專利名稱：用于治療與白三烯有關的疾病的酰胺連接的吡啶-苯甲酸衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及用于治療與白三烯有關的疾病的酰胺連接的吡啶-苯甲酸衍生物。這些化合物特別用于治療由羥基白三烯，尤其是LTB4和LTB4-促效藥活性物質引起的疾病。
通稱為白三烯的生物活性脂類對于呼吸，心血管和胃腸系統(tǒng)產生藥理作用。白三烯通常分為兩個亞類，即肽白三烯(白三烯C4、D4和E4)和羥基白三烯(白三烯B4)。本發(fā)明主要涉及羥基白三烯(LTB4)，但并不局限于這種特定的白三烯。
肽白三烯與生物應答有關，此生物應答是與“過敏反應的緩慢應答物質”(SRS-A)相聯(lián)系的。這種應答在體內表現(xiàn)為延長支氣管收縮，在心血管中的作用，如冠狀動脈血管收縮和許多其他生物應答。肽白三烯的藥理學包括平滑肌收縮、心肌阻抑、增大血管滲透性和增加粘液的產生。
比較起來，LTB4是通過刺激白細胞和淋巴細胞功能而產生其生物學作用。它刺激多形核白細胞(PMNS)的趨化性，化學激動作用和聚集。
嚴格說來，它們與傳遞心血管的、肺的、皮膚的、腎的、過敏性的及炎性的許多種類的疾病有關，這些疾病包括哮喘，成年人呼吸窘迫綜合癥，膀胱的纖維變性，牛皮癬以及腸炎疾病。
白三烯B4(LTB4)最初是由Borgeat和Samuelsson在1979年描述的，以后由Corey及其合作者證實為5(S)，12(R)-二羥基-(Z，E，E，Z)-6，8，10，14-二十烷四烯酸。
由LTA4的酶催化水解所得的產物就是花生四烯酸串聯(lián)。已經發(fā)現(xiàn)它可由柱狀細胞，多形核白細胞，單核細胞和巨噬細胞產生。已經表明LTB4在體內是PMN白細胞的有效的刺激物，從而導致增加趨化性的和化學激動作用的遷移、粘連、聚集、脫粒，超氧化物的形成及細胞毒性。LTB4的作用是通過白細胞表面上具有高度立體定向性的特殊的受體部位來傳遞的。對于人的血液PMN白細胞之藥理學研究表明存在兩類LTB4特異性受體，它們是和肽趨化因子的特異性受體分開的。每類受體都可以被連接到分離類的PMN白細胞功能基上。鈣遷移作用包括兩種機理。
LTB4已被證實為體內炎癥的傳遞質。除了被發(fā)現(xiàn)在具有嚴重的肺機能不良的人的肺灌洗中其濃度增大之外，它還與狗的氣道過度應答有關。
通過拮抗LTB4的作用，或拮抗其他位于器官末端上的藥理活性傳遞質如氣道平滑肌的作用，本發(fā)明的化合物和藥物組合物對治療包括人或動物受治療者的疾病是有價值的，在這些疾病中白三烯是一個因子。某些這種化合物還可以抑制5-脂氧合酶或者他們是LTD4拮抗劑。
本發(fā)明的化合物或其藥物上可接受的鹽或N-氧化物由通式(Ⅰ)表示，
式中T為酰胺連接基
其中的羰基碳與吡啶環(huán)連接;
R為C1至C20脂族基、未取代或取代的苯基C1至C10脂族基，其中取代苯基有一個或多個選自低級烷氧基、低級烷基、三鹵代甲基，或鹵素的基團，或者R為C1至C20脂族-O-，或R為未取代或取代的苯基C1至C10脂族-O-，其中取代苯基有一個或多個低級烷氧基、低級烷基、三鹵代甲基，或鹵素基團;
R1為R4、-(C1至C5脂族基)R4，-(C1至C5脂族基)CHO，-(C1至C5脂族基)CH2OR8，-CH2OH或-CHO;
R2為氫、COR5，其中R5為-OH，藥物上可接受的形成酯的基-OR6，或OX，其中X為藥物上可接受的陽離子，或者R5為-N(R7)2，其中R7為H，或1至10個碳原子的脂族基，4至10個碳原子的環(huán)烷基-(CH2)n-基，其中n為0-3，或者兩個R7連在一起形成具有4至6個碳原子的環(huán)，或者R2為NHSO2R9，其中R9為-CF3，C1至C6烷基或苯基;
R3為氫，低級烷氧基，鹵素，-CH，COR5，或OH;
R4為COR5，其中R5為-OH，藥物上可接受的形成酯的基-OR6，或OX，其中X為藥物上可接受的陽離子，或R5為-N(R7)2，其中R7為H，1至10個碳原子的脂族基，4至10個碳原子的環(huán)烷基-(CH2)n-基，其中n為0-3，或者兩個R7連在一起形成具有4至6個碳原子的環(huán);
R8為氫，C1至C6烷基，或C1至C6酰基。
另一方面，本發(fā)明包括含有這些化合物和藥物上可接受的賦形劑的藥物組合物。
治療與白三烯特別是LTB4有關的或由它們所引起的疾病，或與處于器官末端的藥理活性傳遞質有關的疾病包括在本發(fā)明范圍之內。這種治療可以通過服用一種或多種單獨的或與藥物上可接受的賦形劑結合在一起的通式Ⅰ化合物來進行。
又一方面，本發(fā)明涉及制備通式Ⅰ化合物的方法，該方法在下面給出的反應圖解及列出的實施例中被說明。
下列定義用于描述本發(fā)明并在此陳述發(fā)明人認為是他們的發(fā)明。
“脂族的”是指包括飽和與不飽和的基團。它包括直鏈和支鏈，飽和的或單或多個不飽和鏈，其中雙鍵和三鍵可以任意組合形式存在。術語“低級烷基”是指以任何異構形式但特別是正構或直鏈形式的1至6個碳原子的烷基?！暗图壨檠趸笔侵傅图壨榛?O-基團。“酰基”是指具有末端羰基碳的基團?！胞u素”是指氟、氯、溴或碘。苯環(huán)可以用一個或多個這些基團取代。多取代基可以相同或不同，如其中有三個氯基團，或氯與烷基的組合，而且后者這種組合在氯/烷基方式中可以有不同的烷基。
在R2和R3中的術語“藥物上可接受的形成酯的基”包括由存在于這些化合物中的酸官能基形成的所有酯。所得到的酯在其用于制藥用途中為可接受的。因此，這意味著單或二酯將保持母體化合物的生物活性，并且在其應用及用于治療疾病中將沒有不適宜的或有害的作用。這些酯是例如與下面由-OR6所代表的基團之一形成的那些酯，其中R6是C1至C10烷基、苯基-C1-C6烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、烷基芳基烷基、氨基烷基、2，3-二氫化茚基、新戊酰氧甲基、乙酰氧甲基、丙酰氧甲基、甘氨酰氧甲基、苯基甘氨酰氧甲基，或噻吩甘氨酰氧甲基。芳基包括苯基和萘基，或雜芳基如呋喃基、噻吩基、咪唑基、三唑基或四唑基。最優(yōu)選的形成酯的基是其中R6為烷基，尤其是1至10個碳的烷基〔即CH3-(CH2)n-，其中的n為0-9〕或苯基-(CH2)n-，其中n為0-4的那些基團。
這些化合物的藥物上可接受的鹽也包括在本發(fā)明范圍之內。這些鹽在其制藥應用中為可接受的。因此這意味著鹽將保持母體化合物的生物活性，并且在其應用及用于治療疾病中將沒有不適宜的或有害的作用。
藥物上可接受的鹽可以按一般方法制備。在具有堿部分的酸加成鹽的情況下，是在合適的溶劑中使母體化合物與過量的有機或無機酸反應，或當R4為OH時與過量的有機或無機堿反應。具有代表性的酸有氫氯酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、馬來酸、琥珀酸或甲磺酸。陽離子鹽可由堿金屬堿，如鈉、鉀、鈣、鎂、鋅、銅等的堿以及氨容易地制備。有機堿包括單或二取代胺、乙二胺、氨基酸、咖啡堿、緩血酸胺、緩血酸胺化合物、三乙胺、哌嗪等等。
吡啶環(huán)氮的氧化物可以通過本領域已知的方法和本文所說明的方法來制備。這些被認為是本發(fā)明的一部分。
如果通過取代基的某些組合在本發(fā)明化合物中能夠產生手性中心或其他形式的異構中心，則所有這些異構體形式均包括在本發(fā)明范圍之內。帶有手性中心的化合物可以外消旋混合物的形式給藥，或將外消旋物分離并單獨使用個別的對映體。
作為白三烯拮抗劑，這些化合物可用于治療各種與白三烯特別是LTB4有關的疾病，或其起因或侵襲是由白三烯特別是LTB4引起的疾病。因此，期望這些化合物可用于治療過敏性疾病，包括肺的和非肺種類的疾病。例如，這些化合物可用于抗原誘導的過敏反應。它們用于治療哮喘和過敏性鼻炎。這些化合物也可用來治療眼的疾病，如眼色素層炎和過敏性結膜炎。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物中的R為烷氧基，特別是8至15個碳的烷氧基，或取代或未取代的苯基-C1至C10-脂族基-O-;R1為-(C1至C5脂族基)R4或-(C1至C5脂族基)CH2OR3;并且R2為COOH或其堿金屬鹽或NHSO2R9，其中R9為-CF3，C1至C6烷基或苯基。本發(fā)明較優(yōu)選的化合物中的R為8至15個碳原子的烷氧基或烷氧基取代的苯基-C1至C8鏈烯氧基或C1至C8烷氧基;R1為-COR5，-CH2-CH2COR5或-CH＝CH-COR5;R2為-COOH或NHSO2R9，特別是其中R9為CF3;R2為氫或氯。
最優(yōu)選的化合物列于表Ⅱ中。
表Ⅱ
＊羰基碳被取代于吡啶環(huán)上。
＊＊反式構型。
合成這些化合物可以通過如下列反應圖解中所示的中間體和試劑進行制備。這特定的一組中間體用來說明一般的方法。反應圖解1說明了制備用于制備R基團化合物的方法。為了制備R基團，其他圖解使用的原料的制備在圖解1中描述，或得自商業(yè)來源的中間體，然后說明制備通式Ⅰ化合物的方法。
通式Ⅰ的R基團是從化學品供應商店買到的或可以通過在反應圖解Ⅰ中所描述的兩種方法之一進行制備。
反應圖解Ⅰ(a)說明了制備不飽和苯基-脂族R基的方法。
反應圖解Ⅰ(a)
僅管在此說明的是甲氧苯基化合物，但這一系列步驟及試劑可用于制備由R所表示的其他取代的苯基-ω-脂族基。起始原料苯甲醛市場上可以買到或可用已知方法容易地進行制備。
為制備酸(a)，首先在惰性氣氛下將烷基硅雜疊氮化物加入惰性溶劑中。然后加入磷鎓鹽。此填加是在約室溫下進行的。經過短暫的混合后，該混合物通常為懸浮液。在約室溫下慢慢加入苯甲醛。使用稍微摩爾過量的磷鎓鹽。在約室溫下經附加的短暫攪拌后，用水使反應混合物驟冷。將溶液酸化并用合適的有機溶劑萃取此酸。根據(jù)需要進一步使用一般的分離和純化方法。
通過使用還原劑還原上面的酸制得醇?？梢允褂脷浠X鋰或類似的還原劑，反應條件可以根據(jù)進行還原的需要而變化。
在惰性溶劑中使用對甲苯磺酰氯和堿如吡啶來制備對甲苯磺酸酯。合適的條件包括在約室溫下進行該反應1至5小時?？梢灾苽湓诠δ苌项愃朴趯妆交撬狨サ钠渌线m的離去基團，并用作將R部分加到吡啶環(huán)上的方法。
反應圖解Ⅰ(b)概述了制備烷氧苯基烷基R基團的一種方法。該方法可用于制備苯基為脂族鏈上的ω基團的其他R基團，包括取代的含苯基的基團。
反應圖解Ⅰ(b)
在這些實例中的ω-炔-1-醇是市場上買不到的，它的制備可由相應的3-炔-1-醇通過用強堿處理該醇來進行。這里使用堿金屬酰胺。然后將醇保護起來以便使所需的苯基加在未端三鍵上。在此例中形成甲硅烷基醚;它說明了一般情況。鹵代苯基加合物被用來將苯基加在三鍵上。這里三鍵可被還原，最適宜的是用催化的方法，如鈀/碳和氫氣。另一種方法是將三鍵保留，中間體按照所說明的進行反應得到對甲苯磺酸酯。將甲硅烷基除去并將得到的醇轉化為對甲苯磺酸酯或別的基團，該基團應具有足夠的反應活性，以便在以后這些化合物的合成中能很容易地形成醚。
在下列反應圖解中使用在反應圖解Ⅰ中制備的化合物和買到的或用已知方法制備的其他化合物，可以按照下面反應圖解中概述的反應順序制備通式Ⅰ化合物。而且，這些圖解用具體的實例說明了如何制備這些化合物的一般方法。通過改變或改進此處說明的化學品，這些圖解可用于制備本發(fā)明公開的其它化合物。這種改變或改進將改變反應條件，如溫度、壓力、反應時間，試劑用量，等等。試劑可以被其等價物或類似的試劑取代，此等價物或類似的試劑將產生相同的或等價的產物。同樣地，也可以改變起始原料和中間體以適應制備具體化合物的需要。
在反應圖解2中列出了制備化合物的一種方法，其中酰胺連接基團的氮是連在苯環(huán)上。
反應圖解2
上述圖解說明了制備通式Ⅰ化合物的一種合成路線，其通式Ⅰ中的羧基碳是連在吡啶環(huán)上。3-羥基-2-(羥甲基)吡啶可在市場上買到或可以用公開的已知方法來制備。將此二醇中2-位羥甲基轉化為醛，然后轉化為3-烷氧基化合物，或者首先將3-羥基轉化為醚，然后將2-位羥甲基氧化為醛。氧化醇可以使用溫和的氧化劑很容易地進行;優(yōu)選二氧化錳，但其他氧化劑也能很好地用于此步驟中。在堿性條件下醚可以由相應的α-鹵代-R基團或象對甲苯磺酸酯類的化合物很容易地進行制備。
然后利用合適的正膦基內鎓鹽酯在通常用于這種反應的條件下將此3-取代-2-羧基醛(c)轉化為2-甲酯基乙烯基形式(d)。再將得到的酯用過酸處理來制備N-氧化物，此N-氧化物可用于制備吡啶酮(e)。該步驟是通過間-氯過氧苯甲酸加以說明的，但也可以使用其他類似的氧化劑。之后用三氟乙酸酐或類似的試劑進行N-氧化物的重排，生成2-吡啶酮(f)。
使2-吡啶酮轉化為酰胺是通過?；?-吡啶酮(g)，然后在一定的催化劑和一氧化碳的存在下，用所需的氨基苯甲酸酯(h)與該酯反應而進行的。以三氟甲磺酸酐為例說明?；襟E。酰胺化反應是通過在Pd(OAc)2、1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵存在下用一氧化碳鼓泡通過三氟甲磺酸酯溶液來進行的。然后將得到的二酯(ⅰ)用無機堿皂化使酯基水解。中和所得的鹽以便得到游離酸?？梢杂靡阎椒▽⒂坞x酸轉化為另一種酯或制備成相應的酰胺。
飽和的3-位取代基可由鏈烯烴類似物通過催化氫化很容易地進行制備。反應圖解3說明了這種方法。
反應圖解3
在經典的催化還原反應中利用重金屬催化劑和氫氣將二酯催化還原為(3a)。還原反應完成以后，如果需要二酸(3b)，可以使用堿使二酯水解。通過合適的氧化，還原、酯化、酰胺化反應或通過其他方法，每一化合物均能轉化為本發(fā)明的其他化合物。
這些化合物的碳類似物，即其中連接R基團到3-位上的原子為亞甲基的化合物可以按照在第4個流程圖中列出的步驟之順序進行制備。
反應圖解4
用相應的鏈烷醇和酸催化劑將3-羥基吡啶甲酸轉化為烷基酯。用三氟甲磺酸酐和吡啶將羥基轉化為三氟甲磺酸酯(4a)。然后用合適的烷基兒茶酚硼化物連上脂尾(4b)，所用的烷基兒茶酚硼化物是用鈀偶合條件(〔Pd(OAc)2〕)由1-十三碳烯和兒茶酚硼烷來制備的。再用適宜的氫化物，如氫化二異丁基鋁將烷基酯轉化為相應的醛。使該醛再進行威悌希(Wittig)烯化作用，例如用(三苯基膦內鎓鹽)乙酸甲酯。之后，用在上面的反應圖解2中概述的相同的一系列步驟將得到的吡啶基丙烯酸酯轉化為目的化合物。
反向的酰胺可以按照反應圖解5中給出的步驟之順序進行制備。
反應圖解5
用酸催化劑和相應的鏈烷醇將市場上可買到的3-羥基吡啶甲酸轉化為烷基酯。接著用例如1-碘代十二烷或類似的1-鹵代化合物在一般的條件下進行烷基化反應。該反應最好使用處于二甲基甲酰胺中的弱堿如K2CO3來進行。生成3-烷氧基衍生物。氧化吡啶的氮并重排所得的N-氧化物，生成2-吡啶酮。用過酸如3-氯過氧苯甲酸或類似的氧化劑可以很容易地進行氧化?？梢允褂迷诤线m溶劑如二甲基甲酰胺中的三氟乙酸酐進行N-氧化物(5a)的重排。
形成三氟甲磺酸酯是利用三氟甲磺酸酐和堿如吡啶來進行的。用疊氮化鈉進行的親核取代反應生成2-疊氮基吡啶衍生物(5b)。通過催化氫化將疊氮化物還原為胺。用氫化物如氫化二異丁基鋁還原烷基酯為醛。然后用威悌希(Wittig)反應制備2-氨基吡啶丙烯酸酯(5c)。例如，可使用(三苯基膦內鎓鹽)乙酸甲酯。?；?甲基間苯二酰氯)，接著用堿(LiOH、四氫呋喃、甲醇)將酯水解，得到目的酰胺。用本文說明的方法或本領域通常已知的方法，可以將這些化合物進一步轉化為酯，酰胺，鹽或由通式Ⅰ定義的類似的化合物。
制劑本發(fā)明的藥物組合物包括藥物載體或稀釋劑及一定量的通式(Ⅰ)化合物。該化合物以能進行生理反應的量而存在，或者以較小的量存在，這樣使使用者需服用二或多個單位的組合物來進行預期的治療。這些組合物可以配制為固體，液體或氣態(tài)形式。或者在給藥時可以將這三種形式之一轉變?yōu)榱硪环N形式，如當固體通過氣霧方式被提供時，或者當液體以噴霧或氣霧形式被提供時。
組合物和藥物的載體或稀釋劑的性質當然取決于預期的給藥途徑，如腸胃外的、局部的、口服的或通過吸入的方法。
對于腸胃外給藥，藥物組合物的形式為無菌注射液，如安瓿或含水的或無水的液體懸浮液。
對于局部給藥，藥物組合物的形式為適于眼、耳或鼻給藥的乳膏、軟膏、搽劑、洗劑、糊劑和滴劑。
對于口服給藥，藥物組合物的形式為片劑、膠囊劑、粉劑、丸劑、atroche、錠劑、糖漿劑、液體或乳劑。
當藥物組合物以溶液或懸浮液形式使用時，合適的藥物載體或稀釋劑的實例包括對于含水體系為水;對于非水體系為乙醇、甘油、丙二醇、玉米油、棉子油、花生油、芝麻油、液體石臘以及它們與水的混合物;對于固體體系為乳糖、高嶺土和甘露糖醇;對于氣霧體系為二氯二氟甲烷、氯三氟乙烷和壓縮的二氧化碳。除了藥物載體或稀釋劑外，本發(fā)明的組合物還可以包括其他組份，如穩(wěn)定劑、抗氧化劑、防腐劑、潤滑劑、懸浮劑、粘度調節(jié)劑，等等，只要附加的組份對于本發(fā)明組合物的治療作用無有害的影響。
所述的藥物制劑可以按照適宜于所需目的產物的藥劑師常用的方法進行制備。
通常，特別是對于哮喘的預防治療，組合物適宜的給藥形式是吸入法。因此對于利用一般的噴霧器給藥，組合物包括活性組份的水懸浮液或水溶液。用另一方法由加壓氣霧容器給藥時，組合物包括在一般的液化推進劑或壓縮氣體中的活性組份的懸浮液或溶液。對于由粉末吸入器給藥，組合物還包括用固體稀釋劑稀釋的固體活性組份。在上面的組合物中，載體或稀釋劑的量可以變化，但最好它是活性組份的懸浮液或溶液的較大的部分。當稀釋劑為固體時，它存在的量可以小于，等于或大于固體活性組份的量。
通常，將通式Ⅰ化合物以組合物的形式給藥于受治療者，該組合物包括無毒量的通式Ⅰ化合物，它足以產生抑制以白三烯為因子的疾病之癥狀。當以這種方式使用時，組合物的劑量選自每次給藥50mg至100mg活性組份的范圍。為了方便起見，以規(guī)定的日劑量每天等劑量給藥1至5次，所規(guī)定的日劑量選自約50mg至約5000mg。
公開的范圍之內還包括治療由LTB4傳遞的疾病的方法，該方法包括給受治療者服用治療有效量的通式Ⅰ化合物，優(yōu)選以藥物組合物的形式給藥。例如，通過服用有效量的通式Ⅰ化合物抑制由釋放傳遞質所產生的過敏性反應的癥狀。這被包括在公開的范圍之內?？梢愿鶕?jù)需要在合適的間隔下以劑量單位或以單一劑量進行給藥。通常，當特別需要減輕癥狀時將實施這種方法。然而，該方法也用來進行連續(xù)或預防治療。在本領域的技術范圍內通過常規(guī)試驗，由上面列出劑量范圍可以確定給藥的有效劑量，同時要考慮到被治療的疾病的嚴重程度等等因素。
藥物組合物及其使用方法還包括通式Ⅰ化合物與H1阻斷劑的結合，在此結合中包含的兩種化合物的量足以治療抗原誘導的呼吸過敏反應或類似的過敏性反應。在此有用的具有代表性的H1阻斷劑包括色甘酸鈉，乙醇胺類化合物(苯海拉明)，乙二胺類(吡拉明)，烷基胺類(氯苯吡丙胺)，哌嗪類(氯環(huán)嗪)，以及吩噻嗪類(異丙嗪)。在本發(fā)明中特別有用的H1阻斷劑是2-〔4-(5-溴-3-甲基吡啶-2-基)丁氨基〕-5-〔(6-甲基吡啶-3-基)甲基〕-4-嘧啶酮。
生物試驗本發(fā)明的許多化合物的拮抗劑活性之特異性是通過它們對于象氯化鉀，碳酰膽堿，組胺和PGF2這類促效藥的較低程度的拮抗作用而得到證實的。
用于本發(fā)明方法的化合物之受體結合親和力是通過這些化合物結合到在人的U937細胞膜上的〔3H〕-LTB4結合部位上的能力來測定的。用于本發(fā)明方法中的化合物之LTB4拮抗劑活性是通過它們以劑量相關的方式拮抗LTB4可誘發(fā)鈣過渡狀態(tài)的能力進行測定的，用fura-2即熒光的鈣試樣測定鈣過渡狀態(tài)。所用的方法如下U937細胞培養(yǎng)條件U937細胞是從Dr.John Bomalaski(Medical College of PA)和Dr.John Lee(Smithkline Beecham，Dept.of Immunology)那得到的，在補加了10%(V/V)熱的滅活的胎牛血清的RPMI-1640介質中，在含有5% CO2，95%空氣，37℃的濕潤環(huán)境中對上述細胞進行培養(yǎng)。細胞既可在T型燒瓶中又可在旋轉器培養(yǎng)物中培養(yǎng)。為了用DMSO區(qū)分U937細胞與單核類細胞，在含有1.3%DMSO的上述介質中以1×105個細胞/ml的濃度將細胞接種，并連續(xù)培養(yǎng)4天。細胞密度一般為0.75-1.25×106個細胞/ml，通過在800Xg下離心10分鐘將其收集。
U937細胞膜富集成分的制備將收集的U937細胞在25℃用50mM Tris-HCl洗滌，該洗滌液pH為7.4并含有1mM EDTA(緩沖液A)。將細胞以5×107個細胞/ml的濃度再懸浮于緩沖液A中，并用帕爾高壓氣體貯罐以750psi于0℃下通過氮氣氣穴使細胞碎裂，持續(xù)10分鐘。破碎的細胞制劑在1000Xg下離心10分鐘。將上清液在50，000Xg下離心30分鐘。所得顆粒用緩沖液A洗滌兩次。以約3mg膜蛋白/ml的濃度在25℃用50mM Tris HCl(pH為7.4)將顆粒再懸浮，并使等分試樣快速冷凍，于-70℃下貯藏。
〔3H〕-LTB4結合于U937膜受體〔3H〕-LTB4結合試驗是在25℃，在含有10mMCaCl2，10mM MgCl2，〔3H〕-LTB4，U937細胞膜蛋白的50mM Tris-HCl(pH 7.5)緩沖液中(標準條件)，在有或沒有不同濃度的LTB4或SK & F化合物的存在下進行的。每一試驗點代表重復三次的測定之平均值。在沒有或有2μM未標記的LTB4存在下，分別測定了〔3H〕-LTB4的總的和非特異性結合。根據(jù)總的與非特異性結合之差計算出特異性結合。放射配體竟爭試驗的進行是在標準條件下，用約0.2μM〔3H〕-LTB4，20-40μg的U937細胞膜蛋白，在0.2ml反應體積中增加LTB4的濃度(0.1nM至10nM)或其他竟爭性配體的濃度(0.1μM至30μM)，并于25℃下培養(yǎng)30分鐘。通過真空過濾方法將未結合的放射配體及競爭性藥物與膜結合配體分開。用液體閃爍光譜測定法測定濾器上膜結合放射活性。
U937細胞的飽和結合試驗是在標準條件下，用約15-50μg U937膜蛋白，并在0.2ml反應體積中增加〔3H〕-LTB4的濃度(0.02至2.0mM)，以及在22℃培養(yǎng)30分鐘來進行的。LTB4(2μM)被放在單獨的一套培養(yǎng)試管中以便測定非特異性結合。由飽和結合試驗所得的數(shù)據(jù)經過計算機輔助的非線性最小二乘法曲線擬合分析，并進一步用Scatchard方法分析。
用被分化的U937細胞進行Fura-2的攝取收集的細胞以2×106個細胞/ml的濃度再懸浮于Krebs Ringer Hensilet緩沖液中，該緩沖液含0.1%BSA(RIA級)，1.1mM MgSO4，1.0mM CaCl2和5mM HEPES(pH7.4，緩沖液B)。將fura-2(fura-2/AM)的二乙酰甲氧基酯加至最終濃度為2nM，在暗處于37℃下將細胞培養(yǎng)30分鐘。在800Xg下將細胞離心10分鐘，并以2×106個細胞/ml的濃度將其再懸浮于新鮮的緩沖液B中，在37℃培養(yǎng)20分鐘，使殘存的酯完全水解。在800Xg下將細胞離心10分鐘，并以5×106個細胞/ml的濃度將其再懸浮于冷的新鮮的緩沖液B中。細胞被保持于暗處的冰上，直至用于熒光的測定。
熒光的測定鈣遷移作用用由Johnson Foundation Biomedical Instrumentation Group設計的熒光計測定含fura-2的U937細胞的熒光。熒光計在比色杯支持器下裝有溫控器和磁攪拌器。激發(fā)波長位于339nm，發(fā)射波長位于499nm。全部試試驗均在37℃下用恒定攪拌來進行。
U937細胞用新鮮的緩沖液稀釋至濃度為1×106個細胞/ml，保持在暗處冰上。將細胞懸浮液的等分試樣(2ml)放入4ml比色杯中，溫度升至37℃，(保持在37℃，水浴10分鐘)。將比色杯移入熒光計中，在加入興奮劑或拮抗劑之前測定熒光約1分鐘，加入興奮劑后接著測定熒光約2分鐘，促效藥與拮抗藥均以2μl等分試樣加入。
先將拮抗劑加入熒光計內的細胞中，以便測定潛在的興奮劑活性。然后約1分鐘后加入10nM LTB4(接近最大有效濃度)，最大的Ca2+遷移濃度〔Ca2+〕i;用下式計算
F為樣品的最大的相對熒光量度。Fmax是通過用10μl的10%Triton X-100(最終濃度為0.02%)溶解細胞來測定的。測定了Fmax之后，將67μl 100mM EDTA溶液(pH10)加到完全螯合的Ca2+中，使fura-2信號消失，并得到Fmin。在沒有拮抗劑的情況下，對于10nM LTB4〔Ca2+〕i濃度為100%，最低的〔Ca2+〕i為0%。IC50濃度為阻斷50%的10nM LTB4誘導的〔Ca2+〕i遷移作用的拮抗劑濃度。對于LTB4誘導的〔Ca2+〕i遷移作用的增加之EC50為最大增加之半的濃度。對于鈣遷移作用的Ki用下式確定Ki=IC501+[LTB4][EC50]]]>對于所述的試驗，LTB4濃度為10nM，EC50為2nM。
將通過這些方法試驗的化合物的結果，列于表Ⅲ中。
表Ⅲ結合IC50，(Ki)，μM Ca-遷移作用U-937 PMN U-937 PMN完整的完整的 IC50興奮劑興奮劑構成 膜 細胞 細胞 μM % %Ex1 4.0(1.4) 2.0 2.4 3.7 0 0Ex2 23(8.0) 4.7 - 3.0 0 0Ex3 47(17) 5.8 0.65 0.58 0 0Ex4 6.5(2.2) 3.4 2.2 8.5 0 0Ex5 41(14) 1.1 2.2 0.72 0 0Ex6＊6.1(2.0) 0.68 0.14 0.74 0 0＊標題化合物實施例下面給出的實施例說明如何制備和應用本發(fā)明的化合物。這些實施例只是實例，而不限定或限制本發(fā)明的范圍。由該文件作出了用以限定保留給發(fā)明人的權利要求之依據(jù)。
實施例 A8-(4-甲氧基苯基)辛烷-1-(4-甲苯磺酸酯)A(1)7-辛炔-1-醇35%KH的礦物油(27g，240mmol)溶液在氬氣氛下用己烷洗滌，用1，3-二氨基丙烷一滴一滴地處理。混合物在室溫下攪拌直至均勻。將燒瓶冷卻至0℃，緩慢地加入3-辛炔-1-醇(10g，79mmol，Lancaster Synthesis)。然后將反應混合物在室溫下攪拌18小時。反應混合物用水(50ml)驟冷，產物用乙醚萃取。有機層用10%HCl(3×15ml)和鹽水洗滌，并干燥(MgSO4)。經蒸發(fā)得到標題產物，不再提純便可使用。1H NMR(90MHz，CDCl3)δ3.65(t，J＝5Hz，2H，OCH2)，2.23(m，2H，CH2)，2.0(m，1H，炔基的)，1.7-1.2(m，8H，(CH2)4);1R(純試樣)νmax 3350，2930，2125cm-1。
A(2) 7-辛炔-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚將7-辛炔-1-醇(3.8g，30mmol)溶于二甲基甲酰胺(10ml)中，在0℃用叔丁基氯二苯基硅烷(10.2ml，33mmol)和咪唑(3.65g，45mmol)處理。反應混合物在0℃攪拌10分鐘并在室溫攪拌3小時。加入水，并用乙酸乙酯萃取產物。乙酸乙酯萃取液用水和鹽水洗滌，并干燥(Ma2SO4)。蒸發(fā)出溶劑，剩余物用快速柱色譜(二氧化硅，己烷)提純，得到黃色油狀物。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.7(d，4H，芳基)，7.4(m，6H，芳基)，3.63(t，2H，OCH2)，2.23(m，2H，CH2)，1.97(t，1H，炔基的)，1.6-1.3(m，8H，(CH2)4)，1.05(s，9H，叔丁基);1R(膜)νmax 3321，2940，2125 cm-1。
A(3) 8-(4-甲氧基苯基)-7-辛炔-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚在氬氣氛下向火焰干燥過的燒瓶中加入4-碘代茴香醚(5.34g，22mmol)的三乙胺(50ml)溶液，接著加入7-辛炔-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚(9.84g，27mmol)，(Ph3P)2PdCl2(350mg，0.44mmol)，和CuI(200mg，0.88mmol)。得到的混合物在50℃加熱4小時。當冷卻到室溫時，過濾反應混合物，并蒸發(fā)溶劑。剩余物在乙酸乙酯和水之間分配，收集有機層，用鹽水洗滌，并干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)溶劑，剩余物用快速柱色譜(二氧化硅，1%乙酸乙酯的己烷溶液)提純，得到油狀物。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.7(d，4H，芳基)，7.4(m，6H，芳基)，7.35(d，2H，芳基)，6.8(d，2H，芳基)，3.8(s，3H，OCH3)，3.7(t，2H，OCH2)，2.4(t，2H，CH2)，1.7-1.3(m，8H，(CH2)4)，1.05(s，9H，叔丁基)。
A(4) 8-(4-甲氧基苯基)辛烷-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚將5% Pd/C(100mg)加入8-(4-甲氧基苯基)-7-辛炔-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚(2.2g，4.6mmol)的乙醇(10ml)和乙酸乙酯(10ml)溶液中?；旌衔镌?5PSi下加氫4小時。反應混合物通過硅藻土(Celite)進行過濾，蒸發(fā)溶劑，得到油狀物。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.7(d，4H，芳基，7.4(m，6H，芳基)，7.05(d，2H，芳基)，6.8(d，2H，芳基)，3.8(s，3H，OCH3)，3.6(t，2H，OCH2)，2.5(t，2H，芐基)，1.75-1.3(m，12H，(CH2)6)，1.0(s，9H，叔丁基)。
A(5) 8-(4-甲氧基苯基)辛烷-1-醇將8(4-甲氧基苯基)辛烷-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚(2.2g，4.6mmol)的四氫呋喃(20ml)溶液冷卻至0℃，用氟化四丁基銨(14ml，14mmol，1M的四氫呋喃溶液)處理。移去冷卻浴，反應混合物在室溫下攪拌24小時。反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌，并干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)溶劑，剩余物用快速柱色譜(二氧化硅，0-20%乙酸乙酯的己烷溶液)提純，得到白色固體。熔點47-49℃;1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.15(d，2H，芳基)，6.86(d，2H，芳基)，3.85(s，3H，OCH3)，3.68(t，2H，OCH2)，2.62(t，2H，芐基)，1.75-1.3(m，12H，(CH2)6)。
A(6) 8-(4-甲氧基苯基)辛烷-1-(4-甲苯磺酸酯)在氬氣氛下將6-(4-甲氧基苯基)辛烷-1-醇(5.9g，25mmol)溶于無水CH2Cl2(100ml)中，冷卻至0℃。向其中加入吡啶(2.5ml，30mmol)和4-甲苯磺酰氯(5.4g，28mmol)。反應混合物在0℃攪拌20分鐘，在室溫攪拌24小時，反應溶液用水和鹽水洗滌，并干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)溶劑，剩余物用快速柱色譜(二氧化硅，0-10%乙酸乙酯的己烷溶液)提純，得到白色固體。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.79(d，2H，芳基)，7.35(d，2H，芳基)，7.09(d，2H，芳基)，6.82(d，2H，芳基)，4.04(s，2H，OCH2)，3.8(s，3H，OCH3)，2.55(t，2H，芐基)，2.46(s，3H，CH3)，1.75-1.15(m，12H，(CH2)6)。
實施例B6-(4-甲氧基苯基)-己烷-1-(4-甲苯磺酸酯)B(1)5-己炔-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚將5-己炔-1-醇(3g，30mmol，Aldrich)溶于二甲基甲酰胺(10ml)中，在0℃用叔丁基氯二苯基硅烷(10.2ml，33mmol)和咪唑(3.65g，45mmol)處理。反應混合物在0℃攪拌10分鐘，在室溫攪拌3小時。加入水，產物用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取液用水和鹽水洗滌，并干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)溶劑，剩余物用快速柱色譜(二氧化硅，己烷)提純，得到黃色油狀物。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.7(d，4H，芳基)，7.4(m，6H，芳基)，3.65(t，2H，OCH2)，2.2(m，2H，CH2)，1.9(t，1H，炔基的)，1.7(m，4H，CH2-CH2)，1.05(s，9H，叔丁基)。
B(2) 6-(4-甲氧基苯基)-5-己炔-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚在氬氣氛下，向火焰干燥過的燒瓶中加入4-碘代茴香醚(5.34g，22mmol)的三乙胺(50ml)溶液，接著加入5-己炔-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚(8.83g，27mmol)、(Ph3P)2PdCl2(350mg，0.44mmol)，和CuI(200mg，0.88mmol)。得到的混合物在50℃加熱4小時。當冷卻至室溫時過濾反應混合物，蒸發(fā)溶劑。剩余物在乙酸乙酯和水之間分配，收集有機層，用鹽水洗滌，并干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)溶劑，剩余物用快速柱色譜(二氧化硅，1%乙酸乙酯的己烷溶液)提純，得到油狀物。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.7(d，4H，芳基)，7.4(m，6H，芳基)，7.35(d，2H，芳基)，6.8(d，2H，芳基)，3.8(s，3H，OCH3)，3.7(t，2H，OCH2)，2.4(t，2H，CH2)，1.7(m，4H，CH2-CH2)，1.05(s，9H，叔丁基)。
B(3) 6-(4-甲氧基苯基)己烷-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚將5%Pd/C(100mg)加入6-(4-甲氧基苯基)-5-己炔-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚(2.0g，4.6mmol)的乙醇(10ml)和乙酸乙酯(10ml)溶液中?；旌衔镌?5psi下加氫4小時。反應混合物通過硅藻土進行過濾，蒸發(fā)溶劑，得到油狀物。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.7(d，4H，芳基)，7.4(m，6H，芳基)，7.05(d，2H，芳基)，6.8(d，2H，芳基)，3.8(s，3H，OCH3)，3.6(t，2H，OCH2)，2.5(t，2H，芐基)，1.55(m，4H，CH2-CH2)，1.3(m，4H，CH2-CH2)，1.0(s，9H，叔丁基)。
B(4) 6-(4-甲氧基苯基)己烷-1-醇將6-(4-甲氧基苯基)己烷-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚(2.0g，4.6mmol)的四氫呋喃(20ml)溶液冷卻至0℃，用氟化四丁基銨(14ml，14mmol，1M的四氫呋喃溶液)處理。移去冷卻浴，反應混合物在室溫攪拌24小時。反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用H2O和鹽水洗滌，并干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)溶劑，剩余物用快速柱色譜(二氧化硅，0-20%乙酸乙酯的己烷溶液)提純，得到白色固體。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.05(d，2H，芳基)，6.8(d，2H，芳基)，3.8(s，3H，OCH3)，3.65(t，2H，OCH2)，2.55(t，2H，芐基)，1.6(m，4H，CH2-CH2)，1.4(m，4H，CH2-CH2)。
B(5) 6-(4-甲氧基苯基)己烷-1-(4-甲苯磺酸酯)在氬氣氛下，將6-(4-甲氧基苯基)己烷-1-醇(5.36g，25mmol)溶于無水CH2Cl2(100ml)中，冷卻至0℃。向其中加入吡啶(2.5ml，30mmol)和4-甲苯磺酰氯(5.4g，28mmol)。反應混合物在0℃攪拌20分鐘，在室溫攪拌24小時。反應溶液用H2O和鹽水洗滌，并干燥(Na2SO4)。蒸發(fā)溶劑，剩余物用快速柱色譜(二氧化硅，0-10%乙酸乙酯的己烷溶液)提純，得到白色固體。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ1.6-1.3(m，8H，(CH2)4)，2.4(s，3H，CH3)，2.5(t，2H，芐基)，3.8(s，3H，OCH3)，4.0(t，2H，OCH2)，6.80(d，2H，芳基)，7.0(d，2H，芳基)，7.3(d，2H，芳基)，7.8(d，2H，芳基)。
實施例CE-6-(4-甲氧基苯基)-1-(4-甲苯磺酸酯)-5-己烯C(1) E-6-(4-甲氧基苯基)-5-己烯酸在室溫和氬氣氛下，將溴化(4-羧基丁基)三苯基鏻(17.6g，30mmol)在四氫呋喃(45ml)中的懸浮液加入新制備的六甲基二硅疊氮化鋰(Iithium hexamethyldisilazide)(64mmol)的四氫呋喃(30ml)溶液中。反應混合物攪拌15分鐘，在此期間形成桔紅色內鎓鹽。逐滴加入4-茴香醛(4.5g，30mmol)的四氫呋喃(30ml)溶液，再繼續(xù)攪拌20分鐘。反應混合物用H2O(50ml)驟冷，用乙醚(30ml)稀釋。水層用3N HCl酸化至pH1.0。產物用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。將合并的有機層進行干燥(MgSO4)，用快速柱色譜(二氧化硅，1%甲醇的CH2Cl2溶液)提純，得到E-鏈烯，固體。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ7.3(d，2H，芳基)，6.8(d，2H，芳基)，6.3(d，1H，鏈烯)，6.0(m，1H，鏈烯)，3.8(s，3H，OCH3)，2.3(m，4H，烯丙基的CH2和CH2CO2)，1.8(q，2H，CH2)。
C(2) E-6-(4-甲氧基苯基)-5-己烯-1-醇在氬氣氛下，將E-6-(4-甲氧基苯基)-5-己烯酸(1.1g，5.0mmol)的無水乙醚(10ml)溶液緩慢地加入LiAlH4(240mg，6.0mmol)在乙醚(10ml)中的懸浮液中。反應混合物回流45分鐘。當冷卻到室溫時用H2O(10ml)驟冷，接著用6N H2SO4(7ml)驟冷。加入乙酸乙酯(20ml)，分離有機層，并干燥(MgSO4)。蒸發(fā)后得到白色結晶固體。熔點65-66℃;1H NMR(200MHz，CDCl3)δ7.2(d，2H，芳基)，6.8(d，2H，芳基)，6.3(d，1H，鏈烯)，6.1(m，1H，鏈烯)，3.8(s，3H，OCH3)，3.6(t，2H，OCH2)，2.2(q，2H，烯丙基)，1.5(m，4H，CH2-CH2);元素分析，計算值(C13H18O2)C，75.65;H，8.80，實驗值C，75.45;H，8.95;MS(CI)207(M+H)。
C(3) E-6-(4-甲氧基苯基)-1-(4-甲苯磺酸酯)-5-己烯在氬氣氛下，將E-6-(4-甲氧基苯基)-5-己烯-1-醇(1.6g，7.0mmol)溶于無水CH2Cl2(50ml)中，用4-甲苯磺酰氯(7.0g，36mmol)和吡啶(3ml)處理。反應溶液在室溫下攪拌3.5小時。向反應混合物中加入水(40ml)，分離有機層，并干燥(MgSO4)。產物用快速柱色譜(二氧化硅，10%乙酸乙酯的己烷溶液)提純，得到油狀物。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ7.8(d，2H，芳基)，7.3(d，2H，芳基)，7.2(d，2H，芳基)，6.8(d，2H，芳基)，6.2(d，1H，鏈烯)，6.0(m，1H，鏈烯)，4.1(t，2H，OCH2)，3.8(s，3H，OCH3)，2.4(s，3H，CH3)，2.1(q，2H，烯丙基)，1.6(m，4H，CH2-CH2);MS(CI)361(M+H)。
實施例1N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-癸氧基-2-吡啶甲酰胺二鈉鹽1(a) 3-癸氧基-2-(羥甲基)吡啶將3-羥基-2-(羥甲基)吡啶鹽酸鹽(500mg，3.09mmol，Aldrich，85%)溶于無水二甲基甲酰胺(10ml)中，順序地用無水K2CO3(1.30g，9.27mmol)和1-碘代癸烷(0.80ml，3.71mmol)處理。在氬氣氛下于90℃將反應混合物激烈攪拌1.5小時。當冷卻到室溫時，反應混合物用乙酸乙酯(100ml)稀釋，用H2O(5×20ml)和鹽水洗滌，并干燥(MgSO4)。得到的化合物用快速柱色譜(二氧化硅，20%乙酸乙酯的石油醚溶液)提純，得到標題產物。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.17(m，1H，6-吡啶基)，7.2(m，2H，4-吡啶基、5-吡啶基)，4.78(s，2H，CH2)，4.48(寬單峰，1H，OH)，4.05(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2)，1.9-0.90(m，19H，脂族的)。
1(b) 3-癸氧基-2-吡啶甲醛將由1(a)得到的3-癸氧基-2-(羥甲基)吡啶(560mg，2.11mmol)的無水CH2Cl2(7ml)溶液用MnO2(1.80g，20.7mmol)處理，在室溫下攪拌24小時。反應混合物通過硅藻土填料進行過濾，用真空除去溶劑，得到醛，為淺黃色油狀物。該醛不經進一步提純直接用于下一步中。
1(c) 2-(E-2-羧甲基乙烯基)-3-癸氧基吡啶在氬氣氛下，將上一步得到的3-癸氧基-2-吡啶甲醛(429mg，1.63mmol)溶于無水甲苯(3.5ml)中，用三苯基膦內鎓鹽乙酸甲酯(820mg，2.45mmol)處理。反應混合物在45℃加熱30分鐘，在此溫度下反應混合物變?yōu)榫鶆?。當冷卻到室溫時，反應混合物用乙酸乙酯(100ml)稀釋，用H2O(2×20ml)和鹽水洗滌，并干燥(MgSO4)。產物用快速柱色譜(二氧化硅，乙酸乙酯∶CH2Cl2∶石油醚＝10∶5∶85)提純，得到產物，為淺黃色固體。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ8.25(m，1H，6-吡啶基)，8.1(d，J＝16.2Hz，1H，鏈烯)，7.25(m，2H，4-吡啶基，5-吡啶基)，7.05(d，J＝16.2Hz，1H，鏈烯)，4.05(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2)，3.85(s，3H，CO2CH3)，1.95-0.90(m，19H，脂族的)。
1(d) 2-(E-2-羧甲基乙烯基)-3-癸氧基吡啶N-氧化物在氬氣氛下，將2-〔E-2-羧甲基乙烯基)-3-癸氧基吡啶(390mg，1.22mmol)溶于無水CH2Cl2(6mlml)中，冷卻到0℃，用85%3-氯過苯甲酸(278mg，1.34mmol)處理。接著移去冷卻浴。反應混合物在室溫下攪拌24小時。反應溶液用CH2Cl2(50ml)稀釋，倒入飽和的NaHCO3水溶液(50ml)中。水相用CH2Cl2(3×50ml)萃取，合并的CH2Cl2萃取液用鹽水洗滌，并干燥(MgSO4)。用快速柱色譜(二氧化硅，10%CH2Cl2的乙酸乙酯溶液)提純。得到N-氧化物，為淺黃色固體。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.18(d，J＝16.2Hz，1H，鏈烯)，7.97(d，J＝6.5Hz，1H，6-吡啶基)，7.58(d，J＝16.2Hz，1H，鏈烯)，7.11(dd，J＝8.6，6.5Hz，1H，5-吡啶基)，6.82(d，J＝8.6Hz，1H，4-吡啶基)，4.08(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2)，3.82(s，3H，CO2CH3)，1.93-0.88(m，19H，脂族的)。
1(e) 6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-癸氧基-2-吡啶酮在氬氣氛下，將2-(E-2-羧甲基乙烯基)-3-癸氧基吡啶N-氧化物(180mg，0.537mmol)溶于無水二甲基甲酰胺(2.2ml)中，冷卻到0℃。向其中緩慢地加入三氟乙酐(0.76ml，5.38mmol)，接著移去冷卻浴。反應混合物在室溫下攪拌18小時。反應溶液用乙酸乙酯(75ml)稀釋，緩慢地倒入飽和的NaHCO3(30ml)水溶液中。有機層用Na2HCO3(20ml)和鹽水洗滌，并干燥(MgSO4)。得到產物，為黃色固體。不進一步提純即可使用。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.75(d，J＝16.3Hz，1H，鏈烯)，7.40(d，J＝9.8Hz，1H，3-吡啶基)，7.01(d，J＝16.3Hz，1H，鏈烯)，6.73(d，J＝9.8Hz，1H，4-吡啶基)，3.95(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2)，3.82(s，3H，CO2CH3)，1.82-0.88(m，19H，脂族的);MS(CI)336(M+H)。
1(f) 6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-癸氧基-2-吡啶三氟甲基磺酸酯在氬氣氛下，向冷卻的(0℃)6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-癸氧基-2-吡啶酮(200mg，0.596mmol)的無水CH2Cl2(3.0ml)溶液中加入無水吡啶(0.48ml，5.96mmol)和三氟甲磺酸酐(0.30ml，1.78mmol)。反應混合物在0℃攪拌15分鐘。反應混合物用乙酸乙酯(50ml)稀釋，分別用H2O(20ml)，2%HCl(10ml)、飽和NaHCO3(20ml)和鹽水洗滌，并干燥(MgSO4)。用快速柱色譜(二氧化硅，5%乙酸乙酯的石油醚溶液)提純，得到磺酸酯，為無色油狀物。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.97(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，7.36(d，J＝8.8Hz，1H，3-吡啶基)，7.11(d，J＝8.8Hz，1H，4-吡啶基)，6.96(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，4.05(t，J＝6.5Hz，2H，OCH2)，3.83(s，3H，CO2CH3)，1.92-0.88(m，19H，脂族的)。
1(g) N-(3-羧甲基苯基)-6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-癸氧基-2-吡啶甲酰胺將6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-癸氧基-2-吡啶三氟甲基磺酸酯(160mg，0.342mmol)溶于無水二甲基甲酰胺(1.25ml)中，順序地用3-氨基苯甲酸甲酯(775mg，5.13mmol，Lancaster)、Pd(OAc)2(4.5mg，0.020mmol)，和1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵(22mg，0.040mmol)處理。緩慢地將一氧化碳鼓泡通過該溶液5分鐘。然后，在CO-氣氛下(氣球壓力)和90℃加熱反應混合物4小時。當冷卻至室溫時，用乙酸乙酯(75ml)稀釋反應混合物，用2%HCl(5×10ml)、H2O(15ml)、飽和NaHCO3(15ml)和鹽水洗滌，并干燥(MgSO4)。用快速柱色譜(二氧化硅，乙酸乙酯∶CH2Cl2∶石油醚＝10∶20∶70)提純。得到酰胺，為無色固體。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ9.85(s，1H，NH)，8.29(s，1H，2-苯基)，8.27(d，J＝8.7Hz，1H，3-吡啶基)，8.14(d，J＝7.9Hz，1H，4-苯基)，8.10(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，7.84(d，J＝7.9Hz，1H，6-苯基)，7.48(dd，J＝7.9Hz，1H，5-苯基)，7.38(d，J＝8.7Hz，1H，4-吡啶基)，7.08(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，4.12(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2)，3.95(s，3H，CO2CH3)，3.88(s，3H，CO2CH3)，1.96-0.88(m，19H，脂族的);元素分析，計算值(C28H36O6N2)C，67.72;H，7.31;N，5.64，實驗值C，67.50;H，7.27;N，5.57;MS(CI)497.5(M+H)。
1(h) N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-癸氧基-2-吡啶甲酰胺二鈉鹽將N-(3-羧甲基苯基)-6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-癸氧基-2-吡啶甲酰胺(60mg，0.121mmol)溶于四氫呋喃(1.25ml)和MeOH(0.50ml)中，用1M LiOH(0.50ml)處理。反應混合物在室溫下攪拌6小時。通過加入2%HCl(0.75ml)使反應混合物緩和地酸化，反應混合物用乙酸乙酯(50ml)稀釋，用水(3×10ml)和鹽水洗滌，并干燥(MgSO4)。真空除去溶劑。將二酸溶于飽和的Na2CO3水溶液(3-5ml)中，通過反相MPLC法(RP-18二氧化硅，10-65%MeOH水溶液)提純，并冷凍干燥分離，得到產物，為白色非晶形固體。1H NMR(250MHz，CD3OD)δ8.22(s，1H，2-苯基)，8.13(d，J＝8.7Hz，1H，3-吡啶基)，7.90-7.70(m，2H，4-苯基，6-苯基)，7.73(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，7.65(d，J＝8.7Hz，1H，4-吡啶基)，7.48(dd，J＝7.9Hz，1H，5-苯基)，7.17(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，4.26(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2)，1.98-0.82(m，19H，脂族的);FAB-MS(+ve)，513.1(M+H);(-ve)，489.0(M-Na)。
實施例2N-(3-羧基苯基)-6-(2-羧基乙基)-5-癸氧基-2-吡啶甲酰胺2(a) N-(3-羧甲基苯基)-6-(2-羧甲基乙基)-5-癸氧基-2-吡啶甲酰胺將N-(3-羧甲基苯基)-6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-癸氧基-2-吡啶甲酰胺(70mg，0.141mmol)溶于乙酸乙酯(1ml)中，用5%Pd/C(10mg)處理，在H2氣氛(氣球壓力)下攪拌4小時。反應混合物不進行TLC，產物不溶于乙酸乙酯。通過加入CH2Cl2(5ml)使沉淀的產物溶解，溶液通過硅藻土填料進行過濾。產物用快速柱色譜(二氧化硅，5%乙酸乙酯的CH2Cl2溶液)提純，得到標題的吡啶甲酰胺，為白色固體。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ10.02(s，1H，NH)，8.48(s，1H，2-苯基)，8.18(d，J＝7.9Hz，1H，4-苯基)，8.11(d，J＝8.5Hz，1H，3-吡啶基)，7.81(d，J＝7.9Hz，1H，6-苯基)，7.46(dd，J＝7.9Hz，1H，5-苯基)，7.20(d，J＝8.5Hz，1H，4-吡啶基)，4.05(t，J＝6.4Hz，2H，OCH2)，3.94(s，3H，CO2CH3)，3.68(s，3H，CO2CH3)，3.24(t，J＝6.9Hz，2H，CH2)，2.88(t，J＝6.9Hz，2H，CH2)，1.88-0.86(m，19H，脂族的);元素分析，計算值(C28H38O6N2)C，67.45;H，7.68;N，5.62，實驗值C，67.26;H，7.76;N，5.54;MS(CI)499(M+H)。
2(b) N-(3-羧基苯基)-6-(2-羧基乙基)-5-癸氧基-2-吡啶甲酰胺二鉀鹽將N-(3-羧甲基苯基)-6-(2-羧甲基乙基)-5-癸氧基-2-吡啶甲酰胺(54mg，0.108mmol)懸浮于四氫呋喃(1.1ml)和甲醇(0.70ml)中，用1M LiOH(0.45ml，0.45mmol)處理。反應混合物在室溫下攪拌30小時。反應混合物用乙酸乙酯(50ml)稀釋，倒入2%HCl(15ml)中。乙酸乙酯層用H2O(3×20ml)和鹽水洗滌，并干燥(MgSO4)。真空除去溶劑，將固體二酸溶于KHCO3水溶液(3-5ml)中。用反相MPLC法(RP-18二氧化硅，10-65%甲醇水溶液)提純，并冷凍干燥分離，得到鹽，為白色非晶形固體。1H NMR(250MHz，CD3OD)δ8.49(s，1H，2-苯基)，8.00(d，J＝8.5Hz，1H，3-吡啶基)，7.88(d，J＝7.9Hz，1H，4-苯基)，7.72(d，J＝7.9Hz，1H，6-苯基)，7.36(m，2H，4-吡啶基，5-苯基)，4.11(t，J＝6.4Hz，2H，OCH2)，3.19(t，J＝6.9Hz，2H，CH2)，2.66(t，J＝6.9Hz，2H，CH2)，1.92-0.87(m，19H，脂族的);FAB-MS(+ve)，547.4(M+H);(-ve)，507.3(M-K)。
實施例3N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-十四烷氧基-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽3(a) 3-羥基-2-吡啶甲醛將3-羥基-2-(羥甲基)吡啶鹽酸鹽(1.32g，6.9mmol，Aldrich，85%)溶于無水CH2Cl2(35ml)中，用三乙胺(1.1ml，7.89mmol)和MnO2(6.0g，69mmol)處理。反應混合物在室溫下攪拌18小時。通過硅藻土填料進行過濾，真空濃縮。粗醛不進一步提純而直接用于下一步中。
3(b) 3-十四烷氧基-2-吡啶甲醛將上一步得到的3-羥基-2-吡啶甲醛(約6.9mmol)溶于無水二甲基甲酰胺(10ml)中，順序地用無水K2CO3(2.86g，20.7mmol)和1-碘代十四烷(2.00ml，7.59mmol)處理上述溶液。反應混合物在氬氣氛下和90℃激烈地攪拌4.5小時。當冷卻到室溫時，反應混合物用乙酸乙酯(100ml)稀釋，用H2O(5×20ml)和鹽水洗滌，并干燥(MgSO4)。用快速柱色譜(二氧化硅，30%乙酸乙酯的石油醚溶液)提純，得到醛，為淺黃色油狀物。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ10.43(s，1H，CHO)，8.38(dd，J＝4.1、1.5Hz，1H，6-吡啶基)，7.42(m，2H，4-吡啶基，5-吡啶基)，4.10(t，J＝6.5Hz，2H，OCH2)，1.91-0.88(m，27H，脂族的)。
3(c) 2(E-2-羧甲基乙烯基)-3-十四烷氧基吡啶按照制備2-(E-2-羧甲基乙烯基)-3-癸氧基吡啶所述的方法制備。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.22(dd，J＝4.0、1.8Hz，1H，6-吡啶基)，8.10(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，7.21(m，2H，4-吡啶基，5-吡啶基)，7.02(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，4.02(t，J＝6.5Hz，2H，OCH2)，3.81(s，3H，CO2CH3)，1.88-0.88(m，27H，脂族的)。
3(d) 2-(E-2-羧甲基乙烯基)-3-十四烷氧基吡啶N-氧化物該化合物按照制備2-(E-2-羧甲基乙烯基)-3-癸氧基吡啶N-氧化物所述的方法制備。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.18(d，J＝16.2Hz，1H，鏈烯)，7.95(d，J＝6.5Hz，1H，6-吡啶基)，7.58(d，J＝16.2Hz，1H，鏈烯)，7.10(dd，J＝8.5、6.5Hz，1H，5-吡啶基)，6.80(d，J＝8.5Hz，1H，4-吡啶基)，4.08(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2)，3.82(s，3H，CO2CH3)，1.88-0.88(m，27H，脂族的)。
3(e) 6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-十四烷氧基-2-吡啶酮該化合物按照制備6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-癸氧基-2-吡啶酮所述的方法制備。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.75(d，J＝16.3Hz，1H，鏈烯)，7.40(d，J＝9.8Hz，1H，3-吡啶基)，7.01(d，J＝16.3Hz，1H，鏈烯)，6.73(d，J＝9.8Hz，1H，4-吡啶基)，3.95(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2)，3.82(s，3H，CO2CH3)，1.82-0.88(m，27H，脂族的)。
3(f) 6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-十四烷氧基-2-吡啶三氟甲基磺酸酯該化合物按照上述制備6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-癸氧基-2-吡啶三氟甲基磺酸酯的方法制備。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.96(d，J＝15.7Hz，1H，鏈烯)，7.35(d，J＝8.8Hz，1H，3-吡啶基)，7.10(d，J＝8.8Hz，1H，4-吡啶基)，6.96(d，J＝15.7Hz，1H，鏈烯)，4.04(t，J＝6.5Hz，2H，OCH2)，3.82(s，3H，CO2CH3)，1.85-0.88(m，27H，脂族的)。
3(g) N-(3-羧甲基苯基)-6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-十四烷氧基-2-吡啶甲酰胺實施例1(g)的方法用于制備N-(3-羧甲基苯基)-6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-十四烷氧基-2-吡啶甲酰胺。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ9.86(s，1H，NH)8.29(s，1H，2-苯基)，8.27(d，J＝8.7Hz，1H，3-吡啶基)，8.13(d，J＝7.9Hz，1H，4-苯基)，8.09(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，7.84(d，J＝7.9Hz，1H，6-苯基)，7.48(dd，J＝7.9Hz，1H，5-苯基)，7.38(d，J＝8.7Hz，1H，4-吡啶基)，7.08(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，4.12(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2)，3.95(s，3H，CO2CH3)，3.88(s，3H，CO2CH3)，1.94-0.88(m，27H，脂族的);MS(CI)553.4(M+H)。
3(h) N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-十四烷氧基-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽將N-(3-羧甲基苯基)-6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-十四烷氧基-2-吡啶甲酰胺(173mg，0.313mmol)溶于四氫呋喃(4.0ml)和甲醇(1.0ml)中，用1M LiOH(1.0ml)處理。反應混合物在室溫下攪拌48小時。得到的凝膠溶于H2O(3ml)中，真空除去四氫呋喃和甲醇。產物用反相MPLC法(RP-18二氧化硅，10-65%甲醇水溶液)提純，并冷凍干燥分離，得到鹽，為無色非晶形固體。
1H NMR(250MHz，CD3OD)δ8.32(s，1H，2-苯基)，8.12(d，J＝8.7Hz，1H，3-吡啶基)，7.85(d，J＝15.7Hz，1H，鏈烯)，7.83(d，J＝7.9Hz，1H，4-苯基)，7.76(d，J＝7.9Hz，1H，6-苯基)，7.52(d，J＝8.7Hz，1H，4-吡啶基)，7.38(dd，J＝7.9Hz，1H，5-苯基)，7.26(d，J＝15.7Hz，1H，鏈烯)，4.16(t，J＝6.6Hz，2H，OCH2)，1.94-0.89(m，27H，脂族的);FAB-MS(+ve)，537(M+H);(-ve)，529(M-Li)。
實施例 4N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-十二烷氧基-2-吡啶甲酰胺(二鋰鹽)按照制備N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-十四烷氧基-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽所述的方法通過以1-碘代十二烷代替1-碘代十四烷(參見實施例3)，制備N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-十二烷氧基-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽。
4(a) 3-十二烷氧基-2-吡啶甲醛1H NMR(250MHz，CDCl3)δ10.43(s，1H，CHO)，8.38(dd，1H，6-吡啶基)，7.42(m，2H，4-吡啶基，5-吡啶基)，4.1(t，2H，OCH2)，1.91-0.88(m，23H，脂族的)。
4(b) 2-(E-2-羧甲基乙烯基)-3-十二烷氧基吡啶1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.22(dd，1H，6-吡啶基)，8.1(d，1H，J＝15.8Hz，鏈烯)，7.21(m，2H，4-吡啶基，5-吡啶基)，7.02(d，1H，J＝15.8Hz，鏈烯)，4.02(t，2H，OCH2)，3.81(s，3H，CO2CH3)，1.88-0.88(m，23H，脂族的)。
4(c) 2-(E-2-羧甲基乙烯基)-3-十二烷氧基吡啶N-氧化物1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.15(d，1H，J＝16.2Hz，鏈烯)，7.9(d，1H，6-吡啶基)，7.58(d，1H，J＝16.2Hz，鏈烯)，7.1(dd，1H，5-吡啶基)，6.8(d，1H，4-吡啶基)，4.08(t，2H，OCH2)，3.82(s，3H，CO2CH3)，1.88-0.88(m，23H，脂族的)。
4(e) 6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-十二烷氧基-2-吡啶酮1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.0(s，1H，OH)，7.75(d，1H，J＝16Hz，鏈烯)，7.4(d，1H，3-吡啶基)，7.0(d，1H，J＝16Hz，鏈烯)，6.7(d，1H，4-吡啶基)，4.0(t，2H，OCH2)，3.82(s，3H，CO2CH3)，1.85-0.88(m，23H，脂族的)。
4(f) 6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-十二烷氧基-2-吡啶三氟甲基磺酸酯1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.95(d，1H，J＝15.9Hz，鏈烯)，7.37(d，1H，3-吡啶基)，7.1(d，1H，4-吡啶基)，6.95(d，1H，J＝15.9Hz，鏈烯)，4.1(t，2H，OCH2)，3.8(s，3H，CO2CH3)，1.89-0.88(m，23H，脂族的)。
4(g) N-(3-羧甲基苯基)-6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-十二烷氧基-2-吡啶甲酰胺1H NMR(250MHz，CDCl3)δ9.86(s，1H，NH)，8.29(s，1H，芳基)，8.27(d，1H，3-吡啶基)，8.13(d，1H，芳基)，8.09(d，1H，J＝15.8Hz，鏈烯)，7.84(d，1H，芳基)，7.5(t，1H，芳基)，7.38(d，1H，4-吡啶基)，7.08(d，1H，J＝15.8Hz，鏈烯)，4.15(t，2H，OCH2)，3.98(s，3H，CO2CH3)，3.88(s，3H，CO2CH3)，1.94-0.88(m，23H，脂族的);元素分析，計算值(C30H40N2O6)C，68.68;H，7.69;N，5.34，實驗值C，68.43;H，7.54;N，5.21;MS(CI)525(M+H)。
4(h) N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-十二烷氧基-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽1H NMR(250MHz，CD3OD)δ8.37(s，1H，芳基)，8.12(d，1H，3-吡啶基)，7.85(d，1H，J＝15.7Hz，鏈烯)，7.83(d，1H，芳基)，7.77(d，1H，芳基)，7.55(d，1H，4-吡啶基)，7.38(t，1H，芳基)，7.26(d，1H，J＝15.7Hz，鏈烯)，4.16(t，2H，OCH2)，1.90-0.88(m，23H，脂族的);FAB-MS(+ve)，509(M+H);(-ve)，501(M-Li)。
實施例5N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-辛氧基-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽按照制備N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基-5-十四烷氧基-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽(實施例3)所述的方法而用1-碘代辛烷代替1-碘代十四烷，制備N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-辛氧基-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽。
5(a) 3-辛氧基-2-吡啶甲醛1H NMR(250MHz，CDCl3)δ10.43(s，1H，CHO)，8.38(dd，1H，6-吡啶基)，7.42(m，2H，4-吡啶基，5-吡啶基)，4.1(t，2H，OCH2)，1.91-0.88(m，15H，脂族的)。
5(b) 2-(E-2-羧甲基乙烯基)-3-辛氧基吡啶1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.22(dd，1H，6-吡啶基)，8.1(d，1H，J＝15.8Hz，鏈烯)，7.21(m，2H，4-吡啶基，5-吡啶基)，7.02(d，1H，J＝15.8Hz，鏈烯)，4.02(t，2H，OCH2)，3.81(s，3H，CO2CH3)，1.88-0.88(m，15H，脂族的)。
5(c) 2-(E-2-羧甲基乙烯基)-3-辛氧基吡啶N-氧化物1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.15(d，1H，J＝16.2Hz，鏈烯)，7.9(d，1H，6-吡啶基)，7.58(d，1H，J＝16.2Hz，鏈烯)，7.1(dd，1H，5-吡啶基)，6.8(d，1H，4-吡啶基)，4.08(t，2H，OCH2)，3.82(s，3H，CO2CH3)，1.88-0.88(m，15H，脂族的)。
5(d) 6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-辛氧基-2-吡啶酮1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.0(s，1H，OH)，7.75(d，1H，J＝16Hz，鏈烯)，7.4(d，1H，3-吡啶基)，7.0(d，1H，J＝16Hz，鏈烯)，6.7(d，1H，4-吡啶基)，4.0(t，2H，OCH2)，3.82(s，3H，CO2CH3)，1.85-0.88(m，15H，脂族的)。
5(e) 6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-辛氧基-2-吡啶三氟甲基磺酸酯1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.95(d，1H，J＝15.9Hz，鏈烯)，7.37(d，1H，3-吡啶基)，7.1(d，1H，4-吡啶基)，6.95(d，1H，J＝15.9Hz，鏈烯)，4.1(t，2H，OCH2)，3.8(s，3H，CO2CH3)，1.89-0.88(m，15H，脂族的)。
5(f) N-(3-羧甲基苯基)-6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-辛氧基-2-吡啶甲酰胺1H NMR(250MHz，CDCl3)δ9.86(s，1H，NH)，8.29(s，1H，芳基)，8.27(d，1H，3-吡啶基)，8.13(d，1H，芳基)，8.09(d，1H，J＝15.8Hz，鏈烯)，7.84(d，1H，芳基)，7.5(t，1H，芳基)，7.38(d，1H，4-吡啶基)，7.08(d，1H，J＝15.8Hz，鏈烯)，4.15(t，2H，OCH2)，3.98(s，3H，CO2CH3)，3.88(s，3H，CO2CH3)，1.94-0.88(m，15H，脂族的)。
5(g) N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-辛氧基-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽1H NMR(250MHz，CD3OD)δ8.37(s，1H，芳基)，8.12(d，1H，3-吡啶基)，7.85(d，1H，J＝15.7Hz，鏈烯)，7.83(d，1H，芳基)，7.77(d，1H，芳基)，7.55(d，1H，4-吡啶基)，7.38(t，1H，芳基)，7.26(d，1H，J＝15.7Hz，鏈烯)，4.16(t，2H，OCH2)，1.90-0.88(m，15H，脂族的);FAB-MS(+ve)，601.3(M+H);(-ve)，598.9(M-H)。
實施例6N-(3-羰基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-〔8-(4-甲氧基苯基)辛氧基〕-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽按照制備N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-十四烷氧基-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽所描述的方法(實施例4)，而用8-(4-甲氧基苯基)辛烷-1-(4-甲苯磺酸酯)代替1-碘代十四烷，制備N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-〔8-(4-甲氧基苯基)辛氧基〕-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽(參見實施例3)。
按照實施例3(d)以及下列的方法制備下列化合物。
6(a) 2-(E-2-羧甲基乙烯基)-3-〔8-(4-甲氧基苯基)辛氧基〕吡啶實施例A的甲苯磺酸酯用于制備該化合物。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.28(dd，J＝4.0、1.8Hz，1H，6-吡啶基)，8.17(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，7.28(m，2H，4-吡啶基，5-吡啶基)，7.12(d，J＝8.6Hz，2H，芳基)，7.02(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，6.89(d，J＝8.6Hz，2H，芳基)，4.08(t，J＝6.5Hz，2H，OCH2)，3.87(s，3H，CO2CH3)，3.85(s，3H，OCH3)，2.61(t，J＝7.5Hz，2H，芐基)，1.94-1.38(m，12H，脂族的)。
6(b) 2-(E-2-羧甲基乙烯基)-3-〔8-(4-甲氧基苯基)-辛氧基〕吡啶N-氧化物1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.02(d，J＝16.2Hz，1H，鏈烯)，7.80(d，J＝6.5Hz，1H，6-吡啶基)，7.39(d，J＝16.2Hz，1H，鏈烯)，7.00(m，2H，5-吡啶基，4-吡啶基)，6.85(d，J＝8.6Hz，2H，芳基)，6.65(d，J＝8.6Hz，2H，芳基)，3.91(t，J＝6.5Hz，2H，OCH2)，3.68(s，3H，CO2CH3)，3.62(s，3H，OCH3)，2.37(t，J＝7.5Hz，2H，芐基)，1.82-1.10(m，12H，脂族的)。
6(c) 6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-〔8-(4-甲氧基苯基)辛氧基〕-2-吡啶酮1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.75(d，J＝16.2Hz，1H，鏈烯)，7.40(d，J＝9.8Hz，1H，3-吡啶基)，7.10(d，J＝8.6Hz，2H，芳基)，7.00(d，J＝16.2Hz，1H，鏈烯)，6.82(d，J＝8.6Hz，2H，芳基)，6.70(d，J＝9.8Hz，1H，4-吡啶基)，3.95(t，J＝6.5Hz，2H，OCH2)，3.85(s，3H，CO2CH3)，3.82(s，3H，OCH3)，2.57(t，J＝7.5Hz，2H，芐基)，1.85-1.22(m，12H，脂族的)。
6(d) N-(3-羧甲基苯基)-6-(E-2-羧甲基乙烯基)-5-〔8-(4-甲氧基苯基)辛氧基〕-2-吡啶甲酰胺熔點70-73℃;1H NMR(250MHz，CDCl3)δ9.87(s，1H，NH)，8.31(s，1H，2-苯基)，8.28(d，J＝8.7Hz，1H，3-吡啶基)，8.15(d，J＝7.9Hz，1H，4-苯基)，8.08(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，7.85(d，J＝7.9Hz，1H，6-苯基)，7.48(dd，J＝7.9Hz，1H，5-苯基)，7.36(d，J＝8.7Hz，1H，4-吡啶基)，7.10(d，J＝8.6Hz，2H，芳基)，7.08(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，6.85(d，J＝8.6Hz，2H，芳基)，4.12(t，J＝6.5Hz，2H，OCH2)，3.95(s，3H，CO2CH3)，3.88(s，3H，CO2CH3)，3.79(s，3H，OCH3)，2.56(t，J＝7.5Hz，2H，芐基)，1.99-1.28(m，12H，脂族的);元素分析，計算值(C33H33N2O7)C，68.97;H，6.67;N，4.88，實驗值C，69.21;H，6.88;N，4.46;MS(CI)575(M+H)。
6(e) N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-〔8-(4-甲氧基苯基)辛氧基〕-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽熔點315℃(分解)1H NMR(250MHz，CD3OD)δ8.31(s，1H，2-苯基)，8.12(d，J＝8.7Hz，1H，3-吡啶基)，7.86(d，J＝7.9Hz，1H，4-苯基)，7.85(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，7.76(d，J＝7.9Hz，1H，6-苯基)，7.52(d，J＝8.7Hz，1H，4-吡啶基)，7.39(dd，J＝7.9Hz，1H，5-苯基)，7.26(d，J＝15.8Hz，1H，鏈烯)，7.07(d，J＝8.6Hz，2H，芳基)，6.80(d，J＝8.6Hz，2H，芳基)，4.15(t，J＝6.5Hz，2H，OCH2)，3.74(s，3H，OCH3)，2.53(t，J＝7.5Hz，2H，芐基)，1.93-1.37(m，12H，脂族的);元素分析，實驗值C，61.69;H，5.91;N，4.60;FAB-MS(+ve)，559.4(M+H);(-ve)，551.4(M-Li)。
按照相同的方法，但是用合適的氯取代的3-氨基苯甲酸甲酯代替3-氨基苯甲酸甲酯，制備下列化合物N-(3-羧基-6-氯苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-〔8-(4-甲氧基苯基)辛氧基〕-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽;和N-(3-羧基-4-氯苯基)-6-〔E-2-羧基乙烯基)-5-〔8-(4-甲氧基苯基)辛氧基〕-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽。
實施例7通過將鹽溶于水溶液中并加入足夠的酸以至使pH調至約中性(pH7.0)左右，可使鹽轉化為游離酸。雖然優(yōu)選使用無機酸如HCl等，但是可使用任何酸。優(yōu)選使用稀酸而不用濃酸，例如1至6當量溶液最有用。酸可在約室溫下加入;不需要特殊條件。當溶液-達到中性pH或成為酸性時，酸就從溶液中沉淀出來，可以通過結晶方法或對給定酸有用的任何其他方法來回收。
實施例8包括本發(fā)明化合物的藥用制劑可以用各種形式和用各種賦形劑制備。這些制劑的實施例如下吸入劑將式Ⅰ化合物溶于等滲鹽水中，配成濃度為1-10mg/ml的溶液。每次使用在調節(jié)的空氣流下由噴霧器噴成霧狀以提供需要的藥量。
片劑組分 每片 每10，000片1.活性組分(式Ⅰ化合物) 40mg 400g2.玉米淀粉 20mg 200g3.藻酸 20mg 200g4.藻酸鈉 20mg 200g5.硬脂酸鎂 1.3mg 13g101.3mg 1013g制備片劑的方法第1步 在合適的混合器/摻合機中將組分1、2、3和4混合。
第2步 向第一步得到的混合物中分批加入足夠的水，每次加入后仔細混合。這樣加入水并混合直至物料具有一定的稠性使其能轉變成濕的顆粒。
第3步 使?jié)裎锪贤ㄟ^振動制粒機用8號(2.38mm)篩將其轉變成顆粒。
第4步 然后，濕顆粒在60℃于烘箱中烘干，直至干燥。
第5步 干燥的顆粒用組分5潤滑。
第6步 潤滑的顆粒在合適的壓片機上壓制成片。
栓劑組分 每個栓 每1000個栓1.活性組分，式Ⅰ化合物 40.0mg 40g2.聚乙二醇1000 1350.0mg 1，350g3.聚乙二醇4000 450.0mg 450g1840.0mg 1，840g制備方法第1步 將組分2和3一起熔解，并攪拌直至均勻。
第2步 將組分1溶于第1步得到的熔融的物料中，并攪拌直至均勻。
第3步 將第2步得到的熔融物料倒入栓劑模具中，冷卻，從模具中取出栓劑，包裝。
權利要求
1.制備式Ⅰ化合物或其藥物上可接受的鹽或N-氧化物的方法，
式中T是酰胺連接基，其中羰基碳連接在吡啶環(huán)上；
R是C1-C20脂族基，未取代的或取代的苯基C1-C10脂族基，其中取代的苯基有一個或多個選自下列基團中的基低級烷氧基、低級烷基、三鹵甲基或鹵素，或者R是C1-C20脂族氧基，或者R是未取代的或取代的苯基C1-C10脂族氧基，其中取代的苯基有一個或多個低級烷氧基、低級烷基、三鹵甲基或鹵素；R1是R4、-(C1-C5脂族基)R4、-(C1-C5脂族基)CHO、-(C1-C5脂族基)CH2OR8、-CH2OH或-CHO；R2是氫、-COR5，其中R5是-OH、藥物上可接受的形成酯的基團-OR6或OX，其中X是藥物上可接受的陽離子，或者R5是-N(R7)2，其中R7是H或1-10個碳原子的脂族基、4-10個碳原子的環(huán)烷基-(CH2)n-基，其中n是0-3，或者兩個R7基結合形成有4-6個碳原子的環(huán)，或者R2是NHSO2R9，其中R9是-CF3、C1-C6烷基或苯基；R3是氫、低級烷氧基、鹵素、-CN、COR5或OH；R4是COR5，其中R5是-OH、藥物上可接受的形成酯的基團-OR6或OX，其中X是藥物上可接受的陽離子，或者R5是-N(R7)2，其中R7是H或1-10個碳原子的脂族基、4-10個碳原子的環(huán)烷基-(CH2)n-基，其中n是0-3，或者兩個R7結合形成有4-6個碳原子的環(huán)；R8是氫、C1-C6烷基或C1-C6?；?；該方法包括a)將式Ⅰ化合物
式中L是如三氟甲磺?；幕鶊F，用一氧化碳，1，1-雙(二苯基膦基)二茂鐵、合適的鈀催化劑和式2的胺處理，
式中R2不是酰胺或酸；或b)氫化式3的化合物
式中R1是-(C2-C5鏈烯基)R4、-(C2-C5鏈烯基)CHO或-(C2-C5鏈烯基)CH2OR8，形成式Ⅰ的化合物，其中R1是-(C2-C5烷基)R4、-(C2-C5烷基)CHO或-(C2-C5烷基)CH2OR8；或c)水解式Ⅰ化合物，其中R1、R2或R3是酯，形成鹽或酸；或d)酯化式Ⅰ化合物，其中R1、R2或R3是酸；或e)形成式Ⅰ化合物的酰胺，其中R1R2或R3是酸；或f)將鹽轉化成酸。
2.根據(jù)權利要求1的方法，制備其中R是C1-C20脂族氧基或C1-C20脂族基，R1是-(C1-C5脂族基)R4或R4，和R2是-COOH的化合物或其藥物上可接受的鹽。
3.根據(jù)權利要求2的方法，制備其中R是C8-C15烷氧基和R1是-CH＝CHR4(其中雙鍵是順式或反式)的化合物。
4.根據(jù)權利要求3的方法，制備其中R是H17C8-O-，R1是反式-CH＝CHCOOH，和R2是間位取代的-COOH的化合物，即化合物N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-辛氧基-2-吡啶甲酰胺，其二鋰鹽或其藥物上可接受的其他鹽或酯。
5.根據(jù)權利要求3的方法，制備其中R是H21C10-O-，R1是反式-CH＝CHCOOH，和R2是間位取代的-COOH的化合物，即化合物N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-癸氧基-2-吡啶甲酰胺，其二鈉鹽或其藥物上可接受的其他鹽或酯。
6.根據(jù)權利要求3的方法，制備其中R是H25C12-O-，R1是反式-CH＝CHCOOH和R2是間位取代的-COOH的化合物，即化合物N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-十二烷氧基-2-吡啶甲酰胺，其二鋰鹽或其藥物上可接受的其他鹽或酯。
7.根據(jù)權利要求3的方法，制備其中R是H29C14-O-，R1是反式-CH＝CHCOOH，和R2是間位取代的-COOH的化合物，即化合物N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-十四烷氧基-2-吡啶甲酰胺，其二鋰鹽或其藥物上可接受的其他鹽或酯。
8.根據(jù)權利要求2的方法，制備其中R是取代的或未取代的苯基-C1-C10脂族基，R1是-(C1-C5脂族基)R4的化合物。
9.根據(jù)權利要求8的方法，制備其中R是低級烷氧基取代的苯基-C1-C8烷氧基的化合物。
10.根據(jù)權利要求9的方法，制備其中R是對位H3CO-苯基-(CH2)8-O-，R1是HO2CCH＝CH-，和R2是間位取代的-COOH的化合物，即化合物N-(3-羧基苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-〔8-(4-甲氧基苯基)辛氧基〕-2-吡啶甲酰胺，N-(3-羧基-6-氯苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-〔8-(4-甲氧基苯基)辛氧基〕-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽，或N-(3-羧基-4-氯苯基)-6-(E-2-羧基乙烯基)-5-〔8-(4-甲氧基苯基)辛氧基〕-2-吡啶甲酰胺二鋰鹽或其藥物上可接受的其他鹽或酯。
11.根據(jù)權利要求2的方法，制備其中R1是R4CH2CH2-的化合物。
12.根據(jù)權利要求11的方法，制備其中R是H21C10-O-，R1是HO2CCH2CH2-和R2是間位取代的-COOH的化合物，即化合物N-(3-羧基苯基)-6-(2-羧基乙基)-5-癸氧基-2-吡啶甲酰胺，其二鉀鹽或其藥物上可接受的其他鹽或酯。
13.制備藥物組合物的方法，包括將權利要求1中定義的式Ⅰ化合物或其藥物上可接受的鹽和藥物上可接受的載體結合。
14.根據(jù)權利要求13制備藥物組合物的方法，制成適于吸入、腸胃外的、口服的或局部給藥的形式。
全文摘要
本發(fā)明是關于下式化合物
文檔編號A61K31/4418GK1057834SQ9110485
公開日1992年1月15日 申請日期1991年6月7日 優(yōu)先權日1990年6月7日
發(fā)明者R·A·戴恩斯, W·D·金斯伯里 申請人:史密絲克萊恩比徹姆公司