專利名稱：脂質體溶液的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及含有β-內酰胺酶抑制劑的脂質體水溶液。
業(yè)已發(fā)現(xiàn)，當β-內酰胺酶抑制劑以脂質體水溶液的形式使用時，β-內酰胺酶抑制劑，如tazobactam在體內的停留時間延長。此外，還發(fā)現(xiàn)，以該形式使用的β-內酰胺酶抑制劑在血漿內的停留時間受脂質體大小的影響。
本發(fā)明組合物的脂質體可以由已知的脂質體形成物構成。較好的是，所述脂質體由磷脂酰膽堿如雞蛋卵磷脂或大豆卵磷脂，磷脂酰甘油組成以及必要時包括膽甾醇。磷脂酰膽堿磷脂酰甘油摩爾比宜為10∶0-1，最好為10∶1。磷脂酰膽堿膽甾醇摩爾比宜為10∶0-5，最好為10∶5。脂質體溶液中脂質體形成物(即磷脂酰膽堿，磷脂酰甘油和膽甾醇)的濃度宜為約10-400mg/ml，最好為約100-250mg/ml。
術語"β-內酰胺酶抑制劑"指抑制β-內酰胺抗生素，例如青霉素類，頭孢菌素類，單分子內酰胺類和carbapenems的β-內酰胺環(huán)酶解的物質。Tazobactam，舒巴克坦和克拉維酸是β-內酰胺酶抑制劑的實例。β-內酰胺酶抑制劑的其它實例是歐洲專利公開A-0508234中所述的那些化合物，特別是下列化合物
(1S，5R)-7-氧代-6-磺基-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-2-羧酸芐酯，(1S，5R)-2-(Z)-3-α-乙酰氨基肉桂酰〕-7-氧代-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(R/S)-α-(1S，5R)-2-〔2-羧基-2-(3-噻吩基)乙?；?7-氧代-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(1S，5R)-7-氧代-2-(3-吡啶基乙?；?2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(1S，5R)-2-〔(R，S)-2-吲哚基羰基〕-7-氧代-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(1S，5R)-2-〔(R)-α-羥基苯基乙?；?7-氧代-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(1S，5R)-2-〔(S)-α-羥基苯基乙?；?7-氧代-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，R(α)〔〔(1S，5R)-7-氧代-6-磺基-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚-2-基〕羰基〕芐基硫酸酯，(1S，5R)-2-(2-氨基-4-噻唑乙醛酰)-7-氧代-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(1S，5R)-7-氧代-2-(D-2-苯基甘氨酰)-6-磺基-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(1S，5R)-7-氧代-2-(L-2-苯基甘氨酰)-6-磺基-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(1S，5R)-7-氧代-2-L-酪氨酰-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(1S，5R)-2-〔D-2-(對-羥苯基)甘氨酰〕-7-氧代-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(1S，5R)-7-氧代-2-色氨酰-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(1S，5R)-2-〔(R或S)-α-氨基-(2-噻吩基)乙酰基〕-7-氧代-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(1S，5R)-7-氧代-2-(苯基氨基甲?；?-6-磺基-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷，(1S，5R)-2-(芐基氨基甲酰基)-7-氧代-6-磺基-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷，(1S，5R)-7-氧代-2-(N-苯基甘氨酰)-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(1S，5R)-2-〔(E)-3-(2-呋喃基)丙烯?！?7-氧代-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(1S，5R)-2-〔N-(間-氨基苯基)甘氨?！?7-氧代-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，(1S，5R)-2-〔〔(1-甲基-1H-四唑-5-基)硫代〕乙?；?7-氧代-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，
(1S，5R)-2-〔〔(1H-苯并三唑-1-基)硫代〕乙?；?7-氧代-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，和(1S，5R)-2-〔(E)-3-(3-吲哚基)丙烯?！?7-氧代-2，6-二氮雜二環(huán)〔3.2.0〕-庚烷-6-磺酸，以及這些化合物藥物上可用的鹽。
可存在于本發(fā)明脂質體溶液中的其它β-內酰胺酶抑制劑還有下述通式Ⅰ的化合物及其藥物上可用的鹽 式中R1和R2之一表示-COR4，-CN，-CH2OR5或-SO2R6，另一個表示H，-COR4，-CN，-CH2OR5或-SO2R6或低級烷基;
R3＝H，低級烷基，芳基烷基，烯丙基或在體內可裂解的殘基;
R4＝H，低級烷基，低級烷氧基，芐氧基，氨基或低級烷氨基;
R5＝H或-CONH2;
R6＝低級烷基，和n＝0，1或2，特別是下列化合物(E/Z)-(2S，3S，5R)-3-(2-氰基乙烯基)-3-甲基-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二苯甲酯，(E)-(2S，3S，5R)-3-(2-氰基乙烯基)-3-甲基-4，4，7-三氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二苯甲酯，(Z)-(2S，3S，5R)-3-(2-氰基乙烯基)-3-甲基-4，4，7-三氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二苯甲酯，(E)-(2S，3S，5R)-3-(2-氰基乙烯基)-3-甲基-4，4，7-三氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸鈉，(Z)-(2S，3S，5R)-3-(2-氰基乙烯基)-3-甲基-4，4，7-三氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸鈉，(E/Z)-(2S，3S，5R)-3-(2-氨基甲?；?乙烯基)-3-甲基-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二苯甲酯，(E)-(2S，3S，5R)-3-(2-氨基甲?；?乙烯基)-3-甲基-4，4，7-三氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二苯甲酯，(Z)-(2S，3S，5R)-3-(2-氨基甲酰基-乙烯基)-3-甲基-4，4，7-三氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二苯甲酯，(E)-(2S，3S，5R)-3-(2-氨基甲?；?乙烯基)-3-甲基-4，4，7-三氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸鈉，(Z)-(2S，3S，5R)-3-(2-氨基甲酰基-乙烯基)-3-甲基-4，4，7-三氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸鈉，(E)-(2S，3S，5R)-3-(2-乙氧羰基-乙烯基)-3-甲基-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二苯甲酯，
(E)-(2S，3S，5R)-3-(2-乙氧羰基-乙烯基)-3-甲基-4，4，7-三氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二苯甲酯，(E)-(2S，3S，5R)-3-(2-乙氧羰基-乙烯基)-3-甲基-4，4，7-三氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸鈉，(E)-(2S，3S，5R)-3-(2-芐氧羰基-乙烯基)-3-甲基-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二苯甲酯，(E)-(2S，3S，5R)-3-(2-芐氧羰基-乙烯基)-3-甲基-4，4，7-三氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸二苯甲酯，和(E)-(2S，3S，5R)-3-(2-芐氧羰基-乙烯基)-3-甲基-4，4，7-三氧代-4-硫雜-1-氮雜-二環(huán)〔3.2.0〕庚烷-2-羧酸鈉。
脂質體中β-內酰胺酶抑制劑的濃度取決于特定的β-內酰胺酶抑制劑，而且依不同的案例確定。活性物質濃度太高，使用后將導致脂質體在血流中或組織中破裂(滲透作用)。例如，脂質體中tazobactam的濃度宜為不高于0.2mg/mg脂質體形成物質，最好為約0.1-0.15mg/mg脂質體形成物質。
已經發(fā)現(xiàn)，脂質體的大小影響β-內酰胺酶抑制劑在血漿中的停留時間(即半衰期)。為了達到長的停留時間，脂質體的直徑應該小于約250nm。直徑為約100-200nm，特別是為約150nm的脂質體在本發(fā)明中是優(yōu)選的。
根據(jù)其中所含活性物質已知的給藥須知，本發(fā)明的脂質體溶液可非腸道使用，例如靜脈注射，肌內注射或皮下注射。所述脂質體溶液可以含有通常適用于非腸道給藥的應用在藥物脂質體溶液中的佐劑，特別是穩(wěn)定劑，例如糖如蔗糖或海藻糖，以及pH調節(jié)劑和滲透壓調節(jié)劑。此外，本發(fā)明的脂質體溶液還可含有β-內酰胺抗生素，特別是青霉素類和頭孢菌素類，如哌拉西林或阿帕西林;或例如頭孢三嗪，ceftazid或頭孢哌酮;或carbapenem，如imipenem或meropenem;或monobactam，如aztreonam。此外，該溶液還可以凍干形式存在。
本發(fā)明的脂質體溶液可以已知的方法制備，例如通過使用適宜的溶劑，例如氯仿/甲醇自脂質體形成物制備一種無溶劑薄膜，用β-內酰胺酶抑制劑的水溶液使該膜水化，然后通過擠壓將所得到的多層泡狀物轉化成所需尺寸的脂質體。
下列實施例用于說明本發(fā)明。
實施例1在圓底燒瓶中，將50mg雞蛋卵磷脂(LipoidEPC，LipoidKG，Ludwigshafen，Germany)，磷脂酰甘油(LipoidPG，16∶0/16∶0，LipoidKG，Ludwigshafen，Germany)和膽甾醇以10∶1∶5的摩爾比溶于氯仿/甲醇(1∶1體積份)。在減壓(最后達0.01mbar)和40℃下，在旋轉燒瓶中除去溶劑。剩余的膜用1ml10%的tazobactam鈉水溶液處理，在渦旋混合器中處理進行水化。在氮氣壓力(6-8bar)下使所得到的含有tazobactam的多層泡狀物通過0.2μm的聚碳酸酯濾器(Nucleopore，Pleasanton，CA.，USA)三次，通過0.1μm的聚碳酸酯濾器一或二次。所得到的脂質體的平均直徑為150nm(通過用Nano-SizerPSM78，CoulterElectronics，Krefeld，Germany進行準彈性光散射測得)。較大或較小直徑的脂質體可以通過選擇較大(例如0.4μm)或較小(例如0.05μm)孔徑的濾器用類似的方法制備。
實施例2將不同尺寸的tazobactam脂質體(1ml/kg，5.8-10.4mgtazobactam/kg)注入雄性白化大鼠頸靜脈導管。導管用生理鹽水沖洗后，以不同的間隔自導管取血漿樣品，取出的血漿用鹽水溶液代替。樣品中tazobactam濃度用HPLC確定。結果如下配方脂質體直徑1/2AUC[nm][h][mg.h/ml]脂質體1465.0±1.9456.3±250.1脂質體2361.4±0.3135.1±62.5水溶液0.145.27
上述結果表明，通過以脂質體溶液的形式給藥，活性物質在血漿中的停留時間增加，并且所述效果在較小的脂質體溶液的情形下比在較大的脂質體溶液的情形下要強。
權利要求
1.一種脂質體水溶液，該溶液含有β-內酰胺酶抑制劑，和必要時還含有穩(wěn)定劑。
2.根據(jù)權利要求1的脂質體溶液，其中β-內酰胺酶抑制劑是tazobactam，舒巴克坦或克拉維酸;或歐洲專利公開A-0508234中所述的β-內酰胺酶抑制劑;或通式Ⅰ的化合物或其藥物上可用的鹽 式中R1和R2之一表示-COR4，-CN，-CH2OR5或-SO2R6，另一個表示H，-COR4，-CN，-CH2OR5或-SO2R6或低級烷基;R3＝H，低級烷基，芳基-烷基，烯丙基或在體內可裂解的殘基;R4＝H，低級烷基，低級烷氧基，芐氧基，氨基或低級烷氨基;R5＝H或-CONH2;R6＝低級烷基，和n＝0，1或2。
3.根據(jù)權利要求1或2的脂質體溶液，其中穩(wěn)定劑是糖，如蔗糖或海藻糖。
4.根據(jù)權利要求1-3的任一脂質體溶液，其中脂質體由磷脂酰膽堿和磷脂酰甘油及必要時膽甾醇組成。
5.根據(jù)權利要求4的脂質體溶液，其中磷脂酰膽堿，磷脂酰甘油和膽甾醇的摩爾比是10∶0-1∶0-5。
6.根據(jù)權利要求1-5的任一脂質體溶液，其中脂質體的平均直徑是50-250nm。
7.根據(jù)權利要求6的脂質體溶液，其中脂質體的平均直徑是150nm。
8.根據(jù)權利要求1-7的任一脂質體溶液，其中還存在β-內酰胺抗生素。
9.權利要求1-8的脂質體溶液的凍干制劑。
10.根據(jù)權利要求1-9的脂質體溶液，其中β-內酰胺抗生素是青霉素，頭孢菌素，carbapenem或monobactam。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有β-內酰胺酶抑制劑和必要時還含有β-內酰胺抗生素的脂質體水溶液。
文檔編號A61K31/425GK1111125SQ9510168
公開日1995年11月8日 申請日期1995年1月23日 優(yōu)先權日1994年1月25日
發(fā)明者M·費尼斯, H·斯蒂芬, A·蘇普薩歐 申請人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司