專利名稱：一種雞傳染性支氣管炎疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于家禽疫苗技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雞傳染性支氣管炎活疫苗。
背景技術(shù)：
雞傳染性支氣管炎(IB)是由傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的一種急性高度接觸性呼吸道疾病，以氣管啰音、咳嗽、打噴嚏；幼雞流鼻涕，產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋量減少和蛋的品質(zhì)下降為特征；患病的雞常因呼吸道、腎臟或消化道感染而引起死亡。本病于1931年首先由Schalk等報(bào)道于美國(guó)，1936年由Beach和Hudson確定本病的病原為病毒。至今本病在世界范圍內(nèi)廣泛流行，給養(yǎng)雞業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重危害。在我國(guó)，鄺榮祿(1972)在廣東首次發(fā)現(xiàn)本??；到上世紀(jì)70年代后期，鄭福榮等在杭州、吳志達(dá)等在上海、艾國(guó)光等在北京、辛朝安等在廣 州分別自種用雞群中分離出IBV。榮駿弓等(1997)在患有腺胃腫大的病雞中分離到腺胃型雞傳染性支氣管炎病毒D971株，用該毒株回歸SPF雛雞引起典型腎炎及腺胃炎病變，并從人工感染SPF雛雞中回收到雞傳染性支氣管炎病毒。王玉東、范根成等(1998)在山東省某患有腺胃腫大發(fā)病雞群中采集病料，通過(guò)雞胚連續(xù)傳5 6代，經(jīng)電鏡觀察、動(dòng)物回歸和免疫保護(hù)試驗(yàn)、用氣管環(huán)組織培養(yǎng)進(jìn)行理化特性測(cè)定、毒價(jià)測(cè)定、中和試驗(yàn)等，證明目前流行的以腺胃腫大為主要特征的傳染病的病原是冠狀病毒，將該毒株命名為腺胃型雞傳染性支管炎病毒QX株。在歐洲，首先分別于2001年俄羅斯東部及2002年俄羅斯西部分離到IBV類QX株(Bochkov etal，2006)，該毒株能引起雞患腺胃炎、腎炎，與QX株相似。從2003年起許多歐洲國(guó)家相繼分離到IBV類QX株包括德國(guó)、荷蘭、比利時(shí)、法國(guó)、意大利(Worthington etal, 2008 ；Monne et al, 2008)、波蘭(Domanska-Blicharz et al, 2006)、英國(guó)(Gough etal，2008)和西班牙(Dolz et al，2009)。各種相關(guān)研究報(bào)道表明整個(gè)歐洲地區(qū)都有類QX株病毒的存在。顯然，IB類QX株對(duì)于禽養(yǎng)殖來(lái)說(shuō)是很大的威脅，而目前尚無(wú)專門針對(duì)IB類QX株的疫苗。國(guó)外學(xué)者將類QX毒株在雞胚上連續(xù)傳代80余代致弱的IB L1148毒株制成IB類QX株的活疫苗，并進(jìn)行相關(guān)的效力和安全性試驗(yàn)。表明對(duì)于SPF雞亦或是攜有母源抗體的雞，經(jīng)IB LI 148株制成的活苗免后對(duì)類QX株D388的攻毒都能提供有效保護(hù)。免疫接種是防治雞傳染性支氣管炎的最有效手段。目前，國(guó)內(nèi)外用于預(yù)防腺胃型傳染性支氣管炎疫苗的研究較多，但均尚未商品化。同時(shí)由于IBV血清型眾多，市場(chǎng)上一直未有交叉保護(hù)力好的弱毒株，腺胃型IB得不到有效控制。因此，篩選獲得新的具有較好保護(hù)力的IB弱毒株，并制備疫苗就顯得尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種雞傳染性支氣管炎活疫苗，即由新的腺胃型雞傳染性支氣管炎弱毒疫苗株作為抗原制備的疫苗，本發(fā)明的疫苗對(duì)目前中國(guó)流行腺胃型雞傳染性支氣管炎病毒的攻擊能夠提供良好的免疫保護(hù)效力。本發(fā)明的疫苗，由抗原和疫苗輔劑組成，其中抗原為保藏編號(hào)為CGMCCNo. 6752的雞傳染性支氣管炎病毒株。上述的疫苗的制備方法，是將雞傳染性支氣管炎病毒接種雞胚后，收獲胚液獲得病毒擴(kuò)大培養(yǎng)液；然后將雞傳染性支氣管炎病毒擴(kuò)大培養(yǎng)液加入疫苗輔劑制成的。所述的疫苗輔劑為蔗糖和明膠，其在疫苗中的終濃度分別為5%和1%。本發(fā)明制備的疫苗可預(yù)防腺胃型雞傳染性支氣管炎。而且，組成本發(fā)明篩選的雞傳染性支氣管炎病毒為多次傳代獲得的弱毒株，減少了現(xiàn)有傳染性支氣管炎病毒作為抗原所帶來(lái)的副作用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明精神和范圍的前提下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。一、本發(fā)明所用到的雞傳染性支氣管炎弱毒YB160株的篩選使用l(Tll日齡SPF雞胚對(duì)傳染性支氣管炎強(qiáng)毒進(jìn)行連續(xù)傳代致弱，每代通過(guò)尿囊腔接種4枚SPF雞胚，連傳至160代，進(jìn)行致弱評(píng)價(jià)。取10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160傳代接種的病毒株感染I日齡的SPF雞。結(jié)果從第80代病毒株開(kāi)始無(wú)死亡雞，第90代毒株接種雞開(kāi)始無(wú)眼觀病變，第130代接種雞開(kāi)始無(wú)組織學(xué)病變。說(shuō)明IBV第130代已經(jīng)完全致弱，對(duì)雞只具有良好的安全性。同時(shí)用本發(fā)明毒株130、140、150160代毒分別免疫3日齡SPF雞,于免疫后14日，用同源強(qiáng)毒攻擊。免疫組分毒率0/10 1/10，保護(hù)率9/10 10/10，對(duì)照組分毒率10/10。結(jié)果說(shuō)明本發(fā)明毒株具有良好的免疫保護(hù)性。為了便于同以前毒株區(qū)分，將傳代160代弱化的雞胚毒定為原始種子El代，并將該致弱毒株命名為ΥΒ160株。本發(fā)明篩選的雞傳染性支氣管炎病毒(Avian infectiousbronchitis virus) YB160株，該病毒株于2012年10月31日保藏在北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西 路I號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC No. 6752。二、IBV YB160株的安全性檢測(cè)毒力返強(qiáng)試驗(yàn)將保藏編號(hào)為CGMCC No. 6752的弱毒株El代(YB160株)在SPF雞體上人工感染和同居感染分別連續(xù)傳5代(E2-E5)，試驗(yàn)雞均一切正常，接種后5天剖檢氣管、腺胃、腎臟等均未見(jiàn)肉眼病理變化；試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)病毒分離氣管棉拭子和腺胃第4代起分不到病毒，腎臟從第3代起分不到病毒，肝臟從第2代起分不到病毒。試驗(yàn)雞氣管、腺胃、腎臟等組織勻衆(zhòng)中分尚不出病毒。器官病毒分尚率不同，氣管、腺胃病毒分尚率較聞，說(shuō)明該毒株主要在氣管、腺胃兩個(gè)器官增殖。隨著代次的增加病毒向外排泄也逐漸減少，分毒率逐漸降低。水平感染試驗(yàn)也出現(xiàn)人工感染同樣的規(guī)律，只是同居感染的同代次分毒率相對(duì)人工感染低。以上試驗(yàn)結(jié)果證明該毒株無(wú)論人工感染還是水平傳播感染在雞體連續(xù)傳代，均未見(jiàn)毒力返強(qiáng)現(xiàn)象，遺傳性穩(wěn)定，符合雞傳染性支氣管炎弱毒疫苗株無(wú)毒力返強(qiáng)的標(biāo)準(zhǔn)，可以作為疫苗毒株進(jìn)行商品化開(kāi)發(fā)。IBV YB160株毒種安全性試驗(yàn)取 YB160 株的E2、E4、E7、E10、E13 代毒種以 IO5 ciEID5tl滴鼻I滴(約O. 03ml)，分別接種1、3日齡SPF雞，連續(xù)觀察10日。結(jié)果接種雞只均健活，均無(wú)任何異常反應(yīng)。結(jié)果見(jiàn)表1、2。
表IIBV YB160株毒種的安全性試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種雞傳染性支氣管炎活疫苗，由抗原和疫苗凍干保護(hù)劑組成，其中抗原為保藏編號(hào)為CGMCC No. 6752的雞傳染性支氣管炎病毒株。
2.如權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于所述的疫苗凍干保護(hù)劑為蔗糖和明膠，其在疫苗中的終濃度分別為5%和1%。
3.權(quán)利要求1所述的疫苗的制備方法，是將雞傳染性支氣管炎病毒接種雞胚后，收獲胚液獲得病毒擴(kuò)大培養(yǎng)液；將雞傳染性支氣管炎病毒擴(kuò)大培養(yǎng)液加入疫苗凍干保護(hù)劑制成的。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述的疫苗凍干保護(hù)劑為蔗糖和明膠，其在疫苗中的終濃度分別為5%和1%。
5.權(quán)利要求1所述的疫苗用于預(yù)防雞傳染性支氣管炎病。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種雞傳染性支氣管炎活疫苗，由抗原和疫苗輔劑組成，其中抗原為保藏編號(hào)為CGMCC No.6752的雞傳染性支氣管炎病毒株。本發(fā)明制備的疫苗可預(yù)防腺胃型雞傳染性支氣管炎。而且，組成本發(fā)明篩選的雞傳染性支氣管炎病毒為多次傳代獲得的弱毒株，減少了現(xiàn)有傳染性支氣管炎病毒作為抗原所帶來(lái)的副作用。
文檔編號(hào)A61K39/215GK103007272SQ20121059449
公開(kāi)日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月31日
發(fā)明者宋新宇, 范根成, 杜元釗, 王紅, 李曉林, 郭偉偉, 馬爽 申請(qǐng)人:青島易邦生物工程有限公司