專利名稱：二步法從人尿中聯(lián)產(chǎn)生化藥物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種生化藥物的提取方法，特別是從人尿中提取多種生化藥物的方法。
人尿中含有多種活性物質(zhì)，如尿激酶、激肽釋放酶、尿擬胃素、溶菌酶、核糖核酸酶、白蛋白、人尿糖蛋白、睡眠因子、集落刺激因子、人表皮生長(zhǎng)因子、非特異性變態(tài)反應(yīng)疾病治療劑、紅細(xì)胞生成素、蠶白酶抑制劑、補(bǔ)體系統(tǒng)活性抑制因子、血小板增殖因子、親纖維蛋白尿激酶-抑制劑復(fù)合物、抗癌物質(zhì)等等。這些生物學(xué)活性物質(zhì)幾乎對(duì)臨床上所有的常見(jiàn)病、多發(fā)病都有著很好的療效?，F(xiàn)有的提取工藝都只能提取1～2種生化藥物，通常使用二種不同原理的方法來(lái)聯(lián)合進(jìn)行，最?？紤]的是分子量(分子大小)和電荷性兩個(gè)特征，以此來(lái)選擇提純方案，常用的工藝有1、硅藻土吸附工藝；2、樹(shù)脂吸附工藝；3、堿性聚苯乙烯吸附工藝；4、高嶺土吸附工藝；5、DEAE-纖維素層析工藝；6、親和層析工藝；7、高效大孔離子交換工藝。
現(xiàn)有工藝存在以下缺陷。
1、現(xiàn)有工藝均為單產(chǎn)工藝，至多能聯(lián)產(chǎn)兩種生化藥品，往往造成“掛一漏十”的浪費(fèi)，導(dǎo)致生產(chǎn)成本高，不利于工業(yè)化生產(chǎn)；
2、現(xiàn)有工藝的基本過(guò)程是親和結(jié)合某一種生化藥物-洗滌去除其他成分解析生化藥物-進(jìn)一步純化，整個(gè)生產(chǎn)工藝復(fù)雜、耗時(shí)、浪費(fèi)大；3、現(xiàn)有工藝都要加吸附劑或帶有配基的分離介質(zhì)和洗脫劑(如甲醇、乙醇、堿性水溶液等)，導(dǎo)致成本增加，生化藥品的大量損耗(平均總回收率＜40%)，以及生化藥品生物學(xué)活性的降低。
本發(fā)明的目的是提供一種新的從人尿中聯(lián)產(chǎn)生化藥物的方法，本發(fā)明依據(jù)不同的蛋白質(zhì)具有不同的分子量和電荷，結(jié)合先進(jìn)的膜分離技術(shù)(超過(guò)濾)和再循環(huán)無(wú)阻聚焦蛋白質(zhì)電泳技術(shù)，同時(shí)分離、提純10余種生化藥物。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是這樣的將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的無(wú)菌人尿通過(guò)工業(yè)用一體多級(jí)或者是分體多級(jí)超過(guò)濾系統(tǒng)進(jìn)行多級(jí)連續(xù)超過(guò)濾，獲取含有10余種生化藥物成份的濃縮液，在獲取的濃縮液中加入兩性電解質(zhì)，然后拌勻；將濃縮液直接輸入蛋白質(zhì)純化儀，通過(guò)蛋白質(zhì)純化儀將濃縮液中帶有不同的電荷(等電點(diǎn))的生化藥物分離純化，從而獲得生化藥物的無(wú)菌液體(原料藥)。
其具體步驟如下a、多級(jí)連續(xù)超過(guò)濾獲取濃縮液將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的無(wú)菌人尿液泵入工業(yè)用超過(guò)濾系統(tǒng)，進(jìn)行多級(jí)超過(guò)濾濃縮，每級(jí)濃縮比不低于4，平均操作時(shí)間16～20小時(shí)，起始通量200～250升/米2小時(shí)，最終通量2-4升/米2小時(shí)。超濾膜規(guī)格截留分子量為3000道爾頓，截留包括抗瘤酮在內(nèi)的10余種生化藥物。在多級(jí)超過(guò)濾濃縮中最好是采用三級(jí)連續(xù)超過(guò)濾，每級(jí)的濃縮比最好是5，總濃縮比為125，在上述操作中，可選用Amicon廠家(美國(guó))生產(chǎn)的DC90系列或DC120系列工業(yè)用超過(guò)濾系統(tǒng)。
B、再循環(huán)無(wú)阻聚焦蛋白質(zhì)電泳在經(jīng)過(guò)多級(jí)連續(xù)超過(guò)濾獲取的濃縮液中加入2·5%V/V的兩性電解質(zhì)，兩性電解質(zhì)為精氨酸8毫摩爾濃度，環(huán)絲氨酸10毫摩爾濃度，氨基本甲酸為5毫摩爾濃度。將加入兩性電解質(zhì)的濃縮液拌勻，然后進(jìn)入再循環(huán)無(wú)阻聚焦蛋白純化儀，溫度控制在1～15℃，最好是1～5℃，經(jīng)過(guò)2小時(shí)的運(yùn)行，便可從自動(dòng)收集器皿中得到14種生化藥物的無(wú)菌液體(原料藥)。
再循環(huán)無(wú)阻聚焦蛋白純儀可選用RAININInstrumentCo·Inc·廠家(美國(guó))生產(chǎn)的，型號(hào)為RF3-230-5。
采用本發(fā)明提供的方法可同時(shí)分離、提純10余種生化藥物，整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程均在液相中進(jìn)行，生產(chǎn)過(guò)程中無(wú)熱變、相變，也無(wú)需化學(xué)添加劑，充分保留其生物學(xué)活性，產(chǎn)率可達(dá)90%以上，另外就是具有高附加值，提取藥物后的尿液；可回收生產(chǎn)天然活性飲料和尿素。
權(quán)利要求
1.一種二步法從人尿中聯(lián)產(chǎn)生化藥物的方法其特征是將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的無(wú)菌人尿通過(guò)工業(yè)用一體多級(jí)或者是分體多級(jí)超過(guò)濾系統(tǒng)進(jìn)行多級(jí)連續(xù)超過(guò)濾，獲取含有10余種生化藥物成份的濃縮液；在獲取的濃縮液中加入兩性電解質(zhì)，然后拌勻，將濃縮液直接輸入蛋白質(zhì)純化儀，通過(guò)蛋白質(zhì)純化儀將濃縮液中帶不同電荷(等電點(diǎn))的生化藥物分離純化，從而獲得生化藥物的無(wú)菌液體(原料藥)，其具體步驟如下a、多級(jí)連續(xù)超過(guò)濾獲取濃縮液將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的無(wú)菌人尿液泵入工業(yè)用超過(guò)濾系統(tǒng)，進(jìn)行多級(jí)超過(guò)濾濃縮，每級(jí)濃縮比不低于4，平均操作時(shí)間16～20小時(shí)，起始通量200～250升/米2小時(shí)，最終通量2～4升/米2小時(shí)，超濾膜規(guī)格截留分子量為3000道爾頓，截留包括抗瘤酮在內(nèi)的10余種生化藥物；B再循環(huán)無(wú)阻聚焦蛋白質(zhì)電泳在經(jīng)過(guò)多級(jí)連續(xù)超過(guò)濾獲取的濃縮液中加入2.5%V/V的兩性電解質(zhì)，然后混勻，配好的料液直接進(jìn)入再循環(huán)無(wú)阻聚焦蛋白純化儀，經(jīng)過(guò)2小時(shí)的運(yùn)行，便可從自動(dòng)收集器皿中得到10余種生化藥物的無(wú)菌液體(原料藥)。
2.如權(quán)利要求1所述的二步法從人尿中聯(lián)產(chǎn)生化藥物的方法。其特征是所說(shuō)的多級(jí)連續(xù)超過(guò)濾最好是采用三級(jí)連續(xù)超過(guò)濾，每級(jí)的濃縮比最好是5，總濃縮比為125。
3.如權(quán)利要求1或2所述的二步法從人尿中聯(lián)產(chǎn)生化藥物的方法，其特征是所說(shuō)的兩性電解質(zhì)為精氨酸、環(huán)絲氨酸和對(duì)氨基本甲酸，其含量分別為8毫摩爾濃度、10毫摩爾濃度和5毫摩爾濃度。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種從人尿中聯(lián)產(chǎn)生化藥物的方法，它是將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的無(wú)菌人尿通過(guò)工業(yè)用一體多級(jí)或者是分體多級(jí)超過(guò)濾系統(tǒng)進(jìn)行多級(jí)連續(xù)超過(guò)濾，獲取含有10余種生化藥物成分的濃縮液；在獲取的濃縮液中加入兩性電解質(zhì)，然后直接輸入蛋白質(zhì)純化儀，將濃縮液中帶有不同電荷(等電點(diǎn))的生化藥物分離純化，從而獲得生化藥物的無(wú)菌液體(原料藥)。
文檔編號(hào)A61K35/24GK1101553SQ9311553
公開(kāi)日1995年4月19日 申請(qǐng)日期1993年10月10日 優(yōu)先權(quán)日1993年10月10日
發(fā)明者李玉波, 黃智偉 申請(qǐng)人:李玉波