專利名稱：用于結(jié)合血管生成性靶組織以在手術(shù)中顯影腫瘤邊緣的抗體－染料結(jié)合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及適合于結(jié)合新形成的血管結(jié)構(gòu)的抗體—染料結(jié)合物以及在手術(shù)中顯影病理血管生成的應(yīng)用。
在成年人機(jī)體中，除非常少的個(gè)別情況(如孕齡婦女的周期)外，不發(fā)生新的血管形成。但是，在許多疾病中卻可觀察到新的血管形成。發(fā)生新血管形成的過(guò)程在此稱為血管生成，而且作為對(duì)某些信號(hào)的應(yīng)答而發(fā)生。
血管生成是一個(gè)優(yōu)選在病灶的邊緣區(qū)域發(fā)生的過(guò)程。由病灶的中心釋放因子，擴(kuò)散至病灶的邊緣區(qū)域。這些因子也稱為血管生成刺激劑。如果這些血管生成刺激劑到達(dá)病灶邊緣區(qū)域周圍的健康組織，預(yù)先沒(méi)有與病灶成為一體的血管被刺激形成新的血管芽。由這些血管芽生長(zhǎng)的血管在病灶的邊緣區(qū)域中形成新的毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò)。通過(guò)該過(guò)程，總是可以確保對(duì)病灶的合適營(yíng)養(yǎng)輸送?，F(xiàn)已證明特別重要的是，腫瘤及其轉(zhuǎn)移物的生長(zhǎng)取決于誘導(dǎo)血管生成的能力。
在治療局部的病灶時(shí)，手術(shù)療法目前是標(biāo)準(zhǔn)的措施。其在治療腫瘤時(shí)具有非常大的重要意義。但是已經(jīng)證明，盡管手術(shù)技術(shù)已有很大的提高，但局部復(fù)發(fā)的數(shù)量仍是相當(dāng)大的，這是因?yàn)樵谌梭w中的手術(shù)很少能夠大規(guī)模地除去病灶。在許多器官(如腦)中，必須避免大規(guī)模除去病灶，以得到健康組織。損壞健康器官的風(fēng)險(xiǎn)將隨著手術(shù)介入的劇烈程度而增加。
但是，在完成手術(shù)除去腫瘤后，對(duì)腫瘤邊緣區(qū)域的組織學(xué)研究表明，相當(dāng)數(shù)量的腫瘤不能被完全除去，而且腫瘤殘余仍留在體內(nèi)。其他的腫瘤生長(zhǎng)以及腫瘤轉(zhuǎn)移都有可能源自于這些腫瘤殘余。在手術(shù)治療期間精確表明疾病過(guò)程相對(duì)于健康組織的范圍能夠使得完全除去病灶，并最大程度地使健康組織不受影響。
用于顯影病灶的染料是眾所周知的(Poon，W.S.等人，J.Neurosurgery(1992)76679-686；Haglund，M.M.等人，Neurosurgery(1996)38308-317)。它們優(yōu)選從腫瘤細(xì)胞直接吸收或者非特異性地累積于腫瘤的細(xì)胞外空間。因?yàn)榧词乖诮】到M織中的濃度也可檢測(cè)該機(jī)理，所以所用物質(zhì)的特異性和靈敏度較低。
可用于通過(guò)選擇性地顯影病灶的邊緣區(qū)域而在手術(shù)中顯出病灶輪廓的化合物目前還是未知的。
血管生成優(yōu)選發(fā)生在病灶的邊緣區(qū)域中。通過(guò)顯影血管生成，也可顯影健康組織的范圍。用于檢測(cè)病灶中血管生成的抗體是已知的，而且可用于顯影組織學(xué)組織切片中的新形成血管，用于檢測(cè)病灶中的各種蛋白或者作為治療物質(zhì)的載體分子。
然而，可用于通過(guò)選擇性地顯影病灶的邊緣區(qū)域而在手術(shù)中顯出病灶輪廓的與染料結(jié)合的抗體，即所謂的抗體—染料結(jié)合物仍是未知的。
因此，本發(fā)明的目的是制備用于手術(shù)中顯影腫瘤邊緣的抗體—染料結(jié)合物。根據(jù)本發(fā)明的抗體—染料結(jié)合物中的抗體針對(duì)血管生成過(guò)程中特異性的物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的抗體—染料結(jié)合物包括可通過(guò)其濃集而光學(xué)顯影的染料。
因?yàn)檠苌稍诓≡畹倪吘墔^(qū)域最強(qiáng)，在此產(chǎn)生最大的光學(xué)信號(hào)。
因此，根據(jù)本發(fā)明的抗體—染料結(jié)合物適合于通過(guò)手術(shù)中的光學(xué)診斷顯影相對(duì)于健康組織的病灶范圍，即所謂的邊緣區(qū)域。其結(jié)果是，可完全除去病灶，而最大程度地不影響健康組織。
針對(duì)血管原性組織中強(qiáng)烈表達(dá)而且在相鄰組織中僅非常低水平表達(dá)的物質(zhì)的抗體是已知的(WO 96/01653)。
針對(duì)血管生長(zhǎng)因子的受體、炎癥介質(zhì)所結(jié)合的內(nèi)皮細(xì)胞上的受體、基質(zhì)分子所結(jié)合的內(nèi)皮細(xì)胞上的受體、以及在新血管形成中特異性表達(dá)的基質(zhì)蛋白的抗體，對(duì)于抗體—染料結(jié)合物是特別有用的(Brekken等人，Cancer Res.(1998)581952-9；以及Schold，S.C.Jr.等人，Invest.Radiol.(1993)28488-96)。
抗基質(zhì)蛋白EDB-纖連蛋白的抗體或者抗體片段是優(yōu)選的。EDB-纖連蛋白(EDBFN)也稱為胎性癌纖連蛋白，是纖連蛋白的剪接變體，可在血管生成過(guò)程中特異性地形成新形成血管?？笶DB-纖連蛋白的抗體的特別優(yōu)點(diǎn)包括在除去病灶時(shí)不會(huì)由于手術(shù)中的損傷在健康組織中新形成任何EDB-纖連蛋白。在此方面，在手術(shù)過(guò)程中都保持該特異性。但是，在接近病灶的健康組織中，在手術(shù)中仍然新形成抗內(nèi)皮細(xì)胞上的生長(zhǎng)因子受體或者炎癥介質(zhì)而且在腫瘤邊緣區(qū)域中特異性表達(dá)的抗體。
在本發(fā)明的抗體—染料結(jié)合物中特別優(yōu)選的是抗EDB-纖連蛋白的抗體L19和E8(Viti，F(xiàn).等人，Cancer Res.(1999)59347-352)。此等抗體染料結(jié)合物也是本發(fā)明的主題。
已知的抗體與染料結(jié)合，該染料在組織中的濃集可光學(xué)檢測(cè)，而且可在手術(shù)中顯影病灶邊緣區(qū)域的輪廓。
根據(jù)本發(fā)明的抗體—染料結(jié)合物的優(yōu)點(diǎn)是，其可用于選擇性地?zé)晒馊旧卵茉噪A段的組織。熒光染色是腫瘤特異性的，而且產(chǎn)生可以高信噪比檢測(cè)的熒光信號(hào)。
用于熒光成像的抗體—染料結(jié)合物對(duì)于經(jīng)皮非侵入性地顯影腫瘤也是已知的(Neri，D.等人，Nature Biotechnology(1997)151271-1275)。但是，優(yōu)選累積于病灶邊緣區(qū)域中的抗體—染料結(jié)合物仍是未知的。
用于手術(shù)中腫瘤顯影的蛋白—染料結(jié)合物也是已知的。
這些結(jié)合物的缺陷是，特別缺氧而且代謝營(yíng)養(yǎng)不足的腫瘤細(xì)胞吸收結(jié)合物。但是，因?yàn)槟[瘤邊緣區(qū)域中的組織是可良好血管化的，而且在此方面細(xì)胞被供給充足的氧和營(yíng)養(yǎng)，所以已知的蛋白—染料結(jié)合物不可能充分地累積。
然而，根據(jù)本發(fā)明的抗體—染料結(jié)合物很大程度上獨(dú)立于病灶的代謝狀態(tài)。
雖然可以用不同的方式對(duì)病灶的范圍進(jìn)行光學(xué)檢測(cè)，但通常優(yōu)選檢測(cè)相應(yīng)的刺激光所誘發(fā)的染料特異性熒光輻射。根據(jù)發(fā)射波長(zhǎng)，在此情況下熒光可直接用肉眼檢測(cè)或者用顯微鏡檢測(cè)，并同時(shí)任選地用成像檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)字記錄，在顯示器上觀看。
400-650nm光譜范圍的熒光輻射是可肉眼檢測(cè)的。特別優(yōu)選的波長(zhǎng)是450-600nm。使用可見光的特別優(yōu)點(diǎn)是，檢測(cè)熒光的技術(shù)成本低。用合適的激光或者激光二極管產(chǎn)生的刺激光連接至光纖光導(dǎo)器中，并通過(guò)后者傳遞到待診斷的區(qū)域。用大規(guī)模的輻射面積可對(duì)手術(shù)中的腫瘤邊緣實(shí)施檢測(cè)。反射的刺激光被濾光器(例如，研究人員配戴的濾光鏡)阻斷，而僅有染料特異性的熒光被觀察到(肉眼觀察)?；蛘?，可用顯微鏡來(lái)檢測(cè)熒光(顯微鏡觀察)。通過(guò)可見光在組織中的小的穿透深度(幾毫米)，可按此方式檢測(cè)位于表面上的新血管形成。
光譜范圍的可見光的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是，在組織中的穿透深度以及由組織中的發(fā)射小。因此，可檢測(cè)的信號(hào)不會(huì)被來(lái)自更深部分的組織的信號(hào)扭曲，而且可特異性地確定在表面上可見的組織結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的主題還包括抗體—染料結(jié)合物，其中所述染料誘發(fā)可見光范圍的光信號(hào)。
但是，使用其中染料吸收近紅外范圍的光(NIR，600-900nm)的抗體—染料結(jié)合物可檢測(cè)更深層組織(最大達(dá)1cm)的新血管形成，這是因?yàn)镹IR光的組織吸收性更弱，因此具有更大的組織穿透深度。不可能用肉眼觀察熒光，但可通過(guò)設(shè)置在目標(biāo)組織區(qū)域上的CCD攝像機(jī)(電耦裝置攝像機(jī))來(lái)進(jìn)行。肉眼檢測(cè)和顯微鏡檢測(cè)是可能的。如果必須評(píng)估被遮蓋的區(qū)域(如血液)，在抗體—染料結(jié)合物中使用在NIR光譜范圍中有吸收并發(fā)出熒光的染料的優(yōu)點(diǎn)發(fā)生作用。
從光物理的角度看，在400-800nm的光譜范圍具有最大吸收而且在500-900nm的范圍內(nèi)具有至少一個(gè)最大熒光的染料對(duì)于抗體—染料結(jié)合物是合適的。
本發(fā)明的主題還包括抗體—染料結(jié)合物，其特征在于，在僅使用可見光或者近紅外光范圍的確定波長(zhǎng)時(shí)，染料誘發(fā)熒光信號(hào)。
抗體—染料結(jié)合物中所包括的具有可肉眼檢測(cè)的熒光的染料例如選自于以下組中熒光素、熒光素—異硫氰酸酯、羧基熒光素或者鈣黃綠素、四溴熒光素或者曙紅、四碘熒光素或者赤鮮紅、二氟熒光素，如Oregon GreenTM488、Oregon GreenTM500、或者Oregon GreenTM514，羧基對(duì)甲氨基酚(Rhodol GreenTM)—染料(US 5,227,487、US 5,442,045)，羧基若丹明染料(如Rhodamine GreenTM染料)(US 5,366,860)；4，4-二氟-4-硼雜-3a，4a-二氮雜-indacene，如Bodipy FL、Bodipy 493/503、或Bodipy 530/550及其衍生物(US 4,774,339、US5,187,288、US 5,248,782、US5,433,896、以及US 5,451,663)；菁染料，特別是羰花菁染料和部花菁染料；香豆素染料，如7-氨基-4-甲基香豆素，DTPA或者四氮雜大環(huán)烯(環(huán)烯、pyclene)與鋱或者銪的金屬絡(luò)合物或者四吡咯染料，特別是卟啉。
包含近紅外染料的抗體—染料結(jié)合物例如選自于以下組中多亞甲基染料，如二羰花菁、三羰花菁、部花菁和氧雜菁染料(WO96/17628)；若丹明染料；苯并惡嗪或者苯并噻嗪染料；四吡咯染料，特別是苯并卟啉、chorine和酞菁。
抗體—染料結(jié)合物中優(yōu)選的近紅外染料是在700-800nm之間具有最大吸收的花菁染料，特別是茚二羰花菁和茚三羰花菁。
在抗體—染料結(jié)合物中通常優(yōu)選的染料是以上組中具有一個(gè)或者多個(gè)羧基者，該羧基在化學(xué)活化后與抗體或者抗體片段的氨基偶聯(lián)。那些包含馬來(lái)酰亞胺基或者溴代烷基的衍生物也是優(yōu)選的，使得可以與氨基酸半胱氨酸的巰基共價(jià)偶聯(lián)。另外，具有異硫氰酸基的染料也是優(yōu)選的，該基團(tuán)也可以與氨基反應(yīng)。
再者，抗體—染料結(jié)合物中的染料必須具有高度的光穩(wěn)定性，而且在光的輻射(光漂白)下不會(huì)被漂白，以確保研究期間恒定的信號(hào)。
本發(fā)明的主題是抗體—染料結(jié)合物，該結(jié)合物累積于病灶的細(xì)胞組織的邊緣區(qū)域，并由此使病灶的邊緣區(qū)域可光學(xué)檢測(cè)。
具體而言，本發(fā)明的主題是以下通式I表示的抗體—染料結(jié)合物B-(F)n(I)其中B代表與ED-BFN具有高度結(jié)合性的抗體或者抗體片段；F代表選自于以下組中的染料香豆素、熒光素、羧基熒光素、二氟熒光素、四溴熒光素、四碘熒光素、若丹明、羧基若丹明、羧基對(duì)甲氨基酚、4，4-二氟-4-硼雜-3a，4a-二氮雜-indacene、多亞甲基染料、或者四吡咯染料、或者DTPA或者環(huán)烯與鋱或者銪的金屬絡(luò)合物及其衍生物；和n代表1-5。
本發(fā)明的抗體—染料結(jié)合物特別優(yōu)選的是，染料為花菁染料、部花菁染料、氧雜菁染料、苯乙烯基染料或者squarilium染料。
本發(fā)明的抗體—染料結(jié)合物特別優(yōu)選染料部分是花菁染料，特別是羰花菁、二羰花菁或者三羰花菁。
因此，本發(fā)明還特別涉及以下抗體—染料結(jié)合物，其中通式I中的染料-(F)n是以下通式II的花菁染料 其中D代表以下基團(tuán)III或IV， 其中星號(hào)標(biāo)記的位置代表與基團(tuán)B的連接位置，以及B代表以下基團(tuán)V、VI、VII、VIII或IX， 其中R1和R2代表C1-C4磺烷基，飽和或不飽和、直鏈或支鏈的C1-C50烷基鏈，該烷基鏈任選被最多15個(gè)氧原子、和/或最多3個(gè)羰基、和/或最多5個(gè)羥基取代，R3代表基團(tuán)-COOE1、-CONE1E2、-NHCOE1、-NHCONHE1、-NE1E2、
-OE1、-OSO3E1、-SO3E1、-SO2NHE1或-E1，其中E1和E2相互獨(dú)立地代表氫原子、C1-C4磺烷基、飽和或不飽和、直鏈或支鏈的C1-C50烷基鏈，該烷基鏈任選被最多15個(gè)氧原子、和/或最多3個(gè)羰基、和/或最多5個(gè)羥基取代，R4代表氫原子或者氟、氯、溴或碘原子，b代表2或3，X代表氧、硫、或者基團(tuán)＝C(CH3)2或-(CH＝CH)-，以及L代表直接鍵或者連接基團(tuán)，該連接基團(tuán)是具有最多20個(gè)碳原子的直鏈或支鏈碳鏈，該碳鏈可被一個(gè)或多個(gè)-OH、-COOH、或SO3基團(tuán)取代，和/或插入一個(gè)或多個(gè)-O-、-S-、-CO-、-CS-、-CONH-、-NHCO-、-NHCSNH-、-SO2-、PO4-、或-NH-或者芳基環(huán)。
根據(jù)本發(fā)明的抗體—染料結(jié)合物可單獨(dú)使用或者配制成制劑使用。
在以制劑形式使用抗體—染料結(jié)合物時(shí)，除抗體—染料結(jié)合物外，該制劑還包含藥物學(xué)上可接受的適合于腸道或非胃腸道給藥的無(wú)機(jī)或有機(jī)惰性載體，如水、明膠、阿拉伯膠、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、滑石、植物油、聚亞烷基二醇等。該藥物制劑可為固體劑型，如片劑、包衣片、栓劑、膠囊，或者是液體劑型，例如溶液劑、混懸劑或乳劑。該制劑還可任選地包含輔劑如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤(rùn)劑或者乳化劑、用于改變滲透壓的鹽或者緩沖劑。
在非胃腸道使用時(shí)，注射液或者混懸劑、特別是抗體—染料結(jié)合物的水溶液是合適的。
還可使用載體系統(tǒng)，例如表面活性劑，如膽酸鹽或者動(dòng)物或植物磷脂，以及這些物質(zhì)的混合物和脂質(zhì)體或其組分。
在口服使用時(shí)，與滑石和/或烴載體或粘結(jié)劑如乳糖、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉組合使用的片劑、包衣片或膠囊是特別合適的。也可以液體劑型給藥，如其中添加有甜味劑的糖漿劑。
抗體—染料結(jié)合物的劑量可根據(jù)以下因素變化給藥方法、患者的年齡和體重、待治療疾病的類型和嚴(yán)重程度等。在檢測(cè)有限的區(qū)域時(shí)，抗體—染料結(jié)合物的適用劑量為0.5-1000mg，優(yōu)選50-200mg，其中該劑量可以單劑量一次性給藥或者分為兩個(gè)或多個(gè)日劑量。
上述制劑和劑型也是本發(fā)明的主題。
因此，本發(fā)明還涉及藥物，其包括一種或多種用于手術(shù)中顯影病灶的邊緣區(qū)域的抗體—染料結(jié)合物，其中該藥物可單獨(dú)使用或者與合適的溶劑、緩沖劑和/或載體混合使用。
根據(jù)本發(fā)明的抗體—染料結(jié)合物可用于手術(shù)治療血管生成依賴性疾病，例如惡性腫瘤及其轉(zhuǎn)移瘤、良性腫瘤、癌前組織變化、子宮內(nèi)膜異位、血管瘤、和異位懷孕。
本發(fā)明的主題還包括抗體—染料結(jié)合物和藥物在手術(shù)中顯影病灶的應(yīng)用，特別是在手術(shù)中肉眼觀察或者顯微觀察病灶的邊緣區(qū)域的應(yīng)用，以及在制備用于手術(shù)治療血管生成依賴性疾病的藥物中的應(yīng)用，所述疾病是惡性腫瘤及其轉(zhuǎn)移瘤、良性腫瘤、癌前組織變化、子宮內(nèi)膜異位、血管瘤、和異位懷孕。染料的制備染料是根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法來(lái)制備的。適合于制備抗體—染料結(jié)合物的染料是具有羧基或者異硫氰酸基的染料，以與抗體上的氨基結(jié)合。在此情況下，特別優(yōu)選的是花菁染料(Mujumdar，S.R.等人(1996)7356-362；Flanagan，J.H.等人(1997)8751-756；以及Licha，K.等人(1996)Proc SPIE，第2927卷，192-198)。
具有羧基的染料首先根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法轉(zhuǎn)化為反應(yīng)性酯(如N—羥基琥珀酰亞胺酯)，由此進(jìn)行活化。具有異硫氰酸基團(tuán)的染料可直接使用。反應(yīng)性衍生物然后在緩沖液或者有機(jī)溶劑的混合物(如二甲基甲酰胺(DMF)或者二甲基亞砜(DMSO))中與抗體反應(yīng)。在此情況下，使用3-100倍摩爾過(guò)量的染料。在反應(yīng)完全后，未反應(yīng)的部分通過(guò)超濾和/或色譜法進(jìn)行分離。
也可用類似的方法制備以下染料。
制備實(shí)施例1二-1，1′-(4-磺基丁基)茚羰花菁-5-甲酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯按照類似于文獻(xiàn)中已知的方法，由1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基-3H-假吲哚和1-(4-磺基丁基)-2，3，3-三甲基-5-羧基-3H-假吲哚起始制備二-1，1′-(4-磺基丁基)茚羰花菁-5-甲酸(Cytometry 10，11-19，1989；Talanta 39，505-510，1992)。
為轉(zhuǎn)化成N-羥基琥珀酰亞胺酯，0.1mmol的染料(67mg在10ml的DMF中)與分別為0.5mmol的N-羥基琥珀酰亞胺和二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)混合，然后在室溫下攪拌24小時(shí)。添加50ml的乙醚后，過(guò)濾出固體沉淀物，再用少量的DDF重新溶解二次，沉淀物用乙醚洗滌，然后真空干燥(產(chǎn)率89％)?？贵w—染料結(jié)合物的制備制備二-1，1′-(4-磺基丁基)茚羰花菁與L19抗體的結(jié)合物抗體L19(1mg在1ml乙酸鈉緩沖液50mM中，pH8.2)與N-羥基琥珀酰亞胺酯(4mg/ml在DMSO中的溶液75μmol)混合，然后在室溫下攪拌2小時(shí)。在PD10柱(Pharmacia)上用凝膠過(guò)濾進(jìn)行純制，然后使用Centricon-10管(Amicon)進(jìn)行濃縮，同時(shí)得到約1mg/ml的抗體溶液。
最大吸收555nm最大熒光582nm以下實(shí)施例是用于說(shuō)明本發(fā)明的抗體—染料結(jié)合物的生物應(yīng)用性，但其并不僅限于該應(yīng)用實(shí)施例。應(yīng)用實(shí)施例1體內(nèi)對(duì)攜帶腫瘤的裸鼠進(jìn)行熒光成像并在活體外顯微檢查腫瘤組織在注射于攜帶腫瘤的裸鼠后，體內(nèi)檢查根據(jù)本發(fā)明的化合物的成像性質(zhì)。為此目的，靜脈給藥0.1-2μmol/kg的物質(zhì)，然后在0-48小時(shí)內(nèi)觀察腫瘤區(qū)域中的濃度。用相應(yīng)波長(zhǎng)的光照射動(dòng)物，由此誘發(fā)物質(zhì)的熒光，所述光是用激光單色產(chǎn)生的(二極管激光、固態(tài)激光)或者是用濾光器由Hg或Xe燈的多色發(fā)光中過(guò)濾出來(lái)的。在使用如制備實(shí)施例1中描述的化合物時(shí)，使用由NdYAG激光產(chǎn)生的波長(zhǎng)為540nm的光進(jìn)行激發(fā)，以刺激試驗(yàn)動(dòng)物，然后用增強(qiáng)型CCD攝像機(jī)檢測(cè)＞580nm波長(zhǎng)處的熒光輻射，同時(shí)得到整體熒光圖象。平行地用肉眼及照相檢測(cè)熒光。由腫瘤材料制備切片，并用顯微鏡(Zeiss Axiovert顯微鏡，具有Cy3濾光器)進(jìn)行研究。
在攜帶F9-畸胎樣瘤的裸鼠中注射制備實(shí)施例1中提到的抗體—染料結(jié)合物1μmol/kg，接著可在4小時(shí)后檢測(cè)熒光信號(hào)的增加，以便根據(jù)整體熒光圖象與正常組織進(jìn)行對(duì)比。
在制備腫瘤的表皮以及最上層組織后，熒光可以與腫瘤的邊緣區(qū)域結(jié)合。顯微鏡評(píng)估腫瘤切片產(chǎn)生更高的熒光，該熒光用腫瘤邊緣區(qū)域的血管進(jìn)行校正。
權(quán)利要求
1.一種抗體—染料結(jié)合物，其特征在于優(yōu)先在病灶的細(xì)胞組織的邊緣區(qū)域中累積，并由此使得可以光學(xué)檢測(cè)病灶的邊緣區(qū)域。
2.如權(quán)利要求1所述的抗體—染料結(jié)合物，其具有以下通式IB-(F)n(I)其中B代表與EDB-纖連蛋白具有高度結(jié)合性的抗體或者抗體片段；F代表選自于以下組中的染料香豆素、熒光素、羧基熒光素、二氟熒光素、四溴熒光素、四碘熒光素、若丹明、羧基若丹明、羧基對(duì)甲氨基酚、4，4-二氟-4-硼雜-3a，4a-二氮雜-indacene、多亞甲基染料、或者四吡咯染料、或者DTPA或者環(huán)烯與鋱或者銪的金屬絡(luò)合物及其衍生物；和n代表1-5。
3.如權(quán)利要求1或2所述的抗體—染料結(jié)合物，其中所述染料為花菁染料、部花菁染料、氧雜菁染料、苯乙烯基染料或者squarilium染料。
4.如權(quán)利要求1-3之一所述的抗體—染料結(jié)合物，其中所述染料是花菁染料，如羰花菁、二羰花菁或者三羰花菁。
5.如權(quán)利要求1-4之一所述的抗體—染料結(jié)合物，其中通式I中的染料-(F)n是以下通式II的花菁染料 其中D代表以下基團(tuán)III或IV， 其中星號(hào)標(biāo)記的位置代表與基團(tuán)B的連接位置，以及B代表以下基團(tuán)V、VI、VII、VIII或IX， 其中R1和R2代表C1-C4磺烷基，飽和或不飽和、直鏈或支鏈的C1-C50烷基鏈，該烷基鏈任選被最多15個(gè)氧原子、和/或最多3個(gè)羰基、和/或最多5個(gè)羥基取代，R3代表基團(tuán)-COOE1、-CONE1E2、-NHCOE1、-NHCONHE1、-NE1E2、-OE1、-OSO3E1、-SO3E1、-SO2NHE1或-E1，其中E1和E2相互獨(dú)立地代表氫原子、C1-C4磺烷基、飽和或不飽和、直鏈或支鏈的C1-C50烷基，該烷基任選被最多15個(gè)氧原子、和/或最多3個(gè)羰基、和/或最多5個(gè)羥基取代，R4代表氫原子或者氟、氯、溴或碘原子，b代表2或3，X代表氧、硫、或者基團(tuán)＝C(CH3)2或-(CH＝CH)-，以及L代表直接鍵或者連接基團(tuán)，該連接基團(tuán)是具有最多20個(gè)碳原子的直鏈或支鏈碳鏈，該碳鏈可被一個(gè)或多個(gè)-OH、-COOH、或SO3基團(tuán)取代，和/或任選地插入一個(gè)或多個(gè)-O-、-S-、-CO-、-CS-、-CONH-、-NHCO-、-NHCSNH-、-SO2-、PO4-、或-NH-或者芳基環(huán)。
6.如權(quán)利要求1-5之一所述的抗體—染料結(jié)合物，其中所述抗體是抗體L19和E8。
7.如權(quán)利要求1-6之一所述的抗體—染料結(jié)合物，其中染料在可見光范圍內(nèi)誘發(fā)光信號(hào)。
8.如權(quán)利要求1-6之一所述的抗體—染料結(jié)合物，其中僅在使用確定波長(zhǎng)范圍的可見光或者近紅外光時(shí)染料誘發(fā)光信號(hào)。
9.一種用于手術(shù)中顯影病灶邊緣區(qū)域的藥物，其包含一種或多種如權(quán)利要求1-8之一所述的抗體—染料結(jié)合物。
10.如權(quán)利要求9所述的藥物，其是與合適的溶劑、緩沖劑和/或載體的混合物。
11.如權(quán)利要求1-10之一所述的抗體—染料結(jié)合物或藥物在手術(shù)中顯影病灶的應(yīng)用。
12.如權(quán)利要求1-10之一所述的抗體—染料結(jié)合物或藥物在手術(shù)中顯影病灶邊緣區(qū)域的應(yīng)用。
13.如權(quán)利要求1-10之一所述的抗體—染料結(jié)合物或藥物在手術(shù)中肉眼觀察或者顯微觀察病灶的邊緣區(qū)域的應(yīng)用。
14.如權(quán)利要求1-8之一所述的抗體—染料結(jié)合物在制備用于手術(shù)治療血管生成依賴性疾病的藥物中的應(yīng)用，所述疾病是惡性腫瘤及其轉(zhuǎn)移瘤、良性腫瘤、癌前組織變化、子宮內(nèi)膜異位、血管瘤、和異位懷孕。
全文摘要
本發(fā)明涉及適合于結(jié)合新形成的血管的抗體—染料結(jié)合物以及在手術(shù)中顯影病理血管生成的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K47/48GK1376074SQ00813295
公開日2002年10月23日 申請(qǐng)日期2000年8月19日 優(yōu)先權(quán)日1999年9月24日
發(fā)明者米夏埃爾·席爾納, 凱·利夏, 盧德格爾·丁克爾博格 申請(qǐng)人:舍林股份公司