專利名稱：黃芩甙元的提取方法及其在抗炎、鎮(zhèn)痛中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
黃芩為唇形科草本植物黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的根，是我國傳統(tǒng)常用中藥材。黃芩甙元是黃芩主要活性成份之一，具有多種生物學(xué)活性?，F(xiàn)有關(guān)于黃芩甙元提取方法，如中國專利一種黃芩提取物的制備方法(專利申請?zhí)?1102536.8)、(專利申請?zhí)?1145577.2)等，其分別是通過“乙醇回流、乙醚萃取”、“乙醇滲漉提取、樹脂柱層析分離”及“水煮、醇浸”等方法提取黃芩總黃酮甙元，但上述方法均不同程度地存在著提取方法復(fù)雜、費(fèi)時等缺點(diǎn)。而目前對于改進(jìn)中藥有效成分的傳統(tǒng)提取方法，是中藥現(xiàn)代化研究的重要內(nèi)容之一。
類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是主要侵犯骨、關(guān)節(jié)軟骨的慢性炎癥疾病。為常見病、多發(fā)病，并是引起癱瘓的主要因素之一。全世界約有1％的人患有此病，在我國關(guān)節(jié)炎患者總數(shù)已超過1億。目前治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎常用藥物是用甾體類、非甾體類抗炎藥物及免疫抑制藥等，僅能一定程度地緩解病情，但都不能控制病情發(fā)展、阻止惡化，并具有較大的副作用。目前還沒有一種世界公認(rèn)的、能有效控制治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物。
黃芩是具有多種生物活性的傳統(tǒng)中藥，常以根入藥，目前普遍用于治療高血壓、通經(jīng)、腦炎等疾病。而中國專利黃芩莖葉在制藥中的應(yīng)用(專利申請?zhí)?8126822.6)公開了黃芩莖葉的藥用價(jià)值及新用途，證實(shí)黃芩莖葉及其總黃酮的主要有效成分野黃芩甙、黃芩甙等具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛、抗炎、解熱作用。通過傳統(tǒng)的水煮酸沉法即水煎煮、鹽酸沉淀的方法提取莖葉中的黃芩甙、野黃芩甙等黃酮類物質(zhì)，此工藝復(fù)雜、費(fèi)時，提取周期較長。
技術(shù)內(nèi)容為了解決上述缺點(diǎn)，本發(fā)明提供一種新的黃芩甙元提取方法及其在抗炎、鎮(zhèn)痛中的應(yīng)用。
本發(fā)明的提取方法是以黃芩為原料，粉碎后加入5-8倍甲醇，混勻后在200Mpa和600Mpa的壓力下，分別持續(xù)作用5分鐘，除去沉渣，再通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去甲醇，收集析出物，烘干后即得黃芩提取物。
以及黃芩甙元在抗炎、鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供一種簡便、省時、得率高的黃芩甙元提取方法，并為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等炎癥性疾病提供新的治療途徑。并且黃芩甙元具有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。黃芩為天然藥物，與現(xiàn)有傳統(tǒng)的甾體類和非甾體類抗炎、鎮(zhèn)痛類藥相比，藥理作用突出，安全低毒?？蓮V泛用于醫(yī)藥生產(chǎn)領(lǐng)域。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的提取方法是以黃芩為原料，粉碎后加入5-8倍65％甲粉碎、與5-8倍65％甲醇溶液充分混合后，放入包裝袋內(nèi)。排除袋內(nèi)空氣、封口，將封閉后的包裝袋放入密閉的高壓容器內(nèi)，并在室溫下對其加壓。當(dāng)壓力升到200MPa時，保壓5分鐘，然后卸壓，壓力為0時，持續(xù)5分鐘后，再次對其加壓，當(dāng)壓力升到600MPa時，保壓5分鐘，然后卸壓，當(dāng)壓力將至0時，打開裝置，取出包裝袋，將袋內(nèi)容物通過離心除去沉渣，取上清液，將液體通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去甲醇，收集析出物，干燥后得到黃芩甲醇提取物。黃芩甙元的含量不少于總量的50％。本發(fā)明的提取工藝簡單、省時、重復(fù)性好，有效成份含量高，其得率為3.5～3.8％。
利用超高壓方法得到的甲醇提取物，其主要成份為黃芩甙元，且含量不小于總量的50％，用于制備抗炎、鎮(zhèn)痛藥。
藥效學(xué)研究的主要技術(shù)參數(shù)為(一)體外實(shí)驗(yàn)以T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞為靶點(diǎn)，觀察SBM對炎癥細(xì)胞功能、炎癥介質(zhì)產(chǎn)生的影響。
1、SBM(500～31.25μg/ml)可明顯抑制ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，并呈一定的劑量依賴關(guān)系。而通過傳統(tǒng)的水煮酸沉法得到的黃芩提取物及通過浸提方法得到甲醇提取物，當(dāng)濃度為31.25μg/ml時，均不能抑制ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化。同時Westernblot檢測結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)SBM(125μg/ml)可抑制ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞P38蛋白磷酸化，通過影響P38蛋白激酶系統(tǒng)，抑制淋巴細(xì)胞活化、增殖。
2、對巨噬細(xì)胞功能的影響
巨噬細(xì)胞是炎癥反應(yīng)中重要的免疫活性細(xì)胞，可產(chǎn)生TNFα、IL-1β等多種促炎細(xì)胞因子及COX-2等炎癥介質(zhì)，加重炎癥反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明將大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分別與LPS(10μg/ml)或LPS(10μg/ml)和SBM(125～31.25μg/ml)共同培養(yǎng)36小時，SBM(125～31.25μg/ml)可以劑量依賴方式，抑制LPS誘導(dǎo)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞合成IL-1β，可使IL-1β的含量由183.39U分別降至47.54U、97.8U、104.59U、115.46U。同時，Western blot檢測結(jié)果表明SBM(250，125μg/ml)可明顯抑制LPS誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞COX-2蛋白的表達(dá)(

圖1)，同時酶活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步表明SBM(250～15.625μg/ml)可明顯抑制LPS抑制誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞合成COX-2及PGE2，可使COX-2、PGE2的含量由75.96U和26.8U分別降至0.05U、3.76U、11.81U、19.145U、37.445U和1.05U、3.155U、5.435U、5.345U、6.38U，因此，SBM可明顯抑制LPS誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞合成炎癥因子、炎癥介質(zhì)。
(二)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)采用大鼠足跖皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑的方法誘導(dǎo)佐劑性關(guān)節(jié)炎。取雄性大鼠60只，按體重隨機(jī)分為6組(正常組、模型組、陽性對照組、SBM 20mg/kg組、SBM 10mg/kg組、SBM 5mg/kg組)，于右足跖皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑0.1ml，并在注射佐劑的當(dāng)日開始灌胃給藥，連續(xù)給藥21天，同時利用容積法隔日測量足腫脹，以用藥前足腫脹差值為佐劑性關(guān)節(jié)炎的腫脹程度。于第21天殺鼠，取脾、測淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、取腹腔巨噬細(xì)胞、測IL-1β含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)SBM 20mg/kg于給藥的第1天即可抑制佐劑誘導(dǎo)的足腫脹，抑制率可達(dá)22.54％，給藥的第3、7天足腫脹的抑制率分別可達(dá)32.05％、20.57％，而陽性對照組(阿司匹林30mg/kg)第1、3、7天足腫脹的抑制率分別為20.37％、31.14％、21.46％，因此，SBM 20mg/kg可明顯抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎急性炎癥期的炎癥反應(yīng)。SBM 20mg/kg于給藥的第14、16、18、20天注射側(cè)足腫脹抑制率分別可達(dá)36.11％、34.02％、39.14％、35.86％，22.54％，繼發(fā)性病變的抑制率可達(dá)65.55％，而阿司匹林30mg/kg組第14、16、18、20天注射側(cè)足腫脹抑制率分別可達(dá)30.75％、20.29％、27.86％、27.22％，繼發(fā)性病變的抑制率可達(dá)37.78％。結(jié)果提示SBM20mg/kg可抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎原發(fā)及繼發(fā)性炎癥病變，具有抑制急、慢性炎癥反應(yīng)的作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)SBM20mg/kg治療后，模型鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能降低58.85％、IL-1β的含量減少37.59％。因此。SBM可通過抑制淋巴細(xì)胞的功能、炎癥因子的產(chǎn)生，抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎病情的發(fā)展，且其作用效果強(qiáng)于阿司匹林。
實(shí)施例1以黃芩1000g為原料，粉碎后加入8倍65％甲醇，混勻后在200Mpa和600Mpa的壓力下，分別持續(xù)作用5分鐘，除去沉渣，將液體于42℃，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去甲醇，收集析出物，烘干后即得38g黃芩提取物，黃芩甙元的含量不少于總量的50％。并采用常規(guī)技術(shù)制成膠囊、片劑等劑型，作為抗炎、鎮(zhèn)痛藥。
實(shí)施例2以黃芩1000g為原料，粉碎后加入6倍65％甲醇，混勻后在200Mpa和600Mpa的壓力下，分別持續(xù)作用5分鐘，除去沉渣，將液體于42℃，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去甲醇，收集析出物，烘干后即得36g黃芩提取物，黃芩甙元的含量不少于總量的50％。并采用常規(guī)技術(shù)制成膠囊、片劑等劑型，作為抗炎、鎮(zhèn)痛藥。
權(quán)利要求
1.一種黃芩甙元提取方法，其特征在于以黃芩為原料，粉碎后加入5-8倍65％甲醇溶液，混勻后在200Mpa和600Mpa的壓力下，分別持續(xù)作用5分鐘，除去沉渣，再通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去甲醇，收集析出物，烘干后即得黃芩提取物。
2.一種黃芩甙元的新用途，其特征在于黃芩甙元在抗炎、鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一種黃芩甙元的提取方法及其在抗炎、鎮(zhèn)痛中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明是以黃芩為原料，粉碎后加入5－8倍甲醇，混勻后在200Mpa和600Mpa的壓力下，分別持續(xù)作用5分鐘，除去沉渣，再通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去甲醇，收集析出物，烘干后即得黃芩提取物。以及黃芩甙元在抗炎、鎮(zhèn)痛中的應(yīng)用。本發(fā)明提供一種簡便、省時、得率高的黃芩甙元提取方法，并為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等炎癥性疾病提供新的治療途徑。藥理作用突出，安全低毒。可廣泛用于醫(yī)藥生產(chǎn)領(lǐng)域。
文檔編號A61K31/352GK1566107SQ0312760
公開日2005年1月19日 申請日期2003年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月27日
發(fā)明者朱迅, 朱偉, 張守勤 申請人:長春博泰醫(yī)藥生物技術(shù)有限責(zé)任公司