 42的核苷酸序列或與其同源的核酸分子，其中同源性為至少85%。在第一方面的也為第一方面的第一、第二和第三實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二十二實(shí)施方案中，相較于參照核酸分子，核酸分子的親和力增加，其中所述參照核酸分子包含根據(jù)SEQ. ID. NO. 18的核苷酸序列且其中所述參照核酸分子由核糖核苷酸組成，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ. ID. NO. 18的核苷酸序列且其中根據(jù)SEQ. ID. No. 18的核苷酸序 列的一或多個(gè)核苷酸為脫氧核糖核苷酸而非核糖核苷酸。在第一方面的也為第一方面的第二十二實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二十三實(shí)施方案中，核酸分子包含根據(jù)SEQ. ID. No 27至37、39和40中的任一者的核苷酸序列，優(yōu)選根據(jù)SEQ. ID. No 30、34至37、39和40中的任一者的核苷酸序列，更優(yōu)選根據(jù)SEQ. ID. No. 36、
37、39和40中的任一者的核苷酸序列。在第一方面的也為第一方面的第二十三實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二十四實(shí)施方案中，核酸分子包含根據(jù)SEQ. ID. NO. 36的核苷酸序列或與其同源的核酸分子,其中同源性為至少85%，其中所述同源核酸包含核糖核苷酸和至少一個(gè)脫氧核糖核苷酸。在第一方面的也為第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三和第二十四實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二十五實(shí)施方案中，核酸分子包含修飾基團(tuán)，其中相較于不包含所述修飾基團(tuán)的核酸，包含所述修飾基團(tuán)的所述核酸分子自生物體的排泄率降低。在第一方面的也為第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三和第二十四實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二十六實(shí)施方案中，核酸分子包含修飾基團(tuán)，其中相較于不包含所述修飾基團(tuán)的核酸分子，包含所述修飾基團(tuán)的所述核酸分子在生物體中的保留時(shí)間增加。在第一方面的也為第一方面的第二十五和第二十六實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二十七實(shí)施方案中，修飾基團(tuán)選自包含生物可降解和非生物可降解修飾的組，所述修飾基團(tuán)優(yōu)選選自包含聚乙二醇、直鏈聚乙二醇、支鏈聚乙二醇、羥乙基淀粉、肽、蛋白質(zhì)、多糖、固醇、聚氧化丙烯、聚氧基酰胺化物和聚(2-羥乙基)-L-谷氨酰胺的組。
在第一方面的也為第一方面的第二十七實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二十八實(shí)施方案中，修飾基團(tuán)為聚乙二醇，優(yōu)選由直鏈聚乙二醇或支鏈聚乙二醇組成，其中所述聚乙二醇的分子量?jī)?yōu)選為約20，OOODa至約120，OOODa、更優(yōu)選約30，OOODa至約80，OOODa且最優(yōu)選約 40，OOODa0在第一方面的也為第一方面的第二十七和第二十八實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二十九實(shí)施方案中，其中修飾基團(tuán)為羥乙基淀粉，其中優(yōu)選地，羥乙基淀粉的分子量為約50kDa至約lOOOkDa、更優(yōu)選約IOOkDa至約700kDa且最優(yōu)選200kDa至500kDa。在第一方面的也為第一方面的第二十五、第二十六、第二十七、第二十八和第二十九實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第三十實(shí)施方案中，修飾基團(tuán)經(jīng)由連接子偶合于核酸分子，其中所述連接子為生物可降解連接子。在第一方面的也為第一方面的第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九和第三十實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第三十一實(shí)施方案中，修飾基團(tuán)偶合于核酸分子 的5’末端核苷酸和/或3’末端核苷酸和/或偶合于核酸分子的介于核酸分子的5’末端核苷酸與核酸分子的3’末端核苷酸之間的核苷酸。在第一方面的也為第一方面的第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十和第三十一實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第三十二實(shí)施方案中，生物體為動(dòng)物或人體，優(yōu)選人體。在第一方面的也為第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一和第三十二實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第三十三實(shí)施方案中，核苷酸或形成核酸分子的核苷酸為L(zhǎng)-核苷酸。在第一方面的也為第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二和第三十三實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第三十四實(shí)施方案中，核酸分子為L(zhǎng)-核酸。在第一方面的也為第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三和第三十四實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第三十五實(shí)施方案中，核酸分子包含至少一個(gè)能夠結(jié)合I-磷酸鞘氨醇的結(jié)合部分，其中所述結(jié)合部分由L-核苷酸組成。在第一方面的也為第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四和第三十五實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第三十六實(shí)施方案中，核酸分子用于治療和/或預(yù)防疾病的方法中。在第一方面的也為第一方面的第三十六實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第三十七實(shí)施方案中，通過抑制血管生成和/或纖維化來治療或改善疾病。在第一方面的也為第一方面的第三十六和第三十七實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第三十八實(shí)施方案中，疾病為眼病，優(yōu)選地，所述眼病選自包含以下的組年齡相關(guān)的黃斑變性(age-related macular degeneration)、伴有糖尿病性黃斑水腫的糖尿病性視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy with diabetic macular edema)、年齡相關(guān)的黃斑變性或糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的視網(wǎng)膜色素上皮脫離(retinal pigmented epithelium detachment)、增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變(proliferative vitreoretinopathy)和年齡相關(guān)的黃斑變性或糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的視網(wǎng)膜纖維化。在第一方面的也為第一方面的第三十六實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第三十九實(shí)施方案中，通過抑制血管生成和/或增殖來治療或改善疾病。在第一方面的也為第一方面的第三十六、第三十七、第三十八和第三十九實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第四十實(shí)施方案中，疾病為癌癥，優(yōu)選地，所述癌癥選自包含乳癌、卵巢 癌、黑素瘤(melanoma)、肺癌、增生(諸如前列腺增生)的組。在第一方面的也為第一方面的第三十六實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第四十一實(shí)施方案中，疾病為炎性疾病，其中所述炎性疾病選自包含自體免疫性疾病、肺炎、敗血癥和創(chuàng)傷(諸如呼吸器誘發(fā)的肺損傷)的組。在第一方面的也為第一方面的第四i^一實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第四十二實(shí)施方案中，自體免疫性疾病選自包含多發(fā)性硬化癥(multiple sclerosis)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、哮喘和炎性腸病的組。在也為第二方面的第一實(shí)施方案的第二方面，構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)的問題由包含如第一方面的任一實(shí)施方案中定義的核酸分子和任選另一組分的藥物組合物解決，其中所述另一組分選自包含藥學(xué)上可接受的賦形劑、藥學(xué)上可接受的載體和藥學(xué)活性劑的組。在第二方面的也為第二方面的第一實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二實(shí)施方案中，藥物組合物包含如第一方面的任一實(shí)施方案中定義的核酸分子和藥學(xué)上可接受的載體。在也為第三方面的第一實(shí)施方案的第三方面，構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)的問題通過使用根據(jù)第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第二十一、第二十二、第二十二、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第三十九、第四十、第四i 和第四十二實(shí)施方案中的任一者的用于制造藥劑的核酸分子來解決。在第三方面的也為第三方面的第一實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二實(shí)施方案中，藥劑用于人醫(yī)學(xué)中或用于獸醫(yī)學(xué)中。在也為第四方面的第一實(shí)施方案的第四方面，構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)的問題通過使用根據(jù)第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第二十一、第二十二、第二十二、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第三十九、第四十、第四十一和第四十二實(shí)施方案中的任一者的用于制造診斷工具的核酸分子來解決。在第三方面的也為第三方面的第一實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第三實(shí)施方案中，藥劑用于治療和/或預(yù)防眼病、癌癥或炎性疾病。在第三方面的也為第三方面的第三實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第四實(shí)施方案中，眼病選自包含以下的組年齡相關(guān)的黃斑變性、伴有糖尿病性黃斑水腫的糖尿病性視網(wǎng)膜病變、年齡相關(guān)的黃斑變性或糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的視網(wǎng)膜色素上皮脫離、增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變和年齡相關(guān)的黃斑變性或糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的視網(wǎng)膜纖維化。在第三方面的也為第三方面的第三實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第五實(shí)施方案中，癌癥選自包含乳癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、增生(諸如前列腺增生)的組。在第三方面的也為第三方面的第三實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第六實(shí)施方案中，炎性疾病選自包含自體免疫性疾病、肺炎、敗血癥和創(chuàng)傷(諸如呼吸器誘發(fā)的肺損傷)的組。 在第三方面的也為第三方面的第六實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第七實(shí)施方案中，自體免疫性疾病選自包含多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、哮喘和炎性腸病的組。在也為第五方面的第一實(shí)施方案的第五方面,構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)的問題由包含根據(jù)第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第二十二、第二十二、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第四十、第四十一和第四十二實(shí)施方案中的任一者的核酸分子和脂質(zhì)的復(fù)合物解決，其中所述復(fù)合物優(yōu)選為結(jié)晶復(fù)合物。在第五方面的也為第五方面的第一實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二實(shí)施方案中，月旨質(zhì)為磷脂，所述磷脂優(yōu)選為I-磷酸鞘氨醇。在也為第六方面的第一實(shí)施方案的第六方面，構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)的問題通過使用根據(jù)第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第二十一、第二十二、第二十二、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第三十九、第四十、第四十一和第四十二實(shí)施方案中的任一者的用于檢測(cè)脂質(zhì)的核酸分子來解決。在第六方面的也為第六方面的第一實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二實(shí)施方案中，月旨質(zhì)為磷脂，所述磷脂優(yōu)選為I-磷酸鞘氨醇。在也為第七方面的第一實(shí)施方案的第七方面，構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)的問題由一種篩選活性由脂質(zhì)或所述脂質(zhì)的類似物介導(dǎo)的拮抗劑的方法解決，所述方法包含下列步驟-提供活性由所述脂質(zhì)和/或所述脂質(zhì)的類似物介導(dǎo)的候選拮抗劑，-提供如第一方面的任一實(shí)施方案中定義的核酸，-提供在活性由所述脂質(zhì)和/或所述脂質(zhì)的類似物介導(dǎo)的拮抗劑存在下提供信號(hào)的測(cè)試系統(tǒng)，以及I.-確定活性由所述脂質(zhì)介導(dǎo)的所述候選拮抗劑是否為所述脂質(zhì)和/或所述脂質(zhì)的類似物的拮抗劑。
在第七方面的也為第七方面的第一實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二實(shí)施方案中，月旨質(zhì)為磷脂，所述磷脂優(yōu)選為I-磷酸鞘氨醇。在也為第八方面的第一實(shí)施方案的第八方面，構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)的問題由用于檢測(cè)脂質(zhì)的試劑盒解決，所述試劑盒包含根據(jù)第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一和第四十二實(shí)施方案中的任一者的核酸分子，其中所述脂質(zhì)優(yōu)選為磷脂，其中所述磷脂更優(yōu)選為I-磷酸鞘氨醇。在也為第九方面的第一實(shí)施方案的第九方面，構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)的問題由一種檢測(cè)樣品中的如第一方面的任一實(shí)施方案中定義的核酸的方法，其中所述方法包含以下步驟 a)提供捕獲探針，其中所述捕獲探針至少部分互補(bǔ)于如第一方面的任一實(shí)施方案中定義的核酸分子的第一部分；和檢測(cè)探針，其中所述檢測(cè)探針至少部分互補(bǔ)于如第一方面的任一實(shí)施方案中定義的核酸分子的第二部分，或替代地，所述捕獲探針至少部分互補(bǔ)于如第一方面的任一實(shí)施方案中定義的核酸分子的第二部分且所述檢測(cè)探針至少部分互補(bǔ)于如第一方面的任一實(shí)施方案中定義的核酸分子的第一部分；b)單獨(dú)或組合添加所述捕獲探針和所述檢測(cè)探針至含有如第一方面的任一實(shí)施方案中定義的核酸分子或假定含有如第一方面的任一實(shí)施方案中定義的核酸分子的樣品中；c)使所述捕獲探針和所述檢測(cè)探針同時(shí)或以任何順序依序與如第一方面的任一實(shí)施方案中定義的核酸分子或其一部分反應(yīng)；d)任選檢測(cè)所述捕獲探針是否與步驟a)中提供的如第一方面的任一實(shí)施方案中定義的核酸分子雜交；以及e)檢測(cè)步驟c)中形成的由如第一方面的任一實(shí)施方案中定義的核酸分子和所述捕獲探針及所述檢測(cè)探針組成的復(fù)合物。在第九方面的也為第九方面的第一實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第二實(shí)施方案中，檢測(cè)探針包含檢測(cè)工具，和/或其中捕獲探針固定于載體，優(yōu)選固體載體。在第九方面的也為第九方面的第一和第二實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第三實(shí)施方案中，自反應(yīng)移除不為復(fù)合物的一部分的任何檢測(cè)探針以使在步驟e)中僅檢測(cè)為復(fù)合物的一部分的檢測(cè)探針。在第九方面的也為第九方面的第一、第二和第三實(shí)施方案的一實(shí)施方案的第四實(shí)施方案中，步驟e)包含以下步驟比較當(dāng)捕獲探針和檢測(cè)探針在如第一方面的任一實(shí)施方案中定義的核酸分子或其一部分存在下雜交時(shí)由檢測(cè)工具產(chǎn)生的信號(hào)與在不存在所述核酸或其一部分下由檢測(cè)工具產(chǎn)生的信號(hào)。本發(fā)明是基于以下驚人發(fā)現(xiàn)a)有可能產(chǎn)生特異性結(jié)合脂質(zhì)且對(duì)脂質(zhì)具有高親和力的核酸分子，所述脂質(zhì)優(yōu)選為磷脂、更優(yōu)選為SlP;b)為根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的所述核酸分子共有共同核苷酸序列，其中根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的所述共同序列優(yōu)選為根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的結(jié)合特征所必需，更優(yōu)選為結(jié)合SlP所必需；c)根據(jù)本發(fā)明的核酸分子對(duì)脂質(zhì)，優(yōu)選對(duì)磷脂、更優(yōu)選對(duì)SlP的結(jié)合親和力將通過用2’ -脫氧核糖核苷酸置換有限數(shù)目的核糖核苷酸來提高。所述核酸優(yōu)選在本文中也稱為根據(jù)本發(fā)明的核酸分子、根據(jù)本發(fā)明的核酸、本發(fā)明核酸或本發(fā)明核酸分子。就此而言，如果不相反指示，那么術(shù)語核酸及核酸分子以同義方式在本文中使用?？稍趩为?dú)或以任何組合使用核酸的本發(fā)明的任何方面實(shí)現(xiàn)如本文所述的根據(jù)本發(fā)明的核酸的特征。短核酸分子對(duì)脂質(zhì)、磷脂且特別是SlP具有高結(jié)合親和力的研究結(jié)果可被鑒定，
就此而言為驚人的，因?yàn)楸M管如 ‘The aptamer handbook’ (Klussmann, Klussmann, S.(編著)；The Aptamer Handbook,第 I 版-2006 年 2 月，ffiley-VCH, Weinheim)中所述鑒定了針對(duì)幾乎所有靶標(biāo)類別(諸如肽、蛋白質(zhì)、核酸、小分子、抗生素、氨基酸、核苷酸)的核酸分子，但迄今為止無核酸分子可被鑒定結(jié)合脂質(zhì)、磷脂且特別是S1P。脂質(zhì)，特別是磷脂的結(jié)構(gòu)和電荷說明為何鑒定脂質(zhì)結(jié)合核酸分子迄今為止尚未成功和/或從未加以考慮。諸如SlP的磷脂的主要特征為其具有不帶電荷的脂族部分和一個(gè)帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)。在考慮電荷和所述脂質(zhì)的磷酸基團(tuán)的負(fù)電荷下，驚人的是發(fā)明者可鑒定結(jié)合脂質(zhì)、且更具體地結(jié)合磷脂的核酸分子。歸因于核酸分子的糖骨架中的磷酸，核酸分子本身帶負(fù)電荷。因此，核酸分子結(jié)合另一帶負(fù)電荷的分子或部分不大可能。除電荷排斥之外，粘附也影響具有三維結(jié)構(gòu)的核酸分子到達(dá)靶分子。盡管已公布結(jié)合小分子的若干核酸分子，但通常，針對(duì)小分子的核酸分子的親和力在微摩爾范圍內(nèi)(James, 2000 Encyclopedia of Analytical Chemistry,第4848-4871頁)，此致使其不適合供治療使用。然而，根據(jù)本發(fā)明的最佳SlP結(jié)合核酸分子顯示由Kd值表示的高結(jié)合親和力，此允許在體內(nèi)使用所述核酸分子，更具體地在治療或診斷哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人的方法中使用所述核酸分子。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的Kd值小于100nM、更優(yōu)選小于50nM。在一實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的Kd值等于或小于由5nM至53nM的范圍限定的任何值。在另一實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的IC5tl值等于或小于由5nM至31nM的范圍限定的任何值。根據(jù)本發(fā)明的核酸分子特異性結(jié)合SlP (也稱為D-赤-鞘氨醇-I-磷酸酯)，而非缺乏磷酸基團(tuán)的D-赤-鞘氨醇。因?yàn)檎J(rèn)為諸如SlP的脂質(zhì)的許多作用由脂質(zhì)與一種或若干種脂質(zhì)受體(優(yōu)選SlP受體)的相互作用且更具體地脂質(zhì)與一種或若干種脂質(zhì)受體的結(jié)合介導(dǎo)，所以治療方法已集中在靶向脂質(zhì)受體，特別是SlP受體。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解根據(jù)本發(fā)明的核酸分子優(yōu)選為活性由脂質(zhì)，優(yōu)選由磷脂、更優(yōu)選由SlP介導(dǎo)的拮抗劑。已鑒定并描述眾多不同SlP受體拮抗劑和激動(dòng)劑，其由于其結(jié)合所述脂質(zhì)而對(duì)這些脂質(zhì)介導(dǎo)的活性具有影響。其對(duì)各種S1PR(諸如SlPi、SlP3、SlP4和SlP5)的特異性和親和力不同且因此顯示各種功能概況。根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的一個(gè)優(yōu)勢(shì)在于根據(jù)本發(fā)明的核酸分子為SlP的拮抗劑且由此介導(dǎo)所有SlP受體的功能而非處理且更具體地結(jié)合單一 SlP受體。根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)優(yōu)選選自包含蠟、固醇、脂溶性維生素(諸如維生素A、D、E和K)、單酸甘油酯、二酸甘油酯、磷脂等但不限于其的組。
脂質(zhì)可廣泛定義為疏水性或兩親性小分子；一些脂質(zhì)的兩親性性質(zhì)允許其在水性環(huán)境中形成諸如囊泡、脂質(zhì)體或膜的結(jié)構(gòu)。生物脂質(zhì)完全或部分自兩種不同類型的生物化學(xué)亞單位或“構(gòu)筑嵌段”:酮?；彤愇於┗鶊F(tuán)產(chǎn)生。使用此方法，脂質(zhì)可分成八個(gè)種類脂肪?；?、甘油脂、甘油磷脂、鞘脂、糖脂、聚酮(由酮?；鶃唵挝豢s合產(chǎn)生)、固醇脂質(zhì)和異戊烯醇脂質(zhì)(由異戊二烯亞單位縮合產(chǎn)生)。盡管術(shù)語脂質(zhì)有時(shí)用作脂肪的同義詞，但脂肪為稱為甘油三酯的脂質(zhì)亞組。脂質(zhì)也涵蓋諸如脂肪酸及其衍生物(包括甘油三酯、甘油二酯和甘油單酯及磷脂)、以及其它含固醇代謝物(諸如膽固醇)的分子。磷脂為一類脂質(zhì)且為所有細(xì)胞膜的主要組分，因?yàn)槠淇尚纬芍|(zhì)雙層。大多數(shù)磷脂含有甘油二酯、磷酸基團(tuán)和簡(jiǎn)單有機(jī)分子(諸如膽堿)；這個(gè)規(guī)則的一個(gè)例外為鞘磷脂，其由鞘氨醇而非甘油產(chǎn)生。鞘脂為一類由脂族氨基醇鞘氨醇產(chǎn)生的脂質(zhì)。長(zhǎng)鏈堿(有時(shí)簡(jiǎn)稱為類鞘氨醇?jí)A)為酵母與哺乳動(dòng)物兩者中重新鞘脂合成的第一非短暫產(chǎn)物。這些化合物，具體地稱為植物 鞘氨醇和二氫鞘氨醇(dihydrosphingosine)(也稱為二氫鞘氨醇(sphinganine),但此術(shù)語較不常見)，主要為C18化合物，同時(shí)有些較低水平的C20堿。神經(jīng)酰胺和糖鞘脂為這些化合物的N-?；苌?。鞘氨醇骨架為O-連接于(通常)帶電荷的頭基(head group),諸如乙醇胺、絲氨酸或膽堿。骨架也為酰胺-連接于?；T如脂肪酸。I-磷酸鞘氨醇(縮寫為SlP)為一種380道爾頓的磷脂，分子式為C18H38N05P。SlP的同義詞為D-赤-鞘氨醇-I-磷酸酯，4-十八烯-1，3- 二醇，2-氨基 _，1_(磷酸二 氫酯)，(2S, 3R, 4E)-，(2S, 3R, 4E) -2-氨基-3-輕基十八-4-烯-I-基憐酸二氫酯，4-十八烯-I, 3- 二醇，2-氨基 _，I-(磷酸二氫酯)，(R- (R*，S*_ (E)))-，4-十八烯-I, 3- 二醇，2-氨基 _，I-(磷酸二氫酯)，[R- [R*，S*_ (E)]]-，I-磷酸鞘-4-氨醇，I-磷酸C18-鞘氨醇，鞘氨醇，D-赤-I-磷酸酯，I-磷酸D-赤-二氫鞘氨醇，(2S, 3R, E) _2_氨基_3_羥基十八_4_烯基磷酸二氫酯，(2S, 3R, 4E) _2_ 氨基 _4_ 十八烯-I, 3_ 二醇 I-(磷酸二氫酯)，(2S, 3R, 4E) ~2~按基-3-輕基十八-4-稀_1_基憐酸氧酷，(E) - (IS, 2R) ~2~輕基_1-勝酸氧基甲基_十七_(dá)3_稀基_按。本發(fā)明的SlP結(jié)合核酸分子可用在本文中也稱為盒(Box)的核苷酸鏈段來表征。不同類型的SlP結(jié)合核酸包含不同核苷酸鏈段。一般而言，本發(fā)明的SlP結(jié)合核酸分子在其5’末端和3’末端包含末端核苷酸鏈段第一末端核苷酸鏈段和第二末端核苷酸鏈段。第一末端核苷酸鏈段和第二末端核苷酸鏈段可彼此雜交，借此在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)。然而，在生理和/或非生理?xiàng)l件下，所述雜交并非必定在分子中實(shí)現(xiàn)。SlP結(jié)合核酸的三個(gè)核苷酸鏈段-第一末端核苷酸鏈段、中心核苷酸鏈段和第二末端核苷酸鏈段-在5’ 一 3’方向上彼此按以下進(jìn)行排列第一末端核苷酸鏈段-中心核苷酸鏈段-第二末端核苷酸鏈段。然而，或者，在5’ 一3’方向上彼此排列第二末端核苷酸鏈段、中心核苷酸鏈段和末端第一核苷酸鏈段。不同SlP結(jié)合核酸分子之間的確定盒或鏈段的序列差異影響對(duì)SlP的結(jié)合親和力?；趯?duì)本發(fā)明的不同SlP結(jié)合核酸分子的結(jié)合分析，中心鏈段及其核苷酸序列個(gè)別地且更優(yōu)選地以其整體方式為結(jié)合人SlP所必需。在本發(fā)明內(nèi)的是根據(jù)本發(fā)明的核酸分子或其鏈段或其任何部分原則上可彼此雜交。在所述雜交后，形成雙鏈結(jié)構(gòu)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解所述雜交可能或可能不發(fā)生，特別在體外和/或體內(nèi)條件下。此外，在所述雜交的情況下，情況并不必定是雜交歷經(jīng)兩個(gè)鏈段的至少基于堿基配對(duì)的規(guī)則，原則上可發(fā)生所述雜交及因此雙鏈結(jié)構(gòu)的形成所處的整個(gè)長(zhǎng)度而發(fā)生。如本文中優(yōu)選所用，雙鏈結(jié)構(gòu)為由兩個(gè)或更多個(gè)單獨(dú)鏈或單一鏈的兩個(gè)在空間上分開的鏈段形成的分子或結(jié)構(gòu)的一部分，其中存在至少一個(gè)、優(yōu)選兩個(gè)或更多個(gè)優(yōu)選根據(jù)沃森-克里克(Watson-Crick)堿基配對(duì)規(guī)則進(jìn)行堿基配對(duì)的堿基對(duì)。本領(lǐng)域技術(shù)人·員也應(yīng)了解諸如Hoogsten堿基配對(duì)的其它堿基配對(duì)可存在于所述雙鏈結(jié)構(gòu)中或形成所述雙鏈結(jié)構(gòu)。在一優(yōu)選實(shí)施方案中，如本文所用的術(shù)語排列意謂本文關(guān)于本文公開的核酸分子所述的結(jié)構(gòu)或功能特征或組分的次序或順序。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解根據(jù)本發(fā)明的核酸分子能夠使本發(fā)明的分子結(jié)合S1P。在不希望受任何理論束縛下，本發(fā)明者假定SlP結(jié)合由個(gè)別核酸分子的三維結(jié)構(gòu)特性或組分的組合所致，所述特性或組分由形成所述特性或組分的核苷酸序列的定向和折疊樣式所產(chǎn)生，其中優(yōu)選地，所述特性或組分為SlP結(jié)合核酸分子的第一末端核苷酸鏈段、中心核苷酸鏈段和第二末端核苷酸鏈段。明顯的是個(gè)別特性或組分可因此由各種不同個(gè)別序列形成，所述序列的變化程度可視所述組分或特性必須形成的三維結(jié)構(gòu)而變化。核酸分子的總體結(jié)合特征分別由各種組分和特性的相互影響所致，所述相互影響最終導(dǎo)致核酸分子與其靶標(biāo)(即SlP)的相互作用且更具體地核酸分子與其靶標(biāo)的結(jié)合。此外，在不希望受任何理論束縛下，為本發(fā)明的SlP結(jié)合核酸分子所特有的中心鏈段似乎對(duì)于介導(dǎo)和/或建立所要求的核酸與SlP的結(jié)合而言為重要的。實(shí)質(zhì)上，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子適于檢測(cè)S1P。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解根據(jù)本發(fā)明的核酸分子為活性由SlP介導(dǎo)的拮抗劑。由于這個(gè)原因，所以根據(jù)本發(fā)明的核酸分子適于分別治療和預(yù)防與任一 SlP相關(guān)或由任一 SlP引起的任何疾病。科學(xué)推理可取自確定SlP分別涉及多種疾病和病狀或與多種疾病和病狀相關(guān)，且以引用的方式并入本文的先前技術(shù)。根據(jù)本發(fā)明的核酸分子也應(yīng)包含實(shí)質(zhì)上與特定序列，且優(yōu)選本文公開的根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的特定序列同源的核酸分子。術(shù)語實(shí)質(zhì)上同源應(yīng)理解成同源性為至少75%、優(yōu)選85%、更優(yōu)選90%且最優(yōu)選超過95%、96%、97%、98%或99%。相對(duì)于根據(jù)本發(fā)明的參照核苷酸序列或參照核酸分子，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子中存在的同源核苷酸的實(shí)際百分比將取決于核酸分子中存在的核苷酸總數(shù)。修飾百分比可基于核酸分子中存在的核苷酸總數(shù)。優(yōu)選地，本發(fā)明的核酸分子的同源核苷酸選自包含核糖核苷酸和2’ -脫氧核糖核苷酸的組。同源性可如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知加以確定。更具體地，序列比較算法接著基于指定程序參數(shù)計(jì)算測(cè)試序列相對(duì)于參照序列的序列一致性百分比。測(cè)試序列優(yōu)選為據(jù)稱其與另一核酸分子同源或?qū)⒈粶y(cè)試其是否與另一核酸分子同源，且如果同源的話，同源程度有多少的序列或核酸分子，其中所述另一核酸分子也稱為參照序列。在一實(shí)施方案中，參照序列為如本文所述的核酸分子、更優(yōu)選具有根據(jù)任何SEQ. ID. No 12、18、36、41和42的序列的核酸分子。可例如通過Smith和Waterman的局部同源性算法(Smith和Waterman, 1981)、通過Needleman和Wunsch的同源性比對(duì)算法(Needleman和Wunsch, 1970)、通過Pearson和Lipman的搜尋類似性方法(Pearson和Lipman, 1988)、通過這些算法的電腦化執(zhí)行(Wisconsin Genetics 軟件包(Genetics Computer Group, 575ScienceDr. ,Madison, Wi s.)中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)或通過目視檢查進(jìn)行序列的最佳對(duì)準(zhǔn)以實(shí)現(xiàn)比較。適于確定序列一致性百分比的算法的一個(gè)實(shí)例為用于基本局部比對(duì)搜尋工具(下文稱為“BLAST”)中的算法，參見例如Altschul等(Altschul等1990和Altschul等，1997)。用于進(jìn)行BLAST分析的軟件可通過國(guó)家生物技術(shù)信息中心(下文稱為“NCBI”) 公開獲得。用于使用可自NCBI獲得的軟件(例如BLASTN(用于核苷酸序列)和BLASTP (用于氨基酸序列))確定序列一致性的缺省參數(shù)描述于McGinnis等(McGinnis等，2004)中。根據(jù)本發(fā)明的核酸分子也應(yīng)包含含有一個(gè)或若干個(gè)本文公開的核酸序列或其一部分的那些核酸分子，優(yōu)選就核酸分子或所述部分涉及于結(jié)合人SlP中而言。在一實(shí)施方案中，所述核酸分子為本文所述的核酸分子之一或其衍生物和/或代謝物，其中相較于本文所述的核酸分子，所述衍生物和/或代謝物優(yōu)選為截短核酸分子。截短可涉及如本文公開的核酸分子的任一末端或兩個(gè)末端。此外，截短可涉及核酸分子的內(nèi)部核苷酸序列，即其可涉及分別5’末端核苷酸與3’末端核苷酸之間的核苷酸。此外,截短應(yīng)包含自本文公開的核酸分子的序列缺失少至單一核苷酸。截短也可涉及一個(gè)或一個(gè)以上本發(fā)明的核酸分子的鏈段，其中所述鏈段的長(zhǎng)度可少至一個(gè)核苷酸。根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的結(jié)合可由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)或通過使用或采用如本文所述，優(yōu)選如本文在實(shí)施例部分中所述的方法加以測(cè)定。根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可為D-核酸分子(D-核酸分子)或L-核酸(L-核酸分子)。優(yōu)選地，核酸為L(zhǎng)-核酸分子。此外,有可能的是核酸分子的一部分或若干部分以D-核酸形式存在或核酸的至少一部分或若干部分為L(zhǎng)-核酸。術(shù)語核酸分子的“部分”應(yīng)意謂少至一個(gè)核苷酸。所述核酸分子在本文中通常分別稱為D-核酸和L-核酸。因此，在一特別優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子由L-核苷酸組成且包含至少一個(gè)D-核苷酸。所述D-核苷酸優(yōu)選連接于不同于界定根據(jù)本發(fā)明的核酸的鏈段的部分，優(yōu)選為其涉及與核酸分子的其它部分相互作用的那些部分。優(yōu)選地，所述D-核苷酸分別在任何鏈段的末端和根據(jù)本發(fā)明的任何核酸分子的末端連接。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述D-核苷酸可充當(dāng)優(yōu)選使修飾或修飾基團(tuán)(諸如PEG和HES)連接于根據(jù)本發(fā)明的核酸的間隔子或連接子。本發(fā)明的一實(shí)施方案也為本文所述的各個(gè)及任何核酸分子就其核酸序列而言以其整體方式限于特定核苷酸序列。換句話說，在所述實(shí)施方案中，術(shù)語“包含”應(yīng)以含有或由…組成的含義解釋。在本發(fā)明內(nèi)的還有根據(jù)本發(fā)明的核酸分子為較長(zhǎng)核酸分子的一部分，其中這個(gè)較長(zhǎng)核酸包含若干部分，其中至少一個(gè)所述部分為根據(jù)本發(fā)明的核酸分子或其一部分。這些較長(zhǎng)核酸分子的其它部分可為一個(gè)或若干個(gè)D-核酸或一個(gè)或若干個(gè)L-核酸。任何組合可與本發(fā)明關(guān)聯(lián)使用。較長(zhǎng)核酸的這些其它部分單獨(dú)或集合、以其整體形式或以特定組合形式可展現(xiàn)不同于結(jié)合，優(yōu)選不同于結(jié)合SlP的功能。一個(gè)可能的功能在于允許與一個(gè)或其它分子相互作用(其中所述一個(gè)或其它分子優(yōu)選不同于SlP)諸如以實(shí)現(xiàn)固定、交聯(lián)、檢測(cè)或擴(kuò)增。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子包含呈個(gè)別或組合部分形式的本發(fā)明的若干核酸分子。包含本發(fā)明的若干核酸分子的所述核酸分子也由術(shù)語較長(zhǎng)核酸分子涵蓋。如本文所用的L-核酸或L-核酸分子為由L-核苷酸組成，優(yōu)選完全由L-核苷酸組成的核酸。如本文所用的D-核酸或D-核酸分子為由D-核苷酸組成，優(yōu)選完全由D-核苷酸組成的核酸。此外，如果不相反指示，那么任何核苷酸序列在本文中都以5’ 一 3’方向闡述。如本文優(yōu)選所用，核苷酸的任何位置都是相對(duì)于序列、鏈段或亞鏈段的5’末端確定或提及。因此，第二核苷酸為分別自序列、鏈段和亞鏈段的5’末端計(jì)數(shù)的第二核苷酸。此外，根據(jù)此規(guī)則，倒數(shù)第二核苷酸為分別自序列、鏈段和亞鏈段的3’末端計(jì)數(shù)的第二核苷酸。不管本發(fā)明的核酸分子是否由D-核苷酸、L-核苷酸或兩者的組合(其中所述組合為例如隨機(jī)組合或由至少一個(gè)L-核苷酸和至少一個(gè)D-核酸組成的確定鏈段序列)組成，核酸可由脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸或其組合組成。將根據(jù)本發(fā)明的核酸分子設(shè)計(jì)成有利于若干原因的L-核酸分子。L-核酸分子為天然存在的核酸分子的對(duì)映異構(gòu)體。然而，歸因于普遍存在核酸酶，D-核酸分子在水溶液中且特別在生物系統(tǒng)或生物樣品中不是很穩(wěn)定。天然存在的核酸酶，特別是來自動(dòng)物細(xì)胞的核酸酶不能降解L-核酸分子。由于這個(gè)原因，L-核酸分子在所述系統(tǒng)(包括動(dòng)物體和人體)中的生物半衰期顯著增加。歸因于對(duì)L-核酸缺乏可降解性，無核酸酶降解產(chǎn)物自所述L-核酸分子產(chǎn)生且因此未觀察到由此產(chǎn)生的副作用。這個(gè)方面限定事實(shí)上所有其它用于治療涉及SlP或由SlP介導(dǎo)的疾病和/或病癥的化合物的L-核酸分子。通過不同于沃森克里克堿基配對(duì)的機(jī)制特異性結(jié)合靶分子的L-核酸分子、或部分或完全由L-核苷酸組成的適體(特別是其中涉及于使適體結(jié)合于靶分子的那些適體部分)也稱為鏡像異構(gòu)體(Spiegelmer)。在本發(fā)明內(nèi)的還有不管本發(fā)明的本發(fā)明核酸分子是否以D-核酸、L-核酸或D, L-核酸形式存在或其是否為DNA或RNA，其可以單鏈或雙鏈核酸形式存在。通常，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子為單鏈核酸，其歸因于一級(jí)序列而展現(xiàn)確定二級(jí)結(jié)構(gòu)且因此也可形成三級(jí)結(jié)構(gòu)。然而，在彼此互補(bǔ)或部分互補(bǔ)的兩個(gè)鏈彼此雜交的意義上，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子也可為雙鏈。這個(gè)會(huì)賦予核酸分子穩(wěn)定性，如果核酸分子以天然存在的D型而非L型存在，那么此特別將為有利的。本發(fā)明的核酸分子可經(jīng)修飾。所述修飾可涉及核酸分子的單一核苷酸且在本領(lǐng)域中為熟知的。所述修飾的實(shí)例尤其描述于Venkatesan(2003) ；Kusser (2000)；Aurup(1994) ；Cummins (1995) ；Eaton(1995) ；Green(1995) ；Kawasaki(1993)；Lesnik(1993);和Miller (1993)中。所述修飾可為在組成核酸分子的個(gè)別核苷酸的2’位置處的H原子、F原子或0-CH3基團(tuán)或NH2-基團(tuán)。此外，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可包含至少一個(gè)LNA核苷酸。在一實(shí)施方案中,根據(jù)本發(fā)明的核酸分子由LNA核苷酸組成。本發(fā)明者驚人地發(fā)現(xiàn)相較于根據(jù)本發(fā)明的母SlP結(jié)合RNA核酸分子，即由不具有非化學(xué)修飾或取代的核糖核苷酸組成的本發(fā)明的核酸分子，在本發(fā)明的SlP結(jié)合RNA分子，即由L-核糖核苷酸組成的本發(fā)明的L-核酸分子中進(jìn)行所述非化學(xué)修飾或取代會(huì)導(dǎo)致本發(fā)明的SlP結(jié)合RNA分子的結(jié)合親和力提高。非化學(xué)修飾或取代優(yōu)選選自由一個(gè)或多個(gè)L-脫氧核糖核苷酸置換根據(jù)本發(fā)明的RNA核酸分子(即由核糖核苷酸組成的本發(fā)明的核酸分子)中的一個(gè)或多個(gè)L-核糖核苷酸的組。在一優(yōu)選實(shí)施方案中，SlP結(jié)合核酸一僅由核糖核苷酸組成的RNA鏡像異構(gòu)體L-S1P-215-F9-002—的結(jié)合親和力通過由至多五個(gè)脫氧核糖核苷酸置換至多五個(gè)核糖核苷酸，優(yōu)選通過由四個(gè)脫氧核糖核苷酸置換四個(gè)核糖核苷酸得以提高。在一實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可為多分體核酸。如本文所用的多分 體核酸分子為由至少兩個(gè)核酸鏈組成的核酸。這至少兩個(gè)核酸鏈形成功能單元，其中所述功能單元為靶分子的配體。至少兩個(gè)核酸鏈可通過裂解核酸以產(chǎn)生兩個(gè)鏈或通過合成對(duì)應(yīng)于本發(fā)明(即)總體核酸分子的第一部分的一個(gè)核酸和對(duì)應(yīng)于總體核酸分子的第二部分的另一核酸而由任何本發(fā)明核酸分子產(chǎn)生。應(yīng)了解裂解與合成兩者均可應(yīng)用于產(chǎn)生存在如上所示例的兩個(gè)以上鏈的多分體核酸。換句話說，至少兩個(gè)核酸鏈通常不同于彼此互補(bǔ)和雜交的兩個(gè)鏈，但在各種核酸部分之間可存在某一程度的互補(bǔ)性。最后，在本發(fā)明內(nèi)的還有根據(jù)本發(fā)明的核酸的完全閉合(即環(huán)狀)結(jié)構(gòu)被實(shí)現(xiàn)，即根據(jù)本發(fā)明的核酸優(yōu)選通過共價(jià)鍵聯(lián)而閉合，其中更優(yōu)選地，所述共價(jià)鍵聯(lián)在如本文公開的核酸序列的5’末端與3’末端之間進(jìn)行。本發(fā)明者已發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的核酸展現(xiàn)極有利的Kd值范圍。一種測(cè)定根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的結(jié)合常數(shù)的可能性為使用如實(shí)施例4和6中所述的表面等離子體共振，其確認(rèn)根據(jù)本發(fā)明的核酸展現(xiàn)有利Kd值范圍的以上研究結(jié)果。用以表示個(gè)別核酸分子與靶標(biāo)(在本情況下為SlP)之間的結(jié)合強(qiáng)度的一個(gè)適當(dāng)量度為所謂Kd值，其本身以及其測(cè)定方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。根據(jù)本發(fā)明的核酸的特征為具有某一 Kd值。優(yōu)選地，由根據(jù)本發(fā)明的核酸所示的Kd值小于I μ M。約I μΜ的Kd值據(jù)稱為核酸非特異性結(jié)合靶標(biāo)所特有。如本領(lǐng)域人員所應(yīng)了解，一組化合物(諸如根據(jù)本發(fā)明的核酸)的Kd值在某一范圍內(nèi)。以上提及的約ΙμΜ的Kd為Kd值的一優(yōu)選上限。靶結(jié)合核酸的Kd的優(yōu)選下限可為約10皮摩爾或10皮摩爾以上。在本發(fā)明內(nèi)的是結(jié)合SlP的個(gè)別核酸的Kd值優(yōu)選在這個(gè)范圍內(nèi)。優(yōu)選范圍可通過選擇這個(gè)范圍內(nèi)的任何第一數(shù)值和這個(gè)范圍內(nèi)的任何第二數(shù)值來確定。優(yōu)選上限值為250ηΜ和 ΙΟΟηΜ，優(yōu)選下限值為 50nM、10nM、lnM、IOOpM 和 ΙΟρΜ。根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可具有任何長(zhǎng)度，條件是其仍然能夠結(jié)合靶分子。本領(lǐng)域中應(yīng)了解根據(jù)本發(fā)明的核酸存在優(yōu)選長(zhǎng)度。通常，長(zhǎng)度介于15個(gè)核苷酸與120個(gè)核苷酸之間。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解介于15與120之間的任何整數(shù)都為根據(jù)本發(fā)明的核酸的可能長(zhǎng)度。根據(jù)本發(fā)明的核酸的更優(yōu)選長(zhǎng)度范圍為具有約20至100個(gè)核苷酸、約20至80個(gè)核苷酸、約20至60個(gè)核苷酸、約20至50個(gè)核苷酸和約30至50個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度。在本發(fā)明內(nèi)的是本文公開的核酸包含優(yōu)選為高分子量部分和/或優(yōu)選允許改進(jìn)核酸的就尤其在動(dòng)物體，優(yōu)選人體中的保留時(shí)間而言的特征的部分。所述修飾的特別優(yōu)選實(shí)施方案為根據(jù)本發(fā)明的核酸的PEG化和HES化。如本文所用，PEG代表聚(乙二醇)且HES代表羥乙基淀粉。如本文優(yōu)選所用的PEG化為修飾根據(jù)本發(fā)明的核酸，其中所述修飾由連接于根據(jù)本發(fā)明的核酸的PEG部分組成。如本文優(yōu)選所用的HES化為修飾根據(jù)本發(fā)明的核酸，其中所述修飾由連接于根據(jù)本發(fā)明的核酸的HES部分組成。諸如直鏈聚(乙二醇)、支鏈聚(乙二醇)、羥乙基淀粉、肽、蛋白質(zhì)、多糖、固醇、聚氧化丙烯、聚氧基酰胺化物、聚(2-羥乙基)-L-谷氨酰胺和聚乙二醇的修飾以及使用所述修飾來修飾核酸的方法描述于歐洲專利申請(qǐng)EP I 306 382中，其公開內(nèi)容由此以引用的方式整體并入本文。在PEG為所述高分子量部分的情況下，分子量?jī)?yōu)選為約20，OOODa至約120，OOODa,更優(yōu)選約30，OOODa至約80，OOODa且最優(yōu)選約40，OOODa0在HES為所述高分子量部分的情況下，分子量?jī)?yōu)選為約50kDa至約lOOOkDa、更優(yōu)選約IOOkDa至約700kDa且最優(yōu)選200kDa至500kDa。HES展現(xiàn)O. I至I. 5、更優(yōu)選I至I. 5的摩爾取代度且展現(xiàn)表示為C2/C6比率約O. I至15、優(yōu)選約3至10的取代樣品。HES修飾的方法例如描述于德國(guó)專利申請(qǐng)DE I2004 006 249. 8中，其公開內(nèi)容由此以引用的方式整體并入本文。 修飾在原則上可在本發(fā)明的核酸分子的任何位置處對(duì)其進(jìn)行。優(yōu)選地，對(duì)核酸分子的5’末端核苷酸、3’末端核苷酸和/或介于5’核苷酸與3’核苷酸之間的任何核苷酸進(jìn)行所述修飾。修飾且優(yōu)選PEG和/或HES部分可直接或通過連接子連接于本發(fā)明的核酸分子。在本發(fā)明內(nèi)的還有根據(jù)本發(fā)明的核酸分子包含一個(gè)或多個(gè)修飾，優(yōu)選一個(gè)或多個(gè)PEG和/或HES部分。在一實(shí)施方案中，個(gè)別連接子分子使一個(gè)以上PEG部分或HES部分連接于根據(jù)本發(fā)明的核酸分子。與本發(fā)明關(guān)聯(lián)使用的連接子本身可為直鏈或支鏈。這種連接子為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知且進(jìn)一步描述于專利申請(qǐng)W02005074993和W02003035665中。在一優(yōu)選實(shí)施方案中，連接子為生物可降解連接子。歸因于修飾自根據(jù)本發(fā)明的核酸釋放，生物可降解連接子允許改進(jìn)根據(jù)本發(fā)明的核酸的就尤其在動(dòng)物體中，優(yōu)選在人體中的保留時(shí)間而言的特征。生物可降解連接子的使用可允許對(duì)根據(jù)本發(fā)明的核酸的保留時(shí)間進(jìn)行較好控制。所述生物可降解連接子的一優(yōu)選實(shí)施方案為如但不限于以下中所述的生物可降解連接子國(guó)際專利申請(qǐng)W02006/052790、W02008/034122、W02004/092191和W02005/099768，其中在國(guó)際專利申請(qǐng)W02004/092191和W02005/099768中，連接子為由一或兩個(gè)如本文所述的修飾、核酸分子和兩者之間的生物可降解連接子組成的聚合寡核苷酸前藥的一部分。在本發(fā)明內(nèi)的是修飾或修飾基團(tuán)為生物可降解修飾，其中所述生物可降解修飾可直接或通過連接子連接于本發(fā)明的核酸分子。歸因于修飾自根據(jù)本發(fā)明的核酸釋放，生物可降解修飾允許改進(jìn)根據(jù)本發(fā)明的核酸的就尤其在動(dòng)物體中，優(yōu)選在人體中的保留時(shí)間而言的特征。生物可降解修飾的使用可允許對(duì)根據(jù)本發(fā)明的核酸的保留時(shí)間進(jìn)行較好控制。如但不限于國(guó)際專利申請(qǐng)W02002/065963、W02003/070823、W02004/113394和W02000/41647 (在W02000/41647中優(yōu)選第18頁第4至24行)中所述，所述生物可降解修飾的一優(yōu)選實(shí)施方案為生物可降解的。除如上文所述的修飾之外，其它修飾可用于改進(jìn)根據(jù)本發(fā)明的核酸的特征，其中所述修飾選自蛋白質(zhì)、脂質(zhì)(諸如膽固醇)和糖鏈(諸如淀粉酶、葡聚糖等)的組。
在不希望受任何理論束縛下，似乎通過用高分子量部分，諸如聚合物且更特別本文公開的優(yōu)選生理學(xué)上可接受的聚合物修飾根據(jù)本發(fā)明的核酸，排泄動(dòng)力學(xué)得以改變。更特別地，似乎歸因于所述經(jīng)修飾本發(fā)明核酸的分子量增加及歸因于核酸特別在呈L型時(shí)不經(jīng)受代謝，自動(dòng)物體，優(yōu)選自哺乳動(dòng)物體且更優(yōu)選自人體的排泄降低。因?yàn)榕判雇ǔＭㄟ^腎進(jìn)行，所以本發(fā)明者假定相較于不具有這種導(dǎo)致在體內(nèi)的保留時(shí)間增加的高分子量修飾的核酸，如此修飾的核酸的腎小球?yàn)V過率顯著降低。與此關(guān)聯(lián)，特別值得注意的是不管所述高分子量修飾如何，根據(jù)本發(fā)明的核酸的特異性不以不利方式受到影響。就此而言，根據(jù)本發(fā)明的核酸具有驚人的特征-其通常不能自藥學(xué)活性的化合物預(yù)期-以致提供持續(xù)釋放的醫(yī)藥制劑并不必定為提供持續(xù)釋放所需。更確切而言，呈其經(jīng)修飾形式的包含高分子量部分的根據(jù)本發(fā)明的核酸可本身已用作持續(xù)釋放制劑。就此而言，如本文公開的核酸分子的修飾和如此修飾的核酸分子及包含所述核酸分子的任何組合物可提供不同，優(yōu)選受控制的藥物動(dòng)力學(xué)及其生物分布。這個(gè)也包括在循環(huán)中的保留時(shí)間和向組織的分布。所述修飾進(jìn)一步描述于專利申請(qǐng)W02003035665中。然而，在本發(fā)明內(nèi)的還有本文公開的核酸不包含任何修飾且特別是無高分子量修飾，諸如PEG化或HES化。當(dāng)核酸顯示向體內(nèi)任何靶器官或組織的優(yōu)先分布時(shí)或當(dāng)需要核酸在施用之后自身體快速清除時(shí)，所述實(shí)施方案是特別優(yōu)選的。如本文公開的具有向體內(nèi)任何靶器官或組織的優(yōu)先分布概況的核酸將允許在靶組織中建立有效局部濃度同時(shí)保持 核酸的全身濃度較低。這個(gè)將允許使用不僅就經(jīng)濟(jì)觀點(diǎn)來看有益，而且使其它組織向核酸劑的不必要暴露降低，由此降低潛在副作用風(fēng)險(xiǎn)的低劑量。在使用各自根據(jù)本發(fā)明的核酸或包含所述核酸的藥劑的體內(nèi)成像或特定治療給藥要求的情況下，可能需要如本文公開的核酸在施用之后自身體快速清除。在本文中也稱為根據(jù)本發(fā)明的核酸和/或根據(jù)本發(fā)明的拮抗劑的本發(fā)明核酸可用于產(chǎn)生或制造藥劑。所述根據(jù)本發(fā)明的藥劑或藥物組合物含有至少一種本發(fā)明核酸、任選以及其它藥學(xué)活性的化合物，其中本發(fā)明核酸優(yōu)選本身充當(dāng)藥學(xué)活性的化合物。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述藥劑包含至少藥學(xué)上可接受的載體。所述載體可為例如水、緩沖劑、PBS、葡萄糖溶液(優(yōu)選5%葡萄糖鹽平衡溶液)、淀粉、糖、明膠或任何其它可接受的載體物質(zhì)。所述載體通常為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解本發(fā)明的藥劑的或與之相關(guān)的任何實(shí)施方案、用途和方面也可適用于本發(fā)明的藥物組合物且反之亦然。根據(jù)本發(fā)明或根據(jù)本發(fā)明制備的核酸、藥物組合物和藥劑所治療和/或預(yù)防的適應(yīng)癥、疾病和病癥由以相應(yīng)致病機(jī)制直接或間接涉及SlP所致。本發(fā)明提供一種通過鑒定和使用SlP結(jié)合核酸來中和SlP的。因?yàn)楦鶕?jù)本發(fā)明的核酸與人和動(dòng)物SlP相互作用，所以預(yù)期熟練技術(shù)人員了解本發(fā)明的SlP結(jié)合核酸可用于治療、預(yù)防和/或診斷本文所述的任何人和動(dòng)物疾病。與此關(guān)聯(lián)，應(yīng)了解本發(fā)明的核酸可用于治療和預(yù)防本文所述的疾病、病癥或病狀，不管構(gòu)成所述疾病、病癥或病狀的基礎(chǔ)的作用模式如何。在下文中且在不希望受任何理論束縛下，提供結(jié)合各種疾病、病癥和病狀使用根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的推理，由此致使對(duì)根據(jù)本發(fā)明的核酸分子所要求的治療、預(yù)防和診斷適用性似乎有理。為避免任何不必要的重述，應(yīng)了解由于涉及如與此關(guān)聯(lián)所概述的SlP及其受體SlPi、SlP2、SlP3、SlP4和SlP5，所述相互作用可由根據(jù)本發(fā)明的核酸分子闡明以便實(shí)現(xiàn)所要求的治療、預(yù)防和診斷作用。此外，應(yīng)了解患者的疾病、病癥和病狀的特性及與此關(guān)聯(lián)所述的治療方案的任何詳情可服從本申請(qǐng)的優(yōu)選實(shí)施方案。根據(jù)本發(fā)明或根據(jù)本發(fā)明制備的核酸分子、藥物組合物和藥劑所治療和/或預(yù)防的適應(yīng)癥、疾病和病癥由以相應(yīng)致病機(jī)制直接或間接涉及SlP所致。在特征至少部分為一個(gè)或多個(gè)病理學(xué)過程受SlP調(diào)控的疾病和病狀(諸如過度增殖、異常新血管化、血管生成、纖維發(fā)生、纖維化、結(jié)疤、異常細(xì)胞遷移、異常血管完整性、炎癥和自體免疫性反應(yīng))中，中和SlP可能有益。本文提供的分類是為了描述方便且不限制本發(fā)明。SlP通過刺激細(xì)胞增殖和存活來促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。因此，預(yù)期降低SlP的有效體內(nèi)濃度會(huì)有益于治療或預(yù)防過度增殖病癥。過度增殖病癥定義為與不受控制的細(xì)胞增殖相關(guān)的疾病和/或病癥和/或患病狀況。SlP相關(guān)的過度增殖病癥包括增生、瘤形成、與內(nèi)皮細(xì)胞增殖相關(guān)的病癥和與成纖維細(xì)胞增殖相關(guān)的病癥。在大多數(shù)情況下，瘤形成將為癌癥。與內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)的過度增殖病癥可導(dǎo)致血管生成疾病。所述疾病和病狀的實(shí)例為由實(shí)體腫瘤或血液腫瘤引起的癌癥、血管瘤、子宮內(nèi)膜異位癥、肥胖癥、年齡相關(guān)的黃斑變 性和各種視網(wǎng)膜病變、以及由于動(dòng)脈粥樣硬化的治療中的支架術(shù)(stenting)導(dǎo)致再狹窄的內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞增殖。大量日益增長(zhǎng)的證據(jù)暗示SlP為一種高度強(qiáng)力促血管生成劑。SlP刺激人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的趨化運(yùn)動(dòng)性且誘導(dǎo)多細(xì)胞結(jié)構(gòu)的分化[Liu等，J Clin Invest. 2000106:951-961]并促進(jìn)EC前體遷移至新血管化部位[Annabi, Exp Hematol. 2003年7月；31 (7):640-9]。在一項(xiàng)用鼠類抗SlP抗體進(jìn)行的新近研究中，顯示在不同體外測(cè)定中，用抗體中和SlP會(huì)抑制細(xì)胞保護(hù)作用和血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移。在體內(nèi)研究中，相同抗體在基膜膠塞測(cè)定中抑制小鼠中VEGF誘導(dǎo)的血管生成以及促血管生成細(xì)胞因子(諸如VEGF、bFGF、IL-6和IL-8)自腫瘤細(xì)胞釋放。在攜帶人癌細(xì)胞的異種移植小鼠中，用鼠類抗SlP抗體的治療顯著減緩腫瘤進(jìn)展[Visentin，Cancer Cell. 2006年3月；9 (3) : 225-38]。因此，在病理病狀，包括但不限于癌癥和與視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜新血管化相關(guān)的眼病(Caballero，ExpEye Res 2009, 88:367-377 ；Skoura, J Clin Invest 2007,117:2506-2516 ；Xie, J CellPhysiol 2009, 218:192-198)(諸如年齡相關(guān)的黃斑變性)中的促血管生成活性的治療中，直接結(jié)合且中和SlP的藥劑適用于對(duì)抗SlP介導(dǎo)的效應(yīng)。涉及成纖維細(xì)胞的過度增殖病癥包括但不限于結(jié)疤過度(例如纖維化)的病癥，諸如年齡相關(guān)的黃斑變性[Caballero, Exp Eye Res. 2009年3月;88 (3) : 367-77]、與心肌梗塞相關(guān)的心臟重塑和衰竭[Takuwa Cardiovasc Res. 2010年2月I日；85 (3) : 484-93]、硬皮病(scleroderma) [Bu, Arthritis Rheum. 2010 年 7 月;62 (7) : 2117-26]、囊性纖維化[Uhlig1Am J Respir Crit Care Med. 2008 年 12 月 I 日；178 (11) : 1100-14]、和過度傷口愈合，諸如通常由于手術(shù)或損傷、癜痕瘤和類纖維腫瘤及支架術(shù)而發(fā)生。SlP活化成纖維細(xì)胞遷移、增殖且刺激其產(chǎn)生膠原蛋白(collagen)。因此，在細(xì)胞損傷和/或炎癥后，由受損細(xì)胞局部產(chǎn)生的SlP可導(dǎo)致異常傷口愈合、纖維發(fā)生和纖維化。因此，在與成纖維細(xì)胞的過度活性或數(shù)目相關(guān)的疾病和病狀，包括但不限于眼病(諸如年齡相關(guān)的黃斑變性)、心血管疾病和硬皮病的治療中，直接結(jié)合且中和SlP的藥劑適用于對(duì)抗SlP介導(dǎo)的效應(yīng)。SlP調(diào)控淋巴細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性、粘著和遷移。認(rèn)為淋巴細(xì)胞自淋巴組織的溢出遵循SlPn梯度，其中組織中的SlP濃度較低且循環(huán)中的SlP濃度較高。這個(gè)理解由顯示抑制SlP降解酶SlP裂解酶會(huì)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞減少的研究支持[Schwab, Science2005，309 (5741) : 1735-9]。藥物FTY720 (芬戈莫德)通過作用于SlP受體而導(dǎo)致淋巴細(xì)胞減少且已成功用于移植和自體免疫性疾病中(Japtok和Kleuser, Curr OpinInvestig Drugs. 2009年11月；10 (11) : 1183-94)。除淋巴細(xì)胞之外，SlP也通過這些調(diào)控新血管化和血管滲透性的手段來刺激其它免疫細(xì)胞(諸如嗜中性白細(xì)胞、肥大細(xì)胞和樹突細(xì)胞)以及成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、周細(xì)胞和其它細(xì)胞類型的遷移、增殖和存活[Annabi，Exp Hematol. 2003 年 7 月；31(7):640-9 ；Paik,Genes Dev.2004 年 10 月 IH ; 18(19) :2392-403 ；Chae, J Clin Invest 2004，114，1082-9]。因此，由諸如 SlP 結(jié)合核酸分子的中和劑降低特定靶脂質(zhì)(例如SlP)體內(nèi)有效血漿濃度可用于引導(dǎo)效應(yīng)T淋巴細(xì)胞離開炎癥部位，由此適用于治療疾病，包括但不限于自體免疫性疾病和具有炎性組分的眼病，諸如見于年齡相關(guān)的黃斑變性中的脈絡(luò)膜新血管化。SlP在內(nèi)皮和上皮屏障的調(diào)控中起重要作用[Marsolais和Rosen, Nat Rev Drug Discov, 2009年4月；8 (4) : 297-307]。血管內(nèi)皮細(xì)胞屏障使血管組分與小間隙分開。破環(huán)這些屏障會(huì)導(dǎo)致血管滲透性變高，從而導(dǎo)致炎癥及影響器官功能。SlP維持屏障的完整性。認(rèn)為這個(gè)主要由其與SlPl的相互作用介導(dǎo)[Singleton，F(xiàn)ASEBJ.2005 年 10 月；19(12):1646-56 ;Freistritzer 和 Riewald, Blood. 2005 年 4 月 15H ; 105 (8) :3178-84]，但也可能涉及其它S1PR。顯示拮抗SlPl會(huì)誘導(dǎo)血管泄漏[Sanna等，Nat Chem Biol. 2006年8月；2 (8) :434-41]且有證據(jù)表明SlPl與S1P2之間的平衡在SlP介導(dǎo)的血管滲透性調(diào)控中是重要的。在正常情況下，可能重要的是維持內(nèi)皮和上皮屏障的完整性且血管滲透性增加會(huì)造成急性肺損傷和敗血癥[Wang，MiCr0VasCRes.，2009年I月；77 (I) : 39-45.]。另一方面，可存在所述屏障的暫時(shí)破環(huán)為合乎需要或有益的疾病或病理學(xué)情形。在贅生疾病中，血管穩(wěn)定化對(duì)于新血管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移為重要的[Paik, Genes Dev. 2004 年 10 月 I 日;18 (19) : 2392-403]。用 siRNA 降低 SlPl 的表達(dá)會(huì)抑制腫瘤異種移植模型中的血管穩(wěn)定化，從而導(dǎo)致顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)[Chae，J ClinInvest 2004，114，1082-9]。功能性SlP受體拮抗劑FTY720已顯示會(huì)抑制鼠類黑素瘤模型中VEGF誘導(dǎo)的血管滲透性、腫瘤血管化和生長(zhǎng)[LaMontagne, Cancer Res. 2006年I月I日；66 (I) :221-31]。此外，短暫直接中和SlP在以下情況下可能有益其中單獨(dú)或與一種或多種其它治療藥物聯(lián)合破環(huán)內(nèi)皮或上皮屏障適用于治療病理學(xué)狀態(tài)，所述藥物的作用或?qū)Σ±韺W(xué)狀態(tài)的治療可由對(duì)屏障的所述破環(huán)增強(qiáng)。尚未顯示直接干擾SlP本身且因此阻斷所有細(xì)胞外SlP受體活化的藥劑對(duì)血管滲透性的影響。增加或降低血管滲透性仍為思考對(duì)象。兩者均可能適用于治療如上所示的疾病。歸因于生物活性脂質(zhì)涉及于各種病理學(xué)過程(包括過度增殖、新血管化、血管生成、異常纖維發(fā)生、炎癥和血管穩(wěn)定性)中，因此通過直接與中和劑(諸如SlP結(jié)合核酸分子)相互作用降低SlP的有效體內(nèi)濃度可適于治療其中SlP可導(dǎo)致或造成病狀的病理學(xué)病狀。所述疾病和病狀可為全身性的或定位于一個(gè)或多個(gè)特定身體系統(tǒng)、部分或器官?？捎盟龇椒ㄖ委煹募膊』虿“Y的類別包括但不限于癌癥、感染和炎癥、自體免疫性病癥、腦血管疾病、心血管疾病、眼病、結(jié)疤、通氣誘發(fā)的肺損傷、皮膚病、與過度纖維發(fā)生和纖維化相關(guān)的疾病或病癥、與病理性血管生成相關(guān)的疾病或病癥、與異常新血管化相關(guān)的疾病或病癥、與異常血管穩(wěn)定性相關(guān)的疾病或病癥、和與如下文中更詳細(xì)所述的移植相關(guān)的疾病或病癥。癌細(xì)胞常通過不斷突變和進(jìn)化，由此變得對(duì)細(xì)胞毒素或抗血管生成劑具有抗性而逃脫治療方案。癌細(xì)胞如何變得對(duì)治療具有抗性的一個(gè)重要機(jī)制為鞘氨醇激酶I (SphK I)的上調(diào)和反過來使SlP釋放入腫瘤微環(huán)境中[RaguzJr J Cancer 2008,99:387-3912008 ；Cuvillier, Curr Mol Pharmacol 2010,3:53-65]。SlP 介導(dǎo)的化學(xué)抗性的一個(gè)可能機(jī)制涉及SlP與低氧可誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子(HIF)之間的相互影響，其中癌細(xì)胞對(duì)低氧的反應(yīng)涉及SlP/SphK系統(tǒng)的上調(diào)[Ader, Cancer Res 2009，68:8635-8642]。總之，用諸如SlP結(jié)合核酸分子的SlP中和劑克服與SlP過度產(chǎn)生相關(guān)聯(lián)的藥物抗性可能為一種有希望的方法。受SlP調(diào)控的各種過程(諸如異常血管生成/新血管化、異常重塑、纖維化、結(jié)疤和炎癥)與眼病關(guān)聯(lián)發(fā)生[Eichler 等(2006), Curr Pharm Des,第 12 卷2645-60]。年齡相關(guān)的黃斑變性(AMD)為西方世界超過60歲患者的主要失明病因[Bylsma和 Guymer(2005)，Clin Exp Optom,第 88卷:322-34 ；Gryziewicz (2005), Adv Drug Deliv·Rev,第 57卷2092-8 JLiu和 Regillo (2004), Curr Opin Ophthalmol,第 15 卷221-6.]。盡管未完全了解AMD的確切病因，但各種SlP調(diào)控的過程(諸如脈絡(luò)膜新血管化(CNV)、視網(wǎng)膜下纖維化、水腫和炎癥)會(huì)有助于AMD的發(fā)病機(jī)制和AMD相關(guān)的視力損失[Tezel和Kaplan (2004), Trends MoI Med,第 10 卷417-20 ;及 Ambati 等(2003)，Surv Ophthalmol,第48卷257-93]，VEGF通過增加CNV和血管滲透性(此舉會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)視網(wǎng)膜內(nèi)和視網(wǎng)膜下水腫)而有助于AMD的發(fā)病機(jī)制。因此，當(dāng)前療法集中在通過玻璃體內(nèi)注射抗VEGF單克隆抗體來抑制VEGF。日益增長(zhǎng)的證據(jù)表明SlP在滲出性(即濕性)AMD相關(guān)的CNV、纖維化和炎癥中具有作用。SlP誘導(dǎo)上皮細(xì)胞募集至血管化部位并刺激早期血管結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生[Lee, Biochem Biophys Res Commun 1999，264:743-750]且其以 VEGF 非依賴性方式促進(jìn)在上皮細(xì)胞與壁細(xì)胞之間形成N-I丐粘著蛋白(cadherin)介導(dǎo)的接合[Paik, Genes Dev. 2004年10月I日;18(19) :2392-403]。此外，SlP通過交叉活化其它促血管生成因子(諸如bFGF和 VEGF)來支持新血管化[Igarashi, Proc Natl Acad Sci USA2003，100:10664-9]。SlP與促纖維化因子(諸如TGFbJDGF和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子)的相互影響和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞通過SlP誘導(dǎo)膠原蛋白表達(dá)強(qiáng)烈表明SlP在AMD相關(guān)的纖維發(fā)生中具有作用[Xin，JBiolChem 2004, 279:35255-35262 ；Hobson,Science 2001,291:1800-1803 ；Katsuma, FEBS Lett2005,579:2576-2582 ；Swaney, Exp Eye Res 2008,87:367-375]。此外，有累積的證據(jù)表明SlP介導(dǎo)的炎癥事件有助于AMD的發(fā)病機(jī)制。全身性消除巨噬細(xì)胞會(huì)減弱激光誘導(dǎo)的CNV[Sakurai, Invest Ophthalmol Vis Sci 2003，44:3578-3585]且中和抗 SlP 抗體會(huì)降低巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)[Xie, J Cell Physiol 2009, 218:192-198] 此外，已暗示SlP為C5a作用的一種主要下游介體[Vlasenko, J Tmmunol 2005,174:6456-6461],表明 C5a_SlP 軸可決定性地涉及于眼炎癥過程中，因?yàn)樗鲞^程例如在AMD期間發(fā)生。與這些數(shù)據(jù)一致，玻璃體內(nèi)注射中和性抗SlP抗體會(huì)阻斷在激光誘導(dǎo)的布魯赫氏膜(Bruch’s membrane)( 一種滲出性AMD模型)破環(huán)之后的CNV形成和視網(wǎng)膜下纖維化[Caballero, Exp Eye Res2009，88:367-377 ;0’Brien, J Lipid Res 2009，50:2245-2257]。此外，在單劑量 Ia 期臨床試驗(yàn)中，SlP中和抗體在一些患者中導(dǎo)致新血管系統(tǒng)退化，此為一種用抗VEGF療法在單劑量之后尚未觀察到的效應(yīng)[Sabbadini，Br J Pharmacol. 2011 年 3 月;162 (6) : 1225-38]?？傊?，有強(qiáng)力證據(jù)表明降低玻璃體內(nèi)SlP濃度的中和劑(諸如SlP結(jié)合核酸分子)將為一種治療滲出性AMD和與新血管化、纖維化和炎癥相關(guān)的其它眼病的有希望的方法。糖尿病性視網(wǎng)膜病變(DR)為糖尿病患者的一種常見并發(fā)癥。DR為一種缺血性視網(wǎng)膜病變，因此特征為視網(wǎng)膜血流受損害。DR的病理學(xué)涉及VEGF驅(qū)動(dòng)的視網(wǎng)膜新血管化，其可最終導(dǎo)致眼內(nèi)出血、牽拉性視網(wǎng)膜脫離和血管滲透性增加。SlP在新血管化、血管滲透性和纖維化中的作用已表明拮抗SlP可有益于治療DR。實(shí)際上，用SPHK的小分子拮抗劑抑制SlP形成會(huì)減弱大鼠鏈脲佐菌素(Streptozotocin)誘發(fā)的糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的VEGF誘導(dǎo)的血管化和視網(wǎng)膜血管泄漏的早期事件[Maines, Invest Ophthalmol VisSci 2006,47:5022-5031]。糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者視力損壞的一個(gè)主要病因?yàn)樘悄虿⌒渣S斑水腫(DME)的顯現(xiàn)。VEGF誘導(dǎo)的新血管化和血管泄漏廣泛涉及于DME顯現(xiàn)和進(jìn)展中[Aiello, Diabetes 1997, 46:1473-1480]。因此，抗VEGF抗體(雷珠單抗(ranibizumab)，諾適得(Lucentis))治療已在 DME 中成功[Massin1Diabetes Care. 2010，33 (11) : 2399-405]且新近已收到批準(zhǔn)。鑒于中和性抗SlP抗體對(duì)VEGF介導(dǎo)的新血管化和血管泄漏的抑制作用[LaMontagne, Cancer Res. 2006 年 I 月 I 日；66 (I) : 221-31 ;Visentin, Cancer Cell. 2006年3月；9(3) :225-38]，預(yù)期降低玻璃體內(nèi)和視網(wǎng)膜SlP濃度的中和劑(諸如SlP結(jié)合核酸分子)將為一種治療DME的有希望的方法。視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)脫離繼發(fā)于與新血管化、血管滲透性增加和纖維發(fā)生的刺激相關(guān)的眼病，諸如AMD和DR。在激光誘導(dǎo)的損傷后，SlP受RPE強(qiáng)烈上調(diào)[Caballero，ExpEye Res 2009,88:367-377]。證明拮抗SlP在RPE脫離中的有益作用的證據(jù)由單克隆抗S IP抗體松匹珠單抗(sonepcizumab)的I期臨床試驗(yàn)提供?；加须[性疾病的患者經(jīng)歷RPE脫離的消散，此為一種尚未對(duì)抗VEGF治療劑加以研究的效應(yīng)[Sabbadini，Br JPharmacol. 2011年 3 月;162(6):1225-38]。增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變(PVR)為視網(wǎng)膜脫離的最常見并發(fā)癥。PVR病理生理學(xué)最終導(dǎo)致視網(wǎng)膜結(jié)疤過度。鑒于SlP與生長(zhǎng)因子(諸如VEGF、bFGF、IL-6和IL-8)之間的所述相互影響和中和性抗SlP抗體對(duì)這些因子的抑制作用[Visentin, Cancer Cell2006,第 9 卷1-14 ;Milstien 和 Spiegel, Cancer Cell 2006,第 9 卷148-150]。鑒于最終導(dǎo)致PVR中所見的過度結(jié)疤的病理生理學(xué)和功能性SlP受體拮抗劑FTY720對(duì)這些相同關(guān)鍵介體的已知作用以及松匹珠單抗在視網(wǎng)膜脫離患者中的治愈作用[Sabbadini，Br JPharmacol. 2011年3月；162 (6) : 1225-38]，預(yù)期降低玻璃體內(nèi)SlP濃度的中和劑(諸如SlP結(jié)合核酸分子)將為一種治療PVR的有希望的方法。在AMD和DR中，視網(wǎng)膜纖維化導(dǎo)致不可逆的光受體破壞和視力損失。這個(gè)過程不由當(dāng)前可用的治療劑處理。中和性抗SlP抗體會(huì)阻斷激光誘導(dǎo)的布魯赫氏膜(一種滲出性AMD模型)破環(huán)中的CNV形成和視網(wǎng)膜下纖維化[Caballero, Exp Eye Res2009，88:367-377]。在一個(gè)早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(ROP)模型中，缺乏S1P2的小鼠顯示玻璃體腔中的病理性新血管化降低[Skoura, J Clin Invest 2007,117:2506-2516]。在缺血誘導(dǎo)的血管生成的ROP模型中，中和性抗SlP抗體有效阻斷視網(wǎng)膜新血管化和血管泄漏[Xie，J CellPhysiol 2009218:192-198]。此外，中和性抗SlP抗體可限制在ROP期間巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)[Xie, J Cell Physiol 2009,218:192-198]。
眼內(nèi)壓升高為青光眼中的主要風(fēng)險(xiǎn)因素。顯示SlP會(huì)降低豬和人眼中的流出流暢性(outflow facility),由此增加流出阻力和眼內(nèi)壓[Mettu, Invest Ophthalmol VisSci.2004年 7 月;45(7) :2263-71 ；Stamer, Exp Eye Res. 2009年 12 月;89 (6):980-8]。S1P2受體活化會(huì)增加常規(guī)流出阻力[Sumida, Am J Physiol Cell Physiol. 2011年2月2日]。因此，用諸如SlP結(jié)合核酸分子的中和劑降低玻璃體內(nèi)SlP濃度將為一種治療青光眼的有希望的方法。鑒于SlP的已知多效性作用及其與VEGF和相關(guān)生長(zhǎng)因子及細(xì)胞因子的相互作用，預(yù)期降低SlP的有效眼濃度將有效抑制與VEGF驅(qū)動(dòng)的病理視網(wǎng)膜新血管化增殖相關(guān)的缺血性視網(wǎng)膜病變。這些包括但不限于鐮狀細(xì)胞視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜靜脈閉塞性疾病、黃斑皺褶(玻璃紙樣視網(wǎng)膜病變)、增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變O3DR)和視網(wǎng)膜新血管疾病。特征至少部分為新血管化或血管生成異常的其它眼病狀包括隱形眼鏡佩戴過度、角膜感染(包括單純性皰疹、帶狀皰疹和原蟲感染)、翼狀胬肉(pterygium)、感染性葡萄膜炎、在角膜移植和移植排斥之后的淋巴管生成、慢性視網(wǎng)膜脫離、屈光手術(shù)的并發(fā)癥(諸如 朦朧、基質(zhì)結(jié)疤和退化)、鐮狀細(xì)胞視網(wǎng)膜病變、靜脈閉塞性疾病、視網(wǎng)膜血管瘤增殖和特發(fā)性息肉樣脈絡(luò)膜血管病變。具有炎性或免疫組分的其它眼病包括慢性玻璃體炎、自體免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎、過敏性結(jié)膜炎、春季結(jié)膜炎、單純性皰疹、帶狀皰疹和原蟲感染[Ciulla等(2001)，CurrOpin Ophthalmol,第 12 卷:442-9]及眼組織胞衆(zhòng)菌病(histoplasmosis)。SlP涉及于結(jié)疤的調(diào)控中。眼睛前端部分的結(jié)疤涉及于創(chuàng)傷(由在氣載碎片至可例如由手術(shù)和化學(xué)品所致的鈍創(chuàng)傷的范圍內(nèi)的各種危險(xiǎn)所致KDart等(2003)，Eye，第17卷886-92]、眼瘢痕類天皰瘡(OCP)(—種主要影響結(jié)膜的慢性結(jié)疤性(疤形成)自體免疫性疾病)、史蒂文斯約翰遜綜合癥(Stevens Johnson Syndrome, SJS)和中毒性上皮壞死溶解(TEN)(對(duì)藥物的危急生命的不良反應(yīng))、翼狀胬肉(一種出現(xiàn)在瞼間裂縫中的可導(dǎo)致視力損失的翼狀三角形膜；VEGF可能在翼狀胬肉的顯現(xiàn)中起重要作用[Dougherty等(1996)，Cornea,第 15 卷537-540 ;及 Lee 等(2001)，Cornea,第 20 卷238-42])中。SlP通過刺激細(xì)胞增殖和防止細(xì)胞凋亡來促進(jìn)在增生和瘤形成期間的過度增殖。瘤形成是指異常、不受控制且混亂的細(xì)胞生長(zhǎng)。在大多數(shù)情況下，瘤形成將為癌癥。若干證據(jù)表明SlP相對(duì)于鞘氨醇和神經(jīng)酰胺的平衡決定細(xì)胞命運(yùn)[Morita等，2000 ；Melendez 和 Khaw, 2002 ； Baumruker 和 Prieschl, 2000]。已顯不癌細(xì)胞會(huì)上調(diào) SPHKl,由此增加腫瘤微環(huán)境中的S IP濃度[Pyne, Nat Rev Cancer 2010, 10:489-503] 降低SPHKl表達(dá)會(huì)誘導(dǎo)乳癌細(xì)胞中的細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡且SPHK的小分子抑制劑降低乳腺腺癌、組織細(xì)胞白血病、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤異種移植和AML異種移植模型中的腫瘤生長(zhǎng)[Sabbadini, Br J Pharmacol. 2011 年 3 月；162 (6):1225-38]。與這些來自動(dòng)物模型的結(jié)果一致，SPHK在實(shí)體腫瘤患者，尤其患有乳房腫瘤、結(jié)腸腫瘤、肺腫瘤、卵巢腫瘤、胃腫瘤、子宮腫瘤、腎腫瘤、前列腺腫瘤和直腸腫瘤的那些患者中過度表達(dá)[French 等，Cancer Res 63:5962-5969,2003 ；Fyrst, Nat Chemical Biology2010,489-497]。SPHK的表達(dá)增加與患有若干形式的癌癥的患者的存活率顯著降低相關(guān)聯(lián)[Sabbadini, Br J Pharmacol. 2011 年 3 月;162 (6) : 1225-38]。顯示 SlP 中和抗體會(huì)抑制癌細(xì)胞系的增殖、其侵襲及其對(duì)阿霉素(doxOTobucin)誘導(dǎo)的體外細(xì)胞凋亡的抗性，即A549、HT-29、MCF-7 細(xì)胞[Visentin, Cancer Cell. 2006 年 3 月;9(3) :225-38]。除S IP的過度增殖作用之外，其也促進(jìn)作為癌癥病理學(xué)中的關(guān)鍵過程的新血管化、血管生成和轉(zhuǎn)移。暗示SlP為最強(qiáng)力促血管生成劑之一的大量日益增長(zhǎng)的新近證據(jù)來自直接比較SlP與諸如VEGF和bFGF的藥劑的研究。SlP刺激DNA合成和人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的趨化性運(yùn)動(dòng)性，同時(shí)誘導(dǎo)多細(xì)胞結(jié)構(gòu)分化，所有這些都表明SlP在早期血管形成中具有作用(Argraves 等，2004 ;Lee 等，1999 ;Liu 等，JClin Invest. 2000106:951-961)。此外，SlP促進(jìn)骨髓源性EC前體遷移至新血管化部位(Annabi，Exp Hematol. 2003年7月；31 (7) :640-9.)。過度表達(dá)SlP1的細(xì)胞對(duì)抗血管生成劑沙利度胺(thalidomide)和新伐司他(Neovastat)具有抗性(Annabi, Exp Hematol. 2003 年 7 月;31 (7) : 640-9.)。此夕卜，已證明在SlP與其它促血管生成生長(zhǎng)因子(諸如VEGF、EGF、PDGF, bFGF和IL-8)之間存在實(shí)質(zhì)性相互影響。例如，S IP會(huì)轉(zhuǎn)活化EGF(Shida等，2004)和VEGF2受體(Spiegel和 Milstien, 2003)，且 VEGF 會(huì)上調(diào) SlP1 受體表達(dá)(Igarashi 等，2003)。此外，通過 SlP1和“VEGF軸”起作用的SlP為下肢血管生成和新血管化所需(Chae等，2004)?？寡苌伤幬飭慰寺】筕EGF抗體貝伐單抗(bevacizumab) (Avastin, Genentech)已批準(zhǔn)用 于與化學(xué)療法聯(lián)合治療結(jié)腸癌。也已顯示SlP涉及于轉(zhuǎn)移中[Takuwa, Biochim BiophysActa2002, 1582:112-120]。在肝細(xì)胞癌、胚細(xì)胞危象慢性骨髓性白血病、費(fèi)城染色體(Philadelphiachromosome)陽性急性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、成淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤和肺腫瘤模型中，功能性SlP受體拮抗劑FTY720抑制腫瘤生長(zhǎng)和腫瘤相關(guān)的血管生成[Ho, MolCancer Ther 2005，4:1430-1438 ;Neviani, J Clin Invest 2007，117:2408-2421 ；Liu,Blood 2008,111:275-284 ；Lucas da Silva, J Exp TherOncol2008,7:9-15]。盡管這些研究強(qiáng)烈表明SlP的大多數(shù)促腫瘤功能由其細(xì)胞表面受體介導(dǎo)，但應(yīng)認(rèn)為SlP也可充當(dāng)細(xì)胞內(nèi)第二信使[Hait，Science 2009，325:1254-1257 ;Alvarez, Nature 2010，465:1084-1088]。例如，已鑒定 SlP 為組蛋白(histone)脫乙酰酶的一種直接細(xì)胞內(nèi)配體，所述組蛋白脫乙酰酶也牽涉于癌癥的顯現(xiàn)和進(jìn)展中[Hait, Science2009，325:1254-1257]。中和性抗SlP抗體顯著阻斷腫瘤生長(zhǎng)和腫瘤相關(guān)的血管生成。在鼠類基膜膠塞測(cè)定中，抗體抑制bFGF和VEGF誘導(dǎo)的血管生成，且抗體在體外和在體內(nèi)抑制促血管生成生長(zhǎng)因子(VEGF、IL-8、IL-6)自腫瘤細(xì)胞釋放。在小鼠乳癌、卵巢癌模型中，在肺腺癌異種移植模型中及在鼠類黑素瘤同種移植模型中，其抑制腫瘤進(jìn)展[Visentin, Cancer Cell. 2006年3月；9 (3) :225-38]。增生稱為正常組織或器官中的細(xì)胞的過度增殖。一臨床相關(guān)實(shí)例為良性前列腺增生。SlP的過度增殖作用已與增生相關(guān)聯(lián)。已在不同類型的癌癥和前列腺癌中測(cè)試導(dǎo)致S IP含量降低的苯妥帝爾(Phenoxodiol) [Marshall Edwards新聞稿,2010年6月I曰]?？傊?，存在強(qiáng)力證據(jù)證明SlP促進(jìn)過度增殖、血管生成和轉(zhuǎn)移。不管個(gè)別過程對(duì)發(fā)病機(jī)制所起的作用如何，預(yù)期用諸如SlP結(jié)合核酸分子的中和劑直接靶向SlP會(huì)提供對(duì)特征為過度增殖、血管生成、轉(zhuǎn)移和對(duì)細(xì)胞凋亡具有抗性的疾病(諸如大多數(shù)類型的腫瘤和癌癥)的有效治療。SlP調(diào)控淋巴細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性、粘著和遷移。SlP調(diào)控淋巴細(xì)胞自淋巴器官的退出及其在炎癥部位的停留[Matloubian, Nature 2004,427, 355-360 ；Ledgerwood, Nat.Immunol. 2008，9，42-53]。血漿SlP水平的降低會(huì)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞減少，因此引導(dǎo)病原性T淋巴細(xì)胞離開炎癥部位，由此適用于治療炎性疾病[Schwab，Science2005，309(5741):1735-9 ;Japtok 和 Kleuser, Curr Opin Investig Drugs. 2009 年 11月;10(11) : 1183-94]。此外，已顯示SlP會(huì)誘導(dǎo)諸如前列腺素、TNF-α和IL-6的促炎性因子的產(chǎn)生[Lai, J Immunol 2008, 181:8010-17 ；Lai, J Immunol 2009,183:2097-2103]。FTY720在體內(nèi)被磷酸化且充當(dāng)所有SlP受體1、3、4和5的激動(dòng)劑。FTY720對(duì)SlP受體的活化反過來導(dǎo)致在細(xì)胞表面處的受體可用性的下調(diào)。這致使細(xì)胞對(duì)SlP不反應(yīng)且阻斷淋巴細(xì)胞自淋巴組織溢出，從而產(chǎn)生FTY720的免疫抑制作用[Mandala，Science 2002，296:346-349 ；Graler, Faseb J 2004,18:551—553]。FTY720 在各種自體免疫性模型中顯示功效且被批準(zhǔn)用于治療多發(fā)性硬化癥。據(jù)報(bào)導(dǎo)相較于骨關(guān)節(jié)炎患者，在滑膜類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中，SlP和SlPl受體表達(dá)在滑液襯細(xì)胞(synovial lining cell)、血管內(nèi)皮細(xì)胞和炎性單核細(xì)胞中被上調(diào) [Kitano, Arthritis Rheum. 2006 年 3 月;54 (3):742-53 ;Lai, J Immunol. 2008 年 12 月 I日；181 (11) :8010-7]。在膠原蛋白誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎模型中，鞘氨醇激酶抑制劑顯著抑制疾病嚴(yán)重性且減輕關(guān)節(jié)炎癥和關(guān)節(jié)破壞[Lai, J Immunol. 2008年12月I日；181 (11) :8010-7]。與此一致，在SKG小鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中，功能性SlP受體拮抗劑FTY720抑制骨破壞[Tsunemi, Clin Immunol. 2010 年 8 月；136 (2):197-204]。歸因于SlP受體功能性拮抗劑FTY720的免疫抑制作用，建議用諸如SlP結(jié)合核酸分子的中和劑降低SlP的有效體內(nèi)濃度將有益于治療炎性皮膚病，諸如紅斑狼瘡、銀屑病和異位性皮炎[Herzinger, AmJ Clin Dermatol. 2007; 8 (6) : 329-36]。已顯示全身性施用SlP會(huì)增加小鼠的支氣管高反應(yīng)性[Roviezzo, Am JRespir Cell Mol Biol. 2010年5月；42 (5) :572-7]。在鼠類哮喘模型中，通過吸入局部應(yīng)用功能性SlP受體拮抗劑FTY720會(huì)抑制過敏性氣道炎癥[Idzko，J Clin Invest2006,116:2935-2944 ；Nishiuma, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol.2008 年 6月;294(6):L1085-93]。在炎性腸病(IBD)模型中，缺乏SPH激酶的小鼠顯現(xiàn)疾病顯著改善[Snider，F(xiàn)ASEBJ. 2009年I月；23 (I) :143-52]。與此一致，在小鼠IBD模型中，功能性SlP受體拮抗劑FTY720 高效抑制疾病顯現(xiàn)[Deguchi, Oncol Rep. 2006 年 10 月；16(4) :699-703]。在低劑量下，已顯示在小鼠呼吸器誘發(fā)的肺損傷(VILI)模型中，功能性SlP受體拮抗劑FTY720會(huì)增強(qiáng)內(nèi)皮屏障功能且降低肺滲透性(Miiller，Pulm Pharmacol Ther. 2011年3月23日，電子版先于印刷版)。因此，降低有效肺SlP濃度可抑制炎癥且增強(qiáng)不同臨床相關(guān)情形(諸如肺炎、慢性阻塞性肺病(COPD)或肺動(dòng)脈高血壓(PAH))下的肺內(nèi)皮屏障功能。存在其它證據(jù)表明抑制鞘氨醇激酶且由此降低有效SlP水平可能改善在創(chuàng)傷和出血性休克之后的肺損傷[Lee, J Trauma. 2004,57(5) :955-60]。在體外在人吞噬細(xì)胞中以及在敗血癥患者中，細(xì)菌產(chǎn)物增加SphKl表達(dá)和功能。SphKl的阻斷抑制人吞噬細(xì)胞中LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞因子產(chǎn)生且增加腐敗性小鼠的存活率。重要的是在敗血癥中，抗生素治療劑對(duì)存活的治療作用由SphKl阻斷劑增強(qiáng)[Puneet, Science, 2010 年 6 月 4 日;328 (5983):1290-4]。
在動(dòng)物器官移植模型中，SlPl拮抗劑延長(zhǎng)皮膚和心臟同種移植物存活且減弱慢性排斥[Shimizu, Circulation 2005，111，222-229]。類似地，在原位小鼠角膜移植模型中及在大鼠至小鼠角膜異種移植模型中，功能性SlP受體拮抗劑FTY720顯著延長(zhǎng)移植物存活率[Zhang 等(2003), Transplantation,第 76 卷:1511-3 ；Sedlakova 等(2005),Transplantation,第 79 卷，297-303]。在繼承性轉(zhuǎn)移小鼠I型糖尿病模型中，功能性SlP拮抗劑芬戈莫德減緩疾病進(jìn)展[Morris, Autoimmunity. 2011 年 3 月;44 ⑵:115-28]。在炎性前列腺炎模型中，用芬戈莫德治療顯著降低炎性浸潤(rùn)和組織破環(huán)[Zhang, ScandJ Immunol. 2011年 2 月 15 日]。用功能性SlP受體拮抗劑FTY720治療顯著降低鏈脲佐菌素處理的大鼠的蛋白尿 和小管損傷。這個(gè)指示在糖尿病性腎病變中，用諸如SlP結(jié)合核酸分子的中和劑抑制SlP可為有益的。已報(bào)導(dǎo)抑制鞘氨醇激酶-2會(huì)減弱大鼠中與碘乙酸單鈉誘發(fā)的骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的膝關(guān)節(jié)組織學(xué)破壞和疼痛[Fitzpatrick, Pharmacology. 2011; 87 (3-4) : 135-43]。S 1P2受體信號(hào)傳導(dǎo)已牽涉于動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制中[Skoura, ArteriosclerThromb Vase Biol. 2011年 I 月；31 (I):81-5]。過度表達(dá)SPHKl的小鼠顯示與心肌纖維化相關(guān)的深度心臟重塑[Takuwa, Cardiovasc Res 2009,85:484-493]。中和性抗SlP抗體抑制初級(jí)心臟成纖維細(xì)胞產(chǎn)生膠原蛋白[Gellings Lowe, Cardiovasc Res 2009,82:303-312]。因此，根據(jù)本發(fā)明的藥劑可用于治療和/或預(yù)防的疾病和/或病癥和/或患病狀況包括但不限于a)眼病，所述眼病優(yōu)選選自包含以下的組年齡相關(guān)的黃斑變性、伴有糖尿病性黃斑水腫的糖尿病性視網(wǎng)膜病變、年齡相關(guān)的黃斑變性或糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的視網(wǎng)膜色素上皮脫離、增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變和年齡相關(guān)的黃斑變性或糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的視網(wǎng)膜纖維化，b)癌癥，所述癌癥優(yōu)選選自包含乳癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、增生(諸如前列腺增生)的組，c)炎性疾病，其中所述炎性疾病優(yōu)選選自包含自體免疫性疾病、多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、哮喘、炎性腸病、肺炎、敗血癥和創(chuàng)傷(諸如呼吸器誘發(fā)的肺損傷)和敗血癥的組，其中所述自體免疫性疾病優(yōu)選選自包含多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、哮喘和炎性腸病的組。在另一實(shí)施方案中，藥劑包含另一藥學(xué)活性的化合物?；蛘呋蛄硗猓隽硪凰帉W(xué)活性的化合物為另一根據(jù)本發(fā)明的核酸?；蛘?，藥劑包含至少另一種核酸，其結(jié)合不同于SlP的靶分子或展現(xiàn)不同于根據(jù)本發(fā)明的核酸的功能的功能。所述至少另一種核酸優(yōu)選展現(xiàn)與本文公開的其它藥學(xué)活性的化合物的一種或若干種功能之一類似或一致的功能。在本發(fā)明內(nèi)的是藥劑在原則上可選或另外用于預(yù)防與使用藥劑治療所述疾病關(guān)聯(lián)公開的任何疾病。因此，即相應(yīng)疾病的相應(yīng)標(biāo)記物為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。相應(yīng)標(biāo)記物優(yōu)選為S1P。
在本發(fā)明的藥劑的一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥劑與用于本文公開的任何疾病，特別是本發(fā)明的藥劑將用于的那些疾病的其它治療劑聯(lián)合使用。根據(jù)本發(fā)明的組合物也可與另一治療劑或治療方案聯(lián)合施用。此外，通過中和劑調(diào)節(jié)SlP可適用于誘導(dǎo)對(duì)血管滲透性的暫時(shí)調(diào)節(jié)以允許或增強(qiáng)用作用可通過所述聯(lián)合治療得以增加或提1 的第一治療試劑的治療。根據(jù)本發(fā)明的藥劑可與第二藥劑或第二藥學(xué)活性劑聯(lián)合用于治療和/或預(yù)防癌癥，其中所述第二藥劑或第二藥學(xué)活性劑會(huì)破壞、毀壞和/或標(biāo)記癌細(xì)胞。所述第二藥劑或第二藥學(xué)活性劑優(yōu)選選自但不限于包含以下的組a)抗體，諸如利妥昔單抗(Rituximab)(革巴向CD20)、西妥昔單抗(Cetuximab)(革巴向上皮生長(zhǎng)因子受體)、替伊莫單抗(Ibritumomab-Tiuxetan)(革巴向⑶20)、托西莫單抗(Tositumomab)(革巴向CD20)、曲妥珠單抗(Trastuzumab)(革巴向HER2/neu)、貝伐單抗(革巴向VEGF)；·b)焼化劑，諸如順鉬(cisplatin)、卡鉬(carboplatin)、奧沙利鉬(oxaliplatin)、氮芥(mechlorethamine)、環(huán)憐酸胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、阿霉素(Doxorubicin)、美法侖(Melphalan)；c)抗代謝物，諸如_呤硫唑_呤、巰基票呤(mercaptopurine)、氟達(dá)拉濱(Fludarabine)；d)植物生物堿(諸如長(zhǎng)春花生物堿)、植物類萜(諸如紫杉烷(taxane)，優(yōu)選多西他賽(Docetaxel)、紫杉醇(Paclitaxel)、鬼曰毒素(podophyllotoxin)、埃博霉素(epothilone))；e)拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，諸如喜樹堿(camptothecins)、伊立替康(Irinitecan)；f)和其它藥劑或活性劑，諸如亞葉酸(Leucovorin)、甲氨蝶呤(Methotrexate)、他莫昔芬(Tamoxifen)、索拉非尼(Sorafenib)、來那度胺(Lenalidomide)、硼替佐米(Bortezomib)、地塞米松(Dexamethasone)、氟尿啼卩定(Flurouracil) 0根據(jù)本發(fā)明的藥劑可與第二藥劑或第二藥學(xué)活性劑聯(lián)合用于治療和/或預(yù)防眼病，其中所述第二藥劑或第二藥學(xué)活性劑優(yōu)選選自但不限于包含以下的組a)已知會(huì)抑制免疫系統(tǒng)的那些藥劑或活性劑，諸如鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(calcineurin)抑制劑、環(huán)孢霉素(cyclosporin)、甲氨蝶呤、硫唑_呤(azathioprin)、他克莫司(tacrolimus)、雷帕霉素(rapamycin)、苯丁酸氮芥、來氟米特(Ieflunomide)、霉酌■酸嗎乙酯(mycophenolate mofetil)、布喹那(brequinar)、咪唑立賓(mizoribin)、沙利度胺或脫氧精胍菌素(deoxyspergualin);皮質(zhì)類固醇(corticosteroid)，如潑尼松(prednisone)、甲基強(qiáng)的松龍(methylprednisolone)、氫化可的松(hydrocortisone)、地塞米松、曲安奈德(triamcinolone)、倍他米松(betamethasone)(泡騰)或布地縮松(budesonide)。b)消炎或抗血管生成生物品可聯(lián)合使用，諸如IL-10、厄利珠單抗(erlizumab)、托勒單抗(tolermab)、利妥昔單抗、魯昔單抗(gomiliximab)、巴利昔單抗(basiliximab)、達(dá)利珠單抗(daclizumab)、HuMax-TAC、維利珠單抗(visilizumab)、HuMaxCD4、克立昔單抗(clenoliximab)、MAX 16H5、TNX 100、托利珠單抗(toralizumab)、阿侖珠單抗(alemtuzumab)、CY 1788、加利昔單抗(galiximab)、培克珠單抗(pexelizumab)、依庫珠單抗(eculizumab)、PMX-53、ETI 104、FG3019、柏替木單抗(bertiIimumab)、249417 (抗因子IX)阿昔單抗(abciximab)、YM 337、奧馬珠單抗(omalizumab)、他利珠單抗(talizumab)、芳妥珠單抗(fontolizumab)、J695 (抗 IL12)、HuMaxIL-15、美泊利單抗(mepolizumab)、伊斯利莫單抗(elsilimomab)、HuDREG、阿那白滯素(anakinra)、Xoma-052、阿達(dá)木單抗(adalimumab)、英夫利昔單抗(infliximab)、賽妥珠單抗(certolizumab)、阿非莫單抗(afelimomab) > CytoFab> AME 527、伐利昔單抗(Vapaliximab)、貝伐單抗、雷珠單抗、維塔辛(vitaxin)、貝利木單抗(be I imumab) > MLN 1202、伏洛昔單抗(volociximab)、F200 (抗α 5 β I)、依法珠單抗(efalizumab)、m60. 11 (抗 CD lib)、依那西普(etanercept)、奧那西普(onercept)、那他珠單抗(natalizumab)或希普利珠單抗(siplizumab)、托珠單抗(tocilizumab)、優(yōu)特克單抗(ustekinumab)、ABT-874.、眼用 VEGF 捕集劑(VEGF-trapeye)。“聯(lián)合療法”(或“共療法”)包括施用本發(fā)明的藥劑和作為特定治療方案的一部分的至少一種第二藥劑，所述治療方案欲提供由這些治療劑(即本發(fā)明的藥劑和所述第二藥齊IJ)的共同作用產(chǎn)生的有益作用。聯(lián)合的有益作用包括但不限于由治療劑的聯(lián)合所產(chǎn)生的 藥物動(dòng)力學(xué)或藥動(dòng)學(xué)共同作用。這些治療劑的聯(lián)合施用通常歷經(jīng)確定時(shí)期(視所選聯(lián)合而定通常數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)、數(shù)天或數(shù)周)進(jìn)行?！奥?lián)合療法”可但通常不欲涵蓋施用這些治療劑中的兩者或更多者作為附帶且任意產(chǎn)生本發(fā)明的聯(lián)合的單獨(dú)單藥療法方案的一部分?！奥?lián)合療法”欲包括以依序方式施用這些治療劑，即其中各治療劑在不同時(shí)間施用，且以實(shí)質(zhì)上同時(shí)的方式施用這些治療劑或治療劑中的至少兩者。實(shí)質(zhì)上同時(shí)施用可例如通過向受試者施用各治療劑的比率固定的單一膠囊或各治療劑的多個(gè)單一膠囊來實(shí)現(xiàn)。依序或?qū)嵸|(zhì)上同時(shí)施用各治療劑可通過包括但不限于表面途徑、經(jīng)口途徑、靜脈內(nèi)途徑、肌肉內(nèi)途徑和直接通過粘膜組織吸收的任何適當(dāng)途徑來實(shí)現(xiàn)。治療劑可通過相同途徑或通過不同途徑施用。例如，所選聯(lián)合的第一治療劑可通過注射來施用而聯(lián)合的其它治療劑可以表面方式施用?；蛘?，例如，所有治療劑都可以表面方式施用或所有治療劑都可通過注射來施用。除非另外指示，否則施用治療劑所依的順序并不為嚴(yán)格關(guān)鍵的?！奥?lián)合療法”也可包括進(jìn)一步與其它生物活性成分聯(lián)合施用如上所述的治療劑。當(dāng)聯(lián)合療法進(jìn)一步包含非藥物治療時(shí)，所述非藥物治療可在任何適合時(shí)間進(jìn)行，只要實(shí)現(xiàn)由治療劑與非藥物治療的聯(lián)合的共同作用產(chǎn)生的有益作用即可。例如，在適當(dāng)情況下，當(dāng)非藥物治療暫時(shí)自治療劑的施用移除優(yōu)選數(shù)天或甚至數(shù)周時(shí)，有益作用仍然會(huì)實(shí)現(xiàn)。如以上概括所述，根據(jù)本發(fā)明的藥劑在原則上可以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何形式施用。一優(yōu)選施用途徑為全身性施用，更優(yōu)選通過胃腸外施用，優(yōu)選通過注射進(jìn)行?；蛘撸巹┛删植渴┯?。其它施用途徑包含肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)和皮下、口服、鼻內(nèi)、氣管內(nèi)或經(jīng)肺，優(yōu)選給予侵襲性最小，同時(shí)確保功效的施用途徑。胃腸外施用通常用于皮下、肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi)注射和輸注。另外，一種用于胃腸外施用的方法采用植入本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的緩釋或持續(xù)釋放系統(tǒng)，其保證恒定劑量水平得以維持。此外，本發(fā)明的優(yōu)選藥劑可通過表面使用適合鼻內(nèi)媒介物、吸入劑以鼻內(nèi)形式施用，或使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的那些經(jīng)皮皮膚貼片形式通過經(jīng)皮途徑施用。為以經(jīng)皮傳遞系統(tǒng)形式施用，在整個(gè)劑量方案期間，劑量施用將當(dāng)然為連續(xù)的而非間歇的。其它優(yōu)選表面制劑包括乳膏劑、軟膏劑、洗劑、氣霧劑噴霧劑和凝膠劑。本發(fā)明的藥劑將通常包含療法的有效量的活性組分，包括但不限于溶解或分散于藥學(xué)上可接受的介質(zhì)中的本發(fā)明的核酸分子。藥學(xué)上可接受的介質(zhì)或載體包括任何及所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、等張劑和吸收延遲劑等。所述介質(zhì)和試劑針對(duì)醫(yī)藥活性物質(zhì)的使用在本領(lǐng)域中為熟知的。補(bǔ)充性活性成分也可并入本發(fā)明的藥劑中。在另一方面，本發(fā)明涉及一種藥物組合物。所述藥物組合物包含至少一種根據(jù)本發(fā)明的核酸和優(yōu)選藥學(xué)上可接受的媒介物。所述媒介物可為本領(lǐng)域中使用和/或已知的任何媒介物或任何粘合劑。更特別地，所述粘合劑或媒介物為如與本文公開的藥劑的制造關(guān)聯(lián)論述的任何粘合劑或媒介物。在另一實(shí)施方案中，藥物組合物包含另一藥學(xué)活性劑。藥劑和藥物組合物的制備將為本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本公開內(nèi)容所知。通常，所述組合物可制備成呈液體溶液或懸浮液形式的可注射物；適于在注射之前溶解或懸浮于液體 中的固體形式；用于經(jīng)口施用的片劑或其它固體；定時(shí)釋放膠囊；當(dāng)前使用的任何其它形式，包括滴眼劑、乳膏劑、洗劑、油膏劑、吸入劑等。也可特別適用的是由外科醫(yī)生、醫(yī)師或衛(wèi)生保健工作者使用用以處理手術(shù)區(qū)域中的特定區(qū)域的無菌制劑，諸如基于生理鹽水的洗滌齊 。組合物也可通過微裝置、微?；蚝＞d傳遞。在配制后，藥劑將以與劑量配制相容的方式且以諸如藥理學(xué)上有效的量施用。制劑易于以多種劑型，諸如上述可注射溶液類型施用，但也可采用藥物釋放膠囊等。本發(fā)明的藥劑也可以諸如定時(shí)釋放和持續(xù)釋放片劑或膠囊、丸劑、粉末、顆粒劑、酏劑、酊劑、懸浮液、糖漿和乳液的經(jīng)口劑型施用。栓劑方便地由脂肪乳液或懸浮液制備。藥物組合物或藥劑可經(jīng)滅菌和/或含有佐劑，諸如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤(rùn)劑或乳化齊U、溶液促進(jìn)劑、用于調(diào)控滲透壓的鹽和/或緩沖劑。此外，其也可含有其它有治療價(jià)值的物質(zhì)。組合物是根據(jù)常規(guī)混合、粒化或包覆方法來制備的，且通常含有約O. 1%至75%，優(yōu)選約1%至50%的活性成分。液體，特別是可注射組合物可例如通過溶解、分散等制備。將活性化合物溶解于藥學(xué)純?nèi)軇┲谢蚺c其混合以由此形成可注射溶液或懸浮液，所述溶劑諸如水、生理鹽水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇等。另外，可配制適于在注射之前溶解于液體中的固體形式。本發(fā)明的分別藥劑和核酸分子也可以脂質(zhì)體傳遞系統(tǒng)(諸如小單層囊泡、大單層囊泡和多層囊泡)形式施用。脂質(zhì)體可由多種含有膽固醇、十八胺或磷脂酰膽堿的磷脂形成。在一些實(shí)施方案中，脂質(zhì)組分的薄膜用藥物水溶液水合以形成本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的囊封藥物的脂質(zhì)層。例如，本文所述的核酸分子可以使用本領(lǐng)域已知方法構(gòu)建的與親脂性化合物或非免疫原性高分子量化合物的復(fù)合物形式提供。另外，脂質(zhì)體可在其表面上攜帶所述核酸分子以內(nèi)部靶向和運(yùn)載細(xì)胞毒性劑來介導(dǎo)細(xì)胞殺傷。核酸締合的復(fù)合物的一實(shí)例提供于美國(guó)專利No. 6，011，020中。本發(fā)明的分別藥劑和核酸分子也可與作為可靶向藥物載體的可溶性聚合物偶合。所述聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥丙基-甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羥乙基天冬酰胺苯酚或經(jīng)十六酰基殘基取代的聚氧化乙烯聚賴氨酸。此外，本發(fā)明的分別藥劑和核酸分子可偶合于一類適用于實(shí)現(xiàn)藥物的控制釋放的生物可降解聚合物，例如聚乳酸、聚ε己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝膠的交聯(lián)或兩親性嵌段共聚物。在治療本文公開的任何疾病時(shí)，根據(jù)本發(fā)明的核酸的有效血漿水平優(yōu)選在500fM至200 μ Μ、優(yōu)選InM至20 μ Μ、更優(yōu)選5ηΜ至20 μ Μ、最優(yōu)選50ηΜ至20 μ M的范圍內(nèi)。本發(fā)明的分別核酸分子和藥劑可優(yōu)選以單一每日劑量、每?jī)商旎蛎咳臁⒚恐?、每?jī)芍?、以單一每月劑量或每三個(gè)月施用。在本發(fā)明內(nèi)的是如本文所述的藥劑構(gòu)成本文公開的藥物組合物。在另一方面，本發(fā)明涉及一種用于治療需要所述治療的受試者的方法，其中所述方法包含施用醫(yī)藥有效量的至少一種根據(jù)本發(fā)明的核酸。在一實(shí)施方案中，受試者罹患疾病或處于顯現(xiàn)所述疾病的風(fēng)險(xiǎn)中，其中所述疾病為本文公開的疾病的任一者，特別是與使 用根據(jù)本發(fā)明的任何核酸制造藥劑關(guān)聯(lián)公開的那些疾病的任一者。應(yīng)了解根據(jù)本發(fā)明的核酸以及拮抗劑可不僅用作藥劑或用于制造藥劑，而且也用于美容目的，特別是關(guān)于發(fā)炎區(qū)域性皮膚病變中涉及S1P。因此，根據(jù)本發(fā)明的核酸、藥劑和/或藥物組合物可用于治療或預(yù)防的另一病狀或疾病為發(fā)炎區(qū)域性皮膚病變。如本文優(yōu)選所用，診斷法或診斷劑或診斷手段適于直接或間接檢測(cè)S1P，優(yōu)選如本文所述的SlP且更優(yōu)選如本文與本文所述的各種病癥和疾病關(guān)聯(lián)所述的S1P。診斷劑適于檢測(cè)和/或追蹤本文所述的分別病癥和疾病的任一者。通過根據(jù)本發(fā)明的核酸結(jié)合S1P，所述檢測(cè)為可能的。所述結(jié)合可直接或間接被檢測(cè)。相應(yīng)方法和手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。其中，根據(jù)本發(fā)明的核酸可包含允許檢測(cè)根據(jù)本發(fā)明的核酸，優(yōu)選與SlP結(jié)合的核酸的標(biāo)記。所述標(biāo)記優(yōu)選選自包含放射性標(biāo)記、酶標(biāo)記和突光標(biāo)記的組。在原則上，針對(duì)抗體開發(fā)的所有已知測(cè)定都可用于根據(jù)本發(fā)明的核酸，而靶結(jié)合抗體替換成靶結(jié)合核酸。在使用未標(biāo)記靶結(jié)合抗體的抗體測(cè)定中，檢測(cè)優(yōu)選通過用放射性標(biāo)記、酶標(biāo)記和熒光標(biāo)記修飾且在其Fe片段處結(jié)合靶結(jié)合抗體的二抗來進(jìn)行。在核酸，優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明的核酸的情況下，用所述標(biāo)記修飾核酸，其中所述標(biāo)記優(yōu)選選自包含生物素(biotin)、Cy-3和Cy_5的組，且所述標(biāo)記由針對(duì)所述標(biāo)記的抗體，例如抗生物素抗體、抗Cy3抗體或抗Cy5抗體檢測(cè),或-在標(biāo)記為生物素的情況下-標(biāo)記由天然結(jié)合生物素的抗生蛋白鏈菌素(streptavidin)或抗生蛋白(avidin)檢測(cè)。所述抗體、抗生蛋白鏈菌素或抗生蛋白反過來優(yōu)選用相應(yīng)標(biāo)記，例如放射性標(biāo)記、酶標(biāo)記或突光標(biāo)記修飾(如同二抗)。在另一實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸分子由第二檢測(cè)工具檢測(cè)或分析，其中所述檢測(cè)工具為分子信標(biāo)。分子信標(biāo)的方法學(xué)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知且由Mairal等綜述(Mairal 等，2008，Anal Bioanl Chem390(4)，989-1007)。應(yīng)了解使用根據(jù)本發(fā)明的核酸檢測(cè)SlP將特別允許檢測(cè)如本文定義的S1P。與SlP的檢測(cè)相關(guān)聯(lián)，一優(yōu)選方法包含下列步驟(a)提供將被測(cè)試SlP的存在性的樣品，(b)提供根據(jù)本發(fā)明的核酸，(C)使所述樣品與所述核酸，優(yōu)選在反應(yīng)容器中反應(yīng)其中步驟(a)可在步驟(b)之前進(jìn)行，或步驟(b)可在步驟(a)之前進(jìn)行。在一優(yōu)選實(shí)施方案中，提供另一步驟d)，其包括檢測(cè)樣品與核酸的反應(yīng)。優(yōu)選地，使步驟b)的核酸固定于表面。表面可為反應(yīng)容器(諸如反應(yīng)管、板的孔)的表面、或所述反應(yīng)容器中含有的裝置(諸如微珠)的表面?？赏ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何手段，包括但不限于非共價(jià)或共價(jià)鍵聯(lián)使核酸固定于表面。優(yōu)選地，通過表面與核酸之間的共價(jià)化學(xué)鍵來建立鍵聯(lián)。然而，在本發(fā)明內(nèi)的還有核酸間接固定于表面，其中所述間接固定涉及使用另一組分或一對(duì)相互作用伴侶。所述另一組分優(yōu)選為與欲經(jīng)固定的核酸特異性相互作用的也稱為相互作用伴侶，且因此介導(dǎo)核酸連接于表面的化合物。相互作用伴侶優(yōu)選選自包含核酸、多肽、蛋白質(zhì)和抗體的組。優(yōu)選地，相互作用伴侶為抗體，更優(yōu)選為單克隆抗體?；蛘撸嗷プ饔冒閭H為核酸，優(yōu)選為功能性核酸。更優(yōu)選地，所述功能性核酸選自包含至少部分互補(bǔ)于核酸的適體、鏡像異構(gòu)體和核酸的組。在另一替代性實(shí)施方案中，核酸與表面的結(jié)合由多分體相互作用伴侶介導(dǎo)。所述多分體相互作用伴侶優(yōu)選為由第一成員和第二成員組成的一對(duì)相互作用伴侶或一相互作用伴侶，其中所述第一成員由核酸組成或連接于核酸且所述第二成員連接于表面或由表面組成。多分體相互作用伴侶優(yōu)選選自包含生物素和抗生蛋白、生物素和抗生蛋白鏈菌素、及生物素和中和親和素(neutravidin)的數(shù)對(duì)相互作用伴侶的組。優(yōu)選地，相互作用伴侶對(duì)的第一成員為生物素。所述方法的一優(yōu)選結(jié)果為形成SlP與核酸的經(jīng)固定復(fù)合物，其中更優(yōu)選地，檢測(cè)所述復(fù)合物。在一實(shí)施方案內(nèi)的是自復(fù)合物檢測(cè)S1P。 依照這個(gè)要求的一相應(yīng)檢測(cè)工具為例如對(duì)SlP的那個(gè)/那些部分具有特異性的任何檢測(cè)工具。一特別優(yōu)選檢測(cè)工具為選自包含核酸、多肽、蛋白質(zhì)和抗體的組的檢測(cè)工具，所述檢測(cè)工具的產(chǎn)生為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。用于檢測(cè)SlP的方法也包含自優(yōu)選已用于進(jìn)行步驟c)的反應(yīng)容器移除樣品。在另一實(shí)施方案中，方法也包含使SlP的相互作用伴侶固定在表面，優(yōu)選如上定義的表面上的步驟，其中所述相互作用伴侶如本文所定義且優(yōu)選如上與相應(yīng)方法關(guān)聯(lián)所定義且更優(yōu)選在其各種實(shí)施方案中包含核酸、多肽、蛋白質(zhì)和抗體。在這個(gè)實(shí)施方案中，一特別優(yōu)選檢測(cè)工具為根據(jù)本發(fā)明的核酸，其中所述核酸可優(yōu)選經(jīng)標(biāo)記或未經(jīng)標(biāo)記。在所述核酸經(jīng)標(biāo)記的情況下，其可直接或間接被檢測(cè)。在本文所述的各種實(shí)施方案中，所述檢測(cè)也可涉及使用第二檢測(cè)工具，其優(yōu)選也選自包含核酸、多肽、蛋白質(zhì)和實(shí)施方案的組。所述檢測(cè)工具優(yōu)選對(duì)根據(jù)本發(fā)明的核酸具有特異性。在一更優(yōu)選實(shí)施方案中，第二檢測(cè)工具為分子信標(biāo)。在一優(yōu)選實(shí)施方案中，核酸或第二檢測(cè)工具或兩者可包含檢測(cè)標(biāo)記。檢測(cè)標(biāo)記優(yōu)選選自包含生物素、溴脫氧尿苷標(biāo)記、地高辛(digoxigenin)標(biāo)記、熒光標(biāo)記、UV標(biāo)記、放射標(biāo)記和螯合劑分子的組。或者，第二檢測(cè)工具與優(yōu)選由核酸含有、包含或連接的檢測(cè)標(biāo)記相互作用。特別優(yōu)選的組合如下檢測(cè)標(biāo)記為生物素且第二檢測(cè)工具為針對(duì)生物素的抗體，或其中檢測(cè)標(biāo)記為生物素且第二檢測(cè)工具為抗生蛋白或攜帶抗生蛋白的分子，或其中檢測(cè)標(biāo)記為生物素且第二檢測(cè)工具為抗生蛋白鏈菌素或攜帶抗生蛋白鏈菌素的分子，或其中檢測(cè)標(biāo)記為生物素且第二檢測(cè)工具為中和親和素或攜帶中和親和素的分子，或其中檢測(cè)標(biāo)記為溴脫氧尿苷且第二檢測(cè)工具為針對(duì)溴脫氧尿苷的抗體，或其中檢測(cè)標(biāo)記為地高辛且第二檢測(cè)工具為針對(duì)地高辛的抗體，或其中檢測(cè)標(biāo)記為螯合劑且第二檢測(cè)工具為放射核素，其中優(yōu)選的是所述檢測(cè)標(biāo)記連接于核酸。應(yīng)了解這種組合也可適用于核酸連接于表面的實(shí)施方案。在所述實(shí)施方案中，優(yōu)選的是檢測(cè)標(biāo)記連接于相互作用伴侶。最后，在本發(fā)明內(nèi)的還有使用第三檢測(cè)工具檢測(cè)第二檢測(cè)工具，優(yōu)選地，所述第三檢測(cè)工具為酶，更優(yōu)選在檢測(cè)第二檢測(cè)工具后顯示酶促反應(yīng)，或所述第三檢測(cè)工具為用于檢測(cè)放射，更優(yōu)選由放射核素發(fā)出的放射的工具。優(yōu)選地，第三檢測(cè)工具特異性檢測(cè)第二檢測(cè)工具和/或與第二檢測(cè)工具相互作用。此外，在SlP的相互作用伴侶固定在表面上且優(yōu)選添加根據(jù)本發(fā)明的核酸至在相互作用伴侶與SlP之間形成的復(fù)合物中的實(shí)施方案中，樣品可自反應(yīng)，更優(yōu)選自進(jìn)行步驟c)和/或d)所處的反應(yīng)容器移除。在一實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的核酸包含突光部分且其中所述突光部分的突光在核酸與SlP和游離SlP之間形成復(fù)合物后為不同的。在另一實(shí)施方案中，核酸為根據(jù)本發(fā)明的核酸的衍生物，其中核酸的所述衍生物包含至少一種置換腺苷的腺苷熒光衍生物。在一優(yōu)選實(shí)施方案中，腺苷熒光衍生物為亞乙 烯基腺苷。在另一實(shí)施方案中，使用熒光檢測(cè)由根據(jù)本發(fā)明的核酸的衍生物和SlP組成的復(fù)合物。在方法的一實(shí)施方案中，在步驟(C)或步驟(d)中產(chǎn)生信號(hào)且所述信號(hào)優(yōu)選與樣品中的SlP的濃度相關(guān)。在一優(yōu)選方面，可在96孔板中進(jìn)行測(cè)定，其中組分固定在如上所述的反應(yīng)容器中且孔充當(dāng)反應(yīng)容器。本發(fā)明核酸可進(jìn)一步用作藥物發(fā)現(xiàn)的起始物質(zhì)?；旧?，存在兩種可能的方法。一種方法為篩選化合物庫，而所述化合物庫優(yōu)選為低分子量化合物庫。在一實(shí)施方案中，篩選為高通量篩選。優(yōu)選地，高通量篩選為在基于靶標(biāo)的測(cè)定中對(duì)化合物進(jìn)行快速高效試驗(yàn)與誤差(trial-and-error)評(píng)估。在最佳情況下，分析通過比色測(cè)量來進(jìn)行。如與此關(guān)聯(lián)使用的庫為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。在篩選化合物庫的情況下，諸如通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定，可發(fā)現(xiàn)適當(dāng)SlP類似物、SlP激動(dòng)劑或SlP拮抗劑。所述競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定可如下建立。使本發(fā)明核酸，優(yōu)選作為靶結(jié)合L-核酸的鏡像異構(gòu)體偶合于固相。為鑒定SlP類似物，可添加經(jīng)標(biāo)記SlP至測(cè)定中。潛在類似物將與結(jié)合鏡像異構(gòu)體的SlP分子競(jìng)爭(zhēng)，所述鏡像異構(gòu)體將連同由相應(yīng)標(biāo)記獲得的信號(hào)一起降低。篩選激動(dòng)劑或拮抗劑可涉及使用如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒可包含至少一種或若干種優(yōu)選用于檢測(cè)脂質(zhì)，更優(yōu)選用于檢測(cè)SlP的本發(fā)明核酸。另外，試劑盒可包含至少一種或若干種陽性或陰性對(duì)照。陽性對(duì)照可例如為S1P，特別是選擇本發(fā)明核酸所針對(duì)或本發(fā)明核酸所結(jié)合的優(yōu)選呈液體形式的S1P。陰性對(duì)照可例如為依據(jù)生物物理性質(zhì)類似于SlP加以定義，但不由本發(fā)明核酸識(shí)別的肽。此外，所述試劑盒可包含一種或若干種緩沖劑。各種成分可以干燥或凍干形式或溶解于液體中含于試劑盒中。試劑盒可包含一個(gè)或若干個(gè)容器，其反過來可含有試劑盒的一種或若干種成分。在另一實(shí)施方案中，試劑盒包含向使用者提供關(guān)于如何使用試劑盒及其各種成分的信息的說明書或說明書活頁。藥學(xué)性和生物分析性測(cè)定根據(jù)本發(fā)明的核酸基本上是用于評(píng)估其在人體和非人體的若干體液、組織和器官中的藥物動(dòng)力學(xué)和生物動(dòng)力學(xué)概況。出于所述目的，本文公開或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何檢測(cè)方法都可加以使用。在本發(fā)明的另一方面，提供用于檢測(cè)根據(jù)本發(fā)明的核酸的夾心式雜交測(cè)定。在檢測(cè)測(cè)定內(nèi)使用捕獲探針和檢測(cè)探針。捕獲探針互補(bǔ)于根據(jù)本發(fā)明的核酸的第一部分且檢測(cè)探針互補(bǔ)于第二部分。使捕獲探針固定于表面或基質(zhì)。檢測(cè)探針優(yōu)選攜帶可如本文先前所述加以檢測(cè)的標(biāo)記分子或標(biāo)記。對(duì)根據(jù)本發(fā)明的核酸的檢測(cè)可如下進(jìn)行根據(jù)本發(fā)明的核酸以其一個(gè)末端與捕獲探針雜交且以另一末端與檢測(cè)探針雜交。之后，通過例如一個(gè)或若干個(gè)洗滌步驟移除未結(jié)合檢測(cè)探針。優(yōu)選攜帶標(biāo)記或標(biāo)記分子的結(jié)合檢測(cè)探針的量可隨后如例如W0/2008/052774中更詳細(xì)概述加以測(cè)量，所述專利以引用的方式并入本文。如本文優(yōu)選所用，在一優(yōu)選實(shí)施方案中，術(shù)語治療另外或替代地包含預(yù)防和/或追蹤。 如本文優(yōu)選所用，如果不相反指示，那么術(shù)語疾病和病癥應(yīng)以可互換方式使用。如本文所用，術(shù)語包含優(yōu)選不欲限制隨后主題或由所述術(shù)語描述的主題。然而，在一替代性實(shí)施方案中，術(shù)語包含應(yīng)以含有的含義加以理解且因此應(yīng)理解為限制隨后主題或由所述術(shù)語描述的主題。根據(jù)本發(fā)明的核酸分子的各種SEQ. ID.No.、化學(xué)性質(zhì)和如本文所用的靶分子S1P、其實(shí)際序列和內(nèi)部參考編號(hào)概述于下表中。
權(quán)利要求
1.一種核酸分子，所述核酸分子能夠結(jié)合脂質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的核酸分子，其中所述核酸為活性由所述脂質(zhì)介導(dǎo)的拮抗劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的核酸分子，其中所述脂質(zhì)為磷脂，所述磷脂優(yōu)選為I-磷酸鞘氨醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含中心核苷酸鏈段，其中所述中心核苷酸鏈段包含核苷酸序列 5，WAUUGCCGAWUGUAACGCCUUWAGAGAAAGCACUAG3，或 5，WAUUGCCGWUGUAACGCCUUWAGAGAAAGCACUAG 3， 且其中所述脂質(zhì)優(yōu)選為I-磷酸鞘氨醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的核酸分子，其中所述中心核苷酸鏈段包含選自以下的組的核苷酸序列 5， AAUAGCC⑶UGAAACGCCUUUAGAGAAGCACUAG 3'5， AAUAGCCGAUGAAACGCCUUUAGAGAAGCACUAG 3，和5， AAUAGCCGAAUGAAACGCCUUAAGAGAAGCACUAG 3'
6.根據(jù)權(quán)利要求4至5中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子在5’->3’方向上包含第一末端核苷酸鏈段，所述中心核苷酸鏈段和第二末端核苷酸鏈段，其中 所述第一末端核苷酸鏈段包含三至六個(gè)核苷酸，且 所述第二末端核苷酸鏈段包含三至六個(gè)核苷酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求4至5中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子在5’->3’方向上包含第二末端核苷酸鏈段、所述中心核苷酸鏈段和第一末端核苷酸鏈段，其中 所述第一末端核苷酸鏈段包含三至六個(gè)核苷酸，且 所述第二末端核苷酸鏈段包含三至六個(gè)核苷酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求6至7中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X6 3’， 其中 X1為A或不存在，X2為G或不存在，X3為S或不存在，X4為S或不存在，X5為C或不存在，且X6 SU或不存在。
9.根據(jù)權(quán)利要求6至8中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X6 3’， 其中a)X1 為 A，X2 為 G，X3 為 S，X4 為 S，X5 為 C，且 X6 為 U 或 b)X1不存在，X2為G，X3為S，X4為S，X5為C，且X6為U或 CU1為A，X2為G，X3為S，X4為S，X5為C，且X6不存在或 (I)X1不存在，X2為G，X3為S，X4為S，X5為C，且X6不存在。
10.根據(jù)權(quán)利要求6至9中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中 a)所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’AGCGUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACG⑶3’或 b)所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’GCGUG3’且第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACGC 3’。
11.根據(jù)權(quán)利要求6至8中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X63’， 其中 a) X1不存在，X2不存在，X3為S，X4為S，X5為C，且X6不存在或 b)X1不存在，X2為G，X3為S，X4為S，X5不存在，且X6不存在或 c)X1不存在，X2不存在，X3為S，X4為S，X5不存在，且X6不存在。
12.根據(jù)權(quán)利要求6至8和11中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中 a)所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’CGUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACG 3’或 b)所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’GCUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CAGC 3’或 c)所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’GGUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACC 3’，優(yōu)選地 所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’CGUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CACG 3’。
13.根據(jù)權(quán)利要求6至8中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ X1X2X3SUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CASX4X5X63’， 其中 X1不存在，X2不存在，X3為S或不存在，X4為S或不存在，X5不存在，且X6不存在。
14.根據(jù)權(quán)利要求6至8和13中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中 所述第一末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ GUG 3’且所述第二末端核苷酸鏈段包含核苷酸序列5’ CAC 3’。
15.根據(jù)權(quán)利要求4至14中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述中心核苷酸鏈段為結(jié)合.1-磷酸鞘氨醇所必需。
16.根據(jù)權(quán)利要求6至15中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中 所述第一末端核苷酸鏈段和所述第二末端核苷酸鏈段任選彼此雜交，其中在雜交后形成雙鏈結(jié)構(gòu)。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的核酸分子，其中所述雙鏈結(jié)構(gòu)由三至六個(gè)堿基對(duì)組成。
18.根據(jù)權(quán)利要求I至17中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ.ID. No 12至26、41和42中的任一者的核苷酸序列，優(yōu)選根據(jù)SEQ. ID. No 12、13、15、18、19、.23至26、41和42中的任一者的核苷酸序列，更優(yōu)選根據(jù)SEQ ID No 12、18、23、24、41和42中的任一者的核苷酸序列。
19.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ.ID. NO. 18的核苷酸序列或與其同源的核酸分子，其中同源性為至少85%。
20.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ.ID. NO. 41的核苷酸序列或與其同源的核酸分子，其中同源性為至少85%。
21.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ.ID. NO. 42的核苷酸序列或與其同源的核酸分子，其中同源性為至少85%。
22.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中相較于參照核酸分子，所述核酸分子的親和力增加，其中所述參照核酸分子包含根據(jù)SEQ. ID. NO. 18的核苷酸序列且其中所述參照核酸分子由核糖核苷酸組成，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ. ID. NO. 18的核苷酸序列且其中根據(jù)SEQ. ID. No. 18的所述核苷酸序列的一個(gè)或多個(gè)核苷酸為脫氧核糖核苷酸而非核糖核苷酸。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ.ID. No 27至37、39和40中的任一者的核苷酸序列，優(yōu)選根據(jù)SEQ. ID. No 30、34至37、39和40中的任一者的核苷酸序列，更優(yōu)選根據(jù)SEQ. ID. No. 36、37、39和40中的任一者的核苷酸序列。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含根據(jù)SEQ.ID. NO. 36的核苷酸序列或與其同源的核酸分子，其中同源性為至少85%，其中所述同源核酸包含核糖核苷酸和至少一個(gè)脫氧核糖核苷酸。
25.根據(jù)權(quán)利要求I至24中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含修飾基團(tuán)，其中相較于不包含所述修飾基團(tuán)的核酸，包含所述修飾基團(tuán)的所述核酸分子自生物體的排泄率降低。
26.根據(jù)權(quán)利要求I至24中任一項(xiàng)所述的核酸分子分子，其中所述核酸分子包含修飾基團(tuán)，其中相較于不包含所述修飾基團(tuán)的核酸分子，包含所述修飾基團(tuán)的所述核酸分子在生物體中的保留時(shí)間增加。
27.根據(jù)權(quán)利要求25和26中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述修飾基團(tuán)選自包含生物可降解和非生物可降解修飾的組，所述修飾基團(tuán)優(yōu)選選自包含聚乙二醇、直鏈聚乙二醇、支鏈聚乙二醇、羥乙基淀粉、肽、蛋白質(zhì)、多糖、固醇、聚氧化丙烯、聚氧基酰胺化物和聚(2-羥乙基)-L-谷氨酰胺的組。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的核酸分子，其中所述修飾基團(tuán)為聚乙二醇，優(yōu)選由直鏈聚乙二醇或支鏈聚乙二醇組成，其中所述聚乙二醇的分子量?jī)?yōu)選為約20,OOODa至約120，OOODa、更優(yōu)選約 30，OOODa 至約 80，OOODa 且最優(yōu)選約 40，OOODa0
29.根據(jù)權(quán)利要求27所述的核酸分子，其中所述修飾基團(tuán)為羥乙基淀粉，其中優(yōu)選地，所述羥乙基淀粉的分子量為約50kDa至約lOOOkDa、更優(yōu)選約IOOkDa至約700kDa且最優(yōu)選200kDa 至 500kDa。
30.根據(jù)權(quán)利要求25至29中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述修飾基團(tuán)通過連接子偶合于所述核酸分子，其中所述連接子優(yōu)選為生物可降解連接子。
31.根據(jù)權(quán)利要求25至30中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述修飾基團(tuán)偶合于所述核酸分子的5’末端核苷酸和/或3’末端核苷酸和/或偶合于所述核酸分子的介于所述核酸分子的5’末端核苷酸與所述核酸分子的3’末端核苷酸之間的核苷酸。
32.根據(jù)權(quán)利要求25至31中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述生物體為動(dòng)物或人體，優(yōu)選人體。
33.根據(jù)權(quán)利要求I至32中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核苷酸或形成所述核酸分子的所述核苷酸為L(zhǎng)-核苷酸。
34.根據(jù)權(quán)利要求I至33中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子為L(zhǎng)-核酸。
35.根據(jù)權(quán)利要求I至34中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含至少一個(gè)能夠結(jié)合I-磷酸鞘氨醇的結(jié)合部分，其中所述結(jié)合部分由L-核苷酸組成。
36.根據(jù)權(quán)利要求I至35中任一項(xiàng)所述的核酸分子，所述核酸分子用于治療和/或預(yù)防疾病的方法中。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的核酸分子，其中通過抑制血管生成和/或纖維化來治療或改善所述疾病。
38.根據(jù)權(quán)利要求36和37中一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述疾病為眼病，所述眼病優(yōu)選選自包含以下的組年齡相關(guān)的黃斑變性、伴有糖尿病性黃斑水腫的糖尿病性視網(wǎng)膜病變、年齡相關(guān)的黃斑變性或糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的視網(wǎng)膜色素上皮脫離、增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變和年齡相關(guān)的黃斑變性或糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的視網(wǎng)膜纖維化。
39.根據(jù)權(quán)利要求36所述的核酸分子，其中通過抑制血管生成和/或增殖來治療或改善所述疾病。
40.根據(jù)權(quán)利要求36和39中一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述疾病為癌癥，所述癌癥優(yōu)選選自包含乳癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、諸如前列腺增生的增生的組。
41.根據(jù)權(quán)利要求36所述的核酸分子，其中所述疾病為炎性疾病，其中所述炎性疾病選自包含自體免疫性疾病、肺炎、敗血癥和諸如呼吸器誘發(fā)的肺損傷的創(chuàng)傷的組。
42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的核酸分子，其中所述自體免疫性疾病選自包含多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、哮喘和炎性腸病的組。
43.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含如權(quán)利要求I至36中的任一項(xiàng)所定義的核酸分子和任選另一組分，其中所述另一組分選自包含藥學(xué)上可接受的賦形劑、藥學(xué)上可接受的載體和藥學(xué)活性劑的組。
44.根據(jù)權(quán)利要求43所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物包含如權(quán)利要求I至36中的任一項(xiàng)所定義的核酸分子和藥學(xué)上可接受的載體。
45.一種根據(jù)權(quán)利要求I至36中任一項(xiàng)所述的核酸分子的用途，所述核酸分子用于制造藥劑。
46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的用途，其中所述藥劑用于人醫(yī)學(xué)中或用于獸醫(yī)學(xué)中。
47.一種根據(jù)權(quán)利要求I至36中任一項(xiàng)所述的核酸分子的用途，所述核酸分子用于制造診斷工具。
48.根據(jù)權(quán)利要求45所述的用途，其中所述藥劑用于治療和/或預(yù)防眼病、癌癥或炎性疾病。
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的用途，其中所述眼病選自包含以下的組年齡相關(guān)的黃斑變性、伴有糖尿病性黃斑水腫的糖尿病性視網(wǎng)膜病變、年齡相關(guān)的黃斑變性或糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的視網(wǎng)膜色素上皮脫離、增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變和年齡相關(guān)的黃斑變性或糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的視網(wǎng)膜纖維化。
50.根據(jù)權(quán)利要求48所述的用途，其中所述癌癥選自包含乳癌、卵巢癌、黑素瘤、肺癌、諸如前列腺增生的增生的組。
51.根據(jù)權(quán)利要求48所述的用途，其中所述炎性疾病選自包含自體免疫性疾病、肺炎、敗血癥和諸如呼吸器誘發(fā)的肺損傷的創(chuàng)傷的組。
52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的核酸分子，其中所述自體免疫性疾病選自包含多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、哮喘和炎性腸病的組。
53.一種包含根據(jù)權(quán)利要求I至36中任一項(xiàng)所述的核酸分子和脂質(zhì)的復(fù)合物，其中所述復(fù)合物優(yōu)選為結(jié)晶復(fù)合物。
54.根據(jù)權(quán)利要求53所述的復(fù)合物，其中脂質(zhì)為磷脂，所述磷脂優(yōu)選為I-磷酸鞘氨醇。
55.一種根據(jù)權(quán)利要求I至36中任一項(xiàng)所述的核酸分子的用途，所述核酸分子用于檢測(cè)脂質(zhì)。
56.根據(jù)權(quán)利要求55所述的用途，其中所述脂質(zhì)為磷脂，所述磷脂優(yōu)選為I-磷酸鞘氨醇。
57.一種用于篩選活性由脂質(zhì)或所述脂質(zhì)的類似物介導(dǎo)的拮抗劑的方法，所述方法包含下列步驟 -提供活性由所述脂質(zhì)和/或所述脂質(zhì)的類似物介導(dǎo)的候選拮抗劑， -提供如權(quán)利要求I至36中的任一項(xiàng)所定義的核酸， -提供在活性由所述脂質(zhì)和/或所述脂質(zhì)的類似物介導(dǎo)的拮抗劑存在下提供信號(hào)的測(cè)試系統(tǒng)，以及 -確定活性由所述脂質(zhì)介導(dǎo)的所述候選拮抗劑是否為活性由所述脂質(zhì)和/或所述脂質(zhì)的類似物介導(dǎo)的拮抗劑。
58.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中所述脂質(zhì)為磷脂，所述磷脂優(yōu)選為I-磷酸鞘氨醇。
59.一種用于檢測(cè)脂質(zhì)的試劑盒，所述試劑盒包含根據(jù)權(quán)利要求I至36中任一項(xiàng)所述的核酸分子，其中所述脂質(zhì)優(yōu)選為磷脂，其中所述磷脂更優(yōu)選為I-磷酸鞘氨醇。
60.一種用于檢測(cè)樣品中的如權(quán)利要求I至36中的任一項(xiàng)所定義的核酸的方法，其中所述方法包含以下步驟 a)提供捕獲探針，其中所述捕獲探針至少部分互補(bǔ)于如權(quán)利要求I至36中的任一項(xiàng)所定義的所述核酸分子的第一部分；和檢測(cè)探針，其中所述檢測(cè)探針至少部分互補(bǔ)于如權(quán)利要求I至36中的任一項(xiàng)所定義的所述核酸分子的第二部分，或替代地，所述捕獲探針至少部分互補(bǔ)于如權(quán)利要求I至36中的任一項(xiàng)所定義的所述核酸分子的第二部分且所述檢測(cè)探針至少部分互補(bǔ)于如權(quán)利要求I至36中的任一項(xiàng)所定義的所述核酸分子的第一部分； b)單獨(dú)或組合添加所述捕獲探針和所述檢測(cè)探針至含有如權(quán)利要求I至36中的任一項(xiàng)所定義的所述核酸分子或假定含有如權(quán)利要求I至36中的任一項(xiàng)所定義的所述核酸分子的樣品中； c)使所述捕獲探針和所述檢測(cè)探針同時(shí)或以任何順序依序與如權(quán)利要求I至36中的任一項(xiàng)所定義的所述核酸分子或其一部分反應(yīng)； d)任選檢測(cè)所述捕獲探針是否與步驟a)中提供的如權(quán)利要求I至36中的任一項(xiàng)所定義的所述核酸分子雜交；以及 e)檢測(cè)步驟c)中形成的由如權(quán)利要求I至36中的任一項(xiàng)所定義的所述核酸分子和所述捕獲探針及所述檢測(cè)探針組成的復(fù)合物。
61.根據(jù)權(quán)利要求60所述的方法，其中所述檢測(cè)探針包含檢測(cè)工具，和/或其中所述捕獲探針固定于載體，優(yōu)選固體載體。
62.根據(jù)權(quán)利要求60或61所述的方法，其中自反應(yīng)移除不為所述復(fù)合物的一部分的任何檢測(cè)探針以使在步驟e)中僅檢測(cè)為所述復(fù)合物的一部分的檢測(cè)探針。
63.根據(jù)權(quán)利要求60至62中任一項(xiàng)所述的方法，其中步驟e)包含以下步驟比較當(dāng)所述捕獲探針和所述檢測(cè)探針在如權(quán)利要求I至36中的任一項(xiàng)所定義的所述核酸分子或其一部分存在下雜交時(shí)由所述檢測(cè)工具產(chǎn)生的信號(hào)與在不存在所述核酸或其一部分下由所述檢測(cè)工具產(chǎn)生的信 號(hào)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種能夠結(jié)合脂質(zhì)的核酸分子。
文檔編號(hào)A61K31/7088GK102906265SQ201180024560
公開日2013年1月30日 申請(qǐng)日期2011年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月21日
發(fā)明者W·普爾施克, S·克魯斯曼, K·布馳尼爾, F·施沃布爾, K·赫利格 申請(qǐng)人:諾松制藥股份公司