專利名稱：一種茯苓酸性多糖提取物的制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥有效成分的制備方法及其應(yīng)用，更具體涉及一種茯苓酸性多糖提取物的制備方法及其在制備免疫增強(qiáng)藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
茯苓Poria cocosGctiw.) Wolf為常用中藥，自古以來藥食兩用。史載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品，為多孔菌科真菌Poria cocos (Schw. )ffolf的干燥菌核。性味甘淡，平， 歸入心脾肺經(jīng)。具有祛濕利水、健脾和胃、寧心安神的作用。臨床用于治療小便不利，水腫脹滿，痰飲咳逆，嘔穢，泄瀉，遺精，淋濁，驚悸，健忘等。茯苓的主要成份為茯苓多糖、三萜類化合物、蛋白質(zhì)、脂肪及無機(jī)鹽等。其中茯苓多糖和三萜為其主要活性成分，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)茯苓多糖、三萜等成份的藥理作用及臨床應(yīng)用方面作了較多的研究，并且有了較大的進(jìn)展。研究表明，茯苓多糖具有抗腫瘤作用，能增高老年患者體液免疫功能，降低白血病放療中產(chǎn)生的副作用。茯苓中酸性多糖含量占茯苓藥材中50%以上，為水不溶性成分，但臨床應(yīng)用中多采用水煎煮提取的方法，藥理學(xué)研究也主要針對(duì)的是茯苓中水溶性部分，對(duì)其堿溶性部分研究甚少，從而造成了茯苓中有效成分的損失。結(jié)合現(xiàn)代化學(xué)與藥理研究成果，對(duì)茯苓多糖類成分加以開發(fā)利用，發(fā)掘新藥，將對(duì)傳統(tǒng)中藥茯苓的開發(fā)與應(yīng)用有現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供了一種茯苓酸性多糖提取物的制備方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了一種上述方法制備的茯苓酸性多糖提取物在制備具有免疫調(diào)節(jié)作用的藥物中的應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)上述第一個(gè)目的，本發(fā)明采用的技術(shù)措施如下一種茯苓酸性多糖提取物的制備方法，其步驟如下(1)稱取茯苓，按照其重量的4-8倍加入濃度為60 80V/V%的乙醇浸泡3_12小時(shí)；(2)浸泡后回流提取1-3次，每次時(shí)間為1-2小時(shí)，過濾，棄提取液，得濾渣；在步驟(1)的浸泡完成后直接加熱進(jìn)行第一次回流提取，提取完后分離出提取液，后續(xù)每次提取時(shí)加入8倍原料茯苓重量的70v/v%的乙醇作為提取劑；(3)將步驟O)的濾渣加4-10倍重量的水浸泡3-12小時(shí)，浸泡后回流提取1_3 次，每次時(shí)間為1-3小時(shí)，過濾，棄提取液，得濾渣；在步驟(3)的浸泡完成后直接加熱進(jìn)行第一次回流提取，提取完后分離出提取液，后續(xù)每次提取時(shí)再加入4-10倍步驟O)的濾渣重量的水作為提取劑；(4)將步驟(3)得到的濾渣碾碎，加入其重量30-70倍的0. 1-0. 5mol/L NaOH溶液攪拌提取30-120min，過濾，濾液加2wt% HCl中和至中性，離心分離出沉淀，再用水洗沉淀以除鹽，得沉淀；
(5)將步驟(4)所得沉淀經(jīng)噴霧干燥，即得茯苓酸性多糖提取物產(chǎn)品。在步驟(1)⑵中，乙醇回流提取的目的在于分離出茯苓三萜類成分。在步驟(3)中，水回流提取的目的在于分離出茯苓水溶性多糖。在步驟⑷中，NaOH的最佳濃度為0. 5mol/L，其最佳用量為步驟(3)得到的濾渣重量的70倍。在步驟(5)中，所述的噴霧干燥操作條件如下進(jìn)風(fēng)口溫度為175°C，出風(fēng)口溫度為90°C，霧化盤轉(zhuǎn)速為29040轉(zhuǎn)/分鐘。利用上述制備方法得到的茯苓酸性多糖提取物中多糖含量以葡萄糖計(jì)為 1. 9-50. Owt %。上述方法制備得到的茯苓酸性多糖提取物可用于制備免疫增強(qiáng)藥物。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果在于本發(fā)明提高了茯苓藥材的利用率，開辟了其新的藥用途徑。本發(fā)明所得的茯苓酸性多糖提取物具有很好的調(diào)節(jié)免疫功能的作用。不僅可單獨(dú)使用還可以與其他藥物配伍聯(lián)合使用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體的實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的方法及其應(yīng)用。茯苓是一種常用中藥材，一般以飲片的形式使用，該藥材可從各茯苓產(chǎn)地直接購得，本發(fā)明方法中使用到的茯苓片購自有“茯苓之鄉(xiāng)”之稱的湖北省羅田縣九資河鎮(zhèn)。實(shí)施例1 一種茯苓酸性多糖提取物的制備方法，步驟如下(1)稱取茯苓片，按照其重量的8倍加入濃度為70V/V%的乙醇浸泡12小時(shí)；(2)浸泡后回流提取2次，第一次為池，第二次為Ih (第二次提取時(shí)加入茯苓片重量8倍的70V/V%乙醇)，過濾，得到濾渣；(3)加入8倍步驟⑵濾渣重量的水浸泡12h ；(4)浸泡后回流提取3次，每次提取lh，后兩次提取用水量依次為步驟( 濾渣重量的6倍和4倍；過濾，得到濾渣；(5)將濾渣碾碎，加入70倍步驟(4)所得濾渣重量的0. 5mol/L的NaOH攪拌提取 Ih;過濾，得濾液;(6)向上述濾液中加入2wt% HCl中和至中性，離心得到茯苓酸性多糖粗品；(7)將上述茯苓酸性多糖粗品三次水洗離心后，得沉淀，再將所得沉淀噴霧干燥， 即得茯苓酸性多糖提取物。經(jīng)測(cè)試，制得的茯苓酸性多糖提取物中，多糖的含量為21. 8wt% (以葡萄糖計(jì))， 干膏得率為5% (重量)。實(shí)施例2 一種茯苓酸性多糖提取物的制備方法，步驟如下(1)稱取茯苓片，按照其重量的4倍加入濃度為80V/V%的乙醇浸泡10小時(shí)；(2)浸泡后回流提取2次，第一次為池，第二次為Ih (第二次提取時(shí)加入茯苓片重量8倍的70V/V%乙醇)，過濾，得到濾渣；
(3)加入10倍步驟⑵濾渣重量的水浸泡他；(4)浸泡后回流提取3次，每次提取lh，后兩次提取用水量依次為步驟( 濾渣重量的8倍和6倍；過濾，得到濾渣；(5)將濾渣碾碎，加入70倍步驟(4)所得濾渣重量的0. 2mol/L的NaOH攪拌提取 Ih;過濾，得濾液;(6)向上述濾液中加入2wt% HCl中和至中性，離心得到茯苓酸性多糖粗品；(7)將上述茯苓酸性多糖粗品四次水洗離心后，得沉淀，再將所得沉淀噴霧干燥， 即得茯苓酸性多糖提取物。經(jīng)測(cè)試，制得的茯苓酸性多糖提取物中，多糖的含量為1. 7wt% (以葡萄糖計(jì))，干膏得率為9. 8% (重量)。實(shí)施例3 一種茯苓酸性多糖提取物的制備方法，步驟如下(1)稱取茯苓片，按照其重量的7倍加入濃度為70V/V%的乙醇浸泡6小時(shí)；(2)浸泡后回流提取2次，第一次為池，第二次為Ih (第二次提取時(shí)加入茯苓片重量8倍的70V/V%乙醇)，過濾，得到濾渣；(3)加入8倍步驟⑵濾渣重量的水浸泡Mi ；(4)浸泡后回流提取3次，每次提取lh，后兩次提取用水量依次為步驟( 濾渣重量的4倍和6倍；過濾，得到濾渣；(5)將濾渣碾碎，加入70倍步驟(4)所得濾渣重量的0. 2mol/L的NaOH攪拌提取 2h;過濾，得濾液;(6)向上述濾液中加入2wt% HCl中和至中性，離心得到茯苓酸性多糖粗品；(7)將上述茯苓酸性多糖粗品五次水洗離心后，得沉淀，再將所得沉淀噴霧干燥， 即得茯苓酸性多糖提取物。經(jīng)測(cè)試，制得的茯苓酸性多糖提取物中，多糖的含量為1.69wt% (以葡萄糖計(jì))， 干膏得率為9. 8% (重量)。實(shí)施例4 一種茯苓酸性多糖提取物的制備方法，步驟如下(1)稱取茯苓片，按照其重量的6倍加入濃度為60V/V%的乙醇浸泡3小時(shí)；(2)浸泡后回流提取2次，第一次為池，第二次為Ih (第二次提取時(shí)加入茯苓片重量8倍的70V/V%乙醇)，過濾，得到濾渣；(3)加入8倍步驟⑵濾渣重量的水浸泡池；(4)浸泡后回流提取3次，每次提取lh，后兩次提取用水量依次為步驟( 濾渣重量的4倍和6倍；過濾，得到濾渣；(5)將濾渣碾碎，加入70倍步驟(4)所得濾渣重量的0. 5mol/L的NaOH攪拌提取 1.5h;過濾，得濾液;(6)向上述濾液中加入2wt% HCl中和至中性，離心得到茯苓酸性多糖粗品；(7)將上述茯苓酸性多糖粗品三次水洗離心后，得沉淀，再將所得沉淀噴霧干燥， 即得茯苓酸性多糖提取物。經(jīng)測(cè)試，制得的茯苓酸性多糖提取物中，多糖的含量為23. 6wt% (以葡萄糖計(jì))，干膏得率為25.0% (重量)。實(shí)施例5 中試放大實(shí)驗(yàn)一種茯苓酸性多糖提取物的制備方法稱取茯苓片20kg，加入其8倍重量的70V/V%乙醇浸泡12小時(shí)后，回流提取兩次， 第一次池，第二次加入8倍原料茯苓片重量的70v/v%乙醇回流提取lh，過濾；向?yàn)V渣中加入其8倍重量的水浸泡12h，回流提取3次(后兩次提取時(shí)加水量與第一次同)，每次lh， 過濾，得濾渣；將濾渣碾碎，加入70倍濾渣重量的0. 5mol/LNa0H攪拌提取lh，過濾，濾液加 2wt% HCl中和至中性，離心得到的茯苓酸性多糖粗品經(jīng)三次水洗除鹽后，再噴霧干燥，收集干燥物，即得茯苓酸性多糖提取物中試產(chǎn)品，密封，稱重，置于干燥處保存。三批中試放大實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。表1三批中試放大試驗(yàn)結(jié)果表
權(quán)利要求
1.一種茯苓酸性多糖提取物的制備方法，步驟如下(1)稱取茯苓，按照其重量的4-8倍加入濃度為60-80V/V%的乙醇浸泡3-12小時(shí)；(2)浸泡后回流提取1-3次，每次時(shí)間為1-2小時(shí)，過濾，得濾渣；在步驟(1)的浸泡完成后直接加熱進(jìn)行第一次回流提取，提取完后分離出提取液，后續(xù)每次提取時(shí)加入8倍原料茯苓重量的70v/v%的乙醇作為提取劑；(3)向步驟(2)的濾渣中加入其重量的4-10倍的水浸泡3-12小時(shí)，浸泡后回流提取 1-3次，每次提取時(shí)間為1-3小時(shí)，過濾，得濾渣；在步驟(3)的浸泡完成后直接加熱進(jìn)行第一次回流提取，提取完后分離出提取液，后續(xù)每次提取時(shí)再加入4-10倍步驟(2)的濾渣重量的水作為提取劑；(4)將步驟(3)得到的濾渣碾碎，加入其重量的30-70倍的0.1-0. 5mol/L NaOH溶液攪拌提取30-120min，過濾，濾液加2wt%HCl中和至中性，離心分離出沉淀，再用水洗沉淀以除鹽，得沉淀；(5)將所得沉淀經(jīng)噴霧干燥，即得茯苓酸性多糖提取物產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的噴霧干燥操作條件如下進(jìn)風(fēng)口溫度為175°C，出風(fēng)口溫度為90°C，霧化盤轉(zhuǎn)速為29040轉(zhuǎn)/分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于步驟(1)中所述的乙醇濃度是 70v/v%,乙醇用量為茯苓重量的8倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述的回流提取次數(shù)為2次，第一次時(shí)間為2小時(shí)，第一次時(shí)間為1小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中所述的每次提取時(shí)間為1小時(shí)，回流提取的次數(shù)為3次。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于步驟(4)中所述的NaOH溶液的濃度為0. 5mol/L，用量為步驟(3)得到的濾渣重量的70倍，提取時(shí)間為1小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一所述的制備方法制得的茯苓酸性多糖提取物在制備具有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥有效部位提取純化技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種茯苓酸性多糖提取物的制備方法，其步驟取茯苓，加4-8倍重量的60-80v/v％乙醇浸泡3-12h，回流提取1-3次，每次1-2h，過濾，得濾渣；將濾渣用4-10倍重量的水回流提取1-3次，每次1-3h，過濾，得濾渣；加入30-70倍重量的0.1-0.5M的NaOH提取0.5-2h，過濾，濾液用HCl中和，再水洗除鹽，得沉淀；再將沉淀噴霧干燥，得茯苓酸性多糖提取物。該方法簡單，所用溶媒均可重復(fù)回收利用，降低了生產(chǎn)成本，節(jié)約了能源，所得提取物中茯苓酸性多糖的含量以葡萄糖計(jì)為1.9-50.0wt%。該提取物具有明顯的調(diào)節(jié)免疫及抗腫瘤的功能。
文檔編號(hào)A61P37/02GK102399299SQ20111039933
公開日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2011年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月5日
發(fā)明者劉國慶, 劉焱文, 葉曉川, 張衛(wèi)元, 張永丹, 王光忠, 鄧嬡嬡, 邵貝貝 申請(qǐng)人:武漢回盛生物科技有限公司