專利名稱：新的8H－噻吩并[2,3,－b]吡咯啉嗪－8－酮化合物,其制備方法以及含有它們的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮(pyrrolizin-8-one)化合物，其制備方法以及含有它們的藥物組合物。
抗癌治療劑的需求要求立即開發(fā)新的抗腫瘤藥，以獲得更具活性同時(shí)能更好地耐受的藥物。更具體地說，實(shí)體瘤就其對(duì)現(xiàn)有產(chǎn)品的固有和/或獲得的耐受性而言對(duì)抗癌化療提出了一個(gè)主要問題。
本發(fā)明化合物除了是新的事實(shí)外，它們表現(xiàn)出驚人和特殊的體內(nèi)和體外活性。申請(qǐng)人所發(fā)現(xiàn)的化合物具有抗腫瘤性質(zhì)，這使得它們?cè)诎┌Y的治療中且有利的是在實(shí)體瘤的治療中尤為有用。
文獻(xiàn)中已描述了具有緊密相關(guān)結(jié)構(gòu)的化合物，尤其是在專利申請(qǐng)EP718299中，這些化合物用作獲得三環(huán)肟醚的合成中間體。對(duì)這些合成中間體沒有描述治療活性，盡管最終產(chǎn)物，即三環(huán)肟醚對(duì)5HT2C和/或5HT3受體-不同于本發(fā)明的治療區(qū)具有很強(qiáng)的親和性。
更具體地說，本發(fā)明涉及式(I)化合物
其中R1表示氫原子、鹵原子、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、硝基、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、直鏈或支鏈(C1-C6)三鹵代烷基、直鏈或支鏈(C1-C6)三鹵代烷氧基、或氨基(任選被一個(gè)或兩個(gè)可以相同或不同且各自相互獨(dú)立的直鏈或支鏈(C1-C6)烷基取代)，R2表示任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，R3表示氫原子、鹵原子、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、硝基、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、直鏈或支鏈(C1-C6)三鹵代烷基、直鏈或支鏈(C1-C6)三鹵代烷氧基、或氨基(任選被一個(gè)或兩個(gè)可以相同或不同且各自相互獨(dú)立的直鏈或支鏈(C1-C6)烷基取代)，涉及其異構(gòu)體以及其與可藥用酸或堿的加成鹽，條件是當(dāng)R1和R3同時(shí)表示氫原子時(shí)，R2不能表示任選在對(duì)位由溴原子、氯原子、氟原子、甲氧基或羥基取代的苯基。
在可藥用酸中，可以不加限制地提及鹽酸、氫溴酸、硫酸、膦酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、抗壞血酸、草酸、甲磺酸、樟腦酸等。
在可藥用堿中，可以不加限制地提及氫氧化鈉、氫氧化鉀、三乙胺、叔丁胺等。
芳基應(yīng)理解為苯基、萘基、二氫化萘基、四氫化萘基、茚基或二氫化茚基；雜芳基應(yīng)理解為具有5-12個(gè)原子且含有一、二或三個(gè)雜原子的單環(huán)或雙環(huán)芳族基團(tuán)，所述雜原子可以相同或不同且選自氧、氮和硫。在這些雜芳基中，可以不加限制地提及噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡啶基和吲哚基；任選取代的應(yīng)理解為指任選被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代的前述芳基或雜芳基，所述基團(tuán)可以相同或不同且各自獨(dú)立地選自鹵素、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、直鏈或支鏈(C1-C6)三鹵代烷氧基、硝基、氰基、氨基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基氨基、其中各烷基可以為直鏈或支鏈的二(C1-C6)烷基氨基、直鏈或支鏈(C1-C6)?；?、氨基羰基(氨基部分任選由一個(gè)或兩個(gè)可以相同或不同的直鏈或支鏈(C1-C6)烷基取代)、羧基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基羰基、亞甲二氧基、亞乙二氧基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基羰氧基、以及其中烷氧基部分可為直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷氧基。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的取代基R2為被至少一個(gè)上面所定義的基團(tuán)取代的苯基。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)有利變型，優(yōu)選的取代基R2為被至少一個(gè)選自羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基和直鏈或支鏈(C1-C6)烷基羰氧基的基團(tuán)取代的苯基。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的取代基R1和R3在每種情況下為氫原子。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的化合物為3-(3，4-二羥基苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮和乙酸2-甲氧基-5-(8-氧代-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-3-基)苯基酯。
該優(yōu)選化合物的異構(gòu)體以及其與可藥用酸或堿的加成鹽也是本發(fā)明的一個(gè)整體部分。
本發(fā)明還涉及一種制備式(I)化合物的方法，該方法的特征在于使用式(II)化合物作原料
其中R2如式(I)所定義，使式(II)化合物在堿金屬存在下與甲酸乙酯反應(yīng)得到式(III)化合物
其中R2如前所定義且M+表示堿金屬陽離子，如鈉或鉀陽離子，將式(III)化合物在苯磺酰氯存在下置于親核加成條件下，得到式(IV)化合物
其中R2如前所定義，使式(IV)化合物與巰基乙酸甲酯反應(yīng)得到式(V)化合物
其中R2如前所定義，根據(jù)有機(jī)合成的常規(guī)方法保護(hù)式(V)化合物的氨基，然后使之與式(VI)化合物反應(yīng)R3-X (VI)其中X表示離去基團(tuán)且R3如式(I)所定義，然后對(duì)其氨基官能基脫保護(hù)，得到式(VII)化合物
其中R2和R3如式(I)所定義，將式(VII)化合物置于二甲氧基四氫呋喃和氯化4-氯吡啶鎓存在下，得到式(VIII)化合物
其中R2和R3如前所定義，然后使式(VIII)化合物與吡咯烷反應(yīng)得到式(IX)化合物
其中R2和R3如前所定義，使用磷酰氯環(huán)化式(IX)化合物，得到式(I/a)化合物，其為式(I)化合物的特例，
其中R2和R3如前所定義，根據(jù)有機(jī)化合成的常規(guī)條件官能化式(I/a)化合物的吡咯環(huán)，得到式(I/b)化合物，其為式(I)化合物的特例，
其中R2、R3和R1如式(I)所定義，不同的是R1不能表示氫原子，式(I/a)和(I/b)化合物構(gòu)成本發(fā)明化合物的全體，必要時(shí)根據(jù)常規(guī)提純技術(shù)提純，若需要可以根據(jù)常規(guī)分離技術(shù)分離成其不同的異構(gòu)體，且合適的話將其轉(zhuǎn)化為其與可藥用酸或堿的加成鹽。
式(II)和(VI)化合物或者是市售的或根據(jù)有機(jī)合成的常規(guī)方法得到。
式(I)化合物呈現(xiàn)特別有益的抗腫瘤活性。它們對(duì)細(xì)胞系，尤其是由人實(shí)體瘤開始產(chǎn)生的細(xì)胞系具有優(yōu)異的體外細(xì)胞毒性，而且它們?cè)隗w內(nèi)能非常好地耐受。這些化合物的特征性能允許它們作為抗腫瘤藥用于治療中。
本發(fā)明也涉及藥物組合物，其包含式(I)化合物，其光學(xué)異構(gòu)體或其與可藥用酸或堿的加成鹽，單獨(dú)或與一種或多種可藥用的惰性、無毒賦形劑或載體結(jié)合。
在本發(fā)明的藥物組合物中，尤其可提及的是適于口服、胃腸外(靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下)、經(jīng)皮或透皮、經(jīng)鼻、直腸、舌下、經(jīng)眼或呼吸給藥的那些，尤其是片劑或錠劑、舌下片劑、軟明膠膠囊、硬明膠膠囊、栓劑、軟膏、霜?jiǎng)?、皮用凝膠、可注射或可飲用制劑、滴眼液或滴鼻液等。
有用的劑量根據(jù)患者的年齡和體重、給藥途徑、疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度以及任何相關(guān)治療的給藥而變化，且為1mg-500mg，每天給藥一次或多次。
下列實(shí)施例說明本發(fā)明但決不限制本發(fā)明。所用原料為已知的或按已知程序制備的物質(zhì)。
各種步驟獲得在本發(fā)明化合物的制備中有用的合成中間體。
在實(shí)施例和合成步驟中所述的化合物的結(jié)構(gòu)根據(jù)常規(guī)分光光度分析技術(shù)(紅外、核磁共振、質(zhì)譜……)測(cè)定。實(shí)施例13-(2-甲氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮步驟Aα-羥基次甲基-(2-甲氧苯基)乙腈鈉鹽將1當(dāng)量甲酸乙酯和1當(dāng)量2-(2-甲氧苯基)乙腈依次加入冷卻到0℃的0.34mol鈉在150ml甲醇中的溶液中。然后將反應(yīng)混合物在60℃下加熱1小時(shí)，然后加入溶劑而稀釋，出現(xiàn)新沉淀，將其濾出，然后真空干燥，分離出期望產(chǎn)物。
熔點(diǎn)＞250℃步驟Bα-(苯磺酰氧基次甲基)-2-甲氧苯基乙腈將1當(dāng)量2-甲氧苯基磺酰氯滴加到冷卻到0℃的0.3mol步驟A中所得化合物在100ml二甲基甲酰胺中的懸浮液中。攪拌2小時(shí)后，加入100ml水，形成沉淀。濾出沉淀，然后真空干燥，分離出期望產(chǎn)物。
熔點(diǎn)＞250℃步驟C3-氨基-4-(2-甲氧苯基)-2-噻吩羧酸甲酯將11mmol鈉溶于100ml甲醇中。使用冰浴冷卻反應(yīng)混合物后，加入4.5mmol巰基乙酸甲酯，然后加入3.7mmol步驟B中所得化合物。反應(yīng)2小時(shí)后，加入100ml水，形成沉淀，將沉淀濾出，然后干燥，分離出期望產(chǎn)物。
熔點(diǎn)110℃步驟D4-(2-甲氧苯基)-3-(1H-1-吡咯基)-2-噻吩羧酸甲酯在室溫下將5.2mmol二甲氧基四氫呋喃和5.2mmol氯化4-氯吡啶鎓在100ml二噁烷中攪拌15分鐘，然后加入5.2mmol步驟C所得化合物。然后在溶劑回流下加熱反應(yīng)混合物3小時(shí)，然后過濾。減壓濃縮濾液后，通過在乙醚中研制而使所得殘余物結(jié)晶，分離出期望產(chǎn)物。
熔點(diǎn)148℃步驟E4-(2-甲氧苯基)-3-(1H-1-吡咯基)-2-噻吩-N-吡咯烷基羧酰胺將3.8mmol步驟D所得化合物在50ml吡咯烷中的溶液在回流下加熱3小時(shí)。冷卻后，加入100ml水，形成沉淀，將其濾出，用石油醚漂洗，然后真空干燥，分離出期望產(chǎn)物。
熔點(diǎn)108℃步驟F3-(2-甲氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮將2.7mmol步驟E中所得化合物在50ml磷酰氯中的溶液在回流下加熱3小時(shí)。冷卻和減壓蒸除溶劑后，用乙醚結(jié)晶殘余物，過濾并用石油醚洗滌。然后將晶體傾入100ml10％氫氧化鈉水溶液中并在50℃下攪拌1小時(shí)。然后濾出固體，干燥，之后在硅膠上通過層析(氯仿)而提純，分離出期望產(chǎn)物。
熔點(diǎn)142℃元素微分析％C％H ％N計(jì)算值68.313.944.98實(shí)測(cè)值68.244.044.84實(shí)施例23-(3-甲氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮程序如實(shí)施例1，步驟A-F，在步驟A中使用2-(3-甲氧苯基)乙腈作原料。
熔點(diǎn)150℃元素微分析％C％H ％N計(jì)算值68.313.944.98實(shí)測(cè)值63.483.944.29實(shí)施例33-(3，4-二甲氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮程序如實(shí)施例1，步驟A-F，在步驟A中使用2-(3，4-二甲氧苯基)乙腈作原料。
熔點(diǎn)190℃元素微分析％C％H ％N計(jì)算值65.584.214.50實(shí)測(cè)值64.454.124.46實(shí)施例43-(3，4-亞甲二氧基苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮程序如實(shí)施例1，步驟A-F，在步驟A中使用實(shí)施例3中所用原料作原料。
熔點(diǎn)168℃元素微分析％C％H ％N計(jì)算值65.083.074.74實(shí)測(cè)值59.303.774.39實(shí)施例53-(3，4，5-三甲氧基苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮程序如實(shí)施例1，步驟A-F，在步驟A中使用2-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙腈作原料。
熔點(diǎn)180℃元素微分析％C％H ％N計(jì)算值63.334.434.10實(shí)測(cè)值63.264.864.22實(shí)施例63-(2-羥基苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮在室溫下將1.1mmol實(shí)施例1的化合物和1.1mmol三溴化硼在氯仿中的溶液攪拌30分鐘。加入100ml水后，濾出形成的沉淀，干燥，然后用乙醇重結(jié)晶，分離出期望產(chǎn)物。
熔點(diǎn)192℃元素微分析％C％H ％N計(jì)算值67.403.395.24實(shí)測(cè)值66.493.255.48實(shí)施例73-(3-羥基苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮程序如實(shí)施例6，使用實(shí)施例2中所得產(chǎn)物作原料。
熔點(diǎn)＞260℃元素微分析
％C％H ％N計(jì)算值67.403.395.24實(shí)測(cè)值64.193.244.86實(shí)施例83-(3，4-二羥基苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮程序如實(shí)施例6，使用實(shí)施例3所得化合物作原料。
熔點(diǎn)＞260℃實(shí)施例93-(4-乙氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮步驟G3-(4-甲氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮根據(jù)專利申請(qǐng)EP 718 299所述操作條件得到該產(chǎn)物。步驟H3-(4-乙氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮將1.4mmol步驟G中所得化合物和15ml溴乙烷加入到1.4mmol鈉在100ml甲醇中的溶液中，然后加熱該反應(yīng)混合物，直到根據(jù)薄層色譜(二氯甲烷/甲醇9/1)發(fā)現(xiàn)原料完全消失。然后減壓蒸除溶劑并將所得固體攪拌進(jìn)0.5N氫氧化鈉水溶液中。過濾和用水洗滌后，干燥晶體并用甲醇/乙醇1/2混合物重結(jié)晶，分離出期望產(chǎn)物。
熔點(diǎn)200℃元素微分析％C％H ％N計(jì)算值69.134.444.74實(shí)測(cè)值69.074.444.96實(shí)施例103-(4-丙氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮程序如實(shí)施例9的步驟H，使用正丙基溴作試劑。產(chǎn)物用甲醇/異丙醇1/2混合物重結(jié)晶。
熔點(diǎn)172℃元素微分析
％C％H ％N計(jì)算值69.884.894.53實(shí)測(cè)值69.064.654.87實(shí)施例113-(4-正丁氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮程序如實(shí)施例9的步驟H，使用正丁基溴作試劑。產(chǎn)物用乙醇重結(jié)晶。
熔點(diǎn)129℃元素微分析％C％H ％N計(jì)算值70.565.304.33實(shí)測(cè)值69.845.284.65實(shí)施例126-溴-3-(4-甲氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮將2.1mmol溴加入1.8mmol3-(4-甲氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮在50ml氯仿中的溶液中。攪拌2小時(shí)后，減壓蒸除溶劑。硅膠色譜層析(二氯甲烷)分離出期望產(chǎn)物。
熔點(diǎn)186℃元素微分析％C％H ％N計(jì)算值53.352.803.89實(shí)測(cè)值52.582.824.12實(shí)施例132，6-二溴-2-(4-甲氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮在對(duì)實(shí)施例12的化合物進(jìn)行的硅膠色譜層析過程中分離出產(chǎn)物。
熔點(diǎn)202℃元素微分析％C％H ％N計(jì)算值43.762.073.19實(shí)測(cè)值43.482.023.58實(shí)施例143-(3-羥基-4-甲氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮在50℃下將0.6mmol實(shí)施例3的化合物和過量的氯化鋁在氯仿中的溶液攪拌30分鐘。減壓濃縮后，殘余物在水中攪拌30分鐘，得到紅色晶體。過濾后，用硅膠色譜層析(氯仿)分離出期望產(chǎn)物。
熔點(diǎn)180℃元素微分析％C％H ％N計(jì)算值64.633.734.71實(shí)測(cè)值62.893.844.69實(shí)施例156-硝基-3-(4-甲氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮將1mmol實(shí)施例12所得化合物在50ml硝基甲烷中的溶液在室溫下攪拌12小時(shí)，然后將反應(yīng)混合物傾入1M氫氧化鉀溶液中。用二氯甲烷萃取后，有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。硅膠色譜層析(氯仿)分離出期望產(chǎn)物。實(shí)施例166-氨基-3-(4-甲氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮將含有在30ml甲醇中的1當(dāng)量實(shí)施例14所得化合物和100mg 10％Pd/C的溶液在40℃下加熱2小時(shí)。返回到室溫后，用硅藻土過濾反應(yīng)混合物，然后減壓濃縮，分離出期望產(chǎn)物。實(shí)施例176-甲氧基-3-(4-甲氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮在室溫下將1當(dāng)量實(shí)施例12中所得化合物攪拌到甲醇鈉溶液中。反應(yīng)12小時(shí)后，減壓濃縮反應(yīng)混合物。將殘余物溶于二氯甲烷中；然后用飽和NaCl溶液洗滌有機(jī)相，用硫酸鈉干燥，然后減壓濃縮。硅膠色譜層析(二氯甲烷)分離出期望產(chǎn)物。實(shí)施例18丁酸2-(丁酰氧基)-4-(8-氧代-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-3-基)苯基酯將2.2當(dāng)量丁酸酐滴加到1.7mmol實(shí)施例8的化合物在50ml四氫呋喃中的溶液中?；亓?小時(shí)后，冷卻，將幾滴水和50ml5％氫氧化鈉加入反應(yīng)混合物中。隨后萃取有機(jī)相，干燥，過濾，然后減壓蒸發(fā)，分離出期望產(chǎn)物。
元素微分析％C％H ％N計(jì)算值65.234.993.30實(shí)測(cè)值65.114.934.02實(shí)施例19新戊酸2-羥基-4-(8-氧代-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-3-基)苯基酯程序如實(shí)施例18，使用1，1-二甲基丙酸酐作試劑。
元素微分析％C％H ％N計(jì)算值65.384.663.81實(shí)測(cè)值65.184.693.73實(shí)施例20乙酸2-(乙酰氧基)-4-(8-氧代-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-3-基)苯基酯程序如實(shí)施例18，使用乙酸酐作試劑。
元素微分析％C％H ％N計(jì)算值62.113.563.81實(shí)測(cè)值62.183.533.97實(shí)施例21丙酸4-(8-氧代-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-3-基)-2-(丙酰氧基)苯基酯程序如實(shí)施例18，使用丙酸酐作試劑。
元素微分析％C％H ％N計(jì)算值63.784.333.54實(shí)測(cè)值63.504.293.51實(shí)施例223-〔3-(芐氧基)-4-甲氧苯基〕-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮制備A2-〔3-(芐氧基)-4-甲氧苯基〕乙腈步驟13-芐氧基-4-甲氧基苯甲醛將1.2當(dāng)量K2CO3和1.2當(dāng)量芐基溴加入0.33mol3-羥基-4-甲氧基苯甲醛在400ml甲醇中的懸浮液中?；亓?4小時(shí)后，趁熱過濾反應(yīng)混合物，然后減壓蒸除有機(jī)相。將分離出的殘余物溶于300ml氯仿中，然后用水洗滌。萃取、干燥和過濾之后，減壓蒸除有機(jī)相分離出期望產(chǎn)物。步驟2〔3-(芐氧基)-4-甲氧苯基〕甲醇將0.35mol步驟1中所得化合物在400ml甲醇中的溶液和1.5當(dāng)量硼氫化鈉在室溫下攪拌6小時(shí)，然后緩慢加入500ml酸化水。將所得沉淀溶于乙醚中；然后將有機(jī)相萃取、干燥、過濾并減壓蒸發(fā)，分離出期望產(chǎn)物。步驟32-芐氧基-4-氯甲基-1-甲氧基苯將0.32mol步驟2所得化合物和1.2當(dāng)量亞硫酰氯在300ml二噁烷中的溶液在室溫下攪拌。反應(yīng)1小時(shí)后，加入500ml水。將形成的沉淀過濾，用水漂洗，然后干燥，分離出期望產(chǎn)物。步驟42-〔3-(芐氧基)-4-甲氧苯基〕乙腈將0.22mol步驟3中所得化合物在300ml乙腈中的溶液和1.1當(dāng)量四乙基氰化銨在室溫下攪拌一天，然后加入500ml 5％碳酸氫鈉溶液。將所得沉淀溶于乙醚中；然后將有機(jī)相萃取、干燥、過濾和減壓蒸發(fā)，分離出期望產(chǎn)物。
元素微分析％C％H ％N計(jì)算值75.865.965.52實(shí)測(cè)值75.836.125.55然后將制備A的產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)施例1，步驟A-F所述的反應(yīng)，分離出該實(shí)施例的期望標(biāo)題產(chǎn)物。
元素微分析％C％H ％N計(jì)算值71.304.423.62
實(shí)測(cè)值71.524.673.77實(shí)施例233-〔4-(芐氧基)-3-甲氧苯基〕-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮制備B2-〔4-(芐氧基)-3-甲氧苯基〕乙腈程序如制備A，步驟1-4，使用4-羥基-3-甲氧基苯甲醛作為步驟1中的原料。
元素微分析％C％H ％N計(jì)算值75.865.965.52實(shí)測(cè)值75.626.025.88然后使制備B的產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)施例1，步驟A-F所述的反應(yīng)，分離出該實(shí)施例的期望標(biāo)題產(chǎn)物。
元素微分析％C％H ％N計(jì)算值71.304.423.62實(shí)測(cè)值70.874.323.64實(shí)施例243-(4-羥基-3-甲氧苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮將1mmol溶于過量氫溴酸的33％乙酸溶液中的實(shí)施例23的化合物在室溫下攪拌30分鐘。加入100ml水后，形成沉淀，過濾并干燥。硅膠色譜層析(乙酸乙酯/己烷1/2)分離出期望產(chǎn)物。實(shí)施例25乙酸2-甲氧基-5-(8-氧代-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-3-基)苯基酯程序如實(shí)施例18，使用實(shí)施例24的化合物作原料并在乙酸酐存在下于乙酸中進(jìn)行反應(yīng)。
元素微分析％C％H ％N計(jì)算值63.703.864.12實(shí)測(cè)值63.254.464.37本發(fā)明化合物的藥理研究實(shí)施例26體外細(xì)胞毒性使用六種細(xì)胞系-2種鼠白血病，P388和L1210，-1種人非小細(xì)胞肺癌，A549，-1種人表皮樣癌，KB-3-1，及相應(yīng)的抗性系，KB-A1，其多種抗藥性使用阿霉素(ADR)產(chǎn)生，-1種人卵巢癌，IGROV1。
將細(xì)胞在含10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、50單位/ml青霉素、50μg/ml鏈霉素和10mM Hepes，pH為7.4的RPMI1640全培養(yǎng)基中培養(yǎng)。將細(xì)胞分布在微滴定板上并暴露于細(xì)胞毒性化合物。然后將細(xì)胞溫育2天(P388，L1210)或4天(A549，KB-A1，KB-3-1，IGROV1)。然后通過比色分析，微培養(yǎng)四唑鎓分析(the Microculture TetrazoliumAssay)(癌癥研究，1987，47，939-942)定量存活細(xì)胞數(shù)目。
結(jié)果表示為IC50，細(xì)胞毒性劑50％抑制處理細(xì)胞的增殖的濃度。在這些試驗(yàn)中，實(shí)施例8的化合物具有下表所列的IC50
實(shí)施例8的化合物對(duì)源于人實(shí)體瘤的細(xì)胞的效果比對(duì)兩種鼠白血病的效果更強(qiáng)，這是尤其令人驚奇和令人感興趣的結(jié)果。實(shí)施例27對(duì)細(xì)胞周期的作用在不同濃度的待試產(chǎn)品存在下于37℃溫育L1210細(xì)胞21小時(shí)。然后使用70％(v/v)乙醇固定細(xì)胞，用PBS洗滌兩次并在含有100μg/ml核糖核酸酶和50μg/ml碘化丙啶鎓(propidium)的PBS中于20℃溫育30分鐘。結(jié)果表示為與對(duì)照(對(duì)照值20％)相比在21小時(shí)后在G2+M期中濃集的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。在500nM濃度下，實(shí)施例8的化合物使80-90％的細(xì)胞在21小時(shí)后在G2+M期中濃集。實(shí)施例28體內(nèi)活性化合物對(duì)P388白血病的抗腫瘤活性P388細(xì)胞系(鼠白血病)由國(guó)家癌癥研究所(Frederick，USA)供應(yīng)。腫瘤細(xì)胞(106個(gè)細(xì)胞)在第0天接種于重18-20g的雌性BDF1小鼠(Iffa-Credo，法國(guó))的腹膜腔內(nèi)(6個(gè)動(dòng)物一組)。通過腹膜內(nèi)途徑以所示劑量給藥產(chǎn)物，一天一次，共4天(D1-4)。
抗腫瘤活性表示為％T/C
實(shí)施例8的化合物從25mg/kg劑量開始具有活性，且能使處理動(dòng)物的存活增加70％。實(shí)施例29體內(nèi)活性化合物對(duì)IGROV1卵巢癌的抗腫瘤活性IGROV1腫瘤細(xì)胞(107個(gè)細(xì)胞)在第0天接種于無毛BABL/C小鼠(5個(gè)動(dòng)物一組)的腹膜腔內(nèi)。通過腹膜內(nèi)途徑在第4、11和18天每周給藥一次產(chǎn)物?？鼓[瘤活性表示為前面所定義的％T/C。
實(shí)施例8的化合物在200mg/kg劑量下有活性且使處理動(dòng)物的存活增加60％(T/C＝160％)。實(shí)施例30藥物組合物片劑制備1000片各含10mg的片劑的配方實(shí)施例8的化合物 ………………………………10g羥丙基纖維素……………………………………2g小麥淀粉…………………………………………10g乳糖………………………………………………100g硬脂酸鎂…………………………………………2g滑石………………………………………………2g
權(quán)利要求
1.式(I)化合物，其異構(gòu)體以及其與可藥用酸或堿的加成鹽
其中R1表示氫原子、鹵原子、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、硝基、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、直鏈或支鏈(C1-C6)三鹵代烷基、直鏈或支鏈(C1-C6)三鹵代烷氧基，或氨基(任選被一個(gè)或兩個(gè)可以相同或不同且各自相互獨(dú)立的直鏈或支鏈(C1-C6)烷基取代)，R2表示任選取代的芳基或任選取代的雜芳基，R3表示氫原子、鹵原子、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、硝基、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、直鏈或支鏈(C1-C6)三鹵代烷基、直鏈或支鏈(C1-C6)三鹵代烷氧基，或氨基(任選被一個(gè)或兩個(gè)可以相同或不同且各自相互獨(dú)立的直鏈或支鏈(C1-C6)烷基取代)，條件是當(dāng)R1和R3同時(shí)表示氫原子時(shí)，R2不能表示任選在對(duì)位由溴原子、氯原子、氟原子、甲氧基或羥基取代的苯基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)化合物，其異構(gòu)體以及其與可藥用酸或堿的加成鹽，其特征在于R2表示被至少一個(gè)相同或不同的基團(tuán)取代的苯基，所述基團(tuán)選自鹵素、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、硝基、氰基、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、直鏈或支鏈(C1-C6)三鹵代烷氧基、氨基、其中各烷基可以為直鏈或支鏈的單或二(C1-C6)烷基氨基、直鏈或支鏈(C1-C6)?；?、羧基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧羰基、亞甲二氧基、亞乙二氧基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基羰氧基、以及其中烷氧基部分可以為直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷氧基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的式(I)化合物，其異構(gòu)體以及其與可藥用酸或堿的加成鹽，其特征在于R2表示被至少一個(gè)選自羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基以及直鏈或支鏈(C1-C6)烷基羰氧基的基團(tuán)取代的苯基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)化合物，其異構(gòu)體以及其與可藥用酸或堿的加成鹽，其特征在于R1表示氫原子和R3表示氫原子。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)化合物，為3-(3，4-二羥基苯基)-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-8-酮。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)化合物，為乙酸2-甲氧基-5-(8-氧代-8H-噻吩并〔2，3-b〕吡咯啉嗪-3-基)苯基酯。
7.制備式(I)化合物的方法，其特征在于使用式(II)化合物作原料
其中R2如式(I)所定義，使式(II)化合物在堿金屬存在下與甲酸乙酯反應(yīng)得到式(III)化合物
其中R2如前所定義且M+表示堿金屬陽離子，如鈉或鉀陽離子，將式(III)化合物在苯磺酰氯存在下置于親核加成條件下，得到式(IV)化合物
其中R2如前所定義，使式(IV)化合物與巰基乙酸甲酯反應(yīng)，得到式(V)化合物
其中R2如前所定義，根據(jù)有機(jī)合成的常規(guī)方法保護(hù)式(V)化合物的氨基，然后使之與式(VI)化合物反應(yīng)，R3-X (VI)其中X表示離去基團(tuán)且R3如式(I)所定義，然后對(duì)其氨基官能基脫保護(hù)，得到式(VII)化合物
其中R2和R3如式(I)所定義，將式(VII)化合物置于二甲氧基四氫呋喃和氯化4-氯吡啶鎓存在下，得到式(VIII)化合物
其中R2和R3如前所定義，然后使式(VIII)化合物與吡咯烷反應(yīng)得到式(IX)化合物
其中R2和R3如前所定義，使用磷酰氯環(huán)化式(IX)化合物，得到式(I/a)化合物，其為式(I)化合物的特例，
其中R2和R3如前所定義，根據(jù)有機(jī)合成的常規(guī)條件官能化式(I/a)化合物的吡咯環(huán)，得到式(I/b)化合物，其為式(I)化合物的特例
其中R2、R3和R1如式(I)所定義，不同的是R1不能表示氫原子，式(I/a)和(I/b)化合物構(gòu)成本發(fā)明化合物的全體，必要時(shí)根據(jù)常規(guī)提純技術(shù)提純，若需要可以根據(jù)常規(guī)分離技術(shù)分離成其不同的異構(gòu)體，且合適的話將其轉(zhuǎn)化為其與可藥用酸或堿的加成鹽。
8.藥物組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的至少一種式(I)化合物作活性成分，單獨(dú)或與一種或多種可藥用的惰性無毒賦形劑或載體結(jié)合。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的藥物組合物，包括根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的至少一種活性成分且用于治療癌癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(Ⅰ)化合物,其異構(gòu)體以及其與可藥用酸或堿的加成鹽，其中R
文檔編號(hào)A61K31/00GK1244529SQ9911069
公開日2000年2月16日 申請(qǐng)日期1999年7月27日 優(yōu)先權(quán)日1998年7月27日
發(fā)明者S·拉爾特, C·恩古哈德, J-C·蘭斯洛特, M·羅布巴, G·阿塔斯, A·皮埃爾, D-H·凱格納德, P·雷納德 申請(qǐng)人:阿迪爾公司